CN110621781A - 淀粉提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了用于酶辅助玉米湿磨的改善方法。本发明还提供了用于进行本发明的方法的玉米籽粒湿磨系统。
Description
技术领域
本发明涉及使用水解酶提高玉米湿磨过程中淀粉和谷蛋白产率的改善方法。此外，本发明涉及用于实践本发明的方法的玉米湿磨系统和使用所述方法提供的细纤维级分。
背景技术
常规的玉米湿磨是一种设计用于淀粉和若干种副产物(包括胚芽、谷蛋白和纤维)的回收和纯化的过程。
纤维是价值最低的副产物，因此工业已经投入大量精力来提高更有价值的产物(例如淀粉和谷蛋白)的产率，同时减少纤维级分。高品质淀粉是有价值的，因为它可以在进一步加工成例如干燥的淀粉，改性淀粉、糊精、甜味剂和醇之类的产物后用于各种商业目的。谷蛋白通常用于动物饲料，如玉米谷蛋白粉(约60％蛋白)或玉米谷蛋白饲料(约20％蛋白)。
所述湿磨过程取决于具体使用的研磨设备而显著变化，但所述过程通常包括：谷物清洁、浸渍、碾磨、胚芽分离、第二次碾磨、纤维分离、谷蛋白分离和淀粉分离。在清洁玉米籽粒后，典型地通过在受控制的时间和温度条件下浸泡在水中或在稀释的SO2溶液中使它们软化。然后，碾磨籽粒以分解果皮，并将胚芽与籽粒的其余部分分离。剩余的浆液，主要由纤维、淀粉和谷蛋白组成，在纤维洗涤过程中进行精细碾磨和筛选，以将纤维从淀粉和谷蛋白分离，然后分离谷蛋白和淀粉，并且可以在洗涤/过滤过程中纯化淀粉。
已经建议在湿磨过程的若干个步骤中使用酶，例如使用酶用于湿磨过程的浸渍步骤。已经示出，商业酶产品(可得自诺维信公司(Novozymes A/S))适于湿磨过程的第一步骤，即将玉米籽粒浸泡在水中的浸渍步骤。
最近，已经研发了“酶研磨(enzymatic milling)”，这是一种经修饰的湿磨过程，其使用蛋白酶以在玉米湿磨期间显著减少总的处理时间并消除了对作为加工剂的二氧化硫的需求。Johnston等人,Cereal Chem[谷物化学],81,第626-632页(2004)。
US 6,566,125披露了一种用于从玉蜀黍获得淀粉的方法，所述方法涉及将玉蜀黍籽粒浸泡在水中以产生浸泡的玉蜀黍籽粒、碾磨浸泡的玉蜀黍籽粒以产生碾磨的玉蜀黍浆液并将碾磨的玉蜀黍浆液与酶(例如，蛋白酶)一起温育。
US 5,066,218披露了一种研磨谷物(尤其是玉米)的方法，所述方法包括清洁谷物，将谷物浸渍在水中以将其软化，并且然后用纤维素酶研磨谷物。
WO 2002/000731披露了一种处理作物籽粒的过程，所述过程包括将籽粒在水中浸泡1-12小时，湿磨浸泡的籽粒并用一种或多种酶(包括酸性蛋白酶)处理籽粒。
WO 2002/000911披露了一种分离淀粉谷蛋白的过程，所述过程包括使研磨淀粉经受酸性蛋白酶。
WO 2002/002644披露了一种洗涤获得自研磨方法的淀粉谷蛋白分离步骤的淀粉浆液的过程，所述过程包括用包含有效量的酸性蛋白酶的水溶液洗涤淀粉浆液。
WO 2014/082566和WO 2014/082564披露了用于在湿磨中使用的纤维素分解组合物。
尽管本领域已经研究了在玉米湿磨中使用酶的效果，但是在玉米籽粒的浸渍/浸泡期间，在玉米籽粒的碾磨期间和在淀粉谷蛋白分离期间，仍然需要改善的酶技术，其可以提高玉米湿磨中淀粉和谷蛋白的回收。
发明内容
本发明涉及在湿磨过程中改善来自玉米籽粒的淀粉产率和/或谷蛋白产率的方法，所述方法包括：
a)从纤维中分离淀粉和/或谷蛋白以提供纤维级分，
b)通过将所述纤维级分的粗纤维从所述纤维级分的细纤维分离来提供细纤维级分；和
c)将所述细纤维级分与一种或多种水解酶接触。
在第二方面，本发明涉及玉米籽粒湿磨系统，所述玉米籽粒湿磨系统包括：
i)纤维洗涤系统(F)
ii)纤维压榨机(fiber press)(P),
iii)用于给料一种或多种水解酶的手段；和
iv)空间(V1)；
其中所述纤维洗涤系统(F)、所述纤维压榨机(P)和所述空间(V1)相互连接以允许纤维级分从所述纤维洗涤系统流向所述压榨机，纤维压榨滤液或细纤维级分从所述压榨机流向所述空间(V1)；
其中所述用于给料一种或多种水解酶的手段配置用于向所述纤维压榨滤液或所述细纤维级分中给料所述酶；并且
其中所述空间(V1)每天至少加工100m3/1000公吨玉米。
在第三方面，本发明涉及纤维级分(如细纤维级分)，所述纤维级分通过根据本发明的方法可获得或获得。
附图说明
将参考所附附图更详细地描述本发明，并且特别是根据本发明的优选的实施例。附图示出了实现本发明的方式并且不应被解释为限制落入所附的权利要求集的范围的其他可能的实施例。
图1示意性地示出了根据本发明的玉米湿磨过程的实施例。
图2示意性地示出了用于本发明的过程的逆向流动纤维洗涤系统的实施例。
图3示意性地示出了纤维洗涤程序，其中空间(V)设置在系统的筛网单元之间。
图4显示了基于起始材料回收的不溶性固体的平均百分比(％)
图5显示了残余细纤维中淀粉的平均百分比(％)。
图6显示了残余细纤维中蛋白质的平均百分比(％)。
具体实施方式
本发明的一个目的是提供一种优化用于水解酶的使用的纤维洗涤系统。此外，本发明的一个目的是提供一种在湿磨过程中改善来自玉米籽粒的淀粉和谷蛋白产率的方法。本发明的其他益处包括改善的纤维脱水和消泡效果。
湿磨过程：
将玉米籽粒湿磨以打开籽粒并将籽粒分离成其四种主要成分：淀粉、胚芽、纤维和谷蛋白。
湿磨过程可以在研磨间显著变化，但是常规的湿磨通常包括以下步骤：
1.浸渍并分离胚芽，
2.洗涤纤维、加压并干燥，
3.淀粉/谷蛋白分离，并且
4.洗涤淀粉。
1.浸渍、碾磨并分离胚芽
通过在约50℃(例如约45℃至60℃之间)的温度，在水中浸泡约30分钟至约48小时(优选地30分钟至约15小时，例如约1小时至约6小时)之间而软化玉米籽粒。在浸渍期间中，籽粒吸水，从而将其水分含量从15％增加至45％并使大小增加超过一倍。任选地向水中添加例如0.1％二氧化硫(SO2)和/或NaHSO3以防止细菌在温暖环境中生长。随着玉米膨胀并软化，浸渍水的温和酸度开始使玉米内的谷蛋白键松散并释放淀粉。在将玉米籽粒浸渍后，它们裂开以释放胚芽。胚芽含有玉米油。基本上通过使不含其他物质的胚芽段在密切受控的条件下“漂浮(floating)”而将胚芽与淀粉、谷蛋白和纤维的较重密度的混合物分离。这一方法用于消除痕量的玉米油在后面的加工步骤中的任何不利影响。
2.洗涤纤维、加压并干燥
为了得到最大的淀粉和谷蛋白回收同时将终产物中的任何纤维保持为绝对最小值，在加工期间必须从纤维中洗涤出游离淀粉和谷蛋白。在筛选(洗涤)期间将游离淀粉和谷蛋白与纤维分离，并作为研磨淀粉收集。然后加压剩余的纤维以降低水含量并干燥。
3.分离淀粉谷蛋白
将来自纤维洗涤步骤的淀粉-谷蛋白悬浮液(称作研磨淀粉)分离成淀粉和谷蛋白。与淀粉相比，谷蛋白具有较低的密度。通过使研磨淀粉穿过离心机而容易地旋出谷蛋白。
4.洗涤淀粉
来自淀粉分离步骤的淀粉浆液含有一些不溶性蛋白和许多的可溶物。在可以生产顶级品质的淀粉(高纯度淀粉)之前，必须将其去除。在水力旋流器中，将仅剩余1％或2％蛋白的淀粉稀释，洗涤8至14次，重新稀释并再次洗涤，以去除最后痕量的蛋白并产生高品质淀粉，典型地纯度大于99.5％。
湿磨的产物：可以使用湿磨生产(但不限于)玉米浆、玉米谷蛋白饲料、胚芽、玉米油、玉米谷蛋白粉、玉米淀粉、改性玉米淀粉、糖浆(例如玉米糖浆)、以及玉米乙醇。
酶的定义：
具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的阿拉伯呋喃糖苷酶/多肽：术语“阿拉伯呋喃糖苷酶”意指一种α-L-阿拉伯呋喃糖苷阿拉伯呋喃水解酶(EC 3.2.1.55)，其催化α-L-阿拉伯糖苷中的末端非还原性α-L-阿拉伯呋喃糖苷残基的水解。所述酶对α-L-阿拉伯呋喃糖苷、含有(1,3)-和/或(1,2)-和/或(1,5)-键的α-L-阿拉伯聚糖、阿拉伯糖基木聚糖以及阿拉伯半乳聚糖起作用。α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶也称为阿拉伯糖苷酶、α-阿拉伯糖苷酶、α-L-阿拉伯糖苷酶、α-阿拉伯呋喃糖苷酶、多糖α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶、α-L-阿拉伯呋喃糖苷水解酶、L-阿拉伯糖苷酶或α-L-阿拉伯聚糖酶。可以使用每ml的100mM乙酸钠(pH 5)中5mg的中等粘度小麦阿拉伯糖基木聚糖(麦格酶国际爱尔兰股份有限公司(Megazyme InternationalIreland,Ltd.)，布瑞公司(Bray,Co.)，爱尔兰威克洛郡(Wicklow,Ireland))以总体积200μl在40℃持续30分钟，接着通过 HPX-87H柱层析(美国加利福尼亚州赫拉克勒斯(Hercules,CA,USA)的伯乐实验室有限公司(Bio-Rad Laboratories,Inc.))进行阿拉伯糖分析来测定阿拉伯呋喃糖苷酶活性。
具有β-葡糖苷酶活性的β-葡糖苷酶/多肽：术语“β-葡糖苷酶”意指β-D-葡糖苷葡糖水解酶(beta-D-glucoside glucohydrolase)(E.C.3.2.1.21)，其催化末端非还原性β-D-葡萄糖残基的水解，并释放β-D-葡萄糖。可以根据Venturi等人,2002,J.BasicMicrobiol.[基础微生物学杂志]42:55-66的程序使用对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷作为底物来测定β-葡糖苷酶活性。一个单位的β-葡糖苷酶被定义为在25℃、pH 4.8下，在含有0.01％20的50mM柠檬酸钠中从作为底物的1mM对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷每分钟产生1.0μmole的对硝基苯酚阴离子。
具有β-木糖苷酶活性的β-木糖苷酶/多肽：术语“β-木糖苷酶”意指β-D-木糖苷木糖水解酶(β-D-xyloside xylohydrolase)(E.C.3.2.1.37)，其催化短β(1→4)-低聚木糖的外切水解，以将连续的D-木糖残基从非还原性末端去除。可以在含有0.01％20的100mM柠檬酸钠中，在pH 5，40℃，使用1mM对硝基苯基-β-D-木糖苷作为底物来确定β-木糖苷酶活性。一个单位的β-木糖苷酶被定义为在40℃、pH 5，在含有0.01％20的100mM柠檬酸钠中从1mM对硝基苯基-β-D-木糖苷每分钟产生1.0μmole的对15硝基酚根阴离子。
具有纤维二糖水解酶活性的纤维二糖水解酶/多肽：术语“纤维二糖水解酶”意指一种1,4-β-D-葡聚糖纤维二糖水解酶(E.C.3.2.1.91和E.C.3.2.1.176)，其催化纤维素、纤维寡糖、或任何含有β-1,4-连接葡萄糖的聚合物中的1,4-β-D15-糖苷键的水解，从而从链的还原性末端(纤维二糖水解酶I)或非还原性末端(纤维二糖水解酶II)释放纤维二糖(Teeri,1997,Trends in Biotechnology[生物技术趋势]15:160-167；Teeri等人,1998,Biochem.Soc.Trans.[生物化学学会会刊]26:173-178)。可以根据由以下所述的程序来确定纤维二糖水解酶活性：Lever等人,1972,Anal.Biochem.[分析生物化学]47:273-279；vanTilbeurgh等人,1982,FEBS Letters[欧洲生化学会联合会快报]149:152-156；vanTilbeurgh和Claeyssens,1985,FEBS Letters[欧洲生化学会联合会快报]187:283-288；和Tomme等人,1988,Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]170:575-581。
具有纤维素酶活性或纤维素分解活性的纤维素分解酶或纤维素酶/多肽：术语“纤维素分解酶”或“纤维素酶”意指一种或多种(例如，若干种)水解纤维素材料的酶，所述材料包括任何包含纤维素(例如纤维)的材料。纤维素分解酶包括一种或多种内切葡聚糖酶(E.C3.2.1.4)、一种或多种纤维二糖水解酶(E.C 3.2.1.91和E.C 3.2.1.150)、一种或多种β-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.21)、或其组合。用于测量纤维素分解酶活性的两种基本方法包括：(1)测量总纤维素分解酶活性，以及(2)测量个体纤维素分解酶活性(内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、和β-葡糖苷酶)，如在Zhang等人,2006,Biotechnology Advances[生物技术进展]24:452-481中所述的。可使用不溶性底物，包括Whatman№1滤纸、微晶纤维素、细菌纤维素、藻类纤维素、棉花、预处理的木质纤维素等，测量总纤维素分解酶活性。最常见的总纤维素分解活性测定是将Whatman№1滤纸用作底物的滤纸测定。所述测定是由国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)建立的(Ghose,1987,Pure Appl.Chem.[纯粹与应用化学]59:257-68)。
可以通过测量在以下条件下，由一种或多种纤维素分解酶进行的纤维素材料水解期间，糖的产生/释放的增加来确定纤维素分解酶活性：1-50mg纤维素分解酶蛋白/g预处理的玉米秸秆(PCS)(或其他预处理的纤维素材料)中的纤维素,在适合的温度(例如40℃-80℃，例如，40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、或80℃)，以及在适合的pH(例如4-9，例如，4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、或9.0)下持续3-7天，与未添加纤维素分解酶蛋白的对照水解进行比较。典型的条件为：1ml反应，洗涤或未洗涤的PCS，5％不溶性固体(干重)，50mM乙酸钠5(pH 5)，1mM MnSO4，50℃、55℃、或60℃，72小时，通过 HPX-87H柱层析(美国加利福尼亚州赫拉克勒斯的伯乐实验室有限公司)进行糖分析。
具有水解酶活性的水解酶(Hydrolytic enzyme)或水解酶(hydrolase)/多肽：“水解酶”是指使用水分解底物的任何催化蛋白。水解酶包括纤维素酶(EC 3.2.1.4)、木聚糖酶(EC 3.2.1.8)、阿拉伯呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55(非还原性末端α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶)、EC 3.2.1.185(非还原性末端β-L-阿拉伯呋喃糖苷酶)、纤维二糖水解酶I(EC 3.2.1.150)、纤维二糖水解酶II(E.C.3.2.1.91)、纤维二糖苷酶(E.C.3.2.1.176)、β-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.21)、和β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)。
具有木聚糖酶活性的木聚糖酶/多肽：术语“木聚糖酶”意指1,4-β-D-木聚糖-木糖水解酶(E.C.3.2.1.8)，其催化木聚糖中1,4-β-D-木糖苷键的内水解。木聚糖酶活性可以在37℃在0.01％ X-100和200mM磷酸钠(pH 6)中用0.2％AZCL-阿拉伯糖基木聚糖作为底物来确定。一个单位的木聚糖酶活性被定义为在37℃、pH 6，在200mM磷酸钠(pH 6)中从作为底物的0.2％AZCL-阿拉伯糖基木聚糖每分钟产生1.0μmole天青蛋白。
其他定义：
在本上下文中，术语以对于技术人员而言是普通的方式使用。其中一些术语如下阐明：
玉米籽粒：已知多种玉米籽粒，包括例如马齿型玉米、硬粒玉米、有稃种玉米、具条纹玉米、甜玉米、糯玉米等。
一些玉米籽粒具有称为“果皮(Pericarp)”的外部覆盖物，保护籽粒中的胚芽。它防水和水蒸气并且是昆虫和微生物所不希望的。未被“果皮”覆盖的籽粒的唯一区域是“顶帽(Tip Cap)”，它是籽粒至穗轴的附着点。
玉米籽粒物质：优选地用于引用包含纤维、谷蛋白和淀粉的物质，优选地通过汽蒸和碾磨作物籽粒并从胚芽中分离包含纤维、谷蛋白和淀粉的物质来实现。当玉米籽粒物质移动通过纤维洗涤时，它被分离成若干个级分，包括第一级分(s)和第二级分(f)。因此，“玉米籽粒物质的级分”和“玉米籽粒物质的一个或多个级分”是指这些第一级分(s)和第二级分(f)。
表达：术语“表达(expression和expressed)”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不限于：转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
胚芽：“胚芽”是玉米籽粒的唯一存活部分。它包含籽粒生长为玉米植株所必需的遗传信息、酶、维生素以及矿物质。在黄色马齿型玉米中，约25％的胚芽是玉米油。被胚芽覆盖或包围的胚乳构成约82％的籽粒干重并且是种子萌发的能量(淀粉)和蛋白来源。存在两种类型的胚乳，软胚乳和硬胚乳。在硬胚乳中，淀粉被紧紧地堆积在一起。在软胚乳中，淀粉是松散的。
GH10多肽：是指具有酶活性的多肽，所述多肽在http://www.cazy.org/上可获得的碳水化合物活性酶(CAZymes)的数据库中被分类为糖苷水解酶家族10的成员。(Lombard,V.；Golaconda Ramulu,H.；Drula,E.；Coutinho,P.M.；Henrissat,B.(2013年11月21日)."The carbohydrate-active enzymes database(CAZy)in 2013[2013年的碳水化合物活性酶数据库(CAZy)]".Nucleic Acids Research[核酸研究].42(D1):D490–D495；CantarelBL,Coutinho PM,Rancurel C,Bernard T,Lombard V,Henrissat B(2009年1月)."TheCarbohydrate-Active EnZymes database(CAZy):an expert resource forGlycogenomics[碳水化物活性酶数据库(CAZy)：葡萄糖基因组的专业资源]".NucleicAcids Res.[核酸研究]37(Database issue[数据库卷]):D233–8)。
GH11多肽是指具有酶活性的多肽，所述多肽在碳水化合物活性酶(CAZymes)的数据库中被分类为糖苷水解酶家族11的成员。
GH62多肽：是指具有酶活性的多肽，所述多肽在碳水化合物活性酶(CAZymes)的数据库中被分类为糖苷水解酶家族62的成员。
谷蛋白：谷蛋白是一种蛋白，由两种更小的蛋白—麦谷蛋白和麦醇溶蛋白组成。本文“谷蛋白”是指在玉米籽粒中发现的大多数蛋白。来自玉米湿磨的谷蛋白的主要产品是玉米谷蛋白粉(大约60％蛋白)和玉米谷蛋白饲料(大约20％蛋白)。
碾磨(grind或grinding)：术语“碾磨”是指将玉米籽粒分解成更小的组分。
温育时间：玉米籽粒物质的一个或多个级分或细纤维级分与水解酶接触而不受其他加工(如筛选或过滤)影响的时间。例如，“温育时间”可以是指在纤维洗涤期间，玉米籽粒物质的一个或多个级分与酶接触而不受筛选或受到其他分离方式影响的时间段。“温育时间”还可以是指细纤维级分在与其他底物结合之前与酶接触的时间段。在许多优选的实施例中，根据本发明的系统和方法利用“空间”、“空隙”、“培养箱”或“贮存箱”，其中材料通过酶而“留下被影响”，并且在这种情况下，温育时间可以通过以下确定：
可替代地，如果流入至所述“空间”、“空隙”、“培养箱”或“贮存箱”以每时间单位的体积表示：
在上述公式中，“空间”、“空隙”、“培养箱”或“贮存箱”统称为“培养箱”。
研磨设备：“研磨设备”是指粉碎机上使用的所有设备。湿磨过程将取决于可用的研磨设备而变化。研磨设备的实例可以是浸渍罐、蒸发器、螺旋压榨机、旋转干燥机、脱水筛网、离心机、水力旋流器等。每个研磨设备/研磨线的尺寸和数量可以在不同的粉碎机上变化，这将影响研磨过程。例如，纤维洗涤筛网单元的数量可以变化，离心机的尺寸也可以变化。
保留时间：如本文使用的总保留时间定义为一种或多种水解酶与其底物接触的时间段。如此所述时，保留时间也可以是指在湿磨过程的特定阶段或步骤中一种或多种水解酶和底物被保留的时间。例如，本文披露的纤维洗涤系统的总保留时间是在再次离开纤维洗涤系统之前，在第一筛网单元(S1)中接收的玉米籽粒物质及其一个或多个级分与有效量的一种或多种水解酶接触的时间段。在保留时间期间，玉米籽粒物质的一个或多个级分在空间(V)中与一种或多种水解酶温育，然后离开纤维洗涤系统，作为来自最上游筛网单元(S1)的第一级分(s1)的一部分或作为来自最下游筛网单元(S4)的第二级分(f4)的一部分。保留时间可优选地估计为固体物质在根据本发明的系统中所花费的平均时间，所述系统为例如像本文所披露的纤维洗涤系统或贮存箱，包括将其连接到其他工艺设备的流线。这可以通过以下关系估计：
可替代地，如果流入至系统以每时间单位的体积表示：
系统的体积典型地设定为等于系统中所有空隙的体积之和；然而，由于系统中的管道(tubing或piping)典型地做得很小，并且因此在确定保留时间时优选地忽略管道的体积。
筛选的：术语“筛选的”是指将玉米籽粒物质分离成第一级分s和第二级分f以及将这些级分从一个筛网单元移动到另一个筛网单元的过程。筛网单元可以例如是压力进料筛网/进料压力筛网，其中材料通过喷嘴或旋转筛网进料，其中材料借助重力强制通过筛网。这种筛网的实例可以分别是DSM筛网和ICM筛网。
非筛选期是提供用于将玉米籽粒物质或其级分与酶一起温育的非分离期。
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人,2000,TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选地3.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性程度。使用6.1.0版本。
所用的任选参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)替代矩阵。Needle标注的“最长同一性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比同一性，并且如下计算：(同一的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
淀粉：术语“淀粉”意指由植物的复杂多糖构成、由广泛出现在植物组织中的呈贮藏粒形式的葡萄糖单元构成、由直链淀粉和支链淀粉组成且表示为(C6H10O5)n(其中n是任何数字)的任何材料。
浸渍或浸泡：术语“浸渍”意指用水以及任选地SO2浸泡作物籽粒。
发明说明：
诸位发明人已经观察到，在商业玉米湿磨中，使用水解酶可以显著提高与研磨过程中产生的纤维级分接触时的淀粉和谷蛋白的产率。特别地，可以通过将纤维分成细和粗级分，并在细级分中给料酶来实现从纤维中高效分离淀粉和谷蛋白。因此，在第一方面，本发明提供了在湿磨过程中改善来自玉米籽粒的淀粉产率和/或谷蛋白产率的方法，所述方法包括：
a)从纤维中分离淀粉和/或谷蛋白以提供纤维级分，
b)通过将所述纤维级分的粗纤维从所述纤维级分的细纤维分离来提供细纤维级分；和
c)将所述细纤维级分与一种或多种水解酶接触。
可以通过粒径分级提供所述细纤维级分。
在本发明的特定实施例中，通过除去可以在具有1000μm孔隙大小的筛网或滤网上保留的纤维，例如通过除去可以在具有900μm、800μm、700μm、600μm孔隙大小的筛网或滤网上保留的纤维，或例如通过除去可以在具有500μm孔隙大小的筛网或滤网上保留的纤维来提供细纤维级分。如商业湿磨领域的技术人员将了解的，这可以通过在所谓的纤维压榨滤液中给料酶来方便地实现。纤维压榨滤液含有细纤维，而粗纤维则作为干燥、经压榨的纤维级分被分离出来。
所述细纤维级分可通过以下提供：
a)通过除去可以在具有1000μm孔隙大小(例如900μm、800μm、700μm、600μm孔隙大小，或例如500μm孔隙大小)的筛网或滤网上保留的纤维；并且然后
b)收集具有50μm孔隙大小的筛网或滤网上保留的纤维。
可以通过过滤、筛选、筛分、过筛和/或是施加离心力提供细纤维级分。
可以通过使纤维级分穿过具有500-1000μm孔隙大小(如500-900μm、500-800μm、500-700μm孔隙大小，或如500-600μm孔隙大小)的过滤器、筛网或滤网，并且除去所述筛网或滤网上保留的纤维来提供细纤维级分。作为使用过滤器、筛网或滤网的替代或补充，可以使用水力旋流器来提供细纤维级分。
在根据本发明的另外的实施例中，通过以下提供细纤维级分：
a)使纤维级分穿过具有500-1000μm孔隙大小(如500-900μm、500-800μm、500-700μm孔隙大小，或如500-600μm孔隙大小)的过滤器、筛网或滤网，并且除去所述过滤器、筛网或滤网上保留的纤维；并且然后
b)使所述纤维级分的剩余部分穿过具有50μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网，并且收集所述筛网或滤网上保留的纤维。
在本发明的特定实施例中，通过使用一个或多个压力进料筛网和/或一个或多个水力旋流器来提供细纤维级分。
在所述过程中提供足够的保留时间以允许水解酶或酶释放在细纤维级分中结合的残余淀粉在本发明的范围内。相对于进入所述过程中的原料(例如玉米籽粒)总量来说，通常以少量提供细纤维级分，所以在不影响过程效率的情况下，较长的保留时间是可行的。因此，根据本发明，可以将细纤维级分与所述一种或多种水解酶接触2-72小时(如2-48小时、2-24小时、2-12小时、2-6小时)的时间段。
如技术人员将了解的，本发明的过程可以优化，例如通过将温度控制在涵盖所应用的一种或多种水解酶的最佳温度的范围内。因此，细纤维级分可以与所述一种或多种水解酶在35℃-70℃的范围内、如在40℃-60℃的范围内、如在46℃-58℃的范围内、如在47℃-55℃的范围内、如在48℃-52℃的范围内的温度接触。
在本发明的优选的实施例中，当保留在培养箱或贮存箱中时，所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶接触。
培养箱或贮存箱优选地提供足够大的空隙以提供所希望的保留时间，并可以具有在一种或多种水解酶与底物温育期间提供适当工艺条件的手段。特别地，培养箱或贮存箱可以包括一个或多个搅拌器，所述搅拌器被配置成用于防止固体和/或细纤维的沉降。需要理解的是，本发明预见了串联连接的若干个培养箱或贮存箱，或可替代地使用多室培养箱或贮存箱。
在一些实施例中，本发明的方法是如下方法：其中在与一种或多种水解酶接触期间从细纤维级分中释放出的淀粉通过过滤、筛选、筛分、过筛和/或施加离心力从所述细纤维中分离出来。
根据本发明的方法可以具体包括以下步骤：
a)将玉米籽粒浸泡在水中，以产生浸泡的玉米籽粒；
b)碾磨所述浸泡的玉米籽粒；
c)从碾磨和浸泡的玉米籽粒中分离胚芽以产生包含纤维、淀粉和谷蛋白的玉米籽粒物质；和
d)对所述玉米籽粒物质进行纤维洗涤程序，以将淀粉和/或谷蛋白从纤维中分离出来并提供纤维级分；
d)通过将所述纤维级分的细纤维与粗纤维分离，以提供细纤维级分；和
e)将所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶接触。
图1示意性地示出了用于根据本发明的特定实施例的纤维洗涤系统。如图1所示，纤维洗涤系统可以包含以逆向流动洗涤配置流畅连接的多个筛网单元S1、S2、S3、S4。“流畅连接”典型地意指如本文所披露的筛网单元或其他研磨设备通过使用流线(例如用于在筛网单元之间输送物质的管道)连接。筛网单元S1-S4中的每一个被配置成用于将玉米籽粒物质和液体流分离成两个级分：第一级分s(s1、s2、s3、s4)和第二级分f(f1、f2、f3、f4)。如技术人员将理解的，在纤维洗涤系统中产生的第一级分的数量取决于系统中包括的筛网单元的数量。系统中的筛网单元的数量优选地在2-8之间，并且在这样的实施例中，第一和第二级分的数量也将在2-8之间。筛网单元被典型地配置，这样使得固体物质在单独的流中分离出来，由此第二级分f含有与第一级分s相比，以wt％测量的更高量纤维。在所述图中，符号“s”优选地指无纤维流(含有淀粉)，并且符号“f”优选地指含有纤维的流。f和s上的指数是指流的来源。应注意，尽管优选地第一级分s不含有任何纤维，但是这在实际装置中可能难以实现。因此，在这些实施例中，所述方法包括以下步骤:
a)将玉米籽粒浸泡在水中，以产生浸泡的玉米籽粒；
b)碾磨所述浸泡的玉米籽粒；
c)从碾磨和浸泡的玉米籽粒中分离胚芽以产生包含纤维、淀粉和谷蛋白的玉米籽粒物质；
d)通过对所述玉米籽粒物质进行一个或多个纤维洗涤步骤来提供纤维级分；每个纤维洗涤步骤包括：将玉米籽粒物质和液体流穿过筛网单元，所述筛网单元被配置成用于将所述玉米籽粒物质和液体流分离成两个级分：第一级分(s)和第二级分(f)，所述第二级分(f)含有与所述第一级分相比，更高量wt％的纤维，
e)通过将所述纤维级分的细纤维与粗纤维分离，以提供细纤维级分；和
f)将所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶接触。
上述方法可包括将纤维级分和/或所述第二级分(f)与一种或多种水解酶(例如，如下面定义的一种或多种水解酶)接触。
提供在所述过程期间在若干个给料点来给料酶在本发明的范围内。例如，根据本发明的过程可以包括将所述纤维级分和/或所述级分(f)与第一水解酶或第一水解酶组接触，以及将所述细纤维级分与第二水解酶或第二水解酶组接触；其中，所述第一水解酶或第一水解酶组与所述第二水解酶或第二水解酶组相同或不同。
在本发明目前优选的实施例中，空间(V1)、培养箱或贮存箱与所述纤维洗涤程序(例如与所述纤维洗涤程序中的筛网单元)流畅连接。这种流畅的连接允许酶简单方便地回收到纤维洗涤过程中，以及容易分离在与一种或多种水解酶温育期间从细纤维释放的残余淀粉。
纤维洗涤系统中的流动具有下游方向和上游方向：每个筛网单元；例如筛网单元S3，接收流；例如f2，来自上游筛网单元，例如，S2并递送流；例如s3，到上游筛网单元；例如S2。类似地，筛网单元S3从下游筛网单元S4接收流s4，并将流f3递送到下游筛网单元S4。在纤维洗涤系统中通过在最佳点添加酶，可以延长保留时间，这可以提高从纤维中去除或分离淀粉的效率。已发现在最上游筛网单元S1的下游和最下游筛网单元S4的上游的位置添加酶是有利的；在图1的实施例中，酶的添加被示为处于筛网单元S3的流体位置(由图1中标记为“酶”的箭头示出)。优选地，在纤维洗涤系统中的停留时间在35分钟到5小时之间，如45分钟到2.5小时之间。
根据其中纤维洗涤系统包含2个筛网单元的实施例，给料优选地在第一和第二筛网单元之间或在筛网单元1和筛网单元2之间配置的空间中。
根据其中纤维洗涤系统包含3个筛网单元的实施例，给料优选地在第二筛网单元中，或在筛网单元1和筛网单元3之间配置的空间中，最优选的在筛网单元2中，或者在筛网单元2和3之间配置的空间中。
根据其中纤维洗涤系统包含4个筛网单元的实施例，给料优选地在第二或第三筛网单元中，或在筛网单元1和筛网单元4之间配置的空间中，最优选的在筛网单元2中，或者在筛网单元2和3之间配置的空间中。
根据其中纤维洗涤系统包含5个筛网单元的实施例，给料优选地在第二、第三或第四筛网单元中，或在筛网单元1和筛网单元5之间配置的空间中，最优选的在筛网单元3中，或者在筛网单元3和4之间配置的空间中。
根据其中纤维洗涤系统包含6个筛网单元的实施例，给料优选地在第二、第三、第四或第五筛网单元中，或在筛网单元1和筛网单元6之间配置的空间中，最优选的在筛网单元4中，或者在筛网单元4和5之间配置的空间中。
根据其中纤维洗涤系统包含7个筛网单元的实施例，给料优选地在第二、第三、第四、第五或第六筛网单元中，或在筛网单元1和筛网单元7之间配置的空间中，最优选的在筛网单元4中，或者在筛网单元4和5之间配置的空间中。
根据其中纤维洗涤系统包含8个筛网单元的实施例，给料优选地在第二、第三、第四、第五、第六和第七筛网单元中，或在筛网单元1和筛网单元8之间配置的空间中，最优选的在筛网单元5中，或者在筛网单元5和6之间配置的空间中。
在本发明目前优选的实施例中，当压榨已进行纤维洗涤的纤维时，细纤维级分作为流出物或滤液提供。在这些实施例中，所述过程包括
a)将所述纤维级分送入纤维压榨机(P)，并对其进行压榨和过滤，以提供经压榨纤维和纤维压榨滤液，以及
b)将所述纤维压榨滤液送入空间(V1)中，并将所述纤维压榨滤液保留在所述空间(V1)中，然后将所述纤维压榨滤液送入所述纤维洗涤系统(F)中。
图2示意性地示出了根据本发明的一些实施例的过程。所述过程涉及使用与纤维压榨机(P)流畅连接的纤维洗涤系统(F)，所述纤维压榨机又与空间或空隙(V1)连接。因此，根据本发明的方法可以包括
a)通过将玉米籽粒物质送入纤维洗涤系统(F)中，并对其进行一个或多个纤维洗涤步骤来提供纤维级分；每个纤维洗涤步骤包括：将玉米籽粒物质和液体流穿过筛网单元，所述筛网单元被配置成用于将所述玉米籽粒物质和液体流分离成两个级分：第一级分(s)和第二级分(f)，所述第二级分(f)含有与所述第一级分(s)相比，更高量wt％的纤维，
b)将所述纤维级分送入纤维压榨机(P)，并对其进行压榨和过滤，以提供经压榨纤维和纤维压榨滤液，
c)将所述纤维压榨滤液送入空间(V1)中，并将所述纤维压榨滤液保留在所述空间(V1)中，然后将所述纤维压榨滤液送入所述纤维洗涤系统(F)中；
其中将所述纤维压榨滤液与所述一种或多种水解酶在所述纤维压榨滤液(P)与所述空间(V1)之间或所述空间(V1)中接触。
所述空间(V1)中的温育时间可以是至少30分钟，如至少1小时、至少2小时、至少4小时、至少6小时、至少8小时或至少10个小时，如30分钟到48小时，如1-48小时、2-48小时、4-48小时、6-48小时、8-48小时或如10-48小时。
在本发明的这些实施例中，步骤b)中的过滤是穿过具有500-1000μm孔隙大小(如500-900μm、500-800μm、500-700μm孔隙大小，或如500-600μm孔隙大小)的过滤器、筛网或滤网。
图3示意性地示出了纤维洗涤程序，其中空间(V)设置在系统的筛网单元之间。如所示，在根据本发明的方法中，可以使用纤维洗涤系统进行纤维洗涤程序，所述纤维洗涤系统包含：
i)多个筛网单元(S1……S4)，所述筛网单元以逆向流动洗涤配置流畅连接；每个筛网单元被配置成用于将玉米籽粒物质和液体流分离成两个级分：
-第一级分(s)和
-第二级分(f)，
所述第二级分(f)含有与所述第一级分(s)相比，以wt％测量的更高量纤维；
ii)任选地，空间(V)设置在系统中并且流畅连接以接收所述第一级分(s)之一、所述第二级分(f)之一、或混合的第一和第二级分(s，f)、优选地仅第二级分(f)，并配置成为在空间中接收的一个或两个级分提供温育时间；并且将由此温育的一个或两个级分导出到下游筛网单元(S4)，
其中所述系统被配置成用于
-将玉米籽粒物质和液体导入最上游筛网单元(S1)
-将来自最上游筛网单元(S1)的第一级分(s1)作为含有淀粉的产物流导出，
-导入工艺用水，优选地设置用于将工艺用水导入最下游筛网单元(S4)，
-将来自最下游筛网单元(S4)的第二级分(f4)作为洗涤的玉米籽粒物质导出，所述玉米籽粒物质含有比初始玉米籽粒物质更少量的淀粉和谷蛋白；和
-任选地将水解酶引入所述系统。
所述一种或多种水解酶可以按相当于5-500g酶蛋白(EP)，如5-300g EP/公吨玉米籽粒、5-200g EP/公吨玉米籽粒、5-100g EP/公吨玉米籽粒、10-500g EP/公吨玉米籽粒、10-300g EP/公吨玉米籽粒、10-200g EP/公吨玉米籽粒或如10-100g EP/公吨玉米籽粒的量给料。所述一种或多种水解酶也可以按相当于0.2-15mg酶蛋白(EP)/g纤维，如0.2-10mgEP/g纤维、0.2-5mg EP/g纤维、0.4-15mg EP/g纤维、0.4-10mg EP/g纤维或如0.4-5mg EP/g纤维的量给料。
所述空间(V)中的温育时间可以在0.5-3小时，例如1-3小时、1-2小时或如85-95分钟的范围内。所述空间(V)可以具有在50-1000m3，如50-500m3、100-1000m3、100-500m3、200-1000m3、200-500m3或500-1000m3的范围内的体积。
所述一种或多种水解酶可以选自由以下组成的组：纤维素酶(EC 3.2.1.4)、木聚糖酶(EC 3.2.1.8)、阿拉伯呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55(非还原性末端α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶)；EC 3.2.1.185(非还原性末端β-L-阿拉伯呋喃糖苷酶)、纤维二糖水解酶I(EC3.2.1.150)、纤维二糖水解酶II(E.C.3.2.1.91)、纤维二糖苷酶(E.C.3.2.1.176)、β-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.21)、和β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)。
所述水解酶中的一种或多种在具有纤维素酶背景的生物中表达，例如里氏木霉(Trichoderma reesei)。
所述一种或多种水解酶可以包括具有木聚糖酶活性的GH10多肽和/或具有木聚糖酶活性的GH11多肽。
所述一种或多种水解酶可以包括具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的GH61多肽和/或具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的GH62多肽。
所述一种或多种所述水解酶可以特别包括选自由以下组成的组的具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的GH62多肽：
i)如SEQ ID NO:1-21中任一项所示的氨基酸序列
ii)与SEQ ID NO:1-21中所示的氨基酸序列中任一项具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；和
iii)iv)和v)中任一个氨基酸序列的子序列。
所述一种或多种水解酶可以包括选自由以下组成的组的具有木聚糖酶活性的GH10多肽：
i)如SEQ ID NO:22-26中任一项所示的氨基酸序列
ii)与SEQ ID NO:22-26中任一项具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；和
iii)i)和ii)中任一个氨基酸序列的子序列。
所述水解酶中的一种或多种包括选自由以下组成的组的具有木聚糖酶活性的GH11多肽：
i)如SEQ ID NO:27-35中任一项所示的氨基酸序列
ii)与SEQ ID NO:27-35中任一项具有至少80％同一性的氨基酸序列；和
iii)i)和ii)中任一个氨基酸序列的子序列。
所述一种或多种水解酶可在里氏木霉中表达，并且包括木聚糖酶和阿拉伯呋喃糖苷酶，所述木聚糖酶是GH10木聚糖酶，所述阿拉伯呋喃糖苷酶是GH62阿拉伯呋喃糖苷酶。
在目前优选的实施例中，所述过程使用 Fiberwash，这是一种包含GH10木聚糖酶和GH62阿拉伯呋喃糖苷酶的商业产品，可商购自丹麦鲍斯韦(Bagsvaerd,Denmark)的诺维信公司(Novozymes A/S)。
参照图2中的示意图，本发明的方法可以包括
a)通过将玉米籽粒物质送入纤维洗涤系统(F)中，并对其进行一个或多个纤维洗涤步骤来提供纤维级分；每个纤维洗涤步骤包括：将玉米籽粒物质和液体流穿过筛网单元，所述筛网单元被配置成用于将所述玉米籽粒物质和液体流分离成两个级分：第一级分(s)和第二级分(f)，所述第二级分(f)含有与所述第一级分(s)相比，更高量wt％的纤维，
b)将所述纤维级分送入纤维压榨机(P)，并对其进行压榨和过滤，以提供经压榨纤维和纤维压榨滤液或细纤维级分，
c)将纤维压榨滤液或细纤维级分送入空间(V1)中，并将所述纤维压榨滤液或细纤维级分保留在所述空间(V1)中，然后将所述纤维压榨滤液或细纤维级分送入所述纤维洗涤系统(F)中；
其中将所述纤维压榨滤液或细纤维级分与所述一种或多种水解酶(通过给料所述一种或多种酶)在所述纤维压榨滤液(P)与所述空间(V1)之间或所述空间(V1)中接触。
在第二方面，本发明提供玉米籽粒湿磨系统，所述玉米籽粒湿磨系统包括：
i)纤维洗涤系统(F)
ii)纤维压榨机(fiber press)(P),
iii)用于给料一种或多种水解酶的手段；和
iv)空间(V1)；
其中所述纤维洗涤系统(F)、所述纤维压榨机(P)和所述空间(V1)相互连接以允许纤维级分从所述纤维洗涤系统流向所述压榨机，并且纤维压榨滤液或细纤维级分从所述压榨机流向所述空间(V1)；
其中所述用于给料一种或多种水解酶的手段配置用于向所述纤维压榨滤液或所述细纤维级分中给料所述酶，
并且所述空间(V1)每天至少加工100m3/1000公吨玉米。
如技术人员将了解的，关于本文提供的方法和研磨系统，所述空间(V1)的所需体积在一定程度上取决于特定的湿磨机的配置和湿磨过程中选择的工艺参数。相关的工艺参数包括用于温育的干物质(DS)的相对量、纤维压榨滤液或细纤维级分的流量以及所希望的温育时间。例如，对于每天加工1000公吨玉米(以纤维压榨滤液或细纤维级分中干物质的量对应于4％DS和8小时温育时间操作)的工厂，空间(V1)的理想体积为80到100m3。因此，在另外的实施例中，空间(V1)每天加工50和250m3/1000公吨玉米，如每天加工50和250m3/1000公吨玉米。在绝对数量上，空间(V1)的优选体积是50和500m3，如50和400m3、50和300m3、50和250m3、80和500m3、80和400m3，或80和250m3。
所述给料一种或多种水解酶的手段(给料设备)包含在图3的示意图中。所述给料设备(10)典型地适于提供可控的给料量的酶，优选地根据到系统的酶的量与玉米籽粒物质的进料量之间的预定特定比率。为实现此目的，所述给料装置可以是计量泵，如由图3中的活塞泵示出的。
根据本发明的玉米籽粒湿磨系统可以是如下研磨系统，其中：
-所述纤维洗涤系统(F)、所述纤维压榨机(P)和所述空间(V1)相互连接以允许纤维级分从所述纤维洗涤系统流向所述压榨机，纤维压榨滤液或细纤维级分从所述压榨机流向所述空间(V1)和纤维压榨滤液或细纤维级分从所述空间(V1)流向所述纤维洗涤系统；
并且
-所述空间(V1)设置在所述纤维压榨机与所述纤维洗涤系统之间的位置。
根据本发明的玉米籽粒湿磨系统可以包括连接或集成在压榨机中的筛网单元或筛网单元组，所述筛网单元或筛单元组被配置成用于产生如根据本发明定义的细纤维级分。
在特定实施例中，空间(V1)连接到纤维洗涤系统(F)，以便允许纤维压榨滤液或细纤维级分从所述空间(V1)流向所述纤维洗涤系统(F)中。
根据本发明的玉米籽粒湿磨系统可以特别包括纤维洗涤系统，所述纤维洗涤系统包括；
i)多个筛网单元(S1……S4)，所述筛网单元以逆向流动洗涤配置流畅连接；每个筛网单元被配置成用于将玉米籽粒物质和液体流分离成两个级分：
-第一级分(s)和
-第二级分(f)，
所述第二级分(f)含有与所述第一级分(s)相比，以wt％测量的更高量纤维；
ii)任选地，空间(V)设置在系统中并且流畅连接以接收所述第一级分(s)之一、所述第二级分(f)之一、或混合的第一和第二级分(s，f)、优选地仅第二级分(f)，并配置成为在空间中接收的一个或两个级分提供温育时间；并且将由此温育的一个或两个级分导出到下游筛网单元(S4)，
其中所述系统被配置成用于
-将玉米籽粒物质和液体导入最上游筛网单元(S1)
-将来自最上游筛网单元(S1)的第一级分(s1)作为含有淀粉的产物流导出，
-导入工艺用水，优选地设置用于将工艺用水导入最下游筛网单元(S4)，
-将来自最下游筛网单元(S4)的第二级分(f4)作为洗涤的玉米籽粒物质导出，所述玉米籽粒物质含有比初始玉米籽粒物质更少量的淀粉和谷蛋白；和
-任选地将水解酶引入所述系统。
根据本发明的玉米籽粒湿磨系统可以进一步包括：
i)碾磨或研磨装置，其被配置成用于碾磨或研磨已浸渍的作物籽粒，
ii)第一筛网单元或筛网单元组，其被配置成用于接收碾磨或研磨浸渍过的作物籽粒，并将胚芽从淀粉、谷蛋白和纤维中分离出来，
iii)第二筛网单元组，其在纤维洗涤系统(F)中被配置为接收淀粉、谷蛋白和纤维，并将所述纤维与所述淀粉和谷蛋白分离，
iv)压榨机(P),
v)第三筛网单元或第三筛网单元组，其被配置成用于产生细纤维级分，如上文定义的细纤维级分；
vi)酶给料系统，其被配置成用于将所述细纤维级分与一种或多种水解酶接触，和
vii)空间(V1)；
其中所述空间(V1)流畅地连接到所述第三筛网单元或筛网单元组以接收和保留所述细纤维级分和一种或多种酶，并流畅地连接到所述纤维洗涤系统以将所述细纤维级分和一种或多种酶传递到所述纤维洗涤系统中。
在最后方面，本发明提供了纤维级分(如细纤维级分)，所述纤维级分通过根据本发明的方法可获得或获得。
尽管已经结合指定实施例描述了本发明，但是不应将其解释为以任何方式限于所示出的实例。本发明的范围由所附的权利要求集阐述。在权利要求的上下文中，术语“包含(包括)(comprising或comprises)”不排除其他可能的元素或步骤。另外，提及例如“一个(a或an)”等的参考不应被解释为排除多个。权利要求中关于附图中所示元素的参考标记的使用也不应被解释为限制本发明的范围。此外，可以有利地组合在不同权利要求中提到的独立的特征，并且在不同的权利要求中提及这些特征并不排除特征的组合是不可能和有利的。
实施例
本发明还可通过以下实施例来说明：
1.一种在湿磨过程中改善来自玉米籽粒的淀粉产率和/或谷蛋白产率的方法，所述方法包括：
a)从纤维中分离淀粉和/或谷蛋白以提供纤维级分，
b)通过将所述纤维级分的粗纤维从所述纤维级分的细纤维分离来提供细纤维级分；和
c)将所述细纤维级分与一种或多种水解酶接触。
2.根据实施例1所述的方法，其中通过粒径分级提供所述细纤维级分。
3.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中通过除去具有1000μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网上保留的纤维来提供所述细纤维级分。
4.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中通过以下提供所述细纤维级分：
a)除去具有1000μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网上保留的纤维；并且然后
b)收集具有50μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网上保留的纤维。
5.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中通过过滤、筛选、筛分、过筛和/或施加离心力来提供所述细纤维级分。
6.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中通过使所述纤维级分穿过具有1000μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网，并且除去所述筛网或滤网上保留的纤维来提供所述细纤维级分。
7.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中通过以下来提供所述细纤维级分：
a)使所述纤维级分穿过具有1000μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网，并且除去所述过滤器、筛网或滤网上保留的纤维；并且然后
b)使所述纤维级分的剩余部分穿过具有50μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网，并且收集所述筛网或滤网上保留的纤维。
8.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中通过使用一个或多个压力进料筛网和/或一个或多个水力旋流器来提供所述细纤维级分。
9.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶接触2-72小时的时间段。
10.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶在35℃-70℃的范围内、如在40℃-60℃的范围内、如在46℃-58℃的范围内、如在47℃-55℃的范围内、如在48℃-52℃的范围内的温度接触。
11.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中当保留在培养箱或贮存箱中时，所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶接触。
12.根据前述实施例中任一项所述的方法，所述培养箱或贮存箱包括一个或多个搅拌器，所述搅拌器配置成用于防止固体和/或细纤维的沉降。
13.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中在与所述一种或多种水解酶接触期间从细纤维级分中释放出的淀粉通过过滤、筛选、筛分、过筛和/或施加离心力从所述细纤维中分离出来。
14.根据前述实施例中任一项所述的方法，所述方法包括以下步骤：
a)将玉米籽粒浸泡在水中，以产生浸泡的玉米籽粒；
b)碾磨所述浸泡的玉米籽粒；
c)从碾磨和浸泡的玉米籽粒中分离胚芽以产生包含纤维、淀粉和谷蛋白的玉米籽粒物质；和
d)对所述玉米籽粒物质进行纤维洗涤程序，以将淀粉和/或谷蛋白从纤维中分离出来并提供纤维级分；
d)通过将所述纤维级分的细纤维与粗纤维分离，以提供细纤维级分；和
e)将所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶接触。
15.根据前述实施例中任一项所述的方法，所述方法包括以下步骤：
a)将玉米籽粒浸泡在水中，以产生浸泡的玉米籽粒；
b)碾磨所述浸泡的玉米籽粒；
c)从碾磨和浸泡的玉米籽粒中分离胚芽以产生包含纤维、淀粉和谷蛋白的玉米籽粒物质；
d)通过对所述玉米籽粒物质进行一个或多个纤维洗涤步骤来提供纤维级分；每个纤维洗涤步骤包括：将玉米籽粒物质和液体流穿过筛网单元，所述筛网单元被配置成用于将所述玉米籽粒物质和液体流分离成两个级分：第一级分(s)和第二级分(f)，所述第二级分(f)含有与所述第一级分相比，更高量wt％的纤维，
e)通过将所述纤维级分的细纤维与粗纤维分离，以提供细纤维级分；和
f)将所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶接触。
16.根据实施例15所述的方法，所述方法包括将所述纤维级分和/或所述第二级分(f)与一种或多种水解酶接触。
17.根据实施例15或16所述的方法，所述方法包括将所述纤维级分和/或所述级分(f)与第一水解酶或第一水解酶组接触，以及将所述细纤维级分与第二水解酶或第二水解酶组接触；其中，所述第一水解酶或第一水解酶组与所述第二水解酶或第二水解酶组相同或不同。
18.根据实施例11-17中的任一项所述的方法，其中所述培养箱或贮存箱在所述纤维洗涤程序中与筛网单元流畅连接。
19.根据前述实施例中任一项所述的方法，所述方法包括：
a)将所述纤维级分送入纤维压榨机(P)，并对其进行压榨和过滤，以提供经压榨纤维和纤维压榨滤液，以及
b)将所述纤维压榨滤液送入空间(V1)中，并将所述纤维压榨滤液保留在所述空间(V1)中，然后将所述纤维压榨滤液送入所述纤维洗涤系统(F)中。
20.根据前述实施例中任一项所述的方法，所述方法包括：
a)通过将玉米籽粒物质送入纤维洗涤系统(F)中，并对其进行一个或多个纤维洗涤步骤来提供纤维级分；每个纤维洗涤步骤包括：将玉米籽粒物质和液体流穿过筛网单元，所述筛网单元被配置成用于将所述玉米籽粒物质和液体流分离成两个级分：第一级分(s)和第二级分(f)，所述第二级分(f)含有与所述第一级分(s)相比，更高量wt％的纤维，
b)将所述纤维级分送入纤维压榨机(P)，并对其进行压榨和过滤，以提供经压榨纤维和纤维压榨滤液，
c)将所述纤维压榨滤液送入空间(V1)中，并将所述纤维压榨滤液保留在所述空间(V1)中，然后将所述纤维压榨滤液送入所述纤维洗涤系统(F)中；
其中将所述纤维压榨滤液与所述一种或多种水解酶在所述纤维压榨滤液(P)与所述空间(V1)之间或所述空间(V1)中接触。
21.根据实施例20所述的方法，其中步骤b)中的过滤是穿过具有1000μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网。
22.根据实施例20或21所述的方法，其中所述空间(V1)中的温育时间是至少30分钟，如30分钟-48小时。
23.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述纤维洗涤程序是使用纤维洗涤系统进行的，所述纤维洗涤系统包括：
i)多个筛网单元(S1……S4)，所述筛网单元以逆向流动洗涤配置流畅连接；每个筛网单元被配置成用于将玉米籽粒物质和液体流分离成两个级分：
-第一级分(s)和
-第二级分(f)，
所述第二级分(f)含有与所述第一级分(s)相比，以wt％测量的更高量纤维；
ii)任选地，空间(V)设置在系统中并且流畅连接以接收所述第一级分(s)之一、所述第二级分(f)之一、或混合的第一和第二级分(s，f)、优选地仅第二级分(f)，并配置成为在空间中接收的一个或两个级分提供温育时间；并且将由此温育的一个或两个级分导出到下游筛网单元(S4)，
其中所述系统被配置成用于
-将玉米籽粒物质和液体导入最上游筛网单元(S1)
-将来自最上游筛网单元(S1)的第一级分(s1)作为含有淀粉的产物流导出，
-导入工艺用水，优选地设置用于将工艺用水导入最下游筛网单元(S4)，
-将来自最下游筛网单元(S4)的第二级分(f4)作为洗涤的玉米籽粒物质导出，所述玉米籽粒物质含有比初始玉米籽粒物质更少量的淀粉和谷蛋白；和
-任选地将水解酶引入所述系统。
24.根据实施例23所述的方法，其中所述空间(V)具有在50-1000m3的范围内的体积。
25.根据实施例19-24中任一项所述的方法，所述空间(V1)具有在80和250m3的范围内的体积。
26.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述一种或多种水解酶按相当于5-500g酶蛋白(EP)，如5-300g EP/公吨玉米籽粒、5-200g EP/公吨玉米籽粒、5-100g EP/公吨玉米籽粒、10-500g EP/公吨玉米籽粒、10-300g EP/公吨玉米籽粒、10-200g EP/公吨玉米籽粒或如10-100g EP/公吨玉米籽粒的量给料，或按相当于0.2-15mg酶蛋白(EP)/g纤维，如0.2-10mg EP/g纤维、0.2-5mg EP/g纤维、0.4-15mg EP/g纤维、0.4-10mg EP/g纤维或如0.4-5mg EP/g纤维的量给料。
27.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述一种或多种水解酶选自由以下组成的组：纤维素酶(EC 3.2.1.4)、木聚糖酶(EC 3.2.1.8)、阿拉伯呋喃糖苷酶(EC3.2.1.55(非还原性末端α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶)；EC 3.2.1.185(非还原性末端β-L-阿拉伯呋喃糖苷酶)、纤维二糖水解酶I(EC 3.2.1.150)、纤维二糖水解酶II(E.C.3.2.1.91)、纤维二糖苷酶(E.C.3.2.1.176)、β-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.21)、和β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)。
28.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述水解酶中的一种或多种在具有纤维素酶背景的生物中表达，例如里氏木霉。
29.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述一种或多种水解酶包括具有木聚糖酶活性的GH10多肽和/或具有木聚糖酶活性的GH11多肽。
30.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述一种或多种水解酶包括具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的GH61多肽和/或具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的GH62多肽。
31.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述一种或多种水解酶包括选自由以下组成的组的具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的GH62多肽：
i)如SEQ ID NO:1-21中任一项所示的氨基酸序列
ii)与SEQ ID NO:1-21中所示的氨基酸序列中任一项具有至少80％同一性的氨基酸序列；和
iii)iv)和v)中任一个氨基酸序列的子序列。
32.根据前述实施例1-31中任一项所述的方法，其中所述一种或多种水解酶包括选自由以下组成的组的具有木聚糖酶活性的GH10多肽：
i)如SEQ ID NO:22-26中任一项所示的氨基酸序列
ii)与SEQ ID NO:22-26中任一项具有至少80％同一性的氨基酸序列；和
iii)i)和ii)中任一个氨基酸序列的子序列。
33.根据实施例1-32中任一项所述的方法，其中所述水解酶中的一种或多种包括选自由以下组成的组的具有木聚糖酶活性的GH11多肽：
i)如SEQ ID NO:27-35中任一项所示的氨基酸序列
ii)与SEQ ID NO:27-35中任一项具有至少80％同一性的氨基酸序列；和
iii)i)和ii)中任一个氨基酸序列的子序列。
34.根据前述实施例中任一项所述的方法，其中所述一种或多种水解酶在里氏木霉中表达，并且包括木聚糖酶和阿拉伯呋喃糖苷酶，所述木聚糖酶是GH10木聚糖酶，所述阿拉伯呋喃糖苷酶是GH62阿拉伯呋喃糖苷酶。
35.根据前述实施例中任一项所述的方法，所述方法包括：
a)通过将玉米籽粒物质送入纤维洗涤系统(F)中，并对其进行一个或多个纤维洗涤步骤来提供纤维级分；每个纤维洗涤步骤包括：将玉米籽粒物质和液体流穿过筛网单元，所述筛网单元被配置成用于将所述玉米籽粒物质和液体流分离成两个级分：第一级分(s)和第二级分(f)，所述第二级分(f)含有与所述第一级分(s)相比，更高量wt％的纤维，
b)将所述纤维级分送入纤维压榨机(P)，并对其进行压榨和过滤，以提供经压榨纤维或粗纤维级分以及纤维压榨滤液或细纤维级分，
c)将纤维压榨滤液或细纤维级分送入空间(V1)中，并将所述纤维压榨滤液或细纤维级分保留在所述空间(V1)中，然后将所述纤维压榨滤液或细纤维级分送入所述纤维洗涤系统(F)中；
其中将所述纤维压榨滤液或细纤维级分与所述一种或多种水解酶在所述纤维压榨滤液(P)与所述空间(V1)之间或所述空间(V1)中接触。
36.一种玉米籽粒湿磨系统，所述玉米籽粒湿磨系统包括
i)纤维洗涤系统(F)
ii)纤维压榨机(P),
iii)用于给料一种或多种水解酶的手段；和
iv)空间(V1)；
其中所述纤维洗涤系统(F)、所述纤维压榨机(P)和所述空间(V1)相互连接以允许纤维级分从所述纤维洗涤系统流向所述压榨机，纤维压榨滤液或细纤维级分从所述压榨机流向所述空间(V1)；
其中所述用于给料一种或多种水解酶的手段配置用于向所述纤维压榨滤液或所述细纤维级分中给料所述酶，
并且所述空间(V1)每天至少加工100m3/1000公吨玉米。
37.根据实施例36所述的玉米籽粒湿磨系统，其中
-所述纤维洗涤系统(F)、所述纤维压榨机(P)和所述空间(V1)相互连接以允许纤维级分从所述纤维洗涤系统流向所述压榨机，纤维压榨滤液或细纤维级分从所述压榨机流向所述空间(V1)和纤维压榨滤液或细纤维级分从所述空间(V1)流向所述纤维洗涤系统；
并且
-所述空间(V1)设置在所述纤维压榨机与所述纤维洗涤系统之间的位置。
38.根据实施例36-37所述的玉米籽粒湿磨系统，所述玉米籽粒湿磨系统包括连接或集成在所述压榨机中的筛网单元或筛网单元组，所述筛网单元或筛网单元组被配置成用于产生如实施例2-8中任一项所定义的细纤维级分。
39.根据实施例36-38所述的玉米籽粒湿磨系统，其中所述空间(V1)连接到纤维洗涤系统(F)，以便允许所述纤维压榨滤液或所述细纤维级分从所述空间(V1)流向所述纤维洗涤系统(F)中。
40.根据实施例36-39中任一项所述的玉米籽粒湿磨系统，其中所述纤维洗涤系统如实施例23中所定义的。
41.根据实施例36-40中任一项所述的玉米籽粒湿磨系统，所述玉米籽粒湿磨系统包括
i)碾磨或研磨装置，其被配置成用于碾磨或研磨已浸渍的作物籽粒，
ii)第一筛网单元或筛网单元组，其被配置成用于接收碾磨或研磨浸渍过的作物籽粒，并将胚芽从淀粉、谷蛋白和纤维中分离出来，
iii)第二筛网单元组，其在纤维洗涤系统(F)中被配置为接收淀粉、谷蛋白和纤维，并将所述纤维与所述淀粉和谷蛋白分离，
iv)压榨机(P),
v)第三筛网单元或筛网单元组，其被配置成用于产生如实施例2-8中任一项所定义的细纤维级分；
vi)酶给料系统，其被配置成用于将所述细纤维级分与一种或多种水解酶接触，和
vii)空间(V1)；
其中所述空间(V1)流畅地连接到所述第三筛网单元或筛网单元组以接收和保留所述细纤维级分和一种或多种酶，并流畅地连接到所述纤维洗涤系统以将所述细纤维级分和一种或多种酶传递到所述纤维洗涤系统中。
42.一种纤维级分，如一种细纤维级分，所述纤维级分通过根据实施例1-34中任一项所述的方法可获得或获得。
实例
实例1：
在这个实例中，我们测量了在不同剂量和温育时间下温育后从细纤维中回收的不溶性固体、细纤维中残余的淀粉和细纤维中残余的蛋白质。
细纤维样品获得自湿磨厂，其中总干物质含量为5.7％。样品被重新悬浮在自来水中，成为含有4％干固体的浆液。以10.59mg产品/g纤维和31.76mg产品/g纤维，向该浆液中添加 FiberWash(可商购自丹麦鲍斯韦的诺维信公司)。
10.59mg产品/g纤维剂量呈工业过程的3x循环效应：循环效应是由于湿磨过程中流的逆向流动和工艺用水的循环，并且在湿磨机处于平衡状态操作时实现。
0.3kg/MT湿玉米*3(循环效应)/玉米中85％干固体/玉米中10％纤维。
10.59mg产品/g纤维*细纤维干固体＝酶剂量
如下表1示出的，用多种量的水调节％DS，以达到4％DS。
(纤维干固体/％干燥的固体)-纤维重量＝添加的水
表1：
温育在50℃在赛默飞世尔(Thermo Fisher)空气振动器中进行，并且恒定混合0、2、4和24小时。温育后，在加工前将样品在冰水(5℃)中快速冷却。
将浆液倾倒在50μm筛网和托盘上。用托盘收集滤液。将托盘中的不溶性固体转移到500ml Nalgene瓶中。将细纤维从50μm筛网中刮出，并用刮刀在烧杯中用200ml的DI水洗涤。然后将细纤维浆液倾倒在50μm滤网和托盘上，将不溶性固体转移到同一Nalgene瓶中。
然后盖上Nalgene瓶，并且使用真空过滤分离不溶性固体。真空过滤装置利用带有滤纸(Whatman)的漏斗，在真空下将不溶性固体浆液倾倒在滤纸上。在过滤之前将滤纸称重，并且将滤纸放入50℃的烘箱中干燥，并且在烘箱中24小时后取出称重。不溶性固体示于下表2和图4中。
表2：
从剂量和温育时间范围内产生的不溶性固体的数量明显看出Fiberwash的作用。
舀出留在50μm滤网上的细纤维并放置在50℃烘箱中过夜。在50℃烘箱中干燥过夜后，将残余细纤维放置在105℃烘箱中1小时以去除任何残余水分。称取一定量的残余细纤维，并放置在装有50ml 0.4M HCl的琥珀色瓶中。松散地盖上瓶盖并旋转瓶。将瓶放置在230F的高压釜中80分钟。80分钟后,将瓶冷却至室温并通过0.45μm过滤器过滤进HPLC小瓶中。
采用Agilent 1200HPLC进行HPLC分析。
注意：1.111为淀粉水化因子(starch hydration factor)。
结果(残余细纤维中的平均％(w/w)淀粉)如图5所示。
从剂量和温育时间范围内从各种酶处理过的细纤维样品中去除的淀粉百分比明显看出 FiberWash的作用。
在LECO FP-628氮分析仪上运行100mg干燥的残余细纤维。LECO氮分析仪CHN628系列元素测定仪(Elemental Determinator)用于测定有机基质中的氮、碳/氮、和碳/氢/氮。所述仪器利用燃烧技术，并在4.5分钟内提供所有被测定的元素的结果。所述仪器的特征在于具有基于的定制软件，所述软件通过外部PC操作以控制系统操作和数据管理。
将预先称重并封装的样品被放入仪器的装载器里，在此处样品将被转移到仪器的吹扫室(位于炉正上方)中，从而消除转移过程中的大气气体。然后样品引入仅含纯氧的初级炉(primary furnace)中，从而使样品快速完全燃烧(氧化)。样品中存在的碳、氢和氮分别被氧化为二氧化碳(CO2)、水(H20)和NOx，然后由氧载体通过二级炉(secondary furnac)进行吹扫，以进一步氧化和去除悬浮微粒。在FP和CN628型号中，燃烧气体通过预冷器和热电冷却器来除去水蒸气。然后将混合气体收集到称为镇流器(ballast)的容器中进行平衡。将来自镇流器的均质气体通过10cc等分试样环路吹扫，然后通过载气。利用单独优化的非分散红外(NDIR)单元检测H2O和CO2，从而确保系统的快速分析时间。将NOx气体通过装满铜的还原管，以将所述气体还原为N2并去除燃烧过程中存在的任何过量氧气。然后，将等分气体通过LECOSORB和Anhydrone，以去除CO2以及在CO2捕集过程中产生的水，并进入用于检测N2的热导池(TC)。
最终结果通常以重量百分比或百万分率显示，但也可以以其他自定义单位或转换(如总蛋白质百分比、水分校正等)显示。
LECO FP-628安装有
·钢丝绒炉过滤管
·无水高氯酸镁炉过滤管
·多孔坩埚
·35psi氧气
·35psi氦气
·6.25玉米蛋白因子，基于用户手册，蛋白质中氮的平均含量为16％＝100/16＝6.25
基于样品的质量测量氮百分比。
样品氮含量(％)*6.25(玉米蛋白因子)＝蛋白质(％)
结果示于图6中。从剂量和温育时间范围内从各种酶处理过的细纤维样品中去除的蛋白质百分比明显看出 Fiberwash的作用。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
Vidal, Jr., Bernardo
Ferrer, Pastor, Oscar
Gibbons, Thomas Patrick
<120> 淀粉提取方法
<130> 14549-WO-PCT
<160> 35
<170> PatentIn3.5版
<210> 1
<211> 302
<212> PRT
<213> 胶囊青霉（Penicillium capsulatum）
<400> 1
Asn Cys Ala Leu Pro Ser Thr Tyr Ser Trp Thr Ser Thr Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ala Asn Pro Lys Pro Gly Trp Thr Ala Ile Lys Asp Phe Thr Asn Val
20 25 30
Val Phe Asn Asn Arg His Val Val Tyr Ala Ser Thr Thr Asp Thr Ser
35 40 45
Gly Asn Tyr Gly Ala Met Ser Phe Gly Val Phe Ser Asp Trp Pro Gly
50 55 60
Met Ala Ser Ala Ser Gln Asn Ala Leu Ser Phe Ala Ala Val Ala Pro
65 70 75 80
Thr Leu Phe Tyr Phe Gln Pro Lys Ser Ile Trp Val Leu Ala Tyr Gln
85 90 95
Trp Gly Ser Ser Thr Phe Thr Tyr Arg Thr Ser Ser Asp Pro Thr Asn
100 105 110
Ala Tyr Gly Trp Ser Ser Glu Gln Ala Leu Phe Ser Gly Lys Val Thr
115 120 125
Gly Ser Ser Thr Gly Ala Ile Asp Gln Thr Leu Ile Gly Asp Ala Thr
130 135 140
His Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ser
145 150 155 160
Ser Met Pro Ile Ser Asn Phe Pro Gly Asn Phe Gly Thr Val Ser Glu
165 170 175
Val Val Leu Ser Asp Thr Gln Asn Asn Leu Phe Glu Ala Val Gln Val
180 185 190
Tyr Thr Val Lys Gly Gln Asn Gln Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Ile
195 200 205
Gly Ser Glu Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Phe Thr Ala Ser Ser Leu Gly
210 215 220
Gly Leu Trp Thr Ala Gln Ala Ala Ser Glu Thr Lys Pro Phe Ala Gly
225 230 235 240
Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Asp
245 250 255
Leu Val Arg Ser Asn Pro Asp Gln Thr Met Thr Ile Asp Pro Cys Asn
260 265 270
Leu Gln Phe Leu Tyr Gln Gly Arg Asn Pro Gly Ala Ser Gly Asn Tyr
275 280 285
Asn Thr Leu Pro Trp Arg Pro Gly Val Leu Thr Leu Asn Asn
290 295 300
<210> 2
<211> 303
<212> PRT
<213> 黄灰青霉（Penicillium aurantiogriseum）
<400> 2
Asp Cys Ala Leu Pro Ser Thr Tyr Thr Trp Thr Ser Thr Gly Ala Leu
1 5 10 15
Ala Asn Pro Lys Ser Gly Trp Thr Ala Ile Lys Asp Phe Thr Asn Val
20 25 30
Val Val Asn Asn Lys His Leu Val Tyr Ala Ser Thr Thr Asp Ala Ser
35 40 45
Gly Asn Tyr Gly Ala Met Asn Phe Gly Pro Phe Ser Asp Trp Ser Gly
50 55 60
Met Ala Thr Ala Ser Gln Ile Lys Thr Ser Phe Asn Ala Val Ala Pro
65 70 75 80
Thr Leu Phe Tyr Phe Gln Pro Lys Asp Ile Trp Val Ile Ala Tyr Gln
85 90 95
Trp Gly Ser Ser Thr Phe Thr Tyr Arg Thr Ser Ser Asp Pro Thr Asn
100 105 110
Ala Asn Gly Trp Ser Ser Glu Gln Ala Leu Phe Ser Gly Lys Ile Thr
115 120 125
Ala Pro Asp Ala Ala Ile Asp Gln Thr Val Ile Gly Asp Ser Thr His
130 135 140
Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ser Ser
145 150 155 160
Met Ser Ile Asp Lys Phe Pro Gly Asn Phe Gly Thr Ser Ser Glu Ile
165 170 175
Val Leu Ser Gly Ala Arg Asn Asp Leu Phe Glu Ala Val Gln Val Tyr
180 185 190
Thr Val Lys Gly Gln Asn Lys Tyr Leu Met Leu Val Glu Ala Ile Gly
195 200 205
Ala Gln Gly Gln Arg Tyr Phe Arg Ser Phe Val Ser Ser Ser Leu Gly
210 215 220
Gly Lys Trp Glu Pro Gln Ala Ala Ser Glu Ser Lys Pro Phe Ala Gly
225 230 235 240
Lys Ala Asn Val Gly Ala Thr Trp Thr Lys Asp Phe Ser His Gly Asp
245 250 255
Leu Val Arg Thr Asn Pro Asp Gln Thr Met Thr Val Asp Pro Cys Asn
260 265 270
Leu Gln Leu Leu Tyr Gln Gly Arg Asp Pro Thr Ala Thr Ser Ser Asn
275 280 285
Tyr Asn Thr Ile Pro Trp Gln Pro Ala Val Leu Thr Leu Lys Lys
290 295 300
<210> 3
<211> 382
<212> PRT
<213> 棒曲霉（Aspergillus clavatus）
<400> 3
Gln Gln Thr Leu Tyr Gly Gln Cys Gly Gly Asn Gly Trp Thr Gly Pro
1 5 10 15
Thr Gln Cys Val Ser Gly Ala Cys Cys Gln Ile Gln Asn Pro Trp Tyr
20 25 30
Ser Gln Cys Leu Pro Gly Ser Cys Ser Pro Ser Thr Thr Leu Thr Arg
35 40 45
Val Thr Thr Thr Ala Thr Ser Thr Ala Ser Thr Ala Thr Ser Gly Thr
50 55 60
Gly Gly Ser Leu Pro Ser Ser Phe Lys Trp Ser Ser Ser Gly Pro Leu
65 70 75 80
Val Asp Pro Lys Asn Asp Gly Arg Gly Ile Ala Ala Leu Lys Asp Pro
85 90 95
Ser Ile Val Glu Val Asp Gly Thr Tyr His Val Phe Ala Ser Thr Ala
100 105 110
Thr Ser Ala Gly Tyr Asn Met Val Tyr Phe Asn Phe Thr Asp Phe Asn
115 120 125
Gln Ala Asn Asn Ala Pro Phe Phe Tyr Leu Asp Lys Ser Pro Ile Gly
130 135 140
Ser Gly Tyr Arg Ala Ala Pro Gln Val Phe Phe Phe Lys Pro Gln Asn
145 150 155 160
Leu Trp Tyr Leu Val Tyr Gln Asn Gly Asn Ala Ala Tyr Ser Thr Asn
165 170 175
Lys Asp Ile Ser Asn Pro Ala Gly Trp Ser Ala Pro Lys Thr Phe Tyr
180 185 190
Ser Ser Gln Pro Ser Ile Ile Thr Glu Asn Ile Gly Asn Gly Tyr Trp
195 200 205
Val Asp Met Trp Val Ile Cys Asp Ser Ala Asn Cys His Leu Phe Ser
210 215 220
Ser Asp Asp Asn Gly His Leu Tyr Arg Ser Gln Thr Thr Leu Ala Asn
225 230 235 240
Phe Pro Asn Gly Met Thr Asn Thr Val Ile Ala Met Gln Asp Ser Asn
245 250 255
Pro Asn Asn Leu Phe Glu Ala Ser Asn Val Tyr His Val Gly Gly Gly
260 265 270
Lys Tyr Leu Leu Ile Val Glu Ala Ile Gly Ser Gly Gly Asp Arg Tyr
275 280 285
Phe Arg Ser Trp Thr Ser Thr Ser Leu Thr Gly Thr Trp Thr Ala Leu
290 295 300
Ala Ala Ser Glu Ser Asn Pro Phe Ala Gly Ala Lys Asn Val Ala Phe
305 310 315 320
Ser Gly Asn Val Trp Thr Lys Ser Ile Ser His Gly Glu Met Ile Arg
325 330 335
Asp Gln Val Asp Gln Thr Leu Thr Ile Ser Pro Cys Lys Leu Arg Tyr
340 345 350
Leu Tyr Gln Gly Val Asp Pro Ala Ala Thr Gly Asn Tyr Asn Ser Leu
355 360 365
Pro Trp Lys Leu Ala Leu Leu Thr Gln Thr Asn Ser Ala Cys
370 375 380
<210> 4
<211> 378
<212> PRT
<213> 棒曲霉
<400> 4
Gln Gln Pro Leu Tyr Ala Gln Cys Gly Gly Asn Gly Trp Thr Gly Ser
1 5 10 15
Thr Gln Cys Val Ala Gly Ala Cys Cys Ser Ser Ile Asn Ala Trp Tyr
20 25 30
Tyr Gln Cys Leu Ser Gly Asn Cys Met Pro Ser Thr Thr Met Thr Thr
35 40 45
Thr Ala Thr Arg Thr Thr Ser Thr Ser Thr Ser Gly Pro Thr Gly Ser
50 55 60
Leu Pro Pro Ser Phe Lys Trp Ser Ser Thr Asn Ala Leu Val Gly Pro
65 70 75 80
Lys Asn Asp Gly Arg Asn Leu Ala Gly Ile Lys Asp Pro Ser Ile Ile
85 90 95
Glu Val Asp Gly Thr Tyr His Val Phe Ala Ser Thr Ala Gln Ala Ser
100 105 110
Gly Tyr Asn Leu Val Tyr Phe Asn Phe Thr Asp Phe Asn Gln Ala Gly
115 120 125
Asn Ala Pro Phe Phe Tyr Leu Asp Gln Ser Gly Ile Gly Thr Gly Tyr
130 135 140
Arg Ala Ala Pro Gln Val Phe Tyr Phe Gln Pro Gln Gln Leu Trp Tyr
145 150 155 160
Leu Ile Phe Gln Asn Gly Asn Ala Ala Tyr Ser Thr Asn Lys Asp Ile
165 170 175
Ser Asn Pro Ala Gly Trp Ser Ala Pro Lys Asn Phe Phe Ser Ser Val
180 185 190
Pro Ser Ile Ile Thr Gln Asn Ile Gly Asn Gly Tyr Trp Val Asp Met
195 200 205
Trp Val Ile Cys Asp Ser Ser Asn Cys Tyr Leu Phe Ser Ser Asp Asp
210 215 220
Asn Gly His Leu Tyr Arg Ser Gln Thr Thr Leu Ser Asn Phe Pro Asn
225 230 235 240
Gly Met Gly Asn Thr Val Ile Ala Leu Ser Asp Ser Asn Pro Asn Asn
245 250 255
Leu Phe Glu Ala Ser Asn Val Tyr Arg Val Gly Asn Glu Tyr Leu Leu
260 265 270
Ile Val Glu Ala Ile Gly Ser Asp Gly Asn Arg Tyr Phe Arg Ser Trp
275 280 285
Thr Ala Pro Ser Leu Thr Gly Thr Trp Thr Gly Leu Ala Asn Thr Glu
290 295 300
Ala Asn Pro Phe Ala Arg Trp Asn Asn Val Val Phe Ser Gly Thr Ala
305 310 315 320
Trp Thr Lys Ser Ile Ser His Gly Glu Met Val Arg Ser Gln Val Asp
325 330 335
Gln Thr Met Thr Ile Ser Pro Cys Lys Leu Arg Tyr Leu Tyr Gln Gly
340 345 350
Leu Ser Pro Thr Ala Thr Gly Asp Tyr Asn Ser Leu Pro Trp Lys Leu
355 360 365
Ala Leu Leu Thr Gln Thr Asn Ser Ala Cys
370 375
<210> 5
<211> 311
<212> PRT
<213> 玉蜀黍黑粉菌（Ustilago maydis）
<400> 5
Asn Pro Glu Thr Glu Arg Arg Arg Ser Cys Ala Leu Pro Thr Thr Tyr
1 5 10 15
Arg Trp Thr Ser Ser Ala Pro Leu Ala Gln Pro Lys Asp Gly Trp Val
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Phe Thr His Val Pro Tyr Asn Gly Gln His Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ser Tyr His Asp Ser Thr Lys Tyr Gly Ser Met Ala Phe Ser
50 55 60
Pro Phe Lys His Trp Ala Asp Met Ala Thr Ala Thr Gln Thr Gly Met
65 70 75 80
Thr Gln Ala Ala Val Ala Pro Thr Val Phe Tyr Phe Thr Pro Lys Lys
85 90 95
Leu Trp Phe Leu Val Ser Gln Trp Gly Ser Ala Pro Phe Thr Tyr Arg
100 105 110
Thr Ser Thr Asp Pro Thr Lys Val Asn Gly Trp Ser Ala Pro Gln Pro
115 120 125
Leu Phe Thr Gly Lys Val Ala Asp Ser Gly Thr Gly Pro Ile Asp Gln
130 135 140
Thr Val Ile Ala Asp Asp Arg Lys Val Tyr Leu Phe Phe Val Ala Asp
145 150 155 160
Asn Gly Lys Val Tyr Arg Thr Ser Met Ala Ile Gly Asp Phe Pro Ala
165 170 175
Asn Phe Gly Thr Ala Ser Glu Val Ile Leu Ser Asp Thr Gln Ala Lys
180 185 190
Leu Phe Glu Ala Val Gln Val Tyr Thr Val Ala Gly Gln Asn Gln Tyr
195 200 205
Leu Met Ile Val Glu Ala Gln Gly Thr Asn Gly Arg Tyr Phe Arg Ser
210 215 220
Phe Thr Ala Asn Ser Leu Asp Gly Glu Trp Lys Val Gln Ala Gly Ser
225 230 235 240
Glu Ser Ala Pro Phe Ala Gly Lys Ala Asn Ser Gly Ala Ser Trp Thr
245 250 255
Asn Asp Val Ser His Gly Asp Leu Ile Arg Ser Asn Pro Asp Gln Thr
260 265 270
Met Thr Ile Asp Pro Cys Arg Leu Gln Leu Leu Tyr Gln Gly Arg Asp
275 280 285
Lys Asn Lys Val Pro Ser Ser Tyr Asp Leu Ala Pro Tyr Arg Pro Gly
290 295 300
Leu Leu Thr Leu Tyr Gly Leu
305 310
<210> 6
<211> 302
<212> PRT
<213> 草酸青霉菌（Penicillium oxalicum）
<400> 6
Pro Val Pro Ser Gln Gly Gln Tyr Arg Trp Ser Ser Thr Gly Ala Leu
1 5 10 15
Ala Gln Pro Gln His Gly Trp Thr Ser Ile Lys Asp Phe Thr Asn Val
20 25 30
Val Tyr Asn Gly Lys His Leu Val Tyr Ala Ser Val Ala Asp Ser Lys
35 40 45
Gly Asn Tyr His Ser Met Asn Phe Gly Leu Phe Ser Asp Trp Ser Gln
50 55 60
Met Ala Ser Ala Ser Gln Asn Pro Met Asn Phe Asn Ala Val Ala Pro
65 70 75 80
Thr Leu Phe Phe Phe Ala Pro Lys Asn Val Trp Val Leu Ala Tyr Gln
85 90 95
Trp Gly Ala Asn Ala Phe Ser Tyr Arg Thr Ser Asn Asp Pro Ala Asn
100 105 110
Ala Asn Gly Trp Ser Ser Glu His Pro Leu Phe Thr Gly Lys Ile Ala
115 120 125
Asn Ser Gly Thr Gly Pro Ile Asp Gln Thr Leu Ile Gly Asp Asn Gln
130 135 140
Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ser
145 150 155 160
Ser Met Pro Leu Asn Asn Phe Pro Gly Ser Phe Gly Gly Ala Ser Glu
165 170 175
Val Ile Leu Ser Asp Thr Thr Ala Asn Leu Phe Glu Ala Val Gln Val
180 185 190
Tyr Lys Val Ala Gly Glu Asn Lys Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Met
195 200 205
Gly Ala His Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Phe Thr Ala Thr Ser Leu Asn
210 215 220
Gly Lys Trp Thr Leu Asn Ala Gly Ser Glu Gly Ala Pro Phe Ala Gly
225 230 235 240
Lys Ala Asn Ser Gly Ala Gly Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Asp
245 250 255
Leu Val Arg Thr Asn Pro Asp Gln Thr Met Thr Val Asp Met Cys Asn
260 265 270
Leu Gln Phe Leu Tyr Gln Gly Arg Asp Pro Asn Ala Asn Pro Thr Tyr
275 280 285
Asn Ala Leu Pro Tyr Arg Pro Gly Val Leu Thr Leu Lys His
290 295 300
<210> 7
<211> 309
<212> PRT
<213> 褐红篮状菌（Talaromyces pinophilus）
<400> 7
Ser Pro Val Pro Glu Lys Arg Ser Gly Cys Ala Leu Pro Ser Thr Tyr
1 5 10 15
Lys Trp Thr Ser Thr Gly Pro Leu Ala Ser Pro Lys Ser Gly Leu Val
20 25 30
Ala Leu Arg Asp Tyr Ser His Val Ile Tyr Asn Gly Gln His Leu Val
35 40 45
Tyr Gly Ser Thr Ala Asn Thr Ala Gly Ser Tyr Gly Ser Met Asn Phe
50 55 60
Gly Leu Phe Ser Asp Trp Ser Glu Met Ser Ser Ala Ser Gln Asn Thr
65 70 75 80
Met Ser Thr Gly Ala Val Ala Pro Thr Ile Phe Tyr Phe Ala Pro Lys
85 90 95
Ser Val Trp Ile Leu Ala Tyr Gln Trp Gly Pro Tyr Ala Phe Ser Tyr
100 105 110
Arg Thr Ser Thr Asp Pro Ser Asn Ala Asn Gly Trp Ser Ser Pro Gln
115 120 125
Pro Leu Phe Thr Gly Thr Ile Ser Gly Ser Ser Thr Gly Val Ile Asp
130 135 140
Gln Thr Val Ile Gly Asp Ser Glu Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly
145 150 155 160
Asp Asn Gly His Ile Tyr Arg Ala Ser Met Pro Ile Gly Asp Phe Pro
165 170 175
Gly Ser Phe Gly Ser Ala Ser Thr Ile Val Leu Ser Asp Ser Thr Asn
180 185 190
Asn Leu Phe Glu Ala Val Glu Val Tyr Thr Val Glu Gly Gln Asn Gln
195 200 205
Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Ile Gly Ala Asn Gly Arg Tyr Phe Arg
210 215 220
Ser Phe Thr Ala Ser Ser Leu Gly Gly Thr Trp Thr Ala Gln Ala Ser
225 230 235 240
Thr Glu Ser Asn Pro Phe Ala Gly Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp
245 250 255
Thr Asn Asp Ile Ser Ser Gly Asp Leu Val Arg Thr Asn Pro Asp Gln
260 265 270
Thr Gln Thr Ile Asp Ala Cys Asn Leu Gln Phe Leu Tyr Gln Gly Arg
275 280 285
Ser Thr Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Asn Leu Leu Pro Tyr Gln Pro Gly
290 295 300
Leu Leu Thr Leu Ala
305
<210> 8
<211> 438
<212> PRT
<213> 硝孢链霉菌（Streptomyces nitrosporeus）
<400> 8
Ala Ala Ser Gly Ala Leu Arg Gly Ala Gly Ser Gly Arg Cys Val Asp
1 5 10 15
Val Thr Gly Gly Glu Arg Thr Asp Gly Thr Thr Leu Gln Leu Tyr Asp
20 25 30
Cys Trp Gly Gly Thr Asn Gln Gln Trp Thr Ser Thr Asp Ser Gly Gln
35 40 45
Leu Thr Val Tyr Gly Asp Lys Cys Leu Asp Val Pro Gly His Ala Thr
50 55 60
Thr Pro Gly Thr Arg Val Gln Ile Trp Gly Cys Ser Gly Gly Ala Asn
65 70 75 80
Gln Gln Trp Arg Val Asn Ser Asp Gly Thr Val Val Gly Val Glu Ser
85 90 95
Gly Leu Cys Leu Glu Ala Ala Gly Ala Gly Thr Ala Asn Gly Thr Ala
100 105 110
Val Gln Leu Trp Thr Cys Asn Gly Gly Ser Asn Gln Lys Trp Thr Gly
115 120 125
Leu Pro Ala Thr Pro Pro Thr Asp Gly Thr Cys Ser Leu Pro Ser Ala
130 135 140
Tyr Arg Trp Thr Ser Thr Gly Val Leu Ala Gln Pro Ala Asn Gly Trp
145 150 155 160
Ala Ala Val Lys Asp Phe Thr Thr Val Thr His Asn Gly Lys His Leu
165 170 175
Val Tyr Ala Ser Asn Val Ser Gly Ser Ser Tyr Gly Ser Met Met Phe
180 185 190
Ser Pro Phe Thr Asp Trp Pro Asp Met Ala Ser Ala Gly Gln Thr Gly
195 200 205
Met Ser Gln Ala Ala Val Ala Pro Thr Leu Phe Tyr Phe Ala Pro Lys
210 215 220
Asn Ile Trp Val Leu Ala Tyr Gln Trp Gly Ala Trp Pro Phe Ile Tyr
225 230 235 240
Arg Thr Ser Ser Asn Pro Ala Asp Pro Asn Gly Trp Ser Ser Pro Gln
245 250 255
Pro Leu Phe Thr Gly Ser Ile Ser Gly Ser Asp Thr Gly Pro Ile Asp
260 265 270
Gln Thr Leu Ile Ala Asp Gly Gln Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly
275 280 285
Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ala Ser Met Pro Ile Gly Asn Phe Pro
290 295 300
Gly Ser Phe Gly Ser Ser Tyr Thr Thr Val Met Ser Asp Thr Lys Ala
305 310 315 320
Asn Leu Phe Glu Gly Val Gln Val Tyr Lys Val Lys Asp Arg Ser Gln
325 330 335
Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Met Gly Ala Asn Gly Arg Tyr Phe Arg
340 345 350
Ser Phe Thr Ala Ser Ser Leu Asn Gly Thr Trp Thr Pro Gln Ala Ala
355 360 365
Thr Glu Ser Ser Pro Phe Ala Gly Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp
370 375 380
Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Asp Leu Val Arg Asp Asn Pro Asp Gln
385 390 395 400
Thr Met Thr Val Asp Pro Cys Asn Leu Arg Phe Leu Tyr Gln Gly Lys
405 410 415
Ala Pro Asp Ala Gly Gly Glu Tyr Asn Arg Leu Pro Trp Arg Pro Gly
420 425 430
Val Leu Thr Leu Arg Arg
435
<210> 9
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有His-tag的成熟序列
<400> 9
His His His His His His Pro Arg Ala Ala Ser Gly Ala Leu Arg Gly
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Cys Val Asp Val Thr Gly Gly Glu Arg Thr Asp
20 25 30
Gly Thr Thr Leu Gln Leu Tyr Asp Cys Trp Gly Gly Thr Asn Gln Gln
35 40 45
Trp Thr Ser Thr Asp Ser Gly Gln Leu Thr Val Tyr Gly Asp Lys Cys
50 55 60
Leu Asp Val Pro Gly His Ala Thr Thr Pro Gly Thr Arg Val Gln Ile
65 70 75 80
Trp Gly Cys Ser Gly Gly Ala Asn Gln Gln Trp Arg Val Asn Ser Asp
85 90 95
Gly Thr Val Val Gly Val Glu Ser Gly Leu Cys Leu Glu Ala Ala Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Ala Asn Gly Thr Ala Val Gln Leu Trp Thr Cys Asn Gly
115 120 125
Gly Ser Asn Gln Lys Trp Thr Gly Leu Pro Ala Thr Pro Pro Thr Asp
130 135 140
Gly Thr Cys Ser Leu Pro Ser Ala Tyr Arg Trp Thr Ser Thr Gly Val
145 150 155 160
Leu Ala Gln Pro Ala Asn Gly Trp Ala Ala Val Lys Asp Phe Thr Thr
165 170 175
Val Thr His Asn Gly Lys His Leu Val Tyr Ala Ser Asn Val Ser Gly
180 185 190
Ser Ser Tyr Gly Ser Met Met Phe Ser Pro Phe Thr Asp Trp Pro Asp
195 200 205
Met Ala Ser Ala Gly Gln Thr Gly Met Ser Gln Ala Ala Val Ala Pro
210 215 220
Thr Leu Phe Tyr Phe Ala Pro Lys Asn Ile Trp Val Leu Ala Tyr Gln
225 230 235 240
Trp Gly Ala Trp Pro Phe Ile Tyr Arg Thr Ser Ser Asn Pro Ala Asp
245 250 255
Pro Asn Gly Trp Ser Ser Pro Gln Pro Leu Phe Thr Gly Ser Ile Ser
260 265 270
Gly Ser Asp Thr Gly Pro Ile Asp Gln Thr Leu Ile Ala Asp Gly Gln
275 280 285
Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ala
290 295 300
Ser Met Pro Ile Gly Asn Phe Pro Gly Ser Phe Gly Ser Ser Tyr Thr
305 310 315 320
Thr Val Met Ser Asp Thr Lys Ala Asn Leu Phe Glu Gly Val Gln Val
325 330 335
Tyr Lys Val Lys Asp Arg Ser Gln Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Met
340 345 350
Gly Ala Asn Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Phe Thr Ala Ser Ser Leu Asn
355 360 365
Gly Thr Trp Thr Pro Gln Ala Ala Thr Glu Ser Ser Pro Phe Ala Gly
370 375 380
Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Asp
385 390 395 400
Leu Val Arg Asp Asn Pro Asp Gln Thr Met Thr Val Asp Pro Cys Asn
405 410 415
Leu Arg Phe Leu Tyr Gln Gly Lys Ala Pro Asp Ala Gly Gly Glu Tyr
420 425 430
Asn Arg Leu Pro Trp Arg Pro Gly Val Leu Thr Leu Arg Arg
435 440 445
<210> 10
<211> 438
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有His-tag的成熟序列
<400> 10
Ala Ala Gly Gly Ala Leu Arg Gln Ala Ala Ser Gly Arg Cys Leu Asp
1 5 10 15
Val Pro Gly Ala Val Gln Thr Asp Gly Thr Ser Val Gln Ile Tyr Asp
20 25 30
Cys Trp Ser Gly Thr Asn Gln Gln Trp Thr Ser Thr Asp Ala Asn Gln
35 40 45
Leu Thr Val Tyr Gly Asn Lys Cys Leu Asp Val Pro Gly His Ala Thr
50 55 60
Thr Ala Gly Thr Arg Val Gln Ile Trp Ser Cys Ser Gly Gly Ala Asn
65 70 75 80
Gln Gln Trp Arg Val Asn Ser Asp Gly Thr Val Thr Gly Val Glu Ser
85 90 95
Gly Leu Cys Leu Glu Ala Ala Gly Ala Ala Thr Ala Asn Gly Thr Ala
100 105 110
Val Gln Leu Gly Thr Cys Asn Gln Gly Ser Asn Gln Lys Trp Ser Gly
115 120 125
Leu Thr Gly Thr Pro Pro Thr Asp Gly Ser Cys Ser Leu Pro Ser Thr
130 135 140
Tyr Arg Trp Ser Ser Thr Gly Val Leu Ala Gln Pro Ala Asn Gly Trp
145 150 155 160
Ala Ala Val Lys Asp Phe Thr Thr Val Thr Tyr Asn Gly Lys His Leu
165 170 175
Val Tyr Ala Ser Asn Val Ser Gly Ser Ser Tyr Gly Ser Met Met Phe
180 185 190
Ser Pro Phe Thr Asn Trp Ser Asp Met Ala Ser Ala Gly Gln Ser Gly
195 200 205
Met Ser Gln Ala Ala Val Ala Pro Thr Leu Phe Tyr Phe Ala Pro Lys
210 215 220
Asn Ile Trp Val Leu Ala Tyr Gln Trp Gly Ala Ser Pro Phe Val Tyr
225 230 235 240
Arg Thr Ser Ser Asp Pro Thr Asn Pro Asn Gly Trp Ser Ser Pro Gln
245 250 255
Pro Leu Phe Thr Gly Ser Ile Ser Gly Ser Asp Thr Gly Pro Ile Asp
260 265 270
Gln Thr Leu Ile Ala Asp Gly Gln Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly
275 280 285
Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ala Ser Met Pro Ile Gly Asn Phe Pro
290 295 300
Gly Asn Phe Gly Ser Ser Tyr Thr Thr Val Met Ser Asp Thr Lys Ala
305 310 315 320
Asn Leu Phe Glu Gly Val Gln Val Tyr Lys Val Gln Gly Gln Asn Gln
325 330 335
Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Met Gly Ala Asn Gly Arg Tyr Phe Arg
340 345 350
Ser Phe Thr Ala Ser Ser Leu Asn Gly Ser Trp Ala Pro Gln Ala Ala
355 360 365
Thr Glu Ser Asn Pro Phe Ala Gly Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp
370 375 380
Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Asp Leu Val Arg Gly Asn Pro Asp Gln
385 390 395 400
Thr Met Thr Ile Asp Pro Cys Asn Leu Gln Leu Leu Tyr Gln Gly Lys
405 410 415
Ser Pro Thr Ala Gly Gly Pro Tyr Asp Gln Leu Pro Trp Arg Pro Gly
420 425 430
Val Leu Ser Leu Gln Arg
435
<210> 11
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有His-tag的成熟序列
<400> 11
His His His His His His Pro Arg Ala Ala Gly Gly Ala Leu Arg Gln
1 5 10 15
Ala Ala Ser Gly Arg Cys Leu Asp Val Pro Gly Ala Val Gln Thr Asp
20 25 30
Gly Thr Ser Val Gln Ile Tyr Asp Cys Trp Ser Gly Thr Asn Gln Gln
35 40 45
Trp Thr Ser Thr Asp Ala Asn Gln Leu Thr Val Tyr Gly Asn Lys Cys
50 55 60
Leu Asp Val Pro Gly His Ala Thr Thr Ala Gly Thr Arg Val Gln Ile
65 70 75 80
Trp Ser Cys Ser Gly Gly Ala Asn Gln Gln Trp Arg Val Asn Ser Asp
85 90 95
Gly Thr Val Thr Gly Val Glu Ser Gly Leu Cys Leu Glu Ala Ala Gly
100 105 110
Ala Ala Thr Ala Asn Gly Thr Ala Val Gln Leu Gly Thr Cys Asn Gln
115 120 125
Gly Ser Asn Gln Lys Trp Ser Gly Leu Thr Gly Thr Pro Pro Thr Asp
130 135 140
Gly Ser Cys Ser Leu Pro Ser Thr Tyr Arg Trp Ser Ser Thr Gly Val
145 150 155 160
Leu Ala Gln Pro Ala Asn Gly Trp Ala Ala Val Lys Asp Phe Thr Thr
165 170 175
Val Thr Tyr Asn Gly Lys His Leu Val Tyr Ala Ser Asn Val Ser Gly
180 185 190
Ser Ser Tyr Gly Ser Met Met Phe Ser Pro Phe Thr Asn Trp Ser Asp
195 200 205
Met Ala Ser Ala Gly Gln Ser Gly Met Ser Gln Ala Ala Val Ala Pro
210 215 220
Thr Leu Phe Tyr Phe Ala Pro Lys Asn Ile Trp Val Leu Ala Tyr Gln
225 230 235 240
Trp Gly Ala Ser Pro Phe Val Tyr Arg Thr Ser Ser Asp Pro Thr Asn
245 250 255
Pro Asn Gly Trp Ser Ser Pro Gln Pro Leu Phe Thr Gly Ser Ile Ser
260 265 270
Gly Ser Asp Thr Gly Pro Ile Asp Gln Thr Leu Ile Ala Asp Gly Gln
275 280 285
Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ala
290 295 300
Ser Met Pro Ile Gly Asn Phe Pro Gly Asn Phe Gly Ser Ser Tyr Thr
305 310 315 320
Thr Val Met Ser Asp Thr Lys Ala Asn Leu Phe Glu Gly Val Gln Val
325 330 335
Tyr Lys Val Gln Gly Gln Asn Gln Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Met
340 345 350
Gly Ala Asn Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Phe Thr Ala Ser Ser Leu Asn
355 360 365
Gly Ser Trp Ala Pro Gln Ala Ala Thr Glu Ser Asn Pro Phe Ala Gly
370 375 380
Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Asp
385 390 395 400
Leu Val Arg Gly Asn Pro Asp Gln Thr Met Thr Ile Asp Pro Cys Asn
405 410 415
Leu Gln Leu Leu Tyr Gln Gly Lys Ser Pro Thr Ala Gly Gly Pro Tyr
420 425 430
Asp Gln Leu Pro Trp Arg Pro Gly Val Leu Ser Leu Gln Arg
435 440 445
<210> 12
<211> 318
<212> PRT
<213> 棒曲霉
<400> 12
Ala Ser Leu Pro Arg Ser Phe Lys Trp Ser Ser Ser Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Gly Pro Lys Asn Asp Gly Arg His Ile Glu Gly Ile Lys Asp Pro Ser
20 25 30
Ile Val Glu Val Asp Gly Thr Tyr His Val Phe Ala Ser Thr Ala Gln
35 40 45
Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Val Tyr Leu Ser Phe Thr Asp Phe Asn Lys
50 55 60
Ala His Leu Ala Pro Phe His Tyr Leu Asp Gln Thr Arg Ile Gly Lys
65 70 75 80
Gly Tyr Arg Ala Ala Pro Gln Val Phe Tyr Phe Lys Pro His Lys Leu
85 90 95
Trp Tyr Leu Val Tyr Gln Asn Gly Asn Ala Ala Tyr Ser Thr Asn Pro
100 105 110
Asp Ile Ser Asn Pro Ala Gly Trp Thr Ser Pro Gln Asn Phe Phe Ser
115 120 125
Gly Thr Pro Ser Ile Ile Thr His Asn Met Gly Arg Gly Ala Trp Val
130 135 140
Asp Met Trp Thr Ile Cys Asp Thr Arg Asn Cys Tyr Leu Phe Ser Ser
145 150 155 160
Asp Asp Asn Gly His Leu Tyr Arg Ser Gln Thr Ser Leu Ala Asp Phe
165 170 175
Pro His Gly Met Gly Asn Thr Ala Ile Ala Leu Ala Asp Arg Asn Lys
180 185 190
Phe Ser Leu Phe Glu Ala Ser Asn Val Tyr His Thr Gly Asp Gly Ser
195 200 205
Tyr Leu Leu Ile Val Glu Ala Ile Gly Asn Asp Gly Gln Arg Tyr Phe
210 215 220
Arg Ser Trp Thr Ala Ser Ser Leu Ala Gly Gln Trp Lys Pro Leu Ala
225 230 235 240
Asp Thr Glu Ser Asn Pro Phe Ala Arg Ser Asn Asn Val Ala Phe Ala
245 250 255
Asn Gly His Ala Trp Thr Lys Ser Ile Ser His Gly Glu Met Ile Arg
260 265 270
Thr Gln Thr Asp Gln Thr Met Thr Ile Ser Pro Cys Lys Leu Arg Tyr
275 280 285
Leu Tyr Gln Gly Val Asp Pro Ala Ala Lys Gly Asp Tyr Asn Ala Leu
290 295 300
Pro Trp Lys Leu Gly Leu Leu Thr Gln Thr Asn Ser Ala Cys
305 310 315
<210> 13
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有His-tag的成熟序列
<400> 13
Ala Ser Leu Pro Arg Ser Phe Lys Trp Ser Ser Ser Ala Ala Leu Val
1 5 10 15
Gly Pro Lys Asn Asp Gly Arg His Ile Glu Gly Ile Lys Asp Pro Ser
20 25 30
Ile Val Glu Val Asp Gly Thr Tyr His Val Phe Ala Ser Thr Ala Gln
35 40 45
Ala Ser Gly Tyr Asn Leu Val Tyr Leu Ser Phe Thr Asp Phe Asn Lys
50 55 60
Ala His Leu Ala Pro Phe His Tyr Leu Asp Gln Thr Arg Ile Gly Lys
65 70 75 80
Gly Tyr Arg Ala Ala Pro Gln Val Phe Tyr Phe Lys Pro His Lys Leu
85 90 95
Trp Tyr Leu Val Tyr Gln Asn Gly Asn Ala Ala Tyr Ser Thr Asn Pro
100 105 110
Asp Ile Ser Asn Pro Ala Gly Trp Thr Ser Pro Gln Asn Phe Phe Ser
115 120 125
Gly Thr Pro Ser Ile Ile Thr His Asn Met Gly Arg Gly Ala Trp Val
130 135 140
Asp Met Trp Thr Ile Cys Asp Thr Arg Asn Cys Tyr Leu Phe Ser Ser
145 150 155 160
Asp Asp Asn Gly His Leu Tyr Arg Ser Gln Thr Ser Leu Ala Asp Phe
165 170 175
Pro His Gly Met Gly Asn Thr Ala Ile Ala Leu Ala Asp Arg Asn Lys
180 185 190
Phe Ser Leu Phe Glu Ala Ser Asn Val Tyr His Thr Gly Asp Gly Ser
195 200 205
Tyr Leu Leu Ile Val Glu Ala Ile Gly Asn Asp Gly Gln Arg Tyr Phe
210 215 220
Arg Ser Trp Thr Ala Ser Ser Leu Ala Gly Gln Trp Lys Pro Leu Ala
225 230 235 240
Asp Thr Glu Ser Asn Pro Phe Ala Arg Ser Asn Asn Val Ala Phe Ala
245 250 255
Asn Gly His Ala Trp Thr Lys Ser Ile Ser His Gly Glu Met Ile Arg
260 265 270
Thr Gln Thr Asp Gln Thr Met Thr Ile Ser Pro Cys Lys Leu Arg Tyr
275 280 285
Leu Tyr Gln Gly Val Asp Pro Ala Ala Lys Gly Asp Tyr Asn Ala Leu
290 295 300
Pro Trp Lys Leu Gly Leu Leu Thr Gln Thr Asn Ser Ala Cys Arg His
305 310 315 320
His His His His His Pro
325
<210> 14
<211> 302
<212> PRT
<213> 文氏曲霉（Aspergillus wentii）
<400> 14
Asp Cys Ala Leu Pro Ser Thr Tyr Ser Trp Thr Ser Thr Gly Ser Leu
1 5 10 15
Ala Asp Pro Lys Ser Gly Trp Thr Ala Leu Lys Asp Phe Thr Asn Val
20 25 30
Val Ser Asn Asn Lys His Ile Val Tyr Ala Ser Thr Thr Asp Ala Ser
35 40 45
Gly Asn Tyr Gly Ser Met Asn Phe Ala Ser Phe Ser Asp Trp Ser Asp
50 55 60
Met Ala Ser Ala Ser Gln Ala Ala Thr Ser Phe Thr Ala Val Ala Pro
65 70 75 80
Thr Leu Leu Tyr Phe Gln Pro Lys Ser Ile Trp Val Leu Ala Tyr Gln
85 90 95
Trp Gly Ser Ser Thr Phe Thr Tyr Arg Thr Ser Ser Asp Pro Thr Asn
100 105 110
Ala Asn Gly Trp Ser Ser Glu Lys Ala Leu Phe Ser Gly Lys Ile Thr
115 120 125
Gly Ser Asp Thr Gly Ala Ile Asp Gln Thr Leu Ile Gly Asp Ala Thr
130 135 140
Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ser
145 150 155 160
Ser Met Pro Ile Ala Asn Phe Pro Gly Asp Phe Gly Thr Ala Ser Glu
165 170 175
Val Val Leu Ser Asp Ser Arg Asn Asn Leu Phe Glu Ala Val Gln Val
180 185 190
Tyr Thr Val Glu Gly Gln Asn Gln Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Ile
195 200 205
Gly Thr Asn Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Phe Thr Ala Ser Ser Leu Asp
210 215 220
Gly Ser Trp Thr Glu Gln Ala Ala Ser Glu Asn Asn Pro Phe Ala Gly
225 230 235 240
Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Asp
245 250 255
Leu Val Arg Asn Asn Pro Asp Gln Thr Met Thr Ile Asp Pro Cys Asn
260 265 270
Leu Gln Phe Leu Tyr Gln Gly Arg Asp Ala Ser Ala Gly Gly Asn Tyr
275 280 285
Asn Thr Leu Pro Trp Arg Pro Gly Val Leu Thr Leu Lys His
290 295 300
<210> 15
<211> 311
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有His-tag的成熟序列
<400> 15
Asp Cys Ala Leu Pro Ser Thr Tyr Ser Trp Thr Ser Thr Gly Ser Leu
1 5 10 15
Ala Asp Pro Lys Ser Gly Trp Thr Ala Leu Lys Asp Phe Thr Asn Val
20 25 30
Val Ser Asn Asn Lys His Ile Val Tyr Ala Ser Thr Thr Asp Ala Ser
35 40 45
Gly Asn Tyr Gly Ser Met Asn Phe Ala Ser Phe Ser Asp Trp Ser Asp
50 55 60
Met Ala Ser Ala Ser Gln Ala Ala Thr Ser Phe Thr Ala Val Ala Pro
65 70 75 80
Thr Leu Leu Tyr Phe Gln Pro Lys Ser Ile Trp Val Leu Ala Tyr Gln
85 90 95
Trp Gly Ser Ser Thr Phe Thr Tyr Arg Thr Ser Ser Asp Pro Thr Asn
100 105 110
Ala Asn Gly Trp Ser Ser Glu Lys Ala Leu Phe Ser Gly Lys Ile Thr
115 120 125
Gly Ser Asp Thr Gly Ala Ile Asp Gln Thr Leu Ile Gly Asp Ala Thr
130 135 140
Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ser
145 150 155 160
Ser Met Pro Ile Ala Asn Phe Pro Gly Asp Phe Gly Thr Ala Ser Glu
165 170 175
Val Val Leu Ser Asp Ser Arg Asn Asn Leu Phe Glu Ala Val Gln Val
180 185 190
Tyr Thr Val Glu Gly Gln Asn Gln Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Ile
195 200 205
Gly Thr Asn Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Phe Thr Ala Ser Ser Leu Asp
210 215 220
Gly Ser Trp Thr Glu Gln Ala Ala Ser Glu Asn Asn Pro Phe Ala Gly
225 230 235 240
Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Asp
245 250 255
Leu Val Arg Asn Asn Pro Asp Gln Thr Met Thr Ile Asp Pro Cys Asn
260 265 270
Leu Gln Phe Leu Tyr Gln Gly Arg Asp Ala Ser Ala Gly Gly Asn Tyr
275 280 285
Asn Thr Leu Pro Trp Arg Pro Gly Val Leu Thr Leu Lys His Thr Arg
290 295 300
Ala His His His His His His
305 310
<210> 16
<211> 364
<212> PRT
<213> 梭孢端梗孢（Acrophialophora fusispora）
<400> 16
Ala Cys Ser Leu Pro Ser Ser Tyr Arg Trp Ala Ser Thr Gly Pro Leu
1 5 10 15
Ala Asn Pro Lys Ser Gly Trp Tyr Ser Leu Lys Asp Phe Thr His Val
20 25 30
Pro Tyr Asn Gly Lys His Leu Val Tyr Ala Ser Asn Tyr Ala Gly Ser
35 40 45
Ala Tyr Gly Ser Met Asn Phe Gly Leu Phe Ser Asn Trp Ser Asp Met
50 55 60
Ala Ser Ala Ser Gln Asn Ser Met Asn Ala Ala Ala Val Ala Pro Thr
65 70 75 80
Leu Phe Tyr Phe Ala Pro Lys Asn Ile Trp Val Leu Ala Ser Gln Trp
85 90 95
Gly Ala Thr Pro Phe Phe Tyr Arg Thr Ser Thr Asp Pro Thr Asn Pro
100 105 110
Asn Ser Trp Ser Ser Asn Gln Pro Leu Phe Thr Gly Ser Ile Ser Asp
115 120 125
Ser Ser Thr Gly Pro Ile Asp Gln Thr Leu Ile Gly Asp Ala Asn Tyr
130 135 140
Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ser Arg
145 150 155 160
Met Pro Ile Gly Asn Phe Pro Gly Ser Phe Gly Ser Ser Tyr Glu Val
165 170 175
Ile Leu Ser Gly Ser Arg Asn Asp Phe Phe Glu Ala Val Gln Val Tyr
180 185 190
Thr Val Thr Gly Gln Ser Ser Pro Leu Tyr Leu Met Ile Ile Glu Ser
195 200 205
Ile Gly Ser Arg Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Tyr Thr Ala Thr Asn Leu
210 215 220
Gly Gly Ser Trp Ser Pro Gln Ala Thr Ser Glu Ser Ser Pro Phe Ala
225 230 235 240
Gly Ala Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly
245 250 255
Asp Leu Ile Arg Ser Gly Pro Asp Gln Thr Met Pro Ile Asp Pro Cys
260 265 270
Asn Leu Gln Leu Leu Tyr Gln Gly Leu Val Gly Thr Asn Ser Asp Tyr
275 280 285
Asn Lys Leu Pro Tyr Arg Pro Gly Leu Leu Thr Leu Gln Asn Pro Val
290 295 300
Gly Gly Gly Gly Thr Pro Thr Thr Thr Thr Ser Lys Pro Pro Ala Thr
305 310 315 320
Thr Thr Ser Thr Gly Gly Gly Gly Thr Ala Pro Gln Tyr Ala Gln Cys
325 330 335
Gly Gly Gln Gly Tyr Thr Gly Pro Thr Val Cys Ala Ser Pro Tyr Lys
340 345 350
Cys Thr Tyr Ser Asn Pro Trp Tyr Ser Gln Cys Leu
355 360
<210> 17
<211> 373
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有His-tag的成熟序列
<400> 17
Ala Cys Ser Leu Pro Ser Ser Tyr Arg Trp Ala Ser Thr Gly Pro Leu
1 5 10 15
Ala Asn Pro Lys Ser Gly Trp Tyr Ser Leu Lys Asp Phe Thr His Val
20 25 30
Pro Tyr Asn Gly Lys His Leu Val Tyr Ala Ser Asn Tyr Ala Gly Ser
35 40 45
Ala Tyr Gly Ser Met Asn Phe Gly Leu Phe Ser Asn Trp Ser Asp Met
50 55 60
Ala Ser Ala Ser Gln Asn Ser Met Asn Ala Ala Ala Val Ala Pro Thr
65 70 75 80
Leu Phe Tyr Phe Ala Pro Lys Asn Ile Trp Val Leu Ala Ser Gln Trp
85 90 95
Gly Ala Thr Pro Phe Phe Tyr Arg Thr Ser Thr Asp Pro Thr Asn Pro
100 105 110
Asn Ser Trp Ser Ser Asn Gln Pro Leu Phe Thr Gly Ser Ile Ser Asp
115 120 125
Ser Ser Thr Gly Pro Ile Asp Gln Thr Leu Ile Gly Asp Ala Asn Tyr
130 135 140
Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ser Arg
145 150 155 160
Met Pro Ile Gly Asn Phe Pro Gly Ser Phe Gly Ser Ser Tyr Glu Val
165 170 175
Ile Leu Ser Gly Ser Arg Asn Asp Phe Phe Glu Ala Val Gln Val Tyr
180 185 190
Thr Val Thr Gly Gln Ser Ser Pro Leu Tyr Leu Met Ile Ile Glu Ser
195 200 205
Ile Gly Ser Arg Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Tyr Thr Ala Thr Asn Leu
210 215 220
Gly Gly Ser Trp Ser Pro Gln Ala Thr Ser Glu Ser Ser Pro Phe Ala
225 230 235 240
Gly Ala Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly
245 250 255
Asp Leu Ile Arg Ser Gly Pro Asp Gln Thr Met Pro Ile Asp Pro Cys
260 265 270
Asn Leu Gln Leu Leu Tyr Gln Gly Leu Val Gly Thr Asn Ser Asp Tyr
275 280 285
Asn Lys Leu Pro Tyr Arg Pro Gly Leu Leu Thr Leu Gln Asn Pro Val
290 295 300
Gly Gly Gly Gly Thr Pro Thr Thr Thr Thr Ser Lys Pro Pro Ala Thr
305 310 315 320
Thr Thr Ser Thr Gly Gly Gly Gly Thr Ala Pro Gln Tyr Ala Gln Cys
325 330 335
Gly Gly Gln Gly Tyr Thr Gly Pro Thr Val Cys Ala Ser Pro Tyr Lys
340 345 350
Cys Thr Tyr Ser Asn Pro Trp Tyr Ser Gln Cys Leu Thr Arg Ala His
355 360 365
His His His His His
370
<210> 18
<211> 436
<212> PRT
<213> 链孢囊菌属物种-60756 60
<400> 18
Ala Gly Ala Ala Ala Gly Cys Arg Val Asp Tyr Thr Val Ser Asn Gln
1 5 10 15
Trp Pro Gly Gly Phe Gly Ala Asn Val Asn Ile Thr Asn Leu Gly Asp
20 25 30
Pro Ile Asn Gly Trp Arg Leu Thr Trp Ser Phe Pro Ala Gly Gln Thr
35 40 45
Ile Thr Gln Leu Trp Ser Gly Ser His Thr Gln Ser Gly Ser Gln Val
50 55 60
Thr Val Thr Asn Val Asp Tyr Asn Ala Gly Leu Pro Thr Gly Gly Ser
65 70 75 80
Ala Asn Phe Gly Phe Asn Gly Ser Phe Asn Gly Ser Asn Pro Ala Pro
85 90 95
Thr Ser Phe Ala Leu Asn Gly Val Thr Cys Thr Gly Gly Val Thr Ala
100 105 110
Ser Pro Ser Pro Ser Thr Ser Pro Ser Thr Gly Pro Ser Pro Ser Ser
115 120 125
Thr Pro Thr Ser Pro Gly Thr Cys Ala Leu Pro Ser Thr Tyr Arg Trp
130 135 140
Thr Ser Thr Gly Pro Leu Ala Asn Pro Lys Ser Gly Trp Val Ser Leu
145 150 155 160
Lys Asp Phe Thr Asn Val Val His Asn Gly Lys His Leu Val Tyr Ala
165 170 175
Thr Thr His Asp Thr Gly Thr Ser Trp Gly Ser Met Asn Phe Ser Pro
180 185 190
Phe Thr Asn Trp Ser Asp Met Ala Ser Ala Gly Gln Asn Lys Met Asn
195 200 205
Phe Ser Thr Val Ala Pro Thr Leu Phe Tyr Phe Ala Pro Lys Asn Ile
210 215 220
Trp Val Leu Ala Tyr Gln Trp Gly Gly Thr Ala Phe Ser Tyr Arg Thr
225 230 235 240
Ser Ser Asp Pro Thr Asn Ala Asn Gly Trp Ser Ala Gln Gln Thr Leu
245 250 255
Phe Thr Gly Ser Ile Ser Gly Ser Gly Thr Gly Pro Ile Asp Gln Thr
260 265 270
Leu Ile Gly Asp Gly Thr Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn
275 280 285
Gly Lys Ile Tyr Arg Ala Ser Met Pro Ile Gly Asn Phe Pro Gly Ser
290 295 300
Phe Gly Ser Asn Tyr Thr Thr Ile Met Ser Asp Thr Thr Asn Asn Leu
305 310 315 320
Phe Glu Gly Val Glu Val Tyr Lys Leu Gln Gly Gln Asn Lys Tyr Leu
325 330 335
Met Leu Val Glu Ala Ile Gly Ser Gln Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Phe
340 345 350
Thr Ala Thr Ser Leu Asp Gly Thr Trp Thr Pro Gln Ala Ala Thr Glu
355 360 365
Gly Asn Pro Phe Ala Gly Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn
370 375 380
Asp Ile Ser His Gly Asp Leu Val Arg Ser Asn Pro Asp Gln Thr Lys
385 390 395 400
Thr Val Asp Pro Cys Asn Leu Gln Leu Leu Tyr Gln Gly Arg Ser Pro
405 410 415
Asn Ser Gly Gly Asp Tyr Gly Leu Leu Pro Tyr Arg Pro Gly Val Leu
420 425 430
Thr Leu Gln Arg
435
<210> 19
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有His-tag的成熟序列
<400> 19
His His His His His His Pro Arg Ala Gly Ala Ala Ala Gly Cys Arg
1 5 10 15
Val Asp Tyr Thr Val Ser Asn Gln Trp Pro Gly Gly Phe Gly Ala Asn
20 25 30
Val Asn Ile Thr Asn Leu Gly Asp Pro Ile Asn Gly Trp Arg Leu Thr
35 40 45
Trp Ser Phe Pro Ala Gly Gln Thr Ile Thr Gln Leu Trp Ser Gly Ser
50 55 60
His Thr Gln Ser Gly Ser Gln Val Thr Val Thr Asn Val Asp Tyr Asn
65 70 75 80
Ala Gly Leu Pro Thr Gly Gly Ser Ala Asn Phe Gly Phe Asn Gly Ser
85 90 95
Phe Asn Gly Ser Asn Pro Ala Pro Thr Ser Phe Ala Leu Asn Gly Val
100 105 110
Thr Cys Thr Gly Gly Val Thr Ala Ser Pro Ser Pro Ser Thr Ser Pro
115 120 125
Ser Thr Gly Pro Ser Pro Ser Ser Thr Pro Thr Ser Pro Gly Thr Cys
130 135 140
Ala Leu Pro Ser Thr Tyr Arg Trp Thr Ser Thr Gly Pro Leu Ala Asn
145 150 155 160
Pro Lys Ser Gly Trp Val Ser Leu Lys Asp Phe Thr Asn Val Val His
165 170 175
Asn Gly Lys His Leu Val Tyr Ala Thr Thr His Asp Thr Gly Thr Ser
180 185 190
Trp Gly Ser Met Asn Phe Ser Pro Phe Thr Asn Trp Ser Asp Met Ala
195 200 205
Ser Ala Gly Gln Asn Lys Met Asn Phe Ser Thr Val Ala Pro Thr Leu
210 215 220
Phe Tyr Phe Ala Pro Lys Asn Ile Trp Val Leu Ala Tyr Gln Trp Gly
225 230 235 240
Gly Thr Ala Phe Ser Tyr Arg Thr Ser Ser Asp Pro Thr Asn Ala Asn
245 250 255
Gly Trp Ser Ala Gln Gln Thr Leu Phe Thr Gly Ser Ile Ser Gly Ser
260 265 270
Gly Thr Gly Pro Ile Asp Gln Thr Leu Ile Gly Asp Gly Thr Asn Met
275 280 285
Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ala Ser Met
290 295 300
Pro Ile Gly Asn Phe Pro Gly Ser Phe Gly Ser Asn Tyr Thr Thr Ile
305 310 315 320
Met Ser Asp Thr Thr Asn Asn Leu Phe Glu Gly Val Glu Val Tyr Lys
325 330 335
Leu Gln Gly Gln Asn Lys Tyr Leu Met Leu Val Glu Ala Ile Gly Ser
340 345 350
Gln Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Phe Thr Ala Thr Ser Leu Asp Gly Thr
355 360 365
Trp Thr Pro Gln Ala Ala Thr Glu Gly Asn Pro Phe Ala Gly Lys Ala
370 375 380
Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Asp Leu Val
385 390 395 400
Arg Ser Asn Pro Asp Gln Thr Lys Thr Val Asp Pro Cys Asn Leu Gln
405 410 415
Leu Leu Tyr Gln Gly Arg Ser Pro Asn Ser Gly Gly Asp Tyr Gly Leu
420 425 430
Leu Pro Tyr Arg Pro Gly Val Leu Thr Leu Gln Arg
435 440
<210> 20
<211> 302
<212> PRT
<213> 梭孢端梗孢
<400> 20
Gln Cys Pro Leu Pro Ser Thr Tyr Arg Trp Lys Ser Thr Gly Val Leu
1 5 10 15
Ala Asn Pro Lys Ser Gly Trp Val Ser Leu Lys Asp Phe Thr Val Ala
20 25 30
Pro Tyr Asn Gly Lys His Leu Val Tyr Ala Thr Thr His Asp Thr Gly
35 40 45
Ser Ser Trp Gly Ser Met Asn Phe Gly Leu Phe Ser Ser Trp Ser Asp
50 55 60
Met Ala Thr Ala Pro Gln Asn Gly Met Asn Gln Gly Thr Val Ala Pro
65 70 75 80
Thr Leu Phe Tyr Phe Lys Pro Lys Asp Ile Trp Val Leu Ala Tyr Gln
85 90 95
Trp Gly Pro Thr Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Ser Lys Asp Pro Thr Asn
100 105 110
Ala Asn Gly Trp Gly Ser Ala Gln Thr Leu Phe Ser Gly Lys Ile Ser
115 120 125
Gly Ser Ser Thr Gly Ala Ile Asp Gln Thr Val Ile Gly Asp Asp Thr
130 135 140
Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ala
145 150 155 160
Ser Met Pro Ile Asp Arg Phe Pro Gly Ser Phe Gly Asp Gln Tyr Gln
165 170 175
Thr Ile Leu Ser Asp Ser Thr Asn Asn Leu Phe Glu Ala Val Gln Val
180 185 190
Tyr Lys Leu Gln Gly Leu Asn Lys Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Ile
195 200 205
Gly Ser Asn Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Phe Thr Ala Asp Arg Leu Asp
210 215 220
Gly Gln Trp Thr Pro Gln Ala Ala Thr Glu Ser Asn Pro Phe Ala Gly
225 230 235 240
Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Glu
245 250 255
Leu Ile Arg Val Ser Ala Asp Gln Thr Phe Thr Val Asp Pro Cys Asn
260 265 270
Leu Gln Leu Leu Tyr Gln Gly Arg Ser Pro Ser Ser Gly Gly Asp Tyr
275 280 285
Gly Lys Leu Pro Tyr Arg Pro Gly Leu Leu Thr Leu Gln Arg
290 295 300
<210> 21
<211> 311
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有His-tag的成熟序列
<400> 21
Gln Cys Pro Leu Pro Ser Thr Tyr Arg Trp Lys Ser Thr Gly Val Leu
1 5 10 15
Ala Asn Pro Lys Ser Gly Trp Val Ser Leu Lys Asp Phe Thr Val Ala
20 25 30
Pro Tyr Asn Gly Lys His Leu Val Tyr Ala Thr Thr His Asp Thr Gly
35 40 45
Ser Ser Trp Gly Ser Met Asn Phe Gly Leu Phe Ser Ser Trp Ser Asp
50 55 60
Met Ala Thr Ala Pro Gln Asn Gly Met Asn Gln Gly Thr Val Ala Pro
65 70 75 80
Thr Leu Phe Tyr Phe Lys Pro Lys Asp Ile Trp Val Leu Ala Tyr Gln
85 90 95
Trp Gly Pro Thr Thr Phe Ser Tyr Lys Thr Ser Lys Asp Pro Thr Asn
100 105 110
Ala Asn Gly Trp Gly Ser Ala Gln Thr Leu Phe Ser Gly Lys Ile Ser
115 120 125
Gly Ser Ser Thr Gly Ala Ile Asp Gln Thr Val Ile Gly Asp Asp Thr
130 135 140
Asn Met Tyr Leu Phe Phe Ala Gly Asp Asn Gly Lys Ile Tyr Arg Ala
145 150 155 160
Ser Met Pro Ile Asp Arg Phe Pro Gly Ser Phe Gly Asp Gln Tyr Gln
165 170 175
Thr Ile Leu Ser Asp Ser Thr Asn Asn Leu Phe Glu Ala Val Gln Val
180 185 190
Tyr Lys Leu Gln Gly Leu Asn Lys Tyr Leu Met Ile Val Glu Ala Ile
195 200 205
Gly Ser Asn Gly Arg Tyr Phe Arg Ser Phe Thr Ala Asp Arg Leu Asp
210 215 220
Gly Gln Trp Thr Pro Gln Ala Ala Thr Glu Ser Asn Pro Phe Ala Gly
225 230 235 240
Lys Ala Asn Ser Gly Ala Thr Trp Thr Asn Asp Ile Ser His Gly Glu
245 250 255
Leu Ile Arg Val Ser Ala Asp Gln Thr Phe Thr Val Asp Pro Cys Asn
260 265 270
Leu Gln Leu Leu Tyr Gln Gly Arg Ser Pro Ser Ser Gly Gly Asp Tyr
275 280 285
Gly Lys Leu Pro Tyr Arg Pro Gly Leu Leu Thr Leu Gln Arg Thr Arg
290 295 300
Ala His His His His His His
305 310
<210> 22
<211> 405
<212> PRT
<213> 雷塞氏篮状菌（Talaromyces leycettanus）
<400> 22
Met Val His Leu Ser Ser Leu Ala Leu Ala Leu Ala Ala Gly Ser Gln
1 5 10 15
Leu Ala Gln Ala Ala Gly Leu Asn Thr Ala Ala Lys Ala Ile Gly Lys
20 25 30
Leu Tyr Phe Gly Thr Ala Thr Asp Asn Pro Glu Leu Ser Asp Ser Thr
35 40 45
Tyr Met Gln Glu Thr Asp Asn Thr Asp Asp Phe Gly Gln Leu Thr Pro
50 55 60
Ala Asn Ser Met Lys Trp Asp Ala Thr Glu Pro Ser Gln Asn Thr Phe
65 70 75 80
Thr Phe Thr Asn Gly Asp Gln Ile Ala Asn Leu Ala Lys Ser Asn Gly
85 90 95
Gln Met Leu Arg Cys His Asn Leu Val Trp Tyr Asn Gln Leu Pro Ser
100 105 110
Trp Val Thr Ser Gly Ser Trp Thr Asn Ala Thr Leu Leu Ala Ala Met
115 120 125
Lys Asn His Ile Thr Asn Val Val Thr His Tyr Lys Gly Gln Cys Tyr
130 135 140
Ala Trp Asp Val Val Asn Glu Ala Leu Asn Asp Asp Gly Thr Tyr Arg
145 150 155 160
Ser Asn Val Phe Tyr Gln Tyr Ile Gly Glu Ala Tyr Ile Pro Ile Ala
165 170 175
Phe Ala Thr Ala Ala Ala Ala Asp Pro Asn Ala Lys Leu Tyr Tyr Asn
180 185 190
Asp Tyr Asn Ile Glu Tyr Pro Gly Ala Lys Ala Thr Ala Ala Gln Asn
195 200 205
Ile Val Lys Met Val Lys Ala Tyr Gly Ala Lys Ile Asp Gly Val Gly
210 215 220
Leu Gln Ser His Phe Ile Val Gly Ser Thr Pro Ser Gln Ser Ser Gln
225 230 235 240
Gln Ser Asn Met Ala Ala Phe Thr Ala Leu Gly Val Glu Val Ala Ile
245 250 255
Thr Glu Leu Asp Ile Arg Met Thr Leu Pro Ser Thr Ser Ala Leu Leu
260 265 270
Ala Gln Gln Ser Thr Asp Tyr Gln Ser Thr Val Ser Ala Cys Val Asn
275 280 285
Thr Pro Lys Cys Ile Gly Ile Thr Leu Trp Asp Trp Thr Asp Lys Tyr
290 295 300
Ser Trp Val Pro Asn Thr Phe Ser Gly Gln Gly Asp Ala Cys Pro Trp
305 310 315 320
Asp Ser Asn Tyr Gln Lys Lys Pro Ala Tyr Tyr Gly Ile Leu Thr Ala
325 330 335
Leu Gly Gly Ser Ala Ser Thr Ser Thr Thr Thr Thr Leu Val Thr Ser
340 345 350
Thr Arg Thr Ser Thr Thr Thr Ser Thr Ser Ala Thr Ser Thr Ser Thr
355 360 365
Gly Val Ala Gln His Trp Gly Gln Cys Gly Gly Ile Gly Trp Thr Gly
370 375 380
Pro Thr Thr Cys Ala Ser Pro Tyr Thr Cys Gln Glu Leu Asn Pro Tyr
385 390 395 400
Tyr Tyr Gln Cys Leu
405
<210> 23
<211> 398
<212> PRT
<213> 褐孢长毛盘菌（Trichophaea saccata）
<400> 23
Met Arg Thr Phe Ser Ser Leu Leu Gly Val Ala Leu Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ala Asn Ala Gln Val Ala Val Trp Gly Gln Cys Gly Gly Ile Gly Tyr
20 25 30
Ser Gly Ser Thr Thr Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys Val Lys Leu Asn
35 40 45
Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Gln Pro Gly Gly Thr Thr Leu Thr Thr Thr
50 55 60
Thr Lys Pro Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala Thr Ser Pro Ser
65 70 75 80
Ser Ser Pro Gly Leu Asn Ala Leu Ala Gln Lys Ser Gly Arg Tyr Phe
85 90 95
Gly Ser Ala Thr Asp Asn Pro Glu Leu Ser Asp Ala Ala Tyr Ile Ala
100 105 110
Ile Leu Ser Asn Lys Asn Glu Phe Gly Ile Ile Thr Pro Gly Asn Ser
115 120 125
Met Lys Trp Asp Ala Thr Glu Pro Ser Arg Gly Ser Phe Ser Phe Thr
130 135 140
Gly Gly Gln Gln Ile Val Asp Phe Ala Gln Gly Asn Gly Gln Ala Ile
145 150 155 160
Arg Gly His Thr Leu Val Trp Tyr Ser Gln Leu Pro Ser Trp Val Thr
165 170 175
Ser Gly Asn Phe Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ser Ile Met Gln Asn His
180 185 190
Ile Thr Thr Leu Val Ser His Trp Lys Gly Gln Leu Ala Tyr Trp Asp
195 200 205
Val Val Asn Glu Ala Phe Asn Asp Asp Gly Thr Phe Arg Gln Asn Val
210 215 220
Phe Tyr Thr Thr Ile Gly Glu Asp Tyr Ile Gln Leu Ala Phe Glu Ala
225 230 235 240
Ala Arg Ala Ala Asp Pro Thr Ala Lys Leu Cys Ile Asn Asp Tyr Asn
245 250 255
Ile Glu Gly Thr Gly Ala Lys Ser Thr Ala Met Tyr Asn Leu Val Ser
260 265 270
Lys Leu Lys Ser Ala Gly Val Pro Ile Asp Cys Ile Gly Val Gln Gly
275 280 285
His Leu Ile Val Gly Glu Val Pro Thr Thr Ile Gln Ala Asn Leu Ala
290 295 300
Gln Phe Ala Ser Leu Gly Val Asp Val Ala Ile Thr Glu Leu Asp Ile
305 310 315 320
Arg Met Thr Leu Pro Ser Thr Thr Ala Leu Leu Gln Gln Gln Ala Lys
325 330 335
Asp Tyr Val Ser Val Val Thr Ala Cys Met Asn Val Pro Arg Cys Ile
340 345 350
Gly Ile Thr Ile Trp Asp Tyr Thr Asp Lys Tyr Ser Trp Val Pro Gln
355 360 365
Thr Phe Ser Gly Gln Gly Asp Ala Cys Pro Trp Asp Ala Asn Leu Gln
370 375 380
Lys Lys Pro Ala Tyr Ser Ala Ile Ala Ser Ala Leu Ala Ala
385 390 395
<210> 24
<211> 384
<212> PRT
<213> 棘孢曲霉（Aspergillus aculeatus）
<400> 24
Val Gly Leu Asp Gln Ala Ala Val Ala Lys Gly Leu Gln Tyr Phe Gly
1 5 10 15
Thr Ala Thr Asp Asn Pro Glu Leu Thr Asp Ile Pro Tyr Val Thr Gln
20 25 30
Leu Asn Asn Thr Ala Asp Phe Gly Gln Ile Thr Pro Gly Asn Ser Met
35 40 45
Lys Trp Asp Ala Thr Glu Pro Ser Gln Gly Thr Phe Thr Phe Thr Lys
50 55 60
Gly Asp Val Ile Ala Asp Leu Ala Glu Gly Asn Gly Gln Tyr Leu Arg
65 70 75 80
Cys His Thr Leu Val Trp Tyr Asn Gln Leu Pro Ser Trp Val Thr Ser
85 90 95
Gly Thr Trp Thr Asn Ala Thr Leu Thr Ala Ala Leu Lys Asn His Ile
100 105 110
Thr Asn Val Val Ser His Tyr Lys Gly Lys Cys Leu His Trp Asp Val
115 120 125
Val Asn Glu Ala Leu Asn Asp Asp Gly Thr Tyr Arg Thr Asn Ile Phe
130 135 140
Tyr Thr Thr Ile Gly Glu Ala Tyr Ile Pro Ile Ala Phe Ala Ala Ala
145 150 155 160
Ala Ala Ala Asp Pro Asp Ala Lys Leu Phe Tyr Asn Asp Tyr Asn Leu
165 170 175
Glu Tyr Gly Gly Ala Lys Ala Ala Ser Ala Arg Ala Ile Val Gln Leu
180 185 190
Val Lys Asn Ala Gly Ala Lys Ile Asp Gly Val Gly Leu Gln Ala His
195 200 205
Phe Ser Val Gly Thr Val Pro Ser Thr Ser Ser Leu Val Ser Val Leu
210 215 220
Gln Ser Phe Thr Ala Leu Gly Val Glu Val Ala Tyr Thr Glu Ala Asp
225 230 235 240
Val Arg Ile Leu Leu Pro Thr Thr Ala Thr Thr Leu Ala Gln Gln Ser
245 250 255
Ser Asp Phe Gln Ala Leu Val Gln Ser Cys Val Gln Thr Thr Gly Cys
260 265 270
Val Gly Phe Thr Ile Trp Asp Trp Thr Asp Lys Tyr Ser Trp Val Pro
275 280 285
Ser Thr Phe Ser Gly Tyr Gly Ala Ala Leu Pro Trp Asp Glu Asn Leu
290 295 300
Val Lys Lys Pro Ala Tyr Asn Gly Leu Leu Ala Gly Met Gly Val Thr
305 310 315 320
Val Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala Thr Ala Thr Gly Lys Thr
325 330 335
Thr Thr Thr Thr Thr Gly Ala Thr Ser Thr Gly Thr Thr Ala Ala His
340 345 350
Trp Gly Gln Cys Gly Gly Leu Asn Trp Ser Gly Pro Thr Ala Cys Ala
355 360 365
Thr Gly Tyr Thr Cys Thr Tyr Val Asn Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu
370 375 380
<210> 25
<211> 288
<212> PRT
<213> 丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum）
<400> 25
Ala Met Ser His Ser Lys Phe Val Gly Asn Ile Ile Ala Gly Ser Ile
1 5 10 15
Pro Ser Asn Phe Asp Thr Tyr Trp Asn Gln Val Thr Pro Glu Asn Ala
20 25 30
Thr Lys Trp Gly Ala Ile Glu Tyr Gly Arg Gly Asn Tyr Asn Trp Gly
35 40 45
Ser Ala Asp Leu Ile Tyr Asn Tyr Ala Arg Ser Lys Asn Met Pro Phe
50 55 60
Lys Phe His Asn Leu Val Trp Gly Ser Gln Gln Leu Thr Trp Leu Ser
65 70 75 80
Asn Leu Ser Pro Gln Asp Gln Lys Ser Glu Val Ser Lys Trp Ile Ala
85 90 95
Ala Ala Gly Gln Arg Tyr Ser Gly Ser Ala Phe Val Asp Val Val Asn
100 105 110
Glu Pro Leu His Thr Gln Pro Ser Tyr Lys Asn Ala Leu Gly Gly Asp
115 120 125
Gly Ser Thr Gly Tyr Asp Trp Ile Val Trp Ser Tyr Gln Gln Ala Arg
130 135 140
Lys Ala Phe Pro Asn Ser Lys Leu Leu Ile Asn Glu Tyr Gly Ile Ile
145 150 155 160
Gly Asp Pro Asn Ala Ala Ala Asn Tyr Val Lys Ile Ile Asn Val Leu
165 170 175
Lys Ser Lys Gly Leu Ile Asp Gly Ile Gly Ile Gln Cys His Tyr Phe
180 185 190
Asn Met Asp Asn Val Ser Val Gly Thr Met Asn Tyr Val Leu Asn Met
195 200 205
Leu Ser Asn Thr Gly Leu Pro Ile Tyr Val Ser Glu Leu Asp Met Thr
210 215 220
Gly Asp Asp Ser Thr Gln Leu Ala Arg Tyr Gln Gln Lys Phe Pro Val
225 230 235 240
Leu Tyr Gln Asn Pro Asn Val Lys Gly Ile Thr Leu Trp Gly Tyr Met
245 250 255
Gln Gly Gln Thr Trp Asn Ser Gly Thr Tyr Leu Val Asn Ser Asn Gly
260 265 270
Thr Glu Arg Pro Ala Leu Lys Trp Leu Arg Ser Tyr Leu Ala Ser His
275 280 285
<210> 26
<211> 308
<212> PRT
<213> 棘孢曲霉
<400> 26
Asn Pro Ile Glu Pro Arg Gln Ala Ser Val Ser Ile Asp Ala Lys Phe
1 5 10 15
Lys Ala His Gly Lys Lys Tyr Leu Gly Thr Ile Gly Asp Gln Tyr Thr
20 25 30
Leu Asn Lys Asn Ala Lys Thr Pro Ala Ile Ile Lys Ala Asp Phe Gly
35 40 45
Gln Leu Thr Pro Glu Asn Ser Met Lys Trp Asp Ala Thr Glu Pro Asn
50 55 60
Arg Gly Gln Phe Ser Phe Ser Gly Ser Asp Tyr Leu Val Asn Phe Ala
65 70 75 80
Gln Ser Asn Gly Lys Leu Ile Arg Gly His Thr Leu Val Trp His Ser
85 90 95
Gln Leu Pro Ser Trp Val Gln Ser Ile Ser Asp Lys Asn Thr Leu Ile
100 105 110
Gln Val Met Gln Asn His Ile Thr Thr Val Met Gln Arg Tyr Lys Gly
115 120 125
Lys Val Tyr Ala Trp Asp Val Val Asn Glu Ile Phe Asn Glu Asp Gly
130 135 140
Ser Leu Cys Gln Ser His Phe Tyr Asn Val Ile Gly Glu Asp Tyr Val
145 150 155 160
Arg Ile Ala Phe Glu Thr Ala Arg Ala Val Asp Pro Asn Ala Lys Leu
165 170 175
Tyr Ile Asn Asp Tyr Asn Leu Asp Ser Ala Ser Tyr Pro Lys Leu Thr
180 185 190
Gly Leu Val Asn His Val Lys Lys Trp Val Ala Ala Gly Val Pro Ile
195 200 205
Asp Gly Ile Gly Ser Gln Thr His Leu Ser Ala Gly Ala Gly Ala Ala
210 215 220
Val Ser Gly Ala Leu Asn Ala Leu Ala Gly Ala Gly Thr Lys Glu Val
225 230 235 240
Ala Ile Thr Glu Leu Asp Ile Ala Gly Ala Ser Ser Thr Asp Tyr Val
245 250 255
Asn Val Val Lys Ala Cys Leu Asn Gln Pro Lys Cys Val Gly Ile Thr
260 265 270
Val Trp Gly Ser Ser Asp Pro Asp Ser Trp Arg Ser Ser Ser Ser Pro
275 280 285
Leu Leu Phe Asp Ser Asn Tyr Asn Pro Lys Ala Ala Tyr Thr Ala Ile
290 295 300
Ala Asn Ala Leu
305
<210> 27
<211> 195
<212> PRT
<213> 疏棉状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）
<400> 27
Arg Gln Thr Thr Pro Asn Ser Glu Gly Trp His Asp Gly Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Ser Trp Trp Ser Asp Gly Gly Ala Gln Ala Thr Tyr Thr Asn Leu Glu
20 25 30
Gly Gly Thr Tyr Glu Ile Ser Trp Gly Asp Gly Gly Asn Leu Val Gly
35 40 45
Gly Lys Gly Trp Asn Pro Gly Leu Asn Ala Arg Ala Ile His Phe Glu
50 55 60
Gly Val Tyr Gln Pro Asn Gly Asn Ser Tyr Leu Ala Val Tyr Gly Trp
65 70 75 80
Thr Arg Asn Pro Leu Val Glu Tyr Tyr Ile Val Glu Asn Phe Gly Thr
85 90 95
Tyr Asp Pro Ser Ser Gly Ala Thr Asp Leu Gly Thr Val Glu Cys Asp
100 105 110
Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Gly Lys Thr Thr Arg Val Asn Ala Pro Ser
115 120 125
Ile Asp Gly Thr Gln Thr Phe Asp Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln Asp
130 135 140
Lys Arg Thr Ser Gly Thr Val Gln Thr Gly Cys His Phe Asp Ala Trp
145 150 155 160
Ala Arg Ala Gly Leu Asn Val Asn Gly Asp His Tyr Tyr Gln Ile Val
165 170 175
Ala Thr Glu Gly Tyr Phe Ser Ser Gly Tyr Ala Arg Ile Thr Val Ala
180 185 190
Asp Val Gly
195
<210> 28
<211> 203
<212> PRT
<213> 嗜热网团菌（Dictyoglomus thermophilum）
<400> 28
Gln Thr Ser Ile Thr Leu Thr Ser Asn Ala Ser Gly Thr Phe Asp Gly
1 5 10 15
Tyr Tyr Tyr Glu Leu Trp Lys Asp Thr Gly Asn Thr Thr Met Thr Val
20 25 30
Tyr Thr Gln Gly Arg Phe Ser Cys Gln Trp Ser Asn Ile Asn Asn Ala
35 40 45
Leu Phe Arg Thr Gly Lys Lys Tyr Asn Gln Asn Trp Gln Ser Leu Gly
50 55 60
Thr Ile Arg Ile Thr Tyr Ser Ala Thr Tyr Asn Pro Asn Gly Asn Ser
65 70 75 80
Tyr Leu Cys Ile Tyr Gly Trp Ser Thr Asn Pro Leu Val Glu Phe Tyr
85 90 95
Ile Val Glu Ser Trp Gly Asn Trp Arg Pro Pro Gly Ala Thr Ser Leu
100 105 110
Gly Gln Val Thr Ile Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Arg Thr Thr
115 120 125
Arg Val Asn Gln Pro Ser Ile Val Gly Thr Ala Thr Phe Asp Gln Tyr
130 135 140
Trp Ser Val Arg Thr Ser Lys Arg Thr Ser Gly Thr Val Thr Val Thr
145 150 155 160
Asp His Phe Arg Ala Trp Ala Asn Arg Gly Leu Asn Leu Gly Thr Ile
165 170 175
Asp Gln Ile Thr Leu Cys Val Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ala
180 185 190
Asn Ile Thr Gln Asn Thr Phe Ser Gln Gly Ser
195 200
<210> 29
<211> 182
<212> PRT
<213> 饲料类芽孢杆菌（Paenibacillus Pabuli）
<400> 29
Thr Asp Tyr Trp Gln Asn Trp Thr Asp Gly Gly Gly Thr Val Asn Ala
1 5 10 15
Val Asn Gly Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Val Asn Trp Gln Asn Thr Gly
20 25 30
Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Tyr Gly Thr Pro Asn Arg Val
35 40 45
Val Asn Tyr Asn Ala Gly Val Phe Ser Pro Ser Gly Asn Gly Tyr Leu
50 55 60
Thr Phe Tyr Gly Trp Thr Arg Asn Ala Leu Ile Glu Tyr Tyr Val Val
65 70 75 80
Asp Asn Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly Thr Val
85 90 95
Thr Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Met Arg Tyr Asn
100 105 110
Gln Pro Ser Ile Asp Gly Tyr Ser Thr Phe Pro Gln Tyr Trp Ser Val
115 120 125
Arg Gln Ser Lys Arg Pro Ile Gly Val Asn Ser Gln Ile Thr Phe Gln
130 135 140
Asn His Val Asn Ala Trp Ala Ser Lys Gly Met Tyr Leu Gly Asn Ser
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Gln Val Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser
165 170 175
Ser Asn Val Thr Val Trp
180
<210> 30
<211> 183
<212> PRT
<213> 嗜热脂肪土芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）
<400> 30
Ala Thr Asp Tyr Trp Gln Tyr Trp Thr Asp Gly Gly Gly Met Val Asn
1 5 10 15
Ala Val Asn Gly Pro Gly Gly Asn Tyr Ser Val Thr Trp Gln Asn Thr
20 25 30
Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Val Gly Ser Pro Asn Arg
35 40 45
Val Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Ile Trp Glu Pro Ser Gly Asn Gly Tyr
50 55 60
Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Asn Ala Leu Ile Glu Tyr Tyr Val
65 70 75 80
Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Asn Tyr Lys Gly Thr
85 90 95
Val Asn Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Met Arg Tyr
100 105 110
Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Thr Gln Thr Phe Gln Gln Phe Trp Ser
115 120 125
Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Val Ser Ile Thr Phe
130 135 140
Ser Asn His Val Asn Ala Trp Arg Ser Lys Gly Met Asn Leu Gly Ser
145 150 155 160
Ser Trp Ala Tyr Gln Val Leu Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Arg Ser Asn Val Thr Val Trp
180
<210> 31
<211> 183
<212> PRT
<213> 嗜热脂肪土芽孢杆菌
<400> 31
Ala Thr Asp Tyr Trp Gln Tyr Trp Thr Asp Gly Gly Gly Met Val Asn
1 5 10 15
Ala Val Asn Gly Pro Gly Gly Asn Tyr Ser Val Thr Trp Gln Asn Thr
20 25 30
Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Val Gly Ser Pro Asn Arg
35 40 45
Val Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Ile Trp Glu Pro Ser Gly Asn Gly Tyr
50 55 60
Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Asn Ala Leu Ile Glu Tyr Tyr Val
65 70 75 80
Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Asn Tyr Lys Gly Thr
85 90 95
Val Asn Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Met Arg Tyr
100 105 110
Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Thr Gln Thr Phe Gln Gln Phe Trp Ser
115 120 125
Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Val Ser Ile Thr Phe
130 135 140
Ser Asn His Val Asn Ala Trp Arg Ser Lys Gly Met Asn Leu Gly Ser
145 150 155 160
Ser Trp Ala Tyr Gln Val Leu Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Arg Ser Asn Val Thr Val Trp
180
<210> 32
<211> 299
<212> PRT
<213> 北疆链霉菌（Streptomyces beijiangensis）
<400> 32
Asp Thr Val Val Asn Ser Asn Gln Thr Gly Thr Asn Asn Gly Tyr Tyr
1 5 10 15
Tyr Ser His Trp Ser Asp Gly Gly Gly Ser Val Ser Met Thr Leu Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Asn Tyr Gly Tyr Gln Trp Ser Asn Val Gly Asn Phe Val
35 40 45
Gly Gly Lys Gly Trp Ser Thr Gly Gly Arg Lys Ser Val Asn Tyr Ser
50 55 60
Gly Ser Phe Asn Pro Ser Gly Asn Ala Tyr Leu Ala Leu Tyr Gly Trp
65 70 75 80
Thr Thr Asn Pro Leu Val Glu Tyr Tyr Val Val Glu Asn Phe Gly Thr
85 90 95
Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Phe Lys Gly Thr Val Thr Ser Asp Gly Gly
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Tyr Glu Thr Thr Arg Val Asn Gln Pro Ser Ile Glu
115 120 125
Gly Thr Lys Thr Phe Lys Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg
130 135 140
Thr Gly Gly Thr Ile Thr Thr Gly Asn His Phe Asp Ala Trp Ser Ser
145 150 155 160
His Gly Met Ser Met Gly Ser Phe Asn Tyr Met Ile Met Ala Thr Glu
165 170 175
Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ser Asn Ile Thr Val Ser Glu Gly Ser
180 185 190
Ser Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Thr Gly Gly
195 200 205
Gly Gly Ser Gly Gly Cys Thr Ala Thr Leu Ser Ala Gly Asp Lys Trp
210 215 220
Ser Asp Arg Tyr Asn Leu Asn Val Ser Val Ser Gly Ala Gly Asn Trp
225 230 235 240
Thr Val Thr Met Lys Val Pro Ser Pro Glu Lys Val Leu Ser Thr Trp
245 250 255
Asn Val Ser Ala Ala Tyr Pro Asp Ser Gln Thr Leu Val Ala Lys Ser
260 265 270
Asn Gly Ser Gly Ser Asn Trp Gly Ala Thr Ile Gln Thr Asn Gly Ser
275 280 285
Trp Thr Trp Pro Thr Val Thr Cys Ser Ala Gly
290 295
<210> 33
<211> 299
<212> PRT
<213> 北疆链霉菌
<400> 33
Asp Thr Val Val Asn Ser Asn Gln Thr Gly Thr Asn Asn Gly Tyr Tyr
1 5 10 15
Tyr Ser His Trp Ser Asp Gly Gly Gly Ser Val Ser Met Thr Leu Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Asn Tyr Gly Tyr Gln Trp Ser Asn Val Gly Asn Phe Val
35 40 45
Gly Gly Lys Gly Trp Ser Thr Gly Gly Arg Lys Ser Val Asn Tyr Ser
50 55 60
Gly Ser Phe Asn Pro Ser Gly Asn Ala Tyr Leu Ala Leu Tyr Gly Trp
65 70 75 80
Thr Thr Asn Pro Leu Val Glu Tyr Tyr Val Val Glu Asn Phe Gly Thr
85 90 95
Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Phe Lys Gly Thr Val Thr Ser Asp Gly Gly
100 105 110
Thr Tyr Asp Ile Tyr Glu Thr Thr Arg Val Asn Gln Pro Ser Ile Glu
115 120 125
Gly Thr Lys Thr Phe Lys Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg
130 135 140
Thr Gly Gly Thr Ile Thr Thr Gly Asn His Phe Asp Ala Trp Ser Ser
145 150 155 160
His Gly Met Ser Met Gly Ser Phe Asn Tyr Met Ile Met Ala Thr Glu
165 170 175
Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ser Asn Ile Thr Val Ser Glu Gly Ser
180 185 190
Ser Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Gly Thr Gly Gly
195 200 205
Gly Gly Ser Gly Gly Cys Thr Ala Thr Leu Ser Ala Gly Asp Lys Trp
210 215 220
Ser Asp Arg Tyr Asn Leu Asn Val Ser Val Ser Gly Ala Gly Asn Trp
225 230 235 240
Thr Val Thr Met Lys Val Pro Ser Pro Glu Lys Val Leu Ser Thr Trp
245 250 255
Asn Val Ser Ala Ala Tyr Pro Asp Ser Gln Thr Leu Val Ala Lys Ser
260 265 270
Asn Gly Ser Gly Ser Asn Trp Gly Ala Thr Ile Gln Thr Asn Gly Ser
275 280 285
Trp Thr Trp Pro Thr Val Thr Cys Ser Ala Gly
290 295
<210> 34
<211> 188
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）
<400> 34
Thr Gln Pro Thr Thr Gly Thr Ser Gly Gly Tyr Tyr Phe Ser Phe Trp
1 5 10 15
Thr Asp Thr Pro Asn Ser Val Thr Tyr Thr Asn Gly Asn Gly Gly Gln
20 25 30
Phe Ser Met Gln Trp Ser Gly Asn Gly Asn His Val Gly Gly Lys Gly
35 40 45
Trp Met Pro Gly Thr Ser Arg Thr Ile Lys Tyr Ser Gly Ser Tyr Asn
50 55 60
Pro Asn Gly Asn Ser Tyr Leu Ala Val Tyr Gly Trp Thr Arg Asn Pro
65 70 75 80
Leu Ile Glu Tyr Tyr Ile Val Glu Asn Phe Gly Thr Tyr Asn Pro Ser
85 90 95
Ser Gly Gly Gln Lys Lys Gly Glu Val Asn Val Asp Gly Ser Val Tyr
100 105 110
Asp Ile Tyr Val Ser Thr Arg Val Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Asn
115 120 125
Lys Thr Phe Gln Gln Tyr Trp Ser Val Arg Arg Asn Lys Arg Ser Ser
130 135 140
Gly Ser Val Asn Thr Gly Ala His Phe Gln Ala Trp Lys Asn Val Gly
145 150 155 160
Leu Asn Leu Gly Thr His Asp Tyr Gln Ile Leu Ala Val Glu Gly Tyr
165 170 175
Tyr Ser Ser Gly Ser Ala Ser Met Thr Val Ser Gln
180 185
<210> 35
<211> 189
<212> PRT
<213> 棒曲霉
<400> 35
Ala Gly Thr Pro Ser Ser Thr Gly Trp Asn Asn Gly Tyr Tyr Tyr Ser
1 5 10 15
Phe Trp Thr Asp Asn Gly Gly Thr Val Asn Tyr Gln Asn Gly Asn Gly
20 25 30
Gly Ser Tyr Ser Val Gln Trp Lys Asp Thr Gly Asn Phe Val Gly Gly
35 40 45
Lys Gly Trp Asn Pro Gly Ser Ala Arg Thr Ile Asn Tyr Ser Gly Ser
50 55 60
Phe Asn Pro Ser Gly Asn Ala Tyr Leu Thr Val Tyr Gly Trp Thr Thr
65 70 75 80
Asn Pro Leu Val Glu Tyr Tyr Ile Val Glu Asn Tyr Gly Thr Tyr Asn
85 90 95
Pro Gly Asn Gly Gly Thr Tyr Arg Gly Ser Val Tyr Ser Asp Gly Ala
100 105 110
Asn Tyr Asn Ile Tyr Thr Ala Thr Arg Tyr Asn Ala Pro Ser Ile Glu
115 120 125
Gly Asp Lys Thr Phe Thr Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg
130 135 140
Thr Gly Gly Thr Val Thr Thr Ala Asn His Phe Asn Ala Trp Ala Gln
145 150 155 160
Leu Gly Met Ser Leu Gly Thr His Asn Tyr Gln Ile Val Ala Thr Glu
165 170 175
Gly Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ile Thr Val Tyr
180 185
Claims (15)
1.一种在湿磨过程中改善来自玉米籽粒的淀粉产率和/或谷蛋白产率的方法，所述方法包括：
a)从纤维中分离淀粉和/或谷蛋白以提供纤维级分，
b)通过将所述纤维级分的粗纤维从所述纤维级分的细纤维分离来提供细纤维级分；和
c)将所述细纤维级分与一种或多种水解酶接触。
2.根据权利要求1所述的方法，其中通过使所述纤维级分穿过具有1000μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网，并且除去所述筛网或滤网上保留的纤维来提供所述细纤维级分。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过以下来提供所述细纤维级分：
a)使所述纤维级分穿过具有1000μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网，并且除去所述过滤器、筛网或滤网上保留的纤维；并且然后
b)使所述纤维级分的剩余部分穿过具有50μm孔隙大小的过滤器、筛网或滤网，并且收集所述过滤器、筛网或滤网上保留的纤维。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶接触2-72小时的时间段。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶在35℃-70℃的范围内的温度接触。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中当保留在培养箱或贮存箱中时，所述细纤维级分与所述一种或多种水解酶接触。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述培养箱或贮存箱包括一个或多个搅拌器，所述搅拌器配置成用于防止固体和/或细纤维的沉降。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述培养箱或贮存箱在所述纤维洗涤程序中与筛网单元流畅连接。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法包括：
a)将所述纤维级分送入纤维压榨机(P)，并对其进行压榨和过滤，以提供经压榨纤维和纤维压榨滤液，以及
b)将所述纤维压榨滤液送入空间(V1)中，并将所述纤维压榨滤液保留在所述空间(V1)中，然后任选地将所述纤维压榨滤液送入所述纤维洗涤系统(F)中。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述空间(V1)具有在80和250m3的范围内的体积。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种水解酶选自由以下组成的组：纤维素酶(EC 3.2.1.4)、木聚糖酶(EC 3.2.1.8)、阿拉伯呋喃糖苷酶(EC3.2.1.55(非还原性末端α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶)；EC 3.2.1.185(非还原性末端β-L-阿拉伯呋喃糖苷酶)、纤维二糖水解酶I(EC 3.2.1.150)、纤维二糖水解酶II(E.C.3.2.1.91)、纤维二糖苷酶(E.C.3.2.1.176)、β-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.21)、和β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种水解酶包括具有木聚糖酶活性的GH10多肽和/或具有木聚糖酶活性的GH11多肽。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种水解酶包括具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的GH61多肽和/或具有阿拉伯呋喃糖苷酶活性的GH62多肽。
14.一种玉米籽粒湿磨系统，所述玉米籽粒湿磨系统包括
i)纤维洗涤系统(F)
ii)纤维压榨机(P),
iii)用于给料一种或多种水解酶的手段；和
iv)空间(V1)；
其中所述纤维洗涤系统(F)、所述纤维压榨机(P)和所述空间(V1)相互连接以允许纤维级分从所述纤维洗涤系统流向所述压榨机，纤维压榨滤液或细纤维级分从所述压榨机流向所述空间(V1)；
其中所述用于给料一种或多种水解酶的手段配置用于向所述纤维压榨滤液或所述细纤维级分中给料所述酶，
并且所述空间(V1)每天至少加工100m3/1000公吨玉米。
15.根据权利要求14所述的玉米籽粒湿磨系统，其中
-所述纤维洗涤系统(F)、所述纤维压榨机(P)和所述空间(V1)相互连接以允许纤维级分从所述纤维洗涤系统流向所述压榨机，纤维压榨滤液或细纤维级分从所述压榨机流向所述空间(V1)和纤维压榨滤液或细纤维级分从所述空间(V1)流向所述纤维洗涤系统；
以及
-所述空间(V1)设置在所述纤维压榨机与所述纤维洗涤系统之间的位置。
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|---|---|---|---|---|
| CN111117986A (zh) * | 2020-01-16 | 2020-05-08 | 南京林业大学 | 一种钙依赖型耐热α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的编码基因、制备技术和应用 |
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