CN110564705A - 一种用于转座酶片段化的试剂及其应用 - Google Patents

一种用于转座酶片段化的试剂及其应用 Download PDF

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dna
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张惠丹
戴敬
杨晟
黎晗
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Abstract

本发明公开了一种用于转座酶片段化的试剂，其包括独立包装的如下组件：Tn5转座酶、第一接头、第二接头以及转座反应缓冲液。进一步的，所述试剂还包括独立包装的正向引物的集合、反向引物的集合、DNA聚合酶、DNA聚合酶反应缓冲液，以及片段化反应缓冲液、终止溶液等组件。本发明还提供了包括所述试剂的试剂盒。本发明提供的试剂及试剂盒便于使用，成本低廉，既可避免现有商品化转座体系稳定性差、用途单一、成本高昂等缺陷，而且使用灵活性好，适应多种实际需求。特别是，利用所述试剂及试剂盒进行片段化核酸文库的构建时，仅需10min即可完成DNA片段化、末端修复和接头连接过程，可以显著缩短建库时间，并获得优异的测序质量。

Description

一种用于转座酶片段化的试剂及其应用
技术领域
本发明涉及一种试剂盒，特别涉及一种用于转座酶片段化的试剂及试剂盒，属于分子生物学设备技术领域。
背景技术
传统建库流程繁琐，一般要经过以下几个步骤：(1)将待测序的DNA分子用超声波打碎；(2)将打碎后的基因组进行末端补平；(3)在补平后的片段3’端加A和5’端进行磷酸化；(4)对修复后的片段进行接头连接；(5)对接头连接后DNA片段进行PCR扩增；(6)对扩增后的文库进行磁珠纯化。
转座法建库相对于传统建库，其实验方法简单快速，将DNA片段化、末端修复和接头连接过程集中于一个体系完成，最快5分钟内即可同时完成DNA片段化和接头连接，而且所需要的DNA量少。然而目前市面上能提供的Tn5转座法建库试剂盒普遍存在只适用于文库构建，适用范围单一，且采购成本相对较高，预定周期较长等缺陷。
例如，Illumina公司提供的商品化转座体系包括由转座酶和两种等摩尔的接头(Adapter)1、2构成一个完整转座子的mix体系，价格昂贵，且专为Illumina高通量测序平台而开发，用途单一。
此外，现有的商品化试剂盒直接提供转座复合物(Transposome)，转座体稳定性较差，运输过程中剧烈震动颠簸可能都会导致接头脱落，导致片段化效果下降影响最终文库质量和产量。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种用于转座酶片段化的试剂及其应用，以解决现有技术中存在的问题。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案包括：
本发明实施例提供了一种用于转座酶片段化的试剂，其包括独立包装的如下组件：Tn5转座酶、第一接头、第二接头以及转座体缓冲液，所述Tn5转座酶的序列如SEQ IDNO.1所示，所述第一接头的序列如SEQ ID NO.2～3所示，所述第二接头的序列如SEQ IDNO.4～5所示。
进一步的，所述试剂还包括独立包装的正向引物的集合、反向引物的集合、扩增酶、扩增反应缓冲液。
进一步的，所述试剂还包括独立包装的片段化反应缓冲液、终止溶液中的任意一种或多种。
本发明实施例提供了一种试剂盒，其包括前述的任一种试剂。
本发明实施例提供了一种片段化核酸文库的构建方法，其包括：
将Tn5转座酶、第一接头、第二接头于转座反应缓冲液中混合，并在室温下孵育30～120min，获得转座子复合物，之后进行纯化处理，其中所述Tn5转座酶的序列如SEQ IDNO.1所示，所述第一接头的序列如SEQ ID NO.2～3所示，所述第二接头的序列如SEQ IDNO.4～5所示；
将纯化后的转座子复合物、人类基因组DNA与片段化反应缓冲液、超纯水混合，并在50～60℃孵育3～15min，取出冰水浴降温1～2min，之后加入终止溶液50～60℃孵育3～7min终止反应，获得片段化产物；
之后将片段化产物与正向引物的集合、反向引物的集合、扩增酶、扩增反应缓冲液混合，并进行PCR反应，获得富集的DNA片段。
进一步的，所述构建方法还包括：从富集的DNA片段中分选出指定长度的DNA片段，获得片段化核酸文库。
与现有技术相比，本发明至少具有如下有益效果：提供的用于转座酶片段化的试剂及试剂盒便于使用，成本低廉，既可避免现有商品化转座体系稳定性差、用途单一、成本高昂等缺陷，而且使用的灵活性好，适应多种实际需求，例如适用于1ng～50ng的基因DNA聚合酶组DNA、cDNA、扩增子(>500bp)等样本片段化及index标记。特别是，利用所述试剂及试剂盒进行片段化核酸文库的构建时，与现有方法相比，仅需10min即可完成DNA片段化、末端修复和接头连接过程，显著缩短建库时间，并获得优异的测序质量。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明；
图1是本发明一具体实施例内DNA片段化步骤中的电泳图，其中1为阴性对照的基因组DNA，2～5为片段化后的DNA；
图2是本发明一具体实施例内DNA片段富集步骤中的电泳图，其中1为阴性对照的基因组DNA，2～5为片段化后的DNA。
具体实施方式
现在结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明。
本发明实施例一方面提供的一种用于转座酶片段化的试剂包括独立包装的如下组件：Transposase Tn5(转座酶Tn5)、Adapter 1(接头1，即第一接头)、Adapter 2(接头2，即第二接头)、Transposome reaction buffer(转座反应缓冲液)，其中所述Tn5转座酶的序列如SEQ ID NO.1所示，所述第一接头的序列如SEQ ID NO.2～3所示，所述第二接头的序列如SEQ ID NO.4～5所示。
其中，通过将转座酶Tn5、接头1、接头2独立包装，而不是直接提供转座复合物，可以避免出现转座复合物在运输过程中出现的接头脱落等缺陷。
其中，接头1、接头2的序列可以依据不同需求(例如，甲基化测序、转基因、突变体模式生物构建等)而设计，并且用户可以在使用该试剂盒的过程中，可以自行进行转座复合物的连接(例如，可以单次大量合成转座复合物后-20℃保存，有效期约为1年)。
具体地，接头1序列为(Phos表示磷酸化)：5’-Phos-CTGTCTCTTATACACATCT
3’-GACAGAGAATATGTGTAGA+接头1
具体地，接头2序列为(Phos表示磷酸化)：5’-Phos-CTGTCTCTTATACACATCT
3’-GACAGAGAATATGTGTAGA+接头2进一步的，所述第一接头包括第一单链DNA和第二单链DNA，所述第一单链DNA包括依次连接的捕获标签、指定的单链DNA和所述转座酶的识别序列，所述第二单链DNA为所述识别序列的互补序列；所述第二接头包括所述识别序列以及所述识别序列的互补序列。
在一些实施方式中，所述试剂还包括独立包装的Primer-index complex F(正向引物集)、Primer-index complex R(反向引物集)、Amplify enzyme(扩增酶)和Amplifybuffer(扩增缓冲液)。
在一些实施方式中，所述试剂还包括独立包装的Tagment buffer(片段化反应缓冲液)、Terminate solution(终止溶液)中的一种或多种，且不限于此。
本发明实施例另一方面提供的一种试剂盒前述的任一种试剂。
在一些实施方式中，所述试剂盒还包括独立包装的DNA trap beads(DNA磁珠)，当然也可以替代为其它的固相捕捉试剂。其中的DNA磁珠是本领域悉知的，并可以依据实际应用的需求自制或从市场途径获取。
在一些实施方式中，所述试剂盒还包括PCR tube(PCR管)、EP tube(EP管)等，且不限于此。
在一些实施方式中，所述试剂盒还包括Ethyl alcohol absolute(无水乙醇)、UPW(超纯水)等溶剂。
在本发明前述实施例的试剂、试剂盒的应用过程中，可以将转座酶Tn5和等摩尔的接头1、接头2置于转座复合物转座反应缓冲液，室温下孵育一定时间(例如60分钟)完成转座复合物连接，反应完成后的转座复合物可直接用于后续实验，也可于-20℃保存备用。转座发生时，该转座复合物将接头1和接头2接头序列插入靶基因中，形成一端带有接头1，一端带有接头2的DNA，之后利用DNA聚合酶将转座形成的切口补齐。这种产物经正向引物集和反向引物集扩增，产物经分选和纯化后即为片段化核酸文库。
本发明前述实施例提供的试剂、试剂盒适用于1ng～50ng的基因组DNA、cDNA、扩增子(>500bp)等样本片段化及index标记。与常规分步法建库相比，仅需10min即可完成DNA片段化、末端修复和接头连接过程，显著缩短建库时间，并获得优异的测序质量。
本发明前述实施例提供的试剂、试剂盒的操作步骤包括：转座复合物合成、片段化、反应终止、PCR富集以及片段分选，等等，本发明实施例的试剂盒反应终止后直接进行PCR富集，在保证富集效果和文库产量的条件下，节约了操作时间和实验成本，减少操作中的纯化次数也有效减少了片段的损失提高了文库的产量适用于较小量模板的建库。
本发明前述实施例提供的试剂、试剂盒适配Illumina高通量测序平台等，同时为甲基化、转基因等其它用途提供DIY选项，降低成本，提高研发使用的灵活性。
本发明实施例的另一个方面还提供了一种片段化核酸文库的构建方法，其包括：
将Tn5转座酶、第一接头、第二接头于转座反应缓冲液中混合，并在室温下孵育30～120min，获得转座子复合物，之后进行纯化处理，其中所述Tn5转座酶的序列如SEQ IDNO.1所示，所述第一接头的序列如SEQ ID NO.2～3所示，所述第二接头的序列如SEQ IDNO.4～5所示；
将纯化后的转座子复合物、人类基因组DNA与片段化反应缓冲液、超纯水混合，并在50～60℃孵育3～15min，取出冰水浴降温1～2min，之后加入终止溶液50～60℃孵育3～7min终止反应，获得片段化产物；
之后将片段化产物与正向引物的集合、反向引物的集合、扩增酶、扩增反应缓冲液混合，并进行PCR反应，获得富集的DNA片段。
进一步的，所述构建方法具体包括：向所述片段化反应液内加入DNA磁珠并充分混匀，室温孵育5～20min，之后以100～300rpm的转速离心5～20s，之后分离出DNA磁珠，先后以乙醇、超纯水清洗，完成所述纯化处理。
进一步的，所述构建方法还包括：从富集的DNA片段中分选出指定长度的DNA片段，获得片段化核酸文库。
进一步的，所述构建方法还包括：对所获片段化核酸文库的纯度进行检测。
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
实施例：
本发明一典型实施例涉及的一种用于转座酶片段化的试剂盒包括独立包装的如下组件：转座酶Tn5、接头1、接头2、转座反应缓冲液。进一步的，所述试剂盒还可以包括独立包装的如下组件：正向引物集、反向引物集、扩增酶、扩增缓冲液、片段化反应缓冲液、终止溶液。更进一步的，所述试剂盒还可以包括独立包装的如下组件：DNA trap beads(DNA磁珠)、PCR管、EP管等，且不限于此。此外，所述试剂盒还可以包括独立包装的如下组件：无水乙醇、超纯水等溶剂。
其中转座酶Tn5的序列为：
atgATTACATCAGCTTTACATCGTGCTGCTGATTGGGCTAAATCAGTTTTTAGTTCAGCTGCTTTAGGGGCTCCATCCAGGATAAGAGTCGTGGCTGGTGGGTACATTCGGTGCTGTTGTTAGAGGCGACGACTTTACGCACGGTGGGTTTATTGCACCAGGAGTGGTGGATGCGCCCAGATGACCCAGCAGATGCGGATGAAAAGGAGTCCGGTAAATGGTTAGCTGCGGCGGCCACATCCCGTCTGCGCTGGCACAAGAATTCCCGGAACTTTTGGCAATTGAAGATACAACCTCGCTTAGTTATCGTCACCAAGTGGCAGAAGAGCTTGGTAAATTACATGGGGTCAATGATGAGTAACGTCATCGCAGTCTGTGACCGTGAAGCGGACATCCACGCCTACCTTCAAGATAAGCTTGCGCATAACGAGCGTTTTGTCGTTCGCAGCAAACATCCCCGCAAGGATGTCGAATCTGGACTGTACTTGTATGACCAATTAAAGAACCAGCCTGAGCTGGGAGGTTACCAGATTAGCATTCCTCAGAACGGCGATCCACGTCGCACTGCACGTTTGGTAAGCGTCGCGGCACAACTGGCTAAGTATTCAGGCAAATCTATCACGATCTCTAGTGAGGGGAGCAAGGCTATGCAGGAGGGAGCGTATCGTTTTATTCGCAATCCCAATGTTTCCGCTGAGGCTATTCGTAAGGCCGGAGCCATGCAGACTGTAAAAGGTGGTAGACAAACGCGCTAAACGCAAGAACCGTCCAGCCCGTAAGGCCTCTTTGAGCCTGCGTAGCGGGCGCATCACACTTAAACAGGGCAACATCACCTTAAACGCGGTCCTGGCCGAAGAAATTAACCCCCCAAAGGGTGAGACTCCATTGAAGTGGTTATTGCTTACCTCAGAACGAGTTGAGAGTTTGGCGCAGGCCCTGCGTGTTATCGACATTTACACACATCGTTGGCGTATTGAGGAATTCCACAAGGCATGGAAGACAGGTGCTGGCGCAGAGCGTCAGCGTATGGAGGAACAGGATAATCTGGAGCGTATGGTCTCGATTCTTTCGTTCGTAGCGGTGCGCCTTCTACAGCTGCGTGAATCATTCACACCGCCACAGGCTCTTCGCGCGCATGGTCTGTTGAAGGAAGCAGAGCACGTCGAGTCACAAAGCGCAGAGACTGTGCTTACTCCAGATGAATGCCAGTTGCTTGGGTACTTGGACAAAGGAAAACGTAAGCGTAAGGAAAAGGCCGGGAGTCTTCAGTGGGCTTACATGGCTATTGCACGTTTAGGTGGGTTCATGGATTCCAAACGTACAGGGATTGCCAGTTGGGGCGCGCTTTGGGAGGGCTGGGAGGCATTGCAGTCAAAGCTGGACGGATTTCTGGCCGCCAAGGACCTTATGGCCCAAGGAATTAAGATCggtTGCCTGTCCTTCGGTACCGAAATCCTGACCGTTGAATACGGTCCGCTGCCGATCGGTAAAATCGTTTCCGAAGAAATCAACTGCTCCGTTTACTCCGTTGACCCGGAAGGTCGTGTTTACACCCAGGCTATCGCTCAGTGGCACGACCGTGGTGAACAGGAAGTTCTGGAATACGAACTGGAAGACGGATCTGTTATCCGTGCTACCTCCGACCACCGTTTCCTGACCACCGACTACCAGCTGCTGGCTATCGAAGAAATCTTCGCTCGTCAGCTGGACCTGCTGACCCTGGAAAACATCAAACAGACCGAAGAAGCTCTGGACAACCACCGTCTGCCGTTCCCGCTGCTGGACGCTGGCACCATCAAAggtgcctcttaa。
其中，接头1序列为(Phos表示磷酸化)：5’-Phos-CTGTCTCTTATACACATCT
3’-GACAGAGAATATGTGTAGA+接头1
其中，接头2序列为(Phos表示磷酸化)：5’-Phos-CTGTCTCTTATACACATCT
3’-GACAGAGAATATGTGTAGA+接头2
其中转座反应缓冲液的具体组成为：10-50mM HEPES(pH＝7.4)，1-5mM EDTA，100-250mM NaCl。
其中正向引物集、反向引物集的序列为SEQ ID NO.6～7所示：
名称 序列
N5XX 5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACNNNNNNNNTCGTCGGCAGCGTC-3’
N7XX 5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATNNNNNNNNGTCTCGTGGGCTCGG-3’
其中扩增缓冲液、片段化反应缓冲液、终止溶液的具体组成为：
扩增缓冲液：10mM Tris-HCl，50mM KCl，1.5mM MgCl2，0.5％BSA,5％TritonX-100,pH8.3@25℃；
片段化反应缓冲液：10-50mM HEPES(pH＝8.5)，10-50％PEG 3350，5-30％DMF,15-50mM MgCl2；
终止液：1％SDS，1-5％TritonX-100，5-10％巯基乙醇
其中DNA磁珠的具体组成为：
磁珠法核酸纯化分离技术采用了纳米级磁珠微珠，磁珠微珠的表面标记特殊官能团，能同核酸发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。离心磁珠是指磁珠微珠表面包裹了一层可发生离子交换的材料(如DEAE，COOH)等，从而达到吸附核酸目的。PCR富集产物，根据不同体积比加入磁珠微珠，然后用PEG/NaCl溶液沉淀(20％PEG 3000-8000，1M-2.5MNaCl溶液)，使目的DNA吸附至磁珠，最后磁场分离被吸附的DNA，经乙醇洗涤去除残留蛋白和盐粒子，使用纯水洗脱，可获得DNA文库。
本发明一典型实施例涉及一种片段化核酸文库构建(50ng DNA)，其包括如下步骤：
(1)转座子复合物连接：5μL转座酶Tn5，5μL接头1，接头2，10μL转座复合物转座反应缓冲液，置于EP管中，室温下孵育60分钟完成转座复合物连接，反应完成后的转座复合物可直接用于后续反应，也可于-20℃保存备用；
(2)DNA片段化：5μL纯化后的转座复合物，1μL人类基因组DNA(50ng/ul)，10μL片段化反应缓冲液，34μL UPW(超纯水)，55℃孵育10分钟，加入5μL终止溶液终止反应；
(3)DNA片段富集：在上述PCR管中加入7μL反向引物的集合，7μL正向引物的集合，1μL扩增酶，10μL扩增缓冲液，移液枪轻吹混匀后，置于PCR仪中进行如下反应：72℃3分钟，98℃30秒，运行“98℃15秒、60℃30秒、72℃3分钟”8个循环，72℃5分钟；反应完成后置于4℃；
(4)DNA片段长度分选：该步骤选取600-700bp长度的DNA片段，吸取25μL DNA磁珠(KAPA、DNA、纯化磁珠)溶液于上述PCR产物中，涡旋振荡混匀后室温孵育5分钟，将反应管置于磁力架上，待溶液澄清后吸取上清至新的PCR管中，吸取25μL DNA磁珠溶液于此PCR管中，涡旋振荡混匀后室温孵育5分钟，将反应管300rpm离心10s，置于磁力架上，溶液澄清后移除上清，加入200μL 80％乙醇漂洗，室温孵育30s，移除上清，漂洗步骤重复2次，空气干燥5分钟后，`加入22μL UPW(超纯水)涡旋振荡混匀，室温孵育5分钟，将反应管置于磁力架上，待溶液澄清后，吸取20μL上清至PCR管中，-20℃保存；
(6)文库质量鉴定：利用Qubit对文库进行定量分析，其量化结果参见下表。
对照组：
该对照组涉及的一种片段化核酸文库的构建方法与实施例的区别之处在于：
省略了步骤(1)；
步骤(2)中未使用转座复合物。
请参阅图1示出了前述实施例及对照组的DNA片段化步骤所获的电泳图，其中1为阴性对照的基因组DNA，2～5为片段化后的DNA；
请参阅图2示出了前述实施例及对照组的DNA片段富集步骤中的电泳图，其中1为阴性对照的基因组DNA，2～5为片段化后的DNA。
以上依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定技术性范围。
序列表
<110> 苏州璞瑞卓越生物科技有限公司
<120> 一种用于转座酶片段化的试剂及其应用
<160> 7
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1812
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 1
atgattacat cagctttaca tcgtgctgct gattgggcta aatcagtttt tagttcagct 60
gctttagggg ctccatccag gataagagtc gtggctggtg ggtacattcg gtgctgttgt 120
tagaggcgac gactttacgc acggtgggtt tattgcacca ggagtggtgg atgcgcccag 180
atgacccagc agatgcggat gaaaaggagt ccggtaaatg gttagctgcg gcggccacat 240
cccgtctgcg ctggcacaag aattcccgga acttttggca attgaagata caacctcgct 300
tagttatcgt caccaagtgg cagaagagct tggtaaatta catggggtca atgatgagta 360
acgtcatcgc agtctgtgac cgtgaagcgg acatccacgc ctaccttcaa gataagcttg 420
cgcataacga gcgttttgtc gttcgcagca aacatccccg caaggatgtc gaatctggac 480
tgtacttgta tgaccaatta aagaaccagc ctgagctggg aggttaccag attagcattc 540
ctcagaacgg cgatccacgt cgcactgcac gtttggtaag cgtcgcggca caactggcta 600
agtattcagg caaatctatc acgatctcta gtgaggggag caaggctatg caggagggag 660
cgtatcgttt tattcgcaat cccaatgttt ccgctgaggc tattcgtaag gccggagcca 720
tgcagactgt aaaaggtggt agacaaacgc gctaaacgca agaaccgtcc agcccgtaag 780
gcctctttga gcctgcgtag cgggcgcatc acacttaaac agggcaacat caccttaaac 840
gcggtcctgg ccgaagaaat taacccccca aagggtgaga ctccattgaa gtggttattg 900
cttacctcag aacgagttga gagtttggcg caggccctgc gtgttatcga catttacaca 960
catcgttggc gtattgagga attccacaag gcatggaaga caggtgctgg cgcagagcgt 1020
cagcgtatgg aggaacagga taatctggag cgtatggtct cgattctttc gttcgtagcg 1080
gtgcgccttc tacagctgcg tgaatcattc acaccgccac aggctcttcg cgcgcatggt 1140
ctgttgaagg aagcagagca cgtcgagtca caaagcgcag agactgtgct tactccagat 1200
gaatgccagt tgcttgggta cttggacaaa ggaaaacgta agcgtaagga aaaggccggg 1260
agtcttcagt gggcttacat ggctattgca cgtttaggtg ggttcatgga ttccaaacgt 1320
acagggattg ccagttgggg cgcgctttgg gagggctggg aggcattgca gtcaaagctg 1380
gacggatttc tggccgccaa ggaccttatg gcccaaggaa ttaagatcgg ttgcctgtcc 1440
ttcggtaccg aaatcctgac cgttgaatac ggtccgctgc cgatcggtaa aatcgtttcc 1500
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<211> 19
<212> DNA
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<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 5
gacagagaat atgtgtaga 19
<210> 6
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 6
aatgatacgg cgaccaccga gatctacacn nnnnnnntcg tcggcagcgt c 51
<210> 7
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 7
caagcagaag acggcatacg agatnnnnnn nngtctcgtg ggctcgg 47

Claims (10)

1.一种用于转座酶片段化的试剂，其特征在于包括独立包装的如下组件：Tn5转座酶、第一接头、第二接头以及转座反应缓冲液，所述Tn5转座酶的序列如SEQ ID NO.1所示，所述第一接头的序列如SEQ ID NO.2～3所示，所述第二接头的序列如SEQ ID NO.4～5所示。
2.根据权利要求1所述试剂，其特征在于：所述第一接头包括第一单链DNA和第二单链DNA，所述第一单链DNA包括依次连接的捕获标签、指定的单链DNA和所述转座酶的识别序列，所述第二单链DNA为所述识别序列的互补序列；所述第二接头包括所述识别序列以及所述识别序列的互补序列。
3.根据权利要求1所述试剂，其特征在于还包括独立包装的正向引物的集合、反向引物的集合、扩增酶、扩增反应缓冲液。
4.根据权利要求1所述试剂，其特征在于还包括独立包装的片段化反应缓冲液、终止溶液中的任意一种或多种。
5.一种试剂盒，其特征在于包括权利要求1-3中任一项所述试剂。
6.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于还包括独立包装的DNA磁珠。
7.一种片段化核酸文库的构建方法，其特征在于包括：
将Tn5转座酶、第一接头、第二接头于转座反应缓冲液中混合，并在室温下孵育30～120min，获得转座子复合物，之后进行纯化处理，其中所述Tn5转座酶的序列如SEQ ID NO.1所示，所述第一接头的序列如SEQ ID NO.2～3所示，所述第二接头的序列如SEQ ID NO.4～5所示；
将纯化后的转座子复合物、人类基因组DNA与片段化反应缓冲液、超纯水混合，并在50～60℃孵育3～15min，之后加入终止溶液50～60℃孵育3～7min终止反应，获得片段化产物；
之后将片段化产物与正向引物的集合、反向引物的集合、扩增酶、扩增反应缓冲液混合，并进行PCR反应，获得富集的DNA片段。
8.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于具体包括：向所述片段化反应液内加入DNA磁珠并充分混匀，室温孵育5～20min，之后以100～300rpm的转速离心5～20s，之后分离出DNA磁珠，先后以乙醇、超纯水清洗，完成所述纯化处理。
9.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于还包括：从富集的DNA片段中分选出指定长度的DNA片段，获得片段化核酸文库。
10.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于还包括：对所获片段化核酸文库的纯度进行检测。
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