CN110585109A - 一种羊胚胎素的提取方法及抗衰老化妆品组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种羊胚胎素的提取方法，将羊胚胎原料经过冷冻、溶解和研磨过程，并反复几次，镜检无完整细胞结构后，加水低温离心，进行二次超滤至相对密度为1.5‑2，除去杂质和大分子蛋白，‑10℃下保存。本发明按适当比例添加上述羊胚胎素溶液的化妆品，能发挥活性多肽的生物活性，能够促进细胞分裂、活化衰老细胞，起到减轻皱纹、延缓皮肤衰老等美容功效，激素含量未检出，使用更安全。

Description

一种羊胚胎素的提取方法及抗衰老化妆品组合物
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及一种羊胚胎素的提取方法及抗衰老化 妆品组合物。
背景技术
目前市面上宣称添加羊胎素的护肤品很多，但实际添加的多为羊胎盘素，其 是以羊胎盘为主要原料或主要原料之一提取制得。羊胎盘是一种特异化的功能性 器官，其中含有较多的绒毛膜促性腺激素、雌激素、孕激素等，且在精制过程中 无有效手段可将激素去除或灭活。羊胎盘素中含有的激素类物质会对部分人群有 不利影响(少年儿童、孕妇及子宫、卵巢、乳房肿瘤患者)；且《化妆品安全技 术规范》(2015版)中已明确将雌激素类物质列入化妆品禁用组分名单，添加羊 胎盘素的化妆品将会面临较大的法规风险。
发明内容
本发明提供一种羊胚胎素的提取方法及抗衰老化妆品组合物，其目的在于， 提供一种羊胚胎素的提取方法，所制备羊胚胎素溶液含大量活性多肽，而性激素 含量极低。将此羊胚胎素溶液送省疾控中心检验，其多肽含量为12.5mg/mL，活 性成分高，而羊胎盘提取液中常含有的绒毛膜促性腺激素、雌激素、孕激素均未 检出。
本发明提供一种羊胚胎素的提取方法，将羊胚胎原料经过冷冻、溶解和研磨 过程，并反复几次，镜检无完整细胞结构后，加水低温离心，进行二次超滤至相 对密度为1.5-2，除去杂质和大分子蛋白，-10℃下保存。
作为本发明进一步的改进，所述羊胚胎原料的制备方法如下：选取怀孕4～6 周的羊胚胎，洗净后采用食物绞碎机进行初步绞碎，绞碎1～2h，将羊胚胎绞碎 至糊状，并加入蒸馏水浸泡，得到羊胚胎原料。
优选怀孕4-6周的羊胚胎，洗净后采用常用食物绞碎机进行初步绞碎，绞 碎1～2h，将羊胚胎绞碎至糊状，并加入所处理羊胚胎重量10倍以上的蒸馏水浸 泡，使细胞吸足水分，处于膨胀状态，后续研磨时细胞能破碎均匀，充分保护其 中活性物质。优选的加水量为所处理羊胚胎重量10倍。此时效果最优。本发明 中所述蒸馏水为医用级蒸馏水。
作为本发明进一步的改进，所述加水量为所处理羊胚胎重量10倍。
作为本发明进一步的改进，所述冷冻条件为-30℃下冷冻21～22h，所述冷冻 过程后还加入一个破碎过程，将冻住的羊胚胎在常温下采用食物绞碎机破碎10～ 20min。
作为本发明进一步的改进，所述研磨过程为采用胶体磨研磨1～2h。
置于-30℃下冷冻21～22h，羊胚胎细胞位置迅速固定，细胞破裂少细胞液流 失少。21～22h后羊胚胎完全冻住。此时可在室温下溶解，后采用胶体磨进行研 磨。显然的为了缩短等待溶解的时间，并进一步提供羊胚胎的破碎程度，此时也 可将冻住的羊胚胎在常温下破碎10～20min，此时的破碎能加速溶解并进一步绞 碎羊胚胎以增强其流动性，便于在胶体磨中研磨。用胶体磨中研磨也是在常温下 进行，羊胚胎进一步溶解，此时研磨对细胞的破碎效果优于为经速冻直接研磨的 羊胚胎。优选胶体磨研磨时间为1～2h,此条件下效果最优。为充分破碎细胞，以 依次进行的冷冻、溶解、破碎和研磨为一个循环，充分上述循环3次，重复3次 后可达到镜检无完整细胞结构，此时活性物质均已溶于蒸馏水中。
作为本发明进一步的改进，所述加水量为加入所处理羊胚胎重量1倍的蒸馏 水。
作为本发明进一步的改进，所述低温离心的温度为-15～-10℃。
为使活性物质充分溶出，加入所处理羊胚胎重量1倍的蒸馏水离心，整个离 心过程中溶液温度为-15～-10℃以下。在此条件下下离心能防止由于液体升温导 致提取物中活性物质失活。
作为本发明进一步的改进，所述二次超滤中第一次超滤的超滤膜的分子量为 10万道尔顿，第二次超滤的超滤膜分子量为1万道尔顿。
取离心后的上清液采用10万分子量的超滤膜进行过滤，进行初步除杂。之 后还需采用1万分子量的超滤膜进行过滤，此时能将提取物中大分子蛋白质除去， 而分子量小于1万的活性物质，具有抗衰老作用，可得到保留。所得提取物置于 -10℃下保存，以抑制其中分解酶的活性。
本发明进一步保护一种上述方法提取得到的羊胚胎素溶液。
本发明进一步保护一种抗衰老化妆品组合物，将上述羊胚胎素溶液按照2wt％ 添加入化妆品基质中混合均匀。
羊胚胎素可促进细胞分裂、活化衰老细胞，起到减轻皱纹、延缓皮肤衰老等 美容功效。通过与化妆品基质复配使用可增强羊胚胎素的皮肤吸收利用度，使得 其作用得到加强。
本发明具有如下有益效果：本发明所制备羊胚胎素溶液含大量活性多肽，而 性激素含量极低。将此羊胚胎素溶液送省疾控中心检验，其多肽含量达到 12.5mg/mL，活性成分高，而羊胎盘提取液中常含有的绒毛膜促性腺激素、雌激 素、孕激素均未检出。
本发明按适当比例添加上述羊胚胎素溶液的化妆品，能发挥活性多肽的生物 活性，能够促进细胞分裂、活化衰老细胞，起到减轻皱纹、延缓皮肤衰老等美容 功效，激素含量未检出，使用更安全。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显 然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施
以下实施例中所使用的药品及仪器均为市售。
实施例1
S1.取怀孕4周的羊胚胎，绞碎1h，加入羊胚胎10倍量的蒸馏水，浸泡1h；
S2.置于-30℃下21h,在常温下采用食物绞碎机破碎10min后用胶体磨研磨 1h；
SS.重复步骤S2 3次；
S4.加入羊胚胎1倍量的蒸馏水，离心温度为-10℃；
S5.取上清液在10万道尔顿分子量下超滤，再用1万道尔顿分子量超滤， 得到羊胚胎素溶液，经检测，羊胚胎素中多肽类活性物含量为12mg/mL,绒毛膜促 性腺激素、雌激素、孕激素均未检出。
实施例2
S1.取怀孕6周的羊胚胎，绞碎2h，加入羊胚胎10倍量的蒸馏水，浸泡1h；
S2.置于-30℃下22h,在常温下采用食物绞碎机破碎20min后用胶体磨研磨 2h；
SS.重复步骤S2 3次；
S4.加入羊胚胎1倍量的蒸馏水，离心温度为-15℃；
S5.取上清液在10万道尔顿分子量下超滤，再用1万道尔顿分子量超滤， 得到羊胚胎素溶液，经检测，羊胚胎素中多肽类活性物含量为11.8mg/mL,绒毛膜 促性腺激素、雌激素、孕激素均未检出。
实施例3
S1.取怀孕5周的羊胚胎，绞碎1.5h，加入羊胚胎10倍量的蒸馏水，浸泡 1h；
S2.置于-30℃下21.5h,在常温下采用食物绞碎机破碎15min后用胶体磨研 磨1.5h；
SS.重复步骤S2 3次；
S4.加入羊胚胎1倍量的蒸馏水，离心温度为-12℃；
S5.取上清液在10万道尔顿分子量下超滤，再用1万道尔顿分子量超滤， 得到羊胚胎素溶液，经检测，羊胚胎素中多肽类活性物含量为12.5mg/mL,绒毛膜 促性腺激素、雌激素、孕激素均未检出。
实施例4
S1.取怀孕8周的羊胚胎，绞碎0.5h，加入羊胚胎7倍量的蒸馏水，浸泡 1h；
S2.置于-30℃下10h,在常温下采用食物绞碎机破碎5min后用胶体磨研磨 0.5h；
SS.重复步骤S2 3次；
S4.加入羊胚胎1倍量的蒸馏水，离心温度为-5℃；
S5.取上清液在10万道尔顿分子量下超滤，再用1万道尔顿分子量超滤， 得到羊胚胎素溶液，经检测，羊胚胎素中多肽类活性物含量为4.5mg/mL,绒毛膜 促性腺激素、雌激素、孕激素均未检出。
实施例5
一种羊胚胎素抗衰老化妆品的制备：
配制化妆品基质：化妆品基质配方为透明质酸钠0.1％-0.5％，海藻糖1％ -2％，甘油5％-10％，丁二醇5％-10％，苯氧乙醇0.5％-1％，剩余组分为蒸馏 水；按比例将基质混合均匀；
配制羊胚胎素抗衰老化妆品：将实施例1制备的羊胚胎素溶液以2wt％的比 例添加于化妆品基质中混合均匀，得到羊胚胎素抗衰老化妆品。
实施例6
一种羊胚胎素抗衰老化妆品的制备：
配制化妆品基质：化妆品基质配方为透明质酸钠0.1％-0.5％，海藻糖1％ -2％，甘油5％-10％，丁二醇5％-10％，苯氧乙醇0.5％-1％，剩余组分为蒸馏 水；按比例将基质混合均匀；
配制羊胚胎素抗衰老化妆品：将实施例3制备的羊胚胎素溶液以2wt％的比 例添加于化妆品基质中混合均匀，得到羊胚胎素抗衰老化妆品。
实施例7
一种羊胚胎素抗衰老化妆品的制备：
配制化妆品基质：化妆品基质配方为透明质酸钠0.1％-0.5％，海藻糖1％ -2％，甘油5％-10％，丁二醇5％-10％，苯氧乙醇0.5％-1％，剩余组分为蒸馏 水；按比例将基质混合均匀；
配制羊胚胎素抗衰老化妆品：将实施例3制备的羊胚胎素溶液以2wt％的比 例添加于化妆品基质中混合均匀，得到羊胚胎素抗衰老化妆品。
实施例8
一种羊胚胎素抗衰老化妆品的制备：
配制化妆品基质：化妆品基质配方为透明质酸钠0.1％-0.5％，海藻糖1％ -2％，甘油5％-10％，丁二醇5％-10％，苯氧乙醇0.5％-1％，剩余组分为蒸馏 水；按比例将基质混合均匀；
配制羊胚胎素抗衰老化妆品：将实施例4制备的羊胚胎素溶液以2wt％的比 例添加于化妆品基质中混合均匀，得到羊胚胎素抗衰老化妆品。
实施例9
一种羊胚胎素抗衰老化妆品的制备：
配制化妆品基质：化妆品基质配方为透明质酸钠0.1％-0.5％，海藻糖1％ -2％，甘油5％-10％，丁二醇5％-10％，苯氧乙醇0.5％-1％，剩余组分为蒸馏 水；按比例将基质混合均匀；
配制羊胚胎素抗衰老化妆品：将实施例3羊胚胎素以0.5wt％的比例添加于 化妆品基质中混合均匀，得到羊胚胎素抗衰老化妆品。
实施例10
一种羊胚胎素抗衰老化妆品的制备：
配制化妆品基质：化妆品基质配方为透明质酸钠0.1％-0.5％，海藻糖1％ -2％，甘油5％-10％，丁二醇5％-10％，苯氧乙醇0.5％-1％，剩余组分为蒸馏 水；按比例将基质混合均匀；
配制羊胚胎素抗衰老化妆品：将实施例3羊胚胎素以5wt％的比例添加于化 妆品基质中混合均匀，得到羊胚胎素抗衰老化妆品。
对比例1
与实施例7相比未添加羊胚胎素溶液。
对比例2
与实施例7相比，羊胚胎素溶液替换为等质量的维生素C。
对比例3
与实施例7相比，羊胚胎素溶液替换为等质量的超氧化物歧化酶。
对比例4
与实施例7相比，羊胚胎素溶液替换为等质量的海洋肽。
对比例5
与实施例7相比，羊胚胎素溶液替换为等质量的市售羊胎素。
测试例1理化指标、卫生指标分析试验
分别对实施例5-10、对比例1-5制备得到的羊胚胎素抗衰老化妆品进行理化 指标和卫生指标分析，分析方法按照《化妆品卫生规范》(2007版)进行，结果见 表1。
测试例2过敏性和刺激性试验
选取21-50岁、自愿参与的健康女性试用者110名，随机分为十一组，每组 人数为10人。这十一组一一对应地使用实施例5-10和对比例1-5制备得到的抗 衰老化妆品组合物涂覆于脸部进行皮肤护理，每周护理两次，每次涂覆时间为 20min，使用周期为2个月。
结果：除了受试对比例5的组别外，其他所有女性均没有发生过敏反应，并 在受试期间没有发生皮肤刺激性反应，实施例6-10和对比例1-4制备得到的抗 衰老化妆品组合物温和无刺激，安全性强。受试对比例5制得的化妆品组合物的 组中出现6人过敏、起红疹，2人出现红血丝。对比例5中产品的安全性很差。
测试例3保湿抗皱试验
选取25-35岁、自愿参与的健康女性试用者330名，平均分成十一组，每组 30人，这十一组一一对应地使用实施例5-10、对比例1-5和市售的抗衰老化妆 品组合物，使用频率为每周两次，每次涂覆时间为20min，持续使用2个月。分 别对保湿度、抗皱效果进行测试观察，并对受试者进行问卷评估，综合取得数据。 测试结果分别见表2和表3。
保湿度的测试结果如表2所示，其中，表2中，A表示保湿度明显改善，B 表示保湿度有所改善，C表示保湿度使用前后无区别，D表示保湿度有所变差；E 表示保湿度明显变差。
表2
抗皱效果的测试结果如表3所示，其中，表3中，A表示皮肤弹性明显改善、 干纹/细纹淡化明显，B表示皮肤弹性有所改善、干纹/细纹有所淡化，C表示皮 肤弹性、干纹/细纹情况使用前后无区别，D表示皮肤弹性、干纹/细纹情况有所 变差；E表示皮肤弹性、干纹/细纹情况明显变差。
表3
受试者在使用实施例5-7，10的抗衰老化妆品组合物2个月后，总体上都感 觉到皮肤变得水润、饱满，大部分受试者局部皮肤的干纹、细纹都有改善，而对 比例1-5虽然有一定的保湿抗皱作用，但是相比而言效果不如实施例5-7,10显 著。实施例5-7为采用实施例1-3制备的羊胚胎素溶液按照2wt％的添加量加入化 妆品基质中得到，对比例1为未添加羊胚胎素溶液的基质，可见羊胚胎素溶液具 有明显保湿抗皱的效果。实施例8为添加实施例4制备的羊胚胎素溶液，实施例 4中制备的工艺参数为采用本发明规定的参数，制得的羊胚胎素溶液的多肽含量 仅为4.5mg/mL，因此，保湿和抗衰老等功效较差。实施例9中羊胚胎素溶液的添 加量过少，仅为0.5wt％，未达到活性含量，效果较差。实施例10的效果与实施 例5-7相差不大，但羊胚胎素溶液的添加量过多，为5wt％，是一种浪费，仅此， 添加量为2wt％的设置较为合适。对比例2-5分别采用维生素C、超氧化物歧化酶、 海洋肽和市售羊胎素替代羊胚胎素溶液，其效果不如本发明制备得到的羊胚胎素 溶液，且对比例5中添加的羊胎素还存在容易引起过敏、红血丝等安全问题，不 建议使用。
与现有技术相比，本发明所制备羊胚胎素溶液含大量活性多肽，而性激素含 量极低。将此羊胚胎素溶液送省疾控中心检验，其多肽含量为12.5mg/mL，活性 成分高，而羊胎盘提取液中常含有的绒毛膜促性腺激素、雌激素、孕激素均未检 出。
本发明按适当比例添加上述羊胚胎素溶液的化妆品，能发挥活性多肽的生物 活性，能够促进细胞分裂、活化衰老细胞，起到减轻皱纹、延缓皮肤衰老等美容 功效，激素含量未检出，使用更安全。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明 的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的 保护范围之内。

Claims (10)

1.一种羊胚胎素的提取方法，其特征在于，将羊胚胎原料经过冷冻、溶解和研磨过程，并反复几次，镜检无完整细胞结构后，加水低温离心，进行二次超滤至相对密度为1.5-2，除去杂质和大分子蛋白，-10℃下保存。
2.根据权利要求1所述一种羊胚胎素的提取方法，其特征在于，所述羊胚胎原料的制备方法如下：选取怀孕4～6周的羊胚胎，洗净后采用食物绞碎机进行初步绞碎，绞碎1～2h，将羊胚胎绞碎至糊状，并加入蒸馏水浸泡，得到羊胚胎原料。
3.根据权利要求2所述一种羊胚胎素的提取方法，其特征在于，所述加水量为所处理羊胚胎重量10倍。
4.根据权利要求1所述一种羊胚胎素的提取方法，其特征在于，所述冷冻条件为-30℃下冷冻21～22h，所述冷冻过程后还加入一个破碎过程，将冻住的羊胚胎在常温下采用食物绞碎机破碎10～20min。
5.根据权利要求1所述一种羊胚胎素的提取方法，其特征在于，所述研磨过程为采用胶体磨研磨1～2h。
6.根据权利要求1所述一种羊胚胎素的提取方法，其特征在于，所述加水量为加入所处理羊胚胎重量1倍的蒸馏水。
7.根据权利要求1所述一种羊胚胎素的提取方法，其特征在于，所述低温离心的温度为-15～-10℃。
8.根据权利要求1所述一种羊胚胎素的提取方法，其特征在于，所述二次超滤中第一次超滤的超滤膜的分子量为10万道尔顿，第二次超滤的超滤膜分子量为1万道尔顿。
9.一种如权利要求1-8任一项权利要求所述方法提取得到的羊胚胎素溶液。
10.一种抗衰老化妆品组合物，其特征在于，将权利要求9所述羊胚胎素溶液按照2wt％添加入化妆品基质中混合均匀。
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