CN110621779B - 具有溶菌酶活性的多肽、编码其的多核苷酸以及其用途和组合物 - Google Patents

具有溶菌酶活性的多肽、编码其的多核苷酸以及其用途和组合物 Download PDF

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Abstract

披露了包含一种或多种具有溶菌酶活性的多肽的动物饲料或动物饲料添加剂。披露了具有溶菌酶活性的多肽,编码这些多肽的多核苷酸,包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞以及产生和使用这些多肽的方法。

Description

具有溶菌酶活性的多肽、编码其的多核苷酸以及其用途和组 合物
序列表的引用
本申请包含处于计算机可读形式的序列表,将其通过引用并入本文。
发明背景
技术领域
本发明涉及具有溶菌酶活性的新颖LYS多肽,编码这些多肽的多核苷酸,包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞,连同产生这些多肽的方法。本发明还涉及包含LYS多肽的组合物,特别是动物饲料,以及LYS多肽在动物饲料中的用途。
背景技术
溶菌酶是一种由许多生物作为对抗细菌的防御性机制而产生的O-糖基水解酶。该酶通过切割肽聚糖的糖苷键引起细菌细胞壁的水解;肽聚糖是细菌中的一种重要的结构分子。在细菌的细胞壁被溶菌酶作用弱化后,由不平衡的渗透压导致细菌细胞溶解。
溶菌酶天然存在于许多生物中,例如病毒、植物、昆虫、鸟类、爬行动物以及哺乳动物。在哺乳动物中,已经从鼻腔分泌物、唾液、眼泪、肠内容物、尿和乳中分离出溶菌酶。该酶切割N-乙酰胞壁酸的1号碳与N-乙酰-D-葡糖胺的4号碳之间的糖苷键。在体内,这两种碳水化合物聚合以形成许多微生物的细胞壁多糖。
目前已经将溶菌酶分类为七种不同的糖苷水解酶(GH)家族(CAZy,www.cazy.org):GH18、GH19、鸡蛋清溶菌酶(GH22)、鹅蛋清溶菌酶(GH23)、噬菌体T4溶菌酶(GH24)、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas)鞭毛蛋白(GH73)以及拟鞘孢属(Chalaropsis)溶菌酶(GH25)。
从鸡蛋清提取的溶菌酶是在商业市场可获得的主要产品,但不切割例如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)细胞壁中的N,6-O-二乙酰胞壁酸并且因此尤其不能溶解这一重要的人类病原体(Masschalck B,Deckers D,Michiels CW(2002),“Lytic andnonlytic mechanism of inactivation of gram-positive bacteria by lysozymeunder atmospheric and high hydrostatic pressure[在大气压和高流体静力压下由溶菌酶灭活革兰氏阳性细菌的溶解和非溶解机制]”,J Food Prot.[食品保护杂志]65(12):1916-23)。
已经提出了溶菌酶在动物饲料(参见例如WO 00/21381和WO 04/026334),在乳酪生产(参见例如WO 05/080559)、食品保藏(Hughey和Johnson(1987)Appl EnvironMicrobiol[应用与环境微生物学]53:2165)、洗涤剂(参见例如US 5,041,236和EP0425016)、口腔护理(参见例如US 4,355,022、WO 04/017988和WO 08/124764)、美容和皮肤学、避孕、泌尿学、以及妇科(参见例如WO 08/124764)中的用途。
传统上,抗微生物生长促进剂(AGP)已经用于动物的生长促进,并且可能通过防止病原体例如产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的低水平感染来起作用。然而,AGP越来越多地被禁止在全世界范围内使用,并且因此促进动物生长但不是AGP的新解决方案是有利益性的。
发明内容
诸位发明人发现了一类具有溶菌酶活性的全新多肽。因此,本发明涉及一种组合物,该组合物包含至少0.01mg LYS多肽/千克组合物,其中该多肽(a)具有溶菌酶活性,并且(b)包含一个或多个LAD催化结构域;其中,当使用SEQ ID NO:46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型(Profile Hidden Markov Model,HMM)查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为180。通常,通过利用HMM确定LAD催化结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询。
本发明进一步涉及具有溶菌酶活性的分离的多肽,该分离的多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少94%序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少87%序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少81%序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少87%序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少96.2%序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少81%序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(o)SEQ ID NO:3的多肽的变体,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(p)SEQ ID NO:6的多肽的变体,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(q)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:36,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43或44位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(r)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:21、SEQID NO:24、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:42,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(s)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:27,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(t)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:39,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41或42位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(u)SEQ ID NO:30的多肽的变体,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7或8位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(v)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)或(u)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;
(w)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)或(u)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸的多肽;以及
(x)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)或(u)的多肽的片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90%。
本发明还涉及包含本发明的LYS多肽的动物饲料添加剂或动物饲料;LYS多肽的溶菌酶在以下方面的用途:在动物饲料中,在动物饲料添加剂中,在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中,用于改善动物中的一个或多个性能参数。本发明进一步涉及改善动物的性能参数和制备动物饲料的方法;编码本发明多肽的分离的多核苷酸、核酸构建体、重组表达载体、重组宿主细胞以及产生本发明LYS多肽的方法。本发明进一步涉及本发明的组合物在以下方面的用途:在动物饲料中;在动物饲料添加剂中;在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中;用于改善动物饲料的营养价值;用于提高动物饲料的消化率;和/或用于改善动物中的一个或多个性能参数。
序列表概述
SEQ ID NO:1是从简青霉(Penicillium simplicissimum)分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:2是从SEQ ID NO:1推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:3是来自简青霉的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4是从Penicillium vasconiae分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:5是从SEQ ID NO:4推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:6是来自Penicillium vasconiae的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:7是从解蛋白篮状菌(Talaromyces proteolyticus)分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:8是从SEQ ID NO:7推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:9是来自解蛋白篮状菌的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:10是从曲霉属物种(Aspergillus sp.)XZ2668分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:11是从SEQ ID NO:10推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:12是来自曲霉属物种XZ2668的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:13是从南极青霉(Penicillium antarcticum)分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:14是从SEQ ID NO:13推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:15是来自南极青霉的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:16是从Ovatospora brasiliensis分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:17是从SEQ ID NO:16推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:18是来自Ovatospora brasiliensis的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:19是从惠灵顿青霉(Penicillium wellingtonense)分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:20是从SEQ ID NO:19推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:21是来自惠灵顿青霉的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:22是从玫瑰紫青霉(Penicillium roseopurpureum)分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:23是从SEQ ID NO:22推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:24是来自玫瑰紫青霉的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:25是从帚青霉(Penicillium virgatum)分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:26是从SEQ ID NO:25推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:27是来自帚青霉的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:28是从霉白曲霉(Aspergillus niveus)分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:29是从SEQ ID NO:28推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:30是来自霉白曲霉的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:31是从毛壳菌属物种(Chaetomium sp.)ZY369分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:32是从SEQ ID NO:31推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:33是来自毛壳菌属物种ZY369的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:34是从Talaromyces atricola分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:35是从SEQ ID NO:34推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:36是来自Talaromyces atricola的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:37是从粗糙短梗蠕孢(Trichocladium asperum)分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:38是从SEQ ID NO:37推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:39是来自粗糙短梗蠕孢的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:40是从肉色绿僵菌(Metarhizium carneum)分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:41是从SEQ ID NO:40推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:42是来自肉色绿僵菌的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:43是从土生梭孢壳霉(Thielavia terrestris)分离的LYS多肽的cDNA序列。
SEQ ID NO:44是从SEQ ID NO:43推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:45是来自土生梭孢壳霉的成熟LYS多肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO:46是来自棒曲霉(Aspergillus clavatus)的SWISSPROT:A1C4L9的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:47是来自热带盐孢菌(Salinispora tropica)的SWISSPROT:A4X6S9的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:48是来自海洋放线菌(Salinispora arenicola)的SWISSPROT:A8M1H3的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:49是来自红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)的SWISSPROT:Q3L9Z6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:50是来自分枝杆菌(Mycobacterium)噬菌体Pacc40的SWISSPROT:B5U576的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:51是来自产红青霉(Penicillium rubens)的SWISSPROT:B6GZX8的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:52是来自橙黄小单孢菌(Micromonospora aurantiaca)的SWISSPROT:D1S6X5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:53是来自橙黄小单孢菌的SWISSPROT:D1S8J3的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:54是来自橙黄小单孢菌的SWISSPROT:D1SH66的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:55是来自黑孢块菌(Tuber melanosporum)的SWISSPROT:D5GBH0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:56是来自Hypocrea atroviridis的SWISSPROT:G9P583的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:57是来自蝗绿僵菌(Metarhizium acridum)的SWISSPROT:E9ED38的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:58是来自罗伯茨绿僵菌(Metarhizium robertsii)的SWISSPROT:E9FAK9的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:59是来自海洋疣孢菌(Verrucosispora maris)的SWISSPROT:F4F8N8的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:60是来自海洋疣孢菌的SWISSPROT:F4FI59的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:61是来自球孢白僵菌(Beauveria bassiana)的SWISSPROT:J4USU4的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:62是来自土生梭孢壳霉的SWISSPROT:G2QV10的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:63是来自Micromonospora peucetia的SWISSPROT:A0A1C6W4S6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:64是来自产左聚糖微杆菌(Microbacterium laevaniformans)的SWISSPROT:H8E7T0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:65是来自脓肿分枝杆菌(Mycobacterium abscessus)的SWISSPROT:I0PF45的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:66是来自羽扇豆小单孢菌(Micromonospora lupini)菌株Lupac的SWISSPROT:I0L0M9的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:67是来自羽扇豆小单孢菌菌株Lupac的SWISSPROT:I0L3A4的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:68是来自白色绿僵菌(Metarhizium album)的SWISSPROT:A0A0B2X541的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:69是来自粉虱座壳孢(Aschersonia aleyrodis)的SWISSPROT:A0A168BML7的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:70是来自白色绿僵菌的SWISSPROT:A0A0B2WV75的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:71是来自布氏虫草(Cordyceps brongniartii)的SWISSPROT:A0A167BWW4的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:72是来自莱氏绿僵菌(Metarhizium rileyi)的SWISSPROT:A0A167ECQ5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:73是来自粗糙虫草(Cordyceps confragosa)的SWISSPROT:A0A162JZ16的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:74是来自粗糙虫草的SWISSPROT:A0A168DNP6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:75是来自粗糙虫草的SWISSPROT:A0A168D0L5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:76是来自玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)的SWISSPROT:A0A168BQC6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:77是来自玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)的SWISSPROT:A0A167XCS5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:78是来自玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)的SWISSPROT:A0A167NNI6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:79是来自淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)的SWISSPROT:A0A179H6H8的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:80是来自厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporia)的SWISSPROT:A0A179FH10的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:81是来自厚垣孢普可尼亚菌的SWISSPROT:A0A179F665的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:82是来自厚垣孢普可尼亚菌的SWISSPROT:A0A179F1Q1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:83是来自草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)的SWISSPROT:S7ZNE7的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:84是来自金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)的SWISSPROT:A0A0D9PBV5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:85是来自金龟子绿僵菌的SWISSPROT:A0A0D9NPP1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:86是来自娄地青霉(Penicillium roqueforti)的SWISSPROT:W6QNL2的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:87是来自冰岛篮状菌(Talaromyces islandicus)的SWISSPROT:A0A0U1M0W5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:88是来自扩展青霉(Penicillium expansum)的SWISSPROT:A0A0A2I9P6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:89是来自产黄支顶孢菌(Acremonium chrysogenum)的SWISSPROT:A0A086T4C8的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:90是来自龟分枝杆菌(Mycobacterium chelonae)的SWISSPROT:X8ERY9的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:91是来自分枝杆菌属物种TKK的SWISSPROT:A0A081HTU5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:92是来自半翅目虫壳(Torrubiella hemipterigena)的SWISSPROT:A0A0A1TMJ0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:93是来自半翅目虫壳的SWISSPROT:A0A0A1TNZ8的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:94是来自节杆菌属物种(Arthrobacter sp)PAMC的SWISSPROT:A0A0A1D149的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:95是来自犹他游动放线菌(Actinoplanes utahensis)的SWISSPROT:A0A0A6UNI9的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:96是来自大孢绿僵菌(Metarhizium majus)的SWISSPROT:A0A0B4I0X1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:97是来自碳样小单孢菌(Micromonospora carbonacea)的SWISSPROT:A0A0D0WU99的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:98是来自免疫原性分枝杆菌(Mycobacterium immunogenum)的SWISSPROT:A0A0D1LTE6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:99是来自明尼苏达被毛孢(Hirsutella minnesotensis)的SWISSPROT:A0A0F8A5E8的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:100是来自明尼苏达被毛孢的SWISSPROT:A0A0F8A6I7的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:101是来自巴西青霉(Penicillium brasilianum)的SWISSPROT:A0A0F7TVL0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:102是来自长瓣弯颈霉(Tolypocladium ophioglossoides)的SWISSPROT:A0A0L0N1U6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:103是来自足马杜拉分枝菌(Madurella mycetomatis)的SWISSPROT:A0A0M0UGY1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:104是来自Aspergillus udagawae的SWISSPROT:A0A0K8L1J1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:105是来自皮疽诺卡菌(Nocardia farcinica)的SWISSPROT:A0A0H5NX60的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:106是来自小单孢菌属物种(Micromonospora sp)HK10的SWISSPROT:A0A0M2RBW0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:107是来自小单孢菌属物种HK10的SWISSPROT:A0A0M2RKI6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:108是来自穆尔西亚青霉(Penicillium murcianum)的SWISSPROT:A0A1F5LVD8的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:109是来自小单孢菌属物种的SWISSPROT:A0A0M8XNG9的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:110是来自盖姆斯木霉(Trichoderma gamsii)的SWISSPROT:A0A0W7W0M4的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:111是来自节杆菌属物种Soil761的SWISSPROT:A0A0Q9MHJ4的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:112是来自节杆菌属物种Soil736的SWISSPROT:A0A0Q9MU26的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:113是来自微杆菌属物种(Microbacterium sp)No 7的SWISSPROT:A0A0P0DUT5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:114是来自节杆菌属物种Soil762的SWISSPROT:A0A0Q9N9Z1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:115是来自盐生小单孢菌(Micromonospora halophytica)的SWISSPROT:A0A1C6RVB7的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:116是来自黑色小单孢菌(Micromonospora nigra)的SWISSPROT:A0A1C6SUA9的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:117是来自展青霉(Penicillium patulum)的SWISSPROT:A0A135LMU8的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:118是来自节杆菌属物种Leaf69的SWISSPROT:A0A0S9BYR1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:119是脓肿分枝杆菌的SWISSPROT:A0A0U0ZSQ6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:120是来自Mycobacterium canariasense的SWISSPROT:A0A100WIQ1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:121是来自利福霉素小单孢菌(Micromonospora rifamycinica)的SWISSPROT:A0A109IP50的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:122是来自利福霉素小单孢菌的SWISSPROT:A0A109IHN3的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:123是来自高山节杆菌(Arthrobacter alpinus)的SWISSPROT:A0A0S2M353的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:124是来自人微杆菌(Microbacterium hominis)的SWISSPROT:A0A134DEL4的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:125是来自戈登菌属(Gordonia)噬菌体Obliviate的SWISSPROT:A0A142KAG2的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:126是来自串珠样小单孢菌(Micromonospora rosaria)的SWISSPROT:A0A136PN50的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:127是来自Tsukamurella pseudospumae的SWISSPROT:A0A138A7X6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:128是来自串珠样小单孢菌的SWISSPROT:A0A136PTZ6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:129是来自黑麦草腥黑穗病菌(Tilletia walkeri)的SWISSPROT:A0A177U5Z0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:130是来自小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa)的SWISSPROT:A0A177VGU0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:131是来自厚垣孢普可尼亚菌170的SWISSPROT:A0A179G202的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:132是来自厚垣孢普可尼亚菌170的SWISSPROT:A0A179G1N9的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:133是来自厚垣孢普可尼亚菌170的SWISSPROT:A0A179FEB3的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:134是来自淡紫紫孢菌的SWISSPROT:A0A179HTK7的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:135是来自Paraphaeosphaeria sporulosa的SWISSPROT:A0A177C655的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:136是来自布氏虫草RCEF 3172的SWISSPROT:A0A167GE76的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:137是来自戈登菌属噬菌体Utz的SWISSPROT:A0A160DID3的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:138是来自嗜烟碱节杆菌(Arthrobacter nicotinovorans)的SWISSPROT:A0A175J866的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:139是来自Mycobacterium conceptionense的SWISSPROT:A0A1A1X5E5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:140是来自那拉提瓦小单孢菌(Micromonospora narathiwatensis)的SWISSPROT:A0A1A8ZCI7的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:141是来自那拉提瓦小单孢菌的SWISSPROT:A0A1A8Z6H4的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:142是来自Micromonospora auratinigra的SWISSPROT:A0A1A8Z6S5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:143是来自分枝杆菌属物种E1747的SWISSPROT:A0A1A2MHG1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:144是来自Micromonospora sediminicola的SWISSPROT:A0A1A9BD29的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:145是来自微杆菌属物种H83的SWISSPROT:A0A196L8B1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:146是来自马桑内酯小单孢菌(Micromonospora coriariae)的SWISSPROT:A0A1C4X8A3的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:147是来自柠檬色小单孢菌(Micromonospora citrea)的SWISSPROT:A0A1C6U2J5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:148是来自Micromonospora peucetia的SWISSPROT:A0A1C6V2H5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:149是来自杨浦小单孢菌(Micromonospora yangpuensis)的SWISSPROT:A0A1C6VFJ6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:150是来自根际小单孢菌(Micromonospora rhizosphaerae)的SWISSPROT:A0A1C6S481的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:151是来自棘橙小单孢菌(Micromonospora echinaurantiaca)的SWISSPROT:A0A1C5K5N0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:152是来自肌醇小单孢菌(Micromonospora inositola)的SWISSPROT:A0A1C5K0N2的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:153是来自肌醇小单孢菌的SWISSPROT:A0A1C5JUR0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:154是来自Micromonospora coxensis的SWISSPROT:A0A1C5JX99的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:155是来自Micromonospora mirobrigensis的SWISSPROT:A0A1C4ZAM5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:156是来自Micromonospora viridifaciens的SWISSPROT:A0A1C4Z5B4的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:157是海口小单孢菌(Micromonospora haikouensis)的SWISSPROT:A0A1C4YQ99的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:158是来自Micromonospora peucetia的SWISSPROT:A0A1C6W5T7的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:159是来自柠檬色小单孢菌的SWISSPROT:A0A1C6W1B9的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:160是来自Micromonospora saelicesensis的SWISSPROT:A0A1C5A7S5的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:161是来自棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora)的SWISSPROT:A0A1C5A2Q7的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:162是来自产紫色小单孢菌(Micromonospora purpureochromogenes)的SWISSPROT:A0A1C4ZJ35的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:163是来自棘暗小单孢菌(Micromonospora echinofusca)的SWISSPROT:A0A1C5G758的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:164是来自棘橙小单孢菌的SWISSPROT:A0A1C5HSB2的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:165是来自柠檬色小单孢菌的SWISSPROT:A0A1C6TPW2的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:166是来自棘橙小单孢菌的SWISSPROT:A0A1C5IVI4的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:167是来自苍白小单孢菌(Micromonospora pallida)的SWISSPROT:A0A1C6SEC0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:168是来自根际小单孢菌的SWISSPROT:A0A1C6SF84的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:169是来自苍白小单孢菌的SWISSPROT:A0A1C6SQT8的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:170是来自甲米小单孢菌(Micromonospora krabiensis)的SWISSPROT:A0A1C3N2H1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:171是来自甲米小单孢菌的SWISSPROT:A0A1C3N0X1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:172是来自分枝杆菌噬菌体Tonenili的SWISSPROT:A0A1C9EHM2的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:173是来自分枝杆菌噬菌体Tonenili的SWISSPROT:A0A1C9EHF6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:174是来自假诺卡氏菌属物种(Pseudonocardia sp)SCN 72-86的SWISSPROT:A0A1E4IB54的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:175是来自多疣微杆菌(Microbacterium pygmaeum)的SWISSPROT:A0A1G8AK84的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:176是来自假诺卡氏菌属物种SCN 73-27的SWISSPROT:A0A1E4NTZ4的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:177是来自分枝杆菌噬菌体Lukilu的SWISSPROT:A0A1J0MA43的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:178是来自Micromonospora avicenniae的SWISSPROT:A0A1N6R3C0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:179是来自脓肿分枝杆菌脓肿亚种(Mycobacterium abscessus subspabscessus)的SWISSPROT:A0A1N0VNN7的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:180是来自脓肿分枝杆菌脓肿亚种的SWISSPROT:A0A1N4DHL3的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:181是来自脓肿分枝杆菌脓肿亚种的SWISSPROT:A0A1N4RVY0的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:182是来自Micromonospora avicenniae的SWISSPROT:A0A1N6X5P6的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:183是来自脓肿分枝杆菌脓肿亚种的SWISSPROT:A0A1N2VK68的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:184是来自脓肿分枝杆菌脓肿亚种的SWISSPROT:A0A1N1GK82的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:185是来自脓肿分枝杆菌脓肿亚种的SWISSPROT:A0A1N1EP78的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:186是来自脓肿分枝杆菌脓肿亚种的SWISSPROT:A0A1N1G9F3的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:187是来自假诺卡氏菌属物种Ae717_Ps2的SWISSPROT:A0A1Q8LJS1的LAD结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:188是来自柄孢霉(Podospora anserina)的SWISSPROT:B2ASY2的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:189是来自产黄青霉(Penicillium chrysogenum)的SWISSPROT:B6GZX8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:190是来自赤球丛赤壳菌(Nectria haematococca)的SWISSPROT:C7ZQ22的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:191是来自蝗绿僵菌的SWISSPROT:E9DSA6的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:192是来自罗伯茨绿僵菌的SWISSPROT:E9F1Z9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:193是来自罗伯茨绿僵菌的SWISSPROT:E9FC42的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:194是来自尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)的SWISSPROT:F9F2K5的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:195是来自尖孢镰孢菌的SWISSPROT:F9GF09的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:196是来自土生梭孢壳霉的SWISSPROT:G2QV10的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:197是来自土生梭孢壳霉的SWISSPROT:G2QV26的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:198是来自阿氏丝孢酵母阿氏变种(Trichosporon asahiivar.Asahii)的SWISSPROT:J5TH48的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:199是来自阿氏丝孢酵母阿氏变种的SWISSPROT:J4UH35的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:200是来自尖孢镰孢菌番茄专化型(Fusarium oxysporumf.sp.Lycopersici)的SWISSPROT:J9NQ28的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:201是来自尖孢镰孢菌番茄专化型的SWISSPROT:J9NQW0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:202是来自阿氏丝孢酵母阿氏变种的SWISSPROT:K1VMN5的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:203是来自阿氏丝孢酵母阿氏变种的SWISSPROT:K1WL46的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:204是来自尖孢镰孢菌甜瓜专化型(Fusarium oxysporumf.sp.Melonis)的SWISSPROT:W9Z045的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:205是来自尖孢镰孢菌甜瓜专化型的SWISSPROT:X0A5V9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:206是来自尖孢镰孢菌古巴专化型(Fusarium oxysporumf.sp.Cubense)的SWISSPROT:N1S551的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:207是来自尖孢镰孢菌古巴专化型的SWISSPROT:N4UD22的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:208是来自尖孢镰孢菌古巴专化型的SWISSPROT:N4UT47的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:209是来自尖孢镰孢菌的SWISSPROT:W9KWW4的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:210是来自尖孢镰孢菌枯萎病专化型(Fusarium oxysporumf.sp.Vasinfectum)的SWISSPROT:X0MM97的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:211是来自串珠状赤霉(Gibberella moniliformis)的SWISSPROT:W7N5Q6的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:212是来自尖孢镰孢菌萝卜专化型(Fusarium oxysporumf.sp.Raphani)的SWISSPROT:X0BE07的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:213是来自尖孢镰孢菌的SWISSPROT:X0BII8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:214是来自尖孢镰孢菌豌豆专化型(Fusarium oxysporum f.sp.Pisi)的SWISSPROT:W9NW59的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:215是来自尖孢镰孢菌豌豆专化型的SWISSPROT:W9NXR4的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:216是来自草酸青霉菌的SWISSPROT:S7ZNE7的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:217是来自草酸青霉菌的SWISSPROT:S7Z5Z6的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:218是来自尖孢镰孢菌番茄专化型的SWISSPROT:W9LDD0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:219是来自尖孢镰孢菌的SWISSPROT:W9HEM8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:220是来自尖孢镰孢菌的SWISSPROT:W9JDH4的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:221是来自藤仓赤霉菌(Gibberella fujikuroi)的SWISSPROT:S0EPI6的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:222是来自娄地青霉的SWISSPROT:W6QNL2的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:223是来自烧土火丝菌(Pyronema omphalodes)的SWISSPROT:U4LJD9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:224是来自烧土火丝菌的SWISSPROT:U4LG64的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:225是来自高大假裸囊菌(Pseudogymnoascus pannorum)的SWISSPROT:A0A094AK50的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:226是来自尖孢镰孢菌的SWISSPROT:W9JIH2的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:227是来自尖孢镰孢菌番茄根专化型(Fusarium oxysporumf.sp.radicis-lycopersici)的SWISSPROT:X0FW82的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:228是来自产黄支顶孢菌的SWISSPROT:A0A086TBY7的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:229是来自产黄支顶孢菌的SWISSPROT:A0A086T755的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:230是来自产黄支顶孢菌的SWISSPROT:A0A086T4C8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:231是来自金龟子绿僵菌的SWISSPROT:A0A086NNR4的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:232是来自金龟子绿僵菌的SWISSPROT:A0A086NFK5的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:233是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094FY19的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:234是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094G1N0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:235是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094GEA0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:236是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094GJR5的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:237是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094G660的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:238是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A093YBN4的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:239是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094FSZ5的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:240是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094FBW1的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:241是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094H0G2的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:242是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094H7M1的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:243是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A093Y8W3的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:244是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094GYN9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:245是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A093XAD4的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:246是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094H7J6的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:247是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094E0I1的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:248是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094CC50的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:249是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094II95的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:250是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094IAA0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:251是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094IBC0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:252是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094E946的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:253是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094A3A0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:254是来自棒曲霉的SWISSPROT:A1C4L9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:255是来自棒曲霉的SWISSPROT:A1CBV9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:256是来自费希新萨托菌(Neosartorya fischeri)的SWISSPROT:A1DA80的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:257是来自费希新萨托菌的SWISSPROT:A1DBW2的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:258是来自费希新萨托菌的SWISSPROT:A1DDF2的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:259是来自土曲霉(Aspergillus terreus)的SWISSPROT:Q0CED1的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:260是来自土曲霉的SWISSPROT:Q0CED2的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:261是来自土曲霉的SWISSPROT:Q0CV85的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:262是来自球毛壳菌(Chaetomium globosum)的SWISSPROT:Q2GND8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:263是来自球毛壳菌的SWISSPROT:Q2GND9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:264是来自球毛壳菌的SWISSPROT:Q2H6W7的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:265是来自烟新萨托菌(Neosartorya fumigata)的SWISSPROT:Q4WAY2的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:266是来自烟新萨托菌的SWISSPROT:Q4WBR4的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:267是来自烟新萨托菌的SWISSPROT:Q4WVY3的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:268是来自产黄青霉的SWISSPROT:B6H9X5的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:269是来自产黄青霉的SWISSPROT:B6HR38的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:270是来自赤球丛赤壳菌的SWISSPROT:C7Z8W0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:271是来自赤球丛赤壳菌的SWISSPROT:C7ZQ20的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:272是来自红褐肉座菌(Hypocrea jecorina)的SWISSPROT:G0RP87的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:273是来自土生梭孢壳霉的SWISSPROT:G2RG69的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:274是来自异宗梭孢壳菌(Thielavia heterothallica)的SWISSPROT:G2QNE9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:275是来自红褐肉座菌的SWISSPROT:G0RM22的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:276是来自嗜热毛壳菌嗜热变种(Chaetomium thermophilumvar.Thermophilum)的SWISSPROT:G0SG36的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:277是来自嗜热毛壳菌嗜热变种的SWISSPROT:G0RZV3的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:278是来自尖孢镰孢菌番茄专化型的SWISSPROT:J9NQV9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:279是来自异宗梭孢壳菌的SWISSPROT:G2QD02的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:280是来自异宗梭孢壳菌的SWISSPROT:G2QNF0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:281是来自绿色肉座菌(Hypocrea virens)的SWISSPROT:G9MHR1的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:282是来自罗伯茨绿僵菌的SWISSPROT:E9ELX9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:283是来自尖孢镰孢菌的SWISSPROT:F9F2K4的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:284是来自嗜热毛壳菌嗜热变种的SWISSPROT:G0RZV2的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:285是来自土生梭孢壳霉的SWISSPROT:G2RG70的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:286是来自尖孢镰孢菌甜瓜专化型的SWISSPROT:W9Z992的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:287是来自尖孢镰孢菌甜瓜专化型的SWISSPROT:W9ZZW9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:288是来自尖孢镰孢菌甜瓜专化型的SWISSPROT:W9ZAE8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:289是来自尖孢镰孢菌古巴专化型的SWISSPROT:N1RWA4的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:290是来自尖孢镰孢菌古巴专化型的SWISSPROT:N4UKT7的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:291是来自尖孢镰孢菌的SWISSPROT:W9KX02的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:292是来自尖孢镰孢菌萝卜专化型的SWISSPROT:X0B4J3的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:293是来自娄地青霉的SWISSPROT:W6QE02的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:294是来自娄地青霉的SWISSPROT:W6R4X8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:295是来自里氏木霉(Trichoderma reesei)的SWISSPROT:A0A024S9B8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:296是来自金龟子绿僵菌的SWISSPROT:A0A086NN36的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:297是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094GA03的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:298是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094C8U1的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:299是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A093Z6Z8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:300是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094IML3的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:301是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094GY79的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:302是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A093XPZ7的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:303是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A093XAS9的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:304是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094I8J6的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:305是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094FTL0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:306是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094AT39的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:307是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A093XSP5的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:308是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094BAE6的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:309是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094IE25的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:310是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094HNM8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:311是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094ETJ5的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:312是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094EPJ7的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:313是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094E9W0的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:314是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094BWD6的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:315是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A094BTS1的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:316是来自高大假裸囊菌的SWISSPROT:A0A093ZTZ8的溶菌酶增强结构域的氨基酸序列。
SEQ ID NO:317是保守基序I AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES。
SEQ ID NO:318是保守基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP。
SEQ ID NO:319是保守基序III[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN]。
SEQ ID NO:320是质粒pDAu770的合成DNA构建体。
SEQ ID NO:321是正向引物KKSC0972-F。
SEQ ID NO:322是反向引物KKSC0972-R。
SEQ ID NO:323是正向引物F1。
SEQ ID NO:324是反向引物F1。
SEQ ID NO:325是正向引物F3。
SEQ ID NO:326是反向引物F3。
SEQ ID NO:327,正向结合引物。
SEQ ID NO:328,反向结合引物。
SEQ ID NO:329是来自Ovatospora brasiliensis的截短LYA多肽的氨基酸序列。
附图说明
图1代表质粒pDAu770上包含的不同DNA特征的图谱。amy2基因座侧翼区(3’和5’)由白色框表示。对于pyrG、tef1和tpi基因的启动子区域,用绿色框表示启动子区。紫色框表示选择盒(针对氨苄青霉素抗性的ampR和针对乙酰胺选择的amdS)。对于niaD和amg基因的终止子区,用蓝色框表示终止子区。FLPase的编码区(sFLP)和pyrG基因的第一个外显子以橙色表示。pyrG内含子的5’区以灰色表示。质粒的复制起点由ORI表示。
图2是通过转化DNA(质粒pDAu724或衍生物或OverlapExtension PCR产物)转化宿主菌株DAu785的示意图。
上图代表amy2基因座,其中整合了由FRT-F和FRT-F3构成的FLP着陆垫、FLPase识别位点、以及amdS(乙酰胺)选择标记和FLPase表达盒。已经使用了分裂的PyrG标记,并且在amy2基因座处插入了pyrG标记的5'端。
中间图代表转化DNA,特别是通过FLPase介导的位点特异性重组而在FLP着陆垫处整合的区域。质粒或PCR产物必须含有FRT-F和F3位点以及pyrG标记的剩余3'部分。
下图代表在FRT位点之间转化DNA的位点特异性整合后所得的amy2基因座。已经将amdS和FLP盒与GOI表达盒和重构完整功能选择标记的pyrG标记的3’部分进行了交换。
定义
动物:术语“动物”是指除人以外的任何动物。动物的实例是单胃动物,包括但不限于猪(包括但不限于仔猪、成长猪、和母猪);家禽,例如火鸡、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子(包括乳鸽)和鸡(包括但不限于肉用仔鸡(本文称为肉鸡)、小鸡、下蛋鸡(本文称为蛋鸡));马(包括但不限于热血马、冷血马和温血马),甲壳类动物(包括但不限于河虾和对虾),以及鱼(包括但不限于琥珀鱼、巨滑舌鱼、魮鱼、鲈鱼、蓝鱼、菖鲉(bocachico)、鲤科鱼、鲶鱼、卡叉马鱼(cachama)、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉鱼、遮目鱼、嘉鱼、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、瓜波特鱼(guapote)、大比目鱼、爪哇鱼(java)、野鲮属鱼、莱鱼(lai)、泥鳅、鲭鱼、牛奶鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕高鱼(paco)、珍珠斑点鱼(pearlspot)、佩杰瑞鱼(pejerrey)、河鲈鱼、狗鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、鲑鱼、虾米鱼(sampa)、加拿大鰤鲈、黑鲈、海鲤、发光鱼(shiner)、睡鲨(sleeper)、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、比目鱼、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼(sweetfish)、丁鲷、特罗尔鱼(terror)、罗非鱼、鳟鱼、鲔鱼、多宝鱼、白鳟鱼、白斑鱼和白鱼)。
动物饲料:术语“动物饲料”是指适合于或旨在用于由单胃动物摄入的任何化合物、制剂或混合物。用于单胃动物的动物饲料通常包含浓缩物以及维生素、矿物质、酶、直接饲喂微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(例如在预混物中)。
抗微生物活性:本文将术语“抗微生物活性”定义为一种杀死微生物或抑制微生物的生长的活性,这些微生物是例如藻类、古细菌、细菌、真菌和/或原生动物。抗微生物活性可以是例如意在杀死细菌的杀菌的或意在阻止细菌的生长的抑菌的。抗微生物活性可以包括催化在肽聚糖中的N-乙酰胞壁酸与N-乙酰-D-葡糖胺残基之间以及在壳糊精中的N-乙酰-D-葡糖胺残基之间的1,4-β-键的水解。抗微生物活性还可以包括LYS多肽结合在微生物的表面并抑制其生长。抗微生物作用还可以包括通过抑制或减少细菌毒素并且通过噬菌素作用使用本发明的LYS多肽作为免疫刺激剂激活细菌自溶素。
体增重:术语“体增重”意指在给定时间段期间动物的活重的增加,例如从第1天到第21天的体重增加。
cDNA:术语“cDNA”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体,其要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工,然后呈现为成熟的剪接的mRNA。
编码序列:术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界通常由可读框确定,该可读框以起始密码子(例如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(例如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可为基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
浓缩物:术语“浓缩物”意指具有高蛋白和能量浓度的饲料,例如鱼粉、糖蜜、低聚糖、高粱、种子和谷物(例如来自玉米、燕麦、黑麦、大麦、小麦的整体或由破碎、碾磨等制备的)、油籽滤饼(例如来自棉籽、红花、向日葵、大豆(例如豆粕)、油菜籽/卡诺拉(canola)、花生或落花生)、棕榈仁饼、酵母衍生材料和酒糟(例如湿酒糟(WDS)和具有可溶物的干酒糟(DDGS))。
控制序列:术语“控制序列”意指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即,来自相同基因)或外源的(即,来自不同基因),或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。最少,控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制位点的目的,这些控制序列可以提供有多个接头。
欧洲生产效能因子(EPEF):“欧洲生产效能因子(European Production EfficacyFactor)”是一种比较动物性能的方法。这种单一数字有助于比较农场内部和农场之间的性能,并可用于评估环境、气候和管理变量。EPEF计算为[(存活率(%)×活体重(kg))/(耗竭时的年龄(天)×FCR)]×100,其中存活率是出栏时存活的动物的百分比,活体重是出栏时动物的平均体重,耗竭年龄是出栏时动物的年龄,并且FCR是出栏时的饲料转化率。
表达:术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤,包括但不限于:转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体:术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子,其包含编码多肽的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
饲料转化率(FCR):FCR是动物将饲料质量转换为所需输出增加的效率的量度。饲养肉用动物-例如猪、家禽和鱼-输出是动物获得的质量。具体而言,FCR是遍及指定的时间段内,按照饲料摄入量除以增重计算的。FCR的改善意指FCR值的降低。FCR改善2%意为FCR降低2%。
饲料效率:术语“饲料效率”意指当动物在一段时间内被任意喂养或喂养指定量的食物时每单位饲料的增重的量。“增加的饲料效率”意味着根据本发明的饲料添加剂组合物在饲料中的使用导致与不用所存在的所述饲料添加剂组合物喂养的动物相比,每单位饲料摄入的增加的增重。
草料:如本文定义的术语“草料”还包括粗粮。草料是新鲜的植物物料,例如来自草料植物(禾草)和其他草料植物(海草、发芽谷物和豆类植物)或其任何组合的干草和青贮。草料植物的实例是紫花苜蓿(Alfalfa、lucerne)、百脉根、芸苔属植物(例如,羽衣甘蓝、油菜籽(卡诺拉、芜菁甘蓝(瑞典芜菁)、萝卜)、三叶草(例如,杂三叶、红三叶、地三叶、白三叶)、禾草(例如,百慕大草、雀麦、伪燕麦草、羊茅、石南草(heath grass)、草地早熟禾、鸭茅(orchard grass)、黑麦草、梯牧草(Timothy-grass))、玉米(玉蜀黍)、小米、大麦、燕麦、黑麦、高粱、大豆和小麦和蔬菜(例如甜菜)。草料进一步包括来自谷物生产的作物残余物(例如玉米秸秆;来自小麦、大麦、燕麦、黑麦和其他谷物的秸秆);来自蔬菜像甜菜缨(beettop)的残余物;来自油籽生产像来自大豆、油菜籽和其他豆科作物的茎和叶的残余物;以及来自用于动物或人消耗的谷物精制或来自燃料生产或其他行业的部分。
片段:术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基端缺失的一个或多个(例如,若干个)氨基酸的LYS多肽;其中该片段具有溶菌酶活性。
在一方面,该片段包含成熟多肽长度的至少90%,例如SEQ ID NO:2的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少273个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少273个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少207个氨基酸、SEQID NO:18的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少208个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少208个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少273个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少273个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少204个氨基酸或SEQ ID NO:45的至少204个氨基酸。
在一方面,该片段包含成熟多肽长度的至少92%,例如SEQ ID NO:2的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少279个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少279个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少211个氨基酸、SEQID NO:18的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少213个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少213个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少279个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少279个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少208个氨基酸或SEQ ID NO:45的至少208个氨基酸。
在一方面,该片段包含成熟多肽长度的至少94%,例如SEQ ID NO:2的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少285个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少285个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少216个氨基酸、SEQID NO:18的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少218个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少218个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少285个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少285个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少213个氨基酸或SEQ ID NO:45的至少213个氨基酸。
在一方面,该片段包含成熟多肽长度的至少96%,例如SEQ ID NO:2的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少291个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少291个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少218个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少218个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少220个氨基酸、SEQID NO:18的至少220个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少220个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少220个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少222个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少222个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少218个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少218个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少218个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少218个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少216个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少291个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少291个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少217个氨基酸或SEQ ID NO:45的至少217个氨基酸。
在一方面,该片段包含成熟多肽长度的至少98%,例如SEQ ID NO:2的至少221个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少221个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少221个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少221个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少218个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少218个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少225个氨基酸、SEQID NO:18的至少225个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少225个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少225个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少227个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少227个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少221个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少221个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少220个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少220个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少220个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少220个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少222个氨基酸或SEQ ID NO:45的至少222个氨基酸。
在一方面,该片段包含成熟多肽长度的至少99%,例如SEQ ID NO:2的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少220个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少220个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少300个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少300个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少225个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少225个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少227个氨基酸、SEQID NO:18的至少227个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少227个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少227个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少229个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少229个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少225个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少225个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少225个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少225个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少223个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少222个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少222个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少222个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少222个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少300个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少300个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少224个氨基酸或SEQ ID NO:45的至少224个氨基酸。
融合多肽:术语“融合多肽”是其中一种多肽在本发明多肽的N-末端或C-末端融合的多肽。通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合于本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的,且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框,而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽,其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583;Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时,该位点被切割,从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点:Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576;Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251;Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493;Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503;和Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381;Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512;Collins-Racie等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:982-987;Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质:结构、功能以及遗传学]6:240-248;以及Stevens,2003,Drug Discovery World[药物发现世界]4:35-48。
宿主细胞:术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。
杂合多肽:术语“杂合多肽”是指包含来自两个或更多个多肽的结构域的多肽,例如,来自一个多肽的结合结构域和来自另一个多肽的催化结构域。这些结构域可以在N-末端或C-末端融合。
分离的:术语“分离的”是指以在自然界中不存在的形式的物质或处于在自然界中不存在该物质的环境中的该物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质,(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质,所述物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除;(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质;或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分,增加物质的量而修饰的任何物质(例如,宿主细胞中的重组产生;编码该物质的基因的多个拷贝;以及使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。
溶菌酶活性:术语“溶菌酶活性”意指肽聚糖中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰-D-葡糖胺残基之间的1,4-β-键的水解,导致溶菌作用。溶菌酶属于EC 3.2.1.17酶类。溶菌酶活性通常通过溶菌酶对滕黄微球菌(Micrococcus luteus)ATCC 4698的裂解作用来测量。在适当的实验条件下,这些变化与培养基中溶菌酶的量成比例(c.f.联合国粮食及农业组织联合食品添加剂规格综合纲要(the Combined Compendium of Food AdditiveSpecifications of the Food and Agriculture Organisation of the UN)的INS 1105(www.fao.org))。出于本发明的目的,根据实例1中所述的还原末端测定法(“使用还原末端测定法测定溶菌酶活性”)来测定溶菌酶活性。如果该多肽对滕黄微球菌ATCC 4698具有活性,则该多肽具有溶菌酶活性。
在一方面,本发明的多肽具有SEQ ID NO:12的至少50%,例如优选至少60%、优选至少70%、更优选至少80%、更优选至少90%、甚至更优选至少95%、或最优选至少100%的溶菌酶活性,优选其中如实例1所述测定溶菌酶活性。在一方面,本发明的多肽具有SEQ IDNO:12的至少50%,例如优选至少60%、优选至少70%、更优选至少80%、更优选至少90%、甚至更优选至少95%、或最优选至少100%的溶菌酶活性,其中如下测定溶菌酶活性:将LYS多肽(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mM K2HPO4、0.01%TritonX-100、pH 5.0)中的50μL0.7μg/mL LYS多肽)与溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)溶液(在milli-Q水中的450μL 1%冻干的溶壁微球菌,ATCC号4698)混合,并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟;将样品离心(4000g,5分钟);将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟;添加NaOH(50μL,3.5M)并将150μL的样品添加到在酒石酸K-Na/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里;将该混合物在95℃下孵育10分钟;并且在405nm处测量光密度。
成熟多肽:术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰(例如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等)之后处于其最终形式的多肽。
在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至226,并且SEQ ID NO:2的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:3的氨基酸1至226。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:5的氨基酸1至226,并且SEQ ID NO:5的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:6的氨基酸1至226。在一方面,该成熟多肽是SEQ IDNO:8的氨基酸1至223,并且SEQ ID NO:8的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:9的氨基酸1至223。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:11的氨基酸1至304,并且SEQ ID NO:11的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:12的氨基酸1至304。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:14的氨基酸1至228,并且SEQ IDNO:14的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:15的氨基酸1至228。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:17的氨基酸1至230,并且SEQ ID NO:17的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:18的氨基酸1至230。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:20的氨基酸1至230,并且SEQ ID NO:20的氨基酸-21至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:21的氨基酸1至230。在一方面,该成熟多肽是SEQ IDNO:23的氨基酸1至232,并且SEQ ID NO:23的氨基酸-22至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:24的氨基酸1至232。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:26的氨基酸1至228,并且SEQ ID NO:26的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:27的氨基酸1至228。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:29的氨基酸1至228,并且SEQ IDNO:29的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:30的氨基酸1至228。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:32的氨基酸1至226,并且SEQ ID NO:32的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:33的氨基酸1至226。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:35的氨基酸1至225,并且SEQ ID NO:35的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:36的氨基酸1至225。在一方面,该成熟多肽是SEQ IDNO:38的氨基酸1至225,并且SEQ ID NO:38的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:39的氨基酸1至225。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:41的氨基酸1至304,并且SEQ ID NO:41的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:42的氨基酸1至304。在一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:44的氨基酸1至227,并且SEQ IDNO:44的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面,该成熟多肽是SEQ ID NO:45的氨基酸1至227。
在本领域中已知的是,宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或多种不同的成熟多肽(即,具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。在本领域中还已知的是,不同的宿主细胞以不同的方式加工多肽,且因此表达多核苷酸的一种宿主细胞当与表达相同多核苷酸的另一种宿主细胞相比时可产生不同的成熟多肽(例如,具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。
成熟多肽编码序列:术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有溶菌酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
核酸构建体:术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子,该核酸分子是从天然存在的基因中分离的,或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成包含核酸的区段,或是合成的,该核酸分子包含一个或多个控制序列。
获得自或可获得自:术语“获得自或可获得自”是指多肽可以在来自特定分类等级的生物中发现。在一个实施例中,该多肽获得自或可获得自真菌界,其中术语界是分类等级。在一个优选的实施例中,该多肽获得自或可获得自子囊菌门(Ascomycota),其中术语门是分类等级。在另一个优选的实施例中,该多肽获得自或可获得自盘菌亚门(Pezizomycotina),其中术语亚门是分类等级。
如果多肽的分类等级未知,则它可以容易地由本领域普通技术人员通过进行多肽的BLASTP检索(使用例如国家生物技术信息中心(the National Center forBiotechnology Information,NCIB)网站http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)并将其与最接近的同系物进行比较来确定。作为已知多肽的片段的未知多肽被认为是属于相同的分类物种。包括在多达10个位置中的取代、缺失和/或插入的未知天然多肽或人工变体被认为来自与已知多肽相同的分类物种。
可操作地连接:术语“可操作地连接”意指如下构型,在该构型中,控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处,使得该控制序列引导该编码序列的表达。
粗粮:术语“粗粮”意指具有高水平纤维的干植物物料,例如来自种子和谷物以及作物残余物(例如秸秆、干椰肉(copra)、稻草、谷壳、甜菜废料)的纤维、麸、苞叶。
序列同一性:两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。
出于本发明的目的,使用尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性,该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件(The European Molecular Biology Open Software Suite),Rice等人,2000,TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔(Needle)程序所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。Needle标注的“最长同一性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比同一性,并且如下计算:
(同一的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的,使用尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核苷酸序列之间的序列同一性,该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件,Rice等人,2000,同上)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。Needle标注的“最长同一性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比同一性,并且如下计算:
(同一的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
子序列:术语“子序列”意指具有从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端缺失的一个或多个(例如,若干个)核苷酸的多核苷酸;其中子序列编码具有溶菌酶活性的片段。
基本上纯的多肽:术语“基本上纯的多肽”意指含有按重量计至多10%、至多8%、至多6%、至多5%、至多4%、至多3%、至多2%、至多1%和至多0.5%的与其天然或重组地相关的其他多肽材料的制剂。优选地,该多肽按存在于制剂中的总多肽材料的重量计是至少92%纯的,例如至少94%纯的、至少95%纯的、至少96%纯的、至少97%纯的、至少98%纯的、至少99%纯的、至少99.5%纯的以及100%纯的。本发明的多肽优选处于基本上纯的形式。这可以例如通过熟知的重组方法或通过经典纯化方法制备该多肽来实现。
变体:术语“变体”意指包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个(若干个)氨基酸残基的改变(即,取代、插入、和/或缺失)的具有溶菌酶活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占用某一位置的氨基酸;缺失意指去除占据某一位置的氨基酸;并且插入意指邻近于并且紧跟着占据该位置的氨基酸之后添加1、2、或3个氨基酸。
在一方面,根据本发明的变体可以包含从1至5;从1至10;从1至15;从1至20;从1至25;从1至30;从1至35;从1至40;从1至45;或1-50,即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个改变。
在一方面,本发明的变体具有SEQ ID NO:12的至少50%,例如优选至少60%、优选至少70%、更优选至少80%、更优选至少90%、甚至更优选至少95%、或最优选至少100%的溶菌酶活性,优选其中如实例1所述测定溶菌酶活性。在一方面,本发明的变体具有SEQ IDNO:12的至少50%,例如优选至少60%、优选至少70%、更优选至少80%、更优选至少90%、甚至更优选至少95%、或最优选至少100%的溶菌酶活性,其中如下测定溶菌酶活性:将LYS多肽(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mM K2HPO4、0.01%TritonX-100、pH 5.0)中的50μL0.7μg/mL LYS多肽)与溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中的450μL 1%冻干的溶壁微球菌,ATCC号4698)混合,并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟;将样品离心(4000g,5分钟);将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟;添加NaOH(50μL,3.5M)并将150μL的样品添加到在酒石酸K-Na/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里;将该混合物在95℃下孵育10分钟;并且在405nm处测量光密度。
在一方面,根据本发明的变体可以包含从1至5;从1至10;从1至15;从1至20;从1至25;从1至30;从1至35;从1至40;从1至45;或1-50,即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个改变,并且具有SEQ ID NO:12的至少50%,例如优选至少60%、优选至少70%、更优选至少80%、更优选至少90%、甚至更优选至少95%、或最优选至少100%的溶菌酶活性,优选其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
命名法
出于本发明的目的,命名法[E/Q]是指在该位置的氨基酸可以是谷氨酸(Glu,E)或谷氨酰胺(Gln,Q)。同样,命名[V/G/A/I]意指在此位置的氨基酸可以是缬氨酸(Val,V)、甘氨酸(Gly,G)、丙氨酸(Ala,A)或异亮氨酸(Ile,I),对于如本文所述的其他组合,依次类推。除非进一步另有限制,否则氨基酸X被这样定义,使得它可以是20种天然氨基酸中的任一种。
具体实施方式
诸位发明人发现了一类具有溶菌酶活性的全新多肽。所述多肽在结构上与已知的溶菌酶相当不同。如下面的序列同一性矩阵所示,本发明的多肽均具有与WO 2013/076259中披露的现有技术序列相比小于45%的序列同一性,这表明这些新颖多肽可具有与已知溶菌酶不同的折叠模式。
本发明的多肽表现出典型的溶菌酶活性,例如在针对溶壁微球菌的传统OD下降测定法(参见实例14)或使用溶壁微球菌作为底物的还原末端测定法(参见实例13)中的活性。
具有溶菌酶活性的本发明的多肽在本文中被称为LYS多肽,并且包含一个或多个LAD(溶菌酶活性结构域)催化结构域和任选的一个或多个溶菌酶增强结构域(LED)。
包含具有溶菌酶活性的多肽的组合物
在第一方面,本发明涉及一种组合物,该组合物包含至少0.01mg LYS多肽/千克组合物,其中该多肽(a)具有溶菌酶活性,并且(b)包含一个或多个LAD催化结构域;其中,当使用SEQ ID NO:46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型(HMM)查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为180,并且其中通过利用HMM确定LAD催化结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询。
在一个实施例中,该多肽进一步包含一个或多个溶菌酶增强结构域(LED)。因此,本发明进一步涉及一种组合物,该组合物包含至少0.01mg LYS多肽/千克组合物,其中:
(a)该LYS多肽具有溶菌酶活性;
(b)该LYS多肽包含一个或多个LAD催化结构域;其中,当使用SEQ ID NO:46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型(HMM)查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为180,并且其中通过利用HMM确定LAD催化结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询;
(c)该多肽包含一个或多个LED结构域,其中当使用SEQ ID NO:188至316和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该LED的domT评分至少为100,并且其中使用hmmscan软件程序执行该查询。
如Durbin等人(Biological sequence analysis:probabilistic models ofproteins and nucleic acids[生物序列分析:蛋白质和核酸的概率模型],CambridgeUniversity Press[剑桥大学出版社],1998)和Krogh等人(1994J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]235:1501-1531)(均通过引用并入本文)所述的序型HMM背后的理论是基于蛋白质组比对中各氨基酸在各位置处出现的概率的蛋白质组的表征。
具体而言,序型HMM是多个序列比对或甚至单个序列的统计模型。它们捕获有关比对的各列的保守程度以及哪些残基是有可能的位置特异性信息。所有的序型方法或多或少都是多序列比对的共有性的统计描述。它们使用针对氨基酸或核苷酸(残基)的位置特异性评分,以及用于开放和延伸插入或缺失的位置特异性罚分。传统的成对比对(例如BLAST、FASTA或Smith/Waterman算法)使用与位置无关的评分参数。序型的这一特性捕获以下重要信息:多重比对中各个位置的保守程度以及空位和插入所允许的变化程度。
使用HMM的优点是HMM具有正规的概率基准。概率理论用于指导应如何设置所有评分参数。最重要的方面之一是HMM具有用于设置位置特异性空位和插入评分的一致理论。这些方法是一致的,因此具有高度的自动化性,可将数百种序型HMM应用于例如全基因组分析。蛋白质结构域模型数据库的一个实例是Pfam(Sonnhammer等人,1997,‘Acomprehensive database of protein families based on seed alignments[基于种子比对的蛋白质家族综合数据库]’,Proteins[蛋白质],28:405-420;Finn等人,2010,‘ThePfam protein families database[Pfam蛋白质家族数据库]’,Nucl.Acids Res.[核酸研究],38:D211-D222),其是Interpro蛋白质结构域标注系统的重要部分。Pfam的构建和使用与HMMER软件包紧密相关(参见https://en.wikipedia.org/wiki/HMMER)。
LAD催化结构域以以下方式定义。使用具有默认设置的软件程序MUSCLE v3.8.31将SEQ ID NO:46至187(即Uniprot条目的部分序列,如本文的‘序列表概述’部分中所解释的)进行比对。使用此比对,为LAD催化结构域建立了隐马尔可夫模型(HMM)。使用软件包HMMER 3.0(2010年3月)(http://hmmer.org/)中的软件程序’hmmbuild’构建HMM,并使用默认设置启用该软件。
如果domT评分至少为170,则使用软件包HMMER 3.0(2010年3月)(http://hmmer.org/)中的软件程序’hmmscan’,使用默认设置,将LAD催化结构域定义为与上述HMM匹配。在一个优选的实施例中,domT评分是至少175,优选至少180,更优选至少185,甚至更优选至少190,甚至更优选至少195,或最优选至少200。
实例10给出了根据上述方法使用SEQ ID NO:46至187产生的LAD催化结构域的HMM序型。可以将HMM序型复制到文本文件中,然后将其加载到软件程序’hmmscan’中,以便可以测试其他多肽以查看所述多肽是否包含一个或多个LAD催化结构域。
溶菌酶增强结构域(LED)以以下方式定义。使用具有默认设置的软件程序MUSCLEv3.8.31将SEQ ID NO:188至316(即Uniprot条目的部分序列,如本文的‘序列表概述’部分中所解释的)进行比对。使用此比对,为LED建立了隐马尔可夫模型(HMM)。使用软件包HMMER3.0(2010年3月)(http://hmmer.org/)中的软件程序’hmmbuild’构建HMM,并使用默认设置启用该软件。
如果domT评分至少为100,则使用软件包HMMER 3.0(2010年3月)(http://hmmer.org/)中的软件程序’hmmscan’,使用默认设置,将LED定义为与上述HMM匹配。在一个优选的实施例中,domT评分是至少103,优选至少106,更优选至少109,更优选至少112,更优选至少115,更优选至少118,甚至更优选至少121,或最优选至少124。
实例11给出了根据上述方法使用SEQ ID NO:188至316产生的LED的HMM序型。可以将HMM序型复制到文本文件中,然后将其加载到软件程序’hmmscan’中,以便可以测试其他多肽以查看所述多肽是否包含一个或多个LED。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少175,LED的domT评分为至少100。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少180,LED的domT评分为至少100。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少185,LED的domT评分为至少100。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少190,LED的domT评分为至少100。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少195,LED的domT评分为至少100。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少200,LED的domT评分为至少100。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少175,LED的domT评分为至少103。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少180,LED的domT评分为至少103。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少185,LED的domT评分为至少103。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少190,LED的domT评分为至少103。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少195,LED的domT评分为至少103。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少200,LED的domT评分为至少103。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少175,LED的domT评分为至少106。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少180,LED的domT评分为至少106。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少185,LED的domT评分为至少106。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少190,LED的domT评分为至少106。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少195,LED的domT评分为至少106。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少200,LED的domT评分为至少106。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少175,LED的domT评分为至少109。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少180,LED的domT评分为至少109。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少185,LED的domT评分为至少109。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少190,LED的domT评分为至少109。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少195,LED的domT评分为至少109。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少200,LED的domT评分为至少109。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少175,LED的domT评分为至少112。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少180,LED的domT评分为至少112。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少185,LED的domT评分为至少112。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少190,LED的domT评分为至少112。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少195,LED的domT评分为至少112。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少200,LED的domT评分为至少112。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少175,LED的domT评分为至少115。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少180,LED的domT评分为至少115。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少185,LED的domT评分为至少115。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少190,LED的domT评分为至少115。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少195,LED的domT评分为至少115。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少200,LED的domT评分为至少115。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少175,LED的domT评分为至少118。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少180,LED的domT评分为至少118。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少185,LED的domT评分为至少118。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少190,LED的domT评分为至少118。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少195,LED的domT评分为至少118。在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分为至少200,LED的domT评分为至少118。
在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
在第一方面的一个实施例中,本发明涉及一种组合物,该组合物包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽,其中将该多肽以至少0.01mg多肽/千克组合物给予,并且该多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(p)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQID NO:45,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(q)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;
(r)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;以及
(s)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽的片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90%。
在第一方面的一个实施例中,本发明涉及一种组合物,该组合物包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽,其中将该LYS多肽以至少0.01mg多肽/千克组合物给予,并且该LYS多肽包含选自由以下组成的组的LAD催化结构域:
(a)与SEQ ID NO:3的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的氨基酸81至220具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸161至304具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的氨基酸88至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的氨基酸87至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的氨基酸90至232具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的氨基酸83至222具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的氨基酸82至225具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸161至303具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;以及
(o)与SEQ ID NO:45的氨基酸85至227具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽。
在第一方面的一个实施例中,本发明涉及一种组合物,该组合物包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽,其中将该LYS多肽以至少0.01mg多肽/千克组合物给予,并且该LYS多肽包含选自由以下组成的组的LAD催化结构域:
(a)与SEQ ID NO:3的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的氨基酸81至220具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸161至304具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的氨基酸88至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的氨基酸87至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的氨基酸90至232具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的氨基酸83至222具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的氨基酸82至225具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸161至303具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;以及
(o)与SEQ ID NO:45的氨基酸85至227具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
并且其中该LYS多肽包含LED结构域且选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸1至72具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的氨基酸1至72具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸96至167具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;以及
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸96至168具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽。
在第一方面的任一部分的一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ IDNO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ IDNO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
在第一方面的任一部分的一个实施例中,该多肽是真菌来源的。在一个实施例中,该多肽获得自或可获得自分类学子囊菌门,优选分类学盘菌亚门。
在第一方面的任一部分的一个实施例中,该组合物包含至少0.01mg的多肽(酶蛋白)/千克组合物,例如至少0.02mg、0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g、50g、75g或100g/千克组合物。在一个实施例中,该组合物包含至多250g的多肽/千克组合物,例如至多150g、100g、50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg/千克组合物。在一个实施例中,该组合物包含在0.01mg和250g之间的多肽(酶蛋白质)/千克组合物,例如在0.02mg、0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g、50g、75g或100g/千克组合物和150g、100g、50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg/千克组合物之间,或其任何组合。
在第一方面的任一部分的一个实施例中,该组合物包含一种或多种配制剂(例如本文描述的那些),优选地选自以下列表的配制剂,该列表由以下组成:甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土、麦芽糊精、环糊精、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐和纤维素,优选地选自以下列表,该列表由以下组成:1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。
在第一方面的任一部分的一个实施例中,该组合物包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选地选自由以下组成的组:乙酰木聚糖酯酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、脂肪酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酶、果胶裂解酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在第一方面的任一部分的一个实施例中,该组合物包含一种或多种益生菌。该一种或多种益生菌优选选自由以下组成的组:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
包含具有溶菌酶活性的多肽的颗粒
在第二方面,本发明涉及包含LYS多肽的颗粒,其中该多肽(a)具有溶菌酶活性,并且(b)包含一个或多个LAD催化结构域;其中,当使用SEQ ID NO:46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型(HMM)查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为180,并且其中通过利用HMM确定LAD催化结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询。在一个实施例中,该颗粒包含核心粒子和一个或多个包衣。在一个优选的实施例中,该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。优选的配制品披露在下文的配制品部分中。
在一个实施例中,该多肽进一步包含一个或多个溶菌酶增强结构域(LED)。因此,本发明进一步涉及包含LYS多肽的颗粒,其中:
(a)该LYS多肽具有溶菌酶活性;
(b)该LYS多肽包含一个或多个LAD催化结构域,其中当使用SEQ ID NO:46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为170,并且其中通过利用HMM确定LAD催化结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询;
(c)该多肽包含一个或多个LED结构域,其中当使用SEQ ID NO:188至316和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该LED的domT评分至少为100,并且典型地其中通过利用HMM确定溶菌酶增强结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询。
在一个实施例中,该颗粒包含核心粒子和一个或多个包衣。在一个优选的实施例中,该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。优选的配制品披露在下文的配制品部分中。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分是至少175,优选至少180,更优选至少185,甚至更优选至少190,甚至更优选至少195,或最优选至少200。在一个实施例中,LED的domT评分是至少103,优选至少106,更优选至少109,更优选至少112,更优选至少115,更优选至少118,甚至更优选至少121,或最优选至少124。domT评分的优选组合如本发明的第一方面中所披露。
在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
在第二方面的一个实施例中,本发明涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽的颗粒,其中该LYS多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(p)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQID NO:45,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(q)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;
(r)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;以及
(s)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽的片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90%。
在一个实施例中,该颗粒包含核心粒子和一个或多个包衣。在一个优选的实施例中,该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。优选的配制品披露在下文的配制品部分中。
在第二方面的一个实施例中,本发明涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽的颗粒,其中该LYS多肽包含LAD催化结构域且选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的氨基酸81至220具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸161至304具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的氨基酸88至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的氨基酸87至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的氨基酸90至232具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的氨基酸83至222具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的氨基酸82至225具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸161至303具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;以及
(o)与SEQ ID NO:45的氨基酸85至227具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽。
在第二方面的一个实施例中,本发明涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽的颗粒,其中该LYS多肽包含LAD催化结构域且选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的氨基酸81至220具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸161至304具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的氨基酸88至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的氨基酸87至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的氨基酸90至232具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的氨基酸83至222具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的氨基酸82至225具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸161至303具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;以及
(o)与SEQ ID NO:45的氨基酸85至227具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
并且其中该LYS多肽包含LED结构域且选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸1至72具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的氨基酸1至72具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸96至167具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;以及
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸96至168具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽。
在一个实施例中,该颗粒包含核心粒子和一个或多个包衣。在一个优选的实施例中,该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。优选的配制品披露在下文的配制品部分中。
在第二方面的任一部分的一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ IDNO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ IDNO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
在第二方面的任一部分的一个实施例中,该多肽是真菌来源的。在一个实施例中,该多肽获得自或可获得自分类学子囊菌门,优选分类学盘菌亚门。
在第一方面的任一部分的一个实施例中,该组合物包含至少0.01mg的多肽(酶蛋白)/千克组合物,例如至少0.02mg、0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g、50g、75g或100g/千克组合物。在一个实施例中,该组合物包含至多250g的多肽/千克组合物,例如至多150g、100g、50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg/千克组合物。在一个实施例中,该组合物包含在0.01mg和250g之间的多肽(酶蛋白质)/千克组合物,例如在0.02mg、0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g、50g、75g或100g/千克组合物和150g、100g、50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg/千克组合物之间,或其任何组合。
在第二方面的任一部分的一个实施例中,该颗粒包含一种或多种配制剂(例如本文描述的那些),优选地选自以下列表的配制剂,该列表由以下组成:甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土、麦芽糊精、环糊精、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐和纤维素,优选地选自以下列表,该列表由以下组成:1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。
在第二方面的任一部分的一个实施例中,该颗粒包含核心粒子和一个或多个包衣。在一个优选的实施例中,该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。优选的配制品披露在下文的配制品部分中。
在第二方面的任一部分的一个实施例中,该颗粒包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选地选自由以下组成的组:乙酰木聚糖酯酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、脂肪酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酶、果胶裂解酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在第二方面的任一部分的一个实施例中,该颗粒包含一种或多种益生菌。该一种或多种益生菌优选选自由以下组成的组:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
包含具有溶菌酶活性的多肽的液体配制品
在第三方面,本发明涉及液体配制品,其中该液体配制品包含:
(a)0.01%至25%w/w的LYS多肽,其中:
(i)该LYS多肽具有溶菌酶活性;
(ii)该LYS多肽包含一个或多个LAD催化结构域,其中当使用SEQ ID NO:46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为170,并且其中通过利用HMM确定LAD催化结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询;
(b)20%至80%w/w的多元醇;
(c)0.01%至2.0%w/w的防腐剂;以及
(d)水。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分是至少175,优选至少180,更优选至少185,甚至更优选至少190,甚至更优选至少195,或最优选至少200。在一个实施例中,LED的domT评分是至少103,优选至少106,更优选至少109,更优选至少112,更优选至少115,更优选至少118,甚至更优选至少121,或最优选至少124。domT评分的优选组合如本发明的第一方面中所披露。
在一个实施例中,该多肽进一步包含一个或多个溶菌酶增强结构域(LED)。因此,本发明进一步涉及液体配制品,其中该液体配制品包含:
(a)0.01%至25%w/w的LYS多肽,其中:
(i)该LYS多肽具有溶菌酶活性;
(ii)该LYS多肽包含一个或多个LAD催化结构域,其中当使用SEQ ID NO:46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为170,并且其中通过利用HMM确定LAD催化结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询;
(iii)该LYS多肽包含一个或多个LED结构域,其中当使用SEQ ID NO:188至316和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该LED的domT评分至少为100,并且其中通过利用HMM确定溶菌酶增强结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询;
(b)20%至80%w/w的多元醇;
(c)0.01%至2.0%w/w的防腐剂;以及
(d)水。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分是至少175,优选至少180,更优选至少185,甚至更优选至少190,甚至更优选至少195,或最优选至少200。在一个实施例中,LED的domT评分是至少103,优选至少106,更优选至少109,更优选至少112,更优选至少115,更优选至少118,甚至更优选至少121,或最优选至少124。domT评分的优选组合如本发明的第一方面中所披露。
在第三方面的一个实施例中,本发明涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽的液体配制品,其中该液体配制品包含:
(A)0.01%至25%w/w的LYS多肽,其中该LYS多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少90%或至少95%)序列同一性的多肽;
(p)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQID NO:45,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(q)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;
(r)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;以及
(s)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽的片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90%;
(B)20%至80%w/w的多元醇;
(D)0.01%至2.0%w/w的防腐剂;以及
(D)水。
在第三方面的一个实施例中,本发明涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽的液体配制品,其中该液体配制品包含:
(A)0.01%至25%w/w的LYS多肽,其中该LYS多肽包含LAD催化结构域且选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的氨基酸81至220具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸161至304具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的氨基酸88至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的氨基酸87至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的氨基酸90至232具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的氨基酸83至222具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的氨基酸82至225具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸161至303具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;以及
(o)与SEQ ID NO:45的氨基酸85至227具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(B)20%至80%w/w的多元醇;
(C)0.01%至2.0%w/w的防腐剂;以及
(D)水。
在第三方面的一个实施例中,本发明涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽的液体配制品,其中该液体配制品包含:
(A)0.01%至25%w/w的LYS多肽,其中该LYS多肽包含LAD催化结构域且选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的氨基酸81至220具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸161至304具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的氨基酸88至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的氨基酸87至230具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的氨基酸90至232具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的氨基酸85至228具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的氨基酸84至226具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的氨基酸83至222具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的氨基酸82至225具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸161至303具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;以及
(o)与SEQ ID NO:45的氨基酸85至227具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(B)该LYS多肽包含LED结构域且选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸1至72具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的氨基酸1至72具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的氨基酸1至73具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的氨基酸96至167具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;以及
(n)与SEQ ID NO:42的氨基酸96至168具有至少80%(例如,至少85%、至少90%、或至少95%)序列同一性的多肽;
(C)20%至80%w/w的多元醇;
(D)0.01%至2.0%w/w的防腐剂;以及
(E)水。
在第三方面的任一部分的一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ IDNO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ IDNO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
在第三方面的任一部分的一个实施例中,该多肽是真菌来源的。在一个实施例中,该多肽获得自或可获得自分类学子囊菌门,优选分类学盘菌亚门。
在第三方面的任一部分的一个实施例中,该液体配制品包含一种或多种配制剂(例如本文描述的那些),优选地选自以下列表的配制剂,该列表由以下组成:甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、PVA、乙酸盐和磷酸盐,优选地选自以下列表,该列表由以下组成:1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。
在第三方面的任一部分的一个实施例中,该液体配制品包含一种或多种多元醇,优选地是选自由以下组成的组的多元醇:甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG),更优选地选自下组,该组由以下组成:甘油、山梨醇和丙二醇(MPG)或其任何组合。
在第三方面的任一部分的一个实施例中,该液体配制品包含20%-80%的多元醇(即多元醇的总量),优选地25%-75%的多元醇,更优选地30%-70%的多元醇,更优选地35%-65%的多元醇,或最优选地40%-60%的多元醇。在第三方面的任一部分的一个实施例中,该液体配制品包含20%-80%的多元醇,优选25%-75%的多元醇,更优选30%-70%的多元醇,更优选35%-65%的多元醇,或最优选40%-60%的多元醇,其中该多元醇选自由以下组成的组:甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)。在第三方面的任一部分的一个实施例中,该液体配制品包含20%-80%的多元醇(即多元醇的总量),优选25%-75%的多元醇,更优选30%-70%的多元醇,更优选35%-65%的多元醇,或最优选40%-60%的多元醇,其中该多元醇选自由以下组成的组:甘油、山梨醇和丙二醇(MPG)。
在第三方面的任一部分的一个实施例中,该防腐剂选自由以下组成的组:山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。在一个实施例中,该液体配制品包含0.02%至1.5%w/w的防腐剂,更优选0.05%至1.0%w/w的防腐剂,或最优选0.1%至0.5%w/w的防腐剂。在一个实施例中,该液体配制品包含0.01%至2.0%w/w的防腐剂(即防腐剂的总量),优选0.02%至1.5%w/w的防腐剂,更优选0.05%至1.0%w/w的防腐剂,或最优选0.1%至0.5%w/w的防腐剂,其中该防腐剂选自由以下组成的组:山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
在第三方面的任一部分的一个实施例中,该液体配制品包含0.05%至20%w/w的LYS多肽,更优选0.2%至15%w/w的LYS多肽,更优选0.5%至15%w/w的LYS多肽,或最优选1.0%至10%w/w的LYS多肽。
在第三方面的任一部分的一个实施例中,该液体配制品包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选地选自由以下组成的组:乙酰木聚糖酯酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、脂肪酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酶、果胶裂解酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在第三方面的任一部分的一个实施例中,该液体配制品一种或多种益生菌。该一种或多种益生菌优选选自由以下组成的组:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
具有溶菌酶活性的多肽
在第四方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少95%,例如至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽相差多达11个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸。
在第四方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:3具有至少95%,例如至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:3相差多达11个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:3具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:3的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:3长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至226或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第四方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少95%,例如至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第四方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:3的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ ID NO:3中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过11,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11。在一个实施例中,在SEQ ID NO:3中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:3中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:3中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在第四方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:3的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
这些氨基酸改变可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地为1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基-末端或羧基-末端延伸,例如氨基末端的甲硫氨酸残基;多达20-25个残基的小接头肽;或小的延伸,其通过改变净电荷或另一官能(例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
保守取代的实例是在下组之内:碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。保守取代的其他实例是G至A;A至G、S;V至I、L、A、T、S;I至V、L、M;L至I、M、V;M至L、I、V;P至A、S、N;F至Y、W、H;Y至F、W、H;W至Y、F、H;R至K、E、D;K至R、E、D;H至Q、N、S;D至N、E、K、R、Q;E至Q、D、K、R、N;S至T、A;T至S、V、A;C至S、T、A;N至D、Q、H、S;Q至E、N、H、K、R。
可以根据本领域中已知的程序,例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一种技术中,在分子中的每个残基处引入单一丙氨酸突变,并且测试所得突变分子的溶菌酶活性以鉴定对分子的活性关键的氨基酸残基。还参见,Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变,如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析,从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见,例如,de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312;Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904;Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法,随后进行相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试,该相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57;Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156;WO 95/17413;或WO 95/22625中披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837;美国专利号5,223,409;WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145;Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子,并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
该多肽可以是杂合多肽或融合多肽。
在第五方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:5的成熟多肽具有至少94%,例如至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:5的成熟多肽相差多达13个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个氨基酸。
在第五方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:6具有至少94%,例如至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:6相差多达13个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:6具有至少94%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:6的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:6具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:6的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:5的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:6长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至226或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第五方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列具有至少94%,例如至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第五方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:6的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ ID NO:6中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过13,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13。在一个实施例中,在SEQ ID NO:6中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:6中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:6中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:6的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第六方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:8的成熟多肽具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:8的成熟多肽相差多达44个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43或44个氨基酸。
在第六方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:9具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:9相差多达44个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43或44个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:9具有至少80%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:9的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:9具有至少85%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:9的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:9具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:9的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:9具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:9的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:8的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:9长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:9的氨基酸1至223或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第六方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:7的成熟多肽编码序列具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第六方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:9的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ ID NO:9中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过44,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43或44。在一个实施例中,在SEQ ID NO:9中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:9中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:9中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第六方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:9的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第七方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:11的成熟多肽具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:11的成熟多肽相差多达50个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在第七方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:12具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:12相差多达50个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:12具有至少80%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:12的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:12具有至少85%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:12的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:12具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:12的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:12具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:12的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:11的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:12长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至304或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第七方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:10的成熟多肽编码序列具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第七方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:12的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ ID NO:12中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在一个实施例中,在SEQ ID NO:12中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:12中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:12中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第七方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:12的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第八方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:14的成熟多肽具有至少87%,例如至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:14的成熟多肽相差多达29个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个氨基酸。
在第八方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:15具有至少87%,例如至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:15相差多达29个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、或29个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:15具有至少87%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:15的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:15具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:15的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:15具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:15的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:14的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:15长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:15的氨基酸1至228或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第八方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列具有至少87%,例如至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第八方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:15的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ ID NO:15中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过29,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29。在一个实施例中,在SEQ ID NO:15中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQID NO:15中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:15中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第八方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:15的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第九方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:17的成熟多肽具有至少81%,例如至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:17的成熟多肽相差多达43个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42或43个氨基酸。
在第九方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:18具有至少81%,例如至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:18相差多达43个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42或43个氨基酸。
在第九方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:18具有至少81%,例如至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:239相差多达28个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:18具有至少81%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:18的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:18具有至少85%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:18的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:18具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:18的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:18具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:18的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:17的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:239的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:18长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至230或由其组成。在一个实施例中,该多肽包含SEQ IDNO:18的氨基酸1至146或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第九方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:16的成熟多肽编码序列具有至少81%,例如至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第九方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:18的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ ID NO:18中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过43,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42或43。在一个实施例中,在SEQ ID NO:18中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:18中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:18中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第九方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:18的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:20的成熟多肽具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:20的成熟多肽相差多达45个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45个氨基酸。
在第十方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:21具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:21相差多达45个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:21具有至少80%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:21的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:21具有至少85%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:21的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:21具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:21的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:21具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:21的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:20的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:21长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:21的氨基酸1至230或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第十方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第十方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:21的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ ID NO:21中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过45,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45。在一个实施例中,在SEQ ID NO:21中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:21中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:21中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:21的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十一方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:23的成熟多肽具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:23的成熟多肽相差多达46个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45或46个氨基酸。
在第十一方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:24具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:24相差多达46个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45或46个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:24具有至少80%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:24的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:24具有至少85%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:24的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:24具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:24的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:24具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:24的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:23的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:24长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:24的氨基酸1至232或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第十一方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:22的成熟多肽编码序列具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第十一方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:24的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ IDNO:24中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过46,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45或46。在一个实施例中,在SEQ ID NO:24中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:24中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQID NO:24中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十一方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:24的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十二方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:26的成熟多肽具有至少87%,例如至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:26的成熟多肽相差多达29个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个氨基酸。
在第十二方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:27具有至少87%,例如至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:27相差多达29个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:27具有至少87%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:27的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:27具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:27的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:27具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:27的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:26的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:27长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:27的氨基酸1至228或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第十二方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:25的成熟多肽编码序列具有至少87%,例如至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第十二方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:27的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ IDNO:27中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过29,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29。在一个实施例中,在SEQ ID NO:27中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:27中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:27中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十二方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:27的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十三方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:29的成熟多肽具有至少96%,例如至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:29的成熟多肽相差多达8个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸。
在第十三方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:30具有至少96%,例如至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:30相差多达8个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:30具有至少96%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:30的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:29的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:30长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:30的氨基酸1至228或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第十三方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:28的成熟多肽编码序列具有至少96%,例如至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第十三方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:30的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ IDNO:30中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过8,例如1、2、3、4、5、6、7或8。在一个实施例中,在SEQ ID NO:30中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过8,例如1、2、3、4、5、6、7或8。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:30中取代(优选保守取代)的数目不超过8,例如1、2、3、4、5、6、7或8。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十三方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:30的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十四方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:32的成熟多肽具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:32的成熟多肽相差多达45个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45个氨基酸。
在第十四方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:33具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:33相差多达45个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:33具有至少80%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:33的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:33具有至少85%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:33的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:33具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:33的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:33具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:33的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:32的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:33长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:33的氨基酸1至226或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第十四方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:31的成熟多肽编码序列具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第十四方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:33的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ IDNO:33中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过45,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45。在一个实施例中,在SEQ ID NO:33中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:33中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ IDNO:33中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十四方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:33的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十五方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:35的成熟多肽具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:35的成熟多肽相差多达44个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43或44个氨基酸。
在第十五方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:36具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:36相差多达44个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43或44个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:36具有至少80%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:36的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:36具有至少85%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:36的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:36具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:36的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:36具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:36的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:35的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:36长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:36的氨基酸1至225或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第十五方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:34的成熟多肽编码序列具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第十五方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:36的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ IDNO:36中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过44,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43或44。在一个实施例中,在SEQ ID NO:36中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:36中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:36中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十五方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:36的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十六方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:38的成熟多肽具有至少81%,例如至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:38的成熟多肽相差多达42个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41或42个氨基酸。
在第十六方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:39具有至少81%,例如至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:39相差多达42个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41或42个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:39具有至少81%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:39的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:39具有至少85%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:39的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:39具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:39的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:39具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:39的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:38的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:39长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:39的氨基酸1至225或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第十六方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:37的成熟多肽编码序列具有至少81%,例如至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第十六方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:39的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ IDNO:39中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过42,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41或42。在一个实施例中,在SEQ ID NO:39中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:39中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:39中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十六方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:39的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十七方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:41的成熟多肽具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:41的成熟多肽相差多达50个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在第十七方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:42具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:42相差多达50个氨基酸,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:42具有至少80%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:42的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:42具有至少85%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:42的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:42具有至少90%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:42的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:42具有至少95%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:42的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:41的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:42长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:42的氨基酸1至304或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第十七方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列具有至少80%,例如至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第十七方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:42的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ IDNO:42中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在一个实施例中,在SEQ ID NO:42中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中,在SEQ ID NO:42中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:42中取代(优选保守取代)的数目不超过10,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十七方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:42的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十八方面,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ ID NO:44的成熟多肽具有至少100%,例如或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ IDNO:44的成熟多肽相差多达0个氨基酸,例如或1个氨基酸。
在第十八方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽,这些多肽与SEQ IDNO:45具有至少100%,例如或100%序列同一性。在一个实施例中,这些多肽与SEQ ID NO:45相差多达0个氨基酸,例如或1个氨基酸。
在一个实施例中,本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:45具有至少100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO:45的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:44的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:45长度的至少90%,如至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一个实施例中,该多肽包含SEQ ID NO:45的氨基酸1至227或由其组成。在一个实施例中,该多肽已经被分离。
在第十八方面的延续中,本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽,该多核苷酸与SEQ ID NO:43的成熟多肽编码序列具有至少100%,例如或100%的序列同一性。在另外的实施例中,该多肽已经被分离。
在第十八方面的延续中,本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:45的变体,这些变体包含在一个或多个(例如,若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中,在SEQ IDNO:45中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过0,例如或1。在一个实施例中,在SEQ ID NO:45中取代和/或缺失和/或插入的数目不超过0,例如或1。在另外的实施例中,在SEQ ID NO:45中保守取代的数目(优选保守取代)不超过0,例如或1。在本发明的第四方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十八方面的一个实施例中,该变体具有SEQ ID NO:45的至少50%,例如至少75%、至少90%、至少95%、或至少100%的溶菌酶活性。在一个实施例中,如实例1所述测定溶菌酶活性。
分类学和结构家族
在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
在一个实施例中,该具有溶菌酶活性的多肽获得自或可获得自分类学子囊菌门,优选分类学盘菌亚门,并且优选地选自下组,该组选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQID NO:45。
在一个实施例中,该具有溶菌酶活性的多肽获得自或可获得自分类学散囊菌纲(Eurotiomycetes),优选分类学散囊菌目(Eurotiales),并且更优选地选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:36。
在一个实施例中,该具有溶菌酶活性的多肽获得自或可获得自分类学散囊菌目,优选分类学曲霉科(Aspergillaceae),并且更优选地选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:30。
在一个实施例中,该具有溶菌酶活性的多肽获得自或可获得自分类学散囊菌目,优选分类学发菌科(Trichocomaceae),并且更优选地选自由以下组成的组:SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:36。
在一个实施例中,该具有溶菌酶活性的多肽获得自或可获得自分类学粪壳菌纲(Sordariomycetes),并且优选地选自下组,该组选自:SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:33、SEQID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:45。
在一个实施例中,该具有溶菌酶活性的多肽获得自或可获得自分类学粪壳菌目(Sordariales),优选分类学毛壳菌科(Chaetomiaceae),并且更优选地选自由以下组成的组:SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45。
在一个实施例中,该具有溶菌酶活性的多肽获得自或可获得自分类学肉座菌目(Hypocreales),优选分类学麦角菌科(Clavicipitaceae),并且更优选地选自由以下组成的组:SEQ ID NO:42。
具有溶菌酶活性的多肽的来源
本发明的具有溶菌酶活性的多肽可以从任何属的微生物获得。出于本发明的目的,如本文结合给定来源使用的术语“获得自”应当意指由多核苷酸编码的多肽是由该来源或由已经插入了来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一方面,获得自给定来源的多肽被分泌到细胞外。
该多肽可以是真菌多肽。在一方面,该多肽是来自散囊菌纲(例如来自散囊菌目,或来自曲霉科,或来自青霉属,或来自简青霉、Penicillium vasconiae、南极青霉、惠灵顿青霉、玫瑰紫青霉或帚青霉物种)的真菌的具有溶菌酶活性的多肽。
该多肽可以是真菌多肽。在一方面,该多肽是来自散囊菌纲(例如来自散囊菌目,或来自曲霉科,或来自曲霉属,或来自曲霉属物种XZ2668或霉白曲霉物种)的真菌的具有溶菌酶活性的多肽。
该多肽可以是真菌多肽。在一方面,该多肽是来自散囊菌纲(例如来自散囊菌目,或来自发菌科,或来自篮状菌属,或来自解蛋白篮状菌或Talaromyces atricola物种)的真菌的具有溶菌酶活性的多肽。
该多肽可以是真菌多肽。在一方面,该多肽是来自粪壳菌纲(例如来自肉座菌目,或来自麦角菌科,或来自绿僵菌属,或来自肉色绿僵菌物种)的真菌的具有溶菌酶活性的多肽。
该多肽可以是真菌多肽。在一方面,该多肽是来自粪壳菌纲(例如来自粪壳菌目,或来自毛壳菌科,或来自Ovatospora属,或来自Ovatospora brasiliensis物种)的真菌的具有溶菌酶活性的多肽。
该多肽可以是真菌多肽。在一方面,该多肽是来自粪壳菌纲(例如来自粪壳菌目,或来自毛壳菌科,或来自毛壳菌属,或来自毛壳菌物种ZY369)的真菌的具有溶菌酶活性的多肽。
该多肽可以是真菌多肽。在一方面,该多肽是来自粪壳菌纲(例如来自粪壳菌目,或来自毛壳菌科,或来自短梗蠕孢属,或来自粗糙短梗蠕孢物种)的真菌的具有溶菌酶活性的多肽。
该多肽可以是真菌多肽。在一方面,该多肽是来自粪壳菌纲(例如来自粪壳菌目,或来自毛壳菌科,或来自梭孢壳属,或来自土生梭孢壳霉物种)的真菌的具有溶菌酶活性的多肽。
应理解的是,对于前述物种,本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfect states),和其他分类学等同物(equivalent),例如无性型,而与它们已知的种名无关。本领域的技术人员会容易地识别适当等同物的身份。
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得,如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(Centraalbureau Voor Schimmelcultures,CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(Agricultural Research Service Patent CultureCollection,Northern Regional Research Center,NRRL)。
可以使用以上提到的探针从其他来源,包括从自然界(例如,土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从天然材料(例如,土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴定和获得该多肽。用于从天然生境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合的DNA样品来获得编码该多肽的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码多肽的多核苷酸,则可以通过利用本领域普通技术人员已知的技术(参见例如,Sambrook等人,1989,同上)分离或克隆多核苷酸。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的多肽的多核苷酸,如本文中所述。在一个实施例中,编码本发明的多肽的多核苷酸已经被分离。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域已知的且包括从基因组DNA或cDNA或其组合进行分离。可以例如通过使用熟知的聚合酶链式反应(PCR)或表达文库的抗体筛选来检测具有共有结构特征的克隆DNA片段,实现从基因组DNA克隆多核苷酸。参见例如,Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and Application[PCR:方法和应用指南],AcademicPress[学术出版社],纽约。可以使用其他核酸扩增程序例如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。这些多核苷酸可以由长毛盘菌属(Trichophaea)菌株或木霉属菌株或相关生物体克隆,并且因此,例如可以是该多核苷酸的多肽编码区的等位基因或种类变体。
编码本发明的多肽的多核苷酸的修饰对于合成基本上类似于该多肽的多肽可以是必需的。术语“基本上类似”于该多肽是指多肽的非天然存在的形式。
核酸构建体
本发明还涉及核酸构建体,其包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸,在与控制序列相容的条件下,该一个或多个控制序列指导该编码序列在合适的宿主细胞中的表达。
可用许多方式操作所述多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体,在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可以是理想的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
该控制序列可为启动子,即,被宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的多核苷酸。该启动子包含介导该多肽的表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸,包括突变型、截短型和杂合型启动子,并且可以获得自编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的合适启动子的实例是从以下基因中获得的启动子:解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。其他启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Usefulproteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”;和在Sambrook等人,1989,同上。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
在丝状真菌宿主细胞中,用于指导本发明的核酸构建体的转录的适合启动子的实例是从以下的基因获得的启动子:构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢菌胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢菌淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢菌Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢菌Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶,以及里氏木霉翻译延伸因子,连同NA2-tpi启动子(来自编码中性α-淀粉酶的曲霉属基因的修饰的启动子,其中已经用来自编码丙糖磷酸异构酶的曲霉属基因的未翻译的前导序列替换未翻译的前导序列;非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的修饰的启动子,其中已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替换未翻译的前导序列);及其突变型、截短型及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
在酵母宿主中,从以下酶的基因获得有用的启动子:酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母乙醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1,ADH2/GAP)、酿酒酵母磷酸丙糖异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用的启动子由Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述。
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接到编码该多肽的多核苷酸的3'-末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得:克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下酶的基因获得:构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢菌胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延长因子。
用于酵母宿主细胞的优选的终止子从以下酶的基因获得:酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)、以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。酵母宿主细胞的其他有用的终止子由Romanos等人,1992,同上描述。
控制序列还可以是启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区域,其增加该基因的表达。
合适的mRNA稳定子区的实例从以下获得:苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。
控制序列也可以是前导序列,即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。该前导序列可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5'-末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的适合的前导序列从以下酶的基因获得:酿酒酵母烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α因子、和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列也可以是多腺苷酸化序列,一种与多核苷酸3’-末端可操作地连接并在转录时由宿主细胞识别为向转录的mRNA添加多腺苷酸残基的信号序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列从以下酶的基因获得:构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢菌胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的多腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
控制序列也可为编码与多肽的N-末端连接的信号肽并指导多肽进入细胞的分泌途径的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5'-端可固有地包含在翻译阅读框中与编码多肽的编码序列的区段天然地连接的信号肽编码序列。可替代地,编码序列的5'-端可包含对于编码序列为外源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不包含信号肽编码序列的情况下,可能需要外源信号肽编码序列。可替代地,外源信号肽编码序列可以单纯地替换天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而,可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews[微生物评论]57:109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下酶的基因获得的信号肽编码序列:黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。其他的有用的信号肽编码序列由Romanos等人,1992,同上描述。
控制序列也可以是编码位于多肽N-末端处的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得:枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列两者都存在的情况下,该前肽序列位于紧邻多肽的N-末端且该信号肽序列位于紧邻该前肽序列的N-末端。
也可为希望的是添加调节序列,该调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac、和trp操纵子系统。在酵母中,可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中,可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKA α-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些序列。在真核系统中,这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中,编码多肽的多核苷酸会与调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。多个核苷酸和控制序列可连接在一起以产生重组表达载体,该重组表达载体可包括一个或多个便利的限制位点以允许编码该多肽的多核苷酸在此类位点处的插入或取代。可替代地,该多核苷酸可以通过将该多核苷酸或包括该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中来表达。在产生该表达载体时,该编码序列位于该载体中,这样使得该编码序列与该用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如,质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体,即作为染色体外实体存在的载体,其复制独立于染色体复制,例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以包含用于确保自我复制的任何手段。可替代地,载体可以是这样的载体,当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外,可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒,其共同包含待引入宿主细胞基因组的总DNA,或可以使用转座子。
载体优选地包含允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标记是一种基因,其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(例如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标记。酵母宿主细胞的适合的标记包括但不限于:ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于丝状真菌宿主细胞中的选择性标记包括但不限于:adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀酸甲酰胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷酰基转移酶)、以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)、以及其等同物。优选的用于曲霉细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选地用于木霉属细胞的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。
选择性标记可以是如WO 2010/039889中所述的双选择性标记系统。在一方面,双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
载体优选地包含允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到该宿主细胞基因组中,该载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地,该载体可包含用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基因组中的染色体中的精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置处整合的可能性,整合元件应当包含足够数目的核酸,例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对,这些核酸与对应的靶序列具有高度序列同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外,整合元件可以是非编码多核苷酸或编码多核苷酸。另一方面,载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
为了自主复制,载体还可以另外包含复制起点,该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的复制起点,以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67;Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175;WO00/24883)。可根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含所述基因的质粒或载体的构建。
可将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数目,其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择包含选择性标记基因的经扩增的拷贝以及由此该多核苷酸的另外的拷贝的细胞。
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域技术人员熟知的(参见例如,Sambrook等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞,这些宿主细胞包含可操作地连接到一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸,该一个或多个控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入到宿主细胞中,这样使得该构建体或载体被维持作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体,如早前所描述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。
在一些实施例中,多肽对重组宿主细胞是异源的。
在一些实施例中,一个或多个控制序列中的至少一个与编码多肽的多核苷酸异源。
在一些实施例中,重组宿主细胞包含本发明的多核苷酸的至少两个拷贝,例如三个,四个或五个。
该宿主细胞可以是在本发明的多肽的重组产生中有用的任何细胞,例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于:芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属和链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单孢菌属、沙门氏菌属和脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞,包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞,包括但不限于类马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌以及马链球菌兽疫亚种细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞,包括但不限于:不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现:原生质体转化(参见,例如,Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如,Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829;或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如,Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)或轭合(参见例如,Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下方式来实现:原生质体转化(参见例如,Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如,Dower等人,1988,Nucleic Acids Res.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下方式来实现:原生质体转化、电穿孔(参见例如,Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如,Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)、或转导(参见例如,Burke等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下方式来实现:电穿孔(参见例如,Choi等人2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如,Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。可通过如下方法实现将DNA引入到链球菌属细胞:例如天然感受态(natural competence)(参见,例如,Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如,Catt和Jollick,1991,Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见例如,Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见例如,Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而,可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞还可以是真核生物,例如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人在以下文献中所定义:Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi[安斯沃思和拜斯比真菌字典],第8版,1995,CAB International[国际应用生物科学中心],University Press[大学出版社],Cambridge,UK[英国剑桥]中定义的)。
真菌宿主细胞可以是酵母细胞。如本文所用的“酵母”包括产子囊酵母(内孢霉目)、产担子酵母及属于半知菌纲(芽孢纲)的酵母。由于酵母的分类可在将来变化,出于本发明的目的,酵母应当如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner,Passmore和Davenport编,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)中所描述的那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁弗酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属或耶氏酵母属细胞,如乳酸克鲁维酵母、卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可以是丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门和卵菌门的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995(同上)所定义的)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳多糖、甘露聚糖和其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延长来进行的,而碳分解代谢是专性需氧的。相反,酵母(例如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)来进行的,而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属(Trametes)或木霉属细胞。
例如,丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌、女王杜香金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢菌、谷类镰孢菌、库威镰孢菌、大刀镰孢菌、禾谷镰孢菌、禾赤镰孢菌、异孢镰孢菌、合欢木镰孢菌、尖孢镰孢菌、多枝镰孢菌、粉红镰孢菌、接骨木镰孢菌、肤色镰孢菌、拟分枝孢镰孢菌、硫色镰孢菌、圆镰孢菌、拟丝孢镰孢菌、镶片镰孢菌、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、产紫青霉、黄孢原毛平革菌、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉细胞。
可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的合适程序描述于以下文献中:EP 238023,Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人,1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化镰孢属物种的合适方法由Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由以下文献描述的程序转化酵母:Becker和Guarente,在Abelson,J.N.和Simon,M.I.编辑,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,AcademicPress,Inc.[学术出版社有限公司],纽约);Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163;以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
产生方法
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法,这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞,该细胞以其野生型形式产生该多肽;和任选地(b)回收该多肽。
在一方面,该细胞是简青霉细胞。在一方面,该细胞是Penicillium vasconiae细胞。在一方面,该细胞是解蛋白篮状菌细胞。在一方面,该细胞是曲霉属物种XZ2668细胞。在一方面,该细胞是南极青霉细胞。在一方面,该细胞是Ovatospora brasiliensis细胞。在一方面,该细胞是惠灵顿青霉细胞。在一方面,该细胞是玫瑰紫青霉细胞。在一方面,该细胞是帚青霉细胞。在一方面,该细胞是霉白曲霉细胞。在一方面,该细胞是毛壳菌属物种ZY369细胞。在一方面,该细胞是Talaromyces atricola细胞。在一方面,该细胞是粗糙短梗蠕孢细胞。在一方面,该细胞是肉色绿僵菌细胞。在一方面,该细胞是土生梭孢壳霉细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法,这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养本发明的重组宿主细胞;和任选地(b)回收该多肽。
宿主细胞是在适合使用本领域已知的方法产生多肽的营养培养基中培养的。例如,可以通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵罐中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞,该培养在合适的培养基中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。使用本领域中已知的程序,培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养介质中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据所公开的组成(例如,在美国典型培养物保藏中心的目录中)制备。如果多肽被分泌到该营养培养基中,那么可以直接从该培养基中回收该多肽。如果多肽不进行分泌,那么其可以从细胞裂解液中进行回收。
可以使用本领域已知的对于多肽是特异性的方法来检测多肽。这些检测方法包括但不限于:特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如,可以使用酶测定来确定多肽的活性。
可以使用本领域已知的方法来回收多肽。例如,可通过常规方法,包括但不限于,收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀,从发酵培养基回收多肽。在一方面,回收包含多肽的发酵液。
可以通过本领域已知的多种程序纯化多肽以获得基本上纯的多肽,这些程序包括但不限于:色谱法(例如,离子交换、亲和、疏水、色谱聚焦和尺寸排阻)、电泳程序(例如,制备型等电聚焦)、差示溶解度(例如,硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE、或提取(参见例如,ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约,1989)。
植物
本发明还涉及分离的植物,例如转基因植物、植物部分或植物细胞,其包含本发明的多肽,从而以可回收的量表达和产生多肽或结构域。可以从该植物或植物部分回收该多肽或结构域。可替代地,含有该多肽或结构域的植物或植物部分可以按原样用于改进食品或饲料的质量,例如改进营养价值、可口性及流变学特性,或破坏抗营养因素。
转基因植物可以是双子叶的(双子叶植物)或单子叶的(单子叶植物)。单子叶植物的实例是草,如草地早熟禾(蓝草,早熟禾属);饲用草,例如羊茅属(Festuca)、黑麦草属(Lolium);温带草,如翦股颖属(Agrostis);以及谷物,例如小麦、燕麦、黑麦、大麦、稻、高粱和玉蜀黍(玉米)。
双子叶植物的实例是烟草、豆科植物(例如羽扇豆、马铃薯、糖甜菜、豌豆、菜豆和大豆)以及十字花科植物(十字花科)(例如花椰菜、油菜籽和紧密相关的模式生物体拟南芥)。
植物部分的实例是茎、愈伤组织、叶、根、果实、种子和块茎以及包含这些部分的独立组织,例如表皮、叶肉、薄壁组织、维管组织、分生组织。
植物细胞和特定的植物细胞区室(例如叶绿体、质外体、线粒体、液泡、过氧化物酶体和细胞质)也被认为是植物部分。
同样包含于本发明范围内的是此类植物、植物部分以及植物细胞的子代。
可以根据本领域已知方法构建表达该多肽或结构域的转基因植物或植物细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽或结构域的方法,这些方法包括(a)在有益于产生该多肽或结构域的条件下培养转基因植物或植物细胞,该转基因植物或植物细胞包含编码该多肽或结构域的多核苷酸;并且(b)回收该多肽或结构域。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。该发酵液产物进一步包含在发酵过程中使用的另外的成分,例如像细胞(包括含有编码本发明的多肽的基因的宿主细胞,这些宿主细胞用于产生目的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中,组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如本文使用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如,当微生物培养物在允许蛋白质合成(例如,由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时,产生发酵液。该发酵液可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地,该发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如,丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中,发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在一些实施例中,该发酵液配制品和细胞组合物包括第一有机酸组分(包括至少一种1-5碳的有机酸和/或其盐)以及第二有机酸组分(包括至少一种6碳或更多碳的有机酸和/或其盐)。在一些实施例中,该第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物;并且该第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物。
在一方面,组合物含有一种或多种有机酸,并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一些实施例中,从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片,以提供不含这些组分的组合物。
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如,抑菌)剂,包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。
该细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地,该细胞杀灭的全培养液或组合物包含用过的培养基以及在微生物细胞(例如,丝状真菌细胞)生长至饱和、在碳限制条件下孵育以允许蛋白合成之后存在的细胞碎片。在一些实施例中,细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中,可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如本文所述的全培养液或细胞组合物典型地是液体,但是可以含有不溶性组分,如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中,可以去除不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过WO 90/15861或WO2010/096673中所述的方法来产生。
酶组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的组合物。优选地,这些组合物富含本发明的多肽。术语“富集”表示组合物的溶菌酶活性已增加,例如富集因子为至少1.1,例如至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少2.0、至少3.0、至少4.0、至少5.0、至少10。
在一个优选的实施例中,该组合物包含一种或多种选自以下列表的具有溶菌酶活性的LYS多肽,该列表由以下组成:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:45。
在一个实施例中,该组合物包含本发明的多肽以及一种或多种如下所述的配制剂。
这些组合物可进一步包含多种酶活性,例如一种或多种(例如若干种)选自由以下组成的组的酶:植酸酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、蛋白酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、溶血磷脂酶、磷脂酶C、磷脂酶D、淀粉酶、溶菌酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、β-木糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、纤维素酶、纤维二糖水解酶、β-葡糖苷酶、支链淀粉酶、和β-葡聚糖酶或其任何组合。
这些组合物可进一步包含一种或多种益生菌。在一个实施例中,该益生菌选自由以下组成的组:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘菌芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、肉食杆菌属、丁酸梭菌、梭菌属、屎肠球菌、肠球菌属、乳酸杆菌属、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳酸杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属、明串珠菌属、埃氏巨型球菌、巨型球菌属、乳酸片球菌、片球菌属、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属、以及链球菌属或其任何组合。
在一个实施例中,该组合物包含一种或多种如本文披露的配制剂,优选一种或多种选自以下列表的化合物,该列表由以下组成:甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土、麦芽糊精、环糊精、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐、高岭土和纤维素。
在一个实施例中,该组合物包含一种或多种选自以下列表的组分,该列表由以下组成:维生素、矿物质和氨基酸。
配制品
本发明的酶可以配制为液体或固体。针对液体配制品,该配制剂可以包括多元醇(像例如,甘油、乙二醇或丙二醇)、盐(像例如,氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾)或糖或糖衍生物(像例如,糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨醇)。因此,在一个实施例中,该组合物是液体组合物,其包含本发明的多肽和一种或多种选自以下列表的配制剂,该列表由以下组成:甘油、乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨醇。该液体配制品可以喷洒在已经丸粒化(pelleted)的饲料上,或可以添加到供给动物的饮用水中。
针对固体配制品,该配制品可以例如作为颗粒、喷雾干粉或聚结物(例如如在WO2000/70034中所披露)。配制剂可以包括盐(有机的或无机的锌、钠、钾或钙盐,像例如,如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如,蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)。
在一个实施例中,该组合物是固体组合物,例如喷雾干燥组合物,该固体组合物包含本发明的LYS多肽和一种或多种选自以下列表的配制剂,该列表由以下组成:氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土、麦芽糊精、环糊精、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐和纤维素。在一个优选的实施例中,该配制剂选自一种或多种以下化合物:硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、硫酸镁和碳酸钙。
本发明还涉及包含本发明的LYS多肽的酶颗粒/粒子任选地与一种或多种另外的酶的组合。该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一个或多个包衣(外层)构成。
通常,该颗粒的粒度(granule/particle size)(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm,具体是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以通过粒化成分的共混物来制备,例如通过包括造粒技术的方法,例如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床凝集、旋转雾化、挤压、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册];C.E.Capes的Particle size enlargement[粒度增大];第1卷;1980;Elsevier[爱思唯尔]。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制技术,例如:
a)喷雾干燥产品,其中在喷雾干燥塔中雾化液体含酶溶液以形成小液滴,在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含有酶的颗粒状材料;
b)层状产品,其中酶作为层包衣在预形成的惰性核心粒子周围,其中包括酶的溶液被雾化,通常在流化床装置中,其中预形成的核心粒子被流体化,并且含酶的溶液附着到核心粒子上并干燥,直到使得干的酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有期望尺寸的有用核心粒子,则通过这种方式能够获得具有期望尺寸的粒子。这种类型的产品描述于例如WO 97/23606中;
c)吸收的核心粒子,其中不是包衣该酶作为核心周围的层,而是在核心的表面上和/或表面中吸收该酶。这样的方法描述于WO 97/39116中。
d)挤出或丸粒化的(pelletized)产品,其中将含有酶的糊料压成丸粒(pellet)或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子,随后干燥这些粒子。此类粒子通常具有相当大的尺寸,因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外,当使用小的开口时,非常高的挤出压力增加了酶糊料中的热发生,这对酶是有害的;
e)颗粒化的产品,其中含酶的粉末悬浮于熔化的蜡中并且例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷洒到冷却室中,在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编辑);Powdereddetergents[粉状洗涤剂];Surfactant Science Series[表面活性剂科学系];1998;第71卷;第140-142页;Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。所获得产物是酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产物。此外,US 4,016,040和US 4,713,245是与此技术有关的文献;
f)混合造粒产品,其中将液体添加到例如常用造粒组分的干燥粉末组合物中,经由液体或粉末或二者引入该酶。将液体和粉末混合,并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收,干燥粉末的组分开始附着并附聚,并且粒子将构建,形成包含酶的颗粒。此种方法描述于US 4,106,991和有关的文献EP 170360、EP 304332、EP 304331、WO90/09440和WO 90/09428中。在其中可以用各种高剪切混合器作为造粒机的此方法的具体产品中,将由作为酶的酶、填料和粘合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以强化粒子,而得到所谓的T-颗粒(T-granulate)。经强化的粒子更加坚固,酶粉尘释放更少。
g)粒度减小,其中通过碾磨或压碎含酶的较大的粒子、丸粒、平片体、坯块(briquette)等产生核心。通过将碾磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子级分。可以回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度减小描述于(Martin Rhodes(编辑);Principles ofPowder Technology[粉末技术原理];1990;第10章;John Wiley&Sons[约翰威利父子公司]);
h)流化床造粒,其涉及将颗粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷洒液体到流态化粒子上。被喷洒的液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并附着于其上并形成颗粒;
i)这些核心可经受干燥,例如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用其他已知的在饲料或洗涤剂工业中用于干燥颗粒的方法。干燥优选在从25℃至90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说,重要的是包含酶的核心在包衣之前含有少量的水。如果在过量水除去之前水敏性酶被包衣,则水分会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。干燥之后,这些核心优选含有0.1%w/w-10%w/w的水。
该核心可以包含另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、黏度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。
该核心可以包含粘合剂,例如合成聚合物、蜡、脂肪或碳水化合物。
该核心通常作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。
在一个实施例中,该核心包含选自由以下组成的组的材料:盐(例如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如,蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)、糖或糖衍生物(像例如,蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)、有机小分子、淀粉、面粉、纤维素和矿物质以及粘土矿物质(也称作水性页硅酸铝)。在一个实施例中,该核心包含粘土矿物质,例如高岭石或高岭土。
该核心可以包含惰性粒子,其中酶被吸附到该惰性粒子之内,或者被施加(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。
该核心的直径可以是20-2000μm,具体地50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以被至少一个包衣包围,例如以改进储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。任选的一个或多个包衣可以包括盐和/或蜡和/或面粉包衣或其他合适的包衣材料。
可以将该包衣按核心的重量计以至少0.1%(例如,至少0.5%、1%或5%)的量施加。该量至多可以是100%、70%、50%、40%或30%。
该包衣优选是至少0.1μm厚,具体地至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一些实施例中,该包衣的厚度低于100μm,例如低于60μm或低于40μm。
该包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣,使得密封或封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。该层或包衣在厚度上应当特别均匀。
该包衣可以进一步含有其他本领域已知的材料,例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂,例如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
盐包衣可以包含按重量计至少60%的盐,例如按重量计至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%。
该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加,或者从盐悬浮液(其中该细粒子是少于50μm,例如少于10μm或少于5μm)中添加。
该盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的,具体地具有在20℃在100g水中至少0.1g的溶解度,优选至少0.5g/100g水,例如至少1g/100g水、例如至少5g/100g水。
该盐可以是无机盐,例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子,例如6个或更少的碳原子)的盐例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子,例如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、山梨酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。具体而言,可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。
在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60%的恒定湿度,具体地超过70%、超过80%或超过85%,或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如,无水物)。该盐包衣可以如WO 1997/05245、WO 1998/54980、WO 1998/55599、WO 2000/70034、WO 2006/034710、WO2008/017661、WO 2008/017659、WO 2000/020569、WO 2001/004279、WO 1997/05245、WO2000/01793、WO 2003/059086、WO 2003/059087、WO 2007/031483、WO 2007/031485、WO2007/044968、WO 2013/192043、WO 2014/014647和WO 2015/197719中所述或者是如WO2001/00042中所述的聚合物包衣。
适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃=76%)、Na2CO3(CH20℃=92%)、NaNO3(CH20℃=73%)、Na2HPO4(CH20℃=95%)、Na3PO4(CH25℃=92%)、NH4Cl(CH20℃=79.5%)、(NH4)2HPO4(CH20℃=93,0%)、NH4H2PO4(CH20℃=93.1%)、(NH4)2SO4(CH20℃=81.1%)、KCl(CH20℃=85%)、K2HPO4(CH20℃=92%)、KH2PO4(CH20℃=96.5%)、KNO3(CH20℃=93.5%)、Na2SO4(CH20℃=93%)、K2SO4(CH20℃=98%)、KHSO4(CH20℃=86%)、MgSO4(CH20℃=90%)、ZnSO4(CH20℃=90%)和柠檬酸钠(CH25℃=86%)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2、乙酸镁、乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌和山梨酸锌。
该盐可以处于无水形式,或者它可以是水合盐,即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物,例如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4.7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4.7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4.7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。
优选地,作为盐溶液施加该盐,例如使用流化床。
蜡包衣可以包含按重量计至少60%的蜡,例如按重量计至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%。
蜡的具体实例是聚乙二醇;聚丙烯;巴西棕榈蜡;小烛树蜡;蜂蜡;氢化植物油或动物脂油例如聚乙二醇(PEG)、甲基羟丙基纤维素(MHPC)、聚乙烯醇(PVA)、氢化牛脂、氢化棕榈油、氢化棉籽油和/或氢化豆油;脂肪酸醇;单甘油酯和/或二甘油酯,例如甘油硬脂酸酯,其中硬脂酸酯是硬脂酸和棕榈酸的混合物;微晶蜡;石蜡;以及脂肪酸,如氢化的线性长链脂肪酸和其衍生物。优选的蜡是棕榈油或氢化棕榈油。
该颗粒可以包含核心(该核心包含本发明的LYS多肽)、一种或多种盐包衣和一种或多种蜡包衣。具有多个包衣的酶颗粒的实例示于WO 1993/07263、WO 1997/23606和WO2016/149636中。
可以产生非粉尘颗粒,例如如美国专利号4,106,991和4,661,452中所披露,并且这些颗粒可以任选地通过本领域已知的方法来包衣。这些包衣材料可以是蜡状包衣材料和成膜包衣材料。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇,PEG);具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚;乙氧基化脂肪醇,其中所述醇含有12至20个碳原子,并且其中存在15至80个环氧乙烷单元;脂肪醇;脂肪酸;以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。
该颗粒可以进一步包含一种或多种另外的酶。然后,每种酶将存在于更多颗粒中,确保酶的更均匀分布,并且还由于不同的粒度而减少不同酶的物理分离。用于产生多酶共颗粒的方法披露于ip.com公开内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒配制酶的另一个实例披露于WO 2013/188331中。
本发明还涉及根据EP 238,216中披露的方法制备的受保护的酶。
因此,在一个另外的方面,本发明提供了颗粒,其包含:
(a)核心,该核心包含根据本发明的具有溶菌酶活性的LYS多肽,和
(b)由包围该核心的一个或多个层组成的包衣。
在一个实施例中,该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中,该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中,该包衣包含盐包衣,然后是本文所述的蜡包衣。
动物饲料添加剂
本发明还涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽的动物饲料添加剂。因此,在一个实施例中,本发明涉及包含LYS多肽的动物饲料添加剂,其中:
(a)该多肽具有溶菌酶活性;
(b)该多肽包含一个或多个LAD催化结构域;以及
(c)当使用SEQ ID NO:46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为170,并且其中通过利用HMM确定溶菌酶增强结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询。
在一个实施例中,该多肽进一步包含一个或多个溶菌酶增强结构域,其中当使用SEQ ID NO:188至316和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该溶菌酶增强结构域的domT评分至少为100,并且其中使用hmmscan软件程序执行该查询。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分是至少175,优选至少180,更优选至少185,甚至更优选至少190,甚至更优选至少195,或最优选至少200。在一个实施例中,LED的domT评分是至少103,优选至少106,更优选至少109,更优选至少112,更优选至少115,更优选至少118,甚至更优选至少121,或最优选至少124。domT评分的优选组合如本发明的第一方面中所披露。
在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
在另一方面,本发明涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽的动物饲料添加剂,其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(p)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQID NO:45,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(q)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;
(r)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;以及
(s)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽的片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90%。
在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
在一个实施例中,该多肽是真菌来源的。在一个实施例中,该多肽获得自或可获得自分类学子囊菌门,优选分类学盘菌亚门。
在一个实施例中,动物饲料添加剂中的酶含量按重量计介于0.001%与10%的组合物的量之间。
在一个实施例中,该动物饲料添加剂包含一种或多种配制剂,优选如上文所述。
在一个实施例中,该动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶,优选如下文所述。
在一个实施例中,该动物饲料添加剂包含一种或多种益生菌,优选如下文所述。
在一个实施例中,该动物饲料添加剂包含一种或多种维生素,优选如下文所述。
在一个实施例中,该动物饲料添加剂包含一种或多种矿物质,优选如下文所述。
在一个实施例中,该动物饲料添加剂包含一种或多种氨基酸,优选如下文所述。
在一个实施例中,该动物饲料添加剂包含一种或多种益生元,优选如下文所述。
在一个实施例中,该动物饲料添加剂包含一种或多种有机酸,优选如下文所述。
在一个实施例中,该动物饲料添加剂包含一种或多种植生素,优选如下文所述。
动物饲料
本发明还涉及包含一种或多种本发明溶菌酶的动物饲料组合物。在一个实施例中,本发明涉及包含如本文所述的颗粒和植物基材料的动物饲料。在一个实施例中,本发明涉及包含如本文所描述的动物饲料添加剂以及植物基材料的动物饲料。
动物饲料组合物或饮食具有相对高的蛋白含量。家禽和猪饮食可以如WO 01/58275的表B第2-3栏所示来表征。鱼饮食可以如表B第4栏所示来表征。此外,此类鱼饮食通常具有200-310g/kg的粗脂肪含量。
根据本发明的动物饲料组合物具有的粗蛋白含量为50-800g/kg,此外还包含至少一种本文所要求的具有溶菌酶活性的多肽。
此外或在(上述粗蛋白含量)的替代方案中,本发明的动物饲料组合物具有10-30MJ/kg的可代谢能量;和/或0.1-200g/kg的钙含量;和/或0.1-200g/kg的有效磷含量;和/或0.1-100g/kg的甲硫氨酸含量;和/或0.1-150g/kg的甲硫氨酸加半胱氨酸含量;和/或0.5-50g/kg的赖氨酸含量。
在具体实施例中,可代谢能量、粗蛋白、钙、磷、甲硫氨酸、甲硫氨酸加半胱氨酸和/或赖氨酸的含量落入WO 01/58275表B中的范围2、3、4或5(R.2-5)中的任何一个内。
粗蛋白以氮(N)乘以系数6.25计算,即粗蛋白(g/kg)=N(g/kg)x 6.25。通过凯氏定氮法(Kjeldahl method)测定氮含量(A.O.A.C.,1984,Official Methods of Analysis[官方分析方法]第14版,Association of Official Analytical Chemists[官方分析化学家集],华盛顿特区)。
可代谢能量可根据如下进行计算:NRC出版物Nutrient requirements in swine[猪的营养需求],第九次再版1988,subcommittee on swine nutrition,committee onanimal nutrition,board of agriculture,national research council[美国国家研究委员会农业部动物营养协会猪营养分会].美国国家科学院出版社[National AcademyPress],华盛顿特区,第2-6页;以及欧洲家禽饲养材料能量值表(European Table ofEnergy Values for Poultry Feed-stuffs),斯克得霍特家禽研究与推广中心[Spelderholt centre for poultry research and extension],7361DA贝克贝亨,荷兰,Grafisch bedrijf Ponsen&looijen bv,瓦赫宁恩[Wageningen].ISBN 90-71463-12-5。
根据诸如Veevoedertabel 1997,gegevens over chemische samenstelling,verteerbaarheid en voederwaarde van voedermiddelen,Central Veevoederbureau,Runderweg 6,8219pk Lelystad.ISBN 90-72839-13-7等饲料表计算在动物全饮食中的钙、有效磷和氨基酸的膳食含量。
在一个具体实施例中,本发明的动物饲料组合物包含如上定义的至少一种植物蛋白。
本发明的动物饲料组合物还可以含有动物蛋白,例如肉和骨粉、羽毛粉和/或鱼粉,通常量为0-25%。本发明的动物饲料组合物还可以包含具有可溶物的干酒糟(DriedDistillers Grains with Solubles,DDGS),通常量为0-30%。
在再进一步具体的实施例中,本发明的动物饲料组合物含有0-80%玉蜀黍;和/或0-80%高粱;和/或0-70%小麦;和/或0-70%大麦;和/或0-30%燕麦;和/或0-40%豆粕;和/或0-25%鱼粉;和/或0-25%肉和骨粉;和/或0-20%乳清。
该动物饲料可以包含植物蛋白。在具体实施例中,这些植物蛋白的蛋白含量是至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%(w/w)。植物蛋白可以衍生自植物蛋白来源,例如豆类和谷类,例如得自蝶形花科(豆科)、十字花科、藜科和早熟禾科植物的材料,如大豆粉饼、羽扇豆粉饼、油菜籽粉饼及其组合。
在一个具体实施例中,该植物蛋白来源是来自豆科的一种或多种植物(例如大豆、羽扇豆、豌豆或菜豆)的材料。在另一个具体实施例中,植物蛋白来源是得自藜科的一种或多种植物,例如甜菜、糖甜菜、菠菜或奎奴亚藜的材料。植物蛋白来源的其他实例是油菜和卷心菜。在另一个具体实施例中,大豆是优选的植物蛋白来源。植物蛋白来源的其他实例是谷物,例如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、稻和高粱。
可以将动物饮食制成例如粉状饲料(非丸粒化)或丸粒状饲料。通常,混合研磨的饲料并根据所讨论的种类的说明添加充足量的必需维生素和矿物质。作为固体或液体酶配制品添加酶。例如,对于粉状饲料,在成分混合步骤前或期间可以添加固体或液体酶配制品。对于丸粒状饲料而言,也可以在饲料成分步骤之前或过程中添加该(液体或固体)溶菌酶/酶制剂。典型地,液体溶菌酶/酶制剂包含本发明的具有溶菌酶活性的多肽,任选地伴随着多元醇(例如甘油、乙二醇或丙二醇),并且是在丸粒化步骤后添加,例如通过将该液体配制品喷涂至丸粒上。也可以将该酶掺入饲料添加剂或预混物中。
可替代地,可以通过冷冻液体酶溶液与填充剂(例如研磨的豆粕)的混合物,并且然后冻干该混合物,来制备具有溶菌酶活性的多肽。
饮食中的最终酶浓度在0.01-200mg酶蛋白/kg饮食的范围内,优选在0.05-100mg/kg饮食之间,更优选0.1-50mg,甚至更优选0.2-20mg酶蛋白/kg动物饮食。
目前预期按一种或多种以下量(剂量范围)施用所述酶:0.01-200;0.05-100;0.1-50;0.2-20;0.1-1;0.2-2;0.5-5;或1-10;-所有这些范围都以每kg饲料中LYS多肽蛋白的mg数(ppm)计。
为了确定每kg饲料中LYS多肽蛋白的mg数,从饲料组合物中纯化LYS多肽,并且使用相关试验(参见溶菌酶活性)确定经纯化的LYS多肽的比活性。使用相同试验测定该饲料组合物的溶菌酶活性,并且在这两次测定的基础上计算出以每kg饲料中溶菌酶蛋白的mg数计的剂量。
在一个具体实施例中,本发明的动物饲料添加剂意欲以0.01%至10.0%,更特别地0.05%至5.0%或0.2%至1.0%(%意指g添加剂/100g饲料)的水平包含(或规定为必须包含)在动物饮食或饲料中。具体地说,对预混物也是如此。
应用相同的原理确定饲料添加剂中的LYS多肽蛋白的mg数。当然,如果可获得用于制备祠料添加剂或饲料的LYS多肽样品,就从该样品确定比活性(不必从饲料组合物或添加剂中纯化该LYS多肽)。
因此,在另一方面,本发明还涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽和植物基材料的动物饲料。在另一方面,本发明还涉及包含本发明的动物饲料添加剂(如上所述)和植物基材料的动物饲料。
在一个实施例中,本发明涉及包含植物基材料和LYS多肽的动物饲料,其中该多肽(a)具有溶菌酶活性,并且(b)包含一个或多个LAD催化结构域;其中,当使用SEQ ID NO:46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型(HMM)查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为180,并且其中通过利用HMM确定LAD催化结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询。
在一个实施例中,该多肽进一步包含一个或多个溶菌酶增强结构域,其中当使用SEQ ID NO:188至316和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该溶菌酶增强结构域的domT评分至少为100,并且其中通过确定溶菌酶的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询。
在一个实施例中,LAD催化结构域的domT评分是至少175,优选至少180,更优选至少185,甚至更优选至少190,甚至更优选至少195,或最优选至少200。在一个实施例中,LED的domT评分是至少103,优选至少106,更优选至少109,更优选至少112,更优选至少115,更优选至少118,甚至更优选至少121,或最优选至少124。domT评分的优选组合如本发明的第一方面中所披露。
在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
在另一方面,本发明涉及包含植物基材料和一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽的动物饲料,其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80%,例如至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的多肽;
(p)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQID NO:45,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(q)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;
(r)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;以及
(s)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽的片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90%。
在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。在一个实施例中,LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317)和一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318),LED包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
在一个实施例中,该多肽是真菌来源的。在一个实施例中,该多肽获得自或可获得自分类学子囊菌门,优选分类学盘菌亚门。
在一个实施例中,该植物基材料选自由以下组成的组:豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜(oilseed rape)、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式(例如豆粕、油菜籽粕)或其任何组合。
在另外的实施例中,该动物饲料是已经丸粒化的。
另外的酶
在另一个实施例中,本文描述的组合物任选地包含一种或多种酶。可以根据handbook Enzyme Nomenclature[酶命名手册](来自NC-IUBMB,1992)对酶进行分类,还参见因特网上的ENZYME网站:http://www.expasy.ch/enzyme/。ENZYME是相对于酶命名法的信息储库。它主要基于国际生物化学和分子生物学联合会命名委员会(IUB-MB),AcademicPress,Inc.[学术出版社公司],1992的推荐并且描述了所表征的酶的每种类型,为所述酶提供EC(酶委员会)编号(Bairoch A.The ENZYME database[酶数据库],2000,NucleicAcids Res[核酸研究]28:304-305)。这种IUB-MB酶命名法是基于它们的底物特异性,有时基于它们的分子机制;这种分类不反映这些酶的结构特征。
在Henrissat等人的“The carbohydrate-active enzymes database(CAZy)in2013[2013年的碳水化合物活性酶数据库(CAZy)]”,Nucl.Acids Res.[核酸研究](2014年1月1日)42(D1):D490-D495中描述了某些糖苷水解酶(例如内切葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、溶菌酶和半乳糖苷酶)的另一种分类;还参见www.cazy.org。
因此,本发明的组合物还可以包含选自下组的至少一种其他的酶,该组由以下组成:植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26);木聚糖酶(EC 3.2.1.8);半乳聚糖酶(EC 3.2.1.89);α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22);蛋白酶(EC 3.4);磷脂酶A1(EC 3.1.1.32);磷脂酶A2(EC3.1.1.4);溶血磷脂酶(EC 3.1.1.5);磷脂酶C(3.1.4.3);磷脂酶D(EC 3.1.4.4);淀粉酶,如例如α-淀粉酶(EC 3.2.1.1);阿拉伯呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55);β-木糖苷酶(EC3.2.1.37);乙酰木聚糖酯酶(EC 3.1.1.72);阿魏酸酯酶(EC 3.1.1.73);纤维素酶(E.C.3.2.1.4);纤维二糖水解酶(EC 3.2.1.91);β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.21);支链淀粉酶(EC 3.2.1.41)、α-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.24)、甘露聚糖酶(EC 3.2.1.25)和β-葡聚糖酶(EC 3.2.1.4或EC 3.2.1.6),或其任何混合物。
在一个具体实施例中,本发明的组合物包含植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26)。可商购的植酸酶的实例包括Bio-FeedTM植酸酶(诺维信公司(Novozymes))、P、NP和/>HiPhos(帝斯曼营养产品公司(DSM NutritionalProducts))、NatuphosTM(巴斯夫公司(BASF))、NatuphosTM E(巴斯夫公司)、/>Blue(AB酶公司(AB Enzymes))、/>(浩卫制药公司(Huvepharma))、Phytase(Aveve Biochem公司)、/>XP(范恩尼姆/杜邦公司(Verenium/DuPont))以及/>PHY(杜邦公司(DuPont))。其他优选的植酸酶包括描述于例如WO 98/28408、WO 00/43503和WO 03/066847中的那些。
在一个具体实施例中,本发明的组合物包含木聚糖酶(EC 3.2.1.8)。可商购的木聚糖酶的实例包括WX(帝斯曼营养产品公司)、/>XT和Barley(ABVista公司)、/>(范恩尼姆公司(Verenium))、/>X(浩卫制药公司)、XB(木聚糖酶/β-葡聚糖酶,杜邦公司)和/>XAP(木聚糖酶/淀粉酶/蛋白酶,杜邦公司)、/>XG 10(木聚糖酶/葡聚糖酶)和/>02CS(木聚糖酶/葡聚糖酶/果胶酶,Aveve Biochem公司)以及Naturgrain(巴斯夫公司)。
在一个具体实施例中,本发明的组合物包含蛋白酶(EC 3.4)。可商购的蛋白酶的实例包括ProAct(帝斯曼营养产品公司)。
在一个具体实施例中,本发明的组合物包含α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)。可商购的α-淀粉酶的实例包括A和/>RumiStarTM(帝斯曼营养产品公司)。/>
在一个实施例中,本发明的组合物包含多组分酶产品,如Octazyme(Framelco公司)、/>G2、/>VP和/>MultiGrain(帝斯曼营养产品公司)、/>Excel或/>Advance(安迪苏公司(Adisseo))。
摄生品
摄生品(eubiotic)是意欲在胃肠道中提供微生物菌群的健康平衡的化合物。摄生品包括许多不同的饲料添加剂,例如益生菌、益生元、植生素(精油)和有机酸,其在下面更详细地描述。
益生菌
在一个实施例中,该动物饲料组合物进一步包含一种或多种另外的益生菌。在一个具体实施例中,该动物饲料组合物进一步包含来自以下一个或多个属的细菌:乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、肠球菌属、明串珠菌属、肉食杆菌属、丙酸杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属和巨型球菌或其任何组合。
在一个优选的实施例中,动物饲料组合物进一步包含来自以下一种或多种菌株的细菌:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双歧杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双歧杆菌动物亚种(Bifidobacterium animalis ssp.animalis)、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius ssp.salivarius)、埃氏巨型球菌、丙酸杆菌属物种。
在一个更优选的实施例中,组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种枯草芽孢杆菌菌株的细菌:3A-P4(PTA-6506)、15A-P4(PTA-6507)、22C-P1(PTA-6508)、2084(NRRL B-500130)、LSSA01(NRRL-B-50104)、BS27(NRRL B-501 05)、BS 18(NRRL B-50633)、BS 278(NRRL B-50634)、DSM 29870、DSM 29871、DSM 32315、NRRL B-50136、NRRL B-50605、NRRL B-50606、NRRL B-50622以及PTA-7547。
在一个更优选的实施例中,组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种短小芽孢杆菌菌株的细菌:NRRL B-50016、ATCC 700385、NRRL B-50885或NRRL B-50886。
在一个更优选的实施例中,组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种地衣芽孢杆菌菌株的细菌:NRRL B 50015、NRRL B-50621或NRRL B-50623。
在一个更优选的实施例中,组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种解淀粉芽孢杆菌菌株的细菌:DSM 29869、DSM 29869、NRRL B 50607、PTA-7543、PTA-7549、NRRL B-50349、NRRL B-50606、NRRL B-50013、NRRL B-50151、NRRL B-50141、NRRL B-50147或NRRL B-50888。
该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 104和1x 1014CFU/kg的干物质之间,优选在1x 106和1x 1012CFU/kg的干物质之间,并且更优选在1x 107至1x1011CFU/kg的干物质之间。在一个更优选的实施例中,该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 108和1x 1010CFU/kg的干物质之间。
该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 105和1x 1015CFU/动物/天之间,优选在1x 107和1x 1013CFU/动物/天之间,并且更优选在1x 108和1x 1012CFU/动物/天之间。在一个更优选的实施例中,该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x109和1x 1011CFU/动物/天之间。在一个实施例中,益生菌的量按重量计为组合物的0.001%至10%。
在另一个实施例中,该一种或多种细菌菌株以稳定的孢子形式存在。
商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司)、Alterion(安迪苏公司)、Enviva PRO(杜邦动物营养公司(DuPont Animal Nutrition))、/>(混合酶+益生菌,杜邦动物营养公司)、/>和/>(Norel/Evonik)以及/>PY1(赢创公司(Evonik))。
益生元
益生元是诱导微生物(例如,细菌和真菌)生长或活动的物质,其有助于宿主的健康。益生元通常是不可消化的纤维化合物,其未消化地通过胃肠道的上部并刺激通过充当它们的底物而定殖大肠的有利细菌的生长或活动。通常,益生元增加胃肠(GI)道中双歧杆菌和乳酸菌的数量或活动。
酵母衍生物(灭活的整个酵母或酵母细胞壁)也可以被认为是益生元。它们通常包括甘露寡糖、酵母β-葡聚糖或蛋白质内容物,并且通常衍生自酵母(酿酒酵母)的细胞壁。
在一个实施例中,益生元的量按重量计为组合物的0.001%至10%。酵母产品的实例是和Agrimos(拉曼动物营养公司(Lallemand Animal Nutrition))。
植生素
植生素是一组来自草药、香料或其他植物的用作饲料添加剂的天然生长促进剂或非抗生素生长促进剂。植生素可以是由精油/提取物、精油/提取物、单一植物和植物混合物(草药产品)或精油/提取物/植物的混合物(专门产品)制备的单一物质。
植生素的实例是迷迭香、鼠尾草、牛至、百里香、丁香和柠檬草。精油的实例是百里酚、丁香酚、间甲酚、香草醛、水杨酸酯、间苯二酚、邻甲氧基苯酚(guajacol)、姜酚、薰衣草油、紫罗酮、鸢尾酮、桉叶油素、薄荷醇、薄荷油、α-蒎烯、柠檬烯、茴香脑、芳樟醇、二氢茉莉酸甲酯、香芹酚、丙酸/丙酸酯、乙酸/乙酸酯、丁酸/丁酸酯、迷迭香油、丁香油、香叶醇、萜品醇、香茅醇、水杨酸戊酯和/或水杨酸苄酯、肉桂醛、植物多酚(单宁)、姜黄和姜黄提取物。
在一个实施例中,植生素的量按重量计为组合物的0.001%至10%。商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司)、CinergyTM、BiacidTM、ProHacidTM Classic和ProHacidTM AdvanceTM(all Promivi公司/嘉吉公司(Cargill))以及Envivo EO(杜邦动物营养公司(DuPont Animal Nutrition))。
有机酸
有机酸(C1-C7)在自然界中作为植物或动物组织的正常成分广泛分布。它们也通过主要在大肠中的碳水化合物的微生物发酵形成。它们通常在猪和家禽生产中用作抗生素生长促进剂的替代品,因为它们对鸡的坏死性肠炎和仔猪的大肠杆菌感染等肠道问题具有预防作用。有机酸可以作为单组分或通常2或3种不同有机酸的混合物出售。有机酸的实例是丙酸、甲酸、柠檬酸、乳酸、山梨酸、苹果酸、乙酸、富马酸、苯甲酸、丁酸和酒石酸或其盐(通常是钠或钾盐、如二甲酸钾或丁酸钠)。
在一个实施例中,有机酸的量按重量计为组合物的0.001%至10%。商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司)、/> (巴斯夫公司)、正丁酸AF(OXEA)以及Adimix Precision(Nutriad公司)。
预混物
将如上文示例的饲料添加剂的组合物掺入动物饲料(例如家禽饲料)中在实践中是使用浓缩剂或预混物进行的。预混物是指一种或多种微小成分与稀释剂和/或载体的优选均匀的混合物。预混物用于促进微小成分在较大混合物中均匀分散。根据本发明的预混物可以作为固体(例如作为水溶性粉末)或液体添加到饲料成分或饮用水中。
氨基酸
本发明的组合物可以进一步包含一种或多种氨基酸。用于动物饲料的氨基酸的实例是赖氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。在一个实施例中,氨基酸的量按重量计为组合物的0.001%至10%。
维生素和矿物质
在另一个实施例中,该动物饲料可以包含一种或多种维生素,如一种或多种脂溶性维生素和/或一种或多种水溶性维生素。在另一个实施例中,该动物饲料可以任选地包含一种或多种矿物质,如一种或多种痕量矿物质和/或一种或多种常量矿物质。
通常,脂溶性维生素和水溶性维生素、以及痕量矿物质形成了一种所谓的旨在添加到饲料中的预混物的部分,而常量矿物质通常被分开地添加到饲料中。
脂溶性维生素的非限制性实例包括维生素A、维生素D3、维生素E、以及维生素K,例如维生素K3。
水溶性维生素的非限制性实例包括维生素C、维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸盐,例如Ca-D-泛酸盐。
痕量矿物质的非限制性实例包括硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、、碘、硒和锌。
常量矿物质的非限制性实例包括钙、镁、磷、钾和钠。
在一个实施例中,维生素的量按重量计为组合物的0.001%至10%。在一个实施例中,矿物质的量按重量计为组合物的0.001%至10%。
这些组分的营养需求(以家禽和仔猪/猪为例)列于WO 01/58275的表A中。营养需求意指应在饮食中提供指定浓度的这些组分。
在替代方案中,本发明的动物饲料添加剂包含WO 01/58275的表A中指定的单独组分中的至少一种。至少一种意指一种或两种或三种或四种等直至所有十三种或直至所有十五种单独组分中的任一种、一种或多种。更具体地,此至少一种单独组分以提供在表A的第四栏或第五栏或第六栏说明的范围内的饲料中浓度(in-feed-concentration)的量包含在本发明的添加剂内。
在一个仍另外的实施例中,本发明的动物饲料添加剂包含至少一种以下维生素,优选以提供落入下表1中所限定的范围之内(分别针对仔猪饮食和肉鸡饮食)的饲料中浓度。
表1:典型维生素推荐
维生素 仔猪饮食 肉鸡饮食
维生素A 10,000-15,000IU/kg饲料 8-12,500IU/kg饲料
维生素D3 1800-2000IU/kg饲料 3000-5000IU/kg饲料
维生素E 60-100mg/kg饲料 150-240mg/kg饲料
维生素K3 2-4mg/kg饲料 2-4mg/kg饲料
维生素B1 2-4mg/kg饲料 2-3mg/kg饲料
维生素B2 6-10mg/kg饲料 7-9mg/kg饲料
维生素B6 4-8mg/kg饲料 3-6mg/kg饲料
维生素B12 0.03-0.05mg/kg饲料 0.015-0.04mg/kg饲料
烟酸(维生素B3) 30-50mg/kg饲料 50-80mg/kg饲料
泛酸 20-40mg/kg饲料 10-18mg/kg饲料
叶酸 1-2mg/kg饲料 1-2mg/kg饲料
生物素 0.15-0.4mg/kg饲料 0.15-0.3mg/kg饲料
氯化胆碱 200-400mg/kg饲料 300-600mg/kg饲料
其他饲料成分
本发明的组合物可以进一步包含着色剂、稳定剂、生长改善添加剂和芳香化合物/调味品、多不饱和脂肪酸(PUFA)、活性氧产生物质、抗氧化剂、抗微生物肽、抗真菌多肽以及霉菌毒素控制化合物。
着色剂的实例是类胡萝卜素,例如β-胡萝卜素、虾青素和叶黄素。
芳香化合物/调味品的实例是甲氧甲酚,茴香脑,十、十一和/或十二内酯、紫罗酮、鸢尾酮、姜酚、哌啶、亚丙基苯酞(propylidene phatalide)、亚丁基苯酞(butylidenephatalide)、辣椒素和单宁。
抗微生物肽(AMP)的实例是CAP18、林可霉素(Leucocin)A、三色肽(Tritrpticin)、Protegrin-1、死亡素(Thanatin)、防卫素、乳铁蛋白、乳铁蛋白肽和奥维司匹林(Ovispirin)如诺维司匹林(Novispirin)(Robert Lehrer,2000)、菌丝霉素(Plectasin)和他汀(包括在WO 03/044049和WO 03/048148中披露的化合物和多肽)以及以上的保留抗微生物活性的变体或片段。
抗真菌多肽(AFP)的实例是巨大曲霉和黑曲霉的肽连同其保留抗真菌活性的变体和片段,如在WO 94/01459和WO 02/090384中披露的。
多不饱和脂肪酸的实例为C18、C20和C22多不饱和脂肪酸,例如花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和γ-亚油酸。
活性氧产生物质的实例为例如过硼酸盐、过硫酸盐或过碳酸盐等化学品;以及例如氧化酶、氧合酶或合成酶等酶。
抗氧化剂可以用于限制可产生的活性氧物质的数量,使得活性氧物质的水平与抗氧化剂平衡。
霉菌毒素(例如脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和伏马菌素)可以在动物饲料中发现,并且可以导致消极的动物性能或疾病。可以将能够例如通过霉菌毒素的失活或通过霉菌毒素的结合控制霉菌毒素水平的化合物添加到饲料中以改善这些负面影响。霉菌毒素控制化合物的实例是Vitafix Ultra(核科学公司(Nuscience))、/>Secure、/>BBSH、/>MTV(百奥明公司(Biomin))、/>以及/>Plus(Nutriad公司)。
用途
在动物饲料中的用途
本发明的LYS多肽也可用于动物饲料,其中术语“动物”是指除人以外的所有动物。动物的实例是单胃动物,例如猪(pig或swine)(包括但不限于仔猪、成长猪和母猪);家禽(包括但不限于家禽、火鸡、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽、雏鸟、小鸡、肉鸡、下蛋鸡、小母鸡和小鸡);鱼(包括但不限于琥珀鱼、巨滑舌鱼、魮鱼、鲈鱼、蓝鱼、菖鲉(bocachico)、鲤科鱼、鲶鱼、卡叉马鱼(cachama)、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉鱼、遮目鱼、嘉鱼、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、瓜波特鱼(guapote)、大比目鱼、爪哇鱼(java)、野鲮属鱼、莱鱼(lai)、泥鳅、鲭鱼、牛奶鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕高鱼(paco)、珍珠斑点鱼(pearlspot)、佩杰瑞鱼(pejerrey)、河鲈鱼、狗鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、鲑鱼、虾米鱼(sampa)、加拿大鰤鲈、黑鲈、海鲤、发光鱼(shiner)、睡鲨(sleeper)、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、比目鱼、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼(sweetfish)、丁鲷、特罗尔鱼(terror)、罗非鱼、鳟鱼、鲔鱼、多宝鱼、白鳟鱼、白斑鱼和白鱼);以及甲壳动物(包括但不限于虾和对虾)。
在根据本发明的用途中,该LYS多肽可在饮食前、后或同时喂饲给动物。优选后者。
在一个具体实施例中,以一定形式加入饲料或包括在饲料添加剂中时,该LYS多肽是被明确限定的。明确限定指的是如经大小排阻色谱法(参见WO 01/58275的实例12)确定的,该LYS多肽制剂至少为50%纯。在其他具体实施例中,如经此方法确定的,该LYS多肽制剂至少为60%、70%、80%、85%、88%、90%、92%、94%纯,或至少为95%纯。
明确限定的LYS多肽制剂是有利的。例如,对于实质上不受其他溶菌酶干扰或污染的LYS多肽而言,更容易确定它在饲料中的正确剂量。术语正确地给料(dose correctly)具体是指得到一致且恒定的结果的目标,和基于所希望的效果优化剂量的能力。
然而,为了在动物饲料中使用,该LYS多肽不必是纯的;它可例如包括其他酶,在此情况下它可被定义为LYS多肽制剂。
该LYS多肽制剂可以(a)直接添加到饲料中,或者(b)它可以用于随后添加到饲料(或者用于处理过程中)中的一种或多种中间组合物(如饲料添加剂或预混物)的生产。上述纯化的程度是指根据上述(a)或(b)使用的原始LYS多肽制剂的纯度。
改善动物性能的方法
在一个实施例中,本发明还涉及改善动物性能的方法,该方法包括向动物施用本发明的动物饲料或动物饲料添加剂。
在一个优选的实施例中,改善动物性能的方法包括向动物施用本发明的包含LYS多肽的动物饲料或动物饲料添加剂。在一个实施例中,该LYS多肽选自由以下组成的组:SEQID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:42和SEQ ID NO:45。
在一个实施例中,本发明还涉及本发明的动物饲料或动物饲料添加剂用于改善动物的性能的用途。在另一个实施例中,本发明涉及本发明的一种或多种溶菌酶用于改善动物的性能的用途。
在一个实施例中,“改善动物的性能”意指存在体增重的增加。在另一个实施例中,“改善动物的性能”意指存在改善的饲料转化率。在另外的实施例中,“改善动物的性能”意指存在增加的饲料效率。在另外的实施例中,“改善动物的性能”意指存在体增重的增加和/或改善的饲料转化率和/或增加的饲料效率。
在一个实施例中,该动物饲料包含选自由以下组成的组的植物基材料:豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或者其任何组合。
制备动物饲料的方法
在一个实施例中,本发明提供了一种用于制备动物饲料的方法,该方法包括将本发明的一种或多种LYS多肽添加至一种或多种动物饲料成分中。动物饲料成分包括但不限于浓缩物(如本文所定义)、草料(如本文所定义)、酶、益生菌、维生素、矿物质和氨基酸。
在一个优选实施例中,制备动物饲料的方法包括将植物基材料与本发明的LYS多肽混合。在一个实施例中,该LYS多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:45。
在一个实施例中,该植物基材料选自由以下组成的组:豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或其任何组合。
优选实施例
以下是本发明优选实施例的列表。
1.一种组合物,该组合物包含至少0.01mg LYS多肽/千克组合物,其中该多肽(a)具有溶菌酶活性,并且(b)包含一个或多个LAD催化结构域;其中,当使用SEQ ID NO:46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型(HMM)查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为180,适当地其中通过利用HMM确定LAD催化结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询;
2.如项目1所述的组合物,其中该多肽进一步包含一个或多个溶菌酶增强结构域,其中当使用SEQ ID NO:188至316和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该溶菌酶增强结构域的domT评分至少为100,并且其中通过确定溶菌酶增强结构域的方法,使用hmmscan软件程序执行该查询。
3.如项目1至2中任一项所述的组合物,其中
(a)该LAD催化结构域包含一个或多个基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQID NO:317)和/或一个或多个基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318);和/或
(b)该溶菌酶增强结构域包含一个或多个基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
4.一种组合物,该组合物包含一种或多种具有溶菌酶活性的LYS多肽,其中将该多肽以至少0.01mg多肽/千克组合物给予,并且该多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80%序列同一性的多肽;
(p)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQID NO:45,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(q)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;
(r)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸;以及
(s)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)或(p)的多肽的片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90%。
5.如项目4所述的组合物,其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少85%序列同一性的多肽;以及
(p)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQID NO:45,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
6.如项目4所述的组合物,其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少90%序列同一性的多肽;以及
(p)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQID NO:45,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
7.如项目4所述的组合物,其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少95%序列同一性的多肽;以及
(p)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42和SEQID NO:45,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
8.如项目4至7中任一项所述的组合物,其中该LYS多肽包含一个或多个选自由以下组成的组的基序:
(a)基序I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO:317);
(b)基序II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO:318);以及
(c)基序III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO:319)。
9.如项目1至8中任一项所述的组合物,其中该多肽是真菌来源的。
10.如项目1至9中任一项所述的组合物,其中该多肽获得自或可获得分类学子囊菌门,优选分类学盘菌亚门。
11.如项目1至10中任一项所述的组合物,其中该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至226、SEQ ID NO:3的氨基酸1至226、SEQ ID NO:5的氨基酸1至226、SEQ ID NO:6的氨基酸1至226、SEQ ID NO:8的氨基酸1至223、SEQ ID NO:9的氨基酸1至223、SEQ ID NO:11的氨基酸1至304、SEQ ID NO:12的氨基酸1至304、SEQ ID NO:14的氨基酸1至228、SEQ ID NO:15的氨基酸1至228、SEQ ID NO:17的氨基酸1至230、SEQ ID NO:18的氨基酸1至230、SEQ ID NO:20的氨基酸1至230、SEQ ID NO:21的氨基酸1至230、SEQ ID NO:23的氨基酸1至232、SEQ IDNO:24的氨基酸1至232、SEQ ID NO:26的氨基酸1至228、SEQ ID NO:27的氨基酸1至228、SEQID NO:29的氨基酸1至228、SEQ ID NO:30的氨基酸1至228、SEQ ID NO:32的氨基酸1至226、SEQ ID NO:33的氨基酸1至226、SEQ ID NO:35的氨基酸1至225、SEQ ID NO:36的氨基酸1至225、SEQ ID NO:38的氨基酸1至225、SEQ ID NO:39的氨基酸1至225、SEQ ID NO:41的氨基酸1至304、SEQ ID NO:42的氨基酸1至304、SEQ ID NO:44的氨基酸1至227或SEQ ID NO:45的氨基酸1至227或由其组成。
12.如项目1至11中任一项所述的组合物,该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
13.如项目12所述的组合物,其中该一种或多种配制剂选自由以下组成的组:甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土、麦芽糊精、环糊精、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐和纤维素或其任何组合。
14.如项目1至13中任一项所述的组合物,该组合物进一步包含一种或多种另外的酶。
15.如项目14所述的组合物,其中该一种或多种另外的酶选自由以下组成的组:乙酰木聚糖酯酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、脂肪酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酶、果胶裂解酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
16.如项目1至15中任一项所述的组合物,该组合物进一步包含一种或多种微生物。
17.如项目16所述的组合物,其中该一种或多种微生物选自由以下组成的组:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
18.如项目1至17中任一项所述的组合物,该组合物进一步包含选自以下列表的一种或多种组分,该列表由以下组成:
一种或多种维生素;
一种或多种矿物质;
一种或多种氨基酸;
一种或多种植生素;
一种或多种益生元;
一种或多种有机酸;以及
一种或多种其他饲料成分。
19.一种颗粒,该颗粒包含如项目1至18中任一项所述的组合物。
20.如项目19所述的颗粒,其中将该颗粒包衣。
21.如项目20所述的颗粒,其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
22.一种动物饲料添加剂,该动物饲料添加剂包含如项目1至18中任一项所述的组合物或如项目19至21中任一项所述的颗粒。
23.一种动物饲料,该动物饲料包含植物基材料和如项目1至18中任一项所述的组合物、如项目19至21中任一项所述的颗粒或如项目22所述的动物饲料添加剂。
24.如项目23所述的动物饲料,其中该植物基材料选自由以下组成的组:豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或其任何组合。
25.一种丸粒状动物饲料,该丸粒状动物饲料包含植物基材料和如项目1至18中任一项所述的组合物、如项目19至21中任一项所述的颗粒或如项目22所述的动物饲料添加剂。
26.如项目25所述的丸粒状动物饲料,其中该植物基材料选自由以下组成的组:豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或其任何组合。
27.一种液体配制品,该液体配制品包含如项目1至18中任一项所述的组合物。
28.如项目27所述的液体配制品,其中将该LYS多肽以0.01%至25%w/w之间的液体配制品给予,优选0.05%至20%w/w的LYS多肽,更优选0.2%至15%w/w的LYS多肽,更优选0.5%至15%w/w的LYS多肽,或最优选1.0%至10%w/w的LYS多肽。
29.如项目27至28中任一项所述的液体配制品,其中该配制品进一步包含20%至80%w/w的多元醇。
30.如项目29所述的液体配制品,其中该多元醇选自由以下组成的组:甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)或其任何组合。
31.如项目27至30中任一项所述的液体配制品,其中该配制品进一步包含0.01%至2.0%w/w的防腐剂。
32.如项目31所述的液体配制品,其中该防腐剂选自由以下组成的组:山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
33.如项目27至32中任一项所述的液体配制品,该液体配制品进一步包含选自以下列表的一种或多种组分,该列表由以下组成:
一种或多种酶;
一种或多种微生物;
一种或多种维生素;
一种或多种矿物质;
一种或多种氨基酸;
一种或多种植生素;
一种或多种益生元;
一种或多种有机酸;以及
一种或多种其他饲料成分。
34.一种制备动物饲料的方法,该方法包括将如项目27至33中任一项所述的液体配制品施加到植物基材料上。
35.如项目34所述的方法,其中该液体配制品通过喷雾施加。
36.如项目34至35中任一项所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或其任何组合。
37.如项目34至36中任一项所述的方法,其中该植物基材料处于丸粒状形式。
38.一种使用如项目34至37中任一项所述的方法制备的丸粒状动物饲料。
39.一种改善动物的一个或多个性能参数的方法,该方法包括向一只或多只动物施用如项目1至18中任一项所述的组合物、如项目19至21中任一项所述的颗粒、如项目22所述的动物饲料添加剂、如项目23至24中任一项所述的动物饲料、如项目25至26或38中任一项所述的丸粒状动物饲料或如项目27至33中任一项所述的液体配制品。
40.如项目39所述的方法,其中该性能参数选自由以下组成的列表:体增重(BWG)、欧洲生产效率因子(EPEF)和饲料转化率(FCR)或其任何组合。
41.一种制备动物饲料的方法,该方法包括将如项目1至18中任一项所述的组合物、如项目19至21中任一项所述的颗粒、如项目22所述的动物饲料添加剂、如项目23至24中任一项所述的动物饲料、如项目25至26或38中任一项所述的丸粒状动物饲料或如项目27至33中任一项所述的液体配制品与植物基材料混合。
42.如项目41所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或其任何组合。
43.如项目1至18中任一项所述的组合物、如项目19至21中任一项所述的颗粒、如项目22所述的动物饲料添加剂、如项目23至24中任一项所述的动物饲料、如项目25至26或38中任一项所述的丸粒状动物饲料或如项目27至33中任一项所述的液体配制品在以下中的用途:
在动物饲料中;
在动物饲料添加剂中;
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中;
用于改善动物饲料的营养价值;
用于提高动物饲料的消化率;和/或
用于改善动物中的一个或多个性能参数。
44.一种具有溶菌酶活性的分离的多肽,该分离的多肽选自由以下组成的组:
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少95%(例如,至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少94%(例如,至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少87%(例如,至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少81%(例如,至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少87%(例如,至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少96.2%(例如,至少97%、至少97.5%、至少98%、至少98.5%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少81%(例如,至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80%(例如,至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)序列同一性的多肽;
(o)SEQ ID NO:3的多肽的变体,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(p)SEQ ID NO:6的多肽的变体,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(q)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:36,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43或44位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(r)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:21、SEQID NO:24、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:42,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(s)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:27,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(t)多肽的变体,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:39,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41或42位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(u)SEQ ID NO:30的多肽的变体,其中该变体具有溶菌酶活性并包含在1、2、3、4、5、6、7或8位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(v)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)或(u)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;
(w)多肽,该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)或(u)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸的多肽;以及(x)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)或(u)的多肽的片段,该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90%。
45.根据项目44所述的多肽,其中该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至316、SEQID NO:3的氨基酸1至316、SEQ ID NO:4的氨基酸1至322、SEQ ID NO:6的氨基酸1至318、SEQID NO:7的氨基酸1至318、SEQ ID NO:8的氨基酸1至326、SEQ ID NO:10的氨基酸1至316、SEQ ID NO:11的氨基酸1至316、SEQ ID NO:12的氨基酸1至324、SEQ ID NO:14的氨基酸1至316、SEQ ID NO:15的氨基酸1至316、SEQ ID NO:16的氨基酸1至324、SEQ ID NO:18的氨基酸1至316、SEQ ID NO:19的氨基酸1至316、SEQ ID NO:20的氨基酸1至324、SEQ ID NO:22的氨基酸1至316、SEQ ID NO:23的氨基酸1至316、SEQ ID NO:24的氨基酸1至324、SEQ ID NO:26的氨基酸1至516、SEQ ID NO:27的氨基酸1至516、SEQ ID NO:28的氨基酸1至524、SEQ IDNO:30的氨基酸1至317、SEQ ID NO:31的氨基酸1至317、SEQ ID NO:32的氨基酸1至325、SEQID NO:34的氨基酸1至316、SEQ ID NO:35的氨基酸1至316、SEQ ID NO:36的氨基酸1至324、SEQ ID NO:38的氨基酸1至316、SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或SEQ ID NO:40的氨基酸1至324或由其组成。
46.一种编码如项目44至45中任一项所述的多肽的多核苷酸。
47.一种核酸构建体或表达载体,该核酸构建体或表达载体包含如项目46所述的多核苷酸,该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。
48.一种重组宿主细胞,该重组宿主细胞包含如项目46所述的多核苷酸,该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
49.如项目48所述的重组宿主细胞,其中该宿主是丝状真菌例如曲霉属、木霉属或镰胞属,或酵母例如毕赤酵母属或酵母属。
50.如项目49所述的重组宿主细胞,其中该宿主是曲霉属,例如泡盛曲霉、臭曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉或米曲霉。
51.如项目49所述的重组宿主细胞,其中该宿主是木霉属,例如哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉或绿色木霉。
52.如项目48所述的重组宿主细胞,其中该宿主是芽孢杆菌属,例如嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、嗜热脂肪土芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、或苏云金芽孢杆菌。
53.一种产生如项目44至45中任一项所述的多肽的方法,该方法包括:
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞,该细胞以其野生型形式产生该多肽;和
(b)回收该多肽。
54.一种产生如项目44至45中任一项所述的多肽的方法,该方法包括:
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养如项目48至52中任一项所述的重组宿主细胞;和
(b)回收该多肽。
55.一种用编码如项目44至45中任一项所述的多肽的多核苷酸转化的转基因植物、植物部分或植物细胞。
56.一种全液配制品或细胞培养组合物,该全液配制品或细胞培养组合物包含如项目44至45中任一项所述的多肽。
通过以下实例进一步描述本发明,这些实例不应理解为对本发明的范围进行限制。
实例
菌株
将购自英杰公司(Invitrogen)(美国生命技术公司(Life Technologies),卡尔斯巴德,加利福利亚州,美国)的大肠杆菌Top-10菌株用于繁殖编码LYS多肽的表达载体。
将米曲霉菌株MT3568用于LYS多肽编码序列的异源表达。米曲霉MT3568是米曲霉JaL355的amdS(乙酰胺酶)破坏的基因衍生物(WO 2002/40694),其中通过用pyrG基因破坏米曲霉乙酰胺酶(amdS)基因来恢复pyrG营养缺陷型。
通过采用PDA培养基(pH7,25C)的稀释平板法,将真菌菌株NN044175从1998年采集自中国的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN044175鉴定为简青霉。
通过采用PDA介质(pH3,25C)的稀释平板法,将真菌菌株NN053742从2011年采集自中国湖北省的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN053742鉴定为Penicillium vasconiae。
通过采用PDA培养基(pH3)的稀释平板法,将真菌菌株NN058285从2014年采集自中国贵州省的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN058285鉴定为解蛋白篮状菌。
通过采用PDA培养基(pH7,25C)的稀释平板法,将真菌菌株NN053333从2010年采集自中国湖南省的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN053333鉴定为曲霉属物种XZ2668。
真菌菌株NN058605来自CBS,登录号为CBS100492。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN058605鉴定为南极青霉。
通过采用YG培养基(pH7,37C)的稀释平板法,将真菌菌株NN047528从1998年采集自中国的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN047528鉴定为Ovatospora brasiliensis。
通过采用PDA培养基(pH7,10C)的稀释平板法,将真菌菌株NN054749从2012年采集自中国西藏的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN054749鉴定为惠灵顿青霉。
通过采用水琼脂(24C)的稀释平板法,将真菌菌株NN054129从2011年采集自瑞典哥特兰岛的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN054129鉴定为玫瑰紫青霉。
通过采用PDA培养基(pH3)的稀释平板法,将真菌菌株NN058650从2014年采集自中国贵州省的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN058650鉴定为帚青霉。
通过采用YG培养基(pH7,37C)的稀释平板法,将真菌菌株NN046949从1998年采集自中国的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN046949鉴定为霉白曲霉。
2014年通过与CAS微生物学研究所的蔡磊(Cai Lei)教授的合作获得真菌菌株NN057921。从中国收集菌株。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将该菌株鉴定为毛壳菌属物种ZY369。
通过采用PDA培养基(pH3,25C)的稀释平板法,将真菌菌株NN058427从2014年采集自中国贵州省的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将该菌株N NN058427鉴定为Talaromyces atricola。
2011年通过与CAS微生物学研究所的合作获得真菌菌株NN053773。从中国收集该菌株,并通过采用PDA培养基(pH7,10C)的稀释平板法分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN053773鉴定为粗糙短梗蠕孢。
通过采用PDA培养基(pH3,25C)的稀释平板法,将真菌菌株NN058086从2014年采集自中国贵州省的土壤样品中分离。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者,将菌株NN058086鉴定为肉色绿僵菌。
土生梭孢壳霉菌株NRRL 8126购自ATCC,并将其接种到PDA平板上,并在37℃下于黑暗中孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在37℃以150rpm振荡孵育6天。
培养基和溶液
DAP4C-1培养基由以下各项构成:0.5g酵母提取物、10g麦芽糖、20g右旋糖、11g硫酸镁七水合物、1g磷酸氢二钾、2g一水合柠檬酸、5.2g磷酸钾三元一水合物、1mL Dowfax63N10(消泡剂)、2.5g碳酸钙,补充有1mL KU6金属溶液以及去离子水补足至1000mL。
KU6金属溶液由以下各项构成:6.8g ZnCl2、2.5g CuSO4.5H2O、0.13g NiCl2、13.9gFeSO4.7H2O、8.45g MnSO4.H2O、3g C6H8O7.H2O、以及去离子水补足至1000mL。
YP 2%葡萄糖培养基由以下各项构成:10g酵母提取物、20g细菌用蛋白胨(Bacto-peptone)、20g葡萄糖、以及去离子水补足至1000mL。
LB板由以下各项构成:10g的细菌用胰蛋白胨(Bacto-tryptone)、5g的酵母提取物、10g的氯化钠、15g的细菌用琼脂(Bacto-agar)、以及去离子水补足至1000mL。
LB培养基由以下各项构成:10g的细菌用胰蛋白胨、5g的酵母提取物、和10g的氯化钠、以及去离子水补足至1000mL。
COVE-蔗糖-T平板由以下各项构成:342g的蔗糖、20g的琼脂粉、20mL的COVE盐溶液、以及去离子水补足至1000mL。将该培养基通过在15psi下高压杀菌15分钟来进行灭菌(Bacteriological Analytical Manual[细菌学分析手册],第8版,修订A,1998)。将该培养基冷却至60℃并且添加10mM乙酰胺、Triton X-100(50μL/500mL)。
COVE-N-琼脂管由以下各项构成:218g山梨醇、10g右旋糖、2.02g KNO3、25g琼脂、50mL Cove盐溶液、以及去离子水补足至1000mL。
COVE盐溶液由以下各项构成:26g的MgSO4·7H2O、26g的KCL、26g的KH2PO4、50mL的COVE痕量金属溶液、以及去离子水补足至1000mL。
COVE痕量金属溶液由以下各项构成:0.04g的Na2B4O7·10H2O、0.4g的CuSO4·5H2O、1.2g的FeSO4·7H2O、0.7g的MnSO4·H2O、0.8g的Na2MoO4·2H2O、10g的ZnSO4·7H2O、以及去离子水补足至1000mL。YPM培养基包含1%的酵母提取物、2%的蛋白胨和2%的麦芽糖。
实例1:使用还原末端测定法测定溶菌酶活性
将LYS多肽在聚丙烯管中在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐,5mM K2HPO4,0.01%TritonX-100,pH 5.0)中稀释至50μg/mL。将稀释的LYS多肽在96孔聚丙烯微量滴定板中进一步稀释至在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐,5mM K2HPO4,0.01%TritonX-100,pH 5.0)中浓度为5.0或0.7μg/mL。在聚丙烯深孔板中,将50μL LYS多肽稀释液与450μL 1%溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中冻干的溶壁微球菌ATCC号4698(Sigma M3770))混合,并在40℃下伴随振荡(500rpm)孵育45分钟。孵育后,将深孔板离心(4000g,5分钟)以沉淀不溶物质,并将100μL上清液与50μL3.2M HCl在96孔PCR板中混合,并在95℃孵育80分钟。向PCR板的每个孔中添加50μL的3.5M NaOH,并将150μL的每种样品转移到新PCR板,该新PCR板含有在酒石酸K-Na/NaOH缓冲液(50g/L酒石酸K-Na+20g/L NaOH)中的75μL/孔的4-羟基苯甲酰肼溶液。将板在95℃孵育10分钟,然后将100μL/样品转移至透明平底微量滴定板,用于405nm处的光密度(OD)测量。对三次稀释的样品(在Milli-Q水中在100μL中稀释的50μL样品)进行OD测量。
实例2:使用OD下降测定法测定溶菌酶活性
洗涤经冷冻干燥的溶壁微球菌ATCC号4698(西格玛公司),并将其悬浮于60mMKH2PO4缓冲液(pH 6.0)中,最终浓度为1%(w/v),作为底物原液。通过添加柠檬酸-Na2HPO4缓冲液来调节该菌株的浓度,直到OD450达到约1。
通过添加61.45ml 0.1M柠檬酸和38.55ml 0.2M Na2HPO4(pH 4)制备柠檬酸-Na2HPO4 pH 4缓冲液。将50μg/mL的20μL酶和200μL的在柠檬酸-Na2HPO4缓冲液(pH4)中稀释的细菌菌株溶液添加到96孔板中,混合并读取OD450。然后将板在37℃、300rpm下孵育1小时并读取OD450。1小时时间点与初始读数之间的OD差异显示了LYS多肽的OD下降活性。通过添加20ul MQ水或相应的缓冲液设置空白,并一式三份地测量每个样品。
实例3:基因组DNA提取
将简青霉菌株NN044175接种到PDA平板上,并在25℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育9天。
将Penicillium vasconiae菌株NN053742接种到PDA平板上,并在25℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育3天。
将解蛋白篮状菌菌株NN058285接种到PDA平板上,并在25℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育4天。
将曲霉属物种菌株NN053333接种到PDA平板上,并在25℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育5天。
将南极青霉菌株NN058605接种到PDA平板上,并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育4天。
将Ovatospora brasiliensis菌株NN047528接种到PDA平板上,并在37℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在37℃以160rpm振荡孵育2天。
将惠灵顿青霉菌株NN054749接种到PDA平板上,并在25℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育11天。
将玫瑰紫青霉菌株NN054129接种到PDA平板上,并在25℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育4天。
将帚青霉菌株NN058650接种到PDA平板上,并在25℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育4天。
将霉白曲霉菌株NN046949接种到PDA平板上,并在25℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育3天。
将毛壳菌属物种菌株NN057921接种到PDA平板上,并在37℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在37℃以160rpm振荡孵育8天。
通过(康碧泉公司(Calbiochem),拉霍亚,加利福尼亚州,美国)过滤来收集南极青霉菌株NN058605的菌丝,并且在液氮中冷冻。用研钵和研棒将冷冻的菌丝磨碎成细粉,并且遵循制造商的说明使用针对土壤的MP Faster DNA spin试剂盒(MP生物医疗公司(MP Biomedicals),圣安娜(Santa Ana),加利福尼亚州,美国)分离出基因组DNA。
将Talaromyces atricola菌株NN058427接种到PDA平板上,并在25℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育3天。
将粗糙短梗蠕孢菌株NN053773接种到PDA平板上,并在15℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在15℃以160rpm振荡孵育4天。
将肉色绿僵菌菌株NN058086接种到PDA平板上,并在25℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育4天。
通过(康碧泉公司,拉霍亚,加利福尼亚州,美国)过滤来收集土生梭孢壳霉的菌丝,并且在液氮中冷冻。用研钵和研棒将冷冻的菌丝磨碎成细粉,并且使用Plant Maxi试剂盒(24)(凯杰有限公司(QIAGEN GmbH),希尔登,德国)遵循制造商的说明分离出基因组DNA。
通过过滤来收集所有其他菌株的菌丝,并且在液氮中冷冻。用研钵和研棒将冷冻的菌丝磨碎成细粉,并且使用/>Plant Maxi试剂盒(24)(凯杰有限公司,希尔登,德国)遵循制造商的说明分离出基因组DNA。
实例4:基因组测序、装配与标注
将简青霉菌株NN044175的提取的基因组DNA样品传送到Exiqon A/S公司(丹麦),以使用MiSeq系统(亿明达公司(Illumina,Inc.),圣地亚哥,加利福尼亚州,美国)进行基因组测序。使用程序Idba(Peng,Yu等人,2010,Research in ComputationalMolecular Biology[计算分子生物学研究]6044:426-440.Springer Berlin Heidelberg[柏林海德尔堡斯普林格出版社]),将原始读数在丹麦诺维信公司(Novozymes)装配。
将解蛋白篮状菌菌株NN058285、南极青霉菌株NN058605、玫瑰紫青霉菌株NN054129、帚青霉菌株NN058650、霉白曲霉菌株NN046949、肉色绿僵菌菌株NN058086的提取的基因组DNA样品传送到Exiqon A/S公司,以使用MiSeq系统进行基因组测序。使用Spades程序(Anton Bankevich等人,2012,Journal of Computational Biology[计算生物学杂志],19(5):455-477),将原始读数在丹麦诺维信公司装配。
将Penicillium vasconiae菌株NN053742、Ovatospora brasiliensis菌株NN047528、粗糙短梗蠕孢菌株NN053773的提取的基因组DNA样品传送到Fasteris公司(瑞士),以使用HiSeq 2000系统(亿明达公司,圣地亚哥,加利福尼亚州,美国)进行基因组测序。使用程序Idba在丹麦诺维信公司装配原始读数。
将曲霉属物种菌株NN053333、毛壳菌属物种菌株NN057921和Talaromycesatricola菌株NN058427的提取的基因组DNA样品传送到诺维信戴维斯公司(NovozymesDavis)(美国),以使用MiSeq系统进行基因组测序。使用程序Spades在丹麦诺维信公司装配原始读数。
将惠灵顿青霉菌株NN054749的提取的基因组DNA样品传送到诺维信戴维斯公司,以使用MiSeq系统进行基因组测序。使用程序Idba在丹麦诺维信公司装配原始读数。
使用标准生物信息学方法分析装配的序列,用于基因鉴定和功能预测。使用GeneMark-ES真菌版本(Ter-Hovhannisyan V等人,2008,Genome Research[基因组研究]18(12):1979-1990)进行基因预测。基于结构同源性,使用Blastall版本2.2.10(Altschul等人,1990,Journal of Molecular Biology[分子生物学杂志]215(3):403-410),ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/blast/executables/release/2.2.10/)和HMMER版本2.1.1(国家生物技术信息中心(NCBI),贝塞斯达,马里兰州,美国)来预测功能。通过分析Blast结果直接鉴定NZ5家族。使用Agene程序(Munch和Krogh,2006,BMC Bioinformatics[BMC生物信息学]7:263)和SignalP程序(Nielsen等人,1997,Protein Engineering[蛋白质工程]10:1-6)鉴定起始密码子。进一步使用SignalP程序来预测信号肽。使用Pepstats(Rice等人,2000,Trends in Genetics[遗传学趋势]16(6):276-277)来预测等电点和分子量。
实例5:真菌NZ5基因(SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37和40)的克隆、表达和发酵
十四个真菌LYS野生型基因,即LYS_Pesi(SEQ ID NO:1)、LYS_Pv(SEQ ID NO:4)、LYS_Tapr(SEQ ID NO:7)、LYS_Asp2668(SEQ ID NO:10)、LYS_Pean(SEQ ID NO:13)、LYS_chbr(SEQ ID NO:16)、LYS_Pewe(SEQ ID NO:19)、LYS_Pr(SEQ ID NO:22)、LYS_Pevir(SEQID NO:25)、LYS_asni(SEQ ID NO:28)、LYS_ch369(SEQ ID NO:31)、LYS_Taat(SEQ ID NO:34)、LYS_Tras(SEQ ID NO:37)、LYS_Meca2(SEQ ID NO:40),分别克隆自简青霉菌株NN044175、Penicillium vasconiae菌株NN053742、解蛋白篮状菌菌株NN058285、曲霉属物种菌株NN053333、南极青霉NN058605、Ovatospora brasiliensis菌株NN047528、惠灵顿青霉菌株NN054749、玫瑰紫青霉菌株NN054129、帚青霉菌株NN058650、霉白曲霉菌株NN046949、毛壳菌属物种菌株NN057921、Talaromyces atricola菌株NN058427、粗糙短梗蠕孢菌株NN053773、肉色绿僵菌菌株NN058086。
如WO 2013029496中所述,将真菌LYS基因克隆到米曲霉表达载体pCaHj505中。具有天然分泌信号的LYS编码序列的转录处于米曲霉α-淀粉酶基因启动子的控制下。
将最终的表达质粒,即p505-LYS_Pesi、p505-LYS_Pv、p505-LYS_Tapr、p505-LYS_Asp2668、p505-LYS_Pean、p505-LYS_chbr、p505-LYS_Pewe、p505-LYS_Pr、p505-LYS_Pevir、p505-LYS_asni、p505-LYS_ch369、p505-LYS_Taat、p505-LYS_Tras和p505-LYS_Meca2,分别转化到米曲霉表达宿主中。通过同源重组将LYS基因整合到转化后的米曲霉宿主基因组中。从选择性培养基琼脂平板中选择每个转化的四个转化体,并接种到24孔板中的3ml YPM或Dap4C培养基中,并在30℃、150rpm孵育。3天的孵育之后,根据制造商的说明,在NuPAGENovex 4%-12%Bis-Tris凝胶w/MES上对来自每一转化体的20μl上清液进行分析。用Instant Blue染色所得凝胶。培养物的SDS-PAGE图谱显示,所有基因均表达了1条蛋白带,分别在约28kDa、25kDa、25kDa、35kDa、25kDa、25kDa、25kDa、25kDa、25kDa、25kDa、25kDa、25kDa、25kDa、30kDa处检测。选择蛋白带最强的重组米曲霉菌株进行摇瓶培养。将重组菌株接种在由斜面培养基制成的斜面上,并在37C孵育6-7天。当菌株充分生长至完全形成孢子时,将它们接种到2L摇瓶中,每个摇瓶含有400ml YPM或DAP4C,每种菌株5-6个烧瓶。烧瓶在80rpm,30C振荡。在第3天或第4天收获培养物,并使用0.22μm DURAPORE膜过滤,并如实例9所述进行纯化。
实例6:改善的分裂标记米曲霉宿主的构建
构建了与WO 2016026938A1中披露的实例5中描述的相当的改善的米曲霉宿主/载体系统。通过将位于质粒pDAu724的PART-II上的FLPase表达盒(参见WO 2016/026938中第34页,图7和SEQ ID NO:30)移至宿主菌株的基因组中的整合基因座amy2中,做出了改善以减小转化DNA的大小。通过从pDAu724扩增FLPase表达盒并在pDAu703的FRT-F3和amdS选择标记之间克隆,将FLPase表达盒克隆到pDAu703(WO 2016/026938,第32页和图6以及SEQID:29)中,以给出质粒pDAu770(图1,SEQ ID NO:320)。使用与WO 2016/026938第33页中描述的相同的方案将线性化质粒pDAu770转化到米曲霉菌株Jal1338的原生质体中(披露于WO2012/160097中)。在AmdS选择平板上选择转化体以获得菌株DAu785。所得重组宿主菌株DAu785具有与DAU716(WO 2016/026938)中相似的经修饰的amy2基因座,其中添加了FLPase表达盒(图2,上图)。现在,该宿主菌株DAu785组成性地表达FLPase位点特异性重组酶(在这一情况下允许在转化DNA的FRT位点处整合通过重叠延伸PCR反应获得的PCR片段(图2,中间图和下图))并描述于实例7中。
实例7:重叠延伸PCR克隆(SEQ ID NO:43)
使用50μL反应体积的Phusion高保真DNA聚合酶(新英格兰实验室(New EnglandBiolabs),生物诺沃挪第克丹麦公司(BioNordika Denmark A/S),海莱乌(Herlev),丹麦)和表2中披露的引物进行编码LYS多肽的SEQ ID NO:43的PCR扩增。
表2:PCR引物
*-F-正向引物;-R-反向引物;粗体字母代表编码序列。
PCR反应混合物由以下组成:10μL Phusion反应缓冲液HF(5x);1μL PCR核苷酸混合物(10mM);2μL正向克隆引物(2.5mM);2μL反向克隆引物(2.5mM);1μL Phusion高保真DNA聚合酶#M0530L(2000U/mL);和PCR级水补充至50μL。使用以下程序在热循环仪T100(伯乐公司(Biorad),赫拉克勒斯(Hercules),加利福尼亚州,美国)上孵育PCR反应:在98℃初始变性2分钟,然后在98℃进行30个10秒的循环,在72℃进行2分钟,最后在72℃最终延伸10分钟。使用适用于Biomek FXp液体处理器(贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter),布雷亚(Brea),加利福尼亚,美国)的AMPure XP珠系统试剂盒(Agencourt公司,贝弗利(Beverly),马萨诸塞州,美国)纯化PCR扩增子。
在反应中,将pDAu724质粒用作DNA模板以扩增两种PCR产物(F1和F3),该反应由以下各项构成:10μL的KAPA聚合酶缓冲液5x、1μL 10mM的KAPA PCR核苷酸混合物、1μL 10μM的合适的正向引物(F1的SEQ ID NO:323和F3的SEQ ID NO:325,表3)、1μL 10μM的合适的反向引物(F1的SEQ ID NO:324和F3的SEQ ID NO:326,表3)、1至10ng的pDAu724质粒、1μL的KAPA生物系统聚合酶KK2502(1单位)和PCR级水补充至50μL。
Dual-Block热循环仪(MJ研究公司(MJ Research Inc.),沃尔瑟姆,马萨诸塞州,美国)上进行PCR扩增反应,程序为在98℃下2分钟,并随后进行在98℃下10秒和在72℃下2分钟的35个循环,以及在72℃下10分钟的最后一个循环。
使用TAE缓冲液通过1%琼脂糖凝胶电泳分析五μl PCR反应,其中观察到适当大小的DNA条带。根据制造商的说明,使用ILLUSTRATM GFXTM PCR DNA和凝胶带纯化试剂盒纯化剩余的PCR反应。
表3:PCR引物
用于对从土生梭孢壳霉gDNA扩增的LYS多肽基因进行克隆的重叠延伸PCR反应由以下各项构成:10μL的KAPA聚合酶缓冲液(5X)、1μL 10mM的KAPA PCR核苷酸混合物、50ng的PCR片段F1和等摩尔量的PCR片段F3、和编码SEQ ID NO:45的LYS多肽基因、1μl的KAPA生物系统聚合酶KK2502(1单位)以及PCR级水补充至48μL。使用由以下构成的程序在Dual-Block热循环仪(MJ研究公司,沃尔瑟姆,马萨诸塞州,美国)上孵育反应:在98℃下2分钟;随后进行5个循环,各自由以下构成:在98℃下10秒、在68℃下30秒、和在72℃下5分钟,以及最后在72℃下8分钟的最后的延伸。
在OE PCR反应期间,通过正向克隆引物(KKSC0972-F)中包含的SEQ ID NO:327中的重叠来确保片段F1和编码SEQ ID NO:45的LYS多肽基因之间的退火,并且通过反向克隆引物(KKSC0972-R)中包含的重叠SEQ ID NO:328来确保片段F3和编码SEQ ID NO:45的LYS多肽基因之间的退火。
将1μL 10mM的引物SEQ1和1μL 10mM的引物SEQ4添加到OE PCR反应中,并且使用以下构成的程序在Dual-Block热循环仪(MJ研究公司,沃尔瑟姆,马萨诸塞州,美国)上第二次孵育该反应:在98℃下2分钟;随后进行25个循环,各自由以下构成:在98℃下10秒,和在72℃下4分钟,以及最后在72℃下10分钟的最后的延伸。
使用TAE缓冲液通过1%琼脂糖凝胶电泳分析五μl PCR反应,其中观察到适当大小的DNA条带。通过在60℃下加热管将剩余的PCR反应浓缩至20μL。将10μL的该反应用于米曲霉DAu785原生质体转化。
正向结合引物SEQ ID NO:327:CTATATACACAACTGGGGATCCACC
反向结合引物SEQ ID NO:328:TAGAGTCGACCCAGCCGCGCCGGCCA
实例8:曲霉属原生质体的制备
米曲霉MT3568的原生质体是根据WO 95/002043制备的。将100μl原生质体与OEPCR片段KKSC0972和250μL的60%PEG 4000(艾普利公司(Applichem),达姆施塔特,德国)(聚乙二醇,分子量4,000)、10mM CaCl2和10mM Tris-HCl pH 7.5混合并轻轻混合。将混合物在37℃孵育30分钟并且将这些原生质体铺展到COVE平板上用于选择。在37℃孵育4-7天后,将四个转化体的孢子接种到96孔微量滴定板中的0.2mL的YP+2%葡萄糖或DAP4C-1培养基中。在30℃培养4天后,通过SDS-PAGE分析培养液以鉴定产生最高量LYS多肽的转化体。
将来自转化的最佳转化体的孢子铺展于包含0.01%X-100的COVE平板上,以便分离单个菌落。在含有10mM硝酸钠的COVE平板上总共重复铺展两次。然后将孢子接种到含有100mL的YP+2%葡萄糖的500mL摇瓶中,并在30℃以100rpm振荡孵育4天。使用0.2μm过滤装置通过过滤收获培养液并如实例9所述纯化。
实例9:LYS多肽的纯化
纯化程序的活性检测
将冷冻干燥的细菌菌株溶壁微球菌ATCC号4698(西格玛公司)和微小杆菌属物种(Exiguobacterium sp.)(从土壤中分离)分别洗涤并悬浮于60mM KH2PO4缓冲液(pH 6.0)中,最终浓度为1%(w/v),作为底物原液。在活性检测之前,用60mM KH2PO4缓冲液(pH 6.0或pH 4.0)将底物的浓度稀释至0.035%,与OD450的约0.7相关。将10ul多肽样品(或5ul样品,如果含有高浓度盐,则含5ul MQ水)和190ul 0.035%底物添加到96孔板中,然后读取OD450。将板在恒温混匀仪中在室温或37℃下以300rpm孵育30或60分钟。将板摇动10秒钟,并再次读取OD450。OD下降显示溶菌酶活性。空白添加10μl的60mM KH2PO4(pH 6.0或pH 4.0)缓冲液,并且如有必要,以一式两份测量每个样品。
SEQ ID NO:3的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后用pH 4.5的20mM NaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的SP快流柱(GE医疗集团(GE Healthcare))中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,并且然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen),目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:6的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后向沉淀中添加水以调节电导率至约140mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 8.0的20mM PBS(添加1.2M(NH4)2SO4)平衡的HIC高效柱(GE医疗集团)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.2M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。
收集贯流液和从1到15的级分,将电导率调整为180mS/cm,然后重新加载到用pH8.0的20mM PBS(添加1.8M(NH4)2SO4)平衡的HIC柱中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.8M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,合并在一起,并用pH 6.0的20mM PBS渗滤。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:9的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后向沉淀中添加水以调节电导率至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 7.0的20mM PBS(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的HIC高效柱(GE医疗集团)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,合并在一起,并用pH 6.0的20mM PBS渗滤。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:12的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后向沉淀中添加水以调节电导率至约185mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加1.8M(NH4)2SO4)平衡的HIC高效柱(GE医疗集团)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.8M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,合并在一起,并用pH 6.0的20mM Bis-Tris渗滤。
将样品加载到用pH 6.0的20mM Bis-Tris平衡的Mono Q柱(GE医疗集团)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,并且然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:15的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后向沉淀中添加水以调节电导率至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。
收集贯流液和具有溶菌酶活性的级分,将电导率调整为190mS/cm,然后重新加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的HIC柱中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,合并在一起,并用pH 6.0的20mM PBS渗滤。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:18的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀来自LYS_chbr(SEQ ID NO:16)的表达的培养上清液,然后向沉淀中添加水以调节电导率至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加1.8M(NH4)2SO4)平衡的苯基琼脂糖高效柱(GE医疗集团)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.8M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,并将级分合并在一起,并用pH 6.0的20mM PBS渗滤。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
通过完整分子量(MAXIS II电喷雾质谱仪(布鲁克股份有限公司(BrukerDaltonik GmbH),不莱梅,德国(DE)))进行的分析表明,主要产物对应于SEQ ID NO:18的氨基酸1至230(检测质量24128.35Da,预测质量24128.21Da),次要产物对应于SEQ ID NO:18的氨基酸4至230(检测的质量23768.79Da,预测的质量23768.16Da)。
SEQ ID NO:329的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀来自LYS_chbr(SEQ ID NO:16)的表达的培养上清液,然后用pH 6.5的20mM PBS透析。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH6.5的20mM PBS平衡的Capto SP柱(GE医疗集团)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,并且然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
通过N-末端测序(应用生物系统(Applied Biosystems)精确氨基酸测序仪494型)和完整分子量(MAXIS II电喷雾质谱仪(布鲁克股份有限公司(Bruker Daltonik GmbH),不莱梅,德国(DE)))进行的分析显示,N-末端LED结构域已被切除,剩下LAD催化结构域,并且该分子具有异质N-末端(参见表4)。主要产物对应于残基85-230,且被披露为SEQ ID NO:329。
表4:N-末端和完整分子量的测定
SEQ ID NO:21的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后向沉淀中添加水以调节电导率至约140mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc(添加2M NaCl)平衡的苯基快流柱(GE医疗集团)中。使用NaCl浓度梯度降低作为从2M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。
收集贯流液和具有溶菌酶活性的级分,将电导率调整为180mS/cm,然后重新加载到用pH 4.5的20mM NaAc(添加4M NaCl)平衡的HIC柱中。使用NaCl浓度梯度降低作为从4M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分和未结合的样品,合并在一起并浓缩。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:24的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后向沉淀中添加水以调节电导率至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加4MNaCl)平衡的HIC高效柱(GE医疗集团)中。使用NaCl浓度梯度降低作为从4M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。
收集贯流液和具有溶菌酶活性的未结合的样品,将电导率调整为190mS/cm,然后重新加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加1.8M(NH4)2SO4)平衡的HIC柱中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.8M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,合并在一起,并用pH 6.0的20mM PBS渗滤。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:27的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后用pH 5.5的20mM NaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 5.5的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗集团)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分。合并具有溶菌酶活性的级分并浓缩,但是发现样品降解。
将样品的电导率调整为200mS/cm,然后重新加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加2.0M(NH4)2SO4)平衡的苯基高效柱中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从2.0M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,合并在一起,并用pH 6.0的20mM PBS渗滤。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:30的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后用pH 4.5的20mM NaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗集团)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,并且然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:33的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀O33X73的培养上清液,然后用pH 4.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗集团)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,并且然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:36的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后用pH 7.0的20mM PBS透析。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 7.0的20mM PBS平衡的Capto Q柱(GE医疗集团)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分。挑取具有溶菌酶活性的贯流级分以进行进一步纯化。
将贯流级分的pH调节至pH 4.5,然后重新加载到用pH 4.5的20mM NaAC平衡的Capto SP柱中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,并合并在一起。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:39的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后向沉淀中添加水以调节电导率至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基琼脂糖6快流柱(GE医疗集团)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。仍在贯流级分和级分1至12中发现了溶菌酶活性,将它们合并在一起以进行进一步纯化。
将具有溶菌酶活性的样品的电导率调整为190mS/cm,然后重新加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加1.8M(NH4)2SO4)平衡的苯基琼脂糖高效柱中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.8M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,合并在一起,并用pH 6.0的20mM PBS渗滤。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:42的纯化
首先用硫酸铵(80%饱和度)沉淀培养上清液,然后向沉淀中添加水以调节电导率至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤,并且然后加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基琼脂糖高效柱(GE医疗集团)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分,但发现两个条带。将具有溶菌酶活性的级分合并在一起以进行进一步纯化。
将这些级分的电导率调整为140mS/cm,然后重新加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加1.2M(NH4)2SO4)平衡的苯基琼脂糖高效柱中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.2M至0的洗脱缓冲液,并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分。级分29至37具有较低的分子量,将其合并在一起,并用pH 6.0的20mM PBS渗滤。级分43至45具有较高的分子量,将其合并在一起,并用pH 6.0的20mM PBS渗滤。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司,目录Q33212)测定蛋白质浓度。
通过N-末端测序(应用生物系统精确氨基酸测序仪494型)进行的分析显示,产物以N-末端序列YPIKDNN开始,对应于SEQ ID NO:42的氨基酸1至7。
通过完整分子量(MAXIS II电喷雾质谱仪(布鲁克股份有限公司(BrukerDaltonik GmbH),不莱梅,德国(DE)))进行的分析表明,主要产物对应于SEQ ID NO:42的氨基酸1至304(检测质量31755.59Da,预测质量31754.97Da)。由于第一LED结构域从N-末端被切除,所以还存在少量对应于SEQ ID NO:42的氨基酸76至304的次要产物(检测质量23617.23Da,预测质量23617.15Da)。
SEQ ID NO:45的纯化
通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤具有溶菌酶的发酵上清液。将250ml过滤的发酵样品用250ml MilliQ水稀释,并将pH调整到4.5。将含有溶菌酶的溶液通过Capto S色谱(在XK16柱中约30ml,使用50mM乙酸钠pH 4.5作为缓冲液A,使用50mM乙酸钠+2M NaCl pH 4.5作为缓冲液B,使用0-100%的梯度,超过约10CV)进行纯化。基于色谱图(在280nm和254nm处的吸收)和SDS-PAGE分析,将来自该柱的级分进行合并。
由SDS-PAGE估算分子量为25kDa,并且纯度>90%。
实例10:利用HMM确定LAD催化结构域的方法
使用具有默认设置的软件程序MUSCLE v3.8.31来比对SEQ ID NO:46至187。使用此比对,使用软件包HMMER 3.0(2010年3月)(http://hmmer.org/)中的软件程序’hmmbuild’构建HMM,并通过以下命令使用默认设置启用该软件:hmmscan3--tbloutoutput.dat model.hmm sequences.fasta。下面给出由此产生的LAD催化结构域HMM序型,以供随后加载到软件程序’hmmscan’中。
HMMER3/b[3.0|2010年3月]
/>
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实例11:利用HMM确定溶菌酶增强结构域的方法
使用具有默认设置的软件程序MUSCLE v3.8.31来比对SEQ ID NO:188至316。使用此比对,使用软件包HMMER 3.0(2010年3月)(http://hmmer.org/)中的软件程序’hmmbuild’构建HMM,并通过以下命令使用默认设置启用该软件:hmmscan3--tbloutoutput.dat model.hmm sequences.fasta。下面给出由此产生的溶菌酶增强结构域HMM序型,以供随后加载到软件程序’hmmscan’中。
HMMER3/b[3.0|2010年3月]
/>
/>
/>
/>
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实例12:DomT评分的确定
使用如本文所述的来自实例10的LAD催化结构域HMM和来自实例11的溶菌酶增强结构域HMM,确定本发明的LYS多肽的LAD结构域和LED结构域的DomT评分,呈现于下表5中。
表5:LAD和LED结构域的DomT评分
/>
所有要求保护的LYS多肽均具有至少170的LAD DomT评分,这表明与LAD HMM模型具有良好的同源性。同样,所有要求保护的LYS多肽均具有LED,均具有至少100的LED DomT评分,这表明与LED HMM模型具有良好的同源性。
实例13:使用还原末端测定法测定的LYS多肽的活性
根据实例1在两种酶浓度下测试本发明的LYS多肽,结果示于下表6至8中。
表6:SEQ ID NO:3的OD下降
1:酶浓度
表7:SEQ ID NO:6至45的OD下降
1:酶浓度
可以看出,本发明的LYS多肽显示出如使用还原末端测定法测定的溶菌酶活性。
实例14:使用OD下降测定法测定的LYS多肽的活性
根据实例2在pH 4下测试本发明的LYA多肽,结果示于下表8和9中。
表8:针对滕黄微球菌的OD下降
表9:针对滕黄微球菌的OD下降
可以看出,本发明的LYS多肽显示出如使用针对滕黄微球菌的传统OD下降测定法测定的溶菌酶活性。
实例19:包含LYS多肽的动物饲料和动物饲料添加剂
动物饲料添加剂
将含有0.01g至10g酶蛋白质的本发明的LYS多肽(例如SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45或239)的配制品添加到以下预混物中(每千克预混物):
/>
动物饲料
这是动物饲料(肉鸡饲料)的一个实例,其包含如上文所述的动物饲料添加剂:
62.55%玉蜀黍
33.8%豆粕(50%粗蛋白)
1.0%大豆油
0.2%DL-甲硫氨酸
0.22%DCP(磷酸二钙)
0.76%CaCO3(碳酸钙)
0.32%砂
0.15%NaCl(氯化钠)
1%上述预混物
将这些成分混合,并将饲料在所希望的温度(例如60℃、65℃、75℃、80℃、85℃、90℃或甚至95℃)下丸粒化。
本文所述和要求保护的本发明不限于本文披露的特定方面的范围,因为这些方面旨在作为本发明若干方面的说明。任何等同方面旨在处于本发明的范围之内。实际上,除本文所示和描述的那些之外,本发明的各种修改对于本领域技术人员而言将从前述描述变得显而易见。此类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。在冲突的情况下,以包括定义的本公开内容为准。
序列表
<110> 诺维信公司(Novozymes A/S)
<120> 具有溶菌酶活性的多肽、编码其的多核苷酸以及其用途和组合物
<130> 14136-WO-PCT
<160> 329
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 809
<212> DNA
<213> 简青霉
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(429)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (58)..(806)
<220>
<221> CDS
<222> (501)..(806)
<400> 1
atg cac ttc tcg ctc ctc gcc atc tcc gca gcc att gcc ttg ccc ctg 48
Met His Phe Ser Leu Leu Ala Ile Ser Ala Ala Ile Ala Leu Pro Leu
-15 -10 -5
gcc agt gcc tat ccc gtc aac gcg gac gat ctc cac tgc cgc tct ggt 96
Ala Ser Ala Tyr Pro Val Asn Ala Asp Asp Leu His Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
cct ggc acc aac tat ggc atc gtg aag tcc tac aag cgc gga acc gac 144
Pro Gly Thr Asn Tyr Gly Ile Val Lys Ser Tyr Lys Arg Gly Thr Asp
15 20 25
ctc agc atc acc tgc cag gcc acc ggc acc gac gtc aac ggt gac gag 192
Leu Ser Ile Thr Cys Gln Ala Thr Gly Thr Asp Val Asn Gly Asp Glu
30 35 40 45
ctc tgg gac aag acc tcc gac ggc tgc tac gtg agc gac tac tat gtc 240
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val
50 55 60
aag acc ggc tcc agc agc tac gtt acc aag cac tgc gac ggc agc tcc 288
Lys Thr Gly Ser Ser Ser Tyr Val Thr Lys His Cys Asp Gly Ser Ser
65 70 75
ggc ggc ggc agc agc ggt ggc aac ctg ccc ggc ctg act gct act cag 336
Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ala Thr Gln
80 85 90
tcc aag cac gcc aag gaa atc atc gcc gag gcc aag cgt gag gat ctg 384
Ser Lys His Ala Lys Glu Ile Ile Ala Glu Ala Lys Arg Glu Asp Leu
95 100 105
ggt ctg cac ggc tgc tct gcc ggt att gcg act gcc ctt gtt gag 429
Gly Leu His Gly Cys Ser Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu
110 115 120
gtatgaacat tgacattccg ccccttgata gcaatctccc tcgaaatacg atcgactaac 489
aattcctcta g tcg aac atc ttg atc tat gcc aac aag gct gtc ccc tct 539
Ser Asn Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Lys Ala Val Pro Ser
125 130 135
tcc ctc aac tac ccc cac gac gcc gtt ggc tcg gac cac gac agt gtt 587
Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Val
140 145 150
ggt atc ttc cag cag cgc gct atg tat tac ccc aac att gcc gct gat 635
Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp
155 160 165
atg gat gcc gcc aag tct gct gcc cag ttc ttt gag aag atg aag aac 683
Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe Phe Glu Lys Met Lys Asn
170 175 180 185
gtt agt ggc tgg aag tca atg gct gtt gga agc ctc tgc cag aag gtc 731
Val Ser Gly Trp Lys Ser Met Ala Val Gly Ser Leu Cys Gln Lys Val
190 195 200
cag ggc tcc gct tat cct act cgc tat gct gag cgt gtt tct gag gct 779
Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Ala Glu Arg Val Ser Glu Ala
205 210 215
gag aag atc tgc aaa gct ggt ggc atc taa 809
Glu Lys Ile Cys Lys Ala Gly Gly Ile
220 225
<210> 2
<211> 245
<212> PRT
<213> 简青霉
<400> 2
Met His Phe Ser Leu Leu Ala Ile Ser Ala Ala Ile Ala Leu Pro Leu
-15 -10 -5
Ala Ser Ala Tyr Pro Val Asn Ala Asp Asp Leu His Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
Pro Gly Thr Asn Tyr Gly Ile Val Lys Ser Tyr Lys Arg Gly Thr Asp
15 20 25
Leu Ser Ile Thr Cys Gln Ala Thr Gly Thr Asp Val Asn Gly Asp Glu
30 35 40 45
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val
50 55 60
Lys Thr Gly Ser Ser Ser Tyr Val Thr Lys His Cys Asp Gly Ser Ser
65 70 75
Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ala Thr Gln
80 85 90
Ser Lys His Ala Lys Glu Ile Ile Ala Glu Ala Lys Arg Glu Asp Leu
95 100 105
Gly Leu His Gly Cys Ser Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser
110 115 120 125
Asn Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Lys Ala Val Pro Ser Ser Leu Asn Tyr
130 135 140
Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln
145 150 155
Gln Arg Ala Met Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala
160 165 170
Lys Ser Ala Ala Gln Phe Phe Glu Lys Met Lys Asn Val Ser Gly Trp
175 180 185
Lys Ser Met Ala Val Gly Ser Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala
190 195 200 205
Tyr Pro Thr Arg Tyr Ala Glu Arg Val Ser Glu Ala Glu Lys Ile Cys
210 215 220
Lys Ala Gly Gly Ile
225
<210> 3
<211> 226
<212> PRT
<213> 简青霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(226)
<400> 3
Tyr Pro Val Asn Ala Asp Asp Leu His Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asn Tyr Gly Ile Val Lys Ser Tyr Lys Arg Gly Thr Asp Leu Ser Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Ala Thr Gly Thr Asp Val Asn Gly Asp Glu Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Tyr Val Thr Lys His Cys Asp Gly Ser Ser Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Ser Gly Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ala Thr Gln Ser Lys His
85 90 95
Ala Lys Glu Ile Ile Ala Glu Ala Lys Arg Glu Asp Leu Gly Leu His
100 105 110
Gly Cys Ser Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Asn Ile Leu
115 120 125
Ile Tyr Ala Asn Lys Ala Val Pro Ser Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp
130 135 140
Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala
145 150 155 160
Met Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala
165 170 175
Ala Gln Phe Phe Glu Lys Met Lys Asn Val Ser Gly Trp Lys Ser Met
180 185 190
Ala Val Gly Ser Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr
195 200 205
Arg Tyr Ala Glu Arg Val Ser Glu Ala Glu Lys Ile Cys Lys Ala Gly
210 215 220
Gly Ile
225
<210> 4
<211> 808
<212> DNA
<213> Penicillium vasconiae
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(429)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (58)..(805)
<220>
<221> CDS
<222> (500)..(805)
<400> 4
atg cac ttc tcg ctc ctc gcc atc tcc gca gcc att gcc ctg ccc ctg 48
Met His Phe Ser Leu Leu Ala Ile Ser Ala Ala Ile Ala Leu Pro Leu
-15 -10 -5
gcc agc gcc tat ccc gtc aac gct gac gat ctc cac tgc cgc tct ggt 96
Ala Ser Ala Tyr Pro Val Asn Ala Asp Asp Leu His Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
cct ggc acc agc tac ggc att gtc aag tcc tac aag cgc gga act gac 144
Pro Gly Thr Ser Tyr Gly Ile Val Lys Ser Tyr Lys Arg Gly Thr Asp
15 20 25
ctc acc atc acc tgc cag gcc gcc ggc acc gat gtc aac ggt gat gag 192
Leu Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ala Gly Thr Asp Val Asn Gly Asp Glu
30 35 40 45
ctc tgg gac aag acc tcc gac ggc tgc tat gtg agc gac tac tac gtc 240
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val
50 55 60
aag acc ggc tcc agc agc tac gtt gcc aag cac tgt gac ggc ggc tct 288
Lys Thr Gly Ser Ser Ser Tyr Val Ala Lys His Cys Asp Gly Gly Ser
65 70 75
agc ggt ggc agc agc ggc ggt gac ttg cct ggt ctg agt gct act cag 336
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Asp Leu Pro Gly Leu Ser Ala Thr Gln
80 85 90
tcc aag cac gcc agg gct atc atc gcc gag gcg aag agt gag gat ctg 384
Ser Lys His Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Ala Lys Ser Glu Asp Leu
95 100 105
ggt ctg cac ggc tgc tcg gct ggt att gcg act gcc ctt gtg gag 429
Gly Leu His Gly Cys Ser Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu
110 115 120
gtaagaacac tccttaatca caattcctcc ttataagatc aatagtatca tcaactaaca 489
acctctatag tcg agc atc ctg atc tat gcc aac cgg gat gtc ccc act 538
Ser Ser Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Arg Asp Val Pro Thr
125 130 135
tcc ctg aac tac ccc cat gac gct att ggc tcg gac aac gac agt gtc 586
Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Ala Ile Gly Ser Asp Asn Asp Ser Val
140 145 150
ggc atc ttc cag cag cgc gcc att tac tac ccc gac att gcg gct gat 634
Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Ile Tyr Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp
155 160 165
atg gat gcc gcc aag tct gct gcc cag ttc ttc aag aag atg aag aac 682
Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe Phe Lys Lys Met Lys Asn
170 175 180 185
att agc ggc tgg aag tct atg gct gtt gga acc ctt tgc cag aag gtc 730
Ile Ser Gly Trp Lys Ser Met Ala Val Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val
190 195 200
cag ggc tct gct tat cct act cgc tat gct gag cgt gtt gct gag gcg 778
Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Ala Glu Arg Val Ala Glu Ala
205 210 215
gag aag att tgc aat gct ggt ggt att taa 808
Glu Lys Ile Cys Asn Ala Gly Gly Ile
220 225
<210> 5
<211> 245
<212> PRT
<213> Penicillium vasconiae
<400> 5
Met His Phe Ser Leu Leu Ala Ile Ser Ala Ala Ile Ala Leu Pro Leu
-15 -10 -5
Ala Ser Ala Tyr Pro Val Asn Ala Asp Asp Leu His Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
Pro Gly Thr Ser Tyr Gly Ile Val Lys Ser Tyr Lys Arg Gly Thr Asp
15 20 25
Leu Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ala Gly Thr Asp Val Asn Gly Asp Glu
30 35 40 45
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val
50 55 60
Lys Thr Gly Ser Ser Ser Tyr Val Ala Lys His Cys Asp Gly Gly Ser
65 70 75
Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Asp Leu Pro Gly Leu Ser Ala Thr Gln
80 85 90
Ser Lys His Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Ala Lys Ser Glu Asp Leu
95 100 105
Gly Leu His Gly Cys Ser Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser
110 115 120 125
Ser Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Arg Asp Val Pro Thr Ser Leu Asn Tyr
130 135 140
Pro His Asp Ala Ile Gly Ser Asp Asn Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln
145 150 155
Gln Arg Ala Ile Tyr Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala
160 165 170
Lys Ser Ala Ala Gln Phe Phe Lys Lys Met Lys Asn Ile Ser Gly Trp
175 180 185
Lys Ser Met Ala Val Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala
190 195 200 205
Tyr Pro Thr Arg Tyr Ala Glu Arg Val Ala Glu Ala Glu Lys Ile Cys
210 215 220
Asn Ala Gly Gly Ile
225
<210> 6
<211> 226
<212> PRT
<213> Penicillium vasconiae
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(226)
<400> 6
Tyr Pro Val Asn Ala Asp Asp Leu His Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Gly Ile Val Lys Ser Tyr Lys Arg Gly Thr Asp Leu Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Ala Ala Gly Thr Asp Val Asn Gly Asp Glu Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Tyr Val Ala Lys His Cys Asp Gly Gly Ser Ser Gly Gly
65 70 75 80
Ser Ser Gly Gly Asp Leu Pro Gly Leu Ser Ala Thr Gln Ser Lys His
85 90 95
Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Ala Lys Ser Glu Asp Leu Gly Leu His
100 105 110
Gly Cys Ser Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Ser Ile Leu
115 120 125
Ile Tyr Ala Asn Arg Asp Val Pro Thr Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp
130 135 140
Ala Ile Gly Ser Asp Asn Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala
145 150 155 160
Ile Tyr Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala
165 170 175
Ala Gln Phe Phe Lys Lys Met Lys Asn Ile Ser Gly Trp Lys Ser Met
180 185 190
Ala Val Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr
195 200 205
Arg Tyr Ala Glu Arg Val Ala Glu Ala Glu Lys Ile Cys Asn Ala Gly
210 215 220
Gly Ile
225
<210> 7
<211> 802
<212> DNA
<213> 解蛋白篮状菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(423)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(60)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (61)..(799)
<220>
<221> CDS
<222> (494)..(799)
<400> 7
atg ttt gct act tcg ctc att gca ctg tcc ctc gtg aca atc ctc ccc 48
Met Phe Ala Thr Ser Leu Ile Ala Leu Ser Leu Val Thr Ile Leu Pro
-20 -15 -10 -5
atc tcc aac gcc tat ccc atc aaa acc gat ggt ctt cac tgc cgt tcc 96
Ile Ser Asn Ala Tyr Pro Ile Lys Thr Asp Gly Leu His Cys Arg Ser
-1 1 5 10
gga ccg gga acg ggt tat tcg atc gtg aag acc tac aac aag ggc gaa 144
Gly Pro Gly Thr Gly Tyr Ser Ile Val Lys Thr Tyr Asn Lys Gly Glu
15 20 25
gag gtc tcg atc act tgc cag gcc cct gga act gat gtt aat gga gac 192
Glu Val Ser Ile Thr Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Asn Gly Asp
30 35 40
tcc ctt tgg gat aag act tct gat ggc tgc tat gtc act gat tac tac 240
Ser Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Thr Asp Tyr Tyr
45 50 55 60
gtt agc aca ggc act agt ggc tac gtc act ggt gag tgt ggt agt acc 288
Val Ser Thr Gly Thr Ser Gly Tyr Val Thr Gly Glu Cys Gly Ser Thr
65 70 75
ggt ggc agt ggt gga aaa ctt ccg ggt ctt gac tct aca caa tcg tcc 336
Gly Gly Ser Gly Gly Lys Leu Pro Gly Leu Asp Ser Thr Gln Ser Ser
80 85 90
cat gcc cga gcc att atc gca gag gcc aaa aag gag agt cta ggt cgt 384
His Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Ala Lys Lys Glu Ser Leu Gly Arg
95 100 105
cag ggc tgc ctt gcc ggc att gca act gct ttg act gag gtatggctta 433
Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Thr Glu
110 115 120
accctactca taaattcccc ttacattgtt tttttaccaa tcatgtctaa ctgagcgcag 493
tcg agc att ctg gtc tac gca aac gag gcc gtt cca gaa tcg atg aaa 541
Ser Ser Ile Leu Val Tyr Ala Asn Glu Ala Val Pro Glu Ser Met Lys
125 130 135
tac aag cac gat gcc gtt ggc agc gac cac gat agc att ggc atc ttc 589
Tyr Lys His Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe
140 145 150
cag cag cgc gca atg tac tat ccc aat atc gcc gca gac atg gat cca 637
Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro
155 160 165
gca aag tcg gct gca cag ttc ttt gct aaa atg aag gag gtt agt gga 685
Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Glu Val Ser Gly
170 175 180 185
tgg cga agc atg aac gtt ggt gaa ctc tgc cag aag gtt caa gga tct 733
Trp Arg Ser Met Asn Val Gly Glu Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser
190 195 200
gcc tat cct act cga tat gaa cag cat ctg tct gct gct gaa gcg atc 781
Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Glu Gln His Leu Ser Ala Ala Glu Ala Ile
205 210 215
tgc tct gct gac agt gat tga 802
Cys Ser Ala Asp Ser Asp
220
<210> 8
<211> 243
<212> PRT
<213> 解蛋白篮状菌
<400> 8
Met Phe Ala Thr Ser Leu Ile Ala Leu Ser Leu Val Thr Ile Leu Pro
-20 -15 -10 -5
Ile Ser Asn Ala Tyr Pro Ile Lys Thr Asp Gly Leu His Cys Arg Ser
-1 1 5 10
Gly Pro Gly Thr Gly Tyr Ser Ile Val Lys Thr Tyr Asn Lys Gly Glu
15 20 25
Glu Val Ser Ile Thr Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Asn Gly Asp
30 35 40
Ser Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Thr Asp Tyr Tyr
45 50 55 60
Val Ser Thr Gly Thr Ser Gly Tyr Val Thr Gly Glu Cys Gly Ser Thr
65 70 75
Gly Gly Ser Gly Gly Lys Leu Pro Gly Leu Asp Ser Thr Gln Ser Ser
80 85 90
His Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Ala Lys Lys Glu Ser Leu Gly Arg
95 100 105
Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Thr Glu Ser Ser Ile
110 115 120
Leu Val Tyr Ala Asn Glu Ala Val Pro Glu Ser Met Lys Tyr Lys His
125 130 135 140
Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg
145 150 155
Ala Met Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Lys Ser
160 165 170
Ala Ala Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Glu Val Ser Gly Trp Arg Ser
175 180 185
Met Asn Val Gly Glu Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro
190 195 200
Thr Arg Tyr Glu Gln His Leu Ser Ala Ala Glu Ala Ile Cys Ser Ala
205 210 215 220
Asp Ser Asp
<210> 9
<211> 223
<212> PRT
<213> 解蛋白篮状菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(223)
<400> 9
Tyr Pro Ile Lys Thr Asp Gly Leu His Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Gly Tyr Ser Ile Val Lys Thr Tyr Asn Lys Gly Glu Glu Val Ser Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Asn Gly Asp Ser Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Thr Asp Tyr Tyr Val Ser Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Gly Tyr Val Thr Gly Glu Cys Gly Ser Thr Gly Gly Ser Gly
65 70 75 80
Gly Lys Leu Pro Gly Leu Asp Ser Thr Gln Ser Ser His Ala Arg Ala
85 90 95
Ile Ile Ala Glu Ala Lys Lys Glu Ser Leu Gly Arg Gln Gly Cys Leu
100 105 110
Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Thr Glu Ser Ser Ile Leu Val Tyr Ala
115 120 125
Asn Glu Ala Val Pro Glu Ser Met Lys Tyr Lys His Asp Ala Val Gly
130 135 140
Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr
145 150 155 160
Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe
165 170 175
Phe Ala Lys Met Lys Glu Val Ser Gly Trp Arg Ser Met Asn Val Gly
180 185 190
Glu Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Glu
195 200 205
Gln His Leu Ser Ala Ala Glu Ala Ile Cys Ser Ala Asp Ser Asp
210 215 220
<210> 10
<211> 1043
<212> DNA
<213> 曲霉属物种XZ2668
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(666)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(60)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (61)..(1040)
<220>
<221> CDS
<222> (735)..(1040)
<400> 10
atg atg ttc att cca ctc gtc act ctt tgc ttt gca gct gct atc ccc 48
Met Met Phe Ile Pro Leu Val Thr Leu Cys Phe Ala Ala Ala Ile Pro
-20 -15 -10 -5
gtt gtc cga gca tac cca gtc aaa gct gat gtc cat tgc cgt tcg ggc 96
Val Val Arg Ala Tyr Pro Val Lys Ala Asp Val His Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
cct gga acc agc tat tcc att gtc aag aca tac agc acg ggg act cag 144
Pro Gly Thr Ser Tyr Ser Ile Val Lys Thr Tyr Ser Thr Gly Thr Gln
15 20 25
atc tcg gtt agc tgc cag gct gct ggt aca gat gtt gat ggt gac cag 192
Ile Ser Val Ser Cys Gln Ala Ala Gly Thr Asp Val Asp Gly Asp Gln
30 35 40
ctg tgg gac aag acc tct gat ggc tgc tat gtc tcc gac tat tat gtg 240
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val
45 50 55 60
tcc aca ggc agc agc aac tat gtt acc agc cac tgc cct acc gag tac 288
Ser Thr Gly Ser Ser Asn Tyr Val Thr Ser His Cys Pro Thr Glu Tyr
65 70 75
gcc att aaa act gat gtc aac tgt cgt tcc ggt ccc gga acc aat tat 336
Ala Ile Lys Thr Asp Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Asn Tyr
80 85 90
ggt att gtc aag aca tac aat cag gga gtg atg gtt tct ctc aac tgc 384
Gly Ile Val Lys Thr Tyr Asn Gln Gly Val Met Val Ser Leu Asn Cys
95 100 105
cag gct tcc ggc acc gat gtc gat ggc gat tct ctc tgg gac aag aca 432
Gln Ala Ser Gly Thr Asp Val Asp Gly Asp Ser Leu Trp Asp Lys Thr
110 115 120
tcc gat ggc tgc tat gtc tct gac tac tac gtg gcc acc ggc agc agc 480
Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser
125 130 135 140
agt tat gtg aca agc gct tgc agc ggc agc agc agc agt ggc ggt ggt 528
Ser Tyr Val Thr Ser Ala Cys Ser Gly Ser Ser Ser Ser Gly Gly Gly
145 150 155
gga agc agc agc agc ggc aac ctg ccc agt ctc gat tcc acc cag tct 576
Gly Ser Ser Ser Ser Gly Asn Leu Pro Ser Leu Asp Ser Thr Gln Ser
160 165 170
gcc cac gcc cgc gcc att atc gga gaa gcc aag agc caa aat gtt ggt 624
Ala His Ala Arg Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Ser Gln Asn Val Gly
175 180 185
cgt caa ggc tgc ctt gct ggc att gca act gcc ctg gtt gag 666
Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu
190 195 200
gtaagaggtt ccccatatct caaggtacca tttttactgg atgaatgatt gctaactgtg 726
tacaccag tcg agc atg ctt atg tat gct aac agc aat gtc gcc gca tcg 776
Ser Ser Met Leu Met Tyr Ala Asn Ser Asn Val Ala Ala Ser
205 210 215
ctc agc tat cct cat gat gct gtc ggc tcg gac tac gat agc gtc ggc 824
Leu Ser Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly
220 225 230
ctc ttc cag cag cgt gtg tcg att tat acc aac ctc gct gct gat atg 872
Leu Phe Gln Gln Arg Val Ser Ile Tyr Thr Asn Leu Ala Ala Asp Met
235 240 245
gat gct gca caa tct gcc ggc cag ttt ttt gat gag atg aag aaa gtc 920
Asp Ala Ala Gln Ser Ala Gly Gln Phe Phe Asp Glu Met Lys Lys Val
250 255 260
agt ggc tgg gag act atg aac gtt ggt gat ctt tgc cag gag gtg cag 968
Ser Gly Trp Glu Thr Met Asn Val Gly Asp Leu Cys Gln Glu Val Gln
265 270 275 280
agg tca gcc tat cca gac cga tat gcg ggg gaa gtt tcg act gct gag 1016
Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Gly Glu Val Ser Thr Ala Glu
285 290 295
tca atc tgc tct gct ggt ggt ttg taa 1043
Ser Ile Cys Ser Ala Gly Gly Leu
300
<210> 11
<211> 324
<212> PRT
<213> 曲霉属物种XZ2668
<400> 11
Met Met Phe Ile Pro Leu Val Thr Leu Cys Phe Ala Ala Ala Ile Pro
-20 -15 -10 -5
Val Val Arg Ala Tyr Pro Val Lys Ala Asp Val His Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
Pro Gly Thr Ser Tyr Ser Ile Val Lys Thr Tyr Ser Thr Gly Thr Gln
15 20 25
Ile Ser Val Ser Cys Gln Ala Ala Gly Thr Asp Val Asp Gly Asp Gln
30 35 40
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val
45 50 55 60
Ser Thr Gly Ser Ser Asn Tyr Val Thr Ser His Cys Pro Thr Glu Tyr
65 70 75
Ala Ile Lys Thr Asp Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Asn Tyr
80 85 90
Gly Ile Val Lys Thr Tyr Asn Gln Gly Val Met Val Ser Leu Asn Cys
95 100 105
Gln Ala Ser Gly Thr Asp Val Asp Gly Asp Ser Leu Trp Asp Lys Thr
110 115 120
Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser
125 130 135 140
Ser Tyr Val Thr Ser Ala Cys Ser Gly Ser Ser Ser Ser Gly Gly Gly
145 150 155
Gly Ser Ser Ser Ser Gly Asn Leu Pro Ser Leu Asp Ser Thr Gln Ser
160 165 170
Ala His Ala Arg Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Ser Gln Asn Val Gly
175 180 185
Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Ser
190 195 200
Met Leu Met Tyr Ala Asn Ser Asn Val Ala Ala Ser Leu Ser Tyr Pro
205 210 215 220
His Asp Ala Val Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln
225 230 235
Arg Val Ser Ile Tyr Thr Asn Leu Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Gln
240 245 250
Ser Ala Gly Gln Phe Phe Asp Glu Met Lys Lys Val Ser Gly Trp Glu
255 260 265
Thr Met Asn Val Gly Asp Leu Cys Gln Glu Val Gln Arg Ser Ala Tyr
270 275 280
Pro Asp Arg Tyr Ala Gly Glu Val Ser Thr Ala Glu Ser Ile Cys Ser
285 290 295 300
Ala Gly Gly Leu
<210> 12
<211> 304
<212> PRT
<213> 曲霉属物种XZ2668
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(304)
<400> 12
Tyr Pro Val Lys Ala Asp Val His Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Ser
1 5 10 15
Tyr Ser Ile Val Lys Thr Tyr Ser Thr Gly Thr Gln Ile Ser Val Ser
20 25 30
Cys Gln Ala Ala Gly Thr Asp Val Asp Gly Asp Gln Leu Trp Asp Lys
35 40 45
Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ser Thr Gly Ser
50 55 60
Ser Asn Tyr Val Thr Ser His Cys Pro Thr Glu Tyr Ala Ile Lys Thr
65 70 75 80
Asp Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Asn Tyr Gly Ile Val Lys
85 90 95
Thr Tyr Asn Gln Gly Val Met Val Ser Leu Asn Cys Gln Ala Ser Gly
100 105 110
Thr Asp Val Asp Gly Asp Ser Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys
115 120 125
Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Ser Tyr Val Thr
130 135 140
Ser Ala Cys Ser Gly Ser Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser
145 150 155 160
Ser Gly Asn Leu Pro Ser Leu Asp Ser Thr Gln Ser Ala His Ala Arg
165 170 175
Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Ser Gln Asn Val Gly Arg Gln Gly Cys
180 185 190
Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Ser Met Leu Met Tyr
195 200 205
Ala Asn Ser Asn Val Ala Ala Ser Leu Ser Tyr Pro His Asp Ala Val
210 215 220
Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Val Ser Ile
225 230 235 240
Tyr Thr Asn Leu Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Gln Ser Ala Gly Gln
245 250 255
Phe Phe Asp Glu Met Lys Lys Val Ser Gly Trp Glu Thr Met Asn Val
260 265 270
Gly Asp Leu Cys Gln Glu Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr
275 280 285
Ala Gly Glu Val Ser Thr Ala Glu Ser Ile Cys Ser Ala Gly Gly Leu
290 295 300
<210> 13
<211> 797
<212> DNA
<213> 南极青霉
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(435)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (58)..(794)
<220>
<221> CDS
<222> (489)..(794)
<400> 13
atg cat ttc caa ctc gtg act ctc tcc gtt gcc ttg ctc tcc ccg ttt 48
Met His Phe Gln Leu Val Thr Leu Ser Val Ala Leu Leu Ser Pro Phe
-15 -10 -5
atc aac gcc tac ccc atc acc ggt gac acc gtc aac tgc cgc tcc ggt 96
Ile Asn Ala Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
cca gga aca tcc tac tca gta gtc aag tcc tac aaa aag ggc gca gat 144
Pro Gly Thr Ser Tyr Ser Val Val Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Ala Asp
15 20 25
gtt gca att acc tgc caa gca tcc ggc aca gac atc aaa ggc gat agc 192
Val Ala Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gly Thr Asp Ile Lys Gly Asp Ser
30 35 40 45
atc tgg gac aag acc gcc gat ggc tgc tat gtc gcg gac ttc tac gtg 240
Ile Trp Asp Lys Thr Ala Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Phe Tyr Val
50 55 60
aaa aca ggt agc tcc agc tac gtg acg aag aaa tgc aac agt ggc agc 288
Lys Thr Gly Ser Ser Ser Tyr Val Thr Lys Lys Cys Asn Ser Gly Ser
65 70 75
ggt ggt ggt ggt ggc agc agc agc gga aat cta cct ggc ctt aca tcc 336
Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ser
80 85 90
act cag tcc aag cat gcc aaa gct atc atc gga gaa gcg aag aag gag 384
Thr Gln Ser Lys His Ala Lys Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu
95 100 105
gat cta ggt cgc cag ggc tgt ctt gct ggt att gca act gct ctt gtt 432
Asp Leu Gly Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val
110 115 120 125
gag gtgaggtcta gtctaattct gcagttcctt gaatcattct taacacattc tag 488
Glu
tca aat att ctc atc tat gcc aac aaa aaa gtc ccc tct tca ctt aac 536
Ser Asn Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Lys Lys Val Pro Ser Ser Leu Asn
130 135 140
tac ccc cac gat gcc gtg ggc tcg gac tat gat agt gtt ggc atc ttc 584
Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe
145 150 155
cag cag cgc gcc aag tac tat ccc agt att gct gcc gat atg gat ccg 632
Gln Gln Arg Ala Lys Tyr Tyr Pro Ser Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro
160 165 170
gcc aaa tcg gct gcg cag ttc ttt aag ggt atg aag ggt gtc agt ggg 680
Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe Phe Lys Gly Met Lys Gly Val Ser Gly
175 180 185 190
tgg aag act atg gag gtt ggg aag ctt tgc cag aag gtg cag ggt tcg 728
Trp Lys Thr Met Glu Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser
195 200 205
gct tat ccc act cga tat gcg gga cgt gtc gat gag gct gag aag att 776
Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Ala Gly Arg Val Asp Glu Ala Glu Lys Ile
210 215 220
tgt gct gct ggt ggt ttg tag 797
Cys Ala Ala Gly Gly Leu
225
<210> 14
<211> 247
<212> PRT
<213> 南极青霉
<400> 14
Met His Phe Gln Leu Val Thr Leu Ser Val Ala Leu Leu Ser Pro Phe
-15 -10 -5
Ile Asn Ala Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
Pro Gly Thr Ser Tyr Ser Val Val Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Ala Asp
15 20 25
Val Ala Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gly Thr Asp Ile Lys Gly Asp Ser
30 35 40 45
Ile Trp Asp Lys Thr Ala Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Phe Tyr Val
50 55 60
Lys Thr Gly Ser Ser Ser Tyr Val Thr Lys Lys Cys Asn Ser Gly Ser
65 70 75
Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ser
80 85 90
Thr Gln Ser Lys His Ala Lys Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu
95 100 105
Asp Leu Gly Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val
110 115 120 125
Glu Ser Asn Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Lys Lys Val Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Asn Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile
145 150 155
Phe Gln Gln Arg Ala Lys Tyr Tyr Pro Ser Ile Ala Ala Asp Met Asp
160 165 170
Pro Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe Phe Lys Gly Met Lys Gly Val Ser
175 180 185
Gly Trp Lys Thr Met Glu Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly
190 195 200 205
Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Ala Gly Arg Val Asp Glu Ala Glu Lys
210 215 220
Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
225
<210> 15
<211> 228
<212> PRT
<213> 南极青霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(228)
<400> 15
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ser Val Val Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Ala Asp Val Ala Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Ala Ser Gly Thr Asp Ile Lys Gly Asp Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ala Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Phe Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Tyr Val Thr Lys Lys Cys Asn Ser Gly Ser Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Gly Ser Ser Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ser Thr Gln Ser
85 90 95
Lys His Ala Lys Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Asp Leu Gly
100 105 110
Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Asn
115 120 125
Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Lys Lys Val Pro Ser Ser Leu Asn Tyr Pro
130 135 140
His Asp Ala Val Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln
145 150 155 160
Arg Ala Lys Tyr Tyr Pro Ser Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Lys
165 170 175
Ser Ala Ala Gln Phe Phe Lys Gly Met Lys Gly Val Ser Gly Trp Lys
180 185 190
Thr Met Glu Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr
195 200 205
Pro Thr Arg Tyr Ala Gly Arg Val Asp Glu Ala Glu Lys Ile Cys Ala
210 215 220
Ala Gly Gly Leu
225
<210> 16
<211> 817
<212> DNA
<213> Ovatospora brasiliensis
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(444)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(60)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (61)..(814)
<220>
<221> CDS
<222> (509)..(814)
<400> 16
atg caa atc tcc ctg atc gcc ctc acc ctc gcg gcc gcc gtc ctc cca 48
Met Gln Ile Ser Leu Ile Ala Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Leu Pro
-20 -15 -10 -5
gcg gtc agc gcc tac ccc gtc aag gcc gac tcg ctc aac tgc cgc agc 96
Ala Val Ser Ala Tyr Pro Val Lys Ala Asp Ser Leu Asn Cys Arg Ser
-1 1 5 10
ggc ccg ggc acc agc tac aag gtc gtc aag acc tac aag aag ggc gcc 144
Gly Pro Gly Thr Ser Tyr Lys Val Val Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Ala
15 20 25
gac atc aag atc tcg tgc cag acc gaa ggc ccc agc gtc aac ggc gac 192
Asp Ile Lys Ile Ser Cys Gln Thr Glu Gly Pro Ser Val Asn Gly Asp
30 35 40
aac ctc tgg atc aag acc cag gac ggg tgc tac gtc gcc gac tac tac 240
Asn Leu Trp Ile Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr
45 50 55 60
gtc aag acg ggc acc aac ggc tat gtt gcc aag aag tgc tct tct ggt 288
Val Lys Thr Gly Thr Asn Gly Tyr Val Ala Lys Lys Cys Ser Ser Gly
65 70 75
gga agc act ggt ggc ggc agc ggc ggc ggc aag ggt aac ctg ccc ggt 336
Gly Ser Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Lys Gly Asn Leu Pro Gly
80 85 90
ctg aat gcc aag cag tcg tct cat gct cgg gct atc gtc gcc cag gcg 384
Leu Asn Ala Lys Gln Ser Ser His Ala Arg Ala Ile Val Ala Gln Ala
95 100 105
aag aag gac ggt gtc ggt ctc cac ggc tgc gag gcc ggt att gcg acc 432
Lys Lys Asp Gly Val Gly Leu His Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr
110 115 120
gct ctt gtc gag gtaagcttct tccacggtat accatccaga ttcatattga 484
Ala Leu Val Glu
125
aacccatgac taaccctcca ccag tcc ggc atc aag gtc tac gcc aac aaa 535
Ser Gly Ile Lys Val Tyr Ala Asn Lys
130 135
aag gtg ccc gcc tcg ctc aag tac ccg cac gac gcc gtc ggc tcc gac 583
Lys Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp
140 145 150
cac gac agc atc ggc atc ttc cag cag cgc gcc gtc tac tac ccc aac 631
His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Val Tyr Tyr Pro Asn
155 160 165
atc gcc gcc gac atg gac ccc gcg cgc tcc gcc cac cag ttc ttt gcc 679
Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala His Gln Phe Phe Ala
170 175 180 185
aag atg aag ggc gtc tcg ggc tgg aag acc atg gct gtc ggc aag ctc 727
Lys Met Lys Gly Val Ser Gly Trp Lys Thr Met Ala Val Gly Lys Leu
190 195 200
tgc cag aag gtc cag gtc tcg gct tac ccg gac cgc tat gcc aag cgg 775
Cys Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Lys Arg
205 210 215
gtg tcg gag gcc acc aag att tgc aag gct gct ggg atc tga 817
Val Ser Glu Ala Thr Lys Ile Cys Lys Ala Ala Gly Ile
220 225 230
<210> 17
<211> 250
<212> PRT
<213> Ovatospora brasiliensis
<400> 17
Met Gln Ile Ser Leu Ile Ala Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Leu Pro
-20 -15 -10 -5
Ala Val Ser Ala Tyr Pro Val Lys Ala Asp Ser Leu Asn Cys Arg Ser
-1 1 5 10
Gly Pro Gly Thr Ser Tyr Lys Val Val Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Ala
15 20 25
Asp Ile Lys Ile Ser Cys Gln Thr Glu Gly Pro Ser Val Asn Gly Asp
30 35 40
Asn Leu Trp Ile Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr
45 50 55 60
Val Lys Thr Gly Thr Asn Gly Tyr Val Ala Lys Lys Cys Ser Ser Gly
65 70 75
Gly Ser Thr Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Lys Gly Asn Leu Pro Gly
80 85 90
Leu Asn Ala Lys Gln Ser Ser His Ala Arg Ala Ile Val Ala Gln Ala
95 100 105
Lys Lys Asp Gly Val Gly Leu His Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr
110 115 120
Ala Leu Val Glu Ser Gly Ile Lys Val Tyr Ala Asn Lys Lys Val Pro
125 130 135 140
Ala Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser
145 150 155
Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Val Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala
160 165 170
Asp Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala His Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys
175 180 185
Gly Val Ser Gly Trp Lys Thr Met Ala Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys
190 195 200
Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Lys Arg Val Ser Glu
205 210 215 220
Ala Thr Lys Ile Cys Lys Ala Ala Gly Ile
225 230
<210> 18
<211> 230
<212> PRT
<213> Ovatospora brasiliensis
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(230)
<400> 18
Tyr Pro Val Lys Ala Asp Ser Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Val Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Ala Asp Ile Lys Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Glu Gly Pro Ser Val Asn Gly Asp Asn Leu Trp Ile
35 40 45
Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Asn Gly Tyr Val Ala Lys Lys Cys Ser Ser Gly Gly Ser Thr Gly
65 70 75 80
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Lys Gly Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ala Lys
85 90 95
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100 105 110
Val Gly Leu His Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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Ala Arg Ser Ala His Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Val Ser Gly
180 185 190
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195 200 205
Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Lys Arg Val Ser Glu Ala Thr Lys Ile
210 215 220
Cys Lys Ala Ala Gly Ile
225 230
<210> 19
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<212> DNA
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<220>
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<220>
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<220>
<221> 成熟肽
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<220>
<221> CDS
<222> (513)..(818)
<400> 19
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Met Pro Leu Thr Lys Phe Leu Pro Val Leu Ala Leu Ser Leu Leu Thr
-20 -15 -10
ccc ttc gca acc gcc tac ccc ata act ggc gac gtg gta aac tgc cgc 96
Pro Phe Ala Thr Ala Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Val Val Asn Cys Arg
-5 -1 1 5 10
tcc ggc cca gga acc acc tac gac gtc gtc aaa tcc tac aaa cta aac 144
Ser Gly Pro Gly Thr Thr Tyr Asp Val Val Lys Ser Tyr Lys Leu Asn
15 20 25
gcc gat gtc tcg att aca tgc caa gca ccc ggc acc gat gtc aag ggt 192
Ala Asp Val Ser Ile Thr Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Lys Gly
30 35 40
gat tcg gtc tgg gac aag acc gcc gac ggc tgc tat gtt gcg gat tac 240
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45 50 55
tac gtg aaa acc ggt agc agc agc tac gtg aca acg aag tgt ggt ggt 288
Tyr Val Lys Thr Gly Ser Ser Ser Tyr Val Thr Thr Lys Cys Gly Gly
60 65 70 75
gat gac gac ggc ggt gat aat gat ggt ggt agt tcc gga aat ctt ccc 336
Asp Asp Asp Gly Gly Asp Asn Asp Gly Gly Ser Ser Gly Asn Leu Pro
80 85 90
ggt ctg aca tcg act cag tcc aag cat gcg aag gat atc att gcc gag 384
Gly Leu Thr Ser Thr Gln Ser Lys His Ala Lys Asp Ile Ile Ala Glu
95 100 105
gcg aag agt gag gat ctt ggg cgg cag gga tgt ctg gct ggt att gct 432
Ala Lys Ser Glu Asp Leu Gly Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala
110 115 120
act gct att gtt gag gtgagcagcc ccttcgcatt ttctttcttg tccttttacc 487
Thr Ala Ile Val Glu
125
ggatattcag ctctaacgca ttcag tca aat atc ctc ata tac gct aac agt 539
Ser Asn Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Ser
130 135
ggc gtc ccc gag tct ctg aaa tac ccg cat gac gca gtc ggt tct gat 587
Gly Val Pro Glu Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp
140 145 150
cac gat agt gtc ggg att ttc cag cag cgc gct atg ttt tat aag gat 635
His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Phe Tyr Lys Asp
155 160 165
att gcg gct gat atg gat gcg ggt aaa tct gct ggg caa ttt ttt ggg 683
Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Gly Lys Ser Ala Gly Gln Phe Phe Gly
170 175 180 185
aaa atg aag gct gtt agt ggg tgg aag agt atg gat gtg ggc act ttg 731
Lys Met Lys Ala Val Ser Gly Trp Lys Ser Met Asp Val Gly Thr Leu
190 195 200
tgt cag aag gtg cag ggt tct gct tat cct tcg agg tat gcg gag cag 779
Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Ser Arg Tyr Ala Glu Gln
205 210 215
gtg tcg aag gct gag aag att tgt aag gcg ggt ggg ctt tga 821
Val Ser Lys Ala Glu Lys Ile Cys Lys Ala Gly Gly Leu
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<210> 20
<211> 251
<212> PRT
<213> 惠灵顿青霉
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Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Phe Tyr Lys Asp Ile Ala
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175 180 185
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190 195 200
Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Ser Arg Tyr Ala Glu Gln Val Ser
205 210 215
Lys Ala Glu Lys Ile Cys Lys Ala Gly Gly Leu
220 225 230
<210> 21
<211> 230
<212> PRT
<213> 惠灵顿青霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(230)
<400> 21
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Val Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
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Thr Tyr Asp Val Val Lys Ser Tyr Lys Leu Asn Ala Asp Val Ser Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp Ser Val Trp Asp
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Asp Asn Asp Gly Gly Ser Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ser Thr
85 90 95
Gln Ser Lys His Ala Lys Asp Ile Ile Ala Glu Ala Lys Ser Glu Asp
100 105 110
Leu Gly Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Ile Val Glu
115 120 125
Ser Asn Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Ser Gly Val Pro Glu Ser Leu Lys
130 135 140
Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe
145 150 155 160
Gln Gln Arg Ala Met Phe Tyr Lys Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala
165 170 175
Gly Lys Ser Ala Gly Gln Phe Phe Gly Lys Met Lys Ala Val Ser Gly
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Cys Lys Ala Gly Gly Leu
225 230
<210> 22
<211> 817
<212> DNA
<213> 玫瑰紫青霉
<220>
<221> CDS
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<220>
<221> 信号肽
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<220>
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<220>
<221> CDS
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<400> 22
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Met Pro Ser Thr Lys Phe Leu Pro Phe Val Ala Ile Ala Leu Ile Ala
-20 -15 -10
gcg cct ctc tcc agc gca tac ccc atc acc ggc gat gtc gtg aac tgt 96
Ala Pro Leu Ser Ser Ala Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Val Val Asn Cys
-5 -1 1 5 10
cgc tcc ggg ccc ggt acc agc tac gat gta gtc aag tcc tac aag ctg 144
Arg Ser Gly Pro Gly Thr Ser Tyr Asp Val Val Lys Ser Tyr Lys Leu
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gac tcc gat gtc aca atc aag tgc caa gca tct gga acc gat gtc aag 192
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Gly Asp Ser Ile Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp
45 50 55
tac tac gtg aag acc ggc agc agc agc tac gtt acg acc aag tgt gat 288
Tyr Tyr Val Lys Thr Gly Ser Ser Ser Tyr Val Thr Thr Lys Cys Asp
60 65 70
gac aac gga ggc gat gat gat gat gat gaa ggt ggc agc tcg ggt gga 336
Asp Asn Gly Gly Asp Asp Asp Asp Asp Glu Gly Gly Ser Ser Gly Gly
75 80 85 90
aac ttg ccc ggt cta acc tcc acc cag tcg aag cat gcg aag gaa atc 384
Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ser Thr Gln Ser Lys His Ala Lys Glu Ile
95 100 105
att gcc gaa gca aag agc gag aat cta gga cat cga gga tgc acc gct 432
Ile Ala Glu Ala Lys Ser Glu Asn Leu Gly His Arg Gly Cys Thr Ala
110 115 120
ggt att gcg act gcg atc gtt gag gtaagacact cctcgtgaat aatattaaaa 486
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125 130
aatcacctct gacattttct ag tca aat att cta atc tac gcc aat aac gcc 538
Ser Asn Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Asn Ala
135 140
gtt ccc gag tct ctg aaa tac ccc cac gat aag gtg ggc tct gac cac 586
Val Pro Glu Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Lys Val Gly Ser Asp His
145 150 155
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160 165 170
gcg gct gat atg gat gct ggc aag tct gct gct caa ttc ttt gag aag 682
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175 180 185
atg acg gct atc agc ggg tgg aag agt atg gat gtt ggt act ttg tgc 730
Met Thr Ala Ile Ser Gly Trp Lys Ser Met Asp Val Gly Thr Leu Cys
190 195 200
cag aag gtg cag ggc tcc gct tat cct act cgg tat gct gag cag gtt 778
Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Ala Glu Gln Val
205 210 215 220
tca aag gcc gag aag att tgc tct gca ggt ggt ctt tga 817
Ser Lys Ala Glu Lys Ile Cys Ser Ala Gly Gly Leu
225 230
<210> 23
<211> 254
<212> PRT
<213> 玫瑰紫青霉
<400> 23
Met Pro Ser Thr Lys Phe Leu Pro Phe Val Ala Ile Ala Leu Ile Ala
-20 -15 -10
Ala Pro Leu Ser Ser Ala Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Val Val Asn Cys
-5 -1 1 5 10
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Asp Ser Asp Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gly Thr Asp Val Lys
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45 50 55
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110 115 120
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220 225 230
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<212> PRT
<213> 玫瑰紫青霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(232)
<400> 24
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Val Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Asp Val Val Lys Ser Tyr Lys Leu Asp Ser Asp Val Thr Ile
20 25 30
Lys Cys Gln Ala Ser Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
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Asp Asp Asp Glu Gly Gly Ser Ser Gly Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr
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Ser Thr Gln Ser Lys His Ala Lys Glu Ile Ile Ala Glu Ala Lys Ser
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130 135 140
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145 150 155 160
Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Phe Tyr Lys Asp Ile Ala Ala Asp Met
165 170 175
Asp Ala Gly Lys Ser Ala Ala Gln Phe Phe Glu Lys Met Thr Ala Ile
180 185 190
Ser Gly Trp Lys Ser Met Asp Val Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln
195 200 205
Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Ala Glu Gln Val Ser Lys Ala Glu
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Lys Ile Cys Ser Ala Gly Gly Leu
225 230
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<212> DNA
<213> 帚青霉
<220>
<221> CDS
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<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(60)
<220>
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<220>
<221> CDS
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atg atg ttc act cct ctt ttg gct ctt act ttt gcc gcc atc gcg ccg 48
Met Met Phe Thr Pro Leu Leu Ala Leu Thr Phe Ala Ala Ile Ala Pro
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att gtc aat gct tat cct atc acc ggc gac ggt gtc aat tgc cgc tct 96
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-1 1 5 10
ggt cct gga acc tcc tat tct gta gtc aag agc tac cag aag gga gcc 144
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gat gtt gca att acg tgc caa gca cct ggc act gat gtc aaa ggt gac 192
Asp Val Ala Ile Thr Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp
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aac atc tgg gac aag act gcc gac ggc tgc tat gtt gcc gac tac tat 240
Asn Ile Trp Asp Lys Thr Ala Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr
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atc aaa act gga agc agt agc tac gtt act gcg aaa tgc gat gac agc 288
Ile Lys Thr Gly Ser Ser Ser Tyr Val Thr Ala Lys Cys Asp Asp Ser
65 70 75
ggg agc ggc agt gga ggc gac agc agt gga aac ctc cct ggt ttg acg 336
Gly Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ser Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr
80 85 90
tcc act cag tcc aag cat gca aag gcc att atc ggt gaa gcg aag aaa 384
Ser Thr Gln Ser Lys His Ala Lys Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys
95 100 105
gaa gac ctg ggc cgc cag ggc tgt ctt gct ggt atc gca act gca ctt 432
Glu Asp Leu Gly Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu
110 115 120
gta gag gtaagcttca acgaagatac ttaatccagg tatgtttaat tagatactga 488
Val Glu
125
ctgacgatca cag tct aat atc tac atc tat gcc aac aaa aag gtg ccc 537
Ser Asn Ile Tyr Ile Tyr Ala Asn Lys Lys Val Pro
130 135
tcg tcc ctt aac tac ccg cac gac aag gtc ggc tcc gat tac gac agc 585
Ser Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Lys Val Gly Ser Asp Tyr Asp Ser
140 145 150
gtg ggc atc ttc cag cag cgt gcc gtt tac tat ccc aac atc gct gcc 633
Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Val Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala
155 160 165 170
gat atg gat gcc gca aag tca gct gga cag ttc ttt gcc aag atg aag 681
Asp Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala Gly Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys
175 180 185
ggt atc agt ggt tgg aag tcc atg gag gtt ggt aag ctt tgc cag aag 729
Gly Ile Ser Gly Trp Lys Ser Met Glu Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys
190 195 200
gtg caa ggc tcg gcg tac cct acc cga tat gcg gaa cgt ctt tct gag 777
Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Ala Glu Arg Leu Ser Glu
205 210 215
gcg aag aag att tgt gct gct ggt ggc ttg taa 810
Ala Lys Lys Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
220 225
<210> 26
<211> 248
<212> PRT
<213> 帚青霉
<400> 26
Met Met Phe Thr Pro Leu Leu Ala Leu Thr Phe Ala Ala Ile Ala Pro
-20 -15 -10 -5
Ile Val Asn Ala Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser
-1 1 5 10
Gly Pro Gly Thr Ser Tyr Ser Val Val Lys Ser Tyr Gln Lys Gly Ala
15 20 25
Asp Val Ala Ile Thr Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp
30 35 40
Asn Ile Trp Asp Lys Thr Ala Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr
45 50 55 60
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65 70 75
Gly Ser Gly Ser Gly Gly Asp Ser Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr
80 85 90
Ser Thr Gln Ser Lys His Ala Lys Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys
95 100 105
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110 115 120
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145 150 155
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160 165 170
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175 180 185
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190 195 200
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225
<210> 27
<211> 228
<212> PRT
<213> 帚青霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(228)
<400> 27
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ser Val Val Lys Ser Tyr Gln Lys Gly Ala Asp Val Ala Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp Asn Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ala Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Ile Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Tyr Val Thr Ala Lys Cys Asp Asp Ser Gly Ser Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Asp Ser Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ser Thr Gln Ser
85 90 95
Lys His Ala Lys Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Asp Leu Gly
100 105 110
Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Asn
115 120 125
Ile Tyr Ile Tyr Ala Asn Lys Lys Val Pro Ser Ser Leu Asn Tyr Pro
130 135 140
His Asp Lys Val Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln
145 150 155 160
Arg Ala Val Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Lys
165 170 175
Ser Ala Gly Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Ile Ser Gly Trp Lys
180 185 190
Ser Met Glu Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr
195 200 205
Pro Thr Arg Tyr Ala Glu Arg Leu Ser Glu Ala Lys Lys Ile Cys Ala
210 215 220
Ala Gly Gly Leu
225
<210> 28
<211> 809
<212> DNA
<213> 霉白曲霉
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(438)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(60)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (61)..(806)
<220>
<221> CDS
<222> (501)..(806)
<400> 28
atg ctg tat ctt ttt ctc act gcc ctt tcg ttt gct gcc act gct ccc 48
Met Leu Tyr Leu Phe Leu Thr Ala Leu Ser Phe Ala Ala Thr Ala Pro
-20 -15 -10 -5
ctg gta ggc gca tat ccc att act ggt gat gga gtc aac tgc cgt tct 96
Leu Val Gly Ala Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser
-1 1 5 10
ggt cct ggt aca agc cat gcc gtg gtc aag tcc tac ccc aag ggc cac 144
Gly Pro Gly Thr Ser His Ala Val Val Lys Ser Tyr Pro Lys Gly His
15 20 25
gag ata tcc att gtc tgc caa gct gcc gga acc gac gtc aag gga gat 192
Glu Ile Ser Ile Val Cys Gln Ala Ala Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp
30 35 40
gat ctc tgg gat aag acg tct gac ggc tgc tac gtc gcc gat tac tac 240
Asp Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr
45 50 55 60
gtg aag act ggg acg acc ggc tat gtc acc aag cac tgc gat ggc ggc 288
Val Lys Thr Gly Thr Thr Gly Tyr Val Thr Lys His Cys Asp Gly Gly
65 70 75
agt gat ggt ggc agc agt ggc ggc agc ggc aat ctt cct ggc ctc act 336
Ser Asp Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr
80 85 90
gcc act cag tcc tct cac gcc cat aag att att ggc gaa gca aag aag 384
Ala Thr Gln Ser Ser His Ala His Lys Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys
95 100 105
gaa ggc ctg ggt cgt caa ggt tgt ctg gct ggt att gca act gct ttg 432
Glu Gly Leu Gly Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu
110 115 120
gtc gag gtgagtcgct ccgagctttt ctccttccat ttgggtactg tactgacggt 488
Val Glu
125
gaacgtgtat ag tcc aac atc tta gtt tat gcc aac agc aag gtc ccg gcg 539
Ser Asn Ile Leu Val Tyr Ala Asn Ser Lys Val Pro Ala
130 135
tct ctc aac tac cct cat gac gcc gtc ggc cac gac tac gac agc gtt 587
Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Ala Val Gly His Asp Tyr Asp Ser Val
140 145 150 155
ggc atc ttc cag cag cgt gct gtc tac tat ccc gac atc gcc gcc gat 635
Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Val Tyr Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp
160 165 170
atg gac ccc gca cgt tct gcc gct cag ttc ttt gcc aag atg aag aat 683
Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala Ala Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Asn
175 180 185
atc agc ggc tgg aag acg atg gat gtt ggc aag ctt tgc cag aag gtg 731
Ile Ser Gly Trp Lys Thr Met Asp Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val
190 195 200
cag gtc tct gcc tat ccc gat cgg tat gca gag cgt gtt cct gct gcc 779
Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Glu Arg Val Pro Ala Ala
205 210 215
gaa aag atc tgc tct gct ggg ggg cta tag 809
Glu Lys Ile Cys Ser Ala Gly Gly Leu
220 225
<210> 29
<211> 248
<212> PRT
<213> 霉白曲霉
<400> 29
Met Leu Tyr Leu Phe Leu Thr Ala Leu Ser Phe Ala Ala Thr Ala Pro
-20 -15 -10 -5
Leu Val Gly Ala Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser
-1 1 5 10
Gly Pro Gly Thr Ser His Ala Val Val Lys Ser Tyr Pro Lys Gly His
15 20 25
Glu Ile Ser Ile Val Cys Gln Ala Ala Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp
30 35 40
Asp Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr
45 50 55 60
Val Lys Thr Gly Thr Thr Gly Tyr Val Thr Lys His Cys Asp Gly Gly
65 70 75
Ser Asp Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr
80 85 90
Ala Thr Gln Ser Ser His Ala His Lys Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys
95 100 105
Glu Gly Leu Gly Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu
110 115 120
Val Glu Ser Asn Ile Leu Val Tyr Ala Asn Ser Lys Val Pro Ala Ser
125 130 135 140
Leu Asn Tyr Pro His Asp Ala Val Gly His Asp Tyr Asp Ser Val Gly
145 150 155
Ile Phe Gln Gln Arg Ala Val Tyr Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met
160 165 170
Asp Pro Ala Arg Ser Ala Ala Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Asn Ile
175 180 185
Ser Gly Trp Lys Thr Met Asp Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln
190 195 200
Val Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Glu Arg Val Pro Ala Ala Glu
205 210 215 220
Lys Ile Cys Ser Ala Gly Gly Leu
225
<210> 30
<211> 228
<212> PRT
<213> 霉白曲霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(228)
<400> 30
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser His Ala Val Val Lys Ser Tyr Pro Lys Gly His Glu Ile Ser Ile
20 25 30
Val Cys Gln Ala Ala Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp Asp Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Tyr Val Thr Lys His Cys Asp Gly Gly Ser Asp Gly Gly
65 70 75 80
Ser Ser Gly Gly Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ala Thr Gln Ser
85 90 95
Ser His Ala His Lys Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Gly Leu Gly
100 105 110
Arg Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Asn
115 120 125
Ile Leu Val Tyr Ala Asn Ser Lys Val Pro Ala Ser Leu Asn Tyr Pro
130 135 140
His Asp Ala Val Gly His Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln
145 150 155 160
Arg Ala Val Tyr Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Arg
165 170 175
Ser Ala Ala Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Asn Ile Ser Gly Trp Lys
180 185 190
Thr Met Asp Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Tyr
195 200 205
Pro Asp Arg Tyr Ala Glu Arg Val Pro Ala Ala Glu Lys Ile Cys Ser
210 215 220
Ala Gly Gly Leu
225
<210> 31
<211> 813
<212> DNA
<213> 毛壳菌属物种ZY369
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(429)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (58)..(810)
<220>
<221> CDS
<222> (505)..(810)
<400> 31
atg caa ctc tca ctc acg gct ctg gcc ctc gcg gcc gct ctc ccc atg 48
Met Gln Leu Ser Leu Thr Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Leu Pro Met
-15 -10 -5
gtc agc gcc tac ccc gtc aag gcg gac ttg ctc aac tgc cgc act ggc 96
Val Ser Ala Tyr Pro Val Lys Ala Asp Leu Leu Asn Cys Arg Thr Gly
-1 1 5 10
ccc gga acc agc tac gac ctt gtc acg caa tac aag aag ggc acc gac 144
Pro Gly Thr Ser Tyr Asp Leu Val Thr Gln Tyr Lys Lys Gly Thr Asp
15 20 25
gtc aag atc acc tgc cag acc aca ggc acg gtc gtc gag ggt cat aac 192
Val Lys Ile Thr Cys Gln Thr Thr Gly Thr Val Val Glu Gly His Asn
30 35 40 45
ctc tgg gac aag acc tcg gac ggg tgc tac gtt gcc gac ttc tac atc 240
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Phe Tyr Ile
50 55 60
cag acg ggc act tcc ggc tat gtc gcg gac aaa tgc ggc gag acc ggc 288
Gln Thr Gly Thr Ser Gly Tyr Val Ala Asp Lys Cys Gly Glu Thr Gly
65 70 75
ggt ggc ggt gac acc ggc ggc aac ctc ccc ggg ctc acc gcg gtg cag 336
Gly Gly Gly Asp Thr Gly Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ala Val Gln
80 85 90
tcc agg aac gcc agg gct atc atc ggc gag gcg aag aag gaa ggg ctt 384
Ser Arg Asn Ala Arg Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Gly Leu
95 100 105
ggc cgc cag ggc tgt gag gcg ggc att gcg acc gcc att gtc gag 429
Gly Arg Gln Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Ile Val Glu
110 115 120
gtgagatcca atgacccacg ggactatgaa gcgcttgtgt cactacaagg tgaacccctt 489
actaacacca cccag tcc aac atc cta att tac gcc aat aag aag gtc aag 540
Ser Asn Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Lys Lys Val Lys
125 130 135
gag tcg tac aac tac ccg cac gac gcc gtg ggc gag gac cac gac agc 588
Glu Ser Tyr Asn Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Glu Asp His Asp Ser
140 145 150
gtc ggc atc ttc cag cag cgc gtg acc ttc tac ccc gac atc gag gcc 636
Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Val Thr Phe Tyr Pro Asp Ile Glu Ala
155 160 165
agc atg gac ccg gcc cgg tcc gcg gcc cag ttt ttc acc gag atg aag 684
Ser Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala Ala Gln Phe Phe Thr Glu Met Lys
170 175 180
cgg atc agc ggc tgg aag acc atg gac gtt ggg acg ctg tgc cag aag 732
Arg Ile Ser Gly Trp Lys Thr Met Asp Val Gly Thr Leu Cys Gln Lys
185 190 195 200
gtg cag cgc tcc gcg tac cca gac cgc tat ggc aag cag gtc gac aag 780
Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Gly Lys Gln Val Asp Lys
205 210 215
gct ggg aag att tgt gct gct ggc ggt atg taa 813
Ala Gly Lys Ile Cys Ala Ala Gly Gly Met
220 225
<210> 32
<211> 245
<212> PRT
<213> 毛壳菌属物种ZY369
<400> 32
Met Gln Leu Ser Leu Thr Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Leu Pro Met
-15 -10 -5
Val Ser Ala Tyr Pro Val Lys Ala Asp Leu Leu Asn Cys Arg Thr Gly
-1 1 5 10
Pro Gly Thr Ser Tyr Asp Leu Val Thr Gln Tyr Lys Lys Gly Thr Asp
15 20 25
Val Lys Ile Thr Cys Gln Thr Thr Gly Thr Val Val Glu Gly His Asn
30 35 40 45
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Phe Tyr Ile
50 55 60
Gln Thr Gly Thr Ser Gly Tyr Val Ala Asp Lys Cys Gly Glu Thr Gly
65 70 75
Gly Gly Gly Asp Thr Gly Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ala Val Gln
80 85 90
Ser Arg Asn Ala Arg Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Gly Leu
95 100 105
Gly Arg Gln Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Ile Val Glu Ser
110 115 120 125
Asn Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Lys Lys Val Lys Glu Ser Tyr Asn Tyr
130 135 140
Pro His Asp Ala Val Gly Glu Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln
145 150 155
Gln Arg Val Thr Phe Tyr Pro Asp Ile Glu Ala Ser Met Asp Pro Ala
160 165 170
Arg Ser Ala Ala Gln Phe Phe Thr Glu Met Lys Arg Ile Ser Gly Trp
175 180 185
Lys Thr Met Asp Val Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala
190 195 200 205
Tyr Pro Asp Arg Tyr Gly Lys Gln Val Asp Lys Ala Gly Lys Ile Cys
210 215 220
Ala Ala Gly Gly Met
225
<210> 33
<211> 226
<212> PRT
<213> 毛壳菌属物种ZY369
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(226)
<400> 33
Tyr Pro Val Lys Ala Asp Leu Leu Asn Cys Arg Thr Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Asp Leu Val Thr Gln Tyr Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Thr Gly Thr Val Val Glu Gly His Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Phe Tyr Ile Gln Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Gly Tyr Val Ala Asp Lys Cys Gly Glu Thr Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Asp Thr Gly Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ala Val Gln Ser Arg Asn
85 90 95
Ala Arg Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Gly Leu Gly Arg Gln
100 105 110
Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Ile Val Glu Ser Asn Ile Leu
115 120 125
Ile Tyr Ala Asn Lys Lys Val Lys Glu Ser Tyr Asn Tyr Pro His Asp
130 135 140
Ala Val Gly Glu Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Val
145 150 155 160
Thr Phe Tyr Pro Asp Ile Glu Ala Ser Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala
165 170 175
Ala Gln Phe Phe Thr Glu Met Lys Arg Ile Ser Gly Trp Lys Thr Met
180 185 190
Asp Val Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp
195 200 205
Arg Tyr Gly Lys Gln Val Asp Lys Ala Gly Lys Ile Cys Ala Ala Gly
210 215 220
Gly Met
225
<210> 34
<211> 804
<212> DNA
<213> Talaromyces atricola
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(429)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(60)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (61)..(801)
<220>
<221> CDS
<222> (496)..(801)
<400> 34
atg ttt gcc acc tcg ctc att gca ctg tcc ctc gcg aca att ctc ccc 48
Met Phe Ala Thr Ser Leu Ile Ala Leu Ser Leu Ala Thr Ile Leu Pro
-20 -15 -10 -5
atc tcg aac gcg tat ccc att aag act gat gga ctt cac tgt cgc tcg 96
Ile Ser Asn Ala Tyr Pro Ile Lys Thr Asp Gly Leu His Cys Arg Ser
-1 1 5 10
ggg cct gga act ggt tat tca gtt gtg aag acc tat aat aag ggt gaa 144
Gly Pro Gly Thr Gly Tyr Ser Val Val Lys Thr Tyr Asn Lys Gly Glu
15 20 25
gag gtc tca atc aaa tgc cag gct cct gga acc aac atc aat gga gat 192
Glu Val Ser Ile Lys Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asn Ile Asn Gly Asp
30 35 40
att ctc tgg gat ctg act gag aat ggc tgt tat gtc gcg gat tac tac 240
Ile Leu Trp Asp Leu Thr Glu Asn Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr
45 50 55 60
gtt agt act ggt act agt ggc tac gtc act gat aag tgt ggt agc agt 288
Val Ser Thr Gly Thr Ser Gly Tyr Val Thr Asp Lys Cys Gly Ser Ser
65 70 75
ggt ggc ggt ggc agc gat gga gat ctt ccg ggt ctc aac tct gta caa 336
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Gly Asp Leu Pro Gly Leu Asn Ser Val Gln
80 85 90
tcg tcc cac gcc cga gcc att atc gcg gag gcc aag cag gag agt ctt 384
Ser Ser His Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Ala Lys Gln Glu Ser Leu
95 100 105
ggt cac cag ggc tgt cta gct ggc att gca act gct ctg act gag 429
Gly His Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Thr Glu
110 115 120
gtaggcttcg atcccactcg tctctaagtg tctcattttc agcaaccatt actaattgag 489
ctgcag tcg agc att tta gtt tac gca aac aag gct gtt cca gct tcg 537
Ser Ser Ile Leu Val Tyr Ala Asn Lys Ala Val Pro Ala Ser
125 130 135
atg aac tac aaa tac gac gcg gtt ggc agc gat cac gat agc att ggc 585
Met Asn Tyr Lys Tyr Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly
140 145 150
atc ttc caa caa cgc gct atg tac tat ccc gat atc gct gcc gac atg 633
Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met
155 160 165
gat cct gct aag tcc gcc gca cag ttc ttc gcc aag atg aag ggg gtt 681
Asp Pro Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Val
170 175 180 185
agt gga tgg caa acc atg gat gtt ggt gac cta tgc cag aag gtt caa 729
Ser Gly Trp Gln Thr Met Asp Val Gly Asp Leu Cys Gln Lys Val Gln
190 195 200
gga tct gct tat ccg acc cga tat gaa cag cat ttg tcc gct gct aaa 777
Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Glu Gln His Leu Ser Ala Ala Lys
205 210 215
tcg atc tgc tct gct gat agt gat taa 804
Ser Ile Cys Ser Ala Asp Ser Asp
220 225
<210> 35
<211> 245
<212> PRT
<213> Talaromyces atricola
<400> 35
Met Phe Ala Thr Ser Leu Ile Ala Leu Ser Leu Ala Thr Ile Leu Pro
-20 -15 -10 -5
Ile Ser Asn Ala Tyr Pro Ile Lys Thr Asp Gly Leu His Cys Arg Ser
-1 1 5 10
Gly Pro Gly Thr Gly Tyr Ser Val Val Lys Thr Tyr Asn Lys Gly Glu
15 20 25
Glu Val Ser Ile Lys Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asn Ile Asn Gly Asp
30 35 40
Ile Leu Trp Asp Leu Thr Glu Asn Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr
45 50 55 60
Val Ser Thr Gly Thr Ser Gly Tyr Val Thr Asp Lys Cys Gly Ser Ser
65 70 75
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Gly Asp Leu Pro Gly Leu Asn Ser Val Gln
80 85 90
Ser Ser His Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Ala Lys Gln Glu Ser Leu
95 100 105
Gly His Gln Gly Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Thr Glu Ser
110 115 120
Ser Ile Leu Val Tyr Ala Asn Lys Ala Val Pro Ala Ser Met Asn Tyr
125 130 135 140
Lys Tyr Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln
145 150 155
Gln Arg Ala Met Tyr Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala
160 165 170
Lys Ser Ala Ala Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Val Ser Gly Trp
175 180 185
Gln Thr Met Asp Val Gly Asp Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala
190 195 200
Tyr Pro Thr Arg Tyr Glu Gln His Leu Ser Ala Ala Lys Ser Ile Cys
205 210 215 220
Ser Ala Asp Ser Asp
225
<210> 36
<211> 225
<212> PRT
<213> Talaromyces atricola
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(225)
<400> 36
Tyr Pro Ile Lys Thr Asp Gly Leu His Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Gly Tyr Ser Val Val Lys Thr Tyr Asn Lys Gly Glu Glu Val Ser Ile
20 25 30
Lys Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asn Ile Asn Gly Asp Ile Leu Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Glu Asn Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Ser Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Gly Tyr Val Thr Asp Lys Cys Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Asp Gly Asp Leu Pro Gly Leu Asn Ser Val Gln Ser Ser His Ala
85 90 95
Arg Ala Ile Ile Ala Glu Ala Lys Gln Glu Ser Leu Gly His Gln Gly
100 105 110
Cys Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Thr Glu Ser Ser Ile Leu Val
115 120 125
Tyr Ala Asn Lys Ala Val Pro Ala Ser Met Asn Tyr Lys Tyr Asp Ala
130 135 140
Val Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met
145 150 155 160
Tyr Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Lys Ser Ala Ala
165 170 175
Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Val Ser Gly Trp Gln Thr Met Asp
180 185 190
Val Gly Asp Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg
195 200 205
Tyr Glu Gln His Leu Ser Ala Ala Lys Ser Ile Cys Ser Ala Asp Ser
210 215 220
Asp
225
<210> 37
<211> 794
<212> DNA
<213> 粗糙短梗蠕孢
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(426)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (58)..(791)
<220>
<221> CDS
<222> (486)..(791)
<400> 37
atg cag ctc tcg ctc atc gcg ctc acc ctt gcg gcc gct gtc ccc ata 48
Met Gln Leu Ser Leu Ile Ala Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Pro Ile
-15 -10 -5
gtc agc gcg tac cct gtc aag gaa aca ctc aac tgc cgc tct ggt ccc 96
Val Ser Ala Tyr Pro Val Lys Glu Thr Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro
-1 1 5 10
gga acc agc tac aaa gtt gtc aag aca tac aag cag ggt gcg gat gtc 144
Gly Thr Ser Tyr Lys Val Val Lys Thr Tyr Lys Gln Gly Ala Asp Val
15 20 25
aag atc acc tgc cag acc acc ggt cca acc atc aag ggt tcc aat atc 192
Lys Ile Thr Cys Gln Thr Thr Gly Pro Thr Ile Lys Gly Ser Asn Ile
30 35 40 45
tgg gac aag acc caa gat ggg tgc tac gtc gcc gac tat tac atc aag 240
Trp Asp Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Ile Lys
50 55 60
aca ggg tct tcg ggc tat gtt gcc gcc aag tgt ggt gcc agt ggt ggt 288
Thr Gly Ser Ser Gly Tyr Val Ala Ala Lys Cys Gly Ala Ser Gly Gly
65 70 75
gat ggc ggc ggc agt ggc acc ctc cct ggc cta aac gcg gtt cag tcc 336
Asp Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu Pro Gly Leu Asn Ala Val Gln Ser
80 85 90
aag cac gcc aaa gcc atc gtt ggc caa gcg aag aaa gac ggt gtc ggc 384
Lys His Ala Lys Ala Ile Val Gly Gln Ala Lys Lys Asp Gly Val Gly
95 100 105
cgc cac ggc tgt gag gcc ggt att gca act gcc ctt gtc gag 426
Arg His Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu
110 115 120
gtaagacccc atcccatgac tgtccgggat aagaaccgcc atctaacgcc gcgatttag 485
tcg acc atg tat gtc tac gcc aac aac aag gtt ccc aaa tcg ctc aac 533
Ser Thr Met Tyr Val Tyr Ala Asn Asn Lys Val Pro Lys Ser Leu Asn
125 130 135
tac ccg cat gac cgg gtc ggc tcg gat tac gac agc gtc ggc atc ttc 581
Tyr Pro His Asp Arg Val Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe
140 145 150 155
cag cag cgc gcc atc tac tat ccc aac atc gcc gcc gat atg gac cct 629
Gln Gln Arg Ala Ile Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro
160 165 170
gcc agg tct gca ggg cag ttc ttt gcc aag atg aag ggg gtc agc ggc 677
Ala Arg Ser Ala Gly Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Val Ser Gly
175 180 185
tgg aag acg atg gct gtt ggc aag ttg tgc cag aag gtg cag gtc tcg 725
Trp Lys Thr Met Ala Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Val Ser
190 195 200
gcc tac cct gac cgc tat gcg cag cag gtc tcc aaa gcc acc aag att 773
Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Gln Gln Val Ser Lys Ala Thr Lys Ile
205 210 215
tgt gct gct gct ggt ctc tag 794
Cys Ala Ala Ala Gly Leu
220 225
<210> 38
<211> 244
<212> PRT
<213> 粗糙短梗蠕孢
<400> 38
Met Gln Leu Ser Leu Ile Ala Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Pro Ile
-15 -10 -5
Val Ser Ala Tyr Pro Val Lys Glu Thr Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro
-1 1 5 10
Gly Thr Ser Tyr Lys Val Val Lys Thr Tyr Lys Gln Gly Ala Asp Val
15 20 25
Lys Ile Thr Cys Gln Thr Thr Gly Pro Thr Ile Lys Gly Ser Asn Ile
30 35 40 45
Trp Asp Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Ile Lys
50 55 60
Thr Gly Ser Ser Gly Tyr Val Ala Ala Lys Cys Gly Ala Ser Gly Gly
65 70 75
Asp Gly Gly Gly Ser Gly Thr Leu Pro Gly Leu Asn Ala Val Gln Ser
80 85 90
Lys His Ala Lys Ala Ile Val Gly Gln Ala Lys Lys Asp Gly Val Gly
95 100 105
Arg His Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Thr
110 115 120 125
Met Tyr Val Tyr Ala Asn Asn Lys Val Pro Lys Ser Leu Asn Tyr Pro
130 135 140
His Asp Arg Val Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln
145 150 155
Arg Ala Ile Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Arg
160 165 170
Ser Ala Gly Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Val Ser Gly Trp Lys
175 180 185
Thr Met Ala Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Tyr
190 195 200 205
Pro Asp Arg Tyr Ala Gln Gln Val Ser Lys Ala Thr Lys Ile Cys Ala
210 215 220
Ala Ala Gly Leu
225
<210> 39
<211> 225
<212> PRT
<213> 粗糙短梗蠕孢
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(225)
<400> 39
Tyr Pro Val Lys Glu Thr Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Ser
1 5 10 15
Tyr Lys Val Val Lys Thr Tyr Lys Gln Gly Ala Asp Val Lys Ile Thr
20 25 30
Cys Gln Thr Thr Gly Pro Thr Ile Lys Gly Ser Asn Ile Trp Asp Lys
35 40 45
Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Ile Lys Thr Gly Ser
50 55 60
Ser Gly Tyr Val Ala Ala Lys Cys Gly Ala Ser Gly Gly Asp Gly Gly
65 70 75 80
Gly Ser Gly Thr Leu Pro Gly Leu Asn Ala Val Gln Ser Lys His Ala
85 90 95
Lys Ala Ile Val Gly Gln Ala Lys Lys Asp Gly Val Gly Arg His Gly
100 105 110
Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Thr Met Tyr Val
115 120 125
Tyr Ala Asn Asn Lys Val Pro Lys Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Arg
130 135 140
Val Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Ile
145 150 155 160
Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala Gly
165 170 175
Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Val Ser Gly Trp Lys Thr Met Ala
180 185 190
Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Arg
195 200 205
Tyr Ala Gln Gln Val Ser Lys Ala Thr Lys Ile Cys Ala Ala Ala Gly
210 215 220
Leu
225
<210> 40
<211> 1063
<212> DNA
<213> 肉色绿僵菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(663)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (58)..(1060)
<220>
<221> CDS
<222> (755)..(1060)
<400> 40
atg cat ctc act tcc ctc tcc gta tac ttg gcc gtc ggc ggc tcc atg 48
Met His Leu Thr Ser Leu Ser Val Tyr Leu Ala Val Gly Gly Ser Met
-15 -10 -5
gtg gcg gca tac ccc atc aag gac aac aat gta aac tgc cgc tcc ggc 96
Val Ala Ala Tyr Pro Ile Lys Asp Asn Asn Val Asn Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
ccg gga acc agc ttc tcc gtc gtc aaa cag tac aag ctc gac caa gac 144
Pro Gly Thr Ser Phe Ser Val Val Lys Gln Tyr Lys Leu Asp Gln Asp
15 20 25
gtc aca gtc agc tgc cag acc cac ggg gag agc att tcc ggc gac acg 192
Val Thr Val Ser Cys Gln Thr His Gly Glu Ser Ile Ser Gly Asp Thr
30 35 40 45
ctc tgg gac aag acg tcg gac ggg tgc tac gtg gcc gac tgg tac gtg 240
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Trp Tyr Val
50 55 60
agg acg ggc acg tcc aac atg gtc acc gga cag tgc ggc agc ggc tat 288
Arg Thr Gly Thr Ser Asn Met Val Thr Gly Gln Cys Gly Ser Gly Tyr
65 70 75
ccc atc aag gag gac aat gtc cac tgc cgc tca ggt ccc ggg acg acc 336
Pro Ile Lys Glu Asp Asn Val His Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Thr
80 85 90
ttt ggc gtc gtc aag acg tac ccc aag ggg caa aag gtc gag ctg tcc 384
Phe Gly Val Val Lys Thr Tyr Pro Lys Gly Gln Lys Val Glu Leu Ser
95 100 105
tgc cag acc cag ggc gag acc gta tcg ggc aac agc ctc tgg gac aag 432
Cys Gln Thr Gln Gly Glu Thr Val Ser Gly Asn Ser Leu Trp Asp Lys
110 115 120 125
acg acc gac ggc tgc tac gtg tcc gac tcg ctc gtc cag acg ggc aca 480
Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Ser Leu Val Gln Thr Gly Thr
130 135 140
tca aac atg gtc gct ggc cag tgt gcc ggc gcc ccc agc agt ccc ccc 528
Ser Asn Met Val Ala Gly Gln Cys Ala Gly Ala Pro Ser Ser Pro Pro
145 150 155
tct gga gga tca gga aat ctc ccc ggc ctg agt gct act cag agc gcg 576
Ser Gly Gly Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Ser Ala Thr Gln Ser Ala
160 165 170
cac gcc cgc gcc atc atc gcc cag gtg aag aag gag gga ctt ggc aga 624
His Ala Arg Ala Ile Ile Ala Gln Val Lys Lys Glu Gly Leu Gly Arg
175 180 185
cag ggc tgt gaa gcc ggc ctg gcc acc gga ctc act gag gtatgtctac 673
Gln Gly Cys Glu Ala Gly Leu Ala Thr Gly Leu Thr Glu
190 195 200
catgaatgag caccagcgtg attatgattg tgcagacaga cagacgacga gaacagtaaa 733
ggctaacatg aaccaaaaca g tcg agt ttg cgc atc ctg gcc aac aac gct 784
Ser Ser Leu Arg Ile Leu Ala Asn Asn Ala
205 210
gtg ccg gcg tcc ttg aag tac gcg cac gac ggc atg ggc tct gac cac 832
Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Ala His Asp Gly Met Gly Ser Asp His
215 220 225
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Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr Thr Asp Ile
230 235 240
gcc tgc gac atg gac gct gcc tgc tcc gcg agc agc ttc ttc aag ggc 928
Ala Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Ser Ser Phe Phe Lys Gly
245 250 255 260
atg acg ggc ata tcc ggc tgg cgg acc atg gat gtt gcc aag ctc tgc 976
Met Thr Gly Ile Ser Gly Trp Arg Thr Met Asp Val Ala Lys Leu Cys
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cag gcc gtg cag cgg tcg gcc tat cct gat gcc tac cag aag tat gtt 1024
Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Ala Tyr Gln Lys Tyr Val
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ggt gcg gct gct gag atc tgc gct gct gga ggg tcg taa 1063
Gly Ala Ala Ala Glu Ile Cys Ala Ala Gly Gly Ser
295 300
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<211> 323
<212> PRT
<213> 肉色绿僵菌
<400> 41
Met His Leu Thr Ser Leu Ser Val Tyr Leu Ala Val Gly Gly Ser Met
-15 -10 -5
Val Ala Ala Tyr Pro Ile Lys Asp Asn Asn Val Asn Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
Pro Gly Thr Ser Phe Ser Val Val Lys Gln Tyr Lys Leu Asp Gln Asp
15 20 25
Val Thr Val Ser Cys Gln Thr His Gly Glu Ser Ile Ser Gly Asp Thr
30 35 40 45
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Trp Tyr Val
50 55 60
Arg Thr Gly Thr Ser Asn Met Val Thr Gly Gln Cys Gly Ser Gly Tyr
65 70 75
Pro Ile Lys Glu Asp Asn Val His Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Thr
80 85 90
Phe Gly Val Val Lys Thr Tyr Pro Lys Gly Gln Lys Val Glu Leu Ser
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Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Ser Leu Val Gln Thr Gly Thr
130 135 140
Ser Asn Met Val Ala Gly Gln Cys Ala Gly Ala Pro Ser Ser Pro Pro
145 150 155
Ser Gly Gly Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Ser Ala Thr Gln Ser Ala
160 165 170
His Ala Arg Ala Ile Ile Ala Gln Val Lys Lys Glu Gly Leu Gly Arg
175 180 185
Gln Gly Cys Glu Ala Gly Leu Ala Thr Gly Leu Thr Glu Ser Ser Leu
190 195 200 205
Arg Ile Leu Ala Asn Asn Ala Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Ala His
210 215 220
Asp Gly Met Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg
225 230 235
Ala Met Tyr Tyr Thr Asp Ile Ala Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser
240 245 250
Ala Ser Ser Phe Phe Lys Gly Met Thr Gly Ile Ser Gly Trp Arg Thr
255 260 265
Met Asp Val Ala Lys Leu Cys Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro
270 275 280 285
Asp Ala Tyr Gln Lys Tyr Val Gly Ala Ala Ala Glu Ile Cys Ala Ala
290 295 300
Gly Gly Ser
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<212> PRT
<213> 肉色绿僵菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(304)
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Tyr Pro Ile Lys Asp Asn Asn Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Phe Ser Val Val Lys Gln Tyr Lys Leu Asp Gln Asp Val Thr Val
20 25 30
Ser Cys Gln Thr His Gly Glu Ser Ile Ser Gly Asp Thr Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Trp Tyr Val Arg Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Asn Met Val Thr Gly Gln Cys Gly Ser Gly Tyr Pro Ile Lys
65 70 75 80
Glu Asp Asn Val His Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Thr Phe Gly Val
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Val Lys Thr Tyr Pro Lys Gly Gln Lys Val Glu Leu Ser Cys Gln Thr
100 105 110
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Gly Cys Tyr Val Ser Asp Ser Leu Val Gln Thr Gly Thr Ser Asn Met
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Val Ala Gly Gln Cys Ala Gly Ala Pro Ser Ser Pro Pro Ser Gly Gly
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Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Ser Ala Thr Gln Ser Ala His Ala Arg
165 170 175
Ala Ile Ile Ala Gln Val Lys Lys Glu Gly Leu Gly Arg Gln Gly Cys
180 185 190
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Ala Asn Asn Ala Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Ala His Asp Gly Met
210 215 220
Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr
225 230 235 240
Tyr Thr Asp Ile Ala Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Ser Ser
245 250 255
Phe Phe Lys Gly Met Thr Gly Ile Ser Gly Trp Arg Thr Met Asp Val
260 265 270
Ala Lys Leu Cys Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Ala Tyr
275 280 285
Gln Lys Tyr Val Gly Ala Ala Ala Glu Ile Cys Ala Ala Gly Gly Ser
290 295 300
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<212> DNA
<213> 土生梭孢壳霉
<220>
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<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (58)..(835)
<220>
<221> CDS
<222> (530)..(835)
<400> 43
atg cag ctc tcc ctc ctc gtc ctc tcc ctc gtg gcc gct gtg ccc atg 48
Met Gln Leu Ser Leu Leu Val Leu Ser Leu Val Ala Ala Val Pro Met
-15 -10 -5
gcc agc gcg tac ccg gtc aag gcc gac act ctc aac tgc cgc tcc ggc 96
Ala Ser Ala Tyr Pro Val Lys Ala Asp Thr Leu Asn Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
ccg ggc acc agt tac aag gtc atc aag acc tac aag aag ggc acc gat 144
Pro Gly Thr Ser Tyr Lys Val Ile Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Thr Asp
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ctc aag atc acc tgc cag acg ccc ggc acc tcg gtc aac ggc gac aac 192
Leu Lys Ile Thr Cys Gln Thr Pro Gly Thr Ser Val Asn Gly Asp Asn
30 35 40 45
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Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val
50 55 60
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Lys Thr Gly Thr Ser Gly Tyr Val Thr Ala His Cys Asp Ala Gly Ser
65 70 75
ggc agc ggc agc agc ggc ggc ggc aac ctg cca gga ctc aac tcg gtc 336
Gly Ser Gly Ser Ser Gly Gly Gly Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ser Val
80 85 90
cag tcc tcg cac gcc cgg gcc atc atc ggc gag gcg aag aag gag ggc 384
Gln Ser Ser His Ala Arg Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Gly
95 100 105
gtc ggc cgc cac ggc tgc gag gcc ggc atc gcg acc gcg ctt gtc gag 432
Val Gly Arg His Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu
110 115 120 125
gtacgttgca tcctaacatc aacacttact tgccttgacc ccactgtcac cgccagaaaa 492
aaccaaaact aacacatcac ctcttcccct cacacag tcc aac atc ctg atc tac 547
Ser Asn Ile Leu Ile Tyr
130
gcc aac aag gcg gtc ccg gcc tcg ctc aag tac ccg cac gac gcg gtg 595
Ala Asn Lys Ala Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Ala Val
135 140 145
ggc tcg gac cac gac agc gtc ggc atc ttc cag cag cgc gcc aag tac 643
Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Lys Tyr
150 155 160
tac ccc aac atc gcg gcc gac atg gac ccg gcg cgc tcg gcc gcc cag 691
Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala Ala Gln
165 170 175
ttc ttc gcc aag atg aag ggc atc aag ggc tgg cag agc atg gcc gtc 739
Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Ile Lys Gly Trp Gln Ser Met Ala Val
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ggc acg ctc tgc cag aag gtc cag ggc tcc gcg tac ccg gac cgc tat 787
Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr
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gcc aag cgg gtc tcg gag gcg acc aag att tgc cag gct ggt ggg ttg 835
Ala Lys Arg Val Ser Glu Ala Thr Lys Ile Cys Gln Ala Gly Gly Leu
215 220 225
taa 838
<210> 44
<211> 246
<212> PRT
<213> 土生梭孢壳霉
<400> 44
Met Gln Leu Ser Leu Leu Val Leu Ser Leu Val Ala Ala Val Pro Met
-15 -10 -5
Ala Ser Ala Tyr Pro Val Lys Ala Asp Thr Leu Asn Cys Arg Ser Gly
-1 1 5 10
Pro Gly Thr Ser Tyr Lys Val Ile Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Thr Asp
15 20 25
Leu Lys Ile Thr Cys Gln Thr Pro Gly Thr Ser Val Asn Gly Asp Asn
30 35 40 45
Leu Trp Asp Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val
50 55 60
Lys Thr Gly Thr Ser Gly Tyr Val Thr Ala His Cys Asp Ala Gly Ser
65 70 75
Gly Ser Gly Ser Ser Gly Gly Gly Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ser Val
80 85 90
Gln Ser Ser His Ala Arg Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Gly
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Val Gly Arg His Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu
110 115 120 125
Ser Asn Ile Leu Ile Tyr Ala Asn Lys Ala Val Pro Ala Ser Leu Lys
130 135 140
Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe
145 150 155
Gln Gln Arg Ala Lys Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro
160 165 170
Ala Arg Ser Ala Ala Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Ile Lys Gly
175 180 185
Trp Gln Ser Met Ala Val Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser
190 195 200 205
Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Lys Arg Val Ser Glu Ala Thr Lys Ile
210 215 220
Cys Gln Ala Gly Gly Leu
225
<210> 45
<211> 227
<212> PRT
<213> 土生梭孢壳霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(227)
<400> 45
Tyr Pro Val Lys Ala Asp Thr Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Ile Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Thr Asp Leu Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Pro Gly Thr Ser Val Asn Gly Asp Asn Leu Trp Asp
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Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Gly Tyr Val Thr Ala His Cys Asp Ala Gly Ser Gly Ser Gly
65 70 75 80
Ser Ser Gly Gly Gly Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ser Val Gln Ser Ser
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Leu Ile Tyr Ala Asn Lys Ala Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Pro His
130 135 140
Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg
145 150 155 160
Ala Lys Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Arg Ser
165 170 175
Ala Ala Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Ile Lys Gly Trp Gln Ser
180 185 190
Met Ala Val Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro
195 200 205
Asp Arg Tyr Ala Lys Arg Val Ser Glu Ala Thr Lys Ile Cys Gln Ala
210 215 220
Gly Gly Leu
225
<210> 46
<211> 144
<212> PRT
<213> 棒曲霉
<400> 46
Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ala Thr Gln Ser Ser His Ala Arg
1 5 10 15
Asp Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Asn Leu Gly Arg Gln Gly Cys
20 25 30
Leu Ala Gly Ile Ala Thr Gly Leu Val Glu Ser Asn Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ala Asn Ser Lys Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Lys His Asp Ala Val
50 55 60
Gly His Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Ile Tyr
65 70 75 80
Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala Ala Gln
85 90 95
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100 105 110
Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr
115 120 125
Ala Gln Arg Val Ser Ala Ala Glu Lys Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 47
<211> 137
<212> PRT
<213> 热带盐孢菌
<400> 47
Gly Leu Thr Gln Thr Gln Met Asp Asn Ala Lys Thr Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Thr Asp Met Asn Ile Pro His Arg Gly Leu Val Val Ala Ile Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Thr Leu Leu Asn Tyr Ala Asn Ala Gly Val
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Glu Ala Val Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ser Ser Thr Gly Trp Gly Ser Ile
65 70 75 80
Ala Glu Leu Met Thr Pro Thr Tyr Ala Ala Glu Ala Phe Tyr Gln Ala
85 90 95
Leu Leu Gln Val Pro Gly Trp Gln Gly Met Ser Val Ala Trp Ala Ala
100 105 110
Gln Ser Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Thr Arg Ala Thr Thr Ile Val Ser Ala
130 135
<210> 48
<211> 137
<212> PRT
<213> 海洋放线菌
<400> 48
Gly Leu Thr Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Thr Arg Met Asp Ile Pro His Arg Gly Leu Ile Val Ala Ile Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Thr Leu Leu Asn Tyr Ala Asn Gly Gly Val
35 40 45
Pro Glu Ser Arg Asn Tyr Pro His Gln Ala Val Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Ser Val
65 70 75 80
Ala Gln Leu Met Arg Pro Thr Tyr Ala Ala Glu Ala Phe Tyr Gln Ala
85 90 95
Leu Leu Thr Ile Pro Gly Trp Gln Glu Met Ser Val Ala Trp Ala Ala
100 105 110
Gln Ser Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Val
115 120 125
Thr Arg Ala Thr Thr Val Val Thr Ala
130 135
<210> 49
<211> 135
<212> PRT
<213> 红平红球菌
<400> 49
Gly Leu Asn Ala Ser Gln Thr Ala Leu Ala Lys Gln Ala Val Ala Ile
1 5 10 15
Gly Glu Ser Met Gly Val Pro Asp Gln Gly Ile Val Val Ala Leu Ala
20 25 30
Thr Met Ser Gln Glu Ser Thr Tyr Arg Met Leu Ala Ser Ser Asn Val
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Gln Tyr Pro His Asp Gly Val Gly Ser Asp His Leu
50 55 60
Ser Val Asn Gln Tyr Gln Gln Gln Val Gly Ile Trp Gly Thr Ala Glu
65 70 75 80
Asp Leu Met Asn Pro Val Thr Ala Asn Val Lys Phe Phe Asp Ala Leu
85 90 95
Leu Lys Val Ser Gly Trp Gln Ser Met Pro Val Thr Val Ala Ala Gln
100 105 110
Thr Val Gln Gly Ser Ala His Pro Glu Ala Tyr Ala Asp Asp Glu Thr
115 120 125
Leu Ala Arg Gln Leu Ala Ser
130 135
<210> 50
<211> 135
<212> PRT
<213> 分枝杆菌噬菌体Pacc40
<400> 50
Met Thr His Thr Asn Asp Thr Tyr Ala Arg Glu Ile Leu Arg Ala Gly
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35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
Ala His Ala Gln Ala Ile Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Gly
115 120 125
Gln Arg Met Ser Glu Ala Gln
130 135
<210> 51
<211> 144
<212> PRT
<213> 产红青霉
<400> 51
Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ser Thr Gln Ser Lys His Ala Lys
1 5 10 15
Asp Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Asp Leu Gly Arg Gln Gly Cys
20 25 30
Leu Ala Gly Ile Ala Thr Gly Leu Val Glu Ser Asn Met Leu Met Tyr
35 40 45
Ala Asn Lys Lys Val Pro Glu Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Ala Val
50 55 60
Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Val Tyr
65 70 75 80
Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala Ala Gln
85 90 95
Phe Phe Lys Gly Met Lys Ala Ile Ser Gly Trp Lys Thr Met Glu Val
100 105 110
Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Ser Arg Tyr
115 120 125
Ser Glu Arg Val Ala Glu Ala Lys Lys Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 52
<211> 136
<212> PRT
<213> 橙黄小单孢菌
<400> 52
Gly Leu Asp Arg Thr Gln Met Asn Asn Ala Lys Lys Ile Val Gln Ala
1 5 10 15
Gly Lys Glu Met Gly Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Thr Leu Leu Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Ser Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Glu Gln Leu Met Asp Pro Glu Tyr Ala Thr Lys Ala Phe Leu Ser Ala
85 90 95
Leu Ala Glu Ile Pro Gly Trp Gln Ser Leu Pro Leu Ser Val Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Gly Glu Val Val Ala
130 135
<210> 53
<211> 147
<212> PRT
<213> 橙黄小单孢菌
<400> 53
Thr Gly Asp Met Pro Arg Phe Ala Glu Tyr Gly Glu Arg Gln Leu Arg
1 5 10 15
Asn Ala Ala Val Ile Ile Lys Val Gly Gln Asp Met Lys Leu Pro Ala
20 25 30
Arg Gly Trp Val Ile Ala Leu Ala Thr Ala Met Gln Glu Ser Ala Leu
35 40 45
Arg Asn Leu Ala Asn Ser Thr Val Pro Ala Ser Leu Ala Leu Pro His
50 55 60
Glu Gly Val Gly Ala Asp His Asp Ser Leu Gly Leu Phe Gln Gln Arg
65 70 75 80
Pro Gly Trp Gly Ser Val Glu Gln Arg Met Thr Pro Ser Tyr Ala Ala
85 90 95
Arg Lys Phe Tyr Gln Lys Met Glu Lys Val Pro Asp Trp Gln Gln Arg
100 105 110
Pro Leu Thr Val Val Ala Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp
115 120 125
Ala Tyr Ala Lys His Glu Glu Leu Ala Gly Ala Ile Val Asp Ala Leu
130 135 140
Ala Gly Gly
145
<210> 54
<211> 137
<212> PRT
<213> 橙黄小单孢菌
<400> 54
Gly Leu Asp Gln Arg Gln Met Asp Asn Ala Lys Ala Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Arg Glu Met Lys Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Val Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Gln Ser Phe Asp His Pro His Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Gln Leu Met Arg Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Tyr Ala Ala
85 90 95
Leu Arg Glu Val Pro Gly Trp Glu Asp Met Ser Val Thr Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Ala Tyr Ala Arg His Glu
115 120 125
Lys Arg Ala Thr Thr Val Val Ser Ala
130 135
<210> 55
<211> 143
<212> PRT
<213> 黑孢块菌
<400> 55
Gly Asn Leu Pro Gly Leu Asp Ala Thr Gln Ser Arg His Ala Arg Thr
1 5 10 15
Ile Ile Ala Val Ala Arg Glu Tyr Gly Val Gly Asn Arg Gly Cys Gln
20 25 30
Val Ser Ile Val Thr Ala Met Gln Glu Ser Arg Ile Arg Val Leu Ala
35 40 45
Asn Pro Ser Val Pro Asp Ser Asn Lys Tyr Pro His Asp Gly Thr Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Pro Gln Phe Trp
65 70 75 80
Gly Thr Val Lys Asp Cys Met Asp Pro Lys Thr Ser Ala Gly Lys Phe
85 90 95
Phe Thr Ala Leu Lys Lys Val Asn Gly Trp Glu Arg Met Glu Ile Gly
100 105 110
Arg Ala Ala Gln Ser Val Gln Arg Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Thr
115 120 125
Lys His Thr Pro Leu Ala Lys Gly Val Cys Glu Ala Gly Gly Ile
130 135 140
<210> 56
<211> 142
<212> PRT
<213> Hypocrea atroviridis
<400> 56
Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ala Val Gln Thr Lys Tyr Ala Asn Ala Ile
1 5 10 15
Ile Ala Lys Ala Lys Ala Asp Asp Val Gly Ser His Gly Cys Gln Ala
20 25 30
Ala Ile Ala Thr Ala Met Val Glu Ser Ser Ile Ile Met Tyr Ala Asn
35 40 45
Lys Ala Val Pro Gly Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Arg Ile Gly Ser
50 55 60
Asp His Asp Arg Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile Tyr Lys
65 70 75 80
Asn Val Lys Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Gly Gln Phe Phe
85 90 95
Ala Glu Met Lys Lys Val Ser Gly Trp Gln Thr Met Ala Val Gly Thr
100 105 110
Leu Cys Gln Lys Ile Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Lys
115 120 125
Gln Val Gly Leu Ala Thr Asn Val Cys Lys Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 57
<211> 137
<212> PRT
<213> 蝗绿僵菌
<400> 57
Leu Thr Glu Leu Gln Ala Lys Tyr Ala Arg Gly Ile Ile Ala Gln Ala
1 5 10 15
Lys Lys Glu Arg Leu Gly Ala Gln Gly Cys Arg Ala Gly Ile Ala Thr
20 25 30
Ala Leu Val Glu Ser Thr Leu Ile Met His Ala Asn Tyr Ala Val Pro
35 40 45
Asp Ser Leu Val Tyr Asp Tyr Asp Arg Leu Gly Tyr Asp Arg Asp Ser
50 55 60
Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile Tyr Thr Asp Ile Lys Cys
65 70 75 80
Ser Met Asn Ala Ala Cys Ser Ala His Gln Phe Phe Thr Glu Met Lys
85 90 95
Gly Val Pro Glu Trp Arg Tyr Met Asp Val Gly Thr Leu Cys Gln Glu
100 105 110
Val Gln Arg Ser Glu Asn Pro Glu Gln Tyr His Glu Phe Ile Asp Gln
115 120 125
Ala Val Asp Ile Cys Lys Glu Gly Gly
130 135
<210> 58
<211> 142
<212> PRT
<213> 罗伯茨绿僵菌
<400> 58
Asn Leu Pro Ser Leu Asn Ala Ala Gln Ser Gly Tyr Ala Lys Ser Ile
1 5 10 15
Ile Ala Lys Ala Lys Ala Ala Gly Val Gln Arg His Gly Cys Gln Ala
20 25 30
Ala Ile Ala Thr Gly Leu Val Glu Ser Lys Leu Leu Met Tyr Ala Asn
35 40 45
Asn Ala Val Pro Ala Ser Leu Thr Tyr Arg His Gly Gly Ile Ser Ser
50 55 60
Asp Asn Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Ser Val Tyr Lys
65 70 75 80
Asn Ile Ala Cys Ser Met Asp Ala Gly Cys Ser Ala Gly Gln Phe Phe
85 90 95
Ser Gln Met Lys Arg Ile Gly Gly Trp Gln Thr Leu Ser Val Gly Ala
100 105 110
Leu Cys Gln Lys Ile Gln Gln Ser Ser Phe Pro Asp Arg Tyr Glu Lys
115 120 125
Gln Val Ala Ala Ala Ala Ser Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 59
<211> 137
<212> PRT
<213> 海洋疣孢菌
<400> 59
Gly Leu Thr Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Val Asp Met Lys Ile Pro Arg Lys Gly Leu Val Val Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Thr Leu Leu Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Arg Asp Leu Met Arg Pro Ala Tyr Ser Ala Arg Ala Phe Tyr Glu Ala
85 90 95
Leu Leu Glu Val Pro Gly Trp Glu Gln Met Ser Leu Thr Leu Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Tyr Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Glu Arg Ala Asn Thr Ile Val Ala Ala
130 135
<210> 60
<211> 133
<212> PRT
<213> 海洋疣孢菌
<400> 60
Ser Gly Ala Gln Val Ala Asn Ala Val Val Ile Val Thr Ala Gly Arg
1 5 10 15
Gln Arg Gln Val Pro Ala Arg Gly Tyr Val Ile Ala Leu Ala Thr Ala
20 25 30
Met Gln Glu Ser Thr Leu Arg Asn Leu Ala Asn Ala Asn Val Pro Glu
35 40 45
Ser Leu Ala Leu Pro His Glu Gly Val Gly Arg Asp His Asp Ser Val
50 55 60
Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Gly Trp Gly Thr Val Arg Glu Arg Met
65 70 75 80
Thr Pro Ser Tyr Ala Ala Asp Arg Phe Tyr Glu Ala Leu Ala Arg Val
85 90 95
Asp Gly Trp Glu Arg Met Arg Leu Thr Asp Ala Ala Gln Ala Val Gln
100 105 110
Arg Ser Ala Tyr Pro Glu Glu Tyr Gln Lys Trp Glu Asp Asp Ala Glu
115 120 125
Leu Leu Ala Ala Ala
130
<210> 61
<211> 142
<212> PRT
<213> 球孢白僵菌
<400> 61
Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ala Leu Gln Thr Lys Tyr Ala Asn Ala Ile
1 5 10 15
Ile Ala Gln Ala Lys Lys Asp Gly Val Gly Ala His Gly Cys Gln Ala
20 25 30
Gly Ile Ala Thr Ala Met Val Glu Ser Thr Leu Val Met Tyr Ala Asn
35 40 45
Lys Ala Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Arg Val Gly Ser
50 55 60
Asp His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile Tyr Lys
65 70 75 80
Asn Val Lys Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Gly Gln Phe Phe
85 90 95
Ala Glu Met Lys Arg Ile Asn Gly Trp Gln Lys Ile Ala Val Gly Thr
100 105 110
Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Lys
115 120 125
Gln Val Gly Leu Ala Thr Asn Val Cys Lys Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 62
<211> 143
<212> PRT
<213> 土生梭孢壳霉
<400> 62
Gly Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ser Val Gln Ser Ser His Ala Arg Ala
1 5 10 15
Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Gly Val Gly Arg His Gly Cys Glu
20 25 30
Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Asn Ile Leu Ile Tyr Ala
35 40 45
Asn Lys Ala Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Ala Val Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala Ala Gln Phe
85 90 95
Phe Ala Lys Met Lys Gly Ile Lys Gly Trp Gln Ser Met Ala Val Gly
100 105 110
Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala
115 120 125
Lys Arg Val Ser Glu Ala Thr Lys Ile Cys Gln Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 63
<211> 137
<212> PRT
<213> Micromonospora peucetia
<400> 63
Gly Leu Thr Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Val Glu Leu Lys Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Val Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ser Met Gln Glu Ser Arg Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Thr Arg Tyr Pro His Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Arg Glu Leu Met Arg Pro Ser Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Tyr Glu Ala
85 90 95
Leu Arg Asp Val Pro Gly Trp Gln Gln Met Ser Val Ala Gly Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Gly Leu Ala Thr Thr Val Val Ala Ala
130 135
<210> 64
<211> 153
<212> PRT
<213> 产左聚糖微杆菌
<400> 64
Gly Ser Thr Arg Thr Leu Gly Ala Thr Glu Leu Gly His Ala Ala Thr
1 5 10 15
Ile Leu Ser Val Ala Arg Ser Leu Gly Val Ser Ala Arg Gly Gln Gln
20 25 30
Ile Ala Ile Met Thr Ala Leu Gln Glu Ser Gly Leu Lys Met Tyr Ala
35 40 45
Asn Ser Ser Val Pro Glu Ser Leu Asp Tyr Pro His Asp Ala Val Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Asn Tyr Phe Gln Gln Arg Val Ser Gly Trp
65 70 75 80
Gly Thr Val Glu Glu Leu Met Asp Pro Leu Tyr Ala Ala Lys Ala Phe
85 90 95
Phe Gly Gly Glu Glu Gly Pro Asn Gly Gly Ser Pro Arg Gly Leu Leu
100 105 110
Asp Ile Pro Gly Trp Glu Asp Met Gly Leu Gly Glu Ala Ala Gln Thr
115 120 125
Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Thr Ala Tyr Asp Lys Trp Glu Pro Ala
130 135 140
Ala Gln Gln Ile Ile Thr Ala Val Gly
145 150
<210> 65
<211> 134
<212> PRT
<213> 脓肿分枝杆菌
<400> 65
Ala Ser Arg Asp Asp Tyr Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Gly Lys Arg
1 5 10 15
Arg Gly Ile Thr Ala Arg Gly Ile Gln Ile Gly Leu Ala Thr Ala Ile
20 25 30
Val Glu Ser Ala Leu Lys Met Trp Ala Asn Glu Lys Val Pro Glu Ser
35 40 45
Phe Asn Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Asp Asp Gly Tyr Ser Val Gly
50 55 60
Leu Phe Gln Gln Gln Ile Val Lys Gly Pro Asn Gly Trp Trp Trp Ala
65 70 75 80
Asp Cys Ala Thr Cys Met Asn Pro Ala Arg Ser Ala Gly Leu Phe Phe
85 90 95
Asp Arg Leu Ala Lys Leu Pro Tyr Asn Asp Ala Leu Arg Leu Pro Gly
100 105 110
Ser Phe Ala Gln Gln Val Gln Gln Ser Asp Phe Pro Glu Arg Tyr Asp
115 120 125
Gln Arg Phe Ala Glu Ala
130
<210> 66
<211> 137
<212> PRT
<213> 羽扇豆小单孢菌菌株Lupac
<400> 66
Gly Leu Asp Asp Asp Gln Met Glu Asn Ala Glu Ala Ile Val Arg Ala
1 5 10 15
Gly Arg Lys Met Gly Val Pro Arg Arg Gly Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Val Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asp Tyr Pro His Gln Gly Val Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ser Ser Ser Gly Trp Gly Pro Val
65 70 75 80
Gly Arg Leu Met Asp Pro Glu Phe Ala Thr Arg Gln Phe Leu Thr Ala
85 90 95
Leu Glu Gln Val Pro Gly Trp Gln Gln Met Arg Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Glu His Tyr Gln Gln His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Thr Arg Val Val Asp Ala
130 135
<210> 67
<211> 137
<212> PRT
<213> 羽扇豆小单孢菌菌株Lupac
<400> 67
Gly Leu Asp Gln Val Gln Met Asp Asn Ala Lys Ile Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Arg Glu Leu Lys Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Val Ala Leu Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Thr Gln Tyr Pro His Gln Gly Ser Gly Ala Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Glu Leu Met Arg Pro Ser Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Tyr Thr Ala
85 90 95
Leu Ala Glu Ile Pro Gly Trp Glu Asp Met Ser Val Thr Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Glu Arg Ala Ser Thr Val Ala Ala Ala
130 135
<210> 68
<211> 144
<212> PRT
<213> 白色绿僵菌
<400> 68
Ala Gly Gly Leu Pro Gly Leu Asp Ala Val Gln Ser Gly Tyr Ala Arg
1 5 10 15
Ser Ile Ile Ala Lys Ala Lys Thr Ala Gly Val Gly Arg Arg Gly Cys
20 25 30
Ala Ala Ala Ile Ala Thr Gly Leu Val Glu Ser Thr Leu Met Met Tyr
35 40 45
Ala Asn Ser Ala Val Pro Glu Ser Leu Arg His His His Asp Arg Val
50 55 60
Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Val
65 70 75 80
Tyr Arg Asn Ile Ala Cys Asp Met Asp Ala Gly Cys Ser Ala Gly Gln
85 90 95
Phe Phe Ala Arg Ile Lys Gly Val Ser Gly Trp His Thr Met Ala Thr
100 105 110
Gly Thr Leu Ser Gln Thr Val Gln Gln Ser Ser Tyr Pro Gly Arg Tyr
115 120 125
Gly Ala Gln Ala Arg Ala Ala Ala Ala Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 69
<211> 142
<212> PRT
<213> 粉虱座壳孢
<400> 69
Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ala Val Gln Ser Arg Tyr Ala Arg Ala Ile
1 5 10 15
Ile Ala Glu Ala Ser Asn Asp Gly Val Gly Arg Gln Gly Cys Glu Ala
20 25 30
Ala Ile Ala Thr Gly Leu Val Glu Ser Ser Ile Ile Met Tyr Ala Asn
35 40 45
Ser Lys Val Pro Ala Ser Leu Asn Tyr His His Asp Arg Val Gly Ser
50 55 60
Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile Tyr Lys
65 70 75 80
Asp Ile Ala Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Gly Gln Phe Phe
85 90 95
Gln Glu Met Arg Arg Ile Lys Gly Trp Gln Thr Met Ala Val Gly Thr
100 105 110
Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Asn Lys
115 120 125
Arg Val Ala Glu Ala Arg Ser Ile Cys Ser Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 70
<211> 139
<212> PRT
<213> 白色绿僵菌
<400> 70
Gly Leu Thr Glu Leu Gln Ser Lys Tyr Ala Arg Arg Ile Thr Ala Gln
1 5 10 15
Ala Arg Lys Glu Glu Leu Gly Ala Gln Gly Cys Gln Ala Ala Ile Ala
20 25 30
Thr Ala Leu Met Glu Ser Thr Leu Ile Met His Ala Asn Ser Ala Val
35 40 45
Pro Gly Ser Leu Ala Phe His His Asp Arg Leu Gly Tyr Asp Gly Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile Tyr Thr Asp Leu Gly
65 70 75 80
Cys Ser Met Asn Ala Ala Cys Ser Ala His Gln Phe Phe Val Glu Met
85 90 95
Arg Asp Val Pro Asp Trp Glu Ser Met Asp Val Gly Thr Leu Cys Gln
100 105 110
Ala Val Gln Arg Ser Gln Asn Pro Glu Arg Tyr Tyr Glu Phe Ile Asp
115 120 125
Leu Ala Ala Ser Val Cys Ala Glu Ala Gly Leu
130 135
<210> 71
<211> 139
<212> PRT
<213> 布氏虫草
<400> 71
Pro Gly Leu Asn His Ala Gln Ser Arg Asn Ala Lys Ala Ala Ile Asp
1 5 10 15
Gln Val Arg Ala Glu Gly Leu Asn Arg Gln Ala Cys Leu Ala Val Ile
20 25 30
Ser Thr Ala Leu Gln Glu Ser Glu Leu Gln Ile Tyr Ala Asn Pro Ile
35 40 45
Val Pro Ala Ser Met Asn Tyr Pro His Asp Lys Val Gly Gly Asp Gln
50 55 60
Asp Ser Ile Gly Met Phe Gln Gln Arg Ala Lys Phe Tyr Ser Asp Ile
65 70 75 80
Ala Thr Asp Met Ser Ala Ala Gly Ser Thr Arg Leu Phe Leu Ala Asp
85 90 95
Met Lys Gly Ile Ala Gly Trp Gln Thr Met Glu Val Ser Ala Leu Cys
100 105 110
Gln Thr Val Gln Lys Ala Glu Ala Gly Asn Leu Tyr Gly Gln Arg Ile
115 120 125
Ser Leu Ala Glu Gln Val Cys Ser Ala Ala Gly
130 135
<210> 72
<211> 139
<212> PRT
<213> 莱氏绿僵菌
<400> 72
Gly Leu Asp Glu Val Gln Ser Lys Tyr Ala Gly Arg Ile Ile Ala Gln
1 5 10 15
Val Lys Met Glu Asn Leu Gly Pro Lys Ala Cys Gln Thr Ala Ile Thr
20 25 30
Thr Ser Leu Met Glu Ser Thr Leu Ile Met His Ala Asn Glu Arg Val
35 40 45
Pro Glu Ser Leu Thr Tyr Glu His Glu Arg Leu Gly Tyr Asp Gly Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Leu Phe Tyr Thr Asp Ile Lys
65 70 75 80
Cys Asn Met Asp Ala Val Cys Ser Ala His Gln Phe Leu Ala Arg Met
85 90 95
Lys Glu Ile Pro Glu Trp Glu Thr Ile Asp Val Gly Thr Leu Ala Gln
100 105 110
Lys Val Gln Arg Ser Glu Gln Pro Glu Arg Tyr His Gln Phe Val Asp
115 120 125
Gln Ser Val Ser Ile Cys Asn Leu Gly Gly Leu
130 135
<210> 73
<211> 139
<212> PRT
<213> 粗糙虫草
<400> 73
Pro Gly Ile Asn Glu Glu Gln Ser Arg Asn Ala Gly Ala Ala Ile Trp
1 5 10 15
Gln Val Arg Asn Tyr Arg Leu Gly Arg Gln Ala Cys Leu Ala Val Ile
20 25 30
Ser Thr Ala Leu Gln Glu Ser Glu Leu Glu Val Tyr Ala Asn Pro Arg
35 40 45
Val Pro Glu Ser Tyr Lys Tyr Pro His Asn Arg Glu Gly Gly Asp Gln
50 55 60
Asp Ser Val Gly Met Phe Gln Gln Arg Lys Ala Tyr Tyr Pro Asp Ile
65 70 75 80
Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Arg Ser Thr Gly Gln Phe Leu Asp Ala
85 90 95
Met Leu Arg Val Pro Gly Trp Gln Asn Met Glu Ile Ser Gln Leu Asp
100 105 110
Gln Ala Val Gln His Ala Glu Ala Gly Asn Leu Tyr Gly Gln Arg Ile
115 120 125
Pro Leu Ala Thr Arg Ile Cys Asn Ala Ala Gly
130 135
<210> 74
<211> 139
<212> PRT
<213> 粗糙虫草
<400> 74
Pro Gly Leu Asn Asn Val Gln Ser Arg Asn Ala Lys Ala Ala Ile Gly
1 5 10 15
Glu Val Arg Ala Glu Gly Leu Asn Arg Gln Ala Cys Leu Ala Val Ile
20 25 30
Ser Thr Ala Leu Gln Glu Ser Glu Leu Gln Ile Tyr Ala Asn Pro Arg
35 40 45
Val Pro Ala Ser Met Asn Tyr Pro His Asp Lys Val Gly Gly Asp Gln
50 55 60
Asp Ser Val Gly Met Phe Gln Gln Arg Ala Gln Phe Tyr Pro Asn Ile
65 70 75 80
Ala Thr Asp Met Ser Ala Ala Gly Ser Thr Arg Gln Phe Leu Ser Val
85 90 95
Met Lys Gly Ile Lys Gly Trp Gln Thr Met Glu Ile Ser Ala Leu Asp
100 105 110
Gln Ala Val Gln Arg Ala Gln Ala Gly Asn Leu Tyr Ala Lys Arg Ile
115 120 125
Pro Leu Ala Lys Gln Val Cys Ser Ala Ala Gly
130 135
<210> 75
<211> 142
<212> PRT
<213> 粗糙虫草
<400> 75
Gly Ser Tyr Pro Gly Leu Asp Ala Val Gln Ser Arg Asn Ala Ala Ala
1 5 10 15
Ala Ile Gly Glu Val Arg Ala Glu Gly Leu Asn Arg Gln Ala Cys Leu
20 25 30
Ala Val Ile Ser Thr Ala Leu Gln Glu Ser Thr Leu His Ile Tyr Ala
35 40 45
Asn Pro Arg Val Pro Ala Ser Tyr Asn Tyr Pro His Asp Leu Glu Gly
50 55 60
Gly Asp Gln Asp Ser Val Gly Met Phe Gln Gln Arg Ala Gln Phe Tyr
65 70 75 80
Pro Asp Ile Gly Ala Asp Met Ser Ala Ala Gly Ser Thr Arg Gln Phe
85 90 95
Leu Ala Val Met Lys Gly Ile Pro Gly Trp Gln Thr Met Glu Val Ser
100 105 110
Ala Leu Asp Gln Ala Val Gln Arg Ala Glu Ala Gly Asn Leu Tyr Ala
115 120 125
Gln Arg Leu Pro Leu Ala Asn Gln Val Cys Ser Ala Ala Gly
130 135 140
<210> 76
<211> 142
<212> PRT
<213> 玫烟色棒束孢
<400> 76
Gly Ser Tyr Pro Gly Leu Asp Ala Thr Gln Ser Arg Asn Ala Ala Ala
1 5 10 15
Ala Ile Gly Glu Val Arg Ala Glu Gly Leu Gly Arg Gln Ala Cys Leu
20 25 30
Ala Val Ile Ser Thr Ala Leu Gln Glu Ser Thr Leu His Ile Tyr Ala
35 40 45
Asn Pro Val Val Pro Ala Ser Met Asn Tyr Pro His Asp Leu Val Gly
50 55 60
Gly Asp Gln Asp Ser Val Gly Met Phe Gln Gln Arg Pro Glu Trp Tyr
65 70 75 80
Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Ser Ala Ala Gly Ser Thr Arg Gln Phe
85 90 95
Leu Ala Ala Met Lys Gln Val Ala Gly Trp Glu Thr Met Glu Val Ser
100 105 110
Ala Leu Asp Gln Ala Val Gln Lys Ala Glu Ala Gly Asn Leu Tyr Ala
115 120 125
Gln Arg Leu Pro Leu Ala Asn Gln Val Cys Ser Ala Ala Gly
130 135 140
<210> 77
<211> 144
<212> PRT
<213> 玫烟色棒束孢
<400> 77
Ala Ala Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ala Val Gln Thr Lys Tyr Ala Arg
1 5 10 15
Ala Ile Ile Ala Gln Ala Lys Lys Asp Gly Val Gly Ala His Gly Cys
20 25 30
Gln Ala Gly Ile Ala Thr Ala Met Val Glu Ser Ser Ile Ile Met Tyr
35 40 45
Ala Asn Asn Ala Val Pro Glu Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Arg Val
50 55 60
Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile
65 70 75 80
Tyr Lys Asn Val Lys Cys Asp Met Asn Ala Ala Cys Ser Ala Gly Gln
85 90 95
Phe Tyr Ala Glu Met Lys Arg Val Ser Gly Trp Lys Thr Met Ala Val
100 105 110
Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr
115 120 125
Ala Lys Gln Val Gly Leu Ala Thr Asn Ile Cys Lys Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 78
<211> 141
<212> PRT
<213> 玫烟色棒束孢
<400> 78
Ile Ala Gly Leu Asp Glu Thr Gln Ser Arg His Ala Gln Ala Ile Ile
1 5 10 15
Asp Val Val Lys Thr Glu Gly Val Gly Ala Leu Gly Cys Gln Ala Ala
20 25 30
Ile Ala Thr Ala Leu Thr Glu Ser Glu Leu Tyr Met His Ala Asn His
35 40 45
Ala Val Pro Gly Ser Leu Asp Lys Pro His Asp Arg Val Gly Ala Asp
50 55 60
Gln Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Val Phe Tyr Thr Asp
65 70 75 80
Val Gly Cys Thr Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Gly Leu Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Arg Ala Val Ala Gly Trp Gln Gly Met Glu Thr Ala Ala Leu
100 105 110
Cys Gln Ala Ile Gln Arg Ser Gln Ile Pro Asp Ala Tyr Ile Lys Asn
115 120 125
Val Ala Lys Ala Val Glu Val Cys Gly Gly Ser Gly Leu
130 135 140
<210> 79
<211> 143
<212> PRT
<213> 淡紫紫孢菌
<400> 79
Gly Asn Leu Pro Thr Leu Asn Ala Val Gln Ser Lys Asn Ala Arg Ala
1 5 10 15
Ile Ile Ala Gln Thr Lys Lys Gln Gly Leu Gly Arg Gln Gly Cys Met
20 25 30
Ala Ala Leu Ala Thr Gly Leu Thr Glu Ser Gln Ile Lys Ile Leu Ala
35 40 45
Asn Asn Lys Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr His Tyr Asp Gly Lys Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr
65 70 75 80
Lys Asp Ile Lys Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Ser Leu Phe
85 90 95
Phe Lys Gly Met Thr Ala Ile Lys Gly Trp Lys Thr Met Asp Val Ala
100 105 110
Lys Leu Cys Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Val Pro Thr Ala Tyr Arg
115 120 125
Lys Tyr Thr Ser Gln Ala Lys Thr Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 80
<211> 143
<212> PRT
<213> 厚垣孢普可尼亚菌
<400> 80
Gly Asn Leu Pro Thr Leu Asn Ala Leu Gln Thr Lys His Ala Arg Ala
1 5 10 15
Ile Ile Ala Gln Thr Lys Lys Gln Gly Leu Gly Arg Gln Gly Cys Glu
20 25 30
Ala Ala Ile Ala Thr Gly Leu Thr Glu Ser Ser Leu Arg Ile Leu Ala
35 40 45
Asn Arg Ser Val Pro Lys Ser Leu Asn Tyr Lys Tyr Asp Gly Ile Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr
65 70 75 80
Lys Asp Ile Lys Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Ser Leu Phe
85 90 95
Phe Lys Gly Met Val Ala Val Lys Gly Trp Lys Thr Met Asp Val Ala
100 105 110
Lys Leu Cys Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Val Pro Thr Ala Tyr Arg
115 120 125
Lys Tyr Thr Ser Ala Ala Lys Ser Ile Cys Ser Ala Gly Gly Ile
130 135 140
<210> 81
<211> 144
<212> PRT
<213> 厚垣孢普可尼亚菌
<400> 81
Ala Ala Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ser Leu Gln Ser Gly Tyr Ala Arg
1 5 10 15
Ala Ile Ile Ala Lys Ala Lys Ala Asp Gly Val Gly Arg His Gly Cys
20 25 30
Glu Ala Ala Ile Ala Thr Gly Leu Val Glu Ser Ser Leu Ile Met Tyr
35 40 45
Ala Asn Asn Ala Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr His His Asp Arg Val
50 55 60
Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile
65 70 75 80
Tyr Lys Asn Ile Ala Cys Asp Met Glu Ala Gly Cys Ser Ala Gly Gln
85 90 95
Phe Ile Ala Glu Met Lys Arg Ile Ser Gly Trp Gln Thr Met Ala Val
100 105 110
Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr
115 120 125
Ala Lys Gln Val Pro Thr Ala Thr Lys Val Cys Ala Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 82
<211> 143
<212> PRT
<213> 厚垣孢普可尼亚菌
<400> 82
Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ser Val Gln Thr Gly His Ala Arg
1 5 10 15
Ala Ile Ile Ala Gln Thr Lys Lys Gln Gly Leu Gly Arg Gln Gly Cys
20 25 30
Glu Ala Ala Ile Ala Thr Gly Leu Thr Glu Ser Gly Leu Arg Ile Leu
35 40 45
Ala Asn Asn Val Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Gly Met
50 55 60
Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr
65 70 75 80
Tyr Thr Asp Ile Gly Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Ser Ser
85 90 95
Phe Phe Lys Gly Met Thr Ala Ile Lys Gly Trp Gln Thr Met Asp Val
100 105 110
Ala Lys Leu Cys Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Val Pro Asp Ala Tyr
115 120 125
Lys Lys Tyr Val Gly Ala Ala Ala Ser Ile Cys Ala Ala Gly Gly
130 135 140
<210> 83
<211> 143
<212> PRT
<213> 草酸青霉菌
<400> 83
Gly Asn Leu Pro Gly Leu Ser Ala Thr Gln Ser Gln His Ala Arg Asp
1 5 10 15
Ile Ile Ala Glu Ala Lys Arg Glu Gly Leu Gly Leu Gln Gly Cys Ser
20 25 30
Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Ser Ile Leu Ile Tyr Ala
35 40 45
Asn Asn Ala Val Pro Ala Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Ala Val Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr
65 70 75 80
Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe
85 90 95
Phe Gln Lys Met Lys Ser Ile Ser Gly Trp Gln Thr Met Ala Ile Gly
100 105 110
Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala
115 120 125
Ala Arg Ala Ala Asp Ala Gln Asn Ile Cys Lys Ala Gly Gly Ile
130 135 140
<210> 84
<211> 148
<212> PRT
<213> 金龟子绿僵菌
<400> 84
Thr Gly Asp Leu Pro Pro Arg Thr Tyr Ser Asn Leu Ser Gly Leu Gln
1 5 10 15
Ser Lys Tyr Ala Arg Gly Ile Met Ala Gln Ala Lys Arg Glu His Leu
20 25 30
Gly Ser Gln Gly Cys Arg Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser
35 40 45
Thr Leu Ile Met His Ala Asn Met Ala Val Pro Ala Ser Leu Ala Tyr
50 55 60
Asp Phe Asp Arg Leu Gly Lys Asp Ala Asp Ser Ile Gly Leu Phe Gln
65 70 75 80
Gln Arg Ala Ser Ile Tyr Thr Asn Ile Lys Cys Ser Met Asp Val Ala
85 90 95
Cys Ser Ala His Gln Phe Phe Lys Glu Met Lys Thr Val Pro Gln Trp
100 105 110
Lys Tyr Met Pro Ile Gly Gln Leu Cys Gln Glu Val Gln His Ser Glu
115 120 125
Asn Pro Glu Arg Tyr His Asp Phe Ile Asp Gln Ala Thr Glu Ile Cys
130 135 140
Gln Ala Ala Gly
145
<210> 85
<211> 143
<212> PRT
<213> 金龟子绿僵菌
<400> 85
Gly Asn Leu Pro Asp Leu Asn Ala Leu Gln Ser Lys Tyr Ala Arg Gly
1 5 10 15
Ile Ile Ala Gln Ala Lys Lys Asp Gly Val Gly Ala His Gly Cys Gln
20 25 30
Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Thr Glu Ser Ser Leu Val Met Tyr Ala
35 40 45
Asn Asn Ala Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Arg Val Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile Tyr
65 70 75 80
Lys Asp Val Lys Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Gly Leu Phe
85 90 95
Phe Thr Glu Met Lys Arg Val Lys Gly Trp Gln Thr Met Ala Val Gly
100 105 110
Thr Leu Cys Gln Arg Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Asn
115 120 125
Lys Phe Val Pro Thr Ala Thr Lys Val Cys Lys Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 86
<211> 144
<212> PRT
<213> 娄地青霉
<400> 86
Ser Ser Asn Leu Pro Gly Leu Ser Ala Thr Gln Thr Lys His Ala Lys
1 5 10 15
Ala Ile Ile Ala Glu Ala Lys Lys Glu Gly Leu Gly Arg Gln Gly Cys
20 25 30
Leu Ala Gly Ile Ser Thr Ala Leu Val Glu Ser Asn Ile Leu Ile Tyr
35 40 45
Ala Asn Lys Lys Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr His His Asp Ala Val
50 55 60
Ala Glu Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Val Tyr
65 70 75 80
Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala Ala Gln
85 90 95
Phe Phe Lys Ile Met Lys Lys Val Ser Gly Trp Lys Lys Met Asn Thr
100 105 110
Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Ser Arg Tyr
115 120 125
Gln Glu Arg Val Pro Glu Ser Lys Lys Ile Cys Ser Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 87
<211> 140
<212> PRT
<213> 冰岛篮状菌
<400> 87
Gly Asn Leu Pro Gly Leu Asp Ser Thr Gln Ser Ser His Ala Arg Ala
1 5 10 15
Ile Ile Ala Glu Ala Lys Arg Glu Lys Leu Gly His Gln Gly Cys Leu
20 25 30
Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Thr Glu Ser Ser Ile Leu Ile Tyr Ala
35 40 45
Asn Ser Ala Val Pro Ala Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Ala Val Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Val Tyr Tyr
65 70 75 80
Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe
85 90 95
Phe Ala Lys Met Lys Gly Val Ser Gly Trp Gln Thr Met Asn Val Gly
100 105 110
Glu Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Gln
115 120 125
Glu His Leu Ser Ala Ala Glu Ser Ile Cys Ser Ala
130 135 140
<210> 88
<211> 144
<212> PRT
<213> 扩展青霉
<400> 88
Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Thr Ser Thr Gln Ser Lys His Ala Lys
1 5 10 15
Ala Ile Ile Ala Glu Ala Lys Lys Glu Asn Leu Gly Arg Gln Gly Cys
20 25 30
Leu Ala Gly Ile Ala Thr Gly Leu Val Glu Ser Asn Ile Leu Val Tyr
35 40 45
Ala Asn Lys Lys Val Pro Asp Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Ala Val
50 55 60
Gly Ser Asp Asn Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Ile Tyr
65 70 75 80
Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala Ala Gln
85 90 95
Phe Phe Lys Gly Ile Lys Asn Val Asn Gly Trp Lys Thr Met Glu Val
100 105 110
Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Ser Arg Tyr
115 120 125
Ala Glu Arg Leu Asp Asp Ala Lys Lys Ile Cys Val Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 89
<211> 142
<212> PRT
<213> 产黄支顶孢菌
<400> 89
Asn Leu Pro Gly Leu Asp Ser Thr Gln Thr Ala Asn Ala Gln Gly Ile
1 5 10 15
Leu Glu Gln Val Gly Thr Asp Asp Val Gly Leu Gln Gly Cys Leu Ala
20 25 30
Gly Phe Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Asn Ile Tyr Ile Tyr Ala Asn
35 40 45
Glu Ala Val Pro Glu Ser Leu Asn Tyr Pro Tyr Asp Lys Met Gly Ser
50 55 60
Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Phe Tyr Pro
65 70 75 80
Asp Ile Ala Ala Asn Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala Gly Gln Phe Phe
85 90 95
Asp Lys Met Val Ser Ile Ser Gly Trp Glu Thr Met Asp Val Gly Glu
100 105 110
Leu Cys Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Glu
115 120 125
Arg Val Glu Glu Ala Arg Ala Ile Cys Asn Ala Gly Gly Ile
130 135 140
<210> 90
<211> 139
<212> PRT
<213> 龟分枝杆菌
<400> 90
Ser Thr Lys Asp Arg His Ala Leu Ala Thr Ile Asn Glu Gly Lys Arg
1 5 10 15
Leu Gly Ile Thr Pro Lys Gly Ile Cys Ile Ala Ile Ala Val Glu Leu
20 25 30
Val Glu Thr Asn Leu Thr Met Tyr Ala Asn Ser Asn Val Pro Ala Ser
35 40 45
Leu Gly Tyr Pro His Glu Lys Val Gly Ser Asp His Asp Ser Thr Gly
50 55 60
Leu Phe Gln Gln Arg Gln Ala Trp Gly Pro Leu Ser Glu Thr Met Asp
65 70 75 80
Pro Thr Leu Ser Ala Arg Leu Phe Phe Leu Gly Gly His Ser Gly Gln
85 90 95
Arg Gly Leu Thr Asp Phe Asp Tyr Asn Ser Asn Ser Arg Thr Pro Gly
100 105 110
Gly Trp Ala Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Tyr Arg Tyr Asp
115 120 125
Glu Arg Tyr Thr Glu Ala Gln Gln Ile Tyr Ala
130 135
<210> 91
<211> 121
<212> PRT
<213> 分枝杆菌属物种TKK
<400> 91
Asn Gly Lys Ala Val Ile Ala Ala Gly Leu Gln Met Lys Val Pro Glu
1 5 10 15
Lys Gly Ile Ile Ile Gly Leu Ala Val Gly Met Glu Glu Ser Gly Leu
20 25 30
Arg Asn Leu Ala Asn Ser Asn Val Pro Glu Ser Leu Gly Ile Pro His
35 40 45
Glu Gly Val Gly His Asp His Lys Ser Val Gly Ile Met Gln Gln Gln
50 55 60
Pro Trp Trp Gly Ser Leu Arg Asp Leu Met Thr Pro Gly Val Ala Ala
65 70 75 80
Gln Lys Phe Phe Ala Lys Leu Leu Lys Val Gly Gly Trp Gln Asn Met
85 90 95
Ala Pro Thr Val Ala Ala Gln Thr Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Asp
100 105 110
Ala Tyr Ala Ala Phe Val Thr Gln Ala
115 120
<210> 92
<211> 142
<212> PRT
<213> 半翅目虫壳
<400> 92
Gly Asn Leu Pro Thr Leu Asn Ser Val Gln Ser Arg Asn Ala Asn Gly
1 5 10 15
Ile Ile Ala Glu Val Lys Arg Arg Asn Leu Gly Arg Gln Gly Cys Leu
20 25 30
Ala Ala Ile Thr Thr Gly Leu Thr Glu Ser Ser Ile Arg Ile Leu Ala
35 40 45
Asn Asn Ala Val Pro Ser Ser Leu Asn Tyr Ala His Asp Gly Leu Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Thr Asn Ile Gln Cys Asp Met Thr Ala Asp Cys Ser Ala Gly Leu Phe
85 90 95
Leu Ala Lys Met Ala Gly Ile Ser Gly Trp Gln Thr Met Asp Val Ala
100 105 110
Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Val Pro Asp Ala Tyr Lys
115 120 125
Lys Tyr Thr Ser Gln Ala Gly Thr Ile Cys Ser Ala Ala Gly
130 135 140
<210> 93
<211> 142
<212> PRT
<213> 半翅目虫壳
<400> 93
Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ala Val Gln Thr Lys Tyr Ala Asn Ala Ile
1 5 10 15
Ile Ala Glu Ala Lys Lys Val Gly Val Gly Ala His Gly Cys Gln Ala
20 25 30
Ala Ile Ala Thr Gly Leu Val Glu Ser Ser Ile Ile Met Tyr Ala Asn
35 40 45
Lys Gly Val Pro Ala Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Arg Val Gly Ser
50 55 60
Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile Tyr Lys
65 70 75 80
Asn Ile Lys Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Gly Gln Phe Phe
85 90 95
Thr Glu Met Lys Lys Val Lys Gly Trp Gln Thr Met Ala Val Gly Thr
100 105 110
Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Lys
115 120 125
Gln Val Gly Leu Ala Thr Lys Val Cys Lys Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 94
<211> 147
<212> PRT
<213> 节杆菌属物种PAMC
<400> 94
Leu Thr Ala Ala Gln Val Lys Val Ala Arg Ala Phe Ile Gly Val Gly
1 5 10 15
Lys Gln Leu Ser Ile Ser Asp Ile Gly Leu Gln Ile Ala Ile Met Val
20 25 30
Gly Leu Gln Glu Ser Gly Leu Arg Val Leu Ala Asn Ser Ser Val Leu
35 40 45
Ala Ser Met Thr Phe Ala His Asp Gly Val Gly Ser Asp His Asp Ser
50 55 60
Val Gly Ser Ala Gln Gln Arg Pro Ser Ala Gly Trp Gly Ser Val Ala
65 70 75 80
Asp Leu Met Ser Pro Val Tyr Asp Ala Gln Ala Phe Phe Gly Gly Thr
85 90 95
Ser Gly Pro Asn His Gly Ser Pro Arg Gly Leu Leu Asp Ile Pro Gly
100 105 110
Trp Lys Ser Met Pro Lys Gly Glu Ala Ala Gln Ala Val Gln Val Ser
115 120 125
Ala Phe Pro Glu Leu Tyr Ala Gln Trp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ile
130 135 140
Val Ala Ala
145
<210> 95
<211> 137
<212> PRT
<213> 犹他游动放线菌
<400> 95
Gly Leu Asn Gln Ala Gln Met Ser Asn Ala Ala Thr Ile Val Arg Leu
1 5 10 15
Ala Gln Glu Arg Asp Leu Pro Arg Arg Ala Met Leu Ile Ala Val Met
20 25 30
Thr Ala Phe Gln Glu Ser Ser Leu Arg Asn Leu Ala Asn Ser Ser Val
35 40 45
Pro Ala Ser Leu Asp Arg Pro His Gln Gly Val Gly Asp Asp Phe Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Gln Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Gln Leu Met Asp Pro Arg Tyr Ala Ala Asp Ala Phe Tyr Asp Arg
85 90 95
Leu Val Glu Ile Pro Asp Trp Glu Ser Leu Ser Leu Gly Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Val Pro Asp Ala Tyr Ala Asp His Glu
115 120 125
Asp Arg Ala Ile Arg Ile Val Asp Ala
130 135
<210> 96
<211> 137
<212> PRT
<213> 大孢绿僵菌
<400> 96
Leu Thr Glu Leu Gln Ser Lys Tyr Ala Arg Gly Ile Ile Arg Gln Ala
1 5 10 15
Lys Lys Glu His Leu Gly Ser Gln Gly Cys Met Ala Gly Ile Ala Thr
20 25 30
Ala Leu Val Glu Ser Thr Leu Leu Met His Ala Asn Tyr Ala Val Pro
35 40 45
Asp Ser Leu Val Tyr Glu Tyr Asp Arg Leu Gly His Asp Ala Asp Ser
50 55 60
Ile Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile Tyr Pro Asn Ile Lys Cys
65 70 75 80
Ser Met Asp Val Ala Cys Ser Ala Arg Gln Phe Phe Glu Gly Met Lys
85 90 95
Arg Val Pro Asp Trp Arg Tyr Met Asp Val Gly Lys Leu Cys Gln Glu
100 105 110
Val Gln Arg Ser Glu Asn Pro Glu Arg Tyr His Glu Phe Ile Asn Gln
115 120 125
Ala Lys Gly Ile Cys Gln Gln Gly Gly
130 135
<210> 97
<211> 137
<212> PRT
<213> 碳样小单孢菌
<400> 97
Gly Leu Ser Gln Leu Gln Met Asp Asn Ala Lys Thr Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Arg Asp Met Lys Leu Pro Arg Arg Gly Leu Val Val Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asp Leu His Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Ala Asn Tyr Pro His Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Arg Asp Leu Met Arg Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Val Phe Tyr Glu Ala
85 90 95
Leu Leu Glu Val Pro Gly Trp Glu Glu Met Ser Leu Thr Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Glu Arg Ala Thr Thr Val Val Ala Ala
130 135
<210> 98
<211> 131
<212> PRT
<213> 免疫原性分枝杆菌
<400> 98
Leu Asp Ala Gly Gln Met Glu Val Ala Arg Lys Ile Ile Glu Glu Gly
1 5 10 15
Leu Arg Arg Gly Leu Ser Pro Glu Ala Ile Gln Ile Ala Leu Ala Thr
20 25 30
Ala Leu Thr Glu Ser Gly Leu Arg Ser Leu Ala Asn Ser Ser Val Pro
35 40 45
Asp Ser Met Met Leu Ala Asn Asp Gly Val Gly His Asp His Asp Ser
50 55 60
Val Gly Pro Phe Gln Gln Arg Gln Ser Trp Gly Ala Thr Ala Asp Leu
65 70 75 80
Met Asp Pro Ser Arg Ser Ala Gly Lys Phe Tyr Asp Gln Leu Val Lys
85 90 95
Val Ser Gly Trp Gln Asp Met Ser Val Ala Gln Ala Ala Gln Ala Val
100 105 110
Gln Arg Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Lys Tyr Glu Ala Gln Ala
115 120 125
Ser Gln Ile
130
<210> 99
<211> 139
<212> PRT
<213> 明尼苏达被毛孢
<400> 99
Ala Ser Lys Val Ser Gly Leu Asp Pro Val Gln Ser Arg Asn Ala Asp
1 5 10 15
Ala Ile Ile Ala Gln Ala Lys Lys Asp Arg Val Gly Glu His Gly Cys
20 25 30
Thr Ala Ala Leu Thr Thr Ala Leu Ser Gln Thr Gly Ile Lys Ile Leu
35 40 45
Ala Asn Lys Lys Val Pro Asp Ser Val Lys Tyr Lys His Asp Asp Leu
50 55 60
Gly Thr Gln Gly Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Ser Val Gln Lys
65 70 75 80
Tyr Lys Asp Ile Ala Cys Val Met Lys Ala Asp Cys Ser Ala Ala Leu
85 90 95
Phe Phe Arg Asp Ile Lys Ala Val Lys Gly Trp Glu Lys Met Asp Val
100 105 110
Thr Lys Leu Leu Glu Ser Thr Asn Lys Ala Gly Thr Pro Ala Ala Phe
115 120 125
Lys Lys Phe Glu Gly Gln Ala Ala Lys Ile Cys
130 135
<210> 100
<211> 141
<212> PRT
<213> 明尼苏达被毛孢
<400> 100
Asp Leu Pro Gly Leu Asn Pro Thr Gln Glu Ala His Ala Arg Ala Ile
1 5 10 15
Ile Gly Ala Asn Asn Gln Gly Asn Tyr Gly Arg Gln Gly Cys Leu Ala
20 25 30
Ala Ile Thr Thr Gly Leu Thr Glu Ser Lys Leu Arg Ile Leu Ala Asn
35 40 45
Pro Lys Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Lys His Asp Ala Thr Gly Thr
50 55 60
Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile Tyr Lys
65 70 75 80
Asn Ile Ala Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Gly Gln Phe Phe
85 90 95
Lys Glu Met Lys Ala Ile Ser Gly Trp Gln Thr Met Asp Val Pro Thr
100 105 110
Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Phe Pro Ala Arg Tyr Arg Glu
115 120 125
Tyr Leu Ala Ser Ala Thr Ala Ile Cys Gln Ala Ala Gly
130 135 140
<210> 101
<211> 143
<212> PRT
<213> 巴西青霉
<400> 101
Gly Asn Leu Pro Gly Leu Ser Ala Thr Gln Ser Lys His Ala Arg Asp
1 5 10 15
Ile Ile Ala Glu Ala Lys Arg Glu Asp Leu Gly Leu His Gly Cys Ser
20 25 30
Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Asn Ile Leu Ile Tyr Ala
35 40 45
Asn Lys Asp Val Pro Lys Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Ala Val Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr
65 70 75 80
Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe
85 90 95
Phe Lys Lys Met Lys Asn Ile Ser Gly Trp Lys Ser Met Ala Val Gly
100 105 110
Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr Ala
115 120 125
Glu Arg Val Ser Glu Ala Glu Lys Ile Cys Asn Ala Gly Gly Ile
130 135 140
<210> 102
<211> 143
<212> PRT
<213> 长瓣弯颈霉
<400> 102
Asn Leu Pro Asp Leu Asn Ala Val Gln Ser Ala His Ala Arg Ser Ile
1 5 10 15
Ile Asp Glu Val Lys Lys Val Gly Val Gly Met His Gly Cys Glu Ala
20 25 30
Ala Ile Thr Thr Gly Leu Thr Glu Glu Ser Gln Ser Ser Leu Arg Ile
35 40 45
Leu Ala Asn Lys Asn Val Pro Ala Ser Leu Asn Tyr Ala His Asp Gly
50 55 60
Leu Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met
65 70 75 80
Tyr Tyr Lys Asp Ile Ala Cys Asp Met Lys Ala Asp Cys Ser Ala Gly
85 90 95
Leu Phe Phe Asn Gly Met Lys Asp Ile Lys Gly Trp Gln Thr Met Asp
100 105 110
Ile Ala Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Thr Ala
115 120 125
Tyr Gln Lys Tyr Thr Gly Thr Ala Ala Lys Val Cys Lys Ala Gly
130 135 140
<210> 103
<211> 143
<212> PRT
<213> 足马杜拉分枝菌
<400> 103
Gly Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ser Val Gln Ser Lys His Ala Arg Ala
1 5 10 15
Ile Ile Ala Gln Ala Lys Lys Asp Lys Val Gly Arg His Gly Cys Gln
20 25 30
Ala Gly Ile Ala Thr Ala Ile Val Glu Ser Asn Ile Leu Val Tyr Ala
35 40 45
Asn Arg Lys Val Pro Ala Ser Met Lys Tyr Pro His Asp Ala Val Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Arg Tyr Tyr
65 70 75 80
Pro Asn Ile Ala Ala Asn Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala Gly Gln Phe
85 90 95
Phe Ala Lys Met Lys Lys Val Lys Gly Trp Lys Thr Met Ala Val Gly
100 105 110
Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala
115 120 125
Lys Gln Val Ser Lys Ala Ala Lys Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 104
<211> 144
<212> PRT
<213> Aspergillus udagawae
<400> 104
Ser Gly Ser Leu Pro Gly Leu Asn Ala Lys Gln Ser Ala His Ala His
1 5 10 15
Lys Val Ile Asp Glu Ala Lys Lys Glu Gly Leu Gly Arg Gln Gly Cys
20 25 30
Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Asn Leu Leu Met Tyr
35 40 45
Ala Asn Ser Lys Val Pro Ala Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Ala Val
50 55 60
Gly His Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Val Tyr
65 70 75 80
Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Arg Ser Ala Ala Gln
85 90 95
Phe Phe Ala Lys Met Lys Asn Ile Ser Gly Trp Lys Thr Met Glu Val
100 105 110
Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr
115 120 125
Ala Gln Arg Val Pro Ala Ala Glu Lys Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 105
<211> 138
<212> PRT
<213> 皮疽诺卡菌
<400> 105
Ser Lys Lys Asp Glu Tyr Ala Leu Ala Ile Leu Ala Glu Gly Arg Arg
1 5 10 15
Arg Gly Ile Thr Pro Arg Gly Ile Val Ile Ala Phe Ala Thr Val Tyr
20 25 30
Val Glu Cys Asp Phe Ile Met Tyr Ala Asn Glu Lys Val Pro Glu Ser
35 40 45
Leu Arg Leu Pro His Glu Arg Val Gly Arg Asp Gly Phe Ser Val Gly
50 55 60
Leu Phe Gln Gln Gln Ile Val Arg Gly Ala Gly Gly Ala Tyr Trp Trp
65 70 75 80
Ala Asp Cys Ala Thr Cys Met Asp Pro Thr Leu Ser Ala Gly Leu Phe
85 90 95
Phe Glu Arg Leu Ala Arg Leu Asp Tyr Asn Ser Asn Glu His Ser Pro
100 105 110
Gly Trp Tyr Ala Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro His Arg Tyr
115 120 125
Asp Glu Arg Met Lys Asp Ala Gln Ala Leu
130 135
<210> 106
<211> 137
<212> PRT
<213> 小单孢菌属物种HK10
<400> 106
Gly Leu Asp Gln Arg Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Arg Ala Met Lys Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Tyr Asp Tyr Pro His Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Gln Leu Met Arg Pro Ser Tyr Ala Ala Gln Ala Phe Tyr Thr Ala
85 90 95
Leu Lys Glu Val Pro Gly Trp Thr Glu Leu Ser Leu Thr Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Ala Tyr Ala Pro His Glu
115 120 125
Glu Arg Ala Thr Thr Val Val Ala Ala
130 135
<210> 107
<211> 137
<212> PRT
<213> 小单孢菌属物种HK10
<400> 107
Gly Leu Asp Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Lys Lys Ile Val Gln Ala
1 5 10 15
Gly Arg Glu Met Gly Val Pro Arg Arg Gly Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Thr Leu Leu Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Ser Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Arg Glu Leu Met Asp Pro Glu Tyr Ala Thr Lys Ala Phe Leu Ser Ala
85 90 95
Leu Glu Glu Ile Pro Gly Trp Gln Asp Leu Pro Leu Thr Val Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Ala Gln Val Val Gly Ala
130 135
<210> 108
<211> 144
<212> PRT
<213> 穆尔西亚青霉
<400> 108
Ser Gly Asn Leu Pro Gly Leu Ser Ser Thr Gln Ser Lys His Ala Lys
1 5 10 15
Ala Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Asp Leu Gly Arg Gln Gly Cys
20 25 30
Leu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Asn Ile Leu Ile Tyr
35 40 45
Ala Asn Lys Asp Val Pro Ser Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Ala Val
50 55 60
Gly Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Lys Tyr
65 70 75 80
Tyr Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala Ala Gln
85 90 95
Phe Phe Lys Gly Met Lys Gly Val Ser Gly Trp Lys Thr Met Glu Val
100 105 110
Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Thr Arg Tyr
115 120 125
Ala Glu Arg Val Asp Glu Ala Lys Lys Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 109
<211> 147
<212> PRT
<213> 小单孢菌属物种
<400> 109
Thr Gly Glu Leu Pro Arg Phe Ala Glu Tyr Gly Asp Thr Gln Ile Arg
1 5 10 15
Asn Ala Ala Ile Ile Ile Lys Val Gly Gln Asp Met Gly Val Pro Ser
20 25 30
Arg Gly Trp Val Ile Ala Leu Ala Thr Ala Met Gln Glu Ser Ala Leu
35 40 45
Arg Asn Leu Ala Asn Ser Gly Val Pro Glu Ser Leu Ala Leu Pro His
50 55 60
Glu Gly Val Gly Ala Asp His Asp Ser Leu Gly Leu Phe Gln Gln Arg
65 70 75 80
Pro Gly Trp Gly Thr Val Ala Glu Arg Met Asn Pro Ala Tyr Thr Ala
85 90 95
Arg Lys Phe Tyr Glu Lys Leu Val Lys Val Arg Ser Trp Gln Arg Arg
100 105 110
Pro Leu Thr Val Val Ala Gln Gln Val Gln Ile Ser Ala Tyr Pro Asp
115 120 125
Ala Tyr Ala Lys His Glu Glu Leu Ala Ser Thr Ile Val Asp Ala Leu
130 135 140
Ala Gly Gly
145
<210> 110
<211> 142
<212> PRT
<213> 盖姆斯木霉
<400> 110
Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ala Val Gln Thr Lys Tyr Ala Asn Ala Ile
1 5 10 15
Ile Ala Lys Ala Lys Ala Glu Gly Val Gly Ala His Gly Cys Gln Ala
20 25 30
Ala Ile Ala Thr Ala Met Val Glu Ser Ser Ile Ile Met Tyr Ala Asn
35 40 45
Asn Gly Val Pro Glu Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Arg Val Gly Ser
50 55 60
Asp His Asp Arg Ile Gly Leu Phe Gln Gln Pro Ala Ser Ile Tyr Lys
65 70 75 80
Asn Ile Lys Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Gly Gln Phe Tyr
85 90 95
Thr Glu Met Lys Lys Ile Ser Gly Trp Lys Asn Met Ala Ile Gly Thr
100 105 110
Leu Ala Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Ala Lys
115 120 125
Gln Val Gly Leu Ala Thr Asn Val Cys Lys Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 111
<211> 151
<212> PRT
<213> 节杆菌属物种Soil761
<400> 111
Leu Thr Pro Arg Gln Glu Ser Val Ala Arg Thr Tyr Ile Ala Val Gly
1 5 10 15
Gln Gln Leu Gly Ile Pro Arg Ser Gly Gln Ile Ile Ala Ile Met Met
20 25 30
Ala Leu Gln Glu Ser Ser Leu Arg Met Leu Ala Asn Pro Ser Val Pro
35 40 45
Ala Ser Val Gln Phe Pro Asn Asp Gly Val Gly Arg Asp His Asp Ser
50 55 60
Ile Gly Ser Ala Gln Gln Arg Pro Ala Ala Gly Trp Gly Thr Val Glu
65 70 75 80
Gln Leu Met Asp Ala Ser Tyr Asn Ala Arg Ala Phe Tyr Gly Gly Pro
85 90 95
Ser Gly Pro Asn Arg Gly Ser Pro Arg Gly Leu Leu Asp Ile Pro Gly
100 105 110
Trp Gln Gly Met Asp Lys Gly Leu Ala Ala Gln Ala Val Gln Val Ser
115 120 125
Ala Phe Pro Glu Leu Tyr Ala Arg Trp Glu Arg Ala Ala Thr Ala Ile
130 135 140
Val Ala Ala Leu Glu Gly Gly
145 150
<210> 112
<211> 144
<212> PRT
<213> 节杆菌属物种Soil736
<400> 112
Leu Thr Ser Asp Gln Ile Ala Val Ala Lys Gly Tyr Ile Ser Val Gly
1 5 10 15
Lys Gln Leu Gly Val Pro Gln Glu Ala Leu Ile Ile Ala Ile Met Met
20 25 30
Ala Leu Gln Glu Ser Ser Leu Arg Val Leu Ala Asn Ser Asn Val Pro
35 40 45
Ala Ser Phe Gln Phe Ser His Asp Gly Val Gly Ser Asp His Asp Ser
50 55 60
Leu Gly Thr Ala Gln Gln Arg Pro Ala Ala Gly Trp Gly Ser Val Glu
65 70 75 80
Glu Leu Met Asp Pro Asp Tyr Asn Ala Arg Ala Phe Tyr Gly Gly Pro
85 90 95
Ser Gly Pro Asn Arg Gly Ser Pro Arg Gly Leu Leu Asp Val Ser Gly
100 105 110
Trp Gln Ser Met Asp Lys Gly Gln Ala Ala Gln Ala Val Gln Val Ser
115 120 125
Ala Phe Pro Glu Leu Tyr Ala Arg Trp Glu Ser Gln Ala Thr Ala Ile
130 135 140
<210> 113
<211> 153
<212> PRT
<213> 微杆菌属物种No. 7
<400> 113
Gly Ser Thr Arg Thr Leu Thr Ala Thr Glu Leu Gly His Ala Ala Thr
1 5 10 15
Ile Leu Ala Val Ala Arg Ser Leu Gly Val Ser Glu Arg Gly Gln Gln
20 25 30
Ile Ala Met Met Thr Ala Leu Gln Glu Ser Gly Leu Lys Met Tyr Ala
35 40 45
Asn Ser Ser Val Pro Ala Ser Leu Asp Tyr Pro His Asp Ala Val Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Asn Phe Phe Gln Gln Arg Val Ser Gly Trp
65 70 75 80
Gly Ser Val Lys Asp Leu Met Asp Pro Thr Tyr Ala Ala Arg Ala Phe
85 90 95
Phe Gly Gly Pro Asp Gly Pro Asn Glu Gly Ser Pro Arg Gly Leu Leu
100 105 110
Asp Ile Pro Gly Trp Glu Ser Met Ser Leu Gly Glu Ala Ala Gln Thr
115 120 125
Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Asp Lys Trp Glu Gly Ala
130 135 140
Ala Gln Gln Ile Ile Ser Ser Val Gly
145 150
<210> 114
<211> 144
<212> PRT
<213> 节杆菌属物种Soil762
<400> 114
Leu Thr Ala Arg Gln Ile Ala Val Ala Ser Asp Tyr Ile Ser Val Gly
1 5 10 15
Lys Gln Leu Gly Val Pro Arg Asp Gly Gln Ile Ile Ala Ile Met Met
20 25 30
Ser Leu Gln Glu Ser Gly Leu Arg Val Leu Ala Asn Ala Asn Val Pro
35 40 45
Glu Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Gly Val Gly Ser Asp His Asp Ser
50 55 60
Leu Gly Ser Ala Gln Gln Arg Pro Ala Ala Gly Trp Gly Ser Ile Ala
65 70 75 80
Gln Leu Met Asp Ser Met Tyr Asn Val Gln Ala Phe Tyr Gly Gly Pro
85 90 95
Ala Gly Pro Asn Arg Gly Ser Pro Pro Gly Leu Leu Asp Ile Arg Gly
100 105 110
Trp Gln Ser Met Ser Lys Gly Gln Ala Ala Gln Ala Val Gln Val Ser
115 120 125
Ala Phe Pro Glu Leu Tyr Ala His Trp Glu Pro Gln Ala Thr Ala Ile
130 135 140
<210> 115
<211> 141
<212> PRT
<213> 盐生小单孢菌
<400> 115
Leu Pro Gly Tyr Gly Asp Asn Gln Leu Arg Asn Ala Ala Val Ile Ile
1 5 10 15
Thr Val Gly Gln Glu Met Lys Val Pro Pro Arg Gly Trp Val Val Ala
20 25 30
Val Ala Thr Ala Met Gln Glu Ser Arg Leu Leu Asn Leu Ala Asn Arg
35 40 45
Thr Val Ala Gln Ser Arg Arg Ile Pro Asn Gln Gly Val Gly Ala Asp
50 55 60
His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Glu Gln Arg Met Thr Pro Glu Tyr Ala Ala Arg Lys Phe Tyr Glu Lys
85 90 95
Leu Val Gln Val Pro Gly Trp Gln Thr Met Pro Leu Thr Arg Ala Ala
100 105 110
Gln Arg Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Lys His Glu
115 120 125
Asp Leu Ala Ala Arg Ile Val Asp Ala Leu Ala Gly Gly
130 135 140
<210> 116
<211> 137
<212> PRT
<213> 黑色小单孢菌
<400> 116
Gly Leu Thr Arg Ala Gln Met Asp Asn Ala Glu Ala Ile Val Arg Ala
1 5 10 15
Gly Arg Glu Met Gly Val Pro Arg Arg Ala Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Thr Leu Tyr Asn Val Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Arg His Pro His Gln Gly Val Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ser Ser Ser Gly Trp Gly Pro Val
65 70 75 80
Gly Arg Leu Met Asp Pro Glu Phe Ala Thr Arg Gln Phe Leu Thr Ala
85 90 95
Leu Leu Arg Val Pro Gly Trp Gln Arg Met Arg Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Gly His Tyr Ala Arg His Glu
115 120 125
Gly Leu Ala Thr Glu Val Val Asp Ala
130 135
<210> 117
<211> 143
<212> PRT
<213> 展青霉
<400> 117
Gly Lys Leu Pro Gly Leu Ser Ser Thr Gln Ser Lys His Ala Lys Asp
1 5 10 15
Ile Ile Gly Glu Ala Lys Lys Glu Gly Leu Gly Arg Gln Gly Cys Leu
20 25 30
Ala Gly Ile Ala Thr Gly Leu Val Glu Ser Asn Leu Leu Ile Tyr Ala
35 40 45
Asn Lys Lys Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp Ala Val Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr
65 70 75 80
Pro Asp Ile Ala Ala Asp Met Asp Ala Ala Lys Ser Ala Ala Gln Phe
85 90 95
Phe Lys Glu Met Lys Arg Val Ser Gly Trp Lys Ser Met Asp Val Gly
100 105 110
Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Ser Arg Tyr Ala
115 120 125
Asp Arg Val Gly Asp Ala Lys Lys Ile Cys Ala Ala Gly Gly Leu
130 135 140
<210> 118
<211> 152
<212> PRT
<213> 节杆菌属物种Leaf69
<400> 118
Val Thr Ala Arg Gln Met Ala Val Ala Gly Asp Tyr Val Ser Ile Gly
1 5 10 15
Gln Gln Leu Gly Ile Pro Arg Asp Gly Gln Ile Ile Ala Ile Met Met
20 25 30
Ala Leu Gln Glu Ser Ser Leu Arg Val Leu Ala Asn Val Asn Val Pro
35 40 45
Ala Ser Leu Gln Tyr Pro His Asp Gly Leu Gly Ser Asp His Asp Ser
50 55 60
Leu Gly Thr Ala Gln Gln Arg Pro Ala Ala Gly Trp Gly Thr Val Glu
65 70 75 80
Gln Leu Met Asp Pro Lys Tyr Asn Val Arg Ala Phe Tyr Gly Gly Pro
85 90 95
Ser Gly Pro Asn Arg Gly Ser Pro Pro Gly Leu Leu Asp Ile Arg Gly
100 105 110
Trp Gln Ser Met Asn Lys Gly Gln Ala Ala Gln Ala Val Gln Val Ser
115 120 125
Ala Phe Pro Glu Leu Tyr Ala Arg Trp Glu Ala Glu Ala Thr Ala Ile
130 135 140
Val Glu Ala Leu Asp Gly Gly Met
145 150
<210> 119
<211> 144
<212> PRT
<213> 脓肿分枝杆菌
<400> 119
Asn Ala Gln Val Val Val Ala Val Gly Glu Lys Met His Ile Pro Pro
1 5 10 15
Gln Gly Ile Ile Val Ala Leu Ala Thr Ala Leu Gln Glu Ser Gly Leu
20 25 30
Lys Asn Tyr Ala Asn Asp Gly Thr Gly Gln Leu Arg Gly Asp Gln Gln
35 40 45
Gly Ile Ala Ser Ser Leu Gln Leu Pro His Asp Ala Val Gly Arg Asp
50 55 60
His Gly Ser Leu Gly Ile Met Gln Gln Gln Tyr Pro Trp Trp Gly Thr
65 70 75 80
Ile Gln Glu Leu Met Thr Pro Ala Ile Ala Ala Arg Lys Phe Tyr Glu
85 90 95
Ala Leu Leu Lys Val Asn Asn Trp Gln Asn Leu Pro Val Thr Val Ala
100 105 110
Ala Gln Thr Val Gln Gly Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Ala Gln
115 120 125
Glu Pro Lys Ala Arg Ala Leu Tyr Ala Thr Tyr Arg Gly Ala Gly Gly
130 135 140
<210> 120
<211> 137
<212> PRT
<213> Mycobacterium canariasense
<400> 120
Thr Lys Asp Gln Val Ala Ser Glu Phe Ile Ala Glu Gly Lys Arg Arg
1 5 10 15
Gly Ile Thr Glu Arg Gly Ile Val Ile Cys Ile Ala Thr Gly Leu Val
20 25 30
Glu Ser Asn Leu Thr Val Tyr Ala Asn Ser Lys Val Pro Glu Ser Leu
35 40 45
Ser Leu Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp Gly Lys Ser Val Gly Pro
50 55 60
Leu Gln Gln Gln Val Val Trp Gly Asn Gly Gly Trp Trp Trp Gly Asp
65 70 75 80
Ala Ala Thr Cys Met Asp Pro Thr Arg Ser Ala Gly Leu Phe Tyr Asp
85 90 95
Arg Leu Val Lys Lys Pro Tyr Gln Ser Ala Thr Ser Asp Val Ala Ala
100 105 110
Gly Ala Ile Ala Gln Ser Ile Gln Gly Ser Ala Phe Pro Asp Arg Tyr
115 120 125
Ala Thr Arg Met Ala Glu Ala Arg Gln
130 135
<210> 121
<211> 147
<212> PRT
<213> 利福霉素小单孢菌
<400> 121
Ser Gly Asn Ile Pro Arg Leu Gly Ser Tyr Gly Gln Thr Gln Met Arg
1 5 10 15
Asn Ala Ala Val Ile Ile Lys Val Gly Gln Asp Met Arg Val Pro Pro
20 25 30
Arg Gly Trp Val Ile Ala Val Ala Thr Ala Met Gln Glu Ser Ala Leu
35 40 45
Arg Asn Leu Ser Asn Ser Thr Val Ala Gly Ser Arg Gly Ile Pro Asn
50 55 60
Glu Gly Val Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg
65 70 75 80
Ala Gly Trp Gly Ser Val Ala Gln Arg Met Ser Pro Asp Tyr Ala Ala
85 90 95
Arg Lys Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Lys Val Asp Gly Trp Glu Arg Met
100 105 110
Pro Leu Thr Arg Ala Ala Gln Lys Val Gln Ile Ser Ala Tyr Pro Asp
115 120 125
Ala Tyr Ala Lys His Glu Asp Ile Ala Ser Gln Ile Val Asn Ala Leu
130 135 140
Ala Gly Gly
145
<210> 122
<211> 137
<212> PRT
<213> 利福霉素小单孢菌
<400> 122
Gly Leu Asp Arg Ala Gln Met Asn Asn Ala Gln Lys Ile Val Lys Ala
1 5 10 15
Gly Arg Ala Met Gly Val Pro Arg Arg Ala Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Glu Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Glu Val
65 70 75 80
Gly Gln Leu Met Asp Pro Ala Phe Ala Thr Arg Ala Phe Leu Thr Ala
85 90 95
Leu Leu Ala Ile Pro Gly Trp Glu Asp Leu Pro Leu Thr Val Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Tyr Pro Asp Leu Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Thr Glu Val Val Ala Ala
130 135
<210> 123
<211> 144
<212> PRT
<213> 高山节杆菌
<400> 123
Leu Ser Glu Ser Gln Thr Lys Val Ala Lys Thr Tyr Ile Ala Val Gly
1 5 10 15
Arg Ala Arg Gly Val Pro Asn Gly Gly Ile Val Ile Ala Leu Met Met
20 25 30
Gly Phe Gln Glu Ser Gly Met Gln Met Leu Ala Asn Ala Ser Val Pro
35 40 45
Glu Ser Leu Asn Phe Pro His Asp Gly Val Gly Ser Asp His Asp Ser
50 55 60
Val Gly Ser Ala Gln Gln Arg Pro Ser Ala Gly Trp Gly Ser Val Glu
65 70 75 80
Glu Leu Met Gln Pro Ala Tyr Asn Ala Glu Ala Phe Tyr Gly Gly Pro
85 90 95
Gln Gly Pro Asn Arg Gly Ser Pro Arg Gly Leu Leu Asp Ile Pro Gly
100 105 110
Trp Gln Gly Leu Asp Lys Gly Ala Ala Ala Gln Ala Val Gln Gly Ser
115 120 125
Ala Phe Pro Glu Arg Tyr Ala Lys Trp Gln Pro Glu Ala Glu Ala Ile
130 135 140
<210> 124
<211> 148
<212> PRT
<213> 人微杆菌
<400> 124
Leu Gly His Thr Gln Leu Thr His Ala Ala Thr Ile Ile Thr Thr Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ile Glu Gly Val Gly Arg Gln Gly Val Leu Ile Ala Leu Met
20 25 30
Ala Ala Leu Thr Glu Ser Thr Leu Arg Met Leu Ala Asn Ala Ala His
35 40 45
Pro Ala Ser Leu Asp Leu Pro His Asp Gly Val Gly Gly Asp His Asp
50 55 60
Ser Leu Gly Leu Phe Gln Met Arg Pro Thr Ser Gly Trp Gly Ser Val
65 70 75 80
Asp Gln Leu Met Asp Pro Lys Tyr Gln Ala Arg Ala Phe Phe Gly Gly
85 90 95
Glu Thr Gly Pro Asn Phe Pro Ser Pro Ala Gly Leu Leu Asp Ile Ala
100 105 110
Gly Trp Gln Ser Ala Asp Pro Gly Ala Ala Ala Gln Ala Val Glu Arg
115 120 125
Ser Ala Phe Pro Asp Arg Tyr Gln Arg Tyr Gln Pro Val Ala Glu Ala
130 135 140
Ile Ile Ser Ala
145
<210> 125
<211> 130
<212> PRT
<213> 戈登菌属噬菌体Obliviate
<400> 125
Ala Ile Thr Glu Gln Ala Lys Lys Met Gly Val Ser Lys Arg Gly Ala
1 5 10 15
Ile Ile Gly Val Ala Thr Gly Leu Val Glu Ser Gly Asp Pro Met Lys
20 25 30
Met Trp Ala Asn Asn Ala Val Pro Glu Ser Leu Lys Phe Pro His Asp
35 40 45
Glu Val Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Leu Phe Gln Gln Arg Gln
50 55 60
Ala Gly Trp Gly Thr Val Ala Asp Arg Met Asp Pro His Arg Ser Ala
65 70 75 80
Ala Met Phe Phe Asp Ala Leu Met Lys Val Pro Gly Trp Glu Thr Met
85 90 95
Asp Met Gly Ala Ala Ala Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Phe Pro Gly
100 105 110
Lys Tyr Ala Glu Arg Met Pro Arg Ala Thr Glu Leu Val Asp Lys Phe
115 120 125
Gly Ile
130
<210> 126
<211> 147
<212> PRT
<213> 串珠样小单孢菌
<400> 126
Thr Gly Ser Met Pro Arg Thr Phe Gly Tyr Gly Glu Arg Gln Met Arg
1 5 10 15
Asn Ala Ala Ile Ile Ile Lys Val Gly Gln Asp Met Lys Val Pro Ala
20 25 30
Arg Gly Trp Val Ile Ala Ile Ala Thr Ala Ile Gln Glu Ser Gly Leu
35 40 45
Lys Asn Tyr Ala Asn Ser Thr Val Pro Glu Ser Leu Ala Ile Pro His
50 55 60
Glu Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg
65 70 75 80
Pro Gly Trp Gly Thr Val Ala Gln Arg Met Asn Pro Ser Tyr Ser Ala
85 90 95
Arg Lys Phe Tyr Glu Lys Leu Val Lys Val Pro Asp Trp Glu Lys Arg
100 105 110
Ser Leu Thr Asn Ala Ala Gln Met Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Tyr Ala Lys His Glu Glu Thr Ala Ser Arg Ile Val Asp Leu Leu
130 135 140
Ala Gly Gly
145
<210> 127
<211> 131
<212> PRT
<213> Tsukamurella pseudospumae
<400> 127
Thr Pro Asp Gln Val Ala Ala Ala Phe Ile Val Glu Gly Leu Arg Ser
1 5 10 15
Gly Val Ser Glu Arg Gly Ile Val Ile Cys Leu Ala Thr Gly Leu Val
20 25 30
Glu Ser Asn Leu Thr Val Tyr Ala Asn Pro Ala Asp Pro Glu Ser Leu
35 40 45
Ala Glu Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp Ala Asn Ser Val Gly Pro
50 55 60
Leu Gln Gln Arg Ala Pro Trp Trp Gly Ser Ser Ala Arg Glu Arg Met
65 70 75 80
Asn Pro Thr Leu Ser Ser Arg Leu Phe Tyr Arg Ala Leu Arg Ala Leu
85 90 95
Pro Tyr Asp Ser Pro Ala His Ser Pro Gly Trp Tyr Ala Gln Gln Val
100 105 110
Gln Arg Ser Ala Phe Pro Asp Arg Tyr Asp Arg Arg Ile Thr Glu Ala
115 120 125
Gln Ala Ile
130
<210> 128
<211> 137
<212> PRT
<213> 串珠样小单孢菌
<400> 128
Gly Leu Thr Gln Val Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Ala Asp Leu Lys Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Val Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser His Gln Tyr Thr Asp Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Arg Asp Leu Met Arg Pro Ala His Ala Ala Gln Leu Phe Tyr Glu Ala
85 90 95
Leu Arg Gln Ile Pro Gly Trp Gln Ser Leu Ser Ile Ala Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Gln Arg Ala Ser Thr Val Val Thr Ala
130 135
<210> 129
<211> 142
<212> PRT
<213> 黑麦草腥黑穗病菌
<400> 129
Gly Leu Ile Ser Gly Leu Asn Ala Ile Gln Thr Ala His Ala Tyr Gln
1 5 10 15
Ile Ala Lys Ala Val Arg Ala Lys Gly Leu Pro Arg Gln Ala Cys Leu
20 25 30
Ala Ala Ile Thr Thr Gly Ile Thr Glu Ala Asn Leu Leu Asn Tyr Ala
35 40 45
Asn Ser Asp Val Ser Ala Ser Phe Asn Tyr Gln Tyr Asp Ala Val Ser
50 55 60
Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Val Phe Gln Gln Arg Val Thr Tyr Tyr
65 70 75 80
Pro Asp Val Gly Ala Asp Met Asp Pro Gln Gln Ala Ala Ser Gln Phe
85 90 95
Leu Asp Lys Met Val Asn Ile Asn Gly Trp Glu Asn Thr Asp Val Gly
100 105 110
Thr Leu Cys Gln Asp Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Asn
115 120 125
Glu Asn Val Gly Gln Ala Gln Asp Ile Cys Thr Ala Met Gly
130 135 140
<210> 130
<211> 142
<212> PRT
<213> 小麦矮腥黑穗病菌
<400> 130
Gly Leu Leu Ser Gly Trp Asn Ala Leu Gln Thr Ala His Ala Tyr Gln
1 5 10 15
Ile Ala Lys Ala Val Arg Ala Lys Gly Leu Pro Arg Gln Ala Cys Leu
20 25 30
Ala Ala Ile Cys Thr Gly Ile Thr Glu Ala Asn Leu Leu Asn Tyr Ala
35 40 45
Asn Ser Asp Val Ala Glu Ser Phe Asn Tyr Gln Tyr Asp Ala Val Ser
50 55 60
Ser Asp Tyr Asp Ser Val Gly Val Phe Gln Gln Arg Val Thr Tyr Tyr
65 70 75 80
Pro Asn Val Ala Ala Asp Met Asp Pro Gln Ser Ala Ala Ala Gln Phe
85 90 95
Leu Asp Lys Met Val Asn Ile Asn Gly Trp Glu Thr Thr Asp Val Gly
100 105 110
Ser Leu Cys Gln Ala Val Gln Gly Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Asn
115 120 125
Glu His Val Gly Gln Ala Gln Asp Ile Cys Ser Ala Met Gly
130 135 140
<210> 131
<211> 145
<212> PRT
<213> 厚垣孢普可尼亚菌170
<400> 131
Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ala Leu Gln Ser Lys Tyr Ala Asn Ala Ile
1 5 10 15
Ile Ala Gln Ala Lys Lys Asp Gly Val Gly Pro His Gly Leu Thr Asn
20 25 30
Tyr Pro Leu Tyr Ala Thr Leu Thr Leu Val Gln Thr Ser Ile Ile Met
35 40 45
Tyr Ala Asn Lys Gly Val Pro Gln Ser Leu Asn Tyr Pro His Asp Arg
50 55 60
Val Gly Ser Asp His Asp Asn Ile Gly Leu Phe Gln Leu Arg Ala Ser
65 70 75 80
Val Tyr Lys Asn Ile Ala Cys Asp Met Asp Ala Gly Cys Ser Ala Gly
85 90 95
Leu Phe Leu Asp Ala Met Arg Lys Ile Lys Gly Trp Glu Arg Met Ala
100 105 110
Ile Gly Thr Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Thr Ala Tyr Pro Asp Arg
115 120 125
Tyr Ala Lys Gln Val Gly Leu Ala Thr Asn Val Cys Lys Ala Gly Gly
130 135 140
Leu
145
<210> 132
<211> 138
<212> PRT
<213> 厚垣孢普可尼亚菌170
<400> 132
Leu Leu Glu Val Gln Gln Lys Tyr Ala Lys Leu Ile Ile Ala Gln Ala
1 5 10 15
Lys Lys Glu Asn Val Gly Arg His Gly Cys Gln Thr Gly Ile Ala Thr
20 25 30
Ala Leu Thr Glu Ser Thr Leu Ile Met His Ala Asn Pro Val Val Pro
35 40 45
Glu Ser Leu Gly Tyr Pro His Glu Arg Leu Gly Tyr Asp Gly Asp Ser
50 55 60
Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ile Tyr Tyr Thr Asp Ile Lys Cys
65 70 75 80
Ser Met Asn Ala Lys Cys Ser Ala His Gln Phe Tyr Glu Ile Met Lys
85 90 95
Lys Ile Pro Asp Trp Gln Asn Ile Pro Val Gly Val Leu Cys Gln Lys
100 105 110
Val Gln Ile Ser Ala Ile Pro Glu Ala Tyr Asn Lys Phe Val Glu Gln
115 120 125
Ala Gly Ser Ile Cys Ala Ala Ala Gly Met
130 135
<210> 133
<211> 142
<212> PRT
<213> 厚垣孢普可尼亚菌170
<400> 133
Asn Leu Pro Gly Leu Asn Asp Val Gln Ser Ala Asn Ala Arg Ala Val
1 5 10 15
Ile Asp Glu Asn Asn Lys Glu Lys Leu Gly Lys Gln Gly Cys Ile Ala
20 25 30
Ala Leu Thr Thr Gly Leu Thr Glu Ser Ser Leu Arg Ile Leu Ala Asn
35 40 45
Asn Gly Val Pro Ala Ser Leu Asn Tyr Lys His Asp Gly Leu Gly Ser
50 55 60
Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Ser Ile Tyr Thr
65 70 75 80
Asn Ile Glu Cys Asp Met Gly Ala Ala Cys Ser Ala Ser Gln Phe Phe
85 90 95
Lys Gly Met Thr Ala Val Ser Gly Trp Glu Thr Met Asp Val Ala Thr
100 105 110
Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Lys Lys
115 120 125
Trp Val Gly Thr Ala Thr Asp Ala Cys Ala Ala Ala Gly Val
130 135 140
<210> 134
<211> 141
<212> PRT
<213> 淡紫紫孢菌
<400> 134
Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ala Lys Gln Ser Ala His Ala Arg Ala Ile
1 5 10 15
Ile Ala Glu Thr Lys Lys Glu Lys Leu Gly His Gln Gly Cys Leu Ala
20 25 30
Ala Ile Thr Thr Gly Leu Thr Glu Ser Ser Leu Arg Val Leu Ala Asn
35 40 45
Lys Lys Val Pro Gln Ser Leu Lys Tyr Lys Asn Asp Gly Leu Gly Ser
50 55 60
Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala Met Tyr Tyr Lys
65 70 75 80
Asp Ile Lys Cys Asp Met Asp Ala Ala Cys Ser Ala Ser Leu Phe Phe
85 90 95
Lys Gly Met Lys Ala Val Lys Gly Trp Gln Lys Met Asp Val Ala Thr
100 105 110
Leu Cys Gln Lys Val Gln Arg Ser Ala Val Pro Ser Ala Tyr Lys Lys
115 120 125
His Val Asp Ala Ala Gly Lys Ile Cys Lys Ala Gly Gly
130 135 140
<210> 135
<211> 144
<212> PRT
<213> Paraphaeosphaeria sporulosa
<400> 135
Ser Gly Thr Leu Pro Gly Leu Asn Ser Val Gln Thr Arg Asn Ala Arg
1 5 10 15
Ala Ile Ile Ala Arg Thr Lys Lys Asp Phe Ala Ala Ser Gln Gln Lys
20 25 30
Arg Ala Cys Tyr Val Ala Ile Thr Thr Ala Phe Gln Glu Ser Gly Ile
35 40 45
Arg Ile Leu Ala Asn Ser Lys Tyr Pro Ala Ser Leu Asn Tyr Pro His
50 55 60
Asp Gly Val Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Arg
65 70 75 80
Pro Ser Trp Gly Ser Thr Lys Asp Arg Met Asn Ala Asp Leu Ser Ala
85 90 95
His Phe Phe Phe Asn Ala Leu Lys Arg Val Arg Gly Trp Gln Ser Leu
100 105 110
Ala Ile Gly Val Ala Ala Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Tyr Asn Lys Trp Val Ala Lys Ala Glu Lys Val Cys Asn Ala Gly
130 135 140
<210> 136
<211> 139
<212> PRT
<213> 布氏虫草RCEF 3172
<400> 136
Pro Gly Leu Asp Ala Val Gln Ser Arg Asn Ala Ala Ala Ala Ile Gly
1 5 10 15
Gln Val Arg Ala Glu Gly Leu Asn Arg Gln Ala Cys Leu Ala Val Ile
20 25 30
Ser Thr Thr Leu Gln Glu Ser Thr Leu His Val Tyr Ala Asn Pro Val
35 40 45
Val Pro Ala Ser Ile Asn Tyr Pro His Asp Leu Val Gly Gly Asp Gln
50 55 60
Asp Ser Thr Gly Met Phe Gln Gln Arg Pro Glu Tyr Tyr Pro Asp Ile
65 70 75 80
Ala Ala Asp Met Ser Ala Ala Gly Ser Thr Arg Gln Phe Leu Ala Ala
85 90 95
Met Lys Gln Val Ser Asn Trp Gln Thr Met Glu Val Ser Ala Leu Asp
100 105 110
Gln Ala Val Gln Arg Ala Glu Ala Gly Asn Leu Tyr Ala Gln Arg Leu
115 120 125
Pro Leu Ala Ser Arg Val Cys Ser Ala Ala Gly
130 135
<210> 137
<211> 134
<212> PRT
<213> 戈登菌属噬菌体Utz
<400> 137
Lys Tyr Pro Phe Ala Ile Thr Glu Gln Ala Lys Lys Met Gly Leu Ser
1 5 10 15
Lys Arg Ala Ala Ile Ile Gly Asn Ala Thr Ala Leu Val Glu Val Gly
20 25 30
Asp Pro Met Lys Met Tyr Ala Asn Thr Ala Val Pro Glu Ser Leu Lys
35 40 45
Phe Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Leu Phe
50 55 60
Gln Gln Arg Gln Ala Gly Trp Gly Thr Val Ala Asp Arg Met Asp Pro
65 70 75 80
His Arg Ser Ala Lys Met Phe Tyr Asp Ala Leu Val Lys Val Pro Gly
85 90 95
Trp Glu Thr Met Asp Met Gly Ala Ala Ala Gln Ala Val Gln Arg Ser
100 105 110
Ala Phe Pro Gly Lys Tyr Ala Gly Arg Met Ala Arg Ala Thr Glu Leu
115 120 125
Val Asp Lys Phe Gly Ile
130
<210> 138
<211> 155
<212> PRT
<213> 嗜烟碱节杆菌
<400> 138
Ser Gly Ser Met Pro Asp Gly Gln Ala Val Gly Leu Ser Ala Gly Gln
1 5 10 15
Ile Ala Val Ala Gln Gly Tyr Ile Ser Val Gly Lys Gln Leu Gly Val
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Met Val Ile Ala Ile Met Met Ser Leu Gln Glu Thr
35 40 45
Thr Leu Arg Met Leu Ala Asn Ala Asn Val Pro Ala Ser Phe Gln Phe
50 55 60
Pro His Asp Gly Val Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Ser Ala Gln
65 70 75 80
Gln Arg Pro Ala Ala Gly Trp Gly Thr Val Ala Glu Leu Met Asp Leu
85 90 95
Thr Tyr Asn Ala Arg Ala Phe Tyr Gly Gly Pro Ser Gly Pro Asn Lys
100 105 110
Gly Ser Pro Arg Gly Leu Leu Asp Val Pro Gly Trp Ser Ala Met Ser
115 120 125
Lys Gly Gln Ala Ala Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Glu Leu
130 135 140
Tyr Ala Arg Trp Glu Gln Gln Ala Thr Ala Ile
145 150 155
<210> 139
<211> 132
<212> PRT
<213> Mycobacterium conceptionense
<400> 139
Thr Asn Asp Ala Tyr Ala Arg Glu Ile Ile Arg Ala Gly Arg Asp Leu
1 5 10 15
Gly Ile Thr Pro Arg Gly Ile Val Ile Ala Phe Ala Thr Val Tyr Val
20 25 30
Glu Ser Asn Trp Ile Met Trp Ala Asn Ala Ala Val Pro Glu Ser Leu
35 40 45
Ala Ile Pro His Glu Arg Val Gly Ser Asp Gly Lys Ser Val Gly Leu
50 55 60
Phe Gln Gln Gln Val Val Trp Gly Asn Gly Ala Trp Trp Trp Gly Ser
65 70 75 80
Ala Ala Asp Cys Met Asp Pro Tyr Lys Ser Ala Arg Leu Phe Phe Gln
85 90 95
Arg Leu Ala Lys Arg Asp Tyr Asn Asn Gly Asp Pro Gly Ala His Ala
100 105 110
Gln Ala Ile Gln Gln Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Gly Gln Arg Met
115 120 125
Ser Glu Ala Gln
130
<210> 140
<211> 137
<212> PRT
<213> 那拉提瓦小单孢菌
<400> 140
Gly Leu Asp Gln Arg Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Ala
1 5 10 15
Gly Arg Ala Met Asn Leu Pro Arg Arg Ala Leu Val Val Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Tyr Asn Tyr Pro His Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Glu Leu Met Gln Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Phe Ala Ala
85 90 95
Leu Ala Glu Val Pro Gly Trp Ala Asp Leu Ser Leu Thr Glu Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Glu Arg Ala Thr Thr Val Val Ala Ala
130 135
<210> 141
<211> 137
<212> PRT
<213> 那拉提瓦小单孢菌
<400> 141
Gly Leu Asp Gly Asp Gln Met Ala Asn Ala Val Ser Ile Val Arg Ala
1 5 10 15
Gly Gln Glu Met Gly Val Pro Gln Arg Gly Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Ala Val
65 70 75 80
Arg Asp Leu Met Gln Pro Ala Tyr Ala Thr Lys Gln Phe Leu Ser Ala
85 90 95
Leu Leu Gln Ile Pro Gly Trp Gln Asn Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Trp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Thr Glu Val Val Asp Ala
130 135
<210> 142
<211> 137
<212> PRT
<213> Micromonospora auratinigra
<400> 142
Gly Leu Asp Gln Arg Gln Met Asp Asn Ala Lys Ala Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Ala Arg Ala Met Lys Leu Pro Arg Arg Ala Met Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asp Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Phe Asp Tyr Pro His Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Ile Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Gln Ile Met Arg Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Leu Thr Ala
85 90 95
Leu Cys Glu Val Pro Gly Trp Thr Gly Leu Ser Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Lys Arg Ala Ser Thr Val Val Ala Ala
130 135
<210> 143
<211> 136
<212> PRT
<213> 分枝杆菌属物种E1747
<400> 143
Thr Ala Asp Gln Tyr Ala Pro Ala Val Leu Gln Ala Gly Arg Asp Leu
1 5 10 15
Gly Ile Thr Pro Lys Gly Val Val Ile Gly Phe Ala Thr Val Tyr Val
20 25 30
Glu Ser Asn Trp Thr Met Tyr Ala Asn Ala Lys Val Pro Glu Ser Met
35 40 45
Asn Ile Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp Gly Leu Ser Val Gly Leu
50 55 60
Phe Gln Gln Gln Val Arg Asp Asp Gly Asn Gly Trp Trp Trp Gly Asp
65 70 75 80
Ala Ala Thr Cys Met Asp Pro Tyr Lys Ser Ala Gln Leu Phe Phe Ser
85 90 95
Arg Leu Lys Arg Leu Asp Tyr Asn Ser Glu Ala Gln Ser Pro Gly Ser
100 105 110
Tyr Ala Gln Ala Ile Gln Gln Ser Ala Phe Pro Asp Arg Tyr Asp Gln
115 120 125
Arg Met Gly Asp Ala Gln Ser Leu
130 135
<210> 144
<211> 137
<212> PRT
<213> Micromonospora sediminicola
<400> 144
Gly Leu Asp Gln Arg Gln Met Asp Asn Ala Lys Ala Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Arg Glu Met Arg Leu Pro Arg Arg Ala Leu Val Val Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asp Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Phe Asp Tyr Pro His Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Ile Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Glu Ile Met Arg Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Phe Thr Ala
85 90 95
Leu Ala Glu Val Pro Gly Trp Glu Glu Met Ser Val Thr Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Lys His Glu
115 120 125
Gln Arg Ala Ala Thr Val Val Ala Ala
130 135
<210> 145
<211> 153
<212> PRT
<213> 微杆菌属物种H83
<400> 145
Gly Ser Lys Arg Thr Leu Gly Pro Thr Glu Leu Asn His Ala Ala Thr
1 5 10 15
Ile Leu Ser Ile Ala Arg Ser Leu Gly Val Ser Val Lys Gly Gln Gln
20 25 30
Ile Ala Ile Met Thr Ala Leu Gln Glu Ser Gly Leu Lys Met Tyr Ala
35 40 45
Asn Ser Ser Val Pro Ala Ser Leu Asp Tyr Pro His Asp Ala Val Gly
50 55 60
Ser Asp His Asp Ser Val Asn Phe Phe Gln Gln Arg Val Ser Gly Trp
65 70 75 80
Gly Thr Val Ala Glu Leu Met Asp Pro Thr Tyr Ala Thr Lys Ala Phe
85 90 95
Phe Gly Gly Pro Glu Gly Pro Asn Gln Gly Ser Pro Arg Gly Leu Leu
100 105 110
Asp Val Pro Gly Trp Glu Ser Met Pro Leu Gly Lys Ala Ala Gln Thr
115 120 125
Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Ala Tyr Asp Lys Trp Glu Thr Ala
130 135 140
Ala Gln Gln Ile Ile Thr Ala Val Gly
145 150
<210> 146
<211> 137
<212> PRT
<213> 马桑内酯小单孢菌
<400> 146
Gly Leu Asp Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Thr Ala Ile Val Arg Ala
1 5 10 15
Gly Gln Lys Met Asp Val Pro Arg Arg Ala Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Thr Gly Trp Gly Ala Val
65 70 75 80
Pro Asp Leu Met Lys Pro Glu Tyr Ala Thr Gln Gln Phe Leu Thr Ala
85 90 95
Leu Leu Glu Val Pro Gly Trp Gln Asp Leu Pro Leu Thr Val Ala Ala
100 105 110
Gln Thr Val Gln Val Ser Ala Phe Gly Trp Leu Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Thr Glu Val Val Asp Ala
130 135
<210> 147
<211> 137
<212> PRT
<213> 柠檬色小单孢菌
<400> 147
Gly Leu Asp Asn Ala Gln Met Glu Asn Ala Glu Val Ile Val Arg Thr
1 5 10 15
Gly Arg Lys Met Gly Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Val Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Gln Gly Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ser Ser Ser Gly Trp Gly Glu Val
65 70 75 80
Gly Gln Leu Met Asp Pro Ala Phe Ala Thr Arg Gln Phe Leu Ser Ala
85 90 95
Leu Ala Glu Val Pro Gly Trp Gln Gln Met Arg Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Tyr Pro Glu His Tyr Ala Lys His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Thr Glu Val Val Glu Ala
130 135
<210> 148
<211> 137
<212> PRT
<213> Micromonospora peucetia
<400> 148
Ile Pro Gln Tyr Gly Glu Arg Gln Leu Arg Asn Ala Ala Arg Ile Ile
1 5 10 15
Lys Val Gly Gln Glu Met Lys Val Ser Pro Arg Gly Trp Val Ile Ala
20 25 30
Val Ala Thr Ala Leu Gln Glu Ser Arg Leu Leu Asn Leu Ala Asn Arg
35 40 45
Thr Val Ser Glu Ser Glu Thr Ile Pro Asn Glu Gly Ile Gly Ala Asp
50 55 60
His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Trp Gly Ser Val
65 70 75 80
Thr Gln Arg Met Thr Pro Glu Tyr Ala Ala Arg Lys Phe Tyr Glu Lys
85 90 95
Leu Val Arg Val Pro Gly Trp Glu Thr Met Pro Leu Ser Arg Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Lys His Glu
115 120 125
Asp Val Ala Ala Arg Ile Val Ser Ala
130 135
<210> 149
<211> 147
<212> PRT
<213> 杨浦小单孢菌
<400> 149
Thr Gly Arg Met Pro Arg Ser Ala Gly Tyr Gly Glu Arg Gln Leu Arg
1 5 10 15
Asn Ala Ala Ile Ile Ile Lys Val Gly Gln Asp Met Lys Val Pro Ala
20 25 30
Arg Gly Trp Val Ile Ala Ile Ala Thr Ala Ile Gln Glu Ser Gly Leu
35 40 45
Lys Asn Tyr Ala Asn Ser Thr Val Pro Glu Ser Leu Ala Leu Pro His
50 55 60
Glu Ala Val Gly Arg Asp His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg
65 70 75 80
Pro Gly Trp Gly Ser Val Lys Gln Arg Met Thr Pro Ser Tyr Ser Ala
85 90 95
Arg Lys Phe Tyr Glu Lys Leu Ile Gln Val Pro Asn Trp Glu Lys Arg
100 105 110
Ser Leu Thr Asp Ala Ala Gln Arg Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Tyr Ala Lys His Glu Glu Thr Ala Ser Arg Ile Val Asp Ala Leu
130 135 140
Ala Gly Gly
145
<210> 150
<211> 137
<212> PRT
<213> 根际小单孢菌
<400> 150
Gly Leu Asp Lys Ala Gln Met Asp Asn Ala Glu Ala Ile Val Lys Ala
1 5 10 15
Gly Gln Glu Met Gly Val Pro Arg Arg Ala Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Ser Val
65 70 75 80
Pro Asp Leu Met Lys Pro Glu Phe Ala Thr Arg Gln Phe Leu Thr Ala
85 90 95
Leu Val Ala Val Pro Gly Trp Gln Asp Met Pro Leu Thr Leu Ala Ala
100 105 110
Gln Thr Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Trp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Asn Glu Val Val Asn Ala
130 135
<210> 151
<211> 147
<212> PRT
<213> 棘橙小单孢菌
<400> 151
Thr Gly Lys Met Pro Arg Met Ser Glu Tyr Gly Glu Ser Gln Leu Arg
1 5 10 15
Asn Ala Ala Arg Ile Val Lys Val Gly Gln Glu Met Lys Val Pro Pro
20 25 30
Arg Gly Trp Val Ile Ala Val Ala Thr Ala Met Gln Glu Ser Gly Leu
35 40 45
Arg Asn Leu Ala Asn Arg Thr Val Ala Gln Ser Arg Asp Leu Pro Asn
50 55 60
Glu Gly Val Gly Ala Asp His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg
65 70 75 80
Ala Asn Trp Gly Ser Val Ala Gln Arg Met Thr Pro Glu Tyr Ala Ala
85 90 95
Arg Lys Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Lys Val Pro Gly Trp Gln Arg Met
100 105 110
Pro Leu Thr Thr Ala Ala Gln Lys Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Tyr Ala Lys His Glu Ala Leu Ala Ala Arg Ile Val Asp Ala Leu
130 135 140
Ala Gly Gly
145
<210> 152
<211> 137
<212> PRT
<213> 肌醇小单孢菌
<400> 152
Gly Leu Asp Glu Asp Gln Met Asp Asn Ala Lys Ala Ile Val Arg Ala
1 5 10 15
Gly Arg Asp Met Gly Val Pro Arg Arg Gly Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Ala Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Gly Asp Leu Met Arg Pro Glu Tyr Ala Thr Lys Gln Phe Leu Thr Ala
85 90 95
Leu Glu Gln Ile Pro Gly Trp Gln Asp Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Trp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Asp Glu Val Val Asp Ala
130 135
<210> 153
<211> 137
<212> PRT
<213> 肌醇小单孢菌
<400> 153
Gly Leu Asp Gln Arg Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Arg Asp Met Lys Leu Pro Arg Arg Ala Leu Ile Val Ala Ile Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Tyr Asp Tyr Pro His Gln Gly Ser Gly Ala Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Glu Leu Met Arg Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Tyr Ala Ala
85 90 95
Leu Ala Glu Val Pro Gly Trp Ala Asp Leu Ser Ile Thr Gln Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Gln Arg Ala Thr Thr Val Val Asp Ala
130 135
<210> 154
<211> 137
<212> PRT
<213> Micromonospora coxensis
<400> 154
Gly Leu Thr Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Val Gly Met Gly Val Pro Arg Arg Gly Leu Val Val Ala Ile Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu His Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Phe Asp His Pro His Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Gln Leu Met Arg Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Tyr Thr Ala
85 90 95
Leu Leu Glu Val Pro Gly Trp Gln Asp Met Ser Val Thr Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Lys His Glu
115 120 125
Gln Arg Ala Gly Thr Val Val Ala Ala
130 135
<210> 155
<211> 126
<212> PRT
<213> Micromonospora mirobrigensis
<400> 155
Gly Leu Asp Glu Thr Gln Met Asp Asn Ala Lys Ala Ile Val Arg Ser
1 5 10 15
Ala Lys Lys Met Gly Val Pro Arg Gln Ala Met Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Thr Leu Leu Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asp Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Glu Gln Leu Met Asp Pro Glu Phe Ala Thr Gln Ala Phe Leu Ser Val
85 90 95
Leu Leu Gln Val Pro Gly Trp Gln Asp Met Pro Leu Thr Leu Ala Ala
100 105 110
Gln Ile Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln
115 120 125
<210> 156
<211> 137
<212> PRT
<213> Micromonospora viridifaciens
<400> 156
Gly Leu Asp Arg Ala Gln Met Asp Asn Ala Thr Thr Ile Val Arg Thr
1 5 10 15
Gly Arg Asp Met Gly Val Pro Arg Arg Gly Leu Ile Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Asp Leu Met Lys Pro Ala Tyr Ala Thr Arg Gln Phe Leu Ala Ala
85 90 95
Leu Glu Gln Ile Pro Gly Trp Gln Asn Met Ala Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Trp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Thr Glu Val Val Asp Ala
130 135
<210> 157
<211> 139
<212> PRT
<213> 海口小单孢菌
<400> 157
Val Pro Gly Val Gly Glu Trp Thr Ser Ala Gln Thr Thr His Ala Thr
1 5 10 15
Val Ile Val Ser Val Gly Arg Gln Arg Arg Val Ala Pro Arg Gly Tyr
20 25 30
Val Ile Ala Leu Ala Val Ala Met Gln Glu Ser Thr Leu Arg Asn Leu
35 40 45
Ala Asn Ser Thr Val Pro Glu Ser Leu Asn Ile Pro His Asp Ala Val
50 55 60
Gly Ser Asp His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Gly Trp
65 70 75 80
Gly Ser Val Arg Glu Arg Met Thr Pro Ser Tyr Ala Ala Arg Lys Phe
85 90 95
Tyr Glu Ala Leu Val Asp Val Asp Gly Trp Gln Arg Met Arg Leu Thr
100 105 110
Asp Ala Ala Gln Ala Val Gln Arg Ser Gly Thr Pro Glu Ala Tyr Gln
115 120 125
Lys Trp Glu Asp Asp Ala Glu Ala Leu Ala Ala
130 135
<210> 158
<211> 137
<212> PRT
<213> Micromonospora peucetia
<400> 158
Gly Leu Asp Lys Ala Gln Met Lys Asn Ala Gln Ala Ile Val Arg Thr
1 5 10 15
Gly Arg Glu Met Glu Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Val Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Arg Asn His Pro His Gln Gly Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ser Ser Ser Gly Trp Gly Glu Val
65 70 75 80
Gly Gln Leu Met Asp Pro Glu Phe Ala Thr Arg Gln Phe Leu Ala Ala
85 90 95
Leu Ala Gln Val Pro Gly Trp Gln Gln Met Arg Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Tyr Pro Glu His Tyr Ala Lys His Glu
115 120 125
Gly Arg Ala Thr Thr Val Val Gly Ala
130 135
<210> 159
<211> 137
<212> PRT
<213> 柠檬色小单孢菌
<400> 159
Gly Leu Thr Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Ala Asp Leu Lys Met Pro Arg Arg Ala Met Val Val Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Arg Gln Tyr Pro His Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Arg Glu Leu Met Arg Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Tyr Glu Ala
85 90 95
Leu Arg Glu Val Pro Gly Trp Gln Glu Met Ser Val Ala Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Arg His Glu
115 120 125
Glu Arg Ala Thr Thr Ile Val Ala Ala
130 135
<210> 160
<211> 137
<212> PRT
<213> Micromonospora saelicesensis
<400> 160
Gly Leu Asp Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Lys Ile Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Leu Glu Met Lys Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Val Ala Leu Ser
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Asp Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Ala Glu Tyr Pro Asn Gln Gly Ser Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Gln Leu Met Arg Pro Ser Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Tyr Thr Ala
85 90 95
Leu Asn Glu Ile Pro Gly Trp Gln Asp Met Ser Val Thr Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Tyr Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Asp Arg Ala Thr Thr Val Ala Ala Ala
130 135
<210> 161
<211> 137
<212> PRT
<213> 棘孢小单孢菌
<400> 161
Gly Leu Thr Gln Arg Gln Met Asp Asn Ala Lys Ala Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Val Glu Leu Arg Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Val Ala Ile Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asp Leu His Asn Leu Ala Asn Asp Arg Ile
35 40 45
Ala Glu Ser Ala Arg Tyr Pro His Gln Gly Ser Gly Thr Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Ser Val
65 70 75 80
Arg Glu Leu Met Gln Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Val Phe Tyr Arg Ala
85 90 95
Leu Arg Glu Val Ser Gly Trp Glu Asp Met Ser Val Thr Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Gly Ala Tyr Ala Lys His Glu
115 120 125
Arg Arg Ala Thr Thr Val Val Asp Ala
130 135
<210> 162
<211> 137
<212> PRT
<213> 产紫色小单孢菌
<400> 162
Gly Leu Asp Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Lys Ala Ile Val Lys Ala
1 5 10 15
Gly Arg Lys Met Gly Val Pro Arg Gln Ala Leu Ile Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro Tyr Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Glu Val
65 70 75 80
Arg Asp Leu Met Asp Pro Glu Tyr Ala Thr Gln Ala Phe Leu Ser Ala
85 90 95
Leu Leu Glu Ile Pro Gly Trp Gln Asp Leu Ala Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Trp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Thr Glu Val Val Glu Ala
130 135
<210> 163
<211> 143
<212> PRT
<213> 棘暗小单孢菌
<400> 163
Ser Ala Asn Pro Pro Gly Ser Ala Ala Asp Ala Ser Trp Lys Pro Ala
1 5 10 15
Gln Val Gly His Ala Ala Thr Ile Val Arg Val Gly Ala Glu Lys Asp
20 25 30
Val Pro Ser Lys Gly Trp Thr Val Ala Val Ala Thr Ala Met Gln Glu
35 40 45
Ser Thr Leu Arg Asn Leu Ala Asn Ser Met Val Pro Glu Ser Leu Gly
50 55 60
Ile Pro His Glu Gly Val Gly Arg Asp His Asp Ser Val Gly Leu Phe
65 70 75 80
Gln Gln Arg Pro Gly Trp Gly Thr Val Val Gln Arg Met Thr Pro Asp
85 90 95
Tyr Ala Ala Gly Lys Phe Tyr Asp Ala Leu Val Lys Val Asn Gly Trp
100 105 110
Glu Ala Met Ser Leu Ala Glu Ala Ala Gln Ala Val Gln Val Ser Arg
115 120 125
Tyr Pro Asp Ala Tyr Ala Lys Trp Gln Ser Glu Ala Gln Arg Leu
130 135 140
<210> 164
<211> 137
<212> PRT
<213> 棘橙小单孢菌
<400> 164
Gly Leu Thr Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Lys Ile Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Val Asp Met Lys Ile Pro Arg Arg Gly Leu Val Val Ala Ile Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Lys Asp Leu Met Arg Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Tyr Glu Ala
85 90 95
Leu Arg Glu Ile Pro Gly Trp Gln Glu Met Ser Val Thr Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Gly Arg Ala Thr Thr Val Val Ala Ala
130 135
<210> 165
<211> 131
<212> PRT
<213> 柠檬色小单孢菌
<400> 165
Ser Ala Gln Ser Thr Asn Ala Ala Thr Ile Val Ala Val Gly Arg Gln
1 5 10 15
Arg Gln Val Pro Pro Arg Gly Phe Val Ile Ala Leu Ala Thr Ala Met
20 25 30
Gln Glu Ser Thr Leu Arg Asn Leu Ala Asn Ser Thr Val Pro Glu Ser
35 40 45
Leu Ser Leu Pro His Glu Gly Val Gly Arg Asp His Asp Ser Val Gly
50 55 60
Leu Phe Gln Gln Arg Pro Gly Trp Gly Ser Val Arg Glu Arg Met Thr
65 70 75 80
Pro Ser Tyr Ala Ala Ala Lys Phe Tyr Glu Ala Leu Val Arg Val Asp
85 90 95
Gly Trp Gln Arg Met Arg Leu Thr Asp Ala Ala Gln Ala Val Gln Arg
100 105 110
Ser Gly Leu Pro Glu Ala Tyr Gln Lys Trp Glu Ala Asp Ala Glu Gln
115 120 125
Leu Ala Ala
130
<210> 166
<211> 137
<212> PRT
<213> 棘橙小单孢菌
<400> 166
Gly Leu Thr Glu Ala Gln Met Glu Asn Ala Glu Ala Ile Val Arg Thr
1 5 10 15
Gly Arg Glu Met Gly Val Pro Arg Arg Ala Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Gln Ala Val Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Pro Val
65 70 75 80
Arg Arg Leu Met Glu Pro Glu Phe Ala Thr Arg Gln Phe Leu Ser Ala
85 90 95
Leu Glu Gln Val Pro Gly Trp Gln Arg Met Arg Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Ile Ser Ala Tyr Pro Glu His Tyr Ala Lys His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Thr Lys Val Val Glu Ala
130 135
<210> 167
<211> 133
<212> PRT
<213> 苍白小单孢菌
<400> 167
Gly Leu Ser Gln Arg Gln Met Asp Asn Ala Lys Thr Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Val Arg Ser Arg Met Pro Arg Arg Ala Leu Val Val Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu His Asn Val Ala Asn Asp Gln Ile
35 40 45
Ala Glu Ser Leu Arg Tyr Pro His Gln Gly Thr Gly Thr Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Ser Val
65 70 75 80
Arg Glu Leu Met Gln Pro Thr Tyr Ala Ala Ser Ala Phe Tyr Arg Ala
85 90 95
Leu Arg Glu Val Pro Gly Trp Gln Lys Leu Ser Val Thr Ala Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Gln Ser Ala Tyr Pro Gly Ala Tyr Ala Lys His Glu
115 120 125
Arg Arg Ala Thr Ala
130
<210> 168
<211> 137
<212> PRT
<213> 根际小单孢菌
<400> 168
Gly Leu Asp Gln Arg Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Arg Glu Met Lys Met Pro Arg Arg Gly Leu Ile Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro Tyr Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Glu Leu Met Arg Pro Ala Tyr Ala Ala Arg Ala Phe Tyr Ser Ala
85 90 95
Leu Asn Glu Val Pro Gly Trp Gln Asp Leu Ser Leu Thr Gln Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Arg His Glu
115 120 125
Glu Arg Ala Thr Thr Val Val Asp Ala
130 135
<210> 169
<211> 141
<212> PRT
<213> 苍白小单孢菌
<400> 169
Gly Pro Val Ala Gly Leu Thr Val Ala Gln Met Asn Asn Ala Lys Lys
1 5 10 15
Ile Val Arg Ala Gly Arg Ala Met Gly Val Pro Arg Arg Ala Leu Val
20 25 30
Ile Ala Val Ala Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Leu Ala
35 40 45
Ser Gly Val Val Pro Glu Ser Gln Asn His Pro Asn Gln Gly Val Gly
50 55 60
Trp Asp His Asp Ser Ile Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Ser Met Gly
65 70 75 80
Trp Gly Thr Val Ala Gln Ile Met Asp Pro Ala Tyr Ala Thr Arg Gln
85 90 95
Phe Leu Thr Val Leu Leu Thr Val Pro Gly Trp Gln Gln Met Arg Leu
100 105 110
Thr Asp Ala Ala Gln Ala Val Gln Val Ser Gly Phe Pro Glu Ala Tyr
115 120 125
Ala Gln His Glu Ser Arg Ala Thr Val Ile Val Asn Ala
130 135 140
<210> 170
<211> 137
<212> PRT
<213> 甲米小单孢菌
<400> 170
Gly Leu Thr Arg Ala Gln Met Lys Asn Ala Gly Ala Ile Val Arg Thr
1 5 10 15
Gly Arg Glu Met Lys Val Pro Arg Arg Ala Leu Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asn Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Ser Val
65 70 75 80
Gly Asp Leu Met Arg Pro Glu Tyr Ala Thr Arg Gln Phe Leu Thr Ala
85 90 95
Leu Glu Glu Val Pro Gly Trp Gln Gln Met Pro Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Phe Gly Trp Leu Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Trp Ala Ala Thr Glu Val Val Asp Ala
130 135
<210> 171
<211> 137
<212> PRT
<213> 甲米小单孢菌
<400> 171
Gly Leu Thr Gln Ala Gln Met Asp Asn Ala Lys Val Ile Val Asp Val
1 5 10 15
Gly Arg Asp Leu Asp Val Pro Lys Phe Gly Met Ile Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Thr Leu Leu Asn Tyr Ala Ser Gly Val Leu
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Asp Tyr Pro His Gln Ala Ile Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Glu Leu Met Arg Pro Ala Phe Ala Ala Arg Ala Phe Tyr Leu Ala
85 90 95
Leu Leu Glu Val Pro Gly Trp Gln Asp Met Ser Leu Thr Val Ala Ala
100 105 110
Gln Thr Val Gln Val Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Gln His Glu
115 120 125
Asp Arg Ala Thr Glu Val Val Glu Ala
130 135
<210> 172
<211> 143
<212> PRT
<213> 分枝杆菌噬菌体Tonenili
<400> 172
Glu Gly Arg Arg Ala Arg Ser Gly Gln Gly Gln Leu Asp His Pro Val
1 5 10 15
Ile Ser Glu Lys Gly Ile Val Ile Ala Leu Ala Thr Gly Leu Val Glu
20 25 30
Ser Asn Leu Thr Met Tyr Ala Asn Arg Ala Asp Pro Asp Ser Leu Lys
35 40 45
Tyr Pro His Asp Ala Val Gly Ser Asp Ala Asn Ser Val Gly Val Phe
50 55 60
Gln Gln Arg Ala Pro Trp Trp Gly Thr Leu Ala Asp Arg Met Asp Val
65 70 75 80
Ala Arg Ser Ala Ala Met Phe Tyr Gly Ser Leu Ala Arg Gln Arg Ile
85 90 95
Val Asp Asn Ala Gly Thr Pro Asn Glu Lys Arg Phe Asp Tyr Asn Thr
100 105 110
Asp Arg Val Ser Pro Gly Thr Trp Ala Gln Met Val Gln Lys Ser Ala
115 120 125
Phe Pro Asp Arg Tyr Asp Gln Arg Met Ala Glu Ala Arg Lys Ile
130 135 140
<210> 173
<211> 102
<212> PRT
<213> 分枝杆菌噬菌体Tonenili
<400> 173
Thr Ile Met Val Glu Ser Asn Trp Ile Met Tyr Ala Asn Asn Ala Val
1 5 10 15
Pro Glu Ser Leu Asn Phe Pro His Asp Ala Ile Gly Ser Asp His Asp
20 25 30
Ser Ile Gly Leu Phe Gln Gln Arg Pro Ser Trp Gly Thr Val Ala Gln
35 40 45
Arg Met Asn Pro Arg Glu Ser Ala Gly Met Phe Leu Lys Glu Leu Ala
50 55 60
Lys Leu Asp Trp Arg Asn Met Asp Arg Gly Ala Ala Cys Gln Ala Val
65 70 75 80
Gln Arg Ser Ala Phe Pro Gly Arg Tyr Ala Ala Gln Glu Gln Ala Ala
85 90 95
Val Glu Met Val Arg Ala
100
<210> 174
<211> 142
<212> PRT
<213> 假诺卡氏菌属物种SCN 72 86
<400> 174
Leu Asp Glu Lys Gln Leu Ala Asn Ala Ala Thr Ile Ile Thr Val Gly
1 5 10 15
Thr Gln Ala Gly Val Pro Ala Ala Gly Leu Lys Val Ala Leu Met Thr
20 25 30
Ala Leu Gln Glu Ser Lys Leu Arg Met Leu Ala Asn Ser Thr Val Pro
35 40 45
Ala Ser Leu Asp Tyr Pro His Glu Gly Val Gly Ser Asp His Asp Ser
50 55 60
Val Asn Met Phe Gln Gln Arg Pro His Trp Gly Lys Leu Ala Asp Leu
65 70 75 80
Met Asp Ala Arg Tyr Ala Val Arg Ala Phe Phe Gly Gly Pro Asn Gly
85 90 95
Pro Asn Gly Gly Ser Pro Arg Gly Leu Leu Asp Ile Lys Gly Trp Asp
100 105 110
Thr Met Pro Pro Gly Gln Ala Ala Gln Arg Val Gln Val Ser Ala Phe
115 120 125
Pro Asp Ala Tyr Asp Gln Trp Glu Gly Ala Ala Glu Thr Ile
130 135 140
<210> 175
<211> 148
<212> PRT
<213> 多疣微杆菌
<400> 175
Leu Arg Arg Ala Gln Leu Thr His Ala Ala Thr Ile Ile Thr Val Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ile Asp Gly Val Gly Arg Gln Gly Val Leu Ile Ala Leu Met
20 25 30
Ala Ala Leu Thr Glu Ser Thr Leu Arg Met Leu Ala Asn Ala Ala His
35 40 45
Pro Ala Ser Leu Asp Met Pro Asn Asp Gly Val Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Leu Gly Leu Phe Gln Met Arg Pro Thr Ser Gly Trp Gly Thr Val
65 70 75 80
Ala Glu Leu Met Asp Ala Arg Tyr Gln Val Arg Ala Phe Phe Gly Gly
85 90 95
Pro Asp Gly Pro Asn Tyr Pro Ser Pro Ala Gly Leu Leu Asp Ile Ala
100 105 110
Gly Trp Gln Thr Ala Asp Pro Gly Thr Ala Ala Gln Ala Val Glu Arg
115 120 125
Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr Gln Asn Tyr Gln Pro Val Ala Glu Ser
130 135 140
Ile Ile Ala Ala
145
<210> 176
<211> 123
<212> PRT
<213> 假诺卡氏菌属物种SCN 73 27
<400> 176
Gly Phe Ala Gly Pro Gln Leu Ala Asn Ala Ala Ala Ile Val Ser Val
1 5 10 15
Gly Val Glu Met Gly Val Ser Gln Arg Gly Gln Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Ile Gln Glu Ser Lys Leu Leu Met Tyr Ala Asn Ser Thr Val
35 40 45
Pro Ala Ser Leu Asp Leu Pro His Asp Arg Val Gly Ser Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ala Pro Trp Gly Pro Leu Gln Val
65 70 75 80
Arg Met Asp Ala Arg Gly Ser Ala Lys Leu Phe Tyr Ala Arg Leu Leu
85 90 95
Thr Val Pro Gly Trp Gln Ser Met Pro Leu Ala Gln Ala Ala Gln Ala
100 105 110
Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala
115 120
<210> 177
<211> 145
<212> PRT
<213> 分枝杆菌噬菌体Lukilu
<400> 177
Thr Gln Asp Gly Ile Ala Ile Gly Ile Ile Ala Glu Gly Arg Arg Ser
1 5 10 15
Arg Ser Gly Glu Gly Gln Leu Asp His Pro Val Met Ser Ala Lys Gly
20 25 30
Ile Val Ile Ala Leu Ala Val Ala Leu Val Glu Thr Asn Leu Lys Met
35 40 45
Tyr Ala Asn Arg Ser Asp Pro Glu Ser Leu Asn Phe Pro His Asp Ala
50 55 60
Val Gly Ser Asp Ala Asn Ser Val Gly Val Phe Gln Gln Arg Ala Pro
65 70 75 80
Trp Trp Gly Thr Val Ala Asp Arg Met Asp Val Ala Arg Ser Ala Ala
85 90 95
Met Phe Tyr Asn Ser Leu Tyr Arg Gln Arg Val Gly Gly Ala Asp Tyr
100 105 110
Asn Thr Asp Arg Val Ser Pro Gly Thr Trp Gly Gln Met Val Gln Gln
115 120 125
Ser Ala Phe Pro Asp Arg Tyr Asp Lys Arg Met Ala Glu Ala Arg Gln
130 135 140
Ile
145
<210> 178
<211> 147
<212> PRT
<213> Micromonospora avicenniae
<400> 178
Ser Gly Lys Met Pro Arg Leu Ala Asp Tyr Gly Asp Ser Gln Leu Arg
1 5 10 15
Asn Ala Ala Arg Ile Ile Gly Thr Gly Gln Lys Met Lys Val Pro Pro
20 25 30
Arg Gly Trp Val Ile Ala Val Ala Thr Ala Met Gln Glu Ser Arg Leu
35 40 45
Arg Asn Leu Ala Asn Arg Thr Val Gly Glu Ser Gln Gly Leu Pro Asn
50 55 60
Glu Gly Val Gly Ala Asp His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg
65 70 75 80
Ala Ser Trp Gly Thr Val Arg Gln Arg Met Thr Pro Glu Tyr Ala Ala
85 90 95
Lys Lys Phe Tyr Glu Gly Leu Leu Asp Ile Pro Asp Trp Glu Gln Leu
100 105 110
Pro Leu Thr Glu Ala Ala Gln Arg Val Gln Arg Ser Ala Phe Pro Asp
115 120 125
Ala Tyr Ala Lys His Glu Ala Val Ala Ala Gln Ile Val Asp Ala Leu
130 135 140
Ala Gly Gly
145
<210> 179
<211> 127
<212> PRT
<213> 脓肿分枝杆菌脓肿亚种
<400> 179
Ser Lys Asp Asp Tyr Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Gly Lys Arg Arg
1 5 10 15
Gly Ile Ser Pro Leu Gly Ile Gln Ile Gly Leu Ala Thr Val Tyr Val
20 25 30
Glu Ser Asp Phe Ile Met Tyr Ala Asn Glu Asp Asp Pro Glu Ser Leu
35 40 45
Asn Tyr Pro His Glu Ala Leu Ser Glu Asp Ala Asn Ser Thr Gly Leu
50 55 60
Phe Gln Gln Arg Ala Pro Trp Trp Gly Thr Val Ala Asp Arg Met Asp
65 70 75 80
Ala Thr Arg Ser Ala Gly Leu Phe Phe Ala Ala Leu Ala Lys Leu Asp
85 90 95
Tyr Asn Asn Pro Ala Arg Ser Pro Gly Ser Tyr Ala Gln Ala Val Gln
100 105 110
Lys Ser Ala Phe Pro Asp Arg Tyr Asp Lys Arg Phe Asn Asp Ala
115 120 125
<210> 180
<211> 140
<212> PRT
<213> 脓肿分枝杆菌脓肿亚种
<400> 180
Ala Gly Thr Val Gly Asp Leu Asp Gly Arg Gln Thr Gln Val Ala Lys
1 5 10 15
Asp Ile Val Ala Glu Gly Leu Arg Arg Gly Ile Pro Phe Lys Gly Leu
20 25 30
Val Ile Gly Val Ala Thr Ala Leu Gln Glu Ser Ser Leu Arg Glu Leu
35 40 45
Ala Asn Pro Ser Val Pro Glu Ser Met Gln Ile Pro His Asp Gly Val
50 55 60
Gly Lys Asp His Asp Ser Val Gly Pro Phe Gln Gln Arg Gln Ser Trp
65 70 75 80
Gly Ala Thr Ala Asp Leu Met Asn Ser Arg Thr Ser Ala Gly Lys Phe
85 90 95
Phe Ala Ala Leu Gln Lys Val Ala Gly Trp Gln Asn Met Ser His Thr
100 105 110
Glu Ala Ala Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Phe Pro Ser Ala Tyr Ala
115 120 125
Lys His Val Ala His Ala Asp Arg Ile Val Arg Ala
130 135 140
<210> 181
<211> 121
<212> PRT
<213> 脓肿分枝杆菌脓肿亚种
<400> 181
Asn Gly Lys Ala Val Ile Ala Thr Gly Leu Gln Met Lys Ile Pro Glu
1 5 10 15
Lys Gly Ile Ile Val Ala Leu Ala Thr Ala Met Gln Glu Ser Gly Leu
20 25 30
Lys Asn Tyr Ala Asn Pro Asn Val Pro Glu Ser Met Gln Ile Pro His
35 40 45
Glu Ala Val Gly His Asp His Ala Ser Val Gly Ile Phe Gln Gln Gln
50 55 60
Pro Trp Trp Gly Ser Ile Lys Asp Leu Met Thr Pro Gly Val Ala Ala
65 70 75 80
Gln Lys Phe Tyr Ala Ala Leu Leu Lys Val Gly Gly Trp Glu Ser Met
85 90 95
Ala Pro Thr Gln Ala Ala Gln Ala Val Gln Arg Ser Ala Tyr Pro Asp
100 105 110
Ala Tyr Ala Asp Asp Val Pro Ala Ala
115 120
<210> 182
<211> 137
<212> PRT
<213> Micromonospora avicenniae
<400> 182
Gly Leu Thr Arg Thr Gln Met Lys Asn Ala Glu Ile Ile Val Arg Thr
1 5 10 15
Gly Arg Gly Met Gly Val Pro Arg Arg Gly Met Val Ile Ala Val Ala
20 25 30
Thr Ala Met Gln Glu Ser Asn Leu Tyr Asn Leu Ala Ser Gly Val Ile
35 40 45
Pro Glu Ser Gln Arg His Pro His Gln Gly Leu Gly Trp Asp His Asp
50 55 60
Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Ser Ser Ser Gly Trp Gly Pro Val
65 70 75 80
Asp Arg Leu Met Asp Pro Glu Phe Ala Thr Arg Gln Phe Leu Gly Ala
85 90 95
Leu Glu Arg Val Pro Gly Trp Gln Gln Met Arg Leu Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Gln Ala Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp Tyr Tyr Ala Lys His Glu
115 120 125
Trp Arg Ala Asn Glu Val Val Asp Ala
130 135
<210> 183
<211> 134
<212> PRT
<213> 脓肿分枝杆菌脓肿亚种
<400> 183
Leu Asn Glu Arg Gln Met Glu Ile Ala Arg Thr Ile Val Ala Glu Ala
1 5 10 15
Gln Arg Arg Gly Leu Ser Pro Phe Ala Ala Lys Ile Ala Leu Ala Thr
20 25 30
Gly Leu Thr Glu Ser Gly Leu Arg Asn Leu Ala Asn Ser Asn Val Pro
35 40 45
Ala Ser Leu Asn Ile Leu Asn Asp Gly Val Gly Lys Asp His Asp Ser
50 55 60
Thr Gly Val Phe Gln Gln Arg Gln Ser Trp Gly Ala Thr Arg Glu Leu
65 70 75 80
Met Thr Pro Met Leu Ala Ala Gly Lys Phe Tyr Asp Ala Leu Val Lys
85 90 95
Val Pro Gly Trp Glu His Met Ser Leu Ala Ala Ala Ala Gln Ser Val
100 105 110
Gln Arg Ser Ala Phe Pro Ser Ala Tyr Ala Lys Tyr Glu Gln Gln Ala
115 120 125
Asn Gln Val Tyr Gln Ala
130
<210> 184
<211> 127
<212> PRT
<213> 脓肿分枝杆菌脓肿亚种
<400> 184
Ser Lys Asp Asp Tyr Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Gly Arg Arg Lys
1 5 10 15
Gly Ile Thr Pro Arg Gly Ile Gln Ile Gly Leu Ala Thr Val Tyr Val
20 25 30
Glu Ser Asp Phe Ile Met Tyr Ala Asn Glu Ala Asp Pro Asp Ser Leu
35 40 45
Asn Tyr Pro His Glu Asp Leu Ser Glu Asp Glu Asn Ser Thr Gly Leu
50 55 60
Phe Gln Gln Arg Ala Pro Trp Trp Gly Thr Val Ala Asp Arg Met Asp
65 70 75 80
Ala Ala Arg Ser Ala Gly Leu Phe Phe Ala Ala Leu Ala Lys Leu Asp
85 90 95
Tyr Asn Asn Pro Ser Arg Ser Pro Gly Ser Tyr Ala Gln Ser Val Gln
100 105 110
Gln Ser Ala Phe Pro Asp Arg Tyr Asp Gln Arg Phe Asn Asp Ala
115 120 125
<210> 185
<211> 130
<212> PRT
<213> 脓肿分枝杆菌脓肿亚种
<400> 185
Gln Met Gln Val Ala Lys Ser Ile Val Ala Glu Gly Val Arg Arg His
1 5 10 15
Leu Pro Pro Lys Ala Met Gln Ile Ala Ile Ala Thr Ala Leu Gln Glu
20 25 30
Ser Gly Met Arg Ser Leu Ala Asn Pro Asn Val Pro Ala Ser Met Gln
35 40 45
Ile Pro His Gln Gly Val Gly Arg Asp His Asp Ser Val Gly Pro Phe
50 55 60
Gln Gln Arg Gln Ser Trp Gly Ala Thr Ala Asp Leu Met Asn Pro Ala
65 70 75 80
Thr Ser Ala Gly Lys Phe Tyr Asp Lys Leu Val Arg Ile Pro Gly Trp
85 90 95
Gln Glu Met Pro Leu Thr Gln Ala Ala Gln Arg Val Gln Val Ser Ala
100 105 110
Tyr Pro Asn Ala Tyr Ala Lys His Thr Gly Pro Ala Gly Gln Ile Val
115 120 125
Ala Ala
130
<210> 186
<211> 135
<212> PRT
<213> 脓肿分枝杆菌脓肿亚种
<400> 186
Ser Lys Glu Asp Gly Tyr Ala Arg Ala Ile Ile Ala Glu Gly Lys Arg
1 5 10 15
Arg Gly Ile Ser Pro Arg Gly Ile Gln Ile Gly Leu Ala Thr Val Phe
20 25 30
Val Glu Ala Ala Leu Lys Met Trp Ala Asn Glu Lys Val Pro Glu Ser
35 40 45
Leu Glu Phe Pro His Asp Asp Val Gly Tyr Asp Gly Tyr Ser Val Gly
50 55 60
Leu Phe Gln Gln Gln Val Val Met Gly Leu Asn Gly Gln Trp Trp Trp
65 70 75 80
Ala Asp Cys Ala Thr Cys Met Asn Pro Thr Leu Ser Ala Gly Leu Phe
85 90 95
Phe Asp Arg Leu Ala Lys Leu Pro Tyr Asn Asp Thr Ser Arg Ser Pro
100 105 110
Gly Ser Phe Ala Gln Asp Val Gln Gln Ser Ala Tyr Pro Asp Arg Tyr
115 120 125
Asp Lys Arg Phe Ala Glu Ala
130 135
<210> 187
<211> 127
<212> PRT
<213> 假诺卡氏菌属物种Ae717_Ps2
<400> 187
Ile Glu Gly Leu Gly Pro Glu Gln Val Ser Asn Ala Gly Leu Ile Val
1 5 10 15
Ala Thr Gly Val Glu Met Asp Val Pro Arg His Gly Arg Val Ile Ala
20 25 30
Leu Ala Thr Ala Met Gln Glu Ser Ser Leu Lys Asn Leu Ala Asn Ser
35 40 45
Asn Val Pro Gln Ser Leu Glu Leu Pro Asn Gln Gly Val Gly Ser Asp
50 55 60
His Asp Ser Val Gly Leu Phe Gln Gln Arg Glu Ala Gly Trp Gly Asp
65 70 75 80
Val Ala Thr Arg Met Asp Pro Arg Gln Ser Ala Arg Leu Phe Tyr Asn
85 90 95
Ala Leu Leu Gln Val Pro Gly Trp Glu Ser Leu Pro Val Thr Arg Ala
100 105 110
Ala Gln Leu Val Gln Ile Ser Ala Phe Pro Asp Ala Tyr Ala Lys
115 120 125
<210> 188
<211> 74
<212> PRT
<213> 柄孢霉
<400> 188
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Val Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ser Val Val Lys Gln Tyr Thr Gln Gly Gln Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Asn Val Asn Gly Val Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ala Asp Gly Asn Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Gln Thr
50 55 60
Gly Val Asn Gly Tyr Val Thr Glu Arg Cys
65 70
<210> 189
<211> 73
<212> PRT
<213> 产黄青霉
<400> 189
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ser Val Val Lys Ser Tyr Lys Gln Gly Ala Asp Val Ala Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ala Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Glu Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Glu Asp Gly Cys Tyr Ile Thr Asp Tyr Tyr Ile Arg Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Tyr Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 190
<211> 73
<212> PRT
<213> 赤球丛赤壳菌
<400> 190
Tyr Pro Val Thr Ser Asp Asn Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Asn Gly Gln Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Asp Asn Ile Glu Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Lys Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Lys Asp Gly Tyr Val Lys Gly Lys Cys
65 70
<210> 191
<211> 61
<212> PRT
<213> 蝗绿僵菌
<400> 191
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Thr Val Asn Cys Arg Ala Gly Pro Ala Thr
1 5 10 15
Asp Pro Ala Ile Val Arg Ala Tyr Lys Lys Asp Asp Lys Val Ser Ile
20 25 30
Ala Arg Gln Thr Gln Gly Pro Asp Ile Asn Gly Gly Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ala Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Phe Val
50 55 60
<210> 192
<211> 73
<212> PRT
<213> 罗伯茨绿僵菌
<400> 192
Phe Pro Val Thr Ala Asp Ser Leu Asn Cys Arg Ala Glu Pro Asn Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Val Lys Lys Thr Tyr Lys Lys Thr Asp Asp Val Lys Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Glu Gly Pro Ser Ile Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Ile Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Thr Gly Lys Cys
65 70
<210> 193
<211> 73
<212> PRT
<213> 罗伯茨绿僵菌
<400> 193
Tyr Ala Ile Glu Ala Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Asp Lys Val Val Arg Thr Tyr Asn Lys Gly Asn Asp Val Lys Leu
20 25 30
Glu Cys Gln Thr Ala Gly Gln Ala Ile His Gly Asp Ser Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Asn Met Val Thr Gly Gln Cys
65 70
<210> 194
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 194
Tyr Pro Val Thr Ser Asp Asn Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gln Gly Asp Asn Val Glu Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Lys Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Lys Asp Gly Tyr Val Lys Gly Lys Cys
65 70
<210> 195
<211> 69
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 195
Asp Glu Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser His Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Thr Lys Gly Thr Asp Val Thr Ile Thr Cys Gln Ile
20 25 30
Glu Gly Thr Asn Ile Glu Gly Asn Ala Leu Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Ser Lys Cys
65
<210> 196
<211> 73
<212> PRT
<213> 土生梭孢壳霉
<400> 196
Tyr Pro Val Lys Ala Asp Thr Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Ile Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Thr Asp Leu Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Pro Gly Thr Ser Val Asn Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Gly Tyr Val Thr Ala His Cys
65 70
<210> 197
<211> 73
<212> PRT
<213> 土生梭孢壳霉
<400> 197
Tyr Pro Ile Lys Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Thr Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Val Lys Ser Tyr Ala Lys Gly Val Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr His Gly Glu Ser Ile Asn Gly Asp Thr Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Asn Met Val Thr Gly Gln Cys
65 70
<210> 198
<211> 73
<212> PRT
<213> 阿氏丝孢酵母
<400> 198
Tyr Pro Ile Lys Thr Asp Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Asp Ile Lys Lys Thr Tyr Ser Ala Gly Asp Lys Val Thr Leu
20 25 30
Ser Cys Tyr Lys Thr Gly Thr Ser Val Glu Gly Asn Thr Tyr Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Gly Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Thr Thr Pro Val Val Ser Lys Cys
65 70
<210> 199
<211> 72
<212> PRT
<213> 阿氏丝孢酵母
<400> 199
Tyr Pro Val Lys Glu Thr Leu His Cys Arg Ser Ser Pro Ser Thr Ser
1 5 10 15
Gly Lys Ile Val Lys Asp Tyr Pro Lys Gly Thr Lys Ile Lys Leu Ser
20 25 30
Cys Tyr Ser Arg Gly Gln Ser Ile Gly Gly Asn Thr Ile Trp Asp Lys
35 40 45
Thr Thr Asp Gly Cys Phe Val Ala Asp Tyr Tyr Val Thr Thr Gly Thr
50 55 60
Thr Asn Pro Val Val Ala Ala Cys
65 70
<210> 200
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 200
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Asn Val Asn Cys Arg Glu Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Gly Tyr Glu Val Val Lys Thr Tyr His Lys Gly Asp Asp Val Lys Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ser Gly Glu Gly Val Leu Gly Asn Ser Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Gly Met Val Thr Lys Asp Cys
65 70
<210> 201
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 201
Tyr Pro Val Thr Ser Asp Asn Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gln Gly Asp Lys Val Glu Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Lys Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Lys Asp Gly Tyr Val Lys Gly Lys Cys
65 70
<210> 202
<211> 72
<212> PRT
<213> 阿氏丝孢酵母
<400> 202
Tyr Pro Val Lys Glu Gly Leu Asn Cys Arg Ser Glu Pro Asn Thr Gly
1 5 10 15
Gly Gly Ile Val Thr Ser Tyr Ala Ala Gly Thr Gln Val Thr Ile Thr
20 25 30
Cys Ala Thr His Gly Glu Ala Val Asn Gly His Asp Val Trp Asp Lys
35 40 45
Thr Thr Asp Gly Cys Phe Val Ser Asp Trp Tyr Val Ser Thr Gly Thr
50 55 60
Ala Glu Phe Val Ala Ser Glu Cys
65 70
<210> 203
<211> 73
<212> PRT
<213> 阿氏丝孢酵母
<400> 203
Tyr Pro Ile Lys Thr Asp Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Asp Ile Lys Lys Thr Tyr Ser Ala Gly Asp Lys Val Thr Leu
20 25 30
Ser Cys Tyr Lys Thr Gly Thr Ser Val Glu Gly Asn Thr Tyr Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Gly Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Thr Thr Pro Val Val Ser Lys Cys
65 70
<210> 204
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 204
Tyr Pro Val Thr Ser Asp Asn Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Thr Ile
20 25 30
Asn Cys Gln Thr Gln Gly Asp Asn Val Glu Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Lys Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Lys Asp Gly Tyr Val Lys Gly Lys Cys
65 70
<210> 205
<211> 69
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 205
Asp Glu Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser Asn Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Ala Lys Gly Thr Asp Val Ala Ile Thr Cys Gln Thr
20 25 30
Glu Gly Thr His Ile Lys Gly Asn Ala Leu Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Val Ser Asp Cys Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Ser Lys Cys
65
<210> 206
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 206
Tyr Pro Val Thr Ser Asp Asn Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gln Gly Asp Asn Val Glu Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Lys Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Lys Asp Gly Tyr Val Lys Gly Lys Cys
65 70
<210> 207
<211> 69
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 207
Asp Glu Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser His Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Thr Lys Gly Thr Asp Val Thr Ile Thr Cys Gln Ile
20 25 30
Glu Gly Thr Asn Ile Glu Gly Asn Ala Leu Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Ser Lys Cys
65
<210> 208
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 208
Tyr Pro Val Thr Ser Asp Asn Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gln Gly Asp Asn Val Glu Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Lys Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Lys Asp Gly Tyr Val Lys Gly Lys Cys
65 70
<210> 209
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 209
Tyr Pro Val Thr Ser Asp Asn Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gln Gly Asp Lys Val Glu Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Lys Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Lys Asp Gly Tyr Val Lys Gly Lys Cys
65 70
<210> 210
<211> 69
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 210
Asp Glu Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser Asn Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Ala Lys Gly Thr Asp Val Ala Ile Thr Cys Gln Thr
20 25 30
Glu Gly Thr His Ile Lys Gly Asn Val Pro Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Ser Lys Cys
65
<210> 211
<211> 69
<212> PRT
<213> 串珠状赤霉
<400> 211
Asp Glu Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser His Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Thr Lys Gly Thr Asp Gly Thr Ile Thr Tyr Gln Thr
20 25 30
Glu Gly Thr Asn Ile Glu Gly Asn Thr Leu Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Phe Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Ser Lys Cys
65
<210> 212
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 212
Tyr Pro Val Thr Ser Asp Asn Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gln Gly Asp Asn Val Glu Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Lys Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Lys Asp Gly Tyr Val Lys Asp Lys Cys
65 70
<210> 213
<211> 69
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 213
Asp Glu Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser His Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Thr Lys Gly Thr Asp Val Thr Ile Thr Cys Gln Ile
20 25 30
Glu Gly Thr Asn Ile Glu Gly Asn Ala Leu Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Ser Lys Cys
65
<210> 214
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 214
Tyr Pro Val Thr Ser Asp Asn Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gln Gly Asp Asn Val Glu Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Lys Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Lys Asp Gly Tyr Val Lys Gly Lys Cys
65 70
<210> 215
<211> 69
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 215
Asp Glu Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser His Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Thr Lys Gly Thr Asp Val Thr Ile Thr Cys Gln Ile
20 25 30
Glu Gly Thr Asn Ile Glu Gly Asn Ala Leu Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Ser Lys Cys
65
<210> 216
<211> 73
<212> PRT
<213> 草酸青霉菌
<400> 216
Tyr Pro Val Lys Thr Asp Gly Leu His Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ser Ile Val Lys Thr Tyr Asn Thr Gly Thr Asp Leu Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Pro Gly Pro Val Ile Asn Gly Asp Glu Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Gly Tyr Val Ala Pro His Cys
65 70
<210> 217
<211> 73
<212> PRT
<213> 草酸青霉菌
<400> 217
Tyr Pro Val Lys Thr Asp Asp Leu His Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asn Tyr Ala Val Val Lys Ser Tyr Lys Ile Gly Thr Asp Leu Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Ala Pro Gly Thr Val Val Ser Gly Asp Glu Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Gly Tyr Val Thr Lys Gln Cys
65 70
<210> 218
<211> 69
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 218
Asp Glu Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser Asn Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Ala Lys Gly Thr Asp Val Ala Ile Thr Cys Gln Thr
20 25 30
Glu Gly Thr His Ile Lys Gly Asn Val Pro Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Lys Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Ser Lys Cys
65
<210> 219
<211> 69
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 219
Asp Glu Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser His Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Thr Lys Gly Thr Asp Val Thr Ile Thr Cys Gln Ile
20 25 30
Glu Gly Thr Asn Ile Glu Gly Asn Ala Leu Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Leu Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Ser Lys Cys
65
<210> 220
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 220
Tyr Pro Val Thr Ser Asp Asn Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Gly Phe Ala Ile Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Ile Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gln Gly Asp Asn Val Glu Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asn Gly Cys Tyr Val Ala Asp Lys Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Lys Asp Gly Tyr Val Lys Gly Lys Cys
65 70
<210> 221
<211> 69
<212> PRT
<213> 藤仓赤霉菌
<400> 221
Asp Glu Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser His Ala Ile
1 5 10 15
Gln Thr His Phe Val Lys Gly Thr Asp Val Thr Ile Thr Cys Gln Thr
20 25 30
Glu Gly Thr Tyr Ile Gly Gly Ser Thr Leu Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Ser Lys Cys
65
<210> 222
<211> 59
<212> PRT
<213> 娄地青霉
<400> 222
Tyr Pro Val Thr Gly Ser Val Ile Asp Cys His Ser Gly Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser His Ser Val Val Lys Thr Tyr Glu Glu Arg Ala Asp Ile Glu Ile
20 25 30
Val Cys Gln Ala Thr Gly Thr Thr Val Asp Gly Ser Asp Ile Trp His
35 40 45
Gln Thr Val Asp Asp Cys Tyr Val Ser Asp Phe
50 55
<210> 223
<211> 74
<212> PRT
<213> 烧土火丝菌
<400> 223
Tyr Pro Leu Val His Thr Asp Thr Leu Asn Cys Arg Ser Ser Pro Ser
1 5 10 15
Thr Ser Ser Ser Ile Thr Lys Thr Tyr Lys Lys Ser Asp Asp Ile Lys
20 25 30
Ile Thr Cys Gln Thr Tyr Gly Asp Thr Ile Lys Gly Asn Asn Ile Trp
35 40 45
Asp Lys Thr Pro Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr
50 55 60
Gly Lys Ser Gly Phe Val Val Gly Lys Cys
65 70
<210> 224
<211> 72
<212> PRT
<213> 烧土火丝菌
<400> 224
Tyr Pro Ala Lys Glu Thr Leu Arg Cys Arg Thr Ser Pro Ser Thr Ser
1 5 10 15
Ala Ser Ile His Lys Thr Tyr Pro Ala Gly Ala Asp Ile Lys Ile Thr
20 25 30
Cys Gln Thr Thr Gly Thr Lys Val Leu Thr Ser Asn Val Trp Asp Lys
35 40 45
Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ser Thr Gly His
50 55 60
Ser Gly Ile Phe Leu Ser Lys Cys
65 70
<210> 225
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 225
Phe Pro Ile Thr Gly Asn Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asp Phe Ser Ile Lys Gln Thr Tyr Ala Lys Gly Glu Ala Val Ala Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ser Gly Thr Lys Ile Asn Gly Asn Asp Ile Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Thr Asp Phe Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ile Ser Tyr Val Leu Pro Lys Cys
65 70
<210> 226
<211> 68
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 226
Asp Lys Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser His Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Thr Lys Gly Thr Asp Val Thr Ile Thr Cys Gln Ile
20 25 30
Glu Gly Thr Asn Ile Glu Gly Asn Ala Leu Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Leu Lys
65
<210> 227
<211> 68
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 227
Asp Lys Gly Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Thr Thr Ser His Ala Ile
1 5 10 15
Gln Arg Gln Phe Thr Lys Gly Thr Asp Val Thr Ile Thr Cys Gln Ile
20 25 30
Glu Gly Thr Asn Ile Glu Gly Asn Ala Leu Trp Asp Lys Thr Thr Phe
35 40 45
Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Ala Thr Gly Ser Ser Gly Tyr
50 55 60
Val Thr Leu Lys
65
<210> 228
<211> 73
<212> PRT
<213> 产黄支顶孢菌
<400> 228
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Glu Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Ser Asp Ile Val Thr Ser Tyr Lys Lys Gly Asp Glu Val Gln Val
20 25 30
Thr Cys Gln Ile Asp Gly Glu Asp Ile Phe Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Gln Thr Glu Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Phe Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Ala Phe Val Thr Glu Ala Cys
65 70
<210> 229
<211> 73
<212> PRT
<213> 产黄支顶孢菌
<400> 229
Tyr Pro Ile Thr Ala Asp Asp Val Lys Cys Arg Ala Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser His Asp Ile Val Thr Ala Phe Ala Glu Gly His Glu Val Glu Leu
20 25 30
Glu Cys Gln Ile Val Gly Glu Asn Ile Phe Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Arg Thr Gly
50 55 60
Ser Asp Gly Met Val Val Asp Asn Cys
65 70
<210> 230
<211> 73
<212> PRT
<213> 产黄支顶孢菌
<400> 230
Tyr Pro Val Thr Ala Asp Ser Leu Asn Cys Arg Glu Gly Ala Gly Thr
1 5 10 15
Asp Thr Ala Val Val Thr Thr Tyr Thr Ala Gly Thr Asp Val Glu Val
20 25 30
Val Cys Gln Ala Glu Gly Glu Val Ile Glu Gly Ser Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Gln Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Val Tyr Val Asp Thr Gly
50 55 60
Ser Asp Gly Tyr Val Ala Asp Lys Cys
65 70
<210> 231
<211> 73
<212> PRT
<213> 金龟子绿僵菌
<400> 231
Tyr Ala Ile Glu Ala Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Asp Lys Val Val Arg Thr Tyr Asn Lys Gly Asn Asp Val Lys Leu
20 25 30
Glu Cys Gln Thr Ala Gly Gln Ala Ile His Gly Asp Ser Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Asn Met Val Thr Gly Gln Cys
65 70
<210> 232
<211> 73
<212> PRT
<213> 金龟子绿僵菌
<400> 232
Phe Pro Val Thr Ala Asp Ser Leu Asn Cys Arg Ala Glu Pro Asn Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ala Val Lys Lys Thr Tyr Lys Lys Thr Asp Asp Val Lys Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Glu Gly Pro Ser Ile Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Ile Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Thr Gly Lys Cys
65 70
<210> 233
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 233
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Tyr Val Asn Cys Arg Thr Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Phe Asp Ile Val Arg Ser Tyr Glu Leu Gly Asp Glu Val Asp Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Ile Ala Gly Glu Thr Val Thr Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Phe Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Phe Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Phe Gly Met Val Val Asp Glu Cys
65 70
<210> 234
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 234
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Tyr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Phe Asp Ile Val Arg Ser Tyr Glu Leu Gly Asp Glu Val Ser Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Ile Ala Gly Glu Thr Val Glu Gly Asp Tyr Leu Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Phe Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Val Gly Met Val Ala Glu Glu Cys
65 70
<210> 235
<211> 74
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 235
Tyr Pro Ile Ser Gly Asp Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ala Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Ile Lys Thr Tyr Ala Lys Gly His Asp Val Lys Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Val Gly Glu Thr Val Lys Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ala Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Arg Val Val Lys Thr Glu Cys
65 70
<210> 236
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 236
Val Thr Ser Pro Thr Thr Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Gln
1 5 10 15
Tyr Lys Ile Val Lys Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Arg Glu Cys Tyr Ser
20 25 30
Cys Tyr Glu Ser Gly Thr Cys Ile Asn Gly Asn Cys Ser Trp Asp Tyr
35 40 45
Asn Tyr Met Asp Asn Cys Tyr Ile Ser Gly Tyr Tyr Thr Gly Ser Ala
50 55 60
Cys Thr Thr Ala Ala Leu Gly Lys Cys
65 70
<210> 237
<211> 74
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 237
Tyr Pro Ile Ser Gly Thr Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ala Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Ile Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Val Gly Glu Thr Val Ser Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Arg Val Val Lys Thr Glu Cys
65 70
<210> 238
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 238
Tyr Pro Ile Lys Gly Ser Val Val Asn Cys Arg Ala Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asn Phe Pro Ile Val Lys Thr Phe Lys Lys Gly Asp Thr Val Asp Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Pro Gly Thr Ser Ile Ser Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Leu Ile Pro Asp Asn Cys Phe Ile Thr Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Gly Lys Tyr Ile Lys Pro Arg Cys
65 70
<210> 239
<211> 64
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 239
Val Thr Asn Pro Thr Thr Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Gln
1 5 10 15
Tyr Arg Ile Val Lys Thr Tyr Arg Ala Gly Asp Arg Glu Cys Tyr Ser
20 25 30
Cys Tyr Glu Ser Gly Thr Cys Ile Asn Gly Asn Cys Ser Trp Asp Tyr
35 40 45
Asn Tyr Met Asp Asn Cys Tyr Ile Ser Gly Tyr Tyr Thr Asp Ser Gly
50 55 60
<210> 240
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 240
Val Thr Ser Pro Thr Thr Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Gln
1 5 10 15
Tyr Lys Ile Val Lys Thr Tyr Pro Ala Ser Gly Arg Glu Cys Tyr Ser
20 25 30
Cys Tyr Glu Ser Gly Thr Cys Ile Asn Gly Asn Cys Ser Trp Asp Tyr
35 40 45
Asn Tyr Met Asp Asn Cys Tyr Ile Ser Gly Tyr Tyr Thr Gly Ser Ala
50 55 60
Cys Thr Thr Ala Ala Leu Gly Lys Cys
65 70
<210> 241
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 241
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asp Phe Pro Ile Lys Lys Thr Phe Ala Lys Gly Ser Ile Val Ser Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Pro Gly Thr Lys Ile Asn Gly Asn Glu Ile Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Ser Asp Gly Cys Phe Val Ser Asp Phe Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ile Thr Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 242
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 242
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Lys Phe Asp Val Val Arg Ser Tyr Val Leu Gly Asp Glu Val Thr Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Ile Ala Gly Glu Thr Val Thr Gly Asp Tyr Leu Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Phe Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Val Gly Met Val Thr Glu Ala Cys
65 70
<210> 243
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 243
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Tyr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Asp Ile Ile Arg Ser Tyr Glu Leu Gly Asp Glu Val Asp Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Ile Ala Gly Glu Thr Val Thr Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Phe Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Phe Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Phe Gly Met Val Val Asp Glu Cys
65 70
<210> 244
<211> 74
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 244
Tyr Pro Ile Ser Gly Asp Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ala Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Ile Lys Thr Tyr Ala Lys Gly His Asp Val Lys Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Val Gly Glu Thr Val Lys Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ala Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Arg Val Val Lys Thr Glu Cys
65 70
<210> 245
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 245
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Tyr Val Asn Cys Arg Thr Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Phe Asp Ile Val Arg Ser Tyr Glu Leu Gly Asp Glu Val Asp Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Ile Ala Gly Glu Thr Val Thr Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Phe Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Phe Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Phe Gly Met Val Val Asp Glu Cys
65 70
<210> 246
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 246
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Tyr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Phe Asp Ile Val Arg Ser Tyr Glu Leu Gly Asp Glu Val Ser Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Ile Ala Gly Glu Thr Val Glu Gly Asp Tyr Leu Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Phe Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Val Gly Met Val Ala Glu Glu Cys
65 70
<210> 247
<211> 72
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 247
Tyr Pro Ile Ser Gly Asp Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ala Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Ile Lys Thr Tyr Leu Lys Gly His Asp Val Asp Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Val Gly Glu Thr Val Lys Gly Asp Ser Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Arg Val Val Lys Lys
65 70
<210> 248
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 248
Tyr Pro Ile Lys Gly Ser Val Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asn Phe Ala Ile Val Lys Thr Phe Lys Lys Gly Asp Thr Val Asp Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Pro Gly Thr Ser Ile Ser Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Pro Asp Asn Cys Phe Ile Thr Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Gly Lys Tyr Ile Lys Pro Arg Cys
65 70
<210> 249
<211> 67
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 249
Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Gly Tyr Ser Val Ile Ala Thr Val Lys
1 5 10 15
Lys Gly Ser Tyr Tyr Ser Phe Gly Cys Tyr Lys Thr Gly Thr Cys Val
20 25 30
Ser Gly Asn Cys Thr Trp Asp Arg Ile Phe Trp Asp Gly Lys Ser Cys
35 40 45
Tyr Val Ser Gly Tyr Tyr Thr Asp Ser Ala Cys Ser Ala Ser Ala Leu
50 55 60
Gly Lys Cys
65
<210> 250
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 250
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Phe Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Lys Phe Asp Val Val Arg Ser Tyr Val Leu Gly Asp Glu Val Thr Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Ile Ala Gly Glu Thr Val Thr Gly Asp Tyr Leu Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Phe Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Val Gly Met Val Thr Glu Ala Cys
65 70
<210> 251
<211> 67
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 251
Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Gly Tyr Ser Val Ile Ala Thr Val Lys
1 5 10 15
Lys Gly Ser Tyr Tyr Ser Phe Gly Cys Tyr Lys Thr Gly Thr Cys Val
20 25 30
Ser Gly Asn Cys Thr Trp Asp Arg Ile Phe Trp Asp Gly Lys Ser Cys
35 40 45
Tyr Val Ser Gly Tyr Tyr Thr Asp Ser Ala Cys Ser Ala Ser Ala Leu
50 55 60
Gly Lys Cys
65
<210> 252
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 252
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Lys Val Asn Cys Arg Thr Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Phe Glu Ile Ile Arg Ser Tyr Lys Leu Gly Asp Glu Val Ser Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Ile Ala Gly Glu Thr Val Gln Gly Asn Tyr Leu Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Phe Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asp Gly Met Val Thr Glu Gly Cys
65 70
<210> 253
<211> 73
<212> PRT
<213> 棒曲霉
<400> 253
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Val Lys Ser Tyr Pro Lys Gly His Gln Val Ser Ile
20 25 30
Val Cys Gln Ala Thr Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp Ser Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Tyr Val Thr Lys His Cys
65 70
<210> 254
<211> 73
<212> PRT
<213> 棒曲霉
<400> 254
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser His Ala Val Val Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Glu Asp Val Lys Ile
20 25 30
Val Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Lys Gly Glu Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Tyr Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 255
<211> 73
<212> PRT
<213> 费希新萨托菌
<400> 255
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Glu Val Asn Cys Arg Ala Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Asn Asp Lys Val Val Lys Ser Tyr His Lys Gly Asp Asp Val Lys Leu
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Tyr Gly Glu Asn Val Gln Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Phe Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Ser Met Val Thr Lys Glu Cys
65 70
<210> 256
<211> 73
<212> PRT
<213> 费希新萨托菌
<400> 256
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asn His Pro Val Val Lys Ser Tyr Pro Lys Gly His Asp Val Ser Ile
20 25 30
Val Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp Lys Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Thr Asp Tyr Val Thr Lys His Cys
65 70
<210> 257
<211> 73
<212> PRT
<213> 费希新萨托菌
<400> 257
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asn His Pro Val Val Lys Ser Tyr Pro Lys Gly His Asp Val Ser Ile
20 25 30
Val Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp Lys Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Asp Tyr Val Thr Lys His Cys
65 70
<210> 258
<211> 73
<212> PRT
<213> 土曲霉
<400> 258
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser His Ala Val Val Lys Ser Tyr Pro Lys Gly His Glu Ile Ser Ile
20 25 30
Val Cys Gln Ala Ala Gly Thr Asp Val Lys Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Thr Gly Tyr Val Thr Lys His Cys
65 70
<210> 259
<211> 64
<212> PRT
<213> 土曲霉
<400> 259
Cys Arg Thr Gly Pro Ser Thr Asn Asp Gly Ile Thr Lys Thr Tyr Lys
1 5 10 15
Lys Gly Asp Asp Val Lys Leu Ser Cys Gln Thr Tyr Gly Glu Ser Ile
20 25 30
Gln Gly Ser Thr Ile Trp Asp Lys Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala
35 40 45
Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly Thr Ser Gly Met Val Thr Gly Glu Cys
50 55 60
<210> 260
<211> 73
<212> PRT
<213> 土曲霉
<400> 260
Tyr Thr Ile Thr Ala Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Asn Lys Ser Val Lys Thr Tyr Ala Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Gln Ala Gly Glu Ser Ile Phe Gly Asn Ser Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Thr Gly Tyr Val Thr Asp Lys Cys
65 70
<210> 261
<211> 73
<212> PRT
<213> 球毛壳菌
<400> 261
Tyr Pro Ile Thr Gly Ser Val Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Gly Ala Asp Val Lys Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Ser Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Asn Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Asn Gly Tyr Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 262
<211> 73
<212> PRT
<213> 球毛壳菌
<400> 262
Tyr Pro Ile Thr Gly Ser Val Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Asn Lys Gly Ala Asp Val Thr Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Thr Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Asn Gly Tyr Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 263
<211> 73
<212> PRT
<213> 球毛壳菌
<400> 263
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Asp Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Asp Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Ser Val Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Ala Asp Val Lys Leu
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Tyr Gly Glu Ser Ile Asn Gly Asn Ala Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Ser Met Val Thr Lys Glu Cys
65 70
<210> 264
<211> 73
<212> PRT
<213> 烟新萨托菌
<400> 264
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Gly Val Asn Cys Arg Ala Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Asn Asp Lys Val Ile Lys Ser Tyr Ala Lys Gly Thr Asp Val Lys Leu
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Tyr Gly Glu Asn Ile Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Ser Met Val Thr Lys Glu Cys
65 70
<210> 265
<211> 73
<212> PRT
<213> 烟新萨托菌
<400> 265
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asn Tyr Pro Val Val Lys Ser Tyr Pro Lys Gly His Glu Val Ser Ile
20 25 30
Val Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Ile Lys Gly Asp Lys Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Tyr Val Thr Lys His Cys
65 70
<210> 266
<211> 73
<212> PRT
<213> 烟新萨托菌
<400> 266
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asn Tyr Pro Val Val Lys Ser Tyr Pro Lys Gly His Glu Val Ser Ile
20 25 30
Val Cys Gln Ala Pro Gly Thr Asp Ile Lys Gly Asp Lys Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Asn Tyr Val Ala Lys His Cys
65 70
<210> 267
<211> 73
<212> PRT
<213> 产黄青霉
<400> 267
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Thr His Ala Val Val Lys Ser Tyr Lys Lys Ala Gln Asp Val Thr Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ala Gly Glu Ser Ile Phe Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Gln Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Asn Tyr Val Thr Thr Lys Cys
65 70
<210> 268
<211> 73
<212> PRT
<213> 产黄青霉
<400> 268
Tyr Pro Ile Thr Ser Asp Gln Leu Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ser Val Val Lys Thr Tyr Lys Ser Gly Ala Asp Val Lys Val
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Tyr Gly Glu Ser Ile Asn Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Asn Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asp Ser Met Val Thr Glu Ser Cys
65 70
<210> 269
<211> 73
<212> PRT
<213> 赤球丛赤壳菌
<400> 269
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Asp Val Arg Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Ile Lys Lys Thr Phe Lys Lys Gly Thr Asn Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Thr Gly Thr Asn Ile Lys Gly Asn Asn Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Val Ser Glu Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Phe Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 270
<211> 73
<212> PRT
<213> 赤球丛赤壳菌
<400> 270
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Asp Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Val Leu Lys Lys Gly Thr Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Ile Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 271
<211> 73
<212> PRT
<213> 红褐肉座菌
<400> 271
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Val Val Asn Cys Arg Thr Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Ile Lys Thr Ser Tyr Lys Lys Ser His Asp Ile Ser Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Thr Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Asn Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ala Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Phe Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 272
<211> 73
<212> PRT
<213> 土生梭孢壳霉
<400> 272
Tyr Ala Ile Thr Gly Asp Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Asn Tyr Ala Val Lys Lys Thr Tyr Ala Lys Gly His Asp Val Thr Leu
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Ser Gly Thr Thr Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Ser Tyr Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 273
<211> 74
<212> PRT
<213> 异宗梭孢壳菌
<400> 273
Tyr Pro Val Thr Ala Asn Gly Gly Leu Ser Cys Arg Ser Gly Pro Gly
1 5 10 15
Thr Ser Tyr Pro Val Lys Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Phe Asp Ile Lys
20 25 30
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35 40 45
Asp Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr
50 55 60
Gly Lys Ser Gly Phe Val Thr Thr Lys Cys
65 70
<210> 274
<211> 73
<212> PRT
<213> 红褐肉座菌
<400> 274
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Phe Ala Ile Lys Lys Thr Tyr Lys Lys Ser Gln Asp Val Ser Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ser Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Tyr Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 275
<211> 73
<212> PRT
<213> 嗜热毛壳菌
<400> 275
Tyr Pro Ile Thr Gly Glu Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Ile Lys Ser Tyr Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Ile Lys Gly Glu Ser Ile Asn Gly Asn Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Ser Met Val Thr Lys Gln Cys
65 70
<210> 276
<211> 73
<212> PRT
<213> 嗜热毛壳菌
<400> 276
Tyr Lys Ile Thr Gly Asn Asn Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ser Val Lys Lys Thr Tyr Ala Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Thr Gly Thr Asn Ile Asn Gly Asn Asn Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Asn Gly Tyr Val Thr Thr Lys Cys
65 70
<210> 277
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 277
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Asp Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Val Leu Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Ile Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Ile Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 278
<211> 73
<212> PRT
<213> 异宗梭孢壳菌
<400> 278
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Asp Val Asn Cys Arg Thr Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Phe Lys Ser Val Lys Thr Tyr Pro Lys Gly Thr Asp Val Lys Leu
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Tyr Gly Glu Val Ile Phe Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Asn Met Val Thr Gly Glu Cys
65 70
<210> 279
<211> 74
<212> PRT
<213> 异宗梭孢壳菌
<400> 279
Tyr Pro Val Thr Ala Asn Gly Gly Leu Ser Cys Arg Ser Gly Pro Gly
1 5 10 15
Thr Ser Tyr Ala Val Lys Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Phe Asp Val Lys
20 25 30
Ile Ser Cys Gln Thr Thr Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Asn Ile Trp
35 40 45
Asp Lys Thr Gln Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr
50 55 60
Gly Lys Asn Gly Phe Val Thr Ser Lys Cys
65 70
<210> 280
<211> 73
<212> PRT
<213> 绿色肉座菌
<400> 280
Tyr Pro Ile Thr Gly Glu Ala Val Asn Cys Arg Thr Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Phe Ala Ile Lys Lys Thr Tyr Lys Lys Ser Gln Asp Val Ser Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ser Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Tyr Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 281
<211> 73
<212> PRT
<213> 罗伯茨绿僵菌
<400> 281
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
His Asp Lys Val Ile Lys Thr Tyr Asn Lys Gly Asn Asp Ile Lys Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Val Ala Gly Glu Thr Val Ser Gly Asn Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Gln Asp Gly Cys Phe Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Gly Met Val Thr Gly Gln Cys
65 70
<210> 282
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 282
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Asp Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Val Leu Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Ile Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Ile Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 283
<211> 73
<212> PRT
<213> 嗜热毛壳菌
<400> 283
Tyr Ala Ile Thr Gly Asp Asn Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Val Tyr Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Thr Thr Gly Thr Asn Ile Asn Gly Asn Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Gly Tyr Val Thr Ser Lys Cys
65 70
<210> 284
<211> 73
<212> PRT
<213> 土生梭孢壳霉
<400> 284
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser His Ala Val Lys Lys Val Tyr Ala Lys Gly Thr Asp Ile Lys Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Ser Ile Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Ser Tyr Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 285
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 285
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Asp Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Val Leu Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Ile Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 286
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 286
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Asp Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Glu Val Leu Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Ile Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Ile Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 287
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 287
Phe Pro Ile Thr Gly Asn Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ser Val Lys Arg Thr Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Ser Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Tyr Gly Thr Asn Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asp Glu Phe Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 288
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 288
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Asp Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Val Leu Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Ile Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Gly Tyr Ile Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 289
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 289
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Asp Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Val Leu Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Ile Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Ile Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 290
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 290
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Asp Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Val Leu Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Ile Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Ile Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 291
<211> 73
<212> PRT
<213> 尖孢镰孢菌
<400> 291
Tyr Pro Ile Thr Gly Asn Asp Val Lys Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Val Leu Lys Lys Gly Thr Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Ile Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Ile Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 292
<211> 73
<212> PRT
<213> 娄地青霉
<400> 292
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser His Thr Val Val Lys Thr Tyr Lys Lys Ala His Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Thr Gly Asp Ser Ile Ser Gly Asn Asn Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Ser Tyr Val Thr Ala Lys Cys
65 70
<210> 293
<211> 73
<212> PRT
<213> 娄地青霉
<400> 293
Tyr Ala Ile Thr Ala Ser Val Ala Asn Cys Arg Thr Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
Ser Asn Ala Val Val Thr Thr Tyr Lys Lys Gly Ala Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Tyr Gly Glu Asn Ile Gln Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Ser Met Val Thr Lys Asp Cys
65 70
<210> 294
<211> 73
<212> PRT
<213> 里氏木霉
<400> 294
Tyr Pro Ile Thr Gly Asp Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Phe Ala Ile Lys Lys Thr Tyr Lys Lys Ser Gln Asp Val Ser Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ser Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Tyr Val Thr Lys Lys Cys
65 70
<210> 295
<211> 73
<212> PRT
<213> 金龟子绿僵菌
<400> 295
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ser Thr
1 5 10 15
His Asp Lys Val Ile Lys Thr Tyr Asn Lys Gly Asn Asp Ile Lys Ile
20 25 30
Ser Cys Gln Val Ala Gly Glu Asn Val Ser Gly Asn Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Arg Asp Gly Cys Tyr Val Ser Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Gly Met Val Thr Gly Gln Cys
65 70
<210> 296
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 296
Tyr Pro Ile Thr Gly Ser Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Asp Ala Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Lys Glu Gly Pro Val Val Ser Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 297
<211> 72
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 297
Tyr Pro Ile Ser Gly Asp Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ala Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Ile Lys Thr Tyr Lys Lys Gly His Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Val Gly Glu Thr Ile Lys Gly Gly Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Thr Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Arg Val Val Lys Lys
65 70
<210> 298
<211> 72
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 298
Phe Pro Val Thr Ala Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Gly
1 5 10 15
Phe Ala Val Lys Lys Ser Tyr Thr Lys Gly His Ala Val Thr Ile Ser
20 25 30
Cys Gln Thr Gly Gly Thr Ser Val Gln Gly Asn Ser Ile Trp Asp Lys
35 40 45
Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly Ser
50 55 60
Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 299
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 299
Phe Pro Ile Thr Gly Asp Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Asn Lys Gly His Ser Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gly Gly Thr Ser Val Lys Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 300
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 300
Phe Pro Ile Thr Gly Asp Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Gly His Ser Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gly Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 301
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 301
Tyr Pro Ile Asn Ala Ala Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Asp His Ala Val Thr Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ala Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Asn Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 302
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 302
Tyr Pro Ile Asn Ala Ala Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Gly Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Asp His Ala Val Thr Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ala Gly Thr Thr Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Asn Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 303
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 303
Tyr Pro Ile Thr Gly Thr Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Thr Tyr Lys Lys Gly Asp Ala Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Lys Glu Gly Pro Val Ile Ser Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 304
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 304
Tyr Pro Ile Thr Gly Lys Thr Val Asn Cys Arg Ala Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Pro Val Lys Lys Thr Tyr Ser Lys Gly Asp Thr Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ser Gly Thr Lys Val Asn Gly Asn Ala Ile Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Leu Thr Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Ser Lys Tyr Ile Lys Pro Gln Cys
65 70
<210> 305
<211> 69
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 305
Tyr Pro Ile Ser Gly Thr Asp Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ala Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Val Lys Thr Tyr Lys Lys Gly His Asp Val Lys Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Val Gly Glu Thr Ile Lys Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Arg Val
65
<210> 306
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 306
Tyr Pro Ile Asn Thr Ala Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Asp His Ala Val Thr Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ala Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ala Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Asn Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 307
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 307
Tyr Pro Ile Asn Ala Ala Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Gly Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Asp His Ala Val Thr Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ala Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Asn Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 308
<211> 74
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 308
Tyr Pro Ile Ser Gly Thr Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Ala Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Lys Val Ile Lys Ala Tyr Lys Lys Gly Gln Asp Val Lys Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Val Gly Glu Thr Val Ser Gly Asp Asn Leu Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Thr Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Thr Thr Gly Arg Val Val Asn Ala Glu Cys
65 70
<210> 309
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 309
Phe Pro Ile Thr Gly Asp Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Gly His Ser Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gly Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 310
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 310
Phe Pro Ile Thr Gly Asp Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Gly His Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gly Gly Thr Ser Val Ser Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 311
<211> 64
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 311
Tyr Pro Ile Thr Gly Lys Thr Val Asn Cys Arg Ala Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Pro Val Lys Lys Thr Tyr Ser Lys Gly Asp Thr Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ser Gly Thr Lys Val Asn Gly Asn Ala Ile Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Leu Thr Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
<210> 312
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 312
Phe Pro Ile Thr Gly Asp Ser Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Gly His Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gly Gly Thr Ser Val Ser Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 313
<211> 72
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 313
Phe Pro Val Thr Glu Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Ser
1 5 10 15
Tyr Gly Val Lys Lys Ser Tyr Thr Lys Gly His Ala Val Thr Ile Ser
20 25 30
Cys Gln Thr Gly Gly Thr Ser Val Lys Gly Asn Ser Ile Trp Asp Lys
35 40 45
Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly Ser
50 55 60
Asn Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 314
<211> 72
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 314
Phe Pro Val Thr Ala Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr Gly
1 5 10 15
Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Thr Lys Gly Asn Ala Val Thr Ile Ser
20 25 30
Cys Gln Thr Gly Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp Lys
35 40 45
Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly Ser
50 55 60
Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 315
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 315
Tyr Pro Ile Asn Ala Ala Gly Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Asp His Ala Val Thr Val
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Ala Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ala Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Asn Thr Gly
50 55 60
Ser Asn Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 316
<211> 73
<212> PRT
<213> 高大假裸囊菌
<400> 316
Phe Pro Ile Thr Gly Ala Thr Val Asn Cys Arg Ser Gly Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Tyr Ala Val Lys Lys Ser Tyr Ala Lys Gly His Asp Val Thr Ile
20 25 30
Thr Cys Gln Thr Gly Gly Thr Ser Val Asn Gly Asn Ser Ile Trp Asp
35 40 45
Lys Thr Ser Asp Gly Cys Tyr Val Ala Asp Tyr Tyr Val Lys Thr Gly
50 55 60
Ser Ser Gly Tyr Val Lys Pro Lys Cys
65 70
<210> 317
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 317是保守基序I
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (3)..(3)
<223> 该保守基序的位置3处的氨基酸是异亮氨酸(I)或亮氨酸(L)。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> 该保守基序的位置6处的氨基酸是丙氨酸(A)或甘氨酸(G)。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> 该保守基序的位置7处的氨基酸是异亮氨酸(I)或亮氨酸(L)。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> 该保守基序的位置8处的氨基酸是苏氨酸(T)或缬氨酸(V)。
<400> 317
Ala Gly Xaa Ala Thr Xaa Xaa Xaa Glu Ser
1 5 10
<210> 318
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 318是保守基序II
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> 该保守基序的位置2处的氨基酸是丙氨酸(A)或甘氨酸(G)。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (3)..(3)
<223> 该保守基序的位置3处的氨基酸是任何氨基酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> 该保守基序的位置7处的氨基酸是任何氨基酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(10)
<223> 该保守基序的位置10处的氨基酸是任何氨基酸。
<400> 318
Val Xaa Xaa Leu Cys Gln Xaa Val Gln Xaa Ser Ala Tyr Pro
1 5 10
<210> 319
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 254是保守基序III
[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN].
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 该保守基序的位置1处的氨基酸是半胱氨酸、甘氨酸或酪氨酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> 该保守基序的位置2处的氨基酸是苯丙氨酸或酪氨酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (3)..(3)
<223> 该保守基序的位置3处的氨基酸是缬氨酸、异亮氨酸或亮氨酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> 该保守基序的位置4处的氨基酸是丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(5)
<223> 该保守基序的位置5处的氨基酸是天冬氨酸或甘氨酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> 该保守基序的位置6处的氨基酸是任何氨基酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> 该保守基序的位置7处的氨基酸是苯丙氨酸或酪氨酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> 该保守基序的位置8处的氨基酸是异亮氨酸、苏氨酸或缬氨酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> 该保守基序的位置8处的氨基酸是任何氨基酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(10)
<223> 该保守基序的位置10处的氨基酸是丝氨酸或苏氨酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> 该保守基序的位置11处的氨基酸是丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺。
<400> 319
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 320
<211> 10767
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 质粒pDAu770的合成DNA构建体。
<400> 320
taggcgtatc acgaggccct ttcgtctcgc gcgtttcggt gatgacggtg aaaacctctg 60
acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg ggagcagaca 120
agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggctggctta actatgcggc 180
atcagagcag attgtactga gagtgcacca tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt 240
aaggagaaaa taccgcatca ggcgccattc gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg 300
gcgatcggtg cgggcctctt cgctattacg ccagctggcg aaagggggat gtgctgcaag 360
gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag 420
tgaattggcc tccatggccg cggccgcgct ttgctaaaac tttggttgat ggaaggtatc 480
tggcgataaa ctccgacgac gtctagaagc aacaatctta tgcaaacgct cattggttct 540
tttcgaccgc aacatccatc atgaaactgg tattttgtct gtgtcagcag tctagaaccc 600
cttgccgggt attttagcat ttcatttttc tataaaaagg taccagcatg tatggatcgt 660
atcttccgta ccgtggttat taaatcccag cagaggccga taggcttaag aagtgaacat 720
ggcatggtta aggaagaagc cattactgag tatatatggc tagaataatc gctgggaaag 780
atttatgctt ccaagaggcg taggacggta taccatacag tacggtattt atgaacaatt 840
cgataatacc actccccaaa gcgggagata ggacacccgc ctcaggcacc aaccaccccc 900
tttttcaact gtcagtggtg cacgtttcca tcgagcataa gcttggtacc ctaaggatag 960
gccctaatct tatctacatg tgactgcatc gatgtgtttg gtcaaaatga ggcatgtggc 1020
tcaccccaca ggcggagaaa cgtgtggcta gtgcatgaca gtcccctcca tagattcaat 1080
ttaatttttc gcggcaattg tcgtgcagtt tgtatctaca tttcattcca tatatcaaga 1140
gttagtagtt ggacatcctg attattttgt ctaattactg aaaactcgaa gtactaacct 1200
actaataagc cagtttcaac cactaagtgc tcatttatac aatatttgca gaaccccgcg 1260
ctacccctcc atcgccaaca tgtcttccaa gtcgcaattg acctacagcg cacgcgctag 1320
caagcacccc aatgcgctcg taaagaagct cttcgaggtt gccgaggcca agaaaaccaa 1380
tgtcaccgtt tccgccgacg tgacaaccac caaagagctg ctggatttgg ctgaccgtat 1440
gcgcaccggg gttgaagttc ctattccgag ttcctattct tcaaatagta taggaacttc 1500
attagtttaa acgtacgatt ttgacatttg ctccattgtc gaggatggat ggaacgagcg 1560
gcgtgcgcca cgaaagtgag gctattgcct atcagctctt tgctacattc cggaaacaaa 1620
catccctttt tgtgaattat ctacgcaact tagatggcgt gaacgcatct tcaaagtctt 1680
tcggcaggtc cggcacgact tttgcatcca gagaagcgcc tacatgtgta ttcgaccacc 1740
tcctagcgcg cttggatatg aggaaatatt actgagagtc gaaaacaagc tccaccgcac 1800
cagctcttct tggagtttta tattaaagaa tattcccagc tcgttgtatt attctttttc 1860
taccgtgcta atgtatcaag gactttggta cctattaacg ttattattcg tgtgctattc 1920
ccaaacataa ccctgtatat gtttcgaacg ccgttatgac ccatgtctta catactcatt 1980
aagtcattcc cttggataat ctcgactcag atgcggcggt tgatgtagga ggagaggtaa 2040
tcgaggacct cctgggagat gatgccgttc caggcggggt agcggatgga gccctcggcg 2100
gagcccttga gctgctcgat atgctgccac tcctcgatgg ggttggtctc atccttgagg 2160
gcgatcatct ccttggagat gggatcgtag gcgtagtagc gggagactag tgcgaagtaa 2220
tgatcgggga tggcggtgat ctgatgggtg taggtggtgc gggcgacggc ggaggcgcgc 2280
ttatcggacc agttgccgac gacgttggtg agctcggtga ggcccttcat ggagaggaag 2340
gaggtcatga gatggcggcc gatatgggac ttggggccgt tcttgatggc gaagatggag 2400
tagggggcgt tcttcttgag ggccttgttg taggagcgga cgaggttatc cttgaggagc 2460
tggtactcct gcttgttgga ggaggagttg ccggtgcggt tgacgcgctt gaggacgggc 2520
tcggagttgc ggaggaactc atcgaggtag acgaggggat cgatgcggcc gcgggcggag 2580
aagaagtaga tatggcggga gacggaggtc ttggtctcgg tgacgaggca ctggatgatg 2640
acgccgaggt acttgttctg gacgagcttg aaggacttgg gatcgacgtt cttgatatcg 2700
gagaagcggc cgcagttgat gaaggtggcg aggaagagga actggtagag ggtcttggtc 2760
ttggtgaagc gggaggtgta ctcgaaggag ttgaggatct tctcggtgat ctcccagatg 2820
gactcgccct cggagaggag ggccttgagc atcttcttgg aatgggagtt gcccttatcg 2880
gcctcctcgg aggactcgaa ctggagctgg agggaggaga cgatatcggt gatatcggac 2940
tgatgcttct ggccgtagta ggggatgatg gtgaactccc aggcggggat gagcttcttg 3000
agggaggcct ccaggatggt ggccttctgg gtcttgtact tgaactggag ggacttgttg 3060
acgatatcga aggagaggga gttggagatg atggtgttgt aggacatgaa ggtggcgcgc 3120
ttgatggcgg tgccgttatg ggtgatcatc cagcagaggt aggtgagctc ggcggcgcag 3180
agggcgatct tctcgccgga ggggcgctcg aagcgctcga cgaactggcg gacgaggacc 3240
ttgggggggg tcttgcagag gatatcgaac tggggcatgg tgctcagata ctacggctga 3300
tcgcgtagag gtactgagca aaacagatgt cagtaaggag aagagttgaa tgaatggaag 3360
aagagtagga aaggaggtat gggggaaaga tatacgtact gatgcggacg aagagagaaa 3420
gaaggaaaaa agttgtggga ggggaaggag ggggaatcct tatatggagg ggcaagcgag 3480
aaggcgaatt agtgggcggg cttaagccct cgaccgccgc ccttatcatt ggacatggag 3540
gggtaatgcc cccaccacgc atgtgcggga ccgacgcaga atctgcacgg cggagtctct 3600
tccagactgt tgacttttgg gcgatgactc ttgttgctgc ggccttttgg gtacaccaac 3660
ctcgttgatc ttgtttcctt ggttctcttt cgctcggaga cccgaccatg accccaccat 3720
cagtcactat cctgcctcgt cgataaaaat tttttcttcc ctctgattgt tacatagtat 3780
gtttccacct ttccggtgga tttcggacag tcaaactggg catcaacgca gtggtgggct 3840
gcttcgtttg ctgcgtgttg tacttgtttg catttgaacc ccgcggtcgt tcgagtcctt 3900
aattggtccg ctcccggtca acacccaagc agctgtggcc cggccgagtg gcgcctgtct 3960
ggtccacagt taattaaagg agagagttga acctggacgc cgcgcaaaaa gcaaagacgc 4020
gcctcgtggg cggtggatca atgatcggat ttagtggcag atggcatcac aggcggccaa 4080
tgaccaccgg gccaactggc cccgacattc cagcaatact gcctaattga ctccaccatg 4140
catctcggct attattgaac tgggtttgat ggatggggac cctcttggaa ttgtcaaaga 4200
ttttgaagcg aagacgatct attggacggt agagatatac tcttgattta gtcgttggga 4260
ggcccctggg gaaagcaatg atggggaatg ttgctgctcc actgtggacc tcggctatgg 4320
aattacgtgc ttggatctaa gatgagctca tggctatgca ttgaatgaca gtgatatcag 4380
cagagcaagc agagaaggat ggaatgctaa ttttctagtg ctttgtgcaa gggtaaatca 4440
gggactgtct gtctggtctt ctacacgaag gaaagaccat ggctttcacg gtgtctgtat 4500
ttccggatat cctcaattcc gtcggtcgat tacaatcaca tgacttggct tccatttcac 4560
tactattatg cacacccact acatacatga tcatataacc aattgccctc atccccatcc 4620
tttaactata gcgaaatgga ttgattgtct accgccaggt gtcagtcacc ctctagatct 4680
cgagctcgct agagtcgacc tatggagtca ccacatttcc cagcaacttc cccacttcct 4740
ctgcaatcgc caacgtcctc tcttcactga gtctccgtcc gataacctgc actgcaaccg 4800
gtgccccatg gtacgcctcc ggatcatact cttcctgcac gagggcatca agctcactaa 4860
ccgccttgaa actctcattc ttcttatcga tgttcttatc cgcaaaggta accggaacaa 4920
ccacgctcgt gaaatccagc aggttgatca cagaggcata cccatagtac cggaactggt 4980
catgccgtac cgcagcggta ggcgtaatcg gcgcgatgat ggcgtccagt tccttcccgg 5040
ccttttcttc agcctcccgc catttctcaa ggtactccat ctggtaattc cacttctgga 5100
gatgcgtgtc ccagagctcg ttcatgttaa cagctttgat gttcgggttc agtaggtctt 5160
tgatatttgg aatcgccggc tcgccggatg cactgatatc gcgcattacg tcggcgctgc 5220
cgtcagccgc gtagatatgg gagatgagat cgtggccgaa atcgtgcttg tatggcgtcc 5280
acggggtcac ggtgtgaccg gctttggcga gtgcggcgac ggtggtttcc acgccgcgca 5340
ggataggagg gtgtggaagg acattgccgt cgaagttgta gtagccgata ttgagcccgc 5400
cgttcttgat cttggaggca ataatgtccg actcggactg gcgccagggc atggggatga 5460
ccttggagtc gtatttccat ggctcctgac cgaggacgga tttggtgaag aggcggaggt 5520
ctaacatact tcatcagtga ctgccggtct cgtatatagt ataaaaagca agaaaggagg 5580
acagtggagg cctggtatag agcaggaaaa gaaggaagag gcgaaggact caccctcaac 5640
agagtgcgta atcggcccga caacgctgtg caccgtctcc tgaccctcca tgctgttcgc 5700
catctttgca tacggcagcc gcccatgact cggccttaga ccgtacagga agttgaacgc 5760
ggccggcact cgaatcgagc caccgatatc cgttcctaca ccgatgacgc caccacgaat 5820
cccaacgatc gcaccctcac caccagaact gccgccgcac gaccagttct tgttgcgtgg 5880
gttgacggtg cgcccgatga tgttgttgac tgtctcgcag accatcaggg tctgcgggac 5940
agaggtcttg acgtagaaga cggcaccggc tttgcggagc atggttgtca gaaccgagtc 6000
cccttcgtcg tacttgttta gccatgagat gtagcccatt gatgtttcgt agccctggtg 6060
gcatatgtta gctgacaaaa agggacatct aacgacttag gggcaacggt gtaccttgac 6120
tcgaagctgg tctttgagag agatggggag gccatggagt ggaccaacgg gtctcttgtg 6180
ctttgcgtag tattcatcga gttcccttgc ctgcgcgaga gcggcgtcag ggaagaactc 6240
gtgggcgcag tttgtctgca cagaagccag cgtcagcttg atagtcccat aaggtggcgt 6300
tgttacatct ccctgagagg tagaggggac cctactaact gctgggcgat tgctgcccgt 6360
ttacagaatg ctagcgtaac ttccaccgag gtcaactctc cggccgccag cttggacaca 6420
agatctgcag cggaggcctc tgtgatcttc agttcggcct ctgaaaggat caccgatttc 6480
tttgggaaat caataacgct gtcttccgca ggcagcgtct ggactttcca ttcatcaggg 6540
atggtttttg cgaggcgggc gcgcttatca gcggccagtt cttcccagga ttgaggcatg 6600
tgcatgcaat gtgtgtttat gtggaagtaa gatacgacga gtttgattga gaaaagacag 6660
ggtgattgtc aagttcagta tggaagaaag agtagaagaa gatcagacga cagggaagag 6720
cgatgacata aaaggtggaa gacggaagaa aaacgaacca aatcaatccc actctatggc 6780
gggggttgga ctgcctgagg ccggcactgg tggggcttat cgataagttc tcgtcaccgg 6840
atgcaatgcg ctgtcaactg ctgacttggc cctgaacatc ctgtcctcta cagatccata 6900
ctatacaatg atcccagtta tagtgcggta aggtgcatat catatctcat tctcatgact 6960
cattcgactt ttttttagag aaagtacata cgtggaacat acactaaacg caacaggtcg 7020
cgacaacact ggtatacaaa acggtccccg gtgaatgacg ttattagtgt ctatccccca 7080
ctcacacccg aaaagaataa tagaaactaa cagaaaaagc ggcccgagga taagaggaac 7140
attcaaacag aaggggaatc ataaaaaccg aaaaatgcaa ggaaaagaga actcaaatca 7200
ataattttca taatactgtc gagagtaata cggaccagcg tctctcaggg acatgcgtcg 7260
gcgcaaggca tcatccaatc tctcatctaa cacatccagc attcgtgttc gatagtctaa 7320
ctgcttctct cggcgctcaa gtcttgcttc ccgatcatcg agttaattaa gaagttccta 7380
tactttctag agaataggaa ctcggaatag gaacttcaag gtaccgagct ctatcctcaa 7440
taccctattt tccacgattc cattgtcata tccaattccg ttttcttttc ttgttttccc 7500
ctcatccaat cccgtccatc atttactcct ttttcttgtg aatgcaagtg gcactaagaa 7560
atccaacccc cagacaaatt ttcctactca ggaacacaaa aacctcgttt ctgctccctt 7620
ctcgtacttc attcctatcg tctcggaatt tcctcaacaa ccctttccga ctttgcgaca 7680
gcgtcgcgat tccagactta tgtgttctcg ttcctactgt cgttaccagt ctatttattc 7740
cgaaacctct gatcgctgaa tttcacacac aacacccccc cgttgatgct ggtggagaat 7800
ccgtagcgtc aagagttgaa ttcactccat gttgtaacga agtccacgaa ttgagacgat 7860
tgatgattac aaccccgcga tcgcctatcg acgattcgac gagatgccat tctcatcctc 7920
ctcatcctcc tccacccccg aggtgtctac caccccgctc gcagattact tctggatcgc 7980
aggtgtcgat ggcgcggaaa tcttagagac tttccaaaga ctcggcgacg aatacagggc 8040
aaacagtgcc accgctcctg gccccgctct tgcggacacg atcgaggaag atgcggacgc 8100
ggaggaggca cacgaccccc gtctggactc cctctctcga cccaattcca tggctggggg 8160
ccgcaattcc ttccagcggt tctcaatgcg ctcaggagac tccagtgagt ccagtgggaa 8220
tggtaccagc agcaaccgga gcagtctgac catcaagggt aatcagtcgc ccagagggtc 8280
gtcgtttcta gaagatttcg actttgacaa ggccctgttc aagtttgcaa acgagcggga 8340
gtcgttcctg tcggatctga gtctcagtgc cggagcaatc actcccacct cccgtcctag 8400
gtccaggtta cgtacacaga agattgtctc cgaggaaagt ccctcccagc catccagctt 8460
gcttcgatca ggcattggta gtgtgcggcg tcatatggca ttcagagaca tgaatagtat 8520
gaaacggcag ccgtcagttg ctcgtcgcgg ccgcagcttg gcgtaatcat ggtcatagct 8580
gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat 8640
aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc 8700
actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg 8760
cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct 8820
gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt 8880
atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc 8940
caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga 9000
gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata 9060
ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac 9120
cggatacctg tccgcctttt tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg 9180
taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc 9240
cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag 9300
acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt 9360
aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaagaacagt 9420
atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg 9480
atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac 9540
gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca 9600
gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac 9660
ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac 9720
ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt 9780
tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt 9840
accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt 9900
atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc 9960
cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa 10020
tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg 10080
tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt 10140
gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc 10200
agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt 10260
aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg 10320
gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac 10380
tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc 10440
gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt 10500
tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg 10560
aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag 10620
catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa 10680
acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct aagaaaccat 10740
tattatcatg acattaacct ataaaaa 10767
<210> 321
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 321是正向引物KKSC0972-F。
<400> 321
ctatatacac aactggggat ccaccatgca gctctccctc ctcgt 45
<210> 322
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 322是反向引物KKSC0972-R。
<400> 322
tagagtcgac ccagccgcgc cggccattac aacccaccag cctggc 46
<210> 323
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 323是正向引物F1。
<400> 323
gaattcgagc tcggtacctt gaagttc 27
<210> 324
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 324是反向引物F1。
<400> 324
ggtggatccc cagttgtgta tatagaggat t 31
<210> 325
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 325是正向引物F3。
<400> 325
tgcgcggcgc ggctgggtcg actcta 26
<210> 326
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 326是反向引物F3。
<400> 326
ttcacacagg aaacagctat gaccatg 27
<210> 327
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 327,正向结合引物。
<400> 327
ctatatacac aactggggat ccacc 25
<210> 328
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 328,反向结合引物。
<400> 328
tagagtcgac ccagccgcgc cggcca 26
<210> 329
<211> 146
<212> PRT
<213> Ovatospora brasiliensis
<400> 329
Gly Gly Lys Gly Asn Leu Pro Gly Leu Asn Ala Lys Gln Ser Ser His
1 5 10 15
Ala Arg Ala Ile Val Ala Gln Ala Lys Lys Asp Gly Val Gly Leu His
20 25 30
Gly Cys Glu Ala Gly Ile Ala Thr Ala Leu Val Glu Ser Gly Ile Lys
35 40 45
Val Tyr Ala Asn Lys Lys Val Pro Ala Ser Leu Lys Tyr Pro His Asp
50 55 60
Ala Val Gly Ser Asp His Asp Ser Ile Gly Ile Phe Gln Gln Arg Ala
65 70 75 80
Val Tyr Tyr Pro Asn Ile Ala Ala Asp Met Asp Pro Ala Arg Ser Ala
85 90 95
His Gln Phe Phe Ala Lys Met Lys Gly Val Ser Gly Trp Lys Thr Met
100 105 110
Ala Val Gly Lys Leu Cys Gln Lys Val Gln Val Ser Ala Tyr Pro Asp
115 120 125
Arg Tyr Ala Lys Arg Val Ser Glu Ala Thr Lys Ile Cys Lys Ala Ala
130 135 140
Gly Ile
145

Claims (84)

1.一种组合物,该组合物包含一种或多种具有溶菌酶活性的 LYS 多肽,其中将该多肽以至少 0.01 mg 多肽/千克组合物给予,其中该多肽选自由以下组成的组:
(a) 与 SEQ ID NO: 3 的多肽具有至少100%序列同一性的多肽;
(b) 多肽,该多肽为 (a)的多肽以及 N-末端和/或 C-末端 His-标签和/或 HQ-标签。
2. 如权利要求1所述的组合物,其中该 LYS 多肽包含一个或多个LAD催化结构域;其中,当使用SEQ ID NO: 46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型(ProfileHidden Markov Model,HMM)查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为180。
3. 如权利要求1所述的组合物,其中该 LYS 多肽包含一个或多个选自由以下组成的组的基序:
a) 基序 I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO: 317);
b) 基序 II :V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO: 318);以及
c) 基序 III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO: 319)。
4. 如权利要求 1 所述的组合物,该多肽进一步包含一个或多个溶菌酶增强结构域,其中当使用SEQ ID NO: 188至316和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型查询时,该溶菌酶增强结构域的domT评分至少为100,并且其中使用hmmscan软件程序执行该查询。
5.如权利要求 1所述的组合物,其中该多肽获得自或可获得自分类学子囊菌门。
6.如权利要求5所述的组合物,其中该多肽获得自或可获得自分类学盘菌亚门。
7.如权利要求6所述的组合物, 其中该多肽获得自或可获得自简青霉。
8.如权利要求 1所述的组合物,其中该多肽为 SEQ ID NO: 3的氨基酸 1 至 226。
9.如权利要求 1 至 8 中任一项所述的组合物,该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
10.如权利要求 9所述的组合物,其中该一种或多种配制剂选自由以下组成的组:
甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或 1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐和纤维素;或其任何组合。
11.如权利要求 10所述的组合物,其中该一种或多种配制剂选自由以下组成的组:麦芽糊精 或环糊精。
12. 如权利要求 1 至 8 中任一项所述的组合物,该组合物进一步包含一种或多种另外的酶。
13. 如权利要求 12 所述的组合物,其中该一种或多种另外的酶选自由以下组成的组:乙酰木聚糖酯酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、脂肪酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、植酸酶、磷脂酶 A1、磷脂酶 A2、磷脂酶 C、磷脂酶 D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
14. 如权利要求 13 所述的组合物,其中该一种或多种另外的酶选自由以下组成的组:纤维二糖水解酶、β-葡糖苷酶 或果胶裂解酶。
15. 如权利要求 1 至 8 中任一项所述的组合物,该组合物进一步包含一种或多种微生物。
16. 如权利要求 15 所述的组合物,其中该一种或多种微生物选自由以下组成的组:双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、梭菌属物种、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、巨型球菌属物种、片球菌属物种、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种;或其任何组合。
17. 如权利要求15所述的组合物,其中该一种或多种微生物选自由以下组成的组:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、丁酸梭菌、屎肠球菌、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、埃氏巨型球菌、乳酸片球菌、和特氏丙酸杆菌; 或其任何组合。
18. 如权利要求 1 至 8 中任一项所述的组合物,该组合物进一步包含选自以下列表的一种或多种组分,该列表由以下组成:
一种或多种维生素;
一种或多种矿物质;
一种或多种氨基酸;
一种或多种植生素;
一种或多种益生元;
一种或多种有机酸;以及
一种或多种其他饲料成分。
19. 一种颗粒,该颗粒包含如权利要求 1 至 18中任一项所述的组合物。
20. 如权利要求 19 所述的颗粒,其中将该颗粒进行包衣。
21. 如权利要求 20 所述的颗粒,其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
22. 一种动物饲料添加剂,该动物饲料添加剂包含如权利要求 1 至 18 中任一项所述的组合物或如权利要求 19至 21中任一项所述的颗粒。
23. 一种动物饲料,该动物饲料包含植物基材料和如权利要求 1 至 18 中任一项所述的组合物、如权利要求 19 至 21中任一项所述的颗粒或如权利要求22 所述的动物饲料添加剂。
24. 如权利要求 23 所述的动物饲料,其中该植物基材料选自由以下组成的组:豆类、谷类,处于其加工形式或其任何组合。
25. 如权利要求 24所述的动物饲料,其中该植物基材料选自由以下组成的组:粟或豆,处于其加工形式或其任何组合。
26. 如权利要求 23 所述的动物饲料,其中该植物基材料选自由以下组成的组:燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、高粱、柳枝稷、珍珠粟、谷子、大豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、卡诺拉、油菜、稻、甜菜、卷心菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式或其任何组合。
27.如权利要求26所述的动物饲料,其中该植物基材料选自由以下组成的组:野生大豆、西班牙花生、或糖甜菜,处于其加工形式或其任何组合。
28.如权利要求26所述的动物饲料,其中该植物基材料为豆粕、油菜籽粕,或其任何组合。
29. 一种丸粒状动物饲料,该丸粒状动物饲料包含植物基材料和如权利要求 1 至 18中任一项所述的组合物、如权利要求 19 至 21 中任一项所述的颗粒或如权利要求 22 所述的动物饲料添加剂。
30.如权利要求29所述的丸粒状动物饲料,其中该植物基材料选自由以下组成的组:豆类、谷类,处于其加工形式或其任何组合。
31.如权利要求30所述的丸粒状动物饲料,其中该植物基材料选自由以下组成的组:粟或豆,处于其加工形式或其任何组合。
32.如权利要求29所述的丸粒状动物饲料,其中该植物基材料选自由以下组成的组:燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、高粱、柳枝稷、珍珠粟、谷子、大豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、卡诺拉、油菜、稻、甜菜、卷心菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式或其任何组合。
33.如权利要求32所述的丸粒状动物饲料,其中该植物基材料选自由以下组成的组:野生大豆、西班牙花生、或糖甜菜,处于其加工形式或其任何组合。
34.如权利要求32所述的丸粒状动物饲料,其中该植物基材料为豆粕、油菜籽粕,或其任何组合。
35.一种液体配制品,该液体配制品包含如权利要求 1 至 18 中任一项所述的组合物,其中将该 LYS 多肽以 0.01%至 25% w/w 之间的液体配制品给予。
36. 如权利要求35所述的液体配制品,其中将该 LYS 多肽以0.05%至 20% w/w 的LYS 多肽给予。
37. 如权利要求36所述的液体配制品, 其中将该LYS 多肽以0.2%至 15% w/w 的 LYS多肽给予。
38. 如权利要求37所述的液体配制品,其中将该LYS 多肽以0.5%至 15% w/w 的 LYS多肽给予。
39. 如权利要求38所述的液体配制品,其中将该LYS 多肽以1.0%至 10% w/w 的 LYS多肽给予。
40. 如权利要求35 所述的液体配制品,其中该配制品进一步包含20%至80% w/w的多元醇。
41. 如权利要求 40所述的液体配制品,其中该多元醇选自由以下组成的组:甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、平均分子量低于600 的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于600 的聚丙二醇(PPG)或其任何组合。
42. 如权利要求41所述的液体配制品,其中该多元醇选自由以下组成的组:1,2-丙二醇或 1,3-丙二醇。
43.如权利要求40所述的液体配制品,其中该多元醇选自二丙二醇。
44. 如权利要求35 至 43中任一项所述的液体配制品,其中该配制品进一步包含0.01%至 2.0% w/w 的防腐剂。
45.如权利要求44所述的液体配制品,其中该防腐剂选自由以下组成的组:山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
46. 如权利要求 35至43 中任一项所述的液体配制品,该液体配制品进一步包含选自以下列表的一种或多种组分,该列表由以下组成:
一种或多种酶;
一种或多种微生物;
一种或多种维生素;
一种或多种矿物质;
一种或多种氨基酸;
一种或多种植生素;
一种或多种益生元;
一种或多种有机酸;以及
一种或多种其他饲料成分。
47. 一种制备动物饲料的方法,该方法包括将如权利要求35 至 46 中任一项所述的液体配制品施加到植物基材料上。
48. 如权利要求 47所述的方法,其中该液体配制品通过喷雾施加。
49. 如权利要求 47所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:豆类、谷类,处于其加工形式或其任何组合。
50. 如权利要求 49 所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:粟或豆,处于其加工形式或其任何组合。
51. 如权利要求 47 所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、高粱、柳枝稷、珍珠粟、谷子、大豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、卡诺拉、油菜、稻、甜菜、卷心菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式或其任何组合。
52. 如权利要求 51 所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:野生大豆、西班牙花生或糖甜菜,处于其加工形式或其任何组合。
53.如权利要求51所述的方法,其中该植物基材料为豆粕、油菜籽粕,或其任何组合。
54. 如权利要求 47 至 53 中任一项所述的方法,其中该植物基材料处于丸粒状形式。
55. 一种使用如权利要求 47至54 中任一项所述的方法制备的丸粒状动物饲料。
56. 一种改善动物的一个或多个性能参数的方法,该方法包括向一种或多种动物施用如权利要求 1 至 18中任一项所述的组合物,其中所述方法不属于疾病的诊断和治疗方法。
57. 一种制备动物饲料的方法,该方法包括将如权利要求 1 至 18 中任一项所述的组合物与植物基材料混合。
58. 如权利要求 57 所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:豆类、谷类,处于其加工形式或其任何组合。
59. 如权利要求 58 所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:粟或豆,处于其加工形式或其任何组合。
60. 如权利要求 57 所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、高粱、柳枝稷、珍珠粟、谷子、大豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆、利马豆、法国菜豆、蚕豆、鹰嘴豆、小扁豆、花生、卡诺拉、油菜、稻、甜菜、卷心菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆,处于其加工形式或其任何组合。
61. 如权利要求 60 所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:野生大豆、西班牙花生、糖甜菜,处于其加工形式或其任何组合。
62. 如权利要求 60 所述的方法,其中该植物基材料选自由以下组成的组:豆粕、油菜籽粕或其任何组合。
63. 如权利要求 1 至 18 中任一项所述的组合物的用途,该用途:
在动物饲料中;
在动物饲料添加剂中;和/或
用于改善动物中的一个或多个性能参数,其不属于疾病的诊断和治疗方法。
64. 如权利要求 1 至 18 中任一项所述的组合物的用途,该用途:
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中。
65.如权利要求 1 至 18 中任一项所述的组合物的用途,该用途:
用于改善动物饲料的营养价值。
66.如权利要求 1 至 18 中任一项所述的组合物的用途,该用途:
用于提高动物饲料的消化率。
67.一种具有溶菌酶活性的分离的多肽,该分离的多肽选自由以下组成的组:
(a)与 SEQ ID NO: 3 的多肽具有100%序列同一性的多肽;
(b)多肽,该多肽为 (a)的多肽以及 N-末端和/或 C-末端 His-标签和/或 HQ-标签。
68.如权利要求67所述的多肽,其中该 LYS 多肽包含一个或多个LAD催化结构域;其中,当使用SEQ ID NO: 46至187和hmmbuild软件程序制备的序型隐马尔可夫模型(ProfileHidden Markov Model,HMM)查询时,该LAD催化结构域的domT评分至少为180。
69. 如权利要求67所述的多肽,其中该 LYS 多肽包含一个或多个选自由以下组成的组的基序:
(a)基序 I:AG[I/L]AT[A/G][I/L][T/V]ES(SEQ ID NO: 317);
(b)基序 II V[G/A]XLCQXVQXSAYP(SEQ ID NO: 318);以及
(c)基序 III:[CGY][YF][VIL][ASTP][DG]X[YF][VIT]X[TS][GAN](SEQ ID NO: 319)。
70.如权利要求 67 所述的多肽,其中该多肽为 SEQ ID NO: 3 的氨基酸 1 至 226。
71. 一种编码如权利要求67 至70任一项所述的多肽的多核苷酸。
72. 一种核酸构建体或表达载体,该核酸构建体或表达载体包含如权利要求71 所述的多核苷酸,该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。
73. 一种重组宿主细胞,该重组宿主细胞包含如权利要求 71 所述的多核苷酸,该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
74. 如权利要求 73 所述的重组宿主细胞,其中该宿主是丝状真菌或酵母。
75.如权利要求74所述的重组宿主细胞,其中所述宿主细胞是曲霉属、木霉属或镰胞属。
76.如权利要求74所述的重组宿主细胞,其中所述宿主细胞是毕赤酵母属或酵母属。
77. 如权利要求 75 所述的重组宿主细胞,其中该宿主是泡盛曲霉、臭曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉或米曲霉。
78. 如权利要求 75所述的重组宿主细胞,其中该宿主是哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉或绿色木霉。
79. 如权利要求 73 所述的重组宿主细胞,其中该宿主是芽孢杆菌属。
80. 如权利要求 79 所述的重组宿主细胞,其中该宿主是嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、嗜热脂肪土芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、或苏云金芽孢杆菌。
81. 一种产生如权利要求67 至70任一项所述的多肽的方法,该方法包括:
(a) 在有益于产生该多肽的条件下培养细胞,该细胞以其野生型形式产生该多肽;和
(b) 回收该多肽。
82. 一种产生如权利要求 67 至70任一项所述的多肽的方法,该方法包括:
在有益于产生该多肽的条件下培养如权利要求73 至80中任一项所述的重组宿主细胞;和
回收该多肽。
83.一种用编码如权利要求67 至70任一项所述的多肽的多核苷酸转化的转基因植物部分或植物细胞,其不属于植物品种。
84. 一种全液配制品或细胞培养组合物,该全液配制品或细胞培养组合物包含如权利要求 67 至70任一项 所述的多肽。
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