CN111269861B - 一株具有降解苯胺和脱氮能力的雷氏普罗维登斯菌及其应用 - Google Patents

一株具有降解苯胺和脱氮能力的雷氏普罗维登斯菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株具有降解苯胺和脱氮能力的雷氏普罗维登斯菌及其应用，该菌命名为雷氏普罗维登斯菌（Providencia rettgeri）Y15‑7，于2019年8月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2019664。所述雷氏普罗维登斯菌Y15‑7在缺氧和好氧条件下均能较快地降解苯胺，并能将部分TN转化为气态氮，而且能在葡萄糖或蔗糖等第二碳源和酵母膏、蛋白胨等有机氮存在下，以及高盐度条件下进行苯胺的降解和脱氮，在水质复杂的实际废水处理中具有广阔的应用前景。

Description

一株具有降解苯胺和脱氮能力的雷氏普罗维登斯菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株具有降解苯胺和脱氮能力的雷氏普罗维登斯菌及其应用，属于环境微生物和废水处理技术领域。
背景技术
苯胺是生产染料、塑料、农药和药品的重要化工原料，其年需求量巨大。大量的生产和广泛的应用使其成为许多化学工业排放废水中的污染物。因毒性大、难降解、具有致癌、致畸、致突变的“三致”特性，苯胺被美国、中国等多个国家列为“环境优先污染物”。微生物降解被认为是水环境中苯胺去除的最有效方法。苯胺在生物降解过程中会释放出氨氮，氨氮是引起水体富营养化的重要物质，如何在降解苯胺的同时实现氨氮的有效去除是苯胺废水处理中必须解决的问题。传统生物脱氮理论认为，生物脱氮必须由空间上或时间上分开的两步反应硝化和反硝化组合完成，其中硝化由自养硝化菌在好氧条件下完成，反硝化由异养反硝化菌在厌（缺）氧条件下完成。然而，近年来，异养硝化-好氧反硝化菌的发现为新型生物脱氮技术提供了思路。这类异养硝化-好氧反硝化菌同时具有异养硝化能力和好氧反硝化能力，使同步硝化反硝化成为可能，而且，由于这类细菌是以有机碳为碳源的，在脱氮的同时，兼具去除有机碳的功能。异养硝化-好氧反硝化菌的发现也为苯胺废水的处理提供了新思路。
赵晶等报道了将苯胺降解菌（假单胞菌属，Pseudomonas sp. Z1）和异养硝化菌（不动杆菌属，Acinetobacter sp. Y1）按1:1比例进行混合组成复合菌，可以有效地同时去除苯胺和苯胺降解过程中积累的氨氮（赵晶,刘玉香,呼婷婷,等.复合菌同时去除苯胺与氨氮及其影响因素研究[J].环境科学与技术,2017,40(3):133-138.）。赵芝清等报道了一株好氧反硝化菌（不动杆菌属，Acinetobacter sp. H3），能够在好氧条件下，对10-150 mg/L浓度范围内的苯胺进行同步脱氮降解苯胺（赵芝清,黄乐,邱唯一,等.一株好氧反硝化菌的同步脱氮降解苯胺特性[J].工业水处理,2019,39(07):14-18.）。
CN 103289940公开了一株雷氏普罗威登斯菌（Providencia rettgeri），它具有异养硝化-好氧反硝化能力，能够在好氧条件下，对由葡萄糖与氨氮、亚硝氮、硝氮、尿素配制的含氮有机废水进行脱氮除碳。但该菌适应的盐度低，其培养基中NaCl浓度仅4g/L，这将大大限制了其对盐度较高废水的处理，且未见利用该菌对苯胺类有机废水进行好氧反硝化处理研究报道，也未见对该菌在缺氧条件下的反硝化性能研究报道。
目前在纯培养菌株降解苯胺的研究中，尚未见在缺氧和好氧条件下均具有降解苯胺和脱氮能力的菌株报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一株耐盐且在缺氧和好氧条件下均具有降解苯胺和脱氮能力的菌株，该菌株命名为雷氏普罗维登斯菌（Providencia rettgeri）Y15-7，已于2019年8月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2019664。
所述雷氏普罗维登斯菌（Providencia rettgeri）Y15-7能够降解或去除苯胺。
用于培养所述雷氏普罗维登斯菌（Providencia rettgeri）Y15-7的种子培养基（g/L）：葡萄糖（或蔗糖）2，细菌学蛋白胨 1，酵母浸膏 0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.2，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO31.0，苯胺 0.2，pH 7.0-7.2。
用于研究所述雷氏普罗维登斯菌（Providencia rettgeri）Y15-7降解能力的培养基（g/L）：葡萄糖（或蔗糖）1-3，细菌学蛋白胨 1，酵母浸膏 0.5，NaCl 0-30，MgSO4·7H2O0.2，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.2-0.8，pH 3.0-9.0。
所述种子培养基的培养温度为25-30℃，摇床转速为150-200 r/min，培养时间为24-48 h；所述降解培养基的培养温度为25-35℃，摇床转速0-200 r/min，培养时间72 h。
本发明还提供了一种应用所述雷氏普罗维登斯菌Y15-7降解培养基中苯胺的方法，将所述雷氏普罗维登斯菌15-7种子按1%接种量接种入降解培养基，在好氧或厌氧条件下进行培养。
优选方案为：将培养36 h的种子液，以1%接种量接种到降解培养基中，在好氧160rpm或厌氧条件下进行培养，培养基中第二碳源为葡萄糖，pH为7.0，培养温度为30℃，NaCl浓度为10g/L,苯胺浓度为0.4 g/L。
本发明的优点：所述雷氏普罗维登斯菌（Providencia rettgeri）Y15-7在缺氧和好氧条件下均能较快地降解苯胺，并能将部分TN转化为气态氮，而且能在葡萄糖或蔗糖等第二碳源和酵母膏、蛋白胨等有机氮存在下，以及高盐度条件下进行苯胺的降解和脱氮，在水质复杂的实际废水处理中具有广阔的应用前景。
附图说明：
图1为菌株Y15-7在LB固体培养基上生长的菌落图。
图2为菌株Y15-7的扫描电镜照片（放大倍数为10000倍）。
图3为菌株Y15-7 的系统发育树图。
图4为菌株Y15-7在好氧条件下，对苯胺的降解和脱氮特性图。
图5为菌株Y15-7在供氧量不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率图。
图6为菌株Y15-7在第二碳源种类不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率图。
图7为菌株Y15-7在培养温度不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率图。
图8为菌株Y15-7在盐度不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率图。
图9为菌株Y15-7在pH值不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率图。
图10为菌株Y15-7在苯胺初始浓度不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率图。
具体实施方式
实施例1 具有降解苯胺和脱氮能力菌株的筛选、分离及鉴定：
菌株来源：印染废水活性污泥
LB培养基（g/L）：细菌学蛋白胨 10，酵母浸膏 5，NaCl 10，蒸馏水，pH 7.0。
菌株的筛选分离方法：取10 mL经打散预处理后的污泥，接种于90 mL含200 mg/L苯胺的 LB培养基中，置于30℃、160 r/min的摇床中培养5d。然后转接到浓度分别为300mg/L、400 mg/L、500 mg/L、600 mg/L、800 mg/L进行驯化。接着将污泥驯化培养液按10倍递增进行梯度稀释，涂布在含200 mg/L苯胺的LB固体培养基平板上，置于30℃生化培养箱中培养，获取单菌落。挑取单菌落接种于苯胺降解培养基中，以苯胺去除率和TN去除率作为指标进行筛选，将具有高效降解效率的菌体进行3次平板纯化，最终获得纯目的菌株。
本发明所述雷氏普罗维登斯菌Y15-7革兰氏染色阴性，在平板上形成半透明、乳白色、凸起、圆形、表面光滑的菌落，菌落形态见图1。菌株Y15-7的扫描电镜形态见图2，该菌为短杆状，有鞭毛。生理生化特征见表1。
表1本发明中所述雷氏普罗维登斯菌Y15-7生理生化特性
Figure 940350DEST_PATH_IMAGE002
注：“+”：阳性；“-”：阴性。
该菌株的16S rDNA基因序列见序列表，序列长度为1407 bp。在GeneBank中其基因序列登录号为MN589673。将该序列在NCBI上经BLAST比对，结果显示与Providenciarettgeri DSM4542T（AM040492）菌株的序列相似性为99.86%。再结合细菌菌落形态特征和生理生化特性，认为该菌株为雷氏普罗威斯登菌（Providencia rettgeri），并命名为Providencia rettgeri Y15-7。菌株的系统发育树图见附图3。图3中涉及的菌株，除了本发明菌株雷氏普罗维登斯菌（Providencia rettgeri）Y15-7需要保护外，其他的包括来自ATCC的菌株均不需要保护。
实施例2 菌株Y15-7在好氧条件下对苯胺的降解和脱氮特性
用于培养菌Y15-7的种子培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨 1，酵母浸膏0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.2，蒸馏水，pH7.0。
用于研究菌Y15-7降解能力的培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨1，酵母浸膏0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.4，蒸馏水，pH7.0。
将平板保存的Y15-7菌种接种于种子培养基中，在30℃、160 r/min下培养42 h，得种子液；将种子液按1%接种量接种苯胺降解培养基中，于30℃、160 r/min下进行好氧通气振荡培养72h，于不同时间点取样测定溶液中苯胺、总氮、氨氮、硝酸盐氮、亚硝酸盐氮、胞内氮的含量以及OD600，分析菌株Y15-7对苯胺的降解和脱氮特性，结果如图4所示。由图4可知，经过72 h的培养，苯胺含量由398.58 mg/L逐渐下降至139.29 mg/L，降解率为65%，随着苯胺的降解，总氮和硝氮分别由最初的403.80 mg/L和125.50 mg/L下降到160.40 mg/L和38.23 mg/L，降解率分别为60%和70%。在此过程中，亚硝氮有部分积累，在0 h到24 h，亚硝氮含量由0.69 mg/L上升至138.39 mg/L，24 h后逐渐下降至83.10 mg/L；氨氮含量也呈先升高后下降趋势，在0 h到24 h，由最初的58.97 mg/L上升至70.51 mg/L，随后降至49.23mg/L；与此同时，胞内氮含量逐渐上升至18.76 mg/L。实验初期苯胺含量的快速下降，氨氮和亚硝氮含量的上升，以及后期氨氮和亚硝氮含量的下降，说明菌株首先将苯胺降解释放出氨氮，导致前期氨氮含量的上升，随即菌株将氨氮硝化成亚硝氮和硝氮，并同时进行反硝化，降低亚硝氮和硝氮的含量。随着时间的增加，在菌的作用下，部分氮转化为气态氮，少量氮被细胞通化吸收，导致总氮含量减少。经过72h的作用，65%的苯胺被降解，60%的TN以转化为气态氮和胞内氮形式而被损耗，其中气态氮占92%。可见，菌株Y15-7具有同时硝化和反硝化能力，能在好氧条件下进行苯胺的降解和脱氮。
实施例3 菌株Y15-7在供氧量不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率
用于培养菌Y15-7的种子培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨 1，酵母浸膏0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.2，蒸馏水，pH7.0。
用于研究菌Y15-7降解能力的培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨1，酵母浸膏0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.4，蒸馏水，pH7.0。
将平板保存的Y15-7菌种接种于种子培养基中，在30℃、160 r/min下培养48 h，得种子液；将种子液按1%接种量接种到含400mg/L苯胺的降解培养基中，通过改变反应器溶液装液量及摇床转速以创造不同的供氧环境（强好氧、好氧、缺氧），来研究供氧量不同条件下菌株对苯胺的降解和脱氮效率。以45mL瓶里装40mL培养基，密闭后于30℃下静置（0 r/min）培养来模拟缺氧环境；以45mL瓶里装15mL培养基，于30℃、160 r/min和30℃、200 r/min下通气振荡培养来模拟供氧量不同的2个好氧环境（强好氧、好氧）。于72h时取样测定溶液中苯胺、总氮、氨氮、硝酸盐氮的含量，分析菌株Y15-7对苯胺的降解和脱氮效率，结果如图5所示。由图5可知，在0 r/min（缺氧）、160 r/min（好氧）和200 r/min（强好氧）下，菌株对苯胺的降解率分别为43%、63%和34%，对总氮的去除率分别为56%、61%和38%，对硝氮的去除率分别为44%、52%和41%，对氨氮的去除率分别为-4%、13%和4%。在160 r/min下菌株的苯胺、氨氮、硝氮、总氮去除性能优于0 r/min 和200 r/min，说明菌株适于在好氧条件下对苯胺进行降解和脱氮，但对氧有个最佳需求值。在缺氧条件下，菌株对氨氮的去除率虽为负（-4%），即氨氮增大了2.35mg/L，但基于苯胺厌氧降解理论分析，43%苯胺（172mg/L）厌氧降解，可释放出25.9mg/L的氨氮，远大于氨氮的测定值，说明厌氧条件下菌株仍具有较好的苯胺、氨氮、硝氮和总氮去除效率，菌株可用于缺氧条件下对苯胺的降解和脱氮。
实施例4 菌株 Y15-7在第二碳源种类不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率
用于培养菌Y15-7的种子培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨 1，酵母浸膏0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.2，蒸馏水，pH7.0。
用于研究菌Y15-7降解能力的培养基（g/L）：细菌学蛋白胨1，酵母浸膏0.5，NaCl10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.4，pH 7.0。第二碳源不添加或为葡萄糖、蔗糖、乳糖、乙酸钠、草酸钠中的一种 2。
将平板保存的Y15-7菌种接种于种子培养基中，在30℃、160 r/min下培养48 h，得种子液；将种子液按1%接种量分别接种到不含第二碳源和第二碳源种类不同的降解培养基中，于30℃、160 r/min下进行好氧通气振荡培养。于72h时取样测定溶液中苯胺、总氮、氨氮、硝酸盐氮的含量，分析菌株Y15-7在第二碳源种类不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率，结果如图6所示。由图6可知，在不添加第二碳源条件下，菌株对苯胺、总氮、氨氮、硝酸盐氮的去除率分别为36%、40%、14%和47%，添加2g/L的葡萄糖、蔗糖、乳糖、乙酸钠、草酸钠后，菌株对苯胺、总氮、氨氮、硝酸盐氮的去除率均有所提高，并以葡萄糖的促进效果最明显，其次是蔗糖。说明葡萄糖或蔗糖等第二碳源的存在可以更好地促进菌株对苯胺的降解和脱氮，这对实际废水的处理非常有利。
实施例5 菌株Y15-7在培养温度不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率
用于培养菌Y15-7的种子培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨 1，酵母浸膏0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.2，蒸馏水，pH7.0。
用于研究菌Y15-7降解能力的培养基（g/L）：葡萄糖 1，细菌学蛋白胨1，酵母浸膏0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.4，pH 7.0。
将平板保存的Y15-7菌种接种于种子培养基中，在30℃、160 r/min下培养36 h，得种子液；将种子液按1%接种量接种到降解培养基中，分别于25 ℃、30 ℃、35 ℃下进行160r/min的好氧通气振荡培养72h。取样测定溶液中苯胺、总氮、氨氮、硝酸盐氮的含量，分析菌株Y15-7在培养温度不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率，结果如图7所示。由图7可知，菌株在30 ℃时对苯胺、总氮、氨氮和硝氮的去除效果最佳，但在25-35℃间活性差异不大。
实施例6 菌株Y15-7在盐度不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率
用于培养菌Y15-7的种子培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨 1，酵母浸膏0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.2，蒸馏水，pH7.0。
用于研究菌Y15-7降解能力的培养基（g/L）：葡萄糖 3，细菌学蛋白胨1，酵母浸膏0.5，NaCl 0-30，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.4，pH 7.0。
将平板保存的Y15-7菌种接种于种子培养基中，在30℃、160 r/min下培养36 h，得种子液；将种子液按1%接种量接种到NaCl浓度分别为0、10、20、30 g/L的降解培养基中，于30℃、160 r/min下培养72h，取样测定溶液中苯胺、总氮、氨氮、硝酸盐氮的含量，分析菌株Y15-7在盐度不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率，结果如图8所示。由图8可知，菌株在NaCl浓度为10g/L时对苯胺、总氮、氨氮和硝氮的去除效果最佳，当NaCl浓度从0g/L提高到10g/L时，菌株对苯胺、总氮、氨氮和硝氮的去除效率提高，进一步提高NaCl浓度，苯胺、总氮、氨氮和硝氮的去除效率则逐渐下降，但在30g/L NaCl浓度下菌株对苯胺、总氮、氨氮和硝氮的去除率仍保持在一个较高的水平，分别为45%、30%、12%和61%，说明菌株适应的盐度范围较广，可应用于含盐废水的处理。
实施例7 菌株Y15-7在pH不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率
用于培养菌Y15-7的种子培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨 1，酵母浸膏0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.2，蒸馏水，pH7.0。
用于研究菌Y15-7降解能力的培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨1，酵母浸膏0.5，NaCl 0-30，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.4，pH 3.0-9.0。
将平板保存的Y15-7菌种接种于种子培养基中，在30℃、160 r/min下培养36 h，得种子液；将种子液按1%接种量接种到pH分别为3、5、7、9的降解培养基中，于30℃、160 r/min下培养72h，取样测定溶液中苯胺、总氮、氨氮、硝酸盐氮的含量，分析菌株Y15-7在pH不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率，结果如图9所示。由图9可知，菌株在pH 7.0和9.0，即中至弱碱性条件下对苯胺的降解和脱氮效率较高，在酸性条件下对苯胺的降解能力较差。
实施例8 菌株Y15-7在苯胺初始浓度不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率
用于培养菌Y15-7的种子培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨 1，酵母浸膏0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.2，蒸馏水，pH7.0。
用于研究菌Y15-7降解能力的培养基（g/L）：葡萄糖 2，细菌学蛋白胨1，酵母浸膏0.5，NaCl 0-30，MgSO4•7H2O 0.5，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.2-0.8，pH7.0。
将平板保存的Y15-7菌种接种于种子培养基中，在30℃、160 r/min下培养48 h，得种子液；将种子液按1%接种量分别接种到含200 mg/L、400 mg/L、600mg/L和800mg/L苯胺的降解培养基中，于30℃、160 r/min下进行好氧通气振荡培养72h。取样测定溶液中苯胺、总氮、氨氮、硝酸盐氮的含量，分析菌株Y15-7在苯胺初始浓度不同条件下，对苯胺的降解和脱氮效率，结果如图10所示。由图10可知，当苯胺浓度为200mg/L时，菌株对苯胺的降解率和脱氮率分别为60%和64%；提高苯胺浓度为400mg/L时，菌株对苯胺的降解和脱氮效率达到最高，苯胺降解率和总氮去除率分别为65%和68%，而继续提高苯胺浓度，菌株对苯胺的降解和脱氮效率则逐渐下降。说明较低浓度的苯胺不能为菌株提供充足的营养，阻碍了菌株的生长和对苯胺的降解，而高浓度的苯胺则对菌株有毒，也抑制了菌株对苯胺的降解。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
序列表
<110>集美大学
<120>一株具有降解苯胺和脱氮能力的雷氏普罗维登斯菌及其应用
<160>1
<210>1
<211>1407
<212>16srDNA
<213> 雷氏普罗维登斯菌Providencia rettgeri Y15-7
<400>1
gcaagtcgag cggtaacagg ggaagcttgc ttctcgctga cgagcggcgg acgggtgagt 60
aatgtatggg gatctgcccg atagaggggg ataactactg gaaacggtag ctaataccgc 120
ataatctctt aggagcaaag caggggaact tcggtccttg cgctatcgga tgaacccata 180
tgggattagc tagtaggtgg ggtaatggct cacctaggcg acgatcccta gctggtctga 240
gaggatgatc agccacactg ggactgagac acggcccaga ctcctacggg aggcagcagt 300
ggggaatatt gcacaatggg cgcaagcctg atgcagccat gccgcgtgta tgaagaaggc 360
cctagggttg taaagtactt tcagtcggga ggaaggcgtt gatgctaata tcatcaacga 420
ttgacgttac cgacagaaga agcaccggct aactccgtgc cagcagccgc ggtaatacgg 480
agggtgcaag cgttaatcgg aattactggg cgtaaagcgc acgcaggcgg ttgattaagt 540
tagatgtgaa atccccgggc ttaacctggg aatggcatct aagactggtc agctagagtc 600
ttgtagaggg gggtagaatt ccatgtgtag cggtgaaatg cgtagagatg tggaggaata 660
ccggtggcga aggcggcccc ctggacaaag actgacgctc aggtgcgaaa gcgtggggag 720
caaacaggat tagataccct ggtagtccac gctgtaaacg atgtcgattt gaaggttgtt 780
cccttgagga gtggctttcg gagctaacgc gttaaatcga ccgcctgggg agtacggccg 840
caaggttaaa actcaaatga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta 900
attcgatgca acgcgaagaa ccttacctac tcttgacatc cagagaactt agcagagatg 960
ctttggtgcc ttcgggaact ctgagacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgttgt 1020
gaaatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttat cctttgttgc cagcgattcg 1080
gtcgggaact caaaggagac tgccggtgat aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaag 1140
tcatcatggc ccttacgagt agggctacac acgtgctaca atggcgtata caaagagaag 1200
cgacctcgcg agagcaagcg gaactcataa agtacgtcgt agtccggatt ggagtctgca 1260
actcgactcc atgaagtcgg aatcgctagt aatcgtagat cagaatgcta cggtgaatac 1320
gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca caccatggga gtgggttgca aaagaagtag 1380
gtagcttaac cttcgggagg gcgctta 1407

Claims (6)

1.一株雷氏普罗维登斯菌在降解苯胺和脱氮能力上的应用，其特征在于：用于培养所述雷氏普罗维登斯菌Y15-7（Providencia rettgeri）CCTCC NO：M 2019664的种子培养基（g/L）包括以下成分：葡萄糖2，细菌学蛋白胨 1，酵母浸膏 0.5，NaCl 10，MgSO4•7H2O 0.2，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺 0.2，pH7.0-7.2。
2.如权利要求1所述的一株雷氏普罗维登斯菌在降解苯胺和脱氮能力上的应用，其特征在于，所述培养基的培养温度为25-30℃，摇床转速150-200 r/min，培养时间24-48 h。
3.如权利要求2所述的一株雷氏普罗维登斯菌在降解苯胺和脱氮能力上的应用，其特征在于，用于研究所述雷氏普罗维登斯菌Y15-7（Providencia rettgeri）CCTCC NO：M2019664降解能力的培养基（g/L）包括以下成分：细菌学蛋白胨1，酵母浸膏0.5，NaCl 0-30，MgSO4·7H2O 0.2，KH2PO4 0.5，K2HPO4 1.5，KNO3 1.0，苯胺0.2-0.8，葡萄糖或蔗糖中的一种1-3，pH 3.0-9.0。
4.如权利要求3所述的一株雷氏普罗维登斯菌在降解苯胺和脱氮能力上的应用，其特征在于，具有降解能力的所述培养基的培养温度为25-35℃，摇床转速0-200 r/min，培养时间72 h。
5.如权利要求4所述的一株雷氏普罗维登斯菌在降解苯胺和脱氮能力上的应用，其特征在于，将培养36 h的种子液，以1%接种量接种到所要降解的苯胺溶液中，分别在好氧和厌氧条件下进行培养。
6.如权利要求5所述的一株雷氏普罗维登斯菌在降解苯胺和脱氮能力上的应用，其特征在于，用于研究所述雷氏普罗维登斯菌（Providencia rettgeri）降解能力的培养基中第二碳源为葡萄糖，pH为7.0，培养温度为30℃，NaCl 浓度为10g/L,苯胺浓度为0.4 g/L，所述好氧条件为160 rpm下振荡培养。
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