CN110585327A - 用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法，涉及生物制药技术领域。其制备方法包括：将新鲜香蕉皮、洋葱洗净，混合破碎至10‑20目；再按1:1的质量比例，向制得的混合物中加入食用陈醋，置于酶解容器中，加淀粉蛋白酶，每天搅拌1次，每次高速旋转搅拌20‑30分钟，并连续搅拌5‑6天；再向酶解物中加入细胞融合酶，静止30‑40天；最后常温下进行分离提纯，将提取物沉清过滤200目，按1：0.25的质量比例，加入羧甲基纤维素钠混合即可。本发明能够有效杀灭和抑制动物细小病毒，治疗动物细小疾病，且无副作用。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域，尤其是涉及一种用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法。
背景技术
细小病毒是一种无囊膜，单链，DNA病毒。可通过较小的抗原转移与自然突变而感染犬科动物。
犬细小病(CPV)毒病是由犬细小病毒感染幼犬所引起的一种急性传染病。临床上有两种表现型，出血性肠炎型以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少为主要特征；心肌炎型则以突然死亡为特征。无论那种类型的临床表现，均以发病率高、死亡率高和传染性强为特点。
细小病毒属(Parvovirus)，病毒粒子无囊膜，CPV对外界的抵抗力较强，对酒精、乙醚、氯仿有抵抗性，对温度也有一定耐受性。65℃、30秒而不失其感染性，低温长期存放对其感染性并无明显影响。在4～10℃存活6个月，37℃存活2周，56℃存活24小时，80℃存活15秒，在室温下保存3个月感染性仅轻度下降，在粪便中可存活数月至数年。对CPV最有效的消毒剂有福尔马林、β-丙内酯、次氯酸钠、氧化剂等。此外，紫外线也能使其失活。如果将含毒粪便和肠管冷藏于低温环境，其感染性可长期保持。犬细小病毒流行无明显季节性，四季均可发病，但以冬春多见。带病毒的犬是主要的传染源，病犬的呕吐物，粪便，尿液均含有大量病毒。传播途径有直接和间接两种，前者是无免疫力的健康犬与病犬直接接触而被传染，后者是无免疫力的健康犬食入了被污染的水，饲料等被传染。本病主要侵害半岁以内的幼犬，特别是三个月以内的幼犬，一旦感染本病50％以上为胃肠炎和心肌炎混合型，死亡率100％。目前的治疗方式均是采用抗生素，但是大量的使用抗生素会对动物产生很大的副作用，并且会使动物产生耐药性。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法，该方法是运用传统的中医理论和现代的生物细胞工程技术相结合，获取的一种新型活性小分子肽物质，能够有效杀灭和抑制动物细小病毒，治疗动物细小疾病，且无副作用。
为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法，包括如下步骤：
S1:将新鲜香蕉皮、洋葱洗净，混合破碎至10-20目；
S2：按1:1的质量比例，向S1制得的混合物中加入食用陈醋，置于酶解容器中，加淀粉蛋白酶，每天搅拌1次，每次高速旋转搅拌20-30分钟，并连续搅拌5-6天；
S3：再向S2的酶解物中加入细胞融合酶，静止30-40天；
S4:常温下进行分离提纯，将提取物沉清过滤200目，按1：0.25的质量比例，加入羧甲基纤维素钠混合即可。
上述羧甲基纤维素钠为该植物细胞酶解物的促形剂。
进一步地，S2中，用于酶解香蕉皮、洋葱的食用陈醋的溶液浓度为30％，酶解温度不高于30℃。
进一步地，S2中，用于酶解香蕉皮、洋葱的淀粉蛋白酶的投放比例为酶解容器中总量的10％。
进一步地，S3中，所述细胞融合酶为壳寡糖细胞融合酶，且壳寡糖细胞融合酶投放比例为酶解容器中总量的1.5％。
香蕉皮，富含蛋白质、脂肪、碳水化合物、膳食纤维、胡萝卜素、B族维生素、维生素C、烟酸、钙、磷、铁等。
洋葱，富含钾、维生素C、叶酸、锌、硒，及纤维质等营养素，可杀菌消炎、提神健体、祛痰利尿。此外，它还能清除体内氧自由基，增强新陈代谢能力，抗衰老，预防骨质疏松，是适合中老年人的保健食物。洋葱具有促进消化、杀菌消炎、祛痰利尿、提神健体、预防脑血栓、有益心血管健康、预防老年斑、防癌抗癌等功效。
本发明以食用植物的根茎和果实，通过植物细胞的基因转换、重组，建立细胞活性酶转换模型，诱导转换酶中的定向活性物质释放，靶向结合动物细小病毒的体表，改变动物细小病毒体表的蛋白合成。同时增强WBC的吞噬能力，增强机体免疫功能，提高血清备解素，对动物感染性疾病的治疗有着重要的意义。
本发明的香焦皮、洋葱为纯天然药食同源植物物质。经过细胞融合酶解后提取的物质，除保持其香焦皮、洋葱原有的功能外(提高免疫能力、抗氧化、抗衰老、降血脂、消炎杀菌、抗病毒等)，特别増加了具有强烈杀灭和抑制动物细小病毒的功效，彻底告别使用大量抗生素所带给动物的副作用及耐药性，对动物治疗具有历史性的意义。
同时，制备本发明的香蕉皮、洋葱植物细胞酶解物的方法及操作简便，收得率高，生产成本相对较低，适合工业化生产或推广。
具体实施方式
下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例的用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法包括如下步骤：
S1:将新鲜香蕉皮、洋葱洗净，混合破碎至20目筛后得混合物备用；
S2：按1:1的质量比例，向制得的混合物中加入食用陈醋，置于酶解容器中，加淀粉蛋白酶，高速旋转搅拌30分钟，每天搅拌1次，并连续搅拌5天；
其中，用于酶解香蕉皮、洋葱的食用陈醋的溶液浓度为30％，酶解温度为20℃。用于酶解香蕉皮、洋葱的淀粉蛋白酶的投放比例为酶解容器中总量的10％。
S3：再向S2中加入细胞融合酶，静止30天；
其中，所述细胞融合酶为壳寡糖细胞融合酶，且壳寡糖细胞融合酶投放比例为酶解容器中总量的1.5％。
S4:常温下进行分离提纯，将提取物沉清过滤200目，按1:0.25的质量比例，加入羧甲基纤维素钠混合即可。
实施例2
本实施例的用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法，其制备方法包括如下步骤：
S1:将新鲜香蕉皮、洋葱洗净，混合破碎至20目筛后得混合物备用；
S2：按1:1的质量比例，向制得的混合物中加入食用陈醋，置于酶解容器中，加淀粉蛋白酶，高速旋转搅拌20分钟，每天搅拌1次，并连续搅拌6天；
其中，用于酶解香蕉皮、洋葱的食用陈醋的溶液浓度为30％，酶解温度为25℃。用于酶解香蕉皮、洋葱的淀粉蛋白酶的投放比例为酶解容器中总量的10％。
S3：再向S2中加入细胞融合酶，静止35天；
其中，所述细胞融合酶为壳寡糖细胞融合酶，且壳寡糖细胞融合酶投放比例为酶解容器中总量的1.5％。
S4:常温下进行分离提纯，将提取物沉清过滤200目，按1：0.25的质量比例，加入羧甲基纤维素钠混合即可。
本发明选用香蕉皮、洋葱植物细胞优化融合，通过10％淀粉蛋白酶及1.5％壳寡糖细胞融合酶的两次作用下，分泌出的小分子肽活性物质，并且使香蕉皮、洋葱植物细胞相互融合30-40天，且该酶解物需在浓度为30％的陈醋中进行。
病例1：某犬，出生2个月感染犬细小病毒，不能主动进食、呕吐、高热、喷水式血便、四肢无力。
采用本发明的香蕉皮、洋葱植物细胞酶解物进行治疗，口服2ml，肛门注射4ml该酶解液，1日3次，三天后恢复正常饮食，五天后全愈。
病例2：某猪，饲养5个月，兽医诊断，该猪感染猪细小病毒。
采用本发明的香蕉皮、洋葱植物细胞酶解物进行治疗，口服20mI，肛门注射10m该酶解液，1日3次，五天后猪全愈。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。
Claims (4)
1.用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1:将新鲜香蕉皮、洋葱洗净，混合破碎至10-20目；
S2：按1:1的质量比例，向S1制得的混合物中加入食用陈醋，置于酶解容器中，加淀粉蛋白酶，每天搅拌1次，每次高速旋转搅拌20-30分钟，并连续搅拌5-6天；
S3：再向S2的酶解物中加入细胞融合酶，静止30-40天；
S4:常温下进行分离提纯，将提取物沉清过滤200目，按1：0.25的质量比例，加入羧甲基纤维素钠混合即可。
2.根据权利要求1所述用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法，其特征在于，S2中，用于酶解香蕉皮、洋葱的食用陈醋的溶液浓度为30％，酶解温度不高于30℃。
3.根据权利要求1所述用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法，其特征在于，S2中，用于酶解香蕉皮、洋葱的淀粉蛋白酶的投放比例为酶解容器中总量的10％。
4.根据权利要求1所述用于杀灭和抑制动物细小病毒的植物细胞酶解物的制备方法，其特征在于，S3中，所述细胞融合酶为壳寡糖细胞融合酶，且壳寡糖细胞融合酶投放比例为酶解容器中总量的1.5％。
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