CN110590638B - 肿瘤靶向他汀类衍生物、药物配方及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及肿瘤靶向他汀类衍生物(THSD)，以及其在治疗、尤其是癌症治疗中的用途。这些THSD中包括下列三个部分：一个他汀部分，其中包括一个二羟基庚酸单元(DHHA)，通过连接保持其开链结构；一个七甲川菁羰花青染料(HMCD)部分；一个将他汀部分中的DHHA连接到染料部分上的连接体。本发明还涉及向患者提供一种或多种治疗有效剂量的ELSD的给药方法，以及在协调给药机制中，ELSD和ALSD的共同给药方法。THSD及其用途的主要优点包括但不限于：能够提高疗效和剂量反应、减少他汀类药物的副作用。

Description

肿瘤靶向他汀类衍生物、药物配方及应用

技术领域

本发明主要涉及肿瘤靶向他汀类衍生物(THSD)，以及其在治疗、尤其是癌症治疗中的用途。

背景技术

当前已经发现了很多的癌症治疗药物，并被用在各种标准治疗方法中，例如酪氨酸激酶抑制剂(TKI)和经典化疗药物。诸如吉非替尼和埃克替尼等很多TKI，以及诸如铂化合物及其衍生物、吉西他滨、阿霉素、紫杉醇和多烯紫杉醇等很多化疗药物都会产生严重的副作用以及/或者会形成耐药性。例如，铂化合物、以及其与其他药物组合后的综合疗法通常用于治疗晚期癌症或者转移癌，或者通常会发生转移的癌症。这些癌症的治疗方法非常有限，尤其是在晚期/转移之后。而且在使用特定的化疗药物治疗之后，这些癌症通常会产生耐药性。因此随之出现了很多将各种传统癌症药物组合在一起的治疗方案，例如各种化疗药物、以及化疗药物和具有特定抗癌功效的其他药物的组合。

他汀类物质属于HMG-CoA还原酶抑制剂类药物，具有降低胆固醇的功效，通常具有一定的副作用。多项研究结果表明他汀类物质具有潜在抗癌功效。在部分患者身上也观察到了积极的响应，尤其是在特定类型肿瘤的临床治疗中，将他汀类物质和传统化疗药物结合使用时。在其他研究中，报导了他汀类药物对癌症风险或者癌症治疗产生的不良效应，例如会增加癌症发病的风险、或者增加癌症复发的风险等。他汀类药物存在的具体问题还包括：其血浆循环时间较短、在肿瘤中的停留时间较短、以及在体内会快速失活等。

七甲川菁羰花青染料(HMCD)通常用于成像，例如在各种诊断过程中用于人体成像。其中部分染料可以同时用于癌症成像和癌症治疗。

在WO 2018/075996、WO 2018/075994和WO 2018/075993中披露了一些特殊的药物偶联HMCD染料(“DZ1”)，这些染料偶联在辛伐他汀或者容易产生耐药性的其他药物上，以便将药物输送到癌细胞中。这些药物释放偶联体能够再次敏化具有耐药性的癌细胞，可以与各种容易产生耐药性的化疗药物共同给药，其中包括但不限于酪氨酸激酶抑制剂(例如：吉非替尼和埃克替尼)、铂化合物、吉西他滨、紫杉醇、多烯紫杉醇、以及抗雄激素类药物恩杂鲁胺和阿比特龙。上述染料-药物偶联体中包括但不限于：染料通过烷基酯连接到辛伐他汀之上，并确保所连接的他汀部分能够形成内酯结构。这种酯类偶联体在后文中将称为“快速释放酯”或者“RRE”。

根据WO2018075996报导，特定的染料-辛伐他汀(NIR-SM)偶联体能够降低前列腺癌细胞中与侵略性相关的基因表达，进而导致与具有治疗/药物耐受性的肿瘤相关的表型反转(让细胞对之前给药的药物重新敏化，确保在再次给药之后，药物能够杀灭这些重新敏化的细胞)。例如，从烷基酯连接NIR-SM偶联体(后文简称为“RRE”)中释放出来的辛伐他汀能够让癌细胞重新敏化，确保能够再次成功进行恩杂鲁胺、阿比特龙、或者多烯紫杉醇等药物的重新给药。

在WO 2018/075994中报导了与顺铂、辛伐他汀、或者青蒿素连接的DZ-1药物偶联体，以及其为各种容易产生耐药性的化疗药物增敏的用途，这些化疗药物包括但不限于顺铂、吉西他滨、紫杉醇和多烯紫杉醇。

在WO 2018/075993中报导了DZ1-药物偶联体，以及其与诸如吉非替尼或埃克替尼等酪氨酸激酶抑制剂(TKI)结合使用，提高癌细胞对TKI治疗的灵敏性、克服TKI耐药性的用途。

使用TKI治疗的癌症包括侵袭性较强，且容易转移以及/或者产生耐药性的癌症。尽管如此，TKI疗法的一大问题是在治疗之后癌细胞很容易形成对TKI的耐药性。部分TKI存在的另一个问题是不能、或者不能有效治疗大脑，即使其体积相对较小(分子量：300-600)。可以用于治疗大脑的其他TKI具有多种副作用，只能对特定的患者群体使用。

尽管如此，依然需要不断改进癌症治疗药物和癌症治疗方法，包括提高其疗效。更加具体地讲，需要癌症治疗药物能够更加快速地抑制癌细胞生长/杀灭癌细胞，同时还需要避免形成耐药性。另外，还需要开发副作用更小的癌症治疗药物和治疗方法。除此之外，还需要开发剂量更小的癌症治疗药物和治疗方法。同时还需要开发能够有效降低未来风险的癌症治疗药物和治疗方法，例如癌症发病、转移、以及化疗药物诱导的疾病发病的风险。还需要开发给药频率更低的癌症治疗药物和治疗方法。还需要开发副作用更小、给药频率更低的有效癌症治疗药物和治疗方法。还需要开发一种或多种更加先进的治疗药物，例如缩短血浆或者消除半衰期、延长血浆循环时间、延长肿瘤停留时间(例如：1-4周或更长)、缩短灭活时间、以及具有更加有利的剂量响应曲线。另外，还需要开发适合于侵袭性较强的癌症的治疗药物和治疗方法，包括能够减少或者避免服用会产生副作用的药物。还需要开发不需要与具有严重副作用的药物同时给药的先进治疗药物和治疗方法。更加具体地讲，需要开发不需要与具有严重副作用的化疗药物同时给药的先进治疗药物和治疗方法，其中包括普通细胞毒性(包括各种非癌细胞)等严重副作用。另外，还需要开发同时适用于多种癌症的治疗药物和治疗方法，尤其是耐药性癌症、转移癌、快速发展癌症、以及侵略性较强的其他癌症。除此之外，还需要开发适用于前列腺癌或肺癌患者的先进治疗药物和治疗方法。另外，还需要开发能够穿透血脑屏障(BBB)，能够有效治疗脑部肿瘤和转移瘤的先进治疗药物和治疗方法。对于诸如肺癌等通常使用TKI进行治疗的癌症而言，还需要开发能够避免形成耐药性的先进治疗药物和治疗方法。对于之前曾经使用TKI进行过治疗的患者而言，需要开发能够克服已经形成的TKI耐药性、或者不受其影响的治疗方法，尤其是非小细胞肺癌(NSCLC)患者，其中尤其包括肺腺癌(AC)患者。对于通常使用化疗药物进行治疗的癌症而言，例如诸如小细胞肺癌(SCLC)等肺癌，需要开发能够避免形成耐药性的治疗方法和治疗药物；对于之前使用化疗药物进行治疗的患者而言，需要开发能够克服已经形成的耐药性、或者不受其影响的治疗药物和治疗方法。本发明的这些和其他特征和优势将在后文中的“发明概述”中进行详细介绍，这些内容对于该领域内的技术人员具有显而易见性。

发明内容

本发明主要涉及肿瘤靶向他汀类衍生物(THSD)，以及其在治疗、尤其是癌症治疗中的用途。这些THSD中包括一个七甲川菁羰花青染料(HMCD)部分，通过连接体连接到他汀部分的DHHA上，并将DHHA固定为开链结构。连接体可以通过酯键(“ELSD”)或者通过酰胺键(“ALSD”)连接到DHHA的开链结构上。本发明的具体实施方式还包括合成THSD的方法、以及其给药方法。更加具体地讲，其中包括ELSD的给药方法，或者ALSD与ESLD、或者可选的一种或多种其他药物(例如：化疗药物或者激素拮抗剂/抗雄激素药物)同时给药的协调给药方法。

让人意外的是，研究结果表明：和前体药物不同，本发明中所述的肿瘤靶向他汀类衍生物(THSD)实质上具有稳定的连接，因而具有多种优势，例如能够改善生长抑制效果、剂量响应、以及/或者提供其他疗效，同时其失活时间相对较长，能够避免或者减轻各种副作用。实际上，ALSD并不会释放出他汀；类似的，与RRE相比，ELSD释放他汀的速度非常缓慢(参阅实施实例8和图8)。和ALSD相比，ELSD能够提供更好的剂量响应关系，即更加平缓的剂量响应曲线(对比图7D-E和图7H)。

从对比实施实例中可以看出(参阅实施实例1b、1E和7，以及图1A-E和图7A-I和图8)，尽管不会释放出他汀(或者对于ELSD而言，释放速度非常缓慢)，但THSD的效果不但远超未偶联的他汀或者未偶联的染料，甚至远超诸如多烯紫杉醇等化疗药物、以及诸如包括抗雄激素药物(例如：阿比特龙和恩杂鲁胺)等其他癌症治疗药物；而且不需要与这些治疗药物同时给药(从而能够避免其产生的严重副作用)。

因此，偶联体形式的THSD能够提供有效成分。另外，让人意外的是，即使其尺寸相对较大，但依然能够与相关的结合口袋结合，包括他汀类的结合口袋在内，进而实现其各种效果，包括抗癌效果、以及他汀类药物的其他效果。相比之下，快速释放酯(“RRE”)会快速水解并释放出他汀(参阅后文中的对比实施实例1A-IV和4A，以及相对应的附图1A-IV)。和RRE不同，THSD的结构更加稳定，因此在很长时间内(例如：数小时、数天、数周、甚至数月)都不会系统性地大量释放他汀，从而能够以偶联体的形式在癌细胞中发挥作用。

同样让人意外的是，与ALSD相比，ELSD具有更好的剂量响应曲线，其剂量响应曲线更加平缓，这就意味着能够以更低的剂量以及/或者在更短的时间内实现初始疗效(对比图7D、图7E和图7H)。在不受当前理论限制的情况下，可以认为这是因为ELSD在早期并不会全身释放，因此在开始数小时内能够直接提供一些抗癌效果和他汀药物效果，但与偶联体以及/或者释放出来的他汀部分相关的效果需要在ELSD进入癌细胞之后才能体现出来。另外，这些他汀类衍生物还能够向癌细胞提供一种或多种他汀类药物效果，例如减少或者避免通常与全身用药、或者通过诸如RRE等快速释放偶联体给药的他汀类药物相关的副作用。

除此之外，同样让人意外的是，TSHD能够有效治疗容易形成耐药性、最具有侵略性的癌症，以及其他容易形成耐药性的癌症，而且能够在不与诸如TKI或化疗药物同时给药的情况下实现上述效果。因此，THSD可能能够有效治疗诸如但不限于前列腺癌，以及包括非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌(AC)和小细胞肺癌(SCLC)等在内的肺癌。从图7A-I、图8和图10中可以看出，在将人癌细胞植入小鼠体内得到的人肿瘤小鼠模型中，ELSD和ALSD都能够对代表前列腺癌、前列腺腺癌、肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌，包括其各种耐药形式的细胞系都具有生长抑制作用。使用THSD治疗癌症可能可以避免诸如TKI或化疗药物等标准治疗方法通常会产生的耐药性，或者可能可以克服已经形成的耐药性，例如之前癌症治疗药物(例如诸如吉非替尼等酪氨酸激酶抑制剂(TKI)、或者诸如多烯紫杉醇和顺铂(DDP)等标准化疗药物)导致的耐药性。

除此之外，同样让人意外的是，即使在全身用药而不是局部用药的情况下，THSD能够穿透血脑屏障，从而可以用于治疗脑部肿瘤和脑部转移瘤。

在不受当前理论限制的情况下，可以认为TSHD至少一部分效果和优势是与偶联体的具体形式相关的，更加具体地讲，与连接体的具体形式、其与偶联体中不同部分的连接方式、以及偶联体中不同部分的具体形式相关。即DZ1-主干，L_E/L_A连接体，以及其通过酰胺键或酯键连接到他汀部分的DHHA单元(这是他汀部分中的关健药效团)的方式；以及更加重要的是在连接到连接体上之后，DHHA单元的具体结构。根据其连接体以及/或者连接结构(以及其效果)，可以区分出下列三种染料-他汀偶联体：1)ALSD；2)ELSD；以及3)RRE。根据连接体/连接结构，能够实现下列效果：1)防止他汀释放(例如：在带有酰胺键L_A连接体的ALSD中)；或者2)能够非常缓慢地释放他汀(例如：在通过酯键连接到DHHA的开链结构上的ELSD中)；以及3)能够从前体药物偶联体中快速释放出他汀(例如：在通过酯键连接到DHHA的内酯结构上的RRE中)。和快速释放的前体药物不同，上述第1)或2)型THSD不会释放他汀、或者只是以非常缓慢的速度释放。

在不受当前理论限制的情况下，可以认为THSD(主要是“零释放”的酰胺键连接他汀类衍生物(“ALSD”)、但“慢速释放”酯键键连接他汀类衍生物(“ELSD”)也是如此)能够紧密连接到蛋白质和核酸分子上，这就能够让THSD不容易灭活，能够在癌细胞中停留更长的时间，例如数天、数周、甚至数月；从而能够大幅降低给药频率、减少甚至避免各种副作用，例如由于偶联或未偶联化疗药物、未偶联他汀、以及“快速释放”前体药物型偶联他汀导致的副作用。尤其是对于ELSD而言，这种紧密连接可能就是防止其快速释放他汀并灭活(像“快速释放”型酯键连接HMCD他汀偶联体那样)的主要原因，这种性质让其能够提高疗效(包括生长抑制/杀灭癌细胞、以及肿瘤治愈)的同时，还能够避免一种或者多种副作用。

在不受当前理论限制的情况下，在比较ELSD和ALSD的生长抑制效果之后可以发现，ELSD的剂量响应曲线更加平缓，这就表明其能够在更低浓度下触发初始非最大疗效。例如，ELSD或者THSD的总剂量约为0.1毫克到最高约6毫克每千克或以下(例如：最高2.5毫克甚至约1.0毫克每千克)。因此，一种或多种ELSD可以单独用于治疗癌症(由于其在肿瘤中的停留时间较长，能够长期发挥非最大但充分的疗效，因此可以使用较低的治疗剂量)；也可以将其与一种或多种ALSD结合使用(以便提供充分的疗效，以及/或者降低达到充分或者最大疗效时所需要的剂量)。在下文中将对示例性给药机制进行介绍。

附图说明

图1A-I描述了连接到他汀中的DHHA单位上的ELSD、RRE和ALSD。

图1A-II描述了HMCD染料的合成。

图1A-III描述了“零释放”ALSD(DZ2a)的合成。

图1A-IV描述了“慢速释放”ELSD(DZ2v)的合成。

图1A-V描述了用于比较的“快速释放酯”(RRE)(DZ2c)。

图1B1描述了DZ2a、DZ1、辛伐他汀和多烯紫杉醇的结构。

图1B2描述了THSD对癌细胞的生长抑制作用。

图1C描述了THSD对各种前列腺癌细胞的生长抑制作用。

图1D描述了THSD在小鼠体内生长的人癌细胞中的摄取和停留情况。

图1E描述了THSD在体内环境下的肿瘤治愈效果。

图2描述了THSD对癌细胞中的线粒体/溶酶体的共定位。

图3A描述了THSD降低癌细胞的氧气消耗率OCR的情况。

图3B描述了THSD减少细胞外酸化率(ECAR)降幅的情况。

图3C描述了THSD与胞液或者线粒体中的蛋白质结合的情况。

图3D描述了THSD预防或者消除聚泛醌蛋白的情况。

图4A描述了THSD快速、彻底抑制癌细胞生长的情况。

图4B描述了THSD抑制具有醋酸阿比特龙耐药性的癌细胞的生长的情况。

图4C描述了THSD抑制具有恩杂鲁胺(EZ)耐药性的癌细胞的生长的情况。

图5描述了肺癌细胞小鼠模型中人肿瘤的RhoA/B染色情况。

图6B1描述了在全身用药之后，THSD在大鼠血浆中快速消减的情况。

图6B2描述了在全身用药之后，THSD在犬类血浆中快速消减的情况。

图7A描述了ALSD和ELSD抑制22Rv1癌细胞生长的情况。

图7B描述了ALSD和ELSD抑制具有EZ耐药性的癌细胞生长的情况。

图7C描述了ALSD和ELSD抑制PC3癌细胞生长的情况。

图7D描述了ALSD和ELSD抑制A549癌细胞生长的情况。

图7E描述了ALSD和ELSD抑制A549DDP癌细胞生长的情况。

图7F描述了ALSD和ELSD抑制H1975癌细胞生长的情况。

图7G描述了ALSD和ELSD抑制ELSD癌细胞生长的情况。

图7H描述了ALSD和ELSD抑制PC9癌细胞生长的情况。

图7I描述了ALSD和ELSD抑制H446癌细胞生长的情况。

图8描述了ALSD是一种稳定/不会水解的药物，而不是一种前体药物。

图9A1中描述了在具有第三代EGFR抑制剂耐药性癌细胞的体内模型中，TSHD表现出来的生长抑制作用。

图9A2描述了肿瘤重量比较图，用于说明THSD在体内的异质性。

图9A3描述了肿瘤体积比较图，用于说明THSD在体内的异质性。

图9A4中描述了小鼠体重对比图，说明没有出现体重减少/急性毒性现象。

图10描述了THSD在H446人癌细胞体内模型中表现出来的生长抑制作用。

图11描述了用于比较的非他汀类DZ1-DHA偶联体。

具体实施方式

在具体实施方式中，将提供一种酯键连接他汀类衍生物，其分子式如式FIa所示：

其中X是一个卤素残基；其中R₁是一个残基，可以从下列官能团中选择：C₁-C₂₅烷基、C₅-C₂₅芳基、C₅-C₂₅吲哚基、C₅-C₂₅噻吩基、C₅-C₂₅苯基、C₅-C₂₅萘基、C₁-C₂₅芳烷基、C₁-C₂₅烷基磺基、C₁-C₂₅烷基羧基、C₁-C₂₅烷基氨基、C₁-C₂₅ω-烷基胺、C₁-C₂₅ω-炔基、一条带有(-CH₂-CH₂-O-)_2-20的PEGyl聚乙烯链、带有(-CH₂-CH₂-O-)_2-20的PEGyl羧化物、带有(-CH₂-CH₂-O-)_2-20的ω-PEGyl胺、ω-酰基-NH、ω-酰基-赖氨酰、ω-酰基-三唑、带有(-CH₂-CH₂-O-)_2-20的ω-PEGyl羧基-NH、带有(-CH₂-CH₂-O-)_2-20的ω-PEGyl羧基-赖氨酰、以及带有(-CH₂-CH₂-O-)_2-20的ω-PEGyl羧基-三唑；其中R₂和R₃是残基，可以分别从下列官能团中独立选择：氢原子、C₁-C₂₀烷基、磺酸基、C₁-C₂₀烷基羧基、C₁-C₂₀烷基氨基、C₁-C₂₀芳基、-SO₃H、-PO₃H、-OH、-NH₂、以及卤素残基；其中R₂和R₃可以连接到一个碳环中的下列位置：3、3’、4、4’、5、5’、6和6’；其中A^-官能团是一个能够与药物成分兼容的带负电的阴离子；其中带有一个酯类连接体L_E，通过酯键连接到他汀残基R_S上；其中L_E可以从带有L_E1和L_E2的官能团中选择，其中L_E1为–(CH₂)_n–O-，其中L_E2为–(CH₂)_n–CO–NH–(CH₂)_m–O-，其中n的取值为4-9、m的取值为1-4；其中R_S是一个他汀或者他汀衍生物的残基，R_S中带有一个二羟基庚酸单元(DHHA)，连接到构成他汀残基其余部分的R_S*上；其中R_S通过其DHHA中的开链结构(-CO-CH₂-COH-CH₂-CHOH-R_S*)连接到L_E之上。

在具体的实施方式中，提供了一种ELSD，其中他汀类药物从下列官能团中选择：辛伐他汀、美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、瑞舒伐他汀、西伐他汀、匹伐他汀，以及连接到他汀中的有效连接区域上的其他衍生物。

在具体的实施方式中，提供了一种ELSD，其中他汀是辛伐他汀，并且其中酯类连接体L_E是L_E2，如式FIb分子式所示：

并且其中，A^-,X,R₁,R₂,R₃和L_E2连接体中的n和m如分子式FIa所定义。

在具体的实施方式中，提供了如分子式FIa或Fib所示的ELSD，其中X为氯原子。提供了更多的实例，其中R₁是–(CH₂)n–SO₃-烷基磺酸盐残基，并且其中R1中的n选自2、3、4、5、6、7和8。还提供了其他实例，其中R₁是–(CH₂)₄–SO₃-烷基磺酸盐残基。此外，还提供了实例，其中R₂和R₃为H。

在具体的实施方式中，提供了一种包含ELSD和一种或多种药物赋形剂的药物配方，其中ELSD从下列官能团中选择：上述分子式FIa中的ELSD；FIa中的ELSD，其中形成R_S的他汀从下列官能团中选择：辛伐他汀、美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、瑞舒伐他汀、赛伐他汀、匹伐他汀以及连接到他汀中的有效连接区域上的其他衍生物；上述分子式FIb中的ELSD，其中他汀类为辛伐他汀，酯类连接体L_E为L_E2(-(CH₂)_n–CO–NH–(CH₂)_m–O-，其中L_E2连接体的A^-、X、R₁、R₂、R₃和n和m为如上文(i)中分子式FIa所定义；如本文所定义的ELSD，其中X为氯原子；如本文所定义的ELSD，其中R₁是–(CH₂)_n–SO₃-烷基磺酸盐残基，并且其中R1中的n选自2、3、4、5、6、7和8；如本文所定义的ELSD，其中R₁是–(CH₂)₄–SO₃ ^-烷基磺酸盐残基。

在具体的实施方式中，提供了包含一个或多个ELSD的药物配方，并且进一步包含以下ALSD的FIIa分子式：

其中A^-、X、R₁、R₂和R₃如本文FIa所定义；而其中酰胺连接体L_A通过酰胺键连接到他汀残基R_S；其中L_A是选自L_A1和L_A2官能团的连接体，其中L_A1是–(CH₂)_n–NH-，并且其中L_A2是–(CH₂)_n–CO–NH–(CH₂)_m–NH-并且其中n＝4-9，并且m＝1-4；其中Rs是他汀类或他汀类衍生物的残基，其中Rs包含连接到残基Rs*的二羟基庚酸单元(DHHA)，残基Rs*是他汀类的残余物，其中R_S通过其开链形式的DHHA连接到L_A，该开链形式为-CO-CH₂-COH-CH₂-CHOH-R_S*。

在具体的实施方式中，提供治疗癌症的方法，其中一个或多个ELSD和任意地一个或多个ALSD给需要的患者施药，以足够的剂量抑制癌细胞或癌前细胞生长或诱导癌细胞或癌前细胞在患者中凋亡，其中选择的一个或多个ELSD由以下官能团组成：上述分子式FIa中的ELSD；FIa中的ELSD，其中形成的RS的他汀类药物从以下官能团中选择：辛伐他汀、美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、罗苏伐他汀、西伐他汀、匹伐他汀以及连接到他汀中的有效连接区域上的其他衍生物。上述分子式FIb中的ELSD，其中，他汀是辛伐他汀，酯类连接体LE为L_E2，是–(CH₂)_n–CO–NH–(CH₂)_m–O-，并且其中，A-、X、R₁、R₂、R₃和LE2连接体中的N和M如上述(i)中分子式FIa所定义；如本文所定义的ELSD中，X为氯原子；如本文所定义的ELSD中，R₁是–(CH₂)_n–SO₃ ^-烷基磺酸盐，而且R₁中的n选自2、3、4、5、6、7和8；如本文所定义的ELSD中，R₁是–(CH₂)₄–SO₃ ^-烷基磺酸盐残基；并且其中任选的一个或多个ALSD从下列官能团中选择：如本文所述的分子式FIIa中的ALSD；和如分子式FIIb中的ALSD，其中他汀为辛伐他汀，连接体为L_A2(–(CH₂)_n–CO–NH–(CH₂)_m–NH-)：

其中，A-、X、R₁、R₂、R₃和L_A2连接体的和n和m如上文分子式FIa所定义。

在具体的实施方式中，提供一种方法，其中一个或多个ELSD和一个或多个ALSD以一个或多个组合剂型的协调给药机制共同向患者给药，其中每个剂型包含一个或多个ELSD和一个或多个ALSD以及一个或多个药物赋形剂。

在具体的实施方式中，提供一种方法，其中一个或多个ELSD与一个或多个ALSD在协调的给药机制中共同给药；其中给药机制中包括：在向患者给予一次或多次维持剂量之前至少一小时或以上，需要先向患者给予一次加载剂量；其中加载剂量中可以包括单独的剂型，可以含有一种或多种药物赋形剂，但可以不含有一种或多种ELSD；其中的一次或多次维持剂量中应该包括下列剂型：含有一种或多种ALSD和一种或多种药物赋形剂，但可以选择含有或不含有ELSD。

在具体的实施方式中，提供一种方法，其中一种或多种ELSD与一种或多种次要药物以协调的给药机制与一种或多种次要药物共同给药，并且其中所述一种或多种次要药物选自以下组：激素拮抗剂、抗雄激素药物、阿比拉特龙、恩杂鲁胺、化疗药物、多西他赛、紫杉醇和卡巴他赛。

在具体的实施方式中，提供一种方法，其中一种或多种组合剂型，或一种或多种负载体量和一种或多种维持剂量的一种或多种单独剂型以协调的给药方案共同给药；其中组合剂型包括一种或多种ELSD、一种或多种ALSD和一种或多种PHA。正常赋形剂，其中所述加载剂量由包含一个或多个ELSD和一个或多个药用赋形剂的单独剂型组成，并且不包含一个或多个ALSD；并且其中所述一个或多个维持剂量由包含一个或多个ALSD和一个或多个药用赋形剂的剂型组成。ENT，并且任意地包含ELSD；其中所述共同给药形式与一种或多种次要药物以协调的给药时间表进一步共同给药，并且其中所述一种或多种次要药物从下列官能团中选择：激素拮抗剂、抗雄激素药物、阿比拉特龙、Enzalutamid一种化学治疗药物，多西紫杉醇，紫杉醇和卡巴齐Cabazitaxel。

在具体的实施方式中，提供一种方法，其中包括将一种或多种ELSD给予给在其癌细胞、癌前病变、组织、肿瘤、或者转移瘤中的一种或多种酪氨酸激酶受体中的一段或多段基因编码中发现了一处或多处遗传变异的患者；其中酪氨酸激酶受体包括：表皮生长因子受体(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶受体(ALF)、以及原癌基因酪氨酸蛋白激酶受体(ROS或者ROS1)。

在具体的实施方式中，提供一种方法，其中包括将一种或多种ELSD给予给其癌细胞、癌前病变、组织、肿瘤、或者转移瘤已经形成了对一种或多种酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的耐药性的患者；其中包括在ELSD给药之前已经进行过一次或多次TKI治疗、且之前的TKI治疗对其产生的疗效已经不充分的患者。

在具体的实施方式中，提供一种方法，其中TKI可以从下列物质中选择：表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)、ALK酪氨酸激酶受体抑制剂(ALK-TKI)、以及原癌基因酪氨酸蛋白激酶ROS(ROS-TKI)。

在具体的实施方式中，提供一种方法，其中EGFR-TKI可以从下列物质中选择：吉非替尼、埃克替尼、埃罗替尼、布加替尼、达克替尼、拉帕替尼、凡德他尼、阿法替尼、奥希替尼(AZD9291)、CO-1686、HM61713、纳扎替尼(EGF816)、奥姆替尼、PF-06747775、YH5448、艾维替尼(AC0010)、Rociletinib和西妥昔单抗。

在具体的实施方式中，提供一种方法，其中患者为通过药物暴露或基因测试确定患有耐药性癌症的患者，其中的耐药性癌症包括下列癌症：前列腺癌、胰腺癌、肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC；NSCLC中可以包括鳞状细胞癌、腺癌(粘液性囊腺癌)、大细胞肺癌、杆状细胞癌、肉瘤样癌、类癌瘤、唾液腺样癌、腺棘癌、乳头状腺癌、巨细胞癌)、SCLC(小细胞肺癌)、综合性小细胞癌、肺部非癌肿瘤(肉瘤、淋巴瘤、未成熟畸胎瘤、以及黑色素瘤)、肾脏癌、淋巴瘤、结肠直肠癌、皮肤癌、肝癌和乳腺癌、肺鳞状细胞癌、肛门癌、胶质母细胞瘤、头部和颈部的上皮细胞瘤、以及其他癌症。

在具体的实施方式中，提供一种方法，其中患者为通过药物暴露或基因测试确定患有耐药性肺癌的患者，其中的耐药性癌症包括下列癌症：小细胞癌肺癌(SCCLC)、非小细胞癌肺癌(NSCLC)、综合性小细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌(AC、粘液性囊腺癌、MCACL)、大细胞肺癌、杆状细胞癌、肉瘤样癌、类癌瘤、唾液腺样癌、腺鳞癌、乳头状腺癌、巨细胞癌、肺部非癌肿瘤、肉瘤、淋巴瘤、未成熟畸胎瘤、以及黑色素瘤。

在具体的实施方式中，THSD基本上包含三个部分：他汀类部分、七甲氧基碳菁(HMCD)染料部分和通过酯或酰胺键(“L_E/L_A连接体”或“连接体”)将他汀类的DHHA结合到染料部分的连接体连接体部分。该染料是一种七甲川碳菁型近红外(近红外)染料，包含中心卤素环己基部分。可将该连接体视为包含该染料的烷基链。在所述共轭他汀类中，DHHA通过连接体和染料的连接固定到其开链形式。

实例包括制备THSD的方法；例如，无限制地，他汀或他汀前体的二羟庚酸(DHHA)单元可以与羟胺反应，并且他汀反应产物的羟基可以与HMCD的羧基反应，形成具有酯键的L_E连接体。或者，染料部分前体可以与二胺反应，并且染料反应产物的胺基可以与他汀类DHHA的羧基反应，从而形成酰胺键。

例如，在ELSD的情况下，所述连接体可以是烷基连接体(–(CH₂)_n–O-，在本文中也称为“L_E1”)，或者可以是包含甲酰胺(–(CH₂)n–CO–NH–(CH₂)m–O-，在本文中称为“L_E2”)的甲酰胺连接体，所述甲酰胺连接体可以由例如HMCD衍生物的羟基(AMI)的反应产生。由HMCD的羧基与羟胺(例如乙醇胺)和他汀类或他汀类衍生物的DHHA单元的羧基的先前反应产生的衍生物的基团，从而形成通过酯键连接到他汀类的DHHA单元的L_E连接体的链内酰胺(比较例如图1A-IV表示如何形成ELSD的说明性实例)。

]在ALSD的情况下，类似地，连接体可以是烷基连接体(–(CH₂)_n–NH-，在本文中也称为“L_A1”)，或者可以是包含甲酰胺(–(CH₂)n–CO–NH–(CH₂)m–NH-，在本文中也称为“L_A2”)的甲酰胺连接体。L_A2的甲酰胺可由(但不限于)他汀衍生物的胺基(衍生物的胺基，例如，他汀的DHHA单元与二胺的胺残基(例如，丙烷-1,3-二胺)与HMCD的羧基反应而产生，从而与汽车形成THSD。通过酰胺键连接到他汀类药物的盒酰胺连接体(L_A2)(例如，图1A-III中的示例性实例是如何形成ALSD)。

因此，THSD的连接体可以通过酰胺键或酯键(分别为L_E或L_A)连接到他汀类药物。

连接酰胺或酯键通过他汀的开链DHHA将THSD的染料部分连接到他汀残余物；在不希望受到理论约束的情况下，这种特殊的连接可能有助于增强ELSD和ALSD的功效，并在酯键的情况下导致酯释放缓慢。因此，ELSD和ALSD都相对稳定：一种基本上零释放他汀(酰胺连接的SD或“ELSD”)，另一种释放非常缓慢(酯连接的SD或“ELSD”)，比其他快速释放的偶联物慢得多，特别是与DHHA连接的快速释放酯(“RRE”)。以内酯的形式

酰胺连接体(L_E2/L_A2)可能是更好的疗效和在酯进一步改善稳定性/缓慢释放的情况下的首选。L_E2/L_A2连接体的通式可为–(CH₂)n–CO–NH–(CH₂)m–NH-，其中n＝4-9且m＝1-4(或“L_E”)用于ALSD，且–(CH₂)n–CO–NH–(CH₂)m–O-，其中n＝4-9且m＝1-4(或“L_A”)用于ELSD。

最好是，可以为L_E和L_A选择n和m如下：n＝4-6和m＝1-4；最优选地，N(n+m)的总数不超过10、9、8、7或6，例如n＝5共6-9(即基于DZ1的THSD)，即不限于：–(CH₂)₅–CO–NH–(CH₂)₁–NH-,–(CH₂)₅–CO–NH–(CH₂)₂–NH-,–(CH₂)₅–CO–NH–(CH₂)₃–NH-,–(CH₂)₅–CO–NH–(CH₂)₄–NH-forL_E；和–(CH₂)₅–CO–NH–(CH₂)₁–O-,–(CH₂)₅–CO–NH–(CH₂)₂–O-,–(CH₂)₅–CO–NH–(CH₂)₃–O-,–(CH₂)₅–CO–NH–(CH₂)₄–O-用于L_A。

令人惊讶的是，已经发现THSD提供了这样的改善，即以偶联物的形式，而不是作为前体药物(其中释放后的药物部分将提供其效果)。在ALSD的情况下，他汀类药物基本上没有或最低限度的水解作用，令人惊讶的是，在体内条件下，发现酰胺键基本稳定，基本上没有检测到释放的他汀类药物。同样，在ELSD的情况下，水解仅在“体内”条件下非常缓慢，因此在ELSD到达癌细胞或组织后

由于在体内条件下，如在各种哺乳动物的血清中没有显示出从他汀类药物中释放的他汀类药物，例如参见实例1A-V(ELSD在37℃的小鼠血清中稳定，与RRE相反)，和实例6(大鼠/犬；ALSD在体内至少稳定24h)，下面所示的THSD的改进效果是：实质上是偶联物本身，避免副作用，包括与全身他汀类药物的使用有关的副作用。

在不希望受理论约束的情况下，相信本文所述的THSD的结构，特别是他汀类药物的DHHA残基的开链形式，有助于各种治疗相关的效果，包括染料或更小的他汀类药物本身都不会达到的效果。这可以通过在连接体中存在甲酰胺来进一步改进。

令人惊讶的是，THSD的治疗效果不仅比未偶联的他汀类药物和未偶联的染料有所改善，而且也比各种化疗药物的治疗效果有所改善，其中一些药物具有高度的细胞毒性，在耐药和不耐药的癌细胞或肿瘤中都有高剂量的作用。例如，在下面的比较实例1A-IV和相应的图1A-IV中显示THSD的这种效应。

在实例1A-1E和图1A-1E中说明了THSD的改进，该实例表明，与未偶联的他汀类药物本身和与未偶联的染料相比，THSD可提供改进的癌细胞生长抑制和体内肿瘤收缩(参见例如图1A-C)。这些改善可以在不同的癌细胞系和生长在小鼠体内的人类肿瘤中发现(参见例如图1D)，并且优于多西紫杉醇等癌症药物(参见例如图1E)，即使在高剂量8mg/kg体重的情况下，这些药物与THSD相比，基本上没有或非常轻微的肿瘤抑制活性，后者显示出在较低剂量5mg/kg下具有强而持久的肿瘤抑制作用。因此多西紫杉醇可以被THSD替代，避免其副作用，提供更好的活性/生长抑制和肿瘤收缩。

另外，如实例4A1-3、B1-3和图4A-C中所示，其显示THSD在治疗耐药癌细胞方面提供改进。已知各种癌症药物(醋酸阿比拉特龙、恩杂鲁胺、多西紫杉醇)对降低细胞存活率，从而抑制耐药癌细胞的生长只有非常温和的作用。然而，当暴露于THSD时，比较图4A-C，在大约16μm或更低的中等浓度下并且仅在8小时内，不仅可以完全抑制亲本(即诱导耐药前)癌细胞的生长(8小时后0％的细胞存活率，参见图4A)，而且在使用相同THSD浓度和在同一短时间内，完全抑制生长(8小时后细胞存活率为0％，见图4B和图4C)。

此外，实例7A-7I和图9A1-4说明，THSD(包括ELSD)在抑制各种不同的人类癌症细胞系(包括各种类型的前列腺癌和肺癌细胞系，包括从NSCLC和SCLC建立的细胞系)的细胞生长方面提供改进，并且包括抗药细胞系。这同样适用于ALSD和ELSD，因为这两种方法都说明了各种人类癌症细胞系中细胞活力的降低，例如图7A-7C所示的22Rv1、MDVR(EZ-耐药性C4-2B)和PC3癌细胞的图进行比较。人体耐药肺癌模型(例如PC9AR AC/NSCLC细胞对EGFR-TKI耐药，THSD无急性毒性(图9A1-4)。与EGFR-TKI联合使用可进一步轻微提高抗癌活性。

IC₅₀和其他基于癌细胞的数据以及肿瘤的重量/体积和其他初步数据支持THSD在癌细胞中引起更强的细胞毒性和更少的副作用(例如，结果如图1b-E、图4A-C、图7A-I所示)。

在不希望受理论约束的情况下，相信HMCD部分和他汀部分(尤其是通过开放链形式的他汀类DHHA)在如所述连接时能够协同作用以达到至少是可加性和可能是协同作用的效果，并且可能提供或有助于提高治疗效果。THSD的TS。这可能是由于THSD偶联物的以下三种作用或功能中的一种或多种，但不是未偶联的HMCD染料：1)线粒体功能，2)溶酶体功能，以及3)通过蛋白预酰化进行细胞间通讯。这三种功能或作用独立发生，但共同促成了THSD的多种机制，每一种机制都有助于改善对癌细胞生长的抑制。

相信显示的THSD的三个功能(不同于未偶联的HMCD染料或未偶联的他汀类)得到图2所示的实例2的结果的支持。关于1)和2)癌细胞的染色显示THSD与线粒体和溶酶体共定位，因此能够干扰癌细胞中的各种线粒体和溶酶体功能。虽然有些蛋白质重叠，但结合的蛋白质在强度和/或同一性上与未偶联染料结合的蛋白质不同，如图3C中出现的附加带所示。示例3A-D和图3A-D显示，与未偶联染料/s相比，THSD在降低癌细胞耗氧率(OCR)方面有令人难以置信的改进。TATIN或对照组(THSD从约800-900pmol/min降至低于200pmol/min，未偶联药物和对照组保持在700以上，参见图3A)。

同样，对于1)并且对应于OCR的强烈降低，THSD也显示细胞外酸化率(“ECAR”)的降低，如图3B所示。ECAR对应于厌氧糖酵解的使用，其厌氧形式在细胞外产生和积累乳酸，因此，较高的速率由乳酸形成的示踪细胞酸性。尽管所有样本的ECAR(厌氧ATP产生)均下降，但THSD暴露细胞(“DZ2a”)显示的下降幅度最小，在恢复下降前约500分钟，该细胞也在曲线上出现向上凸起；所有其他样本的ECAR均呈逐渐下降趋势，阴性对照(“NT”)曲线为l。然而，接下来是未偶联的他汀类药物；其他曲线(不可见)显示出相似的下降和逐渐的趋势；与THSD处理的细胞相比，所有这些样品显示出较高的OCR(即有氧呼吸较高)。ECAR的降低通常意味着厌氧糖酵解减少(取而代之的是有氧呼吸)。ATP的厌氧生产，即通过厌氧糖酵解/乳酸系统，是一种细胞存活的替代方法，对癌细胞尤其重要，尤其是在可能无法获得氧气的实体瘤中。如图所示，THSD影响癌细胞的生理变化，包括有氧的强烈减少，但(在最初尝试转换后)也会产生厌氧的ATP，这有助于抑制暴露于THSD的癌细胞的生长。

关于2)，THSD阻止癌细胞去除/溶酶体清除多泛素化细胞蛋白，如图3D所示。

关于3)，如实例5中所述的结果所示，THSD可以通过抑制RhoA/B的预酰化来阻止RhoA/B锚定到细胞膜上，从而阻断其下游信号。蛋白质异戊二烯化是蛋白质修饰如RhoA/B的翻译后机制，帮助将这些蛋白质锚定在癌细胞膜(如肺癌和前列腺癌细胞)上，以进行下游细胞通讯。THSD能抑制HMG-CoA还原酶，从而抑制胆固醇和异戊二烯的生成。胆固醇和异戊二烯是蛋白质异戊二烯化所必需的，但由于THSD介导的HGM CoA抑制而缺失，从而阻断了异戊二烯化/锚定蛋白质的下游信号传导。

因此，与主要作用于宿主肝HMG-CoA还原酶的未偶联他汀类药物(并且仅在对癌细胞有任何作用时才有限制)不同，THSD可能至少具有三种独立的作用/功能(线粒体、溶酶体和细胞-细胞通讯)。这些可能独立发生，但可能共同有助于抑制癌细胞的生长。

因此，在不希望受理论约束的情况下，与他汀类药物的未偶联形式相比，与未偶联的HMCD相比，和/或与快速释放他汀类药物的结合他汀类药物相比，THSD可提供各种优势。这些快速释放偶联物尤其包括直接连接到DHHA内酯形式的快速释放酯偶联物，例如快速释放酯偶联物(参见图1A-V中的DZ1-SIM)。与通常使用的未偶联染料/他汀类、RRE和/或其他癌症药物相比，THSD具有许多优点，可能包括以下一项或多项：避免或减少他汀类药物的失活(尤其是在体内)，降低正常细胞的一般细胞毒性，同时增加癌细胞的细胞毒性(如图E所示)。例如，通过IC₅₀)，提高了抗癌效果(例如生长抑制、肿瘤收缩、更快速的生长抑制/癌细胞死亡，例如小于16、12、10或8小时，即使在耐药细胞上进行试验(参见例如实例4和实例B1-B3和图4A-C)，从而避免了耐药性的发展)，缩短了持续时间。给予THSD，减少THSD的给药频率(包括一次、一周一次、两周一次、每月一次等)，减少副作用(尤其是系统性给药时)，降低未来风险(如癌症、转移和化疗诱导疾病的风险)，减少和/或减缓药物不活动。改善血浆和/或消除半衰期(例如少于8、4、2、1小时或30分钟，例如大约1-2小时)，增加血浆循环时间，增加肿瘤停留时间(例如长于1、2、3、4周或更长)，以及改进的剂量-反应曲线，特别是小于陡峭的乙状结肠剂量反应曲线。

在不希望受理论约束的情况下，与快速释放酯(RRE)相比，ELSD可能具有更长的肿瘤停留时间。增加的肿瘤停留时间加上较陡的乙状结肠剂量-反应曲线(从而降低初始非最大效应发生时的剂量)可为THSD提供足够的治疗效果。因此，可单独施用ELSD，或与低于单独施用时提供最大效果的剂量的ALSD一起施用，或可如本文所述共同施用，例如作为一个或多个初始ELSD加载剂量之后的一个或多个后续维持剂量。

此外，ELSD的具体优势可能包括癌细胞和/或肿瘤组织中缓慢持续的非全身性他汀类药物释放，允许以ELSD的形式全身给药，同时避免或减少与未偶联他汀类药物全身给药相关的他汀类药物副作用。在不希望受理论约束的情况下，这可能提供额外或改进的抗癌效果，而不是由“零释放”型HMCD偶联物提供，包括ALSD。同样，在不希望受理论约束的情况下，特定的L_E连接体可结合如所述连接的染料和他汀部分(包括以开链形式固定的他汀的DHHA)提供额外或改进的抗癌作用。

此外，令人惊讶的是，与ALSD相比，ELSD似乎提供的乙状结肠剂量反应曲线要陡得多，如初步数据所示，如图7D、图7E和图7H所示。这意味着对于提供初始效应的剂量范围，ELSD在低剂量时的初始效应，此时ALSD还没有任何作用(但可能引起副作用)。同样，观察提供最大效果的高剂量范围，ALSD在低剂量下提供最大效果，而需要更多的ELSD。因此，单独或与ALSD结合使用ELSD，特别是根据本文所述的给药和给药时间表，可以提供提供提高癌症生长抑制和/或降低副作用的改进疗法，并且允许使用降低剂量的ALSD。f毒性更强的药物替代品，包括ALSD和/或频率更低的药物剂量，例如以特定比例、量和频率共同服用ELSD和ALSD，以捕捉ELSD的初始效应和ALSD的最大效应。

例如，THSD的优点和改进使得改进的给药机制具有较少的给药频率，包括将ALSD和ELSD结合在一起的联合给药机制。例如，在不受限制的情况下，可以首先给药ELSD，提供加载剂量，然后给ALSD一个或多个后续维持剂量。

在具体的实施方式中，提供如下所示的分子式FIa中的THSD化合物(在本文中也被称为“ELSD”)，其中A-基是药学上可接受的带负电荷的阴离子；其中X是卤素；其中R1是任意地最终被选自SO3、CO2或NH2的残基取代的烷基残基，并且其中每个R1烷基链可以任意地是支链的，并且所述支链可以构成烷基链、芳环、杂芳基、芳烷基中的一个或多个，并且其中所述链或其分支的一个或多个位置可以是不饱和的；其中R2和R3独立地选自H、抽电子基团(EWG)或电子供体。基团(EDG)；其中L_E选自烷基连接体L_E1和甲酰胺连接体L_E2组成的基团，其中L_E1为–(CH₂)_n–O-并且其中L_E2为–(CH₂)_n–CO–NH–(CH₂)_m–O-，其中n＝4-9，例如4-6，并且m＝1-4，并且其中L_E和他汀残基Rs因此通过酯键连接，并且其中Rs是他汀残基。通过其-CO-CH₂-COH-CH₂-CHOH-R部分连接：

在具体的实施方式中，提供了使用如下所示的分子式FIIa的THSD化合物(也被称为“ALSD”)的方法，其中所述残基被指定用于上述分子式FIa，并且其中LA选自烷基连接体L_A1和甲酰胺连接体L_A2组成的组，其中L_A1是–(CH₂)_n)–NH-并且其中L_A2是–(CH₂)_n–CO–NH–(CH₂)_m–NH-，其中n＝4-9，例如4-6，m＝1-4，其中la和他汀残基rs由此通过酰胺键连接，其中R_S是通过其-CO-CH₂-COH-CH₂-CHOH-R部分连接的他汀残基：

在具体的实施方式中，提供THSD，其中n＝5，并且优选地，所述连接体是n＝5且m＝2的L_E2或L_A2连接体；可选地，可以如上所述选择X、R₁、R₂和R₃或如下选择：X＝Cl,R₁＝(CH₂)₄-SO₃ ^-,R₂＝H,R₃＝H(例如，基于DZ1的THSD)。

在具体的实施方式中，提供THSD，其中A^-基团可选自包含I^-,Cl^-,Br^-,OSO₂R^-,BF₄ ^-,ClO₄-.的基团。

在具体的实施方式中，提供了THSD，其中R_S是statin或其衍生物的残基，其保持对statin的活性结合位点的结合。他汀类药物包括二羟基庚酸单元(DHHA)，通常是3,5-二羟基HA单元，更具体地说是3R,5R-二羟基HA单元，后者是他汀类药物的主要药效载体；DHHA可以他汀类药物的非活性闭环内酯形式或其活性开链羧酸形式(即COOH-CH₂-CHOH-CH₂-CHOH-CH₂-CH₂-R_s*)存在。-CH2-R_S*(或当连接：HMCD-L_E/A-CO-CH₂-CHOH-CH₂-CHOH-CH₂-CH₂-R_s*时)，其中rs*是他汀类药物的剩余部分。形成如本文所述的THSD后，开放链形式存在并连接，或形成并固定在连接上。

在THSD的实例中，RS-他汀残基可分别通过其以开链羧酸形式的DHHA单元残基通过酯键(L_E)或酰胺键(L_A)连接到(L_E)/(L_A)连接体。

在具体的实施方式中，提供了式FIb中的ELSD，其中HMCD染料残基通过L_E2连接体(–(CH₂)_n–CO–NH–(CH₂)_m–O-)与他汀结合，如下所示，所述的他汀具有二羟基庚酸单元(DHHA)，即他汀残基–CO-CH₂-CO-CH₂-CHOH-R_s*，即他汀类药物残留–CO-CH₂-CO-CH₂-CHOH-R_s*，其中R_s*表示他汀类药物残留减去DHHA残留，因此他汀类药物分子的剩余部分：

在具体的实施方式中，提供式FIC的ELSD，其中所述连接体是如上所述的L_E2连接体，所述他汀是辛伐他汀：

在具体的实施方式中，提供分子式FId的ELSD，其中他汀如上文所述为辛伐他汀，并且所述染料是基于DZ1的染料，其中R₁是(CH₂)₄-SO₃ ^-，其中所述连接体是n＝5且m＝2的L_E2连接体，其中X＝Cl，其中R₂和R₃是H：

分子式FId化合物的合成在下面的实例1A-IV中描述，比较化合物14(DZ2b)。

在具体的实施方式中，提供式FIIb的ALSD，其中FIIb染料残基通过L_A2连接体(–(CH₂)_n–CO–NH–(CH₂)_m–NH-)与他汀的DHHA共轭，如FIIb中所示：

在具体的实施方式中，提供了式FIIb的ALSD，其中HMCD残基通过L_A2连接体与辛伐他汀偶联，如FIIc中所示：

在具体的实施方式中，如本文所述，提供了式FIb或FIIb的ALSD，其中，HMCD残基通过L_A连接体(例如L_A1或L_A2)与辛伐他汀偶联，并且其中X＝Cl。

在具体的实施方式中，提供如本文所述的分子式FIb或FIIb的THSD，其中n＝5。

在具体的实施方式中，提供如本文所述的分子式FIb或FIIb的THSD，其中R₁是(CH₂)₄-SO₃。

在具体的实施方式中，提供如本文所述的分子式FIb或FIIb的THSD，其中R_2/3areH。

在具体的实施方式中，提供如本文所述的分子式FIb或FIIb的THSD，其中n＝5，R₁是(CH₂)₄-SO₃ ^-，并且R_2/3是H(基于DZ1的THSD)。

在具体的实施方式中，提供如本文所述的分子式FIb或FIIb的THSD，其中n＝5且m＝3。

作为一个示例，下面的分子式为FIId显示了ALSD，其中HMCD通过L_A2连接体与辛伐他汀偶联，其中n＝5且m＝3(–(CH₂)₅–CO–NH–(CH₂)₃–NH-)，其中X＝Cl，R₁为(CH₂)₄-SO₃ ^-，R_2/3为H)

分子式为FIId化合物的合成在下面的实例1A-IV中描述，比较化合物7(“DZ2a”)。

出于比较目的，下面的分子式FIII和FIV显示了快速释放酯(RRE)型的HMCD他汀偶联物(FIV是比较实例1A-IV的化合物8，本文也指定为“DZ2c”)。RRE缺少更稳定的L_E/L_A连接体，而是包含一个不稳定的LRR连接体(例如，通式–(CH₂)_n–OC–O-))，与他汀形成不稳定的酯键，例如，以其内酯形式与他汀的DHHA单元的残余物形成不稳定的酯键。这种不稳定酯在典型的体内条件下迅速释放他汀类药物，在短时间内(如1小时或更短时间，如30分钟或更短时间，甚至10分钟或更短时间内)可能发生显著释放。

在具体的实施方式中，为了形成THSD，所述方法可以从包含羧基的HMCD(例如DZ1)开始。胺或二胺可与HMCD之羧基或与他汀之DHHA单元之羧基反应以形成待形成之L_E/L_A连接体的一部分，然后使所得酰胺基与剩余部分之羧基(即染料或他汀之羧基)反应以提供期望之THSD与L_E/L_A连接体将HMCD链接到他汀。

例如，为了形成ELSD，羟基烷基胺可与HMCD反应，以在与他汀类DHHA单元的羧基反应时提供所需的L_E连接体。他汀类药物可相应地被激活，如图1A-IV所示，图1A-IV说明了基于DZ1的方法以形成示例性ELSD(化合物14，DZ2b)。例如，作为第一步，形成HMCD的羟乙基酰胺衍生物，例如通过使HMCD与乙醇胺反应形成HMCD羟乙基酰胺。在随后的步骤中，HMCD羟乙基酰胺与所需他汀类药物的甲基衍生物反应。同时比较图1A-III中所示的DZ1和辛伐他汀的示例性方法。

举例来说，为了形成ALSD，烷基二胺可与所需的他汀反应以在衍生物中提供他汀，在与HMCD的羧基发生反应时提供所需的L_A连接体，所述羧基位于图1A-III中DZ1和辛伐他汀对应于L_A的位置。例如，作为第一步，形成statin的胺衍生物，例如通过使statin与烷基二胺(例如丙烷-1,3-二胺)反应以形成胺衍生物。在随后的步骤中，所引入的他汀类衍生物的胺基与HMCD的羧基反应，特别是在R4*残基位置的末端羧基(在与烷基二胺反应后将成为THSD的L_A连接体的一部分)。同时比较图1A-III所示的DZ1和辛伐他汀的示例性方法。

在实例中，THSD可以是式FIa或FIa的THSD，并且可以选择R1，例如，如下面的说明性列表所示，并且可选地，X可以是选自例如(但不限于)Cl和Br的卤素。

*每个烷基链可以任意地是支链的，并且所述支链可以构成烷基链、芳环、杂芳基、芳烷基中的一个或多个；所述链或分支的一个或多个位置可以是不饱和的。

**R₂和R₃基团可独立地选自H、抽电子基团(EWG)或给电子基团(EDG)。下表进一步指出了示例R₂/R₃组。

在实例中，提供式FIa或FIIa的THSD，其中R₁＝(CH₂)₄-SO₃ ^-和X＝Cl。在实例中，提供式FIa或FIIa的THSD，其中R₁＝(CH₂)₄-SO₃ ^-,X＝Cl和R₂/R₃独立地选择，如下所示。

在实例中，提供了式FIa或FIIa的THSD，其中所述他汀类与THSD的L_E或L_A连接体残基共轭。优选地，他汀类药物通过其开链形式的二羟庚酸单元连接，如图1A-I所示。

在实例中，他汀残基作为残基RS通过其二羟庚酸单元(DHHA)连接到连接体(分别为L_E或L_A,)，通常是3R、5R二羟庚酸单元，后者是关键的药包。DHHA是一种修饰的羟基戊酸成分，其结构类似于内源性底物HMG-CoA。一些他汀类药物以开环酸形式(如阿托伐他汀、氟伐他汀、瑞舒伐他汀、西伐他汀、普伐他汀、匹塔伐他汀)构成该单位，另一些则以闭环内酯形式(如辛伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀)构成该单位。在本发明的THSD中，他汀通过其DHHA单元的末端羧基残基连接到连接体，并固定成与DHHA的“开放酸”形式相对应的形式(如图1A-I)，而不像发生在RRE酯中的链接。

在实例中，可以如下表左栏所示选择他汀类，以提供右栏所示的R_S*残基。

在实例中，THSD包含他汀类药物残留(RS)，其中形成本文所述残留的相应他汀类药物可选自包含辛伐他汀、美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、瑞舒伐他汀、西伐他汀、匹伐他汀以及连接到他汀中的有效连接区域上的其他衍生物。他是他汀的活性结合位点。他汀类是一组结构相关的HMG-CoA类似物，在底物HMG-CoA结合方面竞争性抑制HMG-CoA还原酶。他汀类药物通常通过与酶的活性部位结合来起作用，在空间上阻止底物结合，即各自他汀类药物的HMG-COA部分结合到酶活性部位的HMG-COA结合部分，而酶进行重排，使ST的刚性疏水环结构应提供住宿。

他汀类药物的结构通常由三部分组成：1)HMG-CoA类似物；2)参与酶结合的疏水环结构；3)影响溶解性和药动学性质的环上的侧基(例如辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀和洛伐他汀。他汀类药物相对亲油性，而普伐他汀和瑞舒伐他汀则更亲油性)。

令人惊讶的是，大得多的THSD能够提供一种或多种他汀类药物(降低胆固醇，降低某些癌症的风险)和/或本文所述的附加作用，同时避免一种或多种通常与他汀类药物相关的副作用，或与他汀类药物的联合作用。他汀类药物和一种或一种以上的其他药物/二级活性药物(尤其是化疗药物，如顺铂及其衍生物、吉西他滨、阿霉素、紫杉烷药物，如紫杉醇和多西他赛)以及抗雄激素药物，如阿比拉特龙和苯唑胺)。

与他汀类药物相关的副作用包括但不限于：头痛、针扎、恶心、头晕、嗜睡、胃部不适、呕吐、腹痛、腹部绞痛、腹胀、腹泻、难以入睡、感觉不适、皮疹和罕见、关节痛、关节炎、肌肉痛、压痛、疼痛或虚弱。膝盖(肌痛)、压痛、肌肉痉挛、肌肉发炎、皮肤潮红、白内障风险增加、肝功能异常测试、肝脏问题(肝酶水平升高)、肝衰竭、糖尿病风险增加、骨骼肌损伤、横纹肌溶解症(尤其是他汀类药物与其他药物联合使用时)。具有较高的横纹肌溶解症风险)。他汀类药物的常见副作用包括关节痛、腹泻、恶心、呕吐、腹部绞痛或疼痛、头晕、嗜睡、胃部不适、头痛、难以入睡、肝功能异常、肌肉疼痛、压痛、疼痛或虚弱(肌痛)和肌肉痉挛、皮肤潮红。他汀类药物的严重副作用包括横纹肌溶解症、肝脏问题/衰竭和糖尿病。

与他汀类药物与其他药物组合相关的药物-药物相互作用(DDI)包括但不限于：横纹肌溶解症，例如，由于与其他具有高横纹肌溶解症风险的药物组合，和/或与提高血液中他汀类药物浓度的药物组合。

在实例中，提供了方法，其中一个或多个THSD被给予具有较高肿瘤或癌症发生风险的患者或患者组，以降低其发生癌症或肿瘤的风险，或减缓现有肿瘤的生长或防止现有肿瘤的生长和/或扩散。这些可能包括具有或处于癌症风险增加(特别是肺癌和乳腺癌)的患者/患者组，由生物标记物或风险特征确定，包括环境风险(吸烟、接触化学品、职业接触灰尘)或一种或多种特定癌症的家族史，如乳腺癌。癌症和/或潜在癌前病变的检测，如乳腺结节。

在实例中，提供方法，其中一个或多个THSD被给药通常为降低一个或多个癌症发生风险而处方他汀类的患者组，所述癌症包括但不限于：食管癌、结直肠癌、胃癌、肝细胞癌和前列腺癌。对于这些癌症，他汀类药物和类似的THSD可能与降低癌症风险有关，THSD可能在降低风险的同时避免他汀类药物的副作用。

在实例中，提供了一种方法，其中一个或多个THSD被给予经历(或更高风险)他汀类副作用的癌症患者，例如患有肝病的患者、孕妇和哺乳期妇女。

在实例中，提供了一种方法，其中一个或多个THSD被给予由于他汀类药物与其他药物的药物-药物相互作用而经历(或具有更高风险)副作用的癌症患者。这些患者还包括服用一种或多种可能与他汀类药物相互作用的其他药物的患者，包括但不限于：蛋白酶抑制剂(艾滋病治疗)、克拉霉素、红霉素、伊曲康唑、克拉霉素、地尔硫卓、维拉帕米、葡萄柚汁、烟酸或原纤维药物(也可降低胆固醇低密度脂蛋白水平)。

在实例中，治疗癌症或降低未来癌症风险的方法(例如，通过改善线粒体或溶酶体功能，例如，降低线粒体耗氧率(OCR)、提高细胞外酸化率(“ECAR”)，以及减少或防止去除多泛素化物提供蛋白质)。

在实例中，本文所述的THSD和方法可适用于与以下一种或多种癌症相关的治疗或风险降低：前列腺癌、胰腺癌、肺癌、NSCLC(非小细胞肺癌)、SCLC(小细胞肺癌)、肾癌、淋巴瘤、结直肠癌、皮肤癌、HCC癌和乳腺癌、肺癌鳞状细胞癌、肛门癌、胶质母细胞瘤、头颈部上皮性肿瘤等。非小细胞肺癌可包括鳞状细胞癌、腺癌(粘液性囊腺癌)、大细胞肺癌、横纹样癌、肉瘤样癌、类癌、唾液腺样癌、腺鳞癌、乳头状腺癌和巨细胞癌。小细胞肺癌可包括联合小细胞癌。非肺癌可包括肉瘤、淋巴瘤、未成熟畸胎瘤和黑色素瘤。不希望受理论约束，人们认为THSD对不同类型的癌症、肿瘤及其转移具有广泛的适用性。

在实施例中，THSD可特别有益于治疗肺癌患者或具有高于平均发展肺癌风险的患者(例如吸烟者)。肺癌可能包括两种主要类型的癌症，即非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌。最常见的肺癌是肺腺癌(AC)，它是三种NSCLC类型的肺癌之一(另外两种NSCLC癌症是鳞状细胞癌和大细胞癌)。与小细胞肺癌(SCLC)不同，包括AC在内的非小细胞肺癌通常对包括TKI在内的各种温和的非化疗治疗方案有反应。SCLC是与吸烟关系最密切的一种形式，更难治疗，通常需要化疗，而且在化疗后容易产生耐药性。尽管患者有获得性耐药(如对TKI和/或化疗药物的耐药)，THSD仍允许对其进行治疗，或可避免这些癌症在治疗后产生耐药。

在实例中，提供了通过向表现为脑肿瘤或脑转移的患者施用一种或多种THSD来治疗癌症的方法。THSD可穿过血脑屏障(BBB)，因此其可对各种癌症的脑肿瘤或脑转移(尤其是上文所述的癌症)提供其抗癌作用，所述癌症可根据本文所述的给药方法进行治疗，包括特别是系统给药方法。

在实例中，提供包含一个或多个THSD的药物配方。多个THSD可在单个或相应的多个药物配方中施用。如下文所述，可在协调的给药方案中共同施用多个组合物。所述药物配方可供人或兽医使用，并且包含一种或多种本发明化合物(或其盐、溶剂化物、代谢物或衍生物)，所述化合物具有一种或多种药学上可接受的载体和/或一种或多种赋形剂和/或一种或多种活性剂质。可选择一种或多种载体、赋形剂和/或活性剂，以使其与调配物的其他成分相容，且不会对受体造成不适当的损害。此类载体在本领域内为人所知，并且可以选择在本领域具有普通技能的人看来是显而易见的载体。

在实例中，提供了医药试剂盒。所述试剂盒可包含一个或多个THSD或包含优选以其盐形式存在的THSD的组合物，并且通常为药学上可接受的载体。所述试剂盒还可以进一步包括常规试剂盒组件，例如用于注射所述成分的针、用于混合所述成分的一个或多个小瓶等，对于所属领域的普通技术人员来说是显而易见的。此外，工具包中还可以包含说明，例如作为插入件或标签、指示组件数量、混合组件指南以及给药/协同给药程序。特别地，所述试剂盒可以包括如下所述的协调给药机制中多个THSD的共同给药机制的说明。

在实例中，THSD和药物配方的给药途径可以是系统性的(给药到循环系统以使整个身体受到影响)或局部/组织特异性的，并且可以包括但不限于：口服、腹膜内、皮下、肌肉内、经皮、直肠、阴道、皮下UAL、静脉注射、口腔或吸入。在一些实例中，本发明的药物配方含有适于使所述化合物或混合物通过上述给药途径可给药的药学上可接受的赋形剂。或者，所述化合物和药物配方可以通过泌尿生殖道(例如，通过内部器官、局部病变、皮肤补丁或通过滴注(例如膀胱、阴道导管)进入)或通过着床(例如，环着床)阴道通道给予。

有利的是，在实例中，THSD可以低频率给药给患者，避免了每天或每天多次给药的要求。例如，取决于剂量，剂量可每2、3、4、5、6或7天或更长的间隔给予一次。最好每周给药一次。甚至更长的间隔，如每2、3或4周一次，可能是可能的，取决于每种剂量的THSD的剂量和患者的个体需求，包括期望的抗癌效果的程度，患者的癌症类型和肿瘤生长或/或转移扩散的快度，以及副作用水平的考虑。可接受。不希望受到理论的约束，人们认为这是由于这种新的他汀类衍生物的HMCD紧密结合，使其在癌细胞中长时间存在数天，可能数周或数月，从而在预防副作用的同时提供长时间的抗癌活性。

有利的是，在实例中，ELSD和ALSD可以共同给药，例如在协调的给药计划中给药。特别是，第一次给药的ELSD可随后一个或多个后续维持剂量的ALSD。随后可如上文所述对THSD给药进一步的ALSD剂量，例如每2-7天、每周或每2-4周给药一次。

在实施例中，ELSD和ALSD可以同时或随后在协调的给药计划中共同给药。例如，可在第一时间间隔内首先给予ELSD的加载剂量，然后在第二时间间隔开始时给予ALSD的一个或多个随后的维持剂量。例如，根据给药途径，可向患者给药约0.1mg至约10mg ELSD/kg体重、较佳约0.1mg/kg至约6mg/kg体重(例如约0.1mg至约2.5mg或约0.1mg至约1.0mg/kg体重)的第一量，例如静脉内或口服或通过任何方便的给药方式(加载剂量)。在第一时间间隔内，例如4到72小时，例如约4小时、8小时、16小时、24小时、32小时、48小时或72小时，可将ELSD加载剂量分为多个剂量。有利的是，ELSD的加载剂量低于ALSD的维持剂量。在不希望受到理论约束的情况下，人们认为，与ALSD相比，ELSD在较低浓度下有效，并允许身体先体验THSD效应，而ALSD，尤其是单独使用时，可能需要较高剂量(但较高剂量可能提供与ELSD相比效果更好)。

在实例中，在随后的第二和可选的进一步的后续时间间隔内，可施用一种或多种ALSD维持剂量。例如，一种或多种维持剂量可按每剂约0.1mg至约10mgALSD/kg体重、较佳约1至约10mg/kg的量给药，例如约1至约8mg、约1至约6mg、约1mg至约4mg或约1至约2mg/kg可给药患者，具体取决于ADMI的途径。行政和行政频率。后续剂量可为单一后续剂量，或以相同或不同间隔(例如每日、每日、超过2-7天、每周等)多次后续剂量。优选地，可在第1天施用ELSD加载剂量，并且在第2天约24小时后，可如所述施用一或多个较高的ALSD维持剂量。控制，例如每天或不太频繁的时间间隔。ALSD的每种维持剂量可高于或低于ELSD的加载剂量。ELSD：ALSD的适当比率可包括(例如)从约20：1到约1：20(ELSD：ALSD)，例如约10：1到约1：10(ELSD：ALSD)，例如约1：10、1：9、1：8、1：7、1：6、1：5、1：4、1：3、1：2、1：1、2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1、9：1或约10：1(ELSD：ALSD)。有利的是，ELSD的加载剂量低于ALSD的维持剂量。

或者，在第一时间间隔内，ELSD加载剂量可与ALSD维持剂量同时给予，并且在第二时间间隔开始时，可随后给予一种或多种如上所述的ALSD维持剂量。

另外，ELSD和ALSD可按特定比例联合给药，无论是针对每种剂量(包括第一时间间隔内的第一次剂量)，还是仅针对第二时间间隔开始的维持剂量。该比率可为约20：1至约1：20(ELSD：ALSD))，例如约10：1至约1：10(ELSD：ALSD)，例如约1：10、1：9、1：8、1：7、1：6、1：5、1：4、1：3、1：2、1：1、2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1、9：1或约10：1(ELSD：ALSD)。

令人惊讶的是，与酪氨酸激酶抑制剂(TKI)相比，THSD对体内肿瘤具有类似或更好的生长抑制作用，例如，实例9和图9A1-4。因此，有利的是，THSD可用于给予TKI的患者，这通常与经TKI治疗的癌细胞的药物耐药性快速发展有关；或者，THSD可代替TKI(从而避免耐药性的发展，同时提供类似或更好的生长抑制作用)而给予TKI。与TKI相比)，患者组通常受益于TKI的使用。

TKI是一种抑制酪氨酸激酶的药剂或药物。酪氨酸激酶是通过信号转导级联作用激活许多蛋白质的酶，特别是包括EGFR(EGFR-TKI),ALK(ALK-TKI),和ROS1(ROS-TKI)。例如，蛋白质是通过向蛋白质中添加磷酸基(磷酸化)来激活的，这是TKI抑制的一个步骤。TKI通常用作抗癌药物来对抗各种癌症，以抑制癌细胞的生长(阻止或减缓肿瘤的生长)，和/或诱导细胞凋亡(细胞死亡)，通常导致肿瘤萎缩。涉及相关酪氨酸激酶受体基因(如EGFR,ALK,和ROS1基因)的基因重排事件已被描述在各种癌症中发生，包括肺癌。各种癌症和肿瘤，包括肺(如NSCLC、NSCLC/AC)对TKI有反应，包括一种或多种EGFR-TKI,ALK-TKI和ROS-1-TKI。在所有的TKI中，对癌症患者给予TKI后出现耐药性是很常见的。

TKI，尤其是EGFR-TKI，用于治疗各种癌症，尤其是不限于非小细胞肺癌(NSCLC)。

表皮生长因子受体(EGFR)是ErbB受体家族的成员，是四种密切相关受体酪氨酸激酶的亚家族：EGFR(ErbB-1)、HER2/neu(ErbB-2)、Her 3(ErbB-3)和Her 4(ErbB-4)。影响EGFR表达或活性的突变可导致多种类型的癌症，包括，例如，NSCLC、肺腺癌(AC)、肛门癌、胶质母细胞瘤、头颈部上皮性肿瘤；致癌突变包括EGFRvIII(例如，胶质母细胞瘤)，其他畸变包括扩增或失调。主要激活的EGFR突变包括但不限于L858R突变、外显子19(Del19)和T790M的缺失(Del)；进一步的突变包括，例如，E746-A750缺失、L747-E749缺失、A750P突变和C797S突变等。MET扩增是对EGFR-TKIs包括AZD 9291和CO 1686的另一种耐药机制。

间变性淋巴瘤激酶(ALK)也称为ALK酪氨酸激酶受体，是一种由ALK基因编码的酶。ALK异常在癌症中起作用，包括，例如，间变性大细胞淋巴瘤、NSCLC、肺腺癌(AC)、神经母细胞瘤、炎性肌成纤维细胞瘤、肾细胞癌、食管鳞状细胞癌、乳腺癌(特别是炎性亚型)、结肠腺癌、多形胶质母细胞瘤和间变性甲状腺癌等。

原癌基因酪氨酸蛋白激酶(ROS或ROS1)是一种由ROS1基因编码的酶，其结构与ALK蛋白相似。ROS是一种受体酪氨酸激酶，其结构与间变性淋巴瘤激酶(ALK)蛋白相似。涉及ROS1的基因重排事件已在肺癌和其他癌症中被描述，并且发现这种肿瘤对TKI有反应。

根据肿瘤类型/分级、肿瘤组织学、治疗前、对一种或多种TKI的耐药或各种生物标记物(包括一种或多种TKI的突变或畸变)的不同，THSD可用于癌症患者，尤其是对酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗有反应或可能有反应的癌症患者组。或更多影响细胞酪氨酸激酶受体活性的基因(包括，例如，EGFR、ALK、ROS1和BRAF)。这些患者组通常使用相应的抑制剂进行治疗，包括，例如，EGFR-TKI、ALK-TKI、ROS-TKI和BRAF-TKI。例如，这些患者组包括非小细胞肺癌(NSCLC)，尤其是腺癌(AC)的NSCLC，后者是发病率不断上升的常见肺癌类型。NSCLC患者的一个亚组包含一个特定的致癌驱动因素，即激活EGFR、ALK或ROS1畸变(包括染色体重排、易位或突变)；这些致癌驱动因素似乎几乎只存在于ac。

EGFR-TKI包括但不限于：吉非替尼、伊克替尼、厄洛替尼、布瑞加替尼、达克罗替尼、拉帕替尼、万德他尼、阿法替尼、奥西莫替尼(AZD 9291)、CO-1686、HM 61713、纳扎尔替尼(EGF816)、奥莫替尼、PF-06747775、YH 5448、阿维替尼(AC 0010)、罗基替尼和西妥昔单抗；用于治疗各种癌症，包括部分癌症。肺癌，非小细胞肺癌，结肠癌，转移性结直肠癌，头颈癌等。

根据其机理，EGFR-TKI可分为三组：第一代、第二代或第三代TKI/EGFR-TKI。第一代EGFR-TKI的示例包括，例如吉非替尼、埃克替尼和埃罗替尼。第二代EGFR-TKI的示例包括，阿法替尼和达克罗替尼。第二代EGFR-TKI通常不可逆地结合到EGFR和其他ErbB族类的酪氨酸激酶。用于第二代EGFR-TKI的用途包括，例如，对含有激活EGFR突变的晚期NSCLC的一线治疗。第3代EGFR-TKI的示例包括，例如，奥希替尼(AZD9291)、Co-1686、HM61713、纳扎替尼(EGF816)、奥姆替尼、PF-06747775、阿法替尼阿维替尼(AC0010)和罗基替尼。

所有世代的TKI都表现出治疗肿瘤/癌细胞产生耐药性的趋势，第二代和第三代药物通常用于治疗相关基因突变的癌症，特别是表皮生长因子受体(EGFR)基因，和/或显示出对第一代TKI的耐药性。分组是基于机制和相应的患者组，它们可能最能从药物中获益，也可能确定产生耐药性的风险，例如，产生一个或多个不同的突变，特别是EGFR突变，或允许绕过EGFR相关机制的突变。第一代EGFR-TKI是有效的，例如，作为含有激活EGFR突变(外显子19(Del19)和外显子21L858R突变)的晚期非小细胞肺癌的一线治疗；在这些患者中出现了更多的突变，特别是EGFR T790M耐药突变(EGFR T790M)。第2代和第3代EGFR-TKI的设计是为了改进第一代药物，尤其是为了更有效地抑制EGFR和/或克服患者产生的各种突变，特别是在第一代治疗后，如EGFR T790M。

令人惊讶的是，THSD能够绕过TKI耐药并提供生长抑制，例如在实例9和图9A1-4中，对于由TKI耐药的人类癌细胞在体内建立的TKI耐药的肿瘤；因此，THSD可能在表现出这种耐药的患者组中有效，特别是在具有以下特征的患者和患者组中有效：使用TKI抑制剂的麦角碱疗法，包括第一代、第二代或第三代的TKI抑制剂，尤其是适合或曾经接受过第三代TKI抑制剂治疗的患者，或具有TKI或第三代TKI耐药性的肿瘤的患者。如实例9所示，这种规避TKI耐药可能不需要共同施用TKI(尽管对于给定的TKI，共同施用可能有益)。因此，单独使用THSD可能有效地抑制易产生耐药性的癌症，特别是肺癌，包括但不限于NSCLC。特别是，单独使用THSD(即不使用TKI)可有效地在非小细胞肺癌中提供生长抑制，作为第三代EGFR抑制剂的替代治疗，尤其是奥西莫替尼(AZD 9291)或奥西莫替尼治疗后，尤其是在产生耐药性后。

第一代EGFR-TKI的示例包括吉非替尼和埃罗替尼。第二代EGFR-TKI的例子包括阿法替尼和达克罗替尼。第二代EGFR-TKI通常不可逆地结合到EGFR和其他ErbB族类的酪氨酸激酶。用于第二代EGFR-TKI包括一线治疗晚期NSCLC激活EGFR突变。第三代EGFR-TKI可包括但不限于以下一种或多种：奥西莫替尼(AZD9291)、罗氏替尼(CO-1686)、HM61713、纳扎尔蒂尼(EGF816)、奥莫蒂尼(HM61713)、PF-06747775、YH5448、阿法蒂尼、阿维蒂尼(AC0010)和ASP8273。第3代EGFR-TKI通常对产生第1代或第2代TKI耐药患者有效。第三代EGFR-TKI通常是具有选择性的EGFR突变体和保留的EGFR野生型细胞(WT)，即它们对EGFR突变体细胞的活性大于对EGFR野生型(WT)细胞的活性，例如至少10、100、200倍或更多的活性。此外，第3代EGFR-TKI对EGFR激活和抗性突变(尤其是T790M抗性突变)都具有活性或抑制作用。例如，第3代EGFR-TKI(如奥西莫替尼、CO-1686和HM61713)可选择性地和不可逆地导向致敏/激活EGFR突变和T790M抗性突变，同时保留野生型EGFR酪氨酸激酶。

奥西美替尼是一种单苯胺基嘧啶，选择性和不可逆地导向致敏EGFR突变和T790M耐药突变，同时保留野生型EGFR酪氨酸激酶。具体地说，奥希替尼在抑制野生型细胞系中的EGFR磷酸化方面的作用要小得多，例如，对L858R/T790M的抑制作用是野生型EGFR的100-200倍，用于治疗产生耐药性或有产生耐药性倾向的癌症，尤其是非小细胞肺癌。

在实例中，THSD可如本文所述给药具有对TKI产生耐药性的癌症患者，以抑制癌细胞的生长，同时避免其产生耐药性。这些癌症包括晚期表皮生长因子受体(EGFR)、ALK和/或ROS1突变阳性肿瘤，这些肿瘤常见于非小细胞肺癌(NSCLC)。

因此，可能特别受益于THSD给药的患者组可包括那些具有EGFR、ALF或ROS1的激活突变和/或EGFR、ALF或ros1的抗性突变的患者，尤其包括在用TKI、EGFR-、ALF-或ROS1-TKI治疗期间获得的突变，包括第一代、第二代或第三代TKI或EGFR-TKI。例如，产生T790M EGFR突变的患者在接受一线EGFR-TKI治疗后进展的晚期非小细胞肺癌患者中很常见，例如第1代或第2代EGFR-TKI。

具体来说，THSD可用于通常使用ALK-TKI(对ALK酪氨酸激酶受体或CD246的抑制剂)治疗的患者组，以避免产生耐药性。与其他TKI一样，对ALK-TKI的抗性也很常见。此外，THSD可在使用ALK-TKI治疗后给患者服用，以克服获得的对ALK-TKI的耐药性。患者组包括那些患有遗传性ALK异常阳性癌症的患者，如转移性NSCLC。患有ALK阳性癌症的患者组，特别是NSCLC，通常包括不吸烟者、年龄较小的患者、腺癌组织学、女性和/或具有包括实体形态和/或有印戒细胞的病理特征的患者。

ALK畸变可能包括导致聚合基因的染色体重排，如在ALCL和NSCLC中所见。其他变化包括ALK复制数增加和激活ALK突变。众所周知，ALK突变或易位等畸变发生在各种癌症中，包括，NSCLC、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、炎性肌成纤维细胞瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、结肠癌、肾细胞癌、乳腺癌、食管癌和神经母细胞瘤。

ALK-TKI的实例包括，布瑞加替尼、克唑替尼、西替尼、阿来替尼和恩替尼(RXDX-101)。克唑替尼(PF-02341066)是第一代ALK-TKI，用于ALK阳性NSCLC和ROS1阳性NSCLC，尤其是局部晚期和/或转移性NSCLC。它有一个IC₅₀对抗250-300nm的EML4-ALK。例如，色瑞替尼用于ALK阳性转移NSCLC。

同样，THSD可用于ROS-TKI(原癌基因酪氨酸蛋白激酶ROS或ROS1抑制剂)治疗的患者组。患者组包括那些对基因ROS1畸变如聚合或突变(如转移性NSCLC)呈阳性的癌症患者，以及对ROS-TKI治疗产生耐药性的患者。可用于对ROS1异常呈阳性的癌症包括，但不限于：成胶质细胞瘤、肺癌，包括肺腺癌、卵巢癌、卵巢癌、肉瘤、胆管癌、胆管肉瘤、炎性肌成纤维细胞癌、胃癌、结直肠癌、痰盂样黑色素瘤、血管肉瘤等。

ROS-1抑制剂的实例包括，环唑替尼、恩替尼、洛拉替尼(PF-06463922)、西替尼、TPX-0005、DS-6051b和卡波扎替尼。环唑替尼用于转移性ROS1阳性NSCLC)。卡波扎丁尼用于转移性髓样甲状腺癌和肾细胞癌。

一些TKI适用于治疗多种恶性肿瘤机制，可用于多个患者组，例如那些EGFR阳性、ALK阳性或ROS/ROS1阳性(EGFR+、ALK+、ROS+)的患者，即具有影响这些编码各自酪氨酸激酶酶的基因的遗传畸变的患者。例如，恩特雷替尼(Entritinib)是含有三种TRK蛋白(分别由三个NTRK基因编码)以及ROS1和ALK受体酪氨酸激酶的TKI。类似地，环唑替尼抑制ALK和ROS1。

在实例中，活性成分(THSD和可选的次要药物/活性剂质，例如化疗或抗雄激素)可与常规的、药学上可接受的赋形剂混合或复合。给药机制、载体、赋形剂或载体通常应在活性方面基本上是惰性的，本领域的普通技术人员将理解这一点。例如，在Remington'sPharmaceutical Sciences,18th ed.(1990)中介绍了说明性方法、载体、赋形剂和载体，其公开内容以引用方式并入本文中。赋形剂必须是“可接受的”，即与配方的其他成分相容，且对受体不有害。

在实例中，THSD(或ELSD与ALSD的组合，如上文所述联合给药)可与其他药物同时或随后以协调施用时间表联合给药。与THSD共同给药的这类药物尤其包括在单独给药时容易诱导药物耐药性的药物，例如化学疗法，例如顺铂及其衍生物、吉西他滨和阿霉素、抗雄激素药物，例如阿比拉特龙和恩杂鲁胺，以及紫杉烷药物，例如，多西紫杉醇和紫杉醇。在不希望受到理论约束的情况下，雄激素阻断与THSD治疗相结合可能提供一种附加或协同的治疗效果。

在实例中，用于共给药的紫杉烷(也称为类紫杉烷)在结构上是一类二萜类，最初从紫杉属植物(紫杉木)中鉴定出来，并且是用于化疗的药物；它们包含紫杉烯核，通常为6/8/6或6/10/6成员的核环。紫杉醇可包括多西紫杉醇(taxotere)、紫杉醇(taxol)、卡巴地紫杉醇中的一种或多种。它们还可以包括一个或多个阿伯他xane，即一类具有非常规的核心5/7/6型环结构的类群分子，例如，但不限于紫杉素A。常规紫杉烷的核心碳骨架具有6元的A环、8元的B环和6元的C环，组合在一起。对于传统的侧链，阿伯他xanes包含三个改变的环结构，一个5元的A环，7元的B环和6元的C环(与传统的侧链结合)。除紫杉醇A外的11(15→1)个阿伯他xanes还包括短维叶酸和TPI287(以前的ARC-100)。其他的紫杉醇包括紫杉醇B(一种11(15→1)的具有一个牛烷环的Obeotaxoid)。

在实例中，可通过医药领域中众所周知的各种方法以单位剂型方便地制备医药制剂，例如以适于递送的形式呈现所述制剂，例如形成水悬浮液、配制片剂或将粉末封装到胶囊中，例如，在消化的特定时间、阶段或位置释放粉末，和/或保护粉末免受胃酸的影响。所述剂型可以任意地包含一种或多种用于所述制剂的佐剂或辅助药物成分，包括但不限于混合物、缓冲剂和增溶剂。

在实例中，药物制剂的非肠道剂型(即绕过胃肠道的剂型)包括但不限于准备注射的溶液、准备溶解或悬浮在药物上可接受的注射用载体中的干燥产品、准备注射的悬浮液和乳液。此外，可制备受控释放的非肠道给药形式，用于向患者给药，包括但不限于用于全身或组织特异性递送的缓释片、药片或胶囊、

-型和其他可植入的给药形式。

在实例中，可用于提供非肠道剂型的适宜载体包括但不限于：无菌水；注射用水；盐水；葡萄糖溶液；水性载体(例如氯化钠注射液、林格注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化钠注射液和乳酸林格注射液)；水溶性载体(例如乙醇、聚乙二醇和丙二醇)；和非水性载体(例如玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯)。改变或修改如本文所公开的本发明化合物的药学上可接受的盐的溶解性的化合物也可并入本发明的非肠道剂型中，包括常规和受控释放的非肠道剂型。

在实例中，用于非经肠给药的调配物包括水性和非水性无菌注射溶液，其可进一步含有其他药剂，例如抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，使调配物与预期受体的血液等渗。所述制剂可包括含悬浮剂和增稠剂的水性和非水性无菌悬浮液。

在实例中，可无菌注射制剂，例如，可注射的水性或油性悬浮液，可以如本领域众所周知的那样配制，例如，使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂。所述可注射制剂包括可注射溶液、悬浮液或乳状液，所述可注射溶液、悬浮液或乳状液位于无毒的非肠道可接受的稀释剂或溶剂中，例如1,3-丁二醇中的溶液。可接受的载体和溶剂包括水、林格溶液、和等渗氯化钠溶液。此外，无菌固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可使用任何温和的固定油，包括合成单甘油或甘油三酯。此外，油酸等脂肪酸也用于制备注射剂。

在实例中，用于直肠或阴道施用的组合物包括栓剂，其可通过将活性剂与适宜的非刺激性赋形剂或载体混合来制备，所述赋形剂或载体在室温下呈固体，但在体温下呈液体，因此在直肠或阴道腔(例如可可脂、聚乙烯聚糖)中熔化来释放活性剂。

在实例中，适于经口或舌下给药的剂型包括如所属领域内众所周知的制备的片剂、药片、胶囊、丹药、悬浮液、糖浆、薄饼、口香糖等。此类剂型中的活性量可有普通技术人员进行调整，取决于所需的给药频率以及是否制备缓释制剂。糖浆配方通常由活性剂质或其盐在液体载体(例如，乙醇、甘油或水)中的悬浮液或溶液和调味剂或着色剂组成。

在实例中，用于口服的固体剂型包括，胶囊、片剂、药丸、粉末和颗粒。在这种固体剂型中，活性剂与至少一种惰性物质混合：a)填充物、延长剂或稀释剂(例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、硅酸及其混合物)，b)粘合剂(例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、阿拉伯胶及其混合物)，c)保湿剂(例如甘油)，d)崩解剂(例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉、木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐、碳酸钠及其混合物)，e)溶液缓凝剂(例如石蜡)，f)吸收促进剂(例如季铵化合物及其混合物)，g)润湿剂(例如十六醇、甘油单体硬脂酸盐及其混合物)，h)吸收剂(例如高岭土、膨润土及其混合物)和i)润滑剂(例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物)及其混合物。此类剂型还可包括其他物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素，或缓冲剂，尤其是胶囊、片剂和药丸中的缓冲剂。

在实例中，类似的固体成分也可用作软硬填充明胶胶囊中的填充物，使用赋形剂，例如乳糖或高分子量聚乙烯二醇。或者，活性剂可以微胶囊形式与一种或多种赋形剂共同给药。

各种固体剂型(例如，片剂、拉剂、胶囊、药丸和颗粒)可与包衣和外壳(例如肠溶包衣、控释包衣和其他在药物配方技术中众所周知的包衣)一起制备。它们可以任意地含有遮光剂，并且也可以是其仅在或优先在肠道的某一部分以延迟方式释放活性剂的组成。可用于延迟或延长释放的包埋药剂包括聚合物质和蜡。

在实例中，所述活性剂可以盐的形式存在，所述盐可以特别适合用于治疗癌症。根据给药途径、所涉及的盐和所治疗的癌症，本发明的盐可以多种形式给予患者。例如，盐的水性组分或悬浮液可以系统地或通过特定组织注射(例如通过注射或外科植入以药物基质的形式)在所需位置。例如，对基体给药的特定技术可能取决于所涉及基体的形状和尺寸。在一些实例中，盐基本上均匀地引入肿瘤中，以减少肿瘤在冷(未处理)区域中的发生几率。在某些实例中，盐与药学上可接受的载体组合施用。可提供各种医药上可接受的载体并可与盐组合，如本领域普通技术人员所显而易见。

在实例中，活性和/或其剂型的有效量、毒性和治疗效果可通过细胞培养物或实验动物中的标准药物程序来确定，例如，测定LD₅₀(导致半数人口死亡的剂量)和ED₅₀(对半数人口具有疗效的剂量)。剂量可根据使用的剂型和使用的给药途径而变化。毒性与治疗效果的剂量比是治疗指标，可表示为LD50/ED50的比值。从细胞培养分析可以初步估计治疗有效剂量。此外，还可以在动物模型中配制剂量，以确定循环血浆浓度范围，包括细胞培养中测定的IC₅₀，即，本发明化合物的浓度，其在癌症情况下(例如，抑制癌细胞的生长)达到症状的半数最大抑制)。除了通过细胞培养外，也可采用动物模型，特别是哺乳动物，包括小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、猪、狗和其他动物。血浆中的水平可通过高效液相色谱法(HPLC)测量。任何特定剂量的作用可通过医药领域中众所周知的生物测试方法来监测。

在实例中，如本文所述的药物制剂的剂量可由医生确定并根据需要进行调整以适应所观察到的治疗效果。关于治疗的持续时间和频率，熟练的临床医师通常会监测受试者，以确定治疗何时提供治疗益处，并确定是否增加或减少剂量、增加或减少给药频率、停止治疗、恢复治疗或做出其他改变。治疗方案。给药时间表/方案可能会有所不同，例如，每周一次、每天一次或特定的预定间隔，这取决于许多临床因素，包括受试者对每种活性剂的敏感性。

在实例中，包含一个或多个活性剂(即一个或多个THSD、ALSD和ELSD，任意地与一个或多个其他/次要药物组合)的药物配方可以在体内或体外以有效剂量给药患者或患者的肿瘤、癌症或癌前细胞，具体来说，给药到抑制肿瘤、癌症或癌前细胞中，或抑制癌细胞生长，或任意地诱导细胞凋亡，从而治疗癌症或肿瘤，或降低癌症发生的风险或肿瘤增加其生长的风险，例如在癌症和/或肿瘤发生风险高于平均风险的特定患者组中。一种或一种以上活性剂可同时给药，或可根据特定给药方案给药，例如如上文所述。给药方案通常考虑诸如血液中活性剂质的浓度和每种活性剂质的半衰期等因素，这对于一个具有普通技能的人来说是显而易见的。

在实例中，包含一个或多个活性的药物配方的有效剂量可以对患者施用一次或多次。所述药物配方还可以在一段时间内施用，例如在5分钟、10分钟、15分钟、20分钟或25分钟的时间内施用。如有必要，可定期重复给药，例如每小时3小时、6小时、12小时或更长时间，或每两周(即每两周)一个月、两个月、三个月、四个月或更长时间。在某些情况下，在最初的治疗方案之后，随后的治疗可以在较不频繁的基础上进行。例如，每两周给药三个月后，可以每月重复给药一次，持续六个月或一年或更长时间。可相应地调整包含一个或多个在协调的给药时间表中活性的组分的给药，以确保暴露于多个活性剂，例如同时暴露于两个或多个活性剂(例如ALSD和ELSD，或一个或多个THSD和二级药物)，例如降低生物标记的水平或一个或多个症状结果，例如癌症或肿瘤细胞生长抑制、肿瘤生长抑制、肿瘤体积/肿瘤收缩减少、转移酶形成减少或其风险降低。

在实例中，两种或两种以上的活性剂可依次给药；例如，在第二种活性剂给药前的一段时间内，可一个接一个地给药ELSD和ALSD，例如，在ALSD之前的ELSD，反之亦然。最好是，可于ALSD给药前数天、一天、数小时或数分钟给药ELSD(或反之亦然)。例如，这段时间可能是大约20-24小时之前、大约15-20小时之前、大约12-15小时之前、大约10-12小时之前、大约8-10小时之前、大约2-8小时之前、大约1-6小时之前、大约1-4小时之前、大约1-3小时之前、大约1-2小时之前、大约0.5-1.5小时之前或大约45分钟。大约30分钟，或在第二次给药前15分钟。同样和/或另外，一个或多个THSD(ELSD和/或ALSD，同时或顺序)可在给药第二药物之前给药，反之亦然。

在实例中，一个或多个活性剂的量和/或浓度可取决于特定制剂的典型剂量及其给药途径，并且可适于使肿瘤、癌症或癌前细胞暴露于约0.1到约100μm的浓度下。对于ALSD，例如DZ2a，所述浓度可为约0.5至约50μm，例如约16μm，且可与约0.5至约50μm之ELSD(DZ2b)组合，例如约16μm。所有量及浓度将需要适应包括个别患者之环境、癌症类型及治疗持续时间等因素，这对于普通专业人士而言是显而易见的。

在实例中，药物配方中一种或多种活性剂质的量和/或浓度可基于重量、摩尔数或体积。在实例中，药物配方可包含约0.01％-99％、0.05％-90％、0.1％-85％、0.5％-80％、1％-75％、2％-70％或3％-65％、4％-60％或5％-50％的活性剂。所述药物配方可包含每种活性剂的至少0.0001％、至少0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％或至少15％。或者或另外，所述药物配方可最多包含每种活性剂约0.0001％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％或15％的最大值。

在实例中，提供了癌症治疗或细胞抑制(抑制癌细胞或癌前细胞的生长或发育、肿瘤收缩)和识别/定位(例如通过成像，特别是NIR成像)的双功能方法。其中，所述癌细胞、癌前细胞或肿瘤被额外识别、成像和/或定位于需要所述治疗的患者中。该方法可包括提供一个或多个THSD并将其给药患者，以及对一个或多个THSD执行光学成像。该方法可包括提供一个或多个ELSD并将其给予任何患者或依序进一步给予一个或多个ALSD的患者；以及为ELSD或ALSD或两者进行光学成像。最好是，ALSD及ELSD均以协调的给药时间表给药，且光学成像系在至少一种ALSD及ELSD给药后实施。最好是，第一加载剂量是ELSD的剂量，并且成像可以在ELSD给药后进行，或者可以在ELSD的一个或多个后续剂量或可选ALSD之后进行。这可以直观地跟踪细胞生长抑制或治疗的进展(例如肿瘤、癌细胞或癌前病变的生长停滞、消失或收缩)，进而调整一个或多个THSD和可选的次要活性剂的剂量，和/或确定肿瘤和/或转移的位置。THSD的近红外光谱区域。在各种实例中，可实施成像，例如，给药后约6至48小时，例如，不限于注射。可通过比较癌/肿瘤细胞的近红外信号与成像正常组织/细胞确定的背景信号来进行成像。

在实例中，提供对肿瘤、癌症或肿瘤细胞或正常细胞或组织中的活性剂进行原位药代动力学和药效动力学分析的双功能方法。该方法可包括提供一个或多个THSD；将其与癌症/肿瘤细胞或肿瘤接触，或与正常细胞或正常组织接触；并且随后成像暴露于THSD的细胞，随后进行药代动力学和/或药效学分析，例如测定荧光(或其变化)随时间的变化。

示例性实例

下面的实例1A-II-IV描述了ALSD和ELSD的在所介绍的实例中的合成方法，包括合成HMCD染料及其与他汀类药物的结合，例如与辛伐他汀结合的DZ1，在生成的THSD(DZ1-SIM-ALSD，DZ1-SIM)中形成L_E/L_A连接体。对于与ELSD的比较实例，在实例1A-V中，描述了快速释放酯DZ1-SIM RRE(不含L_E/L_A连接体，并且连接到允许内酯形成的他汀类)的合成。作为DZ1的替代品，可以选择与FIa或FIIa的染料部分相对应的另一个HMCD，这对于一个普通技术人员来说是显而易见的。类似地，辛伐他汀可被另一种他汀类药物替代，并且可选择替代试剂以产生替代稳定的L_E/L_A连接体，这对于一个普通技术人员来说是显而易见的。与所述合成方法相对应的反应示意图如图1A-II、A-III和A-IV所示。

实例1A-I/一般合成方法：辛伐他汀购自Ark Pharm，Inc.(伊利诺伊州阿灵顿高地)。所有其他化学品和试剂都是从标准来源(如SigmaAldrich)购买的，质量最好。用于制备溶液的去离子水(18.2Ω)来自Millipore(美国马萨诸塞州比勒里卡)的Milli-Q直接超纯水系统。所有中间体均采用核磁共振氢谱和质量分析法进行了表征，并用高效液相色谱法对其纯度进行了分析。使用标准参数在Bruker 400MHz分光仪上收集1H核磁共振数据；化学位移以ppm(δ)表示，参考残余非氘化溶剂。利用Thermo-Fisher LTQ Orbitrap Elite系统在Mass Spectrometry andBiomarker Discovery Core(质谱和生物标记发现核心)设施中对新化合物进行ESI质谱分析。在下文中，使用以下缩写或公式：乙酸(“HOAc”或“CH₃COOH”)、乙醇(“EtOH”)、甲醇(“MeOH”)、当量(“eq.”)、室温(“RT”)、乙酸钠(“NaOAc”或“CH₃COONa”)、碳酸氢钠(“NaHCO₃”)、羟基苯并三唑(“HOBT”)、3-1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(“EDC”)、4-二甲基氨基吡啶(“DMAP”)、二氯甲烷(“CH₂Cl₂”)和对甲苯磺酸一水合物(“甲苯磺酸一水合物”或“TsOH”)。

实例1A-II：HMC染料的合成(如DZ1所示)。反应示意图如图1A-II所示。显示了一种HMCD(此处为DZ1)，为一种连接染料的活性羧基。对于DZ1，残基R₁和R₂为H，R₃为-(CH₂)₄SO₃H，R4*(将成为L_E/L_A连接体的一部分)为-(CH₂)₅COOH。为了为R₁、R₂和R₃生成具有不同残基的THSD，可以选择不同的HMCD析出物，并且可以根据反应示意图相应地选择改性析出物，包括相应的所需残基。

化合物1a(化合物1，其中R₃＝-(CH₂)₄SO₃H)的合成：在120℃氩搅拌5h的同时，加热2，3，3-三甲-3H-吲哚(5g，31.4mmol)和1,4-丁烷磺酸内酯(5.1g，37.7mmol)的混合物，将所得混合物冷却到室温，使固体溶解在50毫升甲醇中。将乙醚(200ml)添加到甲醇溶液中，收集沉淀并用乙酸乙酯(15ml，3次)洗涤，真空干燥，得到白色固体形式的所需产物(化合物1a，6.8g，收率73％)。

化合物1b(化合物1，其中R＝-(CH₂)₅COOH)的合成：向6-溴己酸(2.5g，13.0mmol)，加入2，3，3-三甲基3H-吲哚(2.5g，15.7mmol)。将反应混合物在110℃下在氩中搅拌8h，同时加热。将所得暗红色固体溶解于50ml甲醇中。加入乙醚(150毫升)。过滤沉淀并用乙醚(15ml，3次)和丙酮(15ml，3次)洗涤。所得产物为白色固体(化合物1b，2.7g，58％)。

化合物3的合成：向EtOH(100ml)中由1a(2g，6.78mmol)与化合物2(3g，8.36mmol)组成的混合物中，加入乙酸钠(0.56g，6.78mmol)。将所得混合物加热回流3h。将反应混合物倒入200ml冰水中。收集形成的沉淀并从乙醇-丙酮结晶，得到呈深蓝色固体的所需产物(化合物3，2.1g，收率58％)。质谱(ESI)525.19[M+H]⁺。

化合物4(“DZ1”)的合成：向EtOH(20ml)中由1b(0.67g，1.9mmol)和化合物3(1.0g，1.9mmol)组成的混合物，加入CH₃COONa(156mg，1.9mmol)。将所得溶液加热回流3h。将加热后的混合物倒入100ml冰水中。将固体过滤并从甲醇-水结晶，得到呈深绿色固体的所需产物(化合物4，0.99g，收率74％)。质谱(ESI)705.31[m+h]+。

实例1A-III：稳定ALSD的合成(此处：分子式为FIId或“DZ2a”的DZ1-SIM，化合物7)：图1A-III为反应示意图。可以生成ALSD(此处使用DZ1/化合物4作为HMCD染料，辛伐他汀/化合物5作为他汀类药物)，使二胺(例如丙烷-1,3-二胺)与他汀类药物反应，以将所得他汀类药物中间体(例如化合物6)连接到染料羧基，并形成基本稳定的“零释放”ALSD(化合物7)。为了形成分子式FIIa的替代ALSD，即根据需要具有不同的R₁、R₂、R₃和R₄*残基(将成为L_E/L_A连接体)，应相应地选择析出物以形成所需的各自残基，这对于具有普通技能的人来说是显而易见的。

他汀类中间体(化合物6)的合成：向乙腈中的辛伐他汀(化合物5，1g，2.39mmol，当量1)溶液中加入丙烷-1,3-二胺(1ml，11.95mmol，当量5)。将混合物加热至回流连续搅拌4h，减压除去溶剂，在高真空下干燥过夜。使用所得产物(化合物6)而不进一步纯化。

DZ1-SIM-ALSD(“DZ2a”，化合物7)的合成：将具有羧基的HMCD，例如DZ1(化合物4，500mg，0.71mmol)、1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺盐酸盐(204mg，1.07mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(115mg，0.85mmol)溶解于10.0ml CH₂Cl₂溶液中，形成混合物。将混合物搅拌，例如约15分钟，然后添加化合物6(350mg，0.71mmol)并搅拌，例如在室温下额外搅拌2小时。在减压下去除溶剂并纯化产物，例如通过C18-RP反相硅胶色谱法用甲醇-水洗脱，得到的所需产物7作为深绿色固体(化合物7，327mg，39％)。质谱(ESI)1179.65[M+H]⁺。

实例1A-IV：通过羧基染料(此处为DZ1)与乙醇胺反应，合成与他汀(辛伐他汀)连接的DZ1基ELSD。图1A-IV为反应示意图。可以生成ELSD(此处使用DZ1/化合物4作为染料，辛伐他汀/化合物5作为他汀类药物)，通过胺(例如乙醇胺)与染料羧基反应，生成染料中间体(例如化合物9)。然后，染料中间体可以与他汀类药物的二羟基庚酸(DHHA，–CO-CH₂-CHOH-CH₂-CHOH-CH₂-CH₂)他汀单元(在辛伐他汀/化合物5的情况下，在DHHA的闭合环内酯形式转化为具有两个羟基保护剂的开链羧酸形式后，即化合物12)反应，形成基本稳定的“缓释”ELSD(化合物14，“DZ2b”)。替代他汀类可相应地与染料中间体反应，例如具有开链羧酸DHHA他汀类(如化合物12所示，对比图1A-IV)可直接与染料中间体反应。为了形成分子式FIa中的替代ELSD，即，根据需要具有不同的R₁、R₂、R₃和R_4*残基(将成为L_E/L_A连接体的一部分)，根据需要选择不同的析出物来形成各自的残基，这对于一个具有普通技能的人来说是显而易见的。

DZ1-羟乙基酰胺(化合物9)的合成：将染料(其中：DZ1，化合物4，600mg，0.85mmol)、1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺盐酸盐(245mg，1.28mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(138mg，1.02mmol)溶解于10.0ml CH2Cl2溶液中。将所得混合物搅拌15分钟，然后在室温下添加乙醇胺(57mg，0.94mmol)并搅拌额外2小时。在减压下去除溶剂并且通过C18-RP反相硅胶色谱法纯化产物，用甲醇-水洗脱以提供所需的ED产物(化合物9)为深绿色固体331mg(52％)。质谱(ESI)749.34[M+H]⁺。

他汀类甲基酯的合成(此处：辛伐他汀的甲基衍生物，化合物10)：在0℃下向辛伐他汀(化合物5，418mg，1mmol)的甲醇溶液(20ml)中添加硫酸200μl，在室温下搅拌5h，并添加10ml 10％NaHCO₃以抑制反应。用乙酸乙酯萃取所得混合物。用饱和盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)，并在低压下去除溶剂。粗品用硅胶色谱法(乙酸乙酯∶己烷＝2：1)纯化，得到化合物10(387毫克，86％收率)。

化合物11的合成：2,2-二甲氧基丙烷(1.3ml，1108mg，10.639mmol)的合成物添加到化合物10(300mg，0.666mmol)、对甲苯磺酸一水合物(13mg，0.067mmol)存于二氯甲烷(10ml)中的溶液中。在回流下将该溶液搅拌2h，然后添加10％NaHCO₃(5ml)以抑制反应。用二氯甲烷萃取所得混合物。用饱和盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)，并在低压下去除溶剂。粗品用硅胶色谱法(乙酸乙酯∶己烷＝1：2)提纯，得到化合物11(301毫克，92％收率)。

合成具有羧基的他汀类衍生物，化合物12：NaOH(1M，1ml)加入到化合物11(300mg，0.600mmol)的四氢呋喃溶液(4ml)中。将所得混合物在室温下搅拌18h，然后添加1M HCl(1.2ml)，然后用二乙醚萃取。用饱和盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，蒸发得到化合物12(274mg，94％收率)。质谱(ESI)499.30[M+Na]⁺

ELSD(此处为：DZ1-SIM ELSD，化合物14，“DZ2b”)的合成：将具有羟基的染料中间体(化合物9，25mg，0.033mmol)和具有羧基的他汀类衍生物(SIM衍生化合物12，16mg，0.034mmol)溶解于3ml无水CH₂Cl₂中。向所得溶液中加入EDC(9.5mg，0.049mmol)，再加入DMAP(2mg，0.017mmol)，在室温下搅拌所得混合物18小时，将该混合物在乙醚中粉碎，残余物用80％水性HOAC(3ml)处理2小时。采用半制备高效液相色谱法纯化，得到产物化合物14(14mg，36％)。质谱(ESI)m/z 1166.62[M+H]⁺。

比较实例1A-V：DZ1-SIM快速释放酯(RRE)的合成和与ELSD(此处：DZ1-SIM)的稳定性比较。如下文所述合成了一种快速释放酯(RRE)，将DZ1与辛伐他汀(DZ1-SIM RRE或“DZ2c”，化合物8)连接起来，并与ELSD(此处：DZ1-SIM或“DZ2b”，化合物14，如上文所述合成)进行比较测试。两种化合物均在小鼠血清中在37℃孵育3小时，然后取样品，并通过测试未偶联的他汀类药物来测试偶联物的降解，如下面的实例6所述(带正离子的LC-MS/MS-025、ESI、MRM检测和HPLC)。与8(RRE)相比，ELSD表现出更高的稳定性(即从偶联物中减少他汀的降解/释放)；具体来说，ELSD的量是在时间0和时间3h时测量的。每个样品的时间0的值为100。在3h时，ELSD的值为100(即无降解/释放)，而在3h时，RRE的值为10(即降解90％)。

DZ1-SIM-RRE(化合物8，DZ2c)的合成：将DZ1(化合物4，500mg，0.71mmol)和辛伐他汀(化合物5，356mg，0.85mmol)溶解于10ml无水CH₂Cl₂中。向所得混合物中添加EDC(204mg，1.06mmol)，然后添加DMAP(40mg，0.33mmol)，在室温下将所得EDC/DMAP混合物搅拌18h。反应混合物在乙醚中破碎，残余物溶解在2ml甲醇中。粗品经C18-RP反相硅胶色谱纯化，甲醇-水洗脱，得到所需的DZ1-SIM-RRE产物(化合物8，329mg，42％)。质谱(ESI)m/z 1105.57[M+H]⁺。

下文所述实例1b-E中所测试药物的配方如图1A-IV所示。总之，下文所述实例中所述的实验证明，在体外和体内对各种癌细胞的生长抑制有所改善，尤其是肿瘤收缩/体积减小。与他汀类(此处为辛伐他汀或“SIM”)或未偶联染料(此处为“DZ1”)相比，ALSD(此处分子式为FIId，“DZ2a”，化合物7)在小鼠体内生长的人类肿瘤。

方法示例1b-E：

细胞培养：在以下的例子中，除非另有说明，所有细胞系都是从美国标准菌库中购买的，并在美国标准菌库(ATCC)推荐的介质中培养，使用终浓度为10％的胎牛血清(FBS)和1×的青霉素/链霉素。除非另有规定，在37℃条件下，用5％的二氧化碳在细胞培养箱中培养链霉素。除非另有规定，培养物为2D。如果培养物为3D，则使用低附着板和相同介质。C4-2B(来源于亲代细胞系和由此衍生的耐药细胞)在含有10％FBS的RPMI-1640中培养。培养MDVR细胞(如下文实例4中所述形成的一种抗酶活性剂质C4-2B前列腺癌细胞)，按照亲本C4-2B细胞所示培养。22Rv1前列腺癌(PC)细胞(

CRL-2505^TM，一种具有上皮形态的人类前列腺癌细胞系)在含有10％FBS的RPMI-1640中培养。A549细胞(

CCL-185^TM，一种具有上皮形态的人肺癌细胞系)在含10％FBS的F-12K培养基中培养。A549/DDP细胞(其描述见DOI：10.3892/mmr.2014.2163和DOI：10.7150/jca.19426；抗顺铂细胞可通过将亲本A549细胞长期暴露于顺铂而获得，MDRA549/顺铂肺腺癌细胞系，耐药)在含10％FBS的F-12K培养基中培养。H1975细胞(

CRL-5908^TM，一种上皮形态的人腺癌非小细胞肺癌细胞系)在含有10％FBS的RPMI--1640培养基中培养；H1975细胞是一种抗吉非替尼(一种用于治某些乳腺癌、肺癌和其他癌症的EGFR抑制剂药物)的人肺癌细胞模型)。H1650细胞(

CRL-5883^TM，一种腺癌/支气管肺泡癌肺癌上皮细胞系)在含有10％FBS的RPMI-1640培养基中培养。PC9细胞(

90071810，前称PC-14，一种肺腺癌/非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系，具有混合形态的EGFR突变，包括圆形和纺锤形细胞)，在含有2mM谷氨酰胺和10％FBS的RPMI1640培养基中培养。发表了PC9AR细胞(一种抗奥希替尼(AZD9291)的细胞系)(DOI：10.1158/1078-0432.CCR-17-1574)，作者可以获得该细胞系，也可以通过将PC9细胞暴露于奥希替尼(也称为AZD 9291)而从亲本细胞系中获得，在大约6个月的时间内浓度从10nmol/L逐渐增到500nmol/L；产生的抗药性细胞按照对亲本PC9细胞的描述进行培养。H446细胞(

HTB-171^TM,，一种源自转移部位的人小细胞癌SCC肺癌细胞系)按照22Rv1细胞的描述培养。PC3细胞(

CRL-1435^TM，一种上皮形态的人类前列腺癌细胞系，起源于四级前列腺腺癌的骨转移)在含10％FBS的F-12K中培养。LNCaP细胞(LNCaP克隆FGC,

CRL-1740^TM，一种上皮形态的前列腺癌细胞系)在含有10％FBS的RPMI-1640中培养。

细胞和组织摄取：在以下实例中，除非另有规定，否则THSD或HMCD对照物的细胞和组织摄取测定如下。将细胞(1×10⁴/孔)接种在玻璃体壁涂层的四孔室玻片(Nalgen Nunc)上，并与含有5％胎牛血清的相应生长培养基(例如C4-B2细胞：T培养基)孵育24小时。将细胞固定至玻片后，用PBS洗涤细胞并将其暴露于浓度为20μMol/L的培养基中的THSD/HMCD中。将玻片在37℃下培养30分钟，用PBS洗涤两次以去除多余的染料，并在4℃下用10％甲醛固定细胞。然后用PBS洗涤两次玻片，并用水性安装介质(Sigma-Aldrich)覆盖玻璃盖片。使用633nm激发激光器和670-810nm长通滤波器或配备75-W氙灯和吲哚菁绿滤光片立方体(激发，750-800nm；发射，820-860nm)的荧光显微镜(Olympus 1×71)，通过共聚焦激光显微镜(ZeissLSM 510META)记录图像色度)。为了确定组织中染料的吸收，将从荷瘤小鼠分离的组织置于OCT(最佳切割温度)培养基中，并在-80℃下冷冻。如上文所述，使用显微镜制备冷冻的5μM组织切片用于组织病理学观察。

亚细胞定位(线粒体、溶酶体)：在以下示例中，除非另有规定，否则根据构成染料或包含染料部分的每种化合物，将THSD或HMCD对照物摄取到癌细胞的线粒体和溶酶体中，进行如下方式的测定。细胞在活体细胞成像室(World Precision Instrument)处理一夜。细胞暴露在不同浓度的染料(即THSD/HMCD)下，用Perkin-Elmer超视距ERS旋转圆盘共聚焦显微镜测定染料的摄取。该系统安装在ZeissAXIOVERT 200m倒置显微镜上，配备37℃实习加热器、培养箱，进行持续的二氧化碳灌注。将63X或100X Zeiss油物镜(数字孔径，1.4)用于实时细胞图像，并使用压电Z步进电动机创建一个Z堆栈。氩离子激光器的633-nm激光线(设置为60％功率)用于激发THSD/HMCD。用650nm的光发射，虽然不是染料的最佳选择，但发现与细胞中的染料浓度直接相关。为了进行比较研究，曝光时间和激光强度保持一致，以便进行准确的强度测量。使用Metamorph 6.1(通用成像)量化像素强度，并使用软件上的区域统计功能将平均像素强度生成为灰度。为了测定线粒体对染料的吸收，采用线粒体跟踪染料MitoTracker^TM Green FM(Invitrogen^TM分子探针^TM)。为了确定溶酶体中染料的位置，使用了溶酶体跟踪染料LysoTracker^TM Green DND-26(Invitrogen^TM分子探针^TM)。在共聚焦显微镜下对线粒体和/或溶酶体染料(THSD，HMCD)的定位进行成像。

体内肿瘤的摄取和积累：在以下示例中，除非另有规定，否则小鼠肿瘤中THSD/HMCD的摄取和积累在体内的测定如下。将人癌细胞(1×106)移植到4-6周大的裸鼠体内(国家癌症研究所)。当肿瘤大小达到直径1-6mm(通过X光或触诊评估)时，以0.375mg/kg或10nmol/20g小鼠体重的剂量向小鼠静脉或静脉注射HMCD。全身光学成像是在24小时或使用配有荧光滤光片组(激发/发射，800：850nm)的4000mm柯达成像站，直径120mm视场、2mW/cm2近红外激发光频率以及以下摄像头进行拍摄的。设置：最大增益，2×2像素组合，1024×1024像素分辨率，曝光时间5秒。活鼠由Olympus OV100全鼠成像系统(激发，762nm；发射，800nm；Olympus)交替/额外成像，该系统包含一个MT-20光源(Olympus生物系统)和DP70CCD相机(Olympus)。成像前，用氯胺酮(75mg/kg)麻醉小鼠，并在成像过程中保持麻醉状态。

实例1b：根据标准方案培养前列腺癌(PC)细胞(22Rv1，

-2505^TM，人类前列腺癌细胞系)，并将其暴露于各自化合物(THSD，未偶联染料)的0-50μM中24-48小时。细胞活力是通过计数活细胞和死细胞后，用台盼蓝染色区分活细胞和死细胞。结果如图1B2所示，Y轴表示细胞活力的百分比。结果表明，用于抑制癌细胞的分子式为FIId“DZ2a”化合物7的ALSD的IC₅₀在约3-4μM之间，这比未偶联的他汀类药物(>50μM)和未偶联的染料(这里称为“DZ1”)有显著改善。试验化合物的化学分子式见图1B1。

实例1C：PC(22Rv1)、LNCAP(lncap克隆FGC(

-1740^TM，人类前列腺；源自转移部位：左锁骨上淋巴结)和C4-2B(

-3315^TM，人类前列腺癌上皮形态细胞)癌细胞培养如下：22Rv1和lncap根据上述使用RPMI培养的方案进行培养；如上文所述，C4-2B在含有10％FBS的RPMI中培养。将培养细胞暴露于分子式为FIId“DZ2a”化合物7的ALSD中约1h至0-50μM。如实例1b中所述，测定细胞活力。结果示于图1C中，y轴表示细胞活力的百分比，x轴表示药物的剂量(单位：μM)。结果表明，ALSD在不同类型的癌细胞中同样有效，IC₅₀约为3-4μM。

实例1D：22Rv1人前列腺癌细胞如上文所述培养，从培养基中分离，再悬浮于50％磷酸盐缓冲盐水(PBS)和50％BD Matrigel^TM(BD Biosciences,CA)中，然后在小鼠皮下注射和生长再悬浮细胞。通过近红外发射监测药物的摄取和保留；肿瘤显示ALSD的摄取和保留至少2到4周或更长时间，特别是在实体非坏死肿瘤/肿瘤的非坏死部分，见图1D。肿瘤在2和4周时THSD降低，分别由近红外信号测定，小于30％左右。

实例1E：如实例1D中所述，在小鼠皮下培养、注射和生长22Rv1人前列腺癌细胞。通过测量卡尺大小和计算如下面实例9中所述的体积来监测肿瘤体积。小鼠经静脉注射以下药物：分子式为FIId(“DZ2a”)的ALSD，化合物7、相应的未偶联染料(此处为DZ1)、他汀类药物的未偶联辛伐他汀(SIM)和癌症药物的多西他赛(DOCetaxel)，以及ALSD与DOC的混合物。对于ALSD、DZ1和SIM，每种活性药物的剂量为5mg/kg，但DOC除外，为8mg/kg。结果如图1E所示。肿瘤体积增加的速率较慢表明肿瘤抑制活性。“载体PBS”作为阴性对照物，显示肿瘤生长不受抑制。DZ1、SIM和DOC均无明显的抑瘤活性；相反，ALSD则表现为抑瘤活性，显著降低肿瘤生长，肿瘤体积增长速度较慢。添加DOC和ALSD并不能进一步增加ALSD的肿瘤生长抑制作用

实例2：22Rv1人前列腺癌细胞培养如上文所述，并用DAPI(细胞核蓝色荧光)、分子式为FIId“DZ2a”的ALSD，化合物7(黄色荧光)、线粒体定位^TM(绿色荧光)和溶酶体定位^TM(绿色荧光)处理。如图2所示，在复合体中，细胞核被DAPI染为蓝色，而ALSD的红色荧光与癌细胞胞质部分的线粒体定位^TM和溶酶体定位^TM的绿色荧光共存，如复合体中的黄色荧光所示。共定位因此允许ALSD干扰癌细胞的线粒体和溶酶体功能。

实例3A：根据线粒体耗氧率(OCR)确定C2-4B MDVR细胞暴露于不同药物和如下所述的对照后的代谢表型及其变化。药物/对照包括：阴性对照/仅介质(“NT”)、未偶联染料(“DZ1”，6μM)、辛伐他汀、未偶联他汀类药物(“SIM”)和胆固醇(“胆固醇”，20μM)。OCR结果如图3A所示，ECAR结果(具有不同的控制)如实例3B和图3B所示。OCR和ECAR对应于细胞的两个主要能量途径：线粒体呼吸和糖酵解，OCR作为线粒体呼吸作用(氧化磷酸化)的指标，ECAR作为糖酵解和乳酸产生的指标。所有药物的初始OCR均在650-1000pmol/min范围内，其中SIM最高，DZ1最低，其他药物的OCR为中等。与所有其他药物相比，分子式为FIId的ALSD(“DZ2a”，化合物7)显著降低OCR；在大约200-300分钟后，速率下降低于NT、SIM、DZ1或胆固醇，并在600-800分钟内持续快速下降至低于200-300pmol/min的速率(与其他药物的650-950pmol/min相比)，持续下降。

使用Seahorse XF分析仪(Seahorse XFE24，Agilent，CA)在24孔板格式的代谢室中测定活细胞的OCR和ECAR。在时间0开始记录之前，将试剂(药物/对照物)添加到孔板中，分析仪记录药物对基本线粒体功能的影响约12小时(720分钟)。所用试剂均为安捷伦(Agilent)试剂。细胞在SeahorseXF RPMI培养基中接种培养，pH7.4。分析开始后约24小时内，细胞的播种率为8x105，达到90％的聚合率。该程序基本上按照制造商的标准程序执行，去除培养基，用XF实时ATP速率分析介质清洗细胞一次，然后根据仪器的预编程和随后的OCAR/ECAR实时测量。

实例3B：指示葡萄糖消耗的细胞外酸化率(“ECAR”)如上文实例3A中所述测定。结果显示，DZ2a在500分钟左右的曲线上出现一个向上的凸点，这表明细胞代谢转变为葡萄糖。

实例3C：如上文所述使用和培养C2-4B MDVR细胞。用β-巯基乙醇作为变性剂对细胞进行变性，20μg部分装入变性凝胶的通道中，将蛋白质按大小分离，凝胶运转，分离的蛋白质从凝胶转移到硝酸纤维素膜上，这些蛋白质被水解。通过近红外信号，将ALSD(分子式为FIId，“DZ2a”，化合物7)与未偶联染料(DZ1)进行比较。结果如图3C所示。该图显示ALSD与细胞溶质和线粒体溶解物中的多个线粒体和细胞溶质蛋白质结合，可能是共价结合。与未偶联染料(DZ1)相比，信号强度可能表明与某些蛋白质具有更高的亲和力，以及在出现附加带的情况下结合的额外蛋白质。

实例3D：如实例3C中所述，蛋白质变性并分离；在膜上使用以泛素为靶点的抗体进行蛋白质印迹分析，以检测多泛素化蛋白质；探针包括分子量标记(“标记”)、DMSO(作为对照物的载体)、未偶联的他汀(辛伐他汀)、未偶联的染料(DZ1)和THSD(这里指分子式为FIId的“DZ2a”，化合物7)。结果如图3D所示。DZ2a通道中大量(而不是单个/离散带)的蛋白质涂片的强信号表明多泛素化蛋白质的积累，即未从细胞中清除的未折叠蛋白质。因此，研究表明，THSD可通过改变涉及缺陷溶酶体功能的自噬过程阻止癌细胞去除多泛素化蛋白。

实例3E：整个细胞和线粒体制备/处理如下。22Rv1前列腺癌细胞培养如上文所述。采集细胞，用十二烷基硫酸锂(LDS)清洁剂处理，然后离心提供全细胞组分和分离的线粒体组分，并对颗粒进行处理，以测定其胆固醇水平，如下所示：用己烷/甲醇混合物提取胆固醇(7：1，v/v)，加入适量稳定同位素标记的d7胆固醇标准品(抗极性脂质)。在水浴中对样品进行超声波处理，旋转，并在16000×g的条件下在室温下离心5分钟。上层在室温下的快速真空中干燥。然后将样品与200μl 10mg/ml 4-(二甲胺基)苯基异氰酸酯(DMAPI)在二氯甲烷中和30μl三乙胺在65℃下在热混合器中孵育1.5小时。用磷酸盐缓冲液(pH8.0)对反应进行淬火，然后用己烷萃取DMAPI标记的胆固醇，并在快速真空中进行真空浓缩。干燥残留物在乙腈/异丙醇(1：1)中重组，并通过液相色谱选择离子监测(LC-SIM)进行分析，使用连接到Orbitrap Fusion Lumos质谱仪(Thermo Scientific)的Ultimate 3000XRS液相色谱系统。在5-cm超白金C18柱上分离后，采用时间安排模拟分析法对DMAPI衍生的内源性胆固醇(m/z549.442)和D7胆固醇(m/z 556.485)进行了分析。利用Skyline对所获得的LC-SIM数据进行了胆固醇定量分析。

胆固醇定量分析见下表。

结果表明，与对照组相比，ALSD(分子式为FIId，“DZ2a”，化合物7)能够显著降低癌细胞胆固醇水平至约58％，线粒体胆固醇水平为34％(见下表结果)。与ALSD相比，他汀类辛伐他汀降低胆固醇(癌细胞降低88％，线粒体降低51％)

实例4：进行细胞分析，将如上所述培养的细胞暴露于以下所示的各种药物中72小时。使用以下细胞：亲本C4-2B细胞和抗C4-B2细胞：C4-2B ABiR抗醋酸阿比拉特龙(一种用于前列腺癌激素治疗的抗雄激素药物)和恩杂鲁胺耐药细胞(“MDVR”)。被称为“C4-2B亲本”的细胞是以前没有接触过癌症药物的无耐药力的C4-2B细胞。所有基于C4-B2的细胞培养如上文所述用于亲本细胞。抗药性C4-B2细胞是通过暴露于相关药物而产生的。将细胞暴露于2、4、8或16μM的ALSD(分子式为FIId，“DZ2a”，化合物7)中。结果显示于图4A(非抗性亲本C4-2B)、图4B(抗醋酸阿比拉特龙或ABiR)和图4C(抗苯扎胺或MDVR)中。对于所有细胞类型，暴露于16μMALSD 8h后，细胞存活率降至0％，暴露3h后存活率低于50％，暴露4h后存活率低于25％。如果使用较少的ALSD，更多的细胞在试验期间存活，例如8μM的ALSD在4-8小时内将存活率降低到25-50％以下，而较少的量则需要更长的时间来降低细胞存活率。结果表明，ALSD降低了细胞存活率，抑制了醋酸阿比拉特龙和苯扎胺耐药细胞的生长，也抑制了非耐药“亲本”C4-2B细胞的生长。与图4B和图4C相比，大约4-5μMALSD的量通常足以降低这些耐药细胞的细胞存活/生长抑制。

此外，初步结果表明，ALSD的量约为5-20μM(例如14μM或更少)，降低了细胞存活率，并且能够抑制多西他赛耐药细胞的生长。

与其他药物(如醋酸阿比拉特龙、恩杂鲁胺和多西他赛)相比，ALSD能够提供更快速的生长抑制。例如，抑制通常在不到8-24小时内实现，通常在不到约2小时内开始，并且在最初约3-8小时内(例如在8-16μM时)具有显著的将细胞存活率降低到50％以下的效果，比较图4A-C.。完全抑制(100％)可以在8-18小时内实现，特别是在更高浓度(例如约16μM)下。结果表明，ALSD在8-24小时内提供快速和完全的(0％细胞存活率或100％生长抑制)，具体取决于剂量。由于缓慢失活，例如约4-5μMALSD或更小的量可能足以在更长时间内(例如16-48小时或约24-32小时)降低非耐药或耐药细胞的细胞存活/生长抑制。对于多西紫杉醇耐药细胞，可能需要更高的量，例如约5到约20μM或更少，例如约14μM，以降低细胞存活率并抑制其生长(未显示数据)。类似地，与实例7D和E相比，ELSD可提供快速生长抑制，从其较不太陡峭的剂量反应曲线可以明显看出。

实例5：该实例表明，THSD可阻止RhoA/B锚定到细胞膜上，可能是由于THSD抑制蛋白质异戊二烯化及其下游细胞信号传导。如下文所述对H-1975人肺癌细胞小鼠模型的肿瘤组织进行RhoA/RhoB膜染色，用THSD(此处为分子式为FIId，“DZ2a”，化合物7的ALSD)对荷瘤小鼠进行治疗，与对应的未偶联染料(“DZ1”)和吉非替尼(一种用于治疗某些乳腺癌、肺癌和其他癌症的EGFR抑制剂药物)进行对比。结果表明，DZ1-和吉非替尼治疗的肿瘤细胞膜上仍有染色，而ALSD-和ALSD/吉非替尼治疗的肿瘤细胞膜上没有染色(见图5)。这表明ALSD可以阻止RhoA/B锚定在细胞膜上，可能是由于ALSD抑制了蛋白质的异戊二烯化。

H-1975细胞，一种对吉非替尼(一种用于治疗某些乳腺癌、肺癌和其他癌症的EGFR抑制剂药物)有耐药力的人肺癌细胞模型，如上文所述进行培养，并皮下注射到小鼠体内以形成肿瘤。小鼠和形成的肿瘤通过静脉注射全身暴露于ALSD(此处为分子式为FIId，“DZ2a”，化合物7)。用吉非替尼(20mg/kg)或ALSD(此处为分子式为FIId，“DZ2a”，化合物7，5mg/kg)、分子式III的未偶联染料(“DZ1”，5mg/kg)或ALSD与吉非替尼的组合治疗荷瘤小鼠。ALSD暴露后，肿瘤体积明显缩小，切除后通过肉眼检查确定，定期测量肿瘤大小和/或用卡尺计算肿瘤体积(未显示数据)。

对于肿瘤组织的免疫染色，通过规定和批准的安乐死技术处死动物。肿瘤组织(最大厚度3毫米)被切片，福尔马林固定，嵌入石蜡块，切片并加工成石蜡切片玻片。对于免疫组化染色，将玻片脱蜡并重新水化(热量、二甲苯、酒精、3％的甲醇H2O2溶液、选择性暴露于RetrievagenA(pH6.0)、BD Pharmingen^TM、Cat.#550524)。玻片暴露于RhoA(26C4)单克隆抗体1：1000(Santa Cruz，CAT SC-418)。或者，可以使用一种或多种其他RhoA和/或RhoB单克隆抗体。在阻断内源性过氧化物酶后，可采用基于HRP的程序(Hores Raddish过氧化物酶，催化显色底物进行显微镜检测)。应用一级抗体和阴性对照抗体(例如RhoA1：1000和阴性对照抗体，如小鼠Igg1阴性对照，Agilent Dako,CA，1：100)。暴露和冲洗后，应用生物素化二级抗体(例如LSAB2试剂盒，Agilent Dako，CA)，然后应用链霉亲和素LSAB2，之后用增强剂(Signet)DAB显色剂20ul/ml，用苏木精50进行反染色。染色后的玻片用分级酒精和二甲苯脱水和清除，然后在适合所用生色团的显微镜下安装和检验。有关结果的讨论，请参见上文。

实例6a：对哺乳动物(大鼠、狗)进行THSD的体内给药。对4只动物(n＝2m+2f)、4只比格犬(7.38-8.59kg)和4只大白鼠(220-235g)分别给予THSD(此处为分子式为FIId或“DZ2a”的ALSD、DZ1-SIM酰胺)。分别通过头静脉注射(狗)或足背静脉注射(大鼠)，1mg/kg(1ml/kg)。动物可以自由获得饲料和水。在时间点(HR)0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、24取样。在指定的时间点采集血液时，每只动物都受到人工限制，通过头静脉穿刺(狗)或尾静脉(大鼠)采集约150微升的血液，连续出血到EDTA-K2钠管中。血液样本保存在湿冰中，取样后15分钟内离心(2000克，4℃，5分钟)获得血浆。所有血浆样品在水中用相同体积的0.5％FA稀释2倍，并在-70℃下储存，直到用于分析。用LCMSMS-025(AB Sciex6500LC/MS/MS系统)分析测定THSD和未偶联他汀(辛伐他汀)的浓度。MS得到正离子ESI。进行MRM检测。高效液相色谱条件为：Poroshell 120、EC-C18、50*2.1m m、2.7μM，流速为0.50ml/min，柱温为45℃。建立了内标校准曲线(1.00-1000ng/ml THSD、2.00-2000ng/ml辛伐他汀)。样品基质为动物血浆，在水溶液中加入等量的0.5％甲酸。在含有0.1％FA的ACN中，将30.0μl样品的一小份添加到200μl中。将混合物旋转5分钟，并以13000rpm离心5分钟。将2.00μl混合物注入LC-MS/MS中。

代表性结果见下表。对于犬和大鼠样品，在5分钟内测定大量THSD，在约5-15(犬)或15-30(大鼠)分钟内达到峰值浓度，然后在约8小时后随时间减少到0(无峰值)。相反，未偶联的他汀类药物在5分钟至24小时的整个采样周期内要么未测定，要么仅以微量测定，最高的微量浓度在1ng/ml以下(最高浓度大鼠0.094ng/ml，犬0.46ng/ml)。结果表明，THSD零释放他汀类药物，因为它在血浆中没有被测到。

*确定的最高值

*测定的最高值

实例6B：将THSD体内给予哺乳动物(大鼠、狗)，随时间测定血浆浓度。如实例6A中所述进行实验，静脉注射1mg/kg的THSD(此处为ALSD，分子式为FIId的DZ1-SIM酰胺或“DZ2a”)；从动物身上每隔24小时采集一次血样，并且对于每个样本，均按上述方法对THSD定量测定，计算其血浆浓度。结果如图6B1(雌性和雄性大鼠的平均浓度)和图6B2(雌性和雄性犬的平均浓度)所示，测量值在24小时低于可量化限值(未显示)。这些图表显示哺乳动物的半衰期约为1小时，大约为0.6至1.7小时，例如雌性狗的半衰期约为半小时，雄性大鼠的半衰期约为2小时。相关的药动力学参数如下所示。

实例7：该实验基本上如实例4中所述通过细胞分析进行。所有细胞系均为人类癌症细胞系且如上文所述培养；其包括：22Rv1(前列腺癌细胞系)、MDVR(如上文实例4中所述形成的抗EZ的C4-2B前列腺癌细胞系)、PC3(起始于IV级前列腺腺癌(AC)骨转移、A549细胞(肺癌细胞系)、A549/DDP细胞(MDRA549/顺铂肺癌细胞系，耐药)、H1975(AC/NSCLC细胞系和TKI耐药细胞模型，尤其是吉非替尼耐药)、H1650(AC/NSCLC细胞系)、PC9(AC/NSCLC肺癌细胞系，具有混合形态的EGFR突变)、PC9AR细胞，是一种奥希替尼/AZD9291-耐药细胞系，可通过将PC9细胞暴露于奥希替尼(也称为AZD929)和H446(一种SCLC细胞系)，从父细胞系生长成形。

细胞系PC9,H1975和H1650具有以下EGFR激活突变：PC9具有EGFR激活突变T790m，H1975具有L858R/T790M双突变，H1650的EGFR外显子19缺失(Del)。还包括以下其他突变：在H446细胞中，c-myc DNA序列被扩增20倍，c-myc RNA相对于正常细胞增加了15倍。

根据上述方案培养细胞系，然后用ELSD(此处为分子分子式FId，“DZ2b”或化合物14)或ALSD(此处为分子式为FIId，“DZ2a”或化合物7)处理每个细胞系48h。对于每种细胞系，测定每种药物(即ELSD、ALSD)和相应的未偶联他汀(辛伐他汀)的IC₅₀，浓度为0.1-100μM。

细胞活力(IC₅₀)通过MTT(噻唑蓝比色法)分析测定如下：100μl的1×104/ml细胞用增加浓度的药物或对照物(THSD、DZ1、SIM)处理24小时。在对照组(图中未显示)中，细胞暴露于DMSO(载体)中，以达到与所测试药物的最高浓度相等的最终浓度，最大浓度小于0.1％v/v。在培养结束/添加SDS前4小时，将10μl四甲基偶氮唑盐(3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H-四唑溴化物，Sigma-Aldrich提供)添加到含有细胞的孔板中。培养结束时，加入100μl 10％十二烷基硫酸钠，然后将含有细胞的平板置于37℃细胞培养箱中培养8小时。上清液的吸光度密度在波长为595nm的96孔微板阅读器上读取。所有IC₅₀均为相对IC₅₀，并基于如图所示的曲线拟合。

结果如下表所示，相应曲线如图7A-I所示。

对于三种不同的癌细胞系，当比较THSD的IC₅₀与未偶联的他汀类或染料的IC₅₀时，趋势是相似的：THSD(ELSD和ALSD)的IC₅₀范围约为2到12μM，而未偶联的他汀类的IC₅₀要高得多，范围约为15到大约>50μM(即，需要更多未偶联的他汀类药物才能对细胞活力产生同样的作用)。因此，ALSD和ELSD都比未偶联的他汀类药物更能降低细胞活力，抑制前列腺癌细胞的生长(比较图7A-I中的图表)。

实例8：基本上如上文实例7所述，使用A549细胞(肺癌细胞系)，并分别用不同浓度的ALSD(此处为分子式为FIId的ALSD，“DZ2a”，化合物7)处理24、72或120小时，然后用MTT法检测细胞活力，如下所述。结果(如图8所示的对比图)表明，无论培养时间(24至120小时)如何，ALSD都具有很强的生长抑制作用(IC₅₀约为5.7μM至5.9μM)，这表明ALSD是一种药物(而非前体药物)，它可以直接抑制肿瘤生长，而不需要他汀类药物将酶从酰胺键释放到ALSD的染料基团。同样，缓慢释放的ELSD只会最低限度地释放他汀(未显示数据)。

实例9：通过将敏感细胞系暴露于TKI来建立TKI耐药细胞系，例如，可使用第3代EGFR-TKI AZD9291或现有敏感细胞系。其他TKI和EGFR-TKI可据此建立和测试。AZD9291购自活性生化药品。与未偶联的他汀类药物、未偶联的染料、EGFR-TKI药物和如下所述的对照物相比，在小鼠异种移植模型中对分子分子式FId(化合物7，ALSD)的THSD“DZ-SIM”酰胺进行体内试验。人前列腺癌细胞是PC9AR细胞，对第三代表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)药物(EGFR-TKI)具有耐药性。如上文所述培养PC9AR细胞。将5×106pc9ar细胞，连同用三分之一基质凝胶皮下接种于5周龄雌性小鼠的侧翼。接种7天后，当肿瘤大小达到约50mm3时，小鼠每周接受3次治疗，共16天，治疗方法如下：载体/阴性对照物(1％Tween80，i.p.)、DZ1(5mg/kg，i.p.)、辛伐他汀(5mg/kg，i.p.)、DZ1-SIM(5mg/kg，i.p.)、AZD9291(10mg/kg，o.g.)，以及DZ1-SIM(5mg/kg，i.p.)和第三代EGFR-TKI AZD9291(10mg/kg，o.g.)的组合。用卡尺测量肿瘤体积，用公式2a×b×0.5计算，a和b是肿瘤的两个主要尺寸(宽度、长度)和a<b，治疗16天后处死小鼠，分离、称重和成像肿瘤组织。肿瘤的照片、重量和体积以及小鼠的重量如图9A1-4所示。标准偏差和置信水平如下图所示：平均值±S.D.(n＝6)。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.0005，***p<0.0001。结果在图9A1-4及其上面的描述中详细说明。总之，通过肿瘤大小、重量和体积随时间的测量，我们确定了用THSD治疗的人类肿瘤细胞源性肿瘤具有显著的生长抑制作用，但在用任何其他药物治疗的肿瘤中没有。THSD和TKI的联合应用并没有增加THSD的生长抑制作用。

实例10：在人肺癌的小鼠异种移植模型中对THSD(分别为ALSD和ELSD)进行活体内测试。该实例基本上如实例9所述进行，并进行以下修改：使用人类SCLC H446癌细胞，并且所测试的药剂包括两种他汀类偶联物(分子分子式FId化合物/化合物14或“DZ2b”和FIId/化合物7或“DZ2a”的化合物，在图10分别命名为“DZ-SIM酯”或“DZ-SIM酰胺”)，以及非他汀类偶联物(“DZ-DHA”)。5周龄裸鼠双侧侧翼皮下植入SCLC H446细胞(1.5x10⁶)。细胞植入后10天，小鼠通过静脉注射每周两次用DZ1(2.8mg/kg)、SIM(2mg/kg)、DZ1-SIM酰胺/化合物7或DZ1-SIM酯/化合物14(4mg/kg)和DZ1-DHA(4mg/kg，DZ1-二氢青蒿素酯“DZ1-DHA”，如图11所示。(A)在52天的治疗期间，用卡尺每四天测量一次肿瘤大小，并使用如上文实例9所述的公式0.5x2axb计算体积。置信水平表示为*P<0.05，**P<0.01，***P<0.0005，结果如图10所示。总之，与所有其他药剂相比，两种THSD都能显著增强人类癌症组织的生长抑制；与非他汀类染料偶联物相比，生长抑制也略有增加。

应注意，图纸和实例中所示的特征不一定按比例绘制，并且一个实例的特征可与其他实例一起使用，正如熟练技工所认识的那样，即使本文没有明确说明。可以省略对已知组件和技术的描述，以避免不必要地偏离实例的重心。

当公开多个实例时，通过阅读此详细说明，本发明的其他实例，对本领域技术人员将是显而易见的。本发明能够在各种明显方面进行无数的修改，而不脱离本发明的精神实质和范围。因此，图纸和说明应视为说明性的，而非限制性的。

Claims (2)

1.一种酯键连接他汀类衍生物，其特征在于，分子式如下所示：

。

2.一种药物配方，其特征在于，包括ELSD和一种或多种药物赋形剂；其中ELSD为权利要求1所述酯键连接他汀类衍生物。

Images