CN105999231A - 一种多肽组合物、提高畜禽免疫功能的组合物、制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及畜牧养殖技术领域，具体公开一种多肽组合物、提高畜禽免疫功能的组合物、制备方法。该多肽组合物由囊素肽、胸腺肽和转移因子按照0.5～5：0.5～5：0.5～5的质量比制备而成。该提高畜禽免疫功能的组合物，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素20～30份、维生素C 20～30份、多肽组合物10～20份、牛磺酸10～15份、抗结剂1～2份、多孔淀粉40～50份。上述产品均可以作为饲料添加剂，或作为药物制剂添加在饮用水中，或者作为药物制剂注射使用，对于猪瘟、口蹄疫、圆环病毒、仔猪腹泻、新城疫、温和型流感、鸭肝病毒病等有很好的防控作用，减少抗生素的使用，减少疫病的发生，减少死亡率，提高免疫力。

Description

一种多肽组合物、提高畜禽免疫功能的组合物、制备方法
技术领域
本发明涉及畜牧养殖技术领域，具体涉及一种多肽组合物、提高畜禽免疫功能的组合物、制备方法。
背景技术
病毒性疾病是当前畜禽养殖业最头疼的疾病，在传统养殖过程为了抵抗病毒性疾病通常会大量的使用抗生素，大剂量使用疫苗，再加上不正当的、封闭的养殖条件，污浊的养殖环境，使病毒、细菌滋生、变异，并产生耐药性，造成免疫系统的超负荷，免疫细胞损伤或形成免疫麻痹、免疫抑制病症，如慢性猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、仔猪腹泻病毒、禽新城疫病毒、禽温和型流感病毒等引起的免疫抑制病症。另外，长时间的养殖和动物快速生长过程中，病毒在动物体内或血液中快速形成毒素的积累，造成肝与肾脏的负担或损伤。而且随着现阶段养殖中大量抗生素、抗病毒化学药物的滥用，造成病毒细菌的不断变异，和产生耐药性，使得治疗、防控效果越来越差，养殖的动物伤亡率越来越高，养殖成本与养殖风险难把控，同时也会造成肉中有药物残留现象，因此从提高食品安全性考虑，在养殖动物过程中已经不允许滥用抗生素，禁用和下手抗病毒化药，如金刚烷胺、利巴韦林、吗啉胍等。因此迫切需要研究开发出一种安全、绿色、可分解、不会造成病毒变异和细菌耐药性，并且可以长期添加反复使用的抗病毒、提高机体免疫力的产品。
肽是构成蛋白质的结构与功能片段，也同样是氨基酸的有序组成，是由两个或两个以上的氨基酸分子通过肽键相互连接组成的化合物，分子量在180至10000之间的小分子活性蛋白质的一类物质的总称。蛋白70％以上是以肽的形式吸收，体内的功能性蛋白质多为载体，它们的作用多由在其上的肽段来完成的。肽是具有多种生理功能的活性物质，是细胞之间与器官之间传递信息的“信使”，通过内分泌、神经内分泌和神经分泌等作用方式行使其微妙的传讯功能，从而使动物体组合成一系列高密度的控制系统，来调节生长、发育、繁殖、代谢和行为等生命过程。小分子生物多肽统称为生物活性肽，在体内的消化吸收过程具有以下特征：
1)不需消化，直接吸收：动物体自身合成的多肽是体内将蛋白质进行酶促水解所得，由促酶、消化酶、胰酶、胃蛋白酶、胃酸、消化道碱性物质进行分解，有的被分解为小肽，有的被分解为氨基酸残基，有的被分解为游离氨基酸，小肽最终通过小肠进行吸收，然后经体内细胞、组织、器官及血液大循环。而体外人工合成的小分子多肽表面有一层保护膜，被动物体服食后不会受到体内的各种酶及酸碱物质二次水解，它和动物体合成的肽一样直接进入小肠，被小肠所吸收，进入人体循环系统，发挥生物学功能；
2)快速吸收完整吸收：人工体外合成的多肽，口服进入动物体，它较氨基酸快70％的速度，快速地穿过口腔、胃，直接进入小肠，被小肠吸收，最终进入体血液循环系统、器官及细胞组织，被完整吸收和利用，迅速发挥其生理作用和生物学功能，肽的吸收速度与输液同步，这是其它营养品望尘莫及的；
3)主动、优先被体内吸收：肽具有主动让动物体吸收或迫使动物体吸收的特点，这对于那些消化能力差、营养缺乏、身体虚弱者，有着重要的意义。
4)具有不耗费动物体能量，不需增加消化道、特别是胃肠功能负担的特点；
5)多肽在体内中表现出载体、信使作用：可将平常所食的营养物质，特别是钙等对动物体有益的微量元素，吸附、粘贴、装载在本体上，送到体内各个细胞、器官、组织，同本体一起被动物体吸收和利用，它作为神经递质传递信息的信使，指挥神经，发挥自身作用，维护动物体神经的团队精神和整体效应。
同时，国内外的研究者也发现多肽具有以下调节机体免疫功能的作用：提供多种氨基酸，帮助身体制造新的组织替代坏死的组织；鉴定血液向细胞输送氧和各种营养物质；调节体内的水分，电解质平衡；为免疫系统制造对抗细菌和感染的抗体，提高免疫功能；帮助伤口血液凝固促进伤口愈合；在体内制造酵素，有助于将食物转化为能量；修复细胞，改善细胞代谢，防止细胞变性，能起到防癌、抗癌的作用；促进蛋白质，酶，酵素的调控；沟通细胞间，器官间信息的重要化学信使；消除心脑血管疾病；改善内分泌与神经系统；改善消化系统，改善慢性肠道疾病；对风湿，类风湿，糖尿病等疾病效果显著；促进造血功能，改善贫血，防止血小板凝集，能提高血红细胞的载氧能力；抗病毒感染，抗衰老，消除体内多余的自由基。
鉴于上述多肽在机体内的吸收作用机制和调节免疫功能的作用，多肽也被研究者认为是一类可多次重复使用，不产生耐药性和毒素积累的健康调节机体免疫力的产品，因此基于多肽研究开发出一种能够抗病毒、提高畜禽机体免疫力的产品，成为了目前亟待解决的技术问题。
发明内容
为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种多肽组合物，可作为饲料添加剂或药物制剂有效成分，具有显著的抗病毒，提高畜禽机体免疫力的功效。
本发明的目的之二在于提供一种提高畜禽免疫功能的组合物，可作为饲料添加剂或药物制剂有效成分，畜禽反复服用该组合物不会引起病毒产生耐药性和变异，安全性好，抗病毒和提高机体免疫力的疗效显著。
同时本发明还在于提供一种提高畜禽免疫功能的组合物的制备方法。
为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：
一种多肽组合物，由囊素肽、胸腺肽和转移因子按照0.5～5：0.5～5：0.5～5的质量比例制备而成。
一种多肽组合物，由囊素肽、胸腺肽和转移因子按照2：1：1的质量比例制备而成。
一种提高畜禽免疫功能的组合物，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素20～30份、维生素C 20～30份、多肽组合物10～20份、牛磺酸10～15份、抗结剂1～2份、多孔淀粉40～50份；所述多肽组合物为上述多肽组合物。
上述提高畜禽免疫功能的组合物，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素25份、维生素C 25份、多肽组合物20份、牛磺酸12份、拮抗剂1.5份、多孔淀粉40份。
所述B族维生素为维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B3中的一种或一种以上的任意组合。
所述B族维生素为维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B3按照20：3：1：20的质量比组成。
所述组合物的剂型为微囊颗粒剂或粉剂。
上述提高畜禽免疫功能的组合物的制备方法，包括以下操作步骤：
1)制备多肽组合物：
A:取新鲜的动物淋巴去除脂肪、包膜，捣碎后，加入生理盐水匀浆，冻融后超声细胞破碎，离心取上清，得转移因子溶液，并测定其中含有的转移因子的浓度；
B:取新鲜的动物的胸腺，去除杂物，捣碎后，加入生理盐水匀浆，冻融后，超声细胞破碎，离心取上清，得胸腺肽溶液，并测定其中含有的胸腺肽的浓度；
C:取新鲜的动物法氏囊去除脂肪、包膜，捣碎后，加入生理盐水匀浆，冻融后超声破碎，取上清，得囊素肽溶液，并测定其中含有的囊素肽的浓度；
D:按照转移因子：按质量比取步骤A、步骤B和步骤C制备的转移因子溶液、胸腺肽溶液和囊素肽溶液，混合均匀，制得多肽组合物粗品；
E:将步骤D制备的多肽组合物粗品过滤，收集滤液，将滤液进行透析、过滤、除菌，制得所述的多肽组合物；
2)调浆：取步骤1)制备的的多肽组合物，取B族维生素、维生素C、牛磺酸、抗结剂和多孔淀粉加入多肽组合物中，并按照料液比1：0.8～1.2的比例补足生理盐水，混合均匀，得组合物浆料；
3)成型：
方法一：取步骤2)制备的组合物浆料进行微囊化包被处理，得所述的提高畜禽免疫功能的组合物微囊颗粒剂；
方法二：取步骤2)制备的组合物浆料进行冻干处理，得所述的提高畜禽免疫功能的组合物粉剂。
步骤2)中在3～5℃条件下，将多肽组合物与B族维生素、维生素C、牛磺酸、抗结剂和多孔淀粉混合均匀，并调节pH＝6.0，得组合物浆料。
步骤E中所述透析的温度为3～5℃。
步骤A、步骤B、步骤C中所述冻融为反复冻融3次。
步骤B中还包括将超声破碎后的细胞在80℃水浴中加热10分钟，再离心取上清。
各原料功能简介：
胸腺肽：又名胸腺素，是胸腺组织分泌的具有生理活性的一组多肽。临床上常用的胸腺肽是从小牛胸腺发现并提纯的有非特异性免疫效应的小分子多肽，胸腺肽中包含多种激素，归属于α、β、γ三类，主要功能作用是诱导T细胞分化成熟、增强细胞因子的生成和增强B细胞的抗体应答，调节和增强人体细胞免疫功能。促使有丝分裂原激活后的外周血中的T淋巴细胞成熟，增加T细胞在各种抗原或致有丝分裂原激活后各种淋巴因子(如：α、γ干扰 素、白介素2和白介素3)的分泌，增加T细胞上淋巴因子受体的水平。同时通过对T4辅助细胞的激活作用来增强淋巴细胞反应。另外，胸腺肽可能影响NK前体细胞的趋化，该前体细胞在暴露于干扰素后变得更有细胞毒性。
囊素肽：从法氏囊中提取的一种活性因子。法氏囊(BF)是禽类特有的中枢免疫器官，是B细胞的最早发生场所，B细胞于BF中发育、分化及成熟后迁移到外周淋巴器官定居和繁衍。囊素肽能够刺激产生成熟与半成熟的B淋巴细胞，加快生成免疫球蛋白，增强机体自身的免疫防护功能。
转移因子(TF)：又称传输因子，国际翻译上习惯译为传输因子，由具有细胞性免疫功能的淋巴细胞产生，为细胞免疫促进剂，具有能获得共体样的特异和非特异的细胞免疫功能，并能促进释放干扰素。是一种多核苷酸和多肽小分子物质，不会被胃蛋白酶、胰蛋白酶分解，也不会被胃酸破坏，可以口服。无毒副作用，无过敏反应，无抗原性。使用剂量小，起效快，药效持续时间长。
转移因子是免疫系统用来标记受感染的细胞用的，被标记的细胞会受到T细胞攻击。理论上，可以通过消灭受感染组织的方式治疗的任何一种疾病，都可以用转移因子治疗。它们运送父淋巴细胞的抗原特异细胞性免疫(迟发性过敏反应)到未暴露或原生的淋巴细胞，转移因子携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息，能够将特异性免疫信息递呈给受体淋巴细胞，使受体无活性的淋巴细胞转变为特异性致敏淋巴细胞，从而激发受体细胞介导的免疫反应。转移因子具有广泛的免疫学调节活性，一方面可诱导免疫细胞活化，增强机体非特异性免疫能力；另一方面能够将特异性免疫能力传递到其他动物，激发动物产生特异性免疫。
B族生素包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素B3等，是水溶性维生素，它怕光、怕水、怕热、怕氧化(多在80度温度下被破坏)。B族维生素是推动体内代谢，把糖、脂肪、蛋白质等转化成热量时不可缺少的物质，是维持体内正常机能与代谢活动不可或缺的水溶性维生素，动物体无法自行制造合成，必须额外补充。B族维生素可以帮助维持心脏、神经系统功能，维持消化系统及皮肤的健康，参与能量代谢，能增强体力、滋补强身。B族维生素广泛存在于米糠、麸皮、酵母、动物的肝脏、粗粮蔬菜等食物中，但由于食用方法不对，几乎摄取不到。B族维生素有很多共同的方面，比如它们都是水溶性的，多余的B族维生素不会贮藏于体内，而会完全排出体外。所以，B族维生素必须每天补充。B族的维生素之间有协同作用——也就是说，一次摄取全部B族的维生素，要比分别摄取效果更好。另外，如果B1、B2、B6摄取比率不均的话，是没有效果的。
维生素B1：促进血液循环，辅助盐酸制造，血流形成，糖类代谢，有助于人体感知，并使脑功能发挥到最佳状态；对能量代谢，生长，食欲，学习能力均起着积极的作用。帮助人体抵抗衰老及烟酒对人体的不利影响。适用人群：脚气病、便秘、浮肿、肝肿大、疲劳、健忘、胃肠功能紊乱、性格改变、易怒、呼吸困难、食欲下降、肌肉萎缩、神经过敏、手足麻木疼痛、动作不协调有麻刺感、肌肉疼痛无力、全身衰竭、体重严重下降。
维生素B2：红细胞形成，抗体制造，细胞呼吸作用及生长必须的营养元素，能够缓解眼睛疲劳，预防白内障，辅助糖类，脂肪，蛋白质、色氨酸代谢，与维生素A合用时，维生素B2可以维持和改善呼吸道粘膜的功能，帮助身体组织如皮肤，指甲，头发利用氧气，去除头皮屑，及协助铁及B6的吸收。如果孕妇缺乏B2，即使本人无任何症状，却有可能损害胎儿的健康。维生素B2和维生素B6合用对治疗腕骨综合症有一定作用。适用人群：嘴角破裂与生疮、口舌发炎、皮肤损害、皮炎、失眠、脱发、对光反射敏感、消化不良、生长迟缓、反应迟钝。
维生素B6：有利于盐酸合成及脂肪、蛋白质的吸收，协助维持身体内钠钾平衡，促进红细胞的形成，有利于解决体内水分滞留带来的不便，帮助脑和免疫系统发挥正常的生理机能，控制细胞增长和分裂，增强机体免疫力，活化体内的许多种酶，并有助于B12的吸收和DNA、RNA等遗传物质的合成。维生素B6防止动脉硬化，在治疗关节炎、过敏、及哮喘上也有一定作用。维生素B6还是一种温和的利尿剂，减轻经前不适症状，还能阻止肾结石的形成。适用人群：头痛、惊厥、贫血、恶心、呕吐、皮肤脱落、舌疮。其它：粉刺，厌食，关节炎，结膜炎，生疮及裂口；抑郁，眩晕，疲劳，易激惹，伤口愈合不良，牙槽与口腔炎；学习能力及记忆能力下降，生长迟缓，刺痛感，腕管狭窄综合症也与B6的缺乏有一定关系。
维生素C：是呈无色无臭的片状晶体，易溶于水，为酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸内酯，Vc有L-型和D-型两种异构体，只有L-型的才具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素。在生物体内，维生素C是一种抗氧化剂，保护身体免于自由基的威胁，维生素C同时也是一种辅酶。摄入维生素C，可以制造大量免疫球蛋白，可以使抗癌的淋巴细胞高效率地发挥作用，但大量的维生素C有使吞噬细胞降低吞噬能力的作用。维生素C为抗体及胶原形成，组织修补(包括某些氧化还原作用)，苯丙氨酸、酪氨酸、维生素B3的代谢，铁、碳水化合物的利用，脂肪、蛋白质的合成，维持免疫功能，羟化与羟色胺，保持血管的完整，促进非血红素铁吸收等所必需，同时维生素C还具备有抗氧化，抗自由基，抑制酪氨酸酶的作用。体内维生素C是高效抗氧化剂，用来减轻抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase)基底的氧化应力(oxidative stress)。
另外，还有许多重要的生物合成过程中也需要维生素C参与作用：
1)参与羟化反应：羟化反应是体内许多重要物质合成或分解的必要步骤，在羟化过程中，必须有维生素C参与：
⑴促进胶原合成，维生素C缺乏时，胶原合成障碍，从而导致坏血病；
⑵促进神经递质(5-羟色胺及去甲肾上腺素)合成；
⑶促进类固醇羟化，高胆固醇患者，应补给足量的维生素C；
⑷促进有机物或毒物羟化解毒，维生素C能提升混合功能氧化酶的活性，增强药物或毒物的解毒(羟化)过程。
2)还原作用：维生素C可以是氧化型，又可以是还原型存在于体内，所以可作为供氢体，又可作为受氢体，在体内氧化还原过程中发挥重要作用：
⑴促进抗体形成：高浓度的维生素C有助于食物蛋白质中的胱氨酸还原为半胱氨酸，进而合成抗体。
⑵促进铁的吸收：维生素C能使难以吸收的三价铁还原为易于吸收的二价铁，从而促进了铁的吸收。此外，还能使亚铁络合酶等的巯基处于活性状态，以便有效地发挥作用，故维生素C是治疗贫血的重要辅助药物。
⑶促进四氢维生素B3形成：维生素C能促进维生素B3还原为四氢维生素B3后发挥作用，故对巨幼红细胞性贫血也有一定疗效。
⑷维持巯基酶的活性。
3)其他功能：
⑴解毒：体内补充大量的维生素C后，可以缓解铅、汞、镉、砷等重金属对机体的毒害作用；
⑵预防癌症：许多研究证明维生素C可以阻断致癌物N-亚硝基化合物合成，预防癌症；
⑶清除自由基：维生素C可通过逐级供给电子而转变为半脱氧抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的过程清除体内超负氧离子(O2-)、羟自由基(OH·)、有机自由基(R·)和有机过氧基(ROO·)等自由基；使生育酚自由基重新还原成生育酚，反应生成的抗坏血酸自由基在一定条件下又可被NADH2的体系酶作用下还原为抗坏血酸。
牛磺酸：又称β-氨基乙磺酸，最早由牛黄中分离出来，故得名。纯品为无色或白色斜状晶体，无臭，牛磺酸化学性质稳定，不溶于乙醚等有机溶剂，是一种含硫的非蛋白氨基酸，在体内以游离状态存在，不参与体内蛋白的生物合成。牛磺酸虽然不参与蛋白质合成，但它却与胱氨酸、半胱氨酸的代谢密切相关。人体合成牛磺酸的半胱氨酸亚硫酸羧酶(CSAD)活性较低，主要依靠摄取食物中的牛磺酸来满足机体需要。牛黄酸具有多种免疫调节功能：
1)保护视网膜：牛磺酸占视网膜中游离氨基酸总量的50％，动物实验证明，缺乏牛磺酸的猫其视网膜电图显示杆细胞与锥细胞广泛变性。
2)促进中枢神经系统发育：胎儿发育中脑组织的浓度显著高于出生后，提示牛磺酸对中枢神经系统发育，如细胞的增殖、移行与分化有作用。
3)保护心肌作用：牛磺酸有增强心脏收缩力的作用，可对抗毛地黄引起的心律不齐，这可能与牛磺酸对膜通透性以及离子流的作用，维持细胞内钙离子浓度有关。牛磺酸还有提高心肌耐缺氧能力作用。
4)抗氧化作用：牛磺酸有维护许多细胞，特别是血细胞抗氧化活性，使组织免受氧化基与自由基的损伤。
5)促进免疫功能：牛磺酸有提高细胞免疫吞噬功能，促进免疫球蛋白的生成的作用。
6)促进脂类消化吸收：牛磺酸与胆酸结合成牛磺胆酸，参与脂类的消化吸收。
同时，牛磺酸还被用于治疗多种疾病和免疫性功能的恢复，如促进婴幼儿组织和智力发育、提高神经传导和视觉机能、防止心血管病、维持正常的生殖功能、解除胆汁阻塞、通过对中枢5-ht系统或儿茶酚胺系统的作用降低体温、降压、强心和抗心律失常、降血糖、松弛骨骼肌和拮抗肌强直、降低血小板聚集作用、增强精子的运动能力、提高胰岛素的活性。另外，牛磺酸防治缺铁性贫血有明显效果，它不仅可以促进肠道对铁的吸收，还可增加红细胞膜的稳定性；牛磺酸还是人体肠道内双歧菌的促生因子，优化肠道内细菌群结构；还具有抗氧化、延缓衰老作用；能够促进急性肝炎恢复正常；对四氯化碳中毒有保护作用，并能抑制由此所引起的血清谷丙转氨酶的升高；对肾毒性有保护作用，牛磺酸对顺铂所致的兔原代肾小管上皮细胞改变有保护作用；牛磺酸可镇静、镇痛和消炎，对冻伤、KCN中毒及偏头疼也有防治作用。
本发明多肽组合物，由囊素肽、胸腺肽和转移因子按照一定的质量比混合制备而成，囊素肽促进B淋巴细胞分化成熟与胸腺肽连续诱导T细胞分化、发育的热性，结合转移因子标记受感染的细胞并能促进释放干扰素，三种多肽相互协同作用，避免一种免疫多肽的功能局限性，解除免疫抑制，恢复受损的免疫细胞，从而更全面、高效的提高动物的免疫力。
本发明提高畜禽免疫功能的组合物，采用本发明的多肽组合物与B族维生素、维生素C和牛磺酸复配，多肽组合物的免疫调节功能与B族维生素、维生素C和牛磺酸的机体功能调节功能协同作用，促进免疫球蛋白的产生和图示细胞的吞噬，产生抗体的速度快，对于疾病的治疗和预防效果显著，具有显著的解毒、排毒、抗氧化、清除或减少自由基，维持、提高免疫力的作用。
本发明多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物均可以作为饲料添加剂，或作为药物制剂添加在饮用水中，或者作为药物制剂注射使用，对于猪瘟、口蹄疫、圆环病毒、仔猪腹泻、新城疫、温和型流感、鸭肝病毒病等都有很好的防控、恢复作用，减少抗生素的使用，减少疫病的发生，减少死亡率，是绿色安全，提高免疫力、提高防病、抗病毒能力的畜禽产品；同时，本发明组合物作为饲料添加剂或者饮用水添加剂，提高畜禽的吸收转化能力，促进生长发育，提高料肉比，提高禽的成活率和产蛋率，尤其使疫病引起的僵猪脱缰，大幅增加经济效益，提高畜禽排毒能力，净化养殖环境。
本发明提高畜禽免疫功能的组合物的制备方法，适用于对多肽的大量提取，与维生素等原料复合后，活性强，性能稳定，且该方法操作简便，易于控制，可工厂化生产。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
一种多肽组合物，由囊素肽、胸腺肽和转移因子按照2：1：1的质量比例制备而成。
一种提高畜禽免疫功能的组合物，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素25份、维生素C 25份、本实施例的多肽组合物20份、牛磺酸12份、抗结剂1.5份、多孔淀粉40份；其中B族维生素由维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B3按照20：3：1：20比例复配组成。
上述组合物的剂型为微囊颗粒剂。
上述提高畜禽免疫功能的组合物的制备方法，具体操作步骤为：
1)制备多肽组合物：
A:取新鲜的动物淋巴去除脂肪、包膜，捣碎后，加入生理盐水匀浆，反复冻融3次后超声细胞破碎，离心取上清，得转移因子溶液，并测定其中含有的转移因子的浓度；
B:取新鲜的动物的胸腺，去除杂物，捣碎后，加入生理盐水匀浆，反复冻融3次后超声细胞破碎，80℃水浴10分钟，离心取上清，得胸腺肽溶液，并测定其中含有的胸腺肽的浓度；
C:取新鲜的动物法氏囊去除脂肪、包膜，捣碎后，加入生理盐水匀浆，反复冻融3次后超声细胞破碎，取上清，得囊素肽溶液，并测定其中含有的囊素肽的浓度；
D:按照转移因子：胸腺肽：囊素肽＝2：1：1的质量比取步骤A、步骤B和步骤C制备的转移因子溶液、胸腺肽溶液和囊素肽溶液，混合均匀，制得多肽组合物粗品；
E:将步骤D制备的多肽组合物粗品过滤，收集滤液，将滤液在4℃温度下进行透析、过滤、除菌，制得所述的多肽组合物；
2)调浆：4℃温度下，取步骤1)制备的的多肽组合物，取B族维生素、维生素C、牛磺酸、抗结剂和多孔淀粉加入多肽组合物中，并按照料液比1：1的比例补足生理盐水，混合均匀，调节pH＝6.0，得组合物浆料；
3)成型：取步骤2)制备的组合物浆料进行微囊化包被处理，得所述的提高畜禽免疫功能的组合物微囊颗粒剂。
实施例2
一种多肽组合物，由囊素肽、胸腺肽和转移因子按照5：5：0.5的质量比例制备而成。
一种提高畜禽免疫功能的组合物，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素20份、维生素C 20份、本实施例的多肽组合物10份、牛磺酸10份、抗结剂1份、多孔淀粉45份；其中B族维生素由维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B3按照20：3：1：20比例复配组成。
上述组合物的剂型为粉剂。
上述提高畜禽免疫功能的组合物的制备方法，具体操作步骤为：
1)制备多肽组合物：
A:取新鲜的动物淋巴去除脂肪、包膜，捣碎后，加入生理盐水匀浆，反复冻融3次后超声细胞破碎，离心取上清，得转移因子溶液，并测定其中含有的转移因子的浓度；
B:取新鲜的动物的胸腺，去除杂物，捣碎后，加入生理盐水匀浆，反复冻融3次后超声细胞破碎，80℃水浴10分钟，离心取上清，得胸腺肽溶液，并测定其中含有的胸腺肽的浓度；
C:取新鲜的动物法氏囊去除脂肪、包膜，捣碎后，加入生理盐水匀浆，反复冻融3次后超声细胞破碎，取上清，得囊素肽溶液，并测定其中含有的囊素肽的浓度；
D:按照转移因子：胸腺肽：囊素肽＝5：5：0.5的质量比取步骤A、步骤B和步骤C制备的转移因子溶液、胸腺肽溶液和囊素肽溶液，混合均匀，制得多肽组合物粗品；
E:将步骤D制备的多肽组合物粗品过滤，收集滤液，将滤液在3℃温度下进行透析、过滤、除菌，制得所述的多肽组合物；
2)调浆：3℃温度下，取步骤1)制备的的多肽组合物，取B族维生素、维生素C、牛磺酸、抗结剂和多孔淀粉加入多肽组合物中，并按照料液比1：1的比例补足生理盐水，混合均匀，调节pH＝6.0，得组合物浆料；
3)成型：取步骤2)制备的组合物浆料进行冻干处理，得所述的提高畜禽免疫功能的组合物粉剂。
实施例3
一种多肽组合物，由囊素肽、胸腺肽和转移因子按照0.5：0.5：5的质量比例制备而成。
一种提高畜禽免疫功能的组合物，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素30份、维生素C 30份、本实施例的多肽组合物15份、牛磺酸15份、抗结剂2份、多孔淀粉50份；其中B族维生素由维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B3按照20：3：1：20比例复配组成。
上述组合物的剂型为微囊颗粒剂。
上述提高畜禽免疫功能的组合物的制备方法，具体操作步骤为：
1)制备多肽组合物：
A:取新鲜的动物淋巴去除脂肪、包膜，捣碎后，加入生理盐水匀浆，反复冻融3次后超声细胞破碎，离心取上清，得转移因子溶液，并测定其中含有的转移因子的浓度；
B:取新鲜的动物的胸腺，去除杂物，捣碎后，加入生理盐水匀浆，反复冻融3次后超声细胞破碎，80℃水浴10分钟，离心取上清，得胸腺肽溶液，并测定其中含有的胸腺肽的浓度；
C:取新鲜的动物法氏囊去除脂肪、包膜，捣碎后，加入生理盐水匀浆，反复冻融3次后超声细胞破碎，取上清，得囊素肽溶液，并测定其中含有的囊素肽的浓度；
D:按照转移因子：胸腺肽：囊素肽＝0.5：0.5：5的质量比取步骤A、步骤B和步骤C制备的转移因子溶液、胸腺肽溶液和囊素肽溶液，混合均匀，制得多肽组合物粗品；
E:将步骤D制备的多肽组合物粗品过滤，收集滤液，将滤液在5℃温度下进行透析、过滤、除菌，制得所述的多肽组合物；
2)调浆：5℃温度下，取步骤1)制备的的多肽组合物，取B族维生素、维生素C、牛磺酸、抗结剂和多孔淀粉加入多肽组合物中，并按照料液比1：1的比例补足生理盐水，混合均匀，调节pH＝6.0，得组合物浆料；
3)成型：取步骤2)制备的组合物浆料进行微囊化包被处理，得所述的提高畜禽免疫功能的组合物微囊颗粒剂。
对比例1
本对比例提高畜禽免疫功能的组合物，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素25份、维生素C 25份、胸腺肽20份、牛磺酸12份、抗结剂1.5份、多孔淀粉40份；其中B族维生素由维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B3按照20：3：1：20比例复配组成。
对比例2
本对比例提高畜禽免疫功能的组合物，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素25份、维生素C 25份、囊素肽20份、牛磺酸12份、抗结剂1.5份、多孔淀粉40份；其中B族维生素由维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B3按照20：3：1：20比例复配组成。
对比例3
本对比例提高畜禽免疫功能的组合物，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素25份、维生素C 25份、转移因子20份、牛磺酸12份、抗结剂1.5份、多孔淀粉40份；其中B族维生素由维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B3按照20：3：1：20比例复配组成。
试验例1本发明制备的多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物对大白鼠的急性毒性试验
1、材料与方法
1.1动物：大白鼠Wister系，河南省实验动物中心提供，体重180～200g。
1.2方法：取大白鼠100只，随机分为10组，每组10只，雌雄各半，实验前在恒定条件下饲养一周，健康状况良好。本发明实施例1制备的多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物按不同给药剂量分组，加入饮用水中，每日一次内服，连续7天，结果如下表1和表2所示：
表1实施例1制备的多肽组合物对大白鼠的急性毒性试验
给药剂量 动物数(只) 死亡数(只) 死亡率(％) 存活率(％)
1.25mg/Kg 10 0 0 100
2mg/Kg 10 0 0 100
4mg/Kg 10 0 0 100
8mg/Kg 10 0 0 100
16mg/Kg 10 0 0 100
表2实施例1制备的提高畜禽免疫功能的组合物的急性毒性试验
给药剂量 动物数(只) 死亡数(只) 死亡率(％) 存活率(％)
1.25mg/Kg 10 0 0 100
2mg/Kg 10 0 0 100
4mg/Kg 10 0 0 100
8mg/Kg 10 0 0 100
16mg/Kg 10 0 0 100
由上述表1和表2所示的数据可知，大白鼠口服本发明多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物剂量达到16mg/kg，临床推荐用量为1.25～2mg/kg，已超出临床推荐用量仍不出现任何中毒症状和死亡，按照毒理学评价标准，认为本发明组合物属于无毒物质。
试验例2本发明多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物对防治断奶应激性腹泻、口蹄疫、温和型流感、仔猪存活率的疗效验证如下：
2、材料与方法
2.1试验药品
实施例1制备的多肽组合物、实施例1制备的提高畜禽免疫功能的组合物、对比例1～3制备的提高畜禽免疫功能的组合物。
2.2试验动物及分组
受试动物，1日龄健康哺乳仔猪600头，随机分为试验组1、试验组2、对照组1、对照组2、对照组3和空白对照组，共6组，每组100只。
2.3试验方法
在哺乳仔猪3日龄和断奶当日，分别对试验组1注射实施例1制备的多肽组合物、试验组2注射实施例1制备的提高畜禽免疫功能的组合物、对照组1注射对比例1制备的提高畜禽免疫功能的组合物、对照组2注射对比例2制备的提高畜禽免疫功能的组合物、对照组3注射对比例3制备的提高畜禽免疫功能的组合物、空白对照组注射生理盐水。其中实施例1和对比例1～3制备的提高畜禽免疫功能的组合物的注射方法是取组合物的微囊化颗粒加入注射用生理盐水中溶解后，再进行注射，具体用药剂量和试验结果如下表3所示：
表3
由上述的试验结果可知：本发明多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物对防止仔猪断奶应激性腹泻、口蹄疫和流感病毒，提高仔猪存活率具有显著的效果，并且本发明提高畜禽免疫功能的组合物将维生素和牛磺酸等物质与多肽组合物复配使用，产生协同增效作用，提高组合物对病毒性疾病的防止作用和免疫功能的提高作用。同时，本发明将三种不同的多肽物质复配使用，使其相互之间发生协同增效作用，效果优于单一的多肽物质。
试验例3本发明多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物对猪瘟和猪圆环病毒的混合感染的临床疗效观察
3.1发病状况
河南省某养殖户共养猪，均为肉用猪，体重约15～20kg，出现了一种以咳嗽、喘气、发热为主要特征的疾病。自发病日起，5天内死亡25头，经流行病学调查、临床症状和实验室诊断，最后确诊为猪瘟与猪圆环病毒的混合感染。
3.2临床症状
病猪精神萎靡，被毛粗乱，皮肤苍白，有的可见豆状黑斑，高热稽留，体温41℃左右，食欲减退，渴欲增加，大便干硬或呈糊状，咳嗽，呼吸迫促，眼结膜潮红，病程较长的猪有的衰竭死亡，有的成为僵猪。
3.3剖检变化
各肠段充血，出血，肠系膜淋巴结合腹股沟淋巴结肿大、出血，切面呈大理石样，扁桃体肿大，肾肿大、淤血，表面呈沟回状，颜色呈土黄色，有点状出血，膀胱粘膜有较多出血点，胃粘膜有的水肿，肝脂肪变性而带黄色，肺充血、水肿、淤血。
3.4实验室诊断
3.4.1猪瘟直接免疫荧光抗体试验
剖检病猪，取其扁桃体、肾脏、淋巴结等组织。速冻1min后，进行冰冻切片，厚度为6μm，切片展贴于洁净载玻片上，经丙酮固定15min后，用PBS缓冲液漂洗，自然风干；用猪瘟、猪细小病毒、猪病毒性腹泻三价荧光抗体滴加于切片表面，于37℃下作用0.5h后，轻漂洗，自然干燥；封固盖片，镜检。于荧光显微镜视野中，可见组织上皮细胞浆内呈现黄色、绿色或黄绿色，细胞核不着色，细胞轮廓分明，为猪瘟病毒感染阳性。
3.4.2圆环病毒多重聚合酶链式反应检测
采用农业部兽医诊断中心的圆环病毒检测试剂盒。取血清，经蛋白酶、RNA酶等55℃笑话过夜后，提取病毒模板DNA，进行多重PCR结束后，取15μl反应产物于10g/L的琼脂糖凝胶中电泳，紫外透射仪中观察结果。结果显示，圆环病毒II型阳性。
疗效评价指标：
痊愈三天内临床症状消失，粪便颜色等性状及精神食欲正常；
有效三天内临床症状明显减轻，精神食欲好转；
无效三天内临床症状未消失，精神食欲差，病情继续发展和死亡。
结果如下表4所示：
表4不同组合物对猪瘟与猪圆环病毒的混合感染的临床疗效统计
上述表4中试验组1注射本发明实施例1制备的多肽组合物，试验组2注射本发明实施例1制备的提高畜禽免疫功能的组合物，对照组1注射对比例1制备的提高畜禽免疫功能的组合物，对照组2注射对比例2制备的提高畜禽免疫功能的组合物，对照组3注射对比例3制备的提高畜禽免疫功能的组合物，空白对照组注射生理盐水。由上述表3所示的结果可知，本发明多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物对猪瘟与猪圆环病毒感染性疾病，具有很好的治疗效果，并且本发明将三种不同的多肽物质复配使用，使其相互之间发生协同增效作用，效果优于单一的多肽物质。
试验例4本发明多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物作为饲料添加剂对仔猪生长性能和免疫能力的影响作用
4.1试验方法
试验对象是来源一致，同胎次，产仔时间相近，产仔数相同，性别比例相近，断奶窝重、体重相近的杜大肠三元断奶仔猪，按配对试验原则将其分成试验组1、试验组2、对照组1、对照组2、对照组3共5组，每组3个重组，每个重复20头，共300头。试验组1饲喂实施例1制备的多肽组合物+日用饲料，每隔一周饲喂3天；试验组2饲喂实施例1制备的提高畜禽免疫功能的组合物+日用饲料，每隔一周饲喂3天；对照组1饲喂对比例1制备的提高畜禽免疫功能的组合物+日用饲料，每隔一周饲喂3天；对照组2饲喂对比例2制备的提高畜禽免疫功能的组合物+日用饲料，每隔一周饲喂3天；对照组3饲喂对比例3制备的提高畜禽免疫功能的组合物+日用饲料。其中试验组1、试验组2、对照组1、对照组2、对照组3中试验样品与日用饲料的复配比例均为，每1000kg日用饲料中拌乳试验样品1kg；每组采食均为自由采食，饲喂周期为50天，期间定期清扫猪舍。记录每组的猪的平均体重，结果如下表5所示：
表5
由上述表5所示的结果可知，本发明多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物，采用三种不同的多肽复配，使其相互之间产生协同增效作用，相比对比例1～3中采用单一的多肽物质与维生素等物质复配组成的组合物，本发明组合物在作为饲料添加剂使用时，提高仔猪的生长性能，降低生产成本，提高经济效益。
试验例5本发明多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物对仔猪免疫功能的影响试验
5.1试验动物分组与试验方法
受试动物，1日龄健康哺乳仔猪60头，随机分为试验组1、试验组2、对照组1、对照组2、对照组3、空白对照组，每组10头。在哺乳仔猪的3日龄和断奶当日，对试验组1肌肉注射实施例1制备的多肽组合物，对试验组2肌肉注射实施例1制备的提高畜禽免疫功能的组合物，对对照组1注射对比例1制备的提高畜禽免疫功能的组合物，对对照组2注射对比例2制备的提高畜禽免疫功能的组合物，对对照组3注射对比例3制备的提高畜禽免疫功能的组合物，注射剂量均为1.25mg/kg。断奶后12天采血，分离血清，测定血清IgG、溶血素，同时分离白细胞，进行玫瑰花环形成试验，结果如下表6所示：
表6
由上述表6所示的结果可知，本发明多肽组合物和提高畜禽免疫功能的组合物，通过采用三种不同的肽复配，使其相互之间产生协同增效作用，相比单一的多肽物质，增强了对仔猪免疫功能的增强作用。

Claims (10)

1.一种多肽组合物，其特征在于，由囊素肽、胸腺肽和转移因子按照0.5～5：0.5～5：0.5～5的质量比例制备而成。
2.如权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，由囊素肽、胸腺肽和转移因子按照2：1：1的质量比例制备而成。
3.一种提高畜禽免疫功能的组合物，其特征在于，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素20～30份、维生素C 20～30份、多肽组合物10～20份、牛磺酸10～15份、抗结剂1～2份、多孔淀粉40～50份；所述多肽组合物为如权利要求1所述的多肽组合物。
4.如权利要求3所述的提高畜禽免疫功能的组合物，其特征在于，由以下重量份数的原料制备而成：B族维生素25份、维生素C 25份、多肽组合物20份、牛磺酸12份、拮抗剂1.5份、多孔淀粉40份。
5.如权利要求3或4所述的提高畜禽免疫功能的组合物，其特征在于，所述B族维生素为维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B3中的一种或一种以上的任意组合。
6.如权利要求5所述的提高畜禽免疫功能的组合物，其特征在于，所述B族维生素为维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B3按照20：3：1：20的质量比组成。
7.如权利要求3或4所述的提高畜禽免疫功能的组合物的制备方法，其特征在于，所述组合物的剂型为微囊颗粒剂或粉剂。
8.一种如权利要求7所述的提高畜禽免疫功能的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
1)制备多肽组合物：
A:取新鲜的动物淋巴去除脂肪、包膜，捣碎后，加入生理盐水匀浆，冻融后超声细胞破碎，离心取上清，得转移因子溶液，并测定其中含有的转移因子的浓度；
B:取新鲜的动物的胸腺，去除杂物，捣碎后，加入生理盐水匀浆，冻融后，超声细胞破碎，离心取上清，得胸腺肽溶液，并测定其中含有的胸腺肽的浓度；
C:取新鲜的动物法氏囊去除脂肪、包膜，捣碎后，加入生理盐水匀浆，冻融后超声破碎，取上清，得囊素肽溶液，并测定其中含有的囊素肽的浓度；
D:按照转移因子：按质量比取步骤A、步骤B和步骤C制备的转移因子溶液、胸腺肽溶液和囊素肽溶液，混合均匀，制得多肽组合物粗品；
E:将步骤D制备的多肽组合物粗品过滤，收集滤液，将滤液进行透析、过滤、除菌，制得所述的多肽组合物；
2)调浆：取步骤1)制备的的多肽组合物，取B族维生素、维生素C、牛磺酸、抗结剂和多孔淀粉加入多肽组合物中，并按照料液比1：0.8～1.2的比例补足生理盐水，混合均匀，得组合物浆料；
3)成型：
方法一：取步骤2)制备的组合物浆料进行微囊化包被处理，得所述的提高畜禽免疫功能的组合物微囊颗粒剂；
方法二：取步骤2)制备的组合物浆料进行冻干处理，得所述的提高畜禽免疫功能的组合物粉剂。
9.如权利要求8所述的提高畜禽免疫功能的组合物的制备方法，其特征在于，步骤2)中在3～5℃条件下，将多肽组合物与B族维生素、维生素C、牛磺酸、抗结剂和多孔淀粉混合均匀，并调节pH＝6.0，得组合物浆料。
10.如权利要求8所述的提高畜禽免疫功能的组合物的制备方法，其特征在于，步骤B中还包括将超声破碎后的细胞在80℃水浴中加热10分钟，再离心取上清。
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