CN110559454A - 一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物 - Google Patents
一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110559454A CN110559454A CN201910939397.3A CN201910939397A CN110559454A CN 110559454 A CN110559454 A CN 110559454A CN 201910939397 A CN201910939397 A CN 201910939397A CN 110559454 A CN110559454 A CN 110559454A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- drug
- micelle
- nano
- crt
- qsh
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 201
- 239000002114 nanocomposite Substances 0.000 title claims abstract description 65
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 title claims abstract description 56
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 160
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims abstract description 133
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 124
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims abstract description 82
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 claims abstract description 35
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 50
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N curcumin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)CC(=O)\C=C\C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N 0.000 claims description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 33
- 229940109262 curcumin Drugs 0.000 claims description 32
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 24
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 20
- 235000012754 curcumin Nutrition 0.000 claims description 18
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 claims description 18
- VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N diferuloylmethane Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)CC(=O)C=CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 17
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000005457 ice water Substances 0.000 claims description 12
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 9
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 8
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 5
- 238000006845 Michael addition reaction Methods 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 2
- 230000003942 amyloidogenic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 abstract description 13
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 abstract description 12
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 abstract description 12
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 abstract description 7
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 abstract description 6
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 abstract description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 6
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 abstract description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 4
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000010863 targeted diagnosis Methods 0.000 abstract description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 abstract description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 24
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 21
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 16
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 16
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 15
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 13
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 13
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 12
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- HYZQBNDRDQEWAN-LNTINUHCSA-N (z)-4-hydroxypent-3-en-2-one;manganese(3+) Chemical compound [Mn+3].C\C(O)=C\C(C)=O.C\C(O)=C\C(C)=O.C\C(O)=C\C(C)=O HYZQBNDRDQEWAN-LNTINUHCSA-N 0.000 description 9
- QGLWBTPVKHMVHM-KTKRTIGZSA-N (z)-octadec-9-en-1-amine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCN QGLWBTPVKHMVHM-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- LZKLAOYSENRNKR-LNTINUHCSA-N iron;(z)-4-oxoniumylidenepent-2-en-2-olate Chemical compound [Fe].C\C(O)=C\C(C)=O.C\C(O)=C\C(C)=O.C\C(O)=C\C(C)=O LZKLAOYSENRNKR-LNTINUHCSA-N 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 9
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 8
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 8
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- BTOOAFQCTJZDRC-UHFFFAOYSA-N 1,2-hexadecanediol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC(O)CO BTOOAFQCTJZDRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- -1 2-hexadecyl glycol Chemical compound 0.000 description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 4
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FATBGEAMYMYZAF-KTKRTIGZSA-N oleamide Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(N)=O FATBGEAMYMYZAF-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 4
- FATBGEAMYMYZAF-UHFFFAOYSA-N oleicacidamide-heptaglycolether Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(N)=O FATBGEAMYMYZAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 3
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 3
- LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N (R)-1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930153442 Curcuminoid Natural products 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 1
- 208000026062 Tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000234299 Zingiberaceae Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000003519 biomedical and dental material Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004781 brain capillary Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 239000012792 core layer Substances 0.000 description 1
- 210000003792 cranial nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000005660 hydrophilic surface Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000011229 interlayer Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000005415 magnetization Effects 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 239000012890 simulated body fluid Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000005979 thermal decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
- A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
- A61K49/10—Organic compounds
- A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
- A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
- A61K49/1806—Suspensions, emulsions, colloids, dispersions
- A61K49/1809—Micelles, e.g. phospholipidic or polymeric micelles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Neurology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，所述纳米复合药物包含具有CRT靶向肽和QSH靶向肽修饰的载药纳米胶束；所述载药纳米胶束所载药物包含抑制分解淀粉样蛋白药和超顺磁性铁氧体。本发明所述纳米复合药物为集靶向诊疗阿尔兹海默症与MRI成像示踪于一体的纳米载药复合物。本发明将靶向AD蛋白的QSH靶向肽和靶向转铁蛋白的CRT靶向肽为靶标，能够同时靶向AD蛋白和转铁蛋白，增加靶向位点药物浓度以及提高药物作用时间，QSH靶向肽和CRT靶向肽结合可以使载药纳米胶束穿透血脑屏障给药；结合抑制分解淀粉样蛋白药和超顺磁性铁氧体，实现双重靶向阿尔兹海默症的诊疗一体化。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物医用材料；具体涉及一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物。
背景技术
阿尔兹海默症(Alzheimer’s Disease,AD)，俗称老年痴呆，是一种以进行性认知功能障碍和学习记忆损害为特征的神经退行性疾病，主要以认知障碍及精神行为异常导致的日常生活能力降低甚至丧失为临床表现。随着人口老龄化的发展，阿尔兹海默症已经成为影响老年人健康以及生活质量的一个重要疾病。阿尔兹海默症的发病机制尚未研究清楚，仍缺乏可以有效治疗该疾病的药物。由于治疗阿尔兹海默症服药需长期进行，所以寻找安全、有效的药物成为预防和治疗阿尔兹海默症的主要目标。
血脑屏障(blood-brain-barrier,BBB)血液系统和脑组织之间形成的屏障，血脑屏障能有选择性的让某些小分子通过，从而保持脑组织内环境的基本稳定，这对保护神经中枢，使其维持正常的生理状态具有十分重要的生物学意义。但与此同时，血脑屏障也能阻止98％的药物分子从血液系统进入到脑组织中，这给我们针对脑组织疾病的治疗带来了很大的障碍。因此，随着全球不断恶化的脑部疾病的发展，脑靶向递药系统的研究已经十分重要。目前，对于脑内递药主要分为以被动扩散透过血脑屏障的方式，和以受体、转运体和吸附介导透过血脑屏障的方式。
姜黄素提取自姜科植物的块茎中，其含量大约在3％-6％范围内，姜黄素不仅可以作为食品添加剂以及香料，还对疾病有一定的治疗和预防的作用。并且由于其提取自天然植物，具有安全性高、毒副作用小的优点，逐渐成为人们研究的热点。研究发现，姜黄素具有抗炎、抗癌、抗氧化应激、抑菌、抗病毒等生理功能，并且近年来有研究表明姜黄素可用于帕金森疾病、阿尔茨海默病等神经退行性疾病的治疗。但是，大分子药物通过血脑屏障的运输效率很低，药物载体的无靶向特异性也降低了药物在脑神经区域的作用效率和治疗效果。此外，传统的治疗方式中，治疗过程与成像示踪(或诊断)亦不能同时进行，对生长快、转移迅速的肿瘤遏制效果有限。因此，发展集靶向治疗与成像示踪于一体的新技术手段，具有十分重要的社会价值和经济意义。
纳米载药系统可针对阿尔兹海默症进行诊断和治疗。可以通过靶向作用将化学药物定向输送到病灶位置使其聚集，使得在提高药物利用率，提升治疗效果的同时，减少药物对除病灶位置的其他组织或器官造成损伤。目前研究的纳米载药体系主要有纳米脂质体、纳米粒子和纳米复合物胶束。其中纳米复合物胶束是通过自组装形成的壳层结构，可作为药物载体将疏水或者难溶的药物包裹在疏水内层，同时，胶束外层的亲水片段有利于减少体内网状内皮系统的吞噬作用。使用纳米复合物胶束作为阿尔兹海默症治疗药物的载体，可以使整个载药纳米复合物的粒径达到可以穿过血脑屏障的水平。
受体介导递送药物作为近年来科研工作者研究最多的生物学策略之一，是目前针对脑部靶向给药最成熟的策略之一。脑毛细血管内皮细胞上存在着诸如转铁蛋白受体之类的很多种特异性的受体。采用受体的配体或抗体作为靶向分子构建载药纳米复合体系可以与受体通过特异性结合，从而介导药物穿过血脑屏障进入脑内。对于阿尔兹海默症，药物的靶向传输显得尤为重要。载药纳米聚合物胶束可作为靶向治疗阿尔兹海默症的载体，将化学药物通过脑靶向递送到脑内，提高药物的聚集程度，调节Aβ(β-淀粉样蛋白)聚集的阻断和生成。同时减少药物对其他组织器官的毒副作用，这被认为有很大的发展前景。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，所述纳米复合药物包含具有CRT靶向肽和QSH靶向肽修饰的载药纳米胶束；所述CRT靶向肽的氨基酸序列为CRTIGPSVC；所述QSH靶向肽的氨基酸序列为QSHYRHISPAQVC；所述载药纳米胶束所载药物包含抑制分解淀粉样蛋白药和超顺磁性铁氧体。
本发明将靶向AD蛋白的QSH靶向肽和靶向转铁蛋白的CRT靶向肽为靶标，能够同时靶向AD蛋白和转铁蛋白，增加靶向位点药物浓度以及提高药物作用时间，QSH靶向肽和CRT靶向肽结合可以使载药纳米胶束穿透血脑屏障给药；结合抑制分解淀粉样蛋白药和超顺磁性铁氧体，可以研究阿尔兹海默症的治疗过程中抑制分解淀粉样蛋白药对淀粉样蛋白的抑制和分解效果和纳米载药复合物在病变区域的MRI(核磁共振)成像功能，因此，本发明所述纳米复合药物为集靶向诊疗阿尔兹海默症与MRI成像示踪于一体的纳米载药复合物。
优选地，所述纳米复合药物包含以下制备原料：超顺磁性铁氧体、功能化聚乙二醇、抑制分解淀粉样蛋白药、CRT靶向肽和QSH靶向肽；所述功能化聚乙二醇为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基。
超顺磁性铁氧体纳米颗粒与功能化聚乙二醇自组装形成纳米胶束，作为纳米药物载体，负载上小分子姜黄素，选择二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(DSPE-PEG-Mal)和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DSPE-PEG-COOH)，通过PEG上修饰的Mal基团和COOH基团，与QSH多肽上的巯基和CRT多肽上的氨基进行连接，从而形成纳米胶束结构，外壳层由亲水性聚乙二醇羧酸和马来酰亚胺片段形成，疏水的超顺磁性铁氧体纳米颗粒和抑制分解淀粉样蛋白药被包裹于内核层中。
优选地，所述功能化聚乙二醇中，所述聚乙二醇为聚乙二醇2000。
优选地，所述二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基的重量之比为1:1。
优选地，所述纳米复合药物包含以下重量份的制备原料：超顺磁性铁氧体5～10份、功能化聚乙二醇10～20份、抑制分解淀粉样蛋白药1～5份、CRT靶向肽0.1～1份和QSH靶向肽0.1～1份。
优选地，所述抑制分解淀粉样蛋白药为姜黄素。
优选地，所述纳米复合物的制备方法包括以下步骤：
(1)纳米胶束的制备：将超顺磁性铁氧体、功能化聚乙二醇与溶剂混合制得纳米胶束；
(2)载药纳米胶束的制备：将抑制分解淀粉样蛋白药负载于步骤(1)制得的纳米胶束上，得载药纳米胶束；
(3a)CRT单靶向肽载药纳米胶束的制备：将CRT靶向肽与步骤(2)所得载药纳米胶束发生酰胺化反应，得CRT单靶向肽载药纳米胶束；
或者(3b)将QSH靶向肽与步骤(2)所得载药纳米胶束发生迈克尔加成反应，得QSH单靶向肽载药纳米胶束；
(4a)CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备：将QSH靶向肽与步骤(3)所得CRT单靶向肽载药纳米胶束发生迈克尔加成反应，得CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束，即为所述纳米复合物；
或者(4b)CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备：将CRT靶向肽与步骤(3b)所得QSH单靶向肽载药纳米胶束发生酰胺化反应，得CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束，即为所述纳米复合物。
本发明首先将两亲性的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(DSPE-PEG-Mal)和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DSPE-PEG-COOH)组装复合在一起形成双壳层纳米胶束(DSPE)，再将超顺磁性铁氧体纳米颗粒(SPIO)封装在胶束壳层结构的夹层中(DSPE)，空心内核内再包埋用于治疗阿尔兹海默症的药物-抑制分解淀粉样蛋白药姜黄素(SDP@CUR)，最后CRT(CRTIGPSVC)靶向肽和QSH(QSHYRHISPAQVC)靶向肽修饰在胶束亲水表面。采用上述方法制得的纳米复合药物是具有双重靶向阿尔兹海默症的诊疗一体化药物(SDP-CRT-QSH@CUR)，可以实现药物的靶向递送和缓释，提高药物的长循环和蓄积作用，因此药物使用量比常规化疗药物少。另外超顺磁性铁氧体纳米粒子具有较强的饱和磁化强度，注射量较小即可进行MRI成像，72小时后可被完全代谢，对人体安全影响很小。QSH靶向肽和CRT靶向肽的负载形式优选采用先将其中一种靶向肽负载后再负载另一种靶向肽，负载顺序不限。
优选地，步骤(1)中，所述纳米胶束的制备方法为：将超顺磁性铁氧体的四氢呋喃溶液与功能化聚乙二醇的四氢呋喃溶液混合，超声混合5～15min，在超声条件下滴加去离子水，继续超声20～40min，透析，得所述纳米胶束。
优选地，步骤(2)中，所述载药纳米胶束的制备方法为：将纳米胶束的四氢呋喃溶液和姜黄素的DMSO溶液混合，超声混合5～15min，在超声条件下滴加去离子水，继续超声20～40min，透析，得所述载药纳米胶束。
优选地，步骤(3a)中，所述CRT单靶向肽载药纳米胶束的制备方法为：在载药纳米胶束的水溶液中加入EDC和NHS活化1～4h，然后加入CRT靶向肽的水溶液，调节pH为5～6，冰水浴并搅拌8～24h，透析，得CRT单靶向肽载药纳米胶束。
优选地，步骤在(3b)中，所述QSH单靶向肽载药纳米胶束的制备方法为：将载药纳米胶束和QSH靶向肽分别分散于pH＝7.4的PBS缓冲液中，将两者混合后冰水浴搅拌反应3～6h，透析，得QSH单靶向肽载药纳米胶束。
优选地，所述1-(3-二甲氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的质量比为：1:2～2:3。
步骤(1)～(4)中的透析优选采用截留分子量为3500Da的透析袋，优选在纯水中透析24h。
优选地，步骤(4a)中，所述CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备方法为：将步骤(3a)制得的CRT单靶向肽载药纳米胶束和QSH靶向肽分别分散于pH＝7.4的PBS缓冲液中，将两者混合后冰水浴搅拌反应3～6h，透析，得CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束。
优选地，步骤(4b)中，CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备方法为：将步骤(3b)制得的QSH单靶向肽载药纳米胶束的水溶液中加入EDC和NHS活化1～4h，然后加入CRT靶向肽的水溶液，调节pH为5～6，冰水浴并搅拌8～24h，透析，得CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备方法。
优选地，所述超顺磁性铁氧体的制备方法包括以下步骤：以三乙酰丙酮铁、乙酰丙酮锰为原料，1,2-十六烷基二醇、二苄醚为溶剂，油酸和油胺为表面活性剂，采用高温热分解法进行制备。
更优选地，所述超顺磁性铁氧体的制备方法包括以下步骤：将三乙酰丙酮铁、乙酰丙酮锰、1,2-十六烷基二醇混合均匀，再加入油酸、油胺和二苄醚，在氩气氛围下搅拌，加热至200℃保温2h，再加热至300℃回流反应1h，冷却至室温，加入乙醇，离心取固体，在固体中加入油酸和油酰胺，再加入正己烷，离心取固体；在固体中加入乙醇，离心取固体，重复加入乙醇和离心步骤1～3次，取固体即得所述超顺磁性铁氧体；所述三乙酰丙酮铁、乙酰丙酮锰、1,2-十六烷基二醇、油酸和油胺的摩尔比为：三乙酰丙酮铁：乙酰丙酮锰：1,2-十六烷基二醇：油酸：油胺：二苄醚＝(1～5):(0.5～2.5):(5～25):(3～15)：(3～15):(5～25)。优选地，所述三乙酰丙酮铁、乙酰丙酮锰、1,2-十六烷基二醇、油酸和油胺的摩尔比为：三乙酰丙酮铁：乙酰丙酮锰：1,2-十六烷基二醇：油酸：油胺＝2:1:10:6:6:10。
本发明还提供了一种用于诊疗阿尔兹海默症的药物组合物，所述药物组合物包含所述纳米复合药物。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物。本发明所述纳米复合药物为集靶向诊疗阿尔兹海默症与MRI成像示踪于一体的纳米载药复合物。本发明将靶向AD蛋白的QSH靶向肽和靶向转铁蛋白的CRT靶向肽为靶标，能够同时靶向AD蛋白和转铁蛋白，增加靶向位点药物浓度以及提高药物作用时间，QSH靶向肽和CRT靶向肽结合可以使载药纳米胶束穿透血脑屏障给药；结合抑制分解淀粉样蛋白药和超顺磁性铁氧体，可以研究阿尔兹海默症的治疗过程中抑制分解淀粉样蛋白药对淀粉样蛋白的抑制和分解效果和纳米载药复合物在病变区域的MRI(核磁共振)成像功能，实现双重靶向阿尔兹海默症的诊疗一体化。
附图说明
图1为实施例1所述超顺磁性纳米颗粒的透射电子显微镜和粒径分布图；
图2为实施例1所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物的透射电子显微镜和粒径分布图；
图3为实施例1所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物的体外MRI成像示意图；
图4为实施例1所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物的姜黄素体外缓释曲线图；
图5为实施例1所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物的流式图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物包含以下重量份的制备原料：超顺磁性铁氧体5份、功能化聚乙二醇10份、抑制分解淀粉样蛋白药2份、CRT靶向肽1份和QSH靶向肽1份；
所述超顺磁性铁氧体纳米颗粒是通过以下方法进行制备：将2mmol三乙酰丙酮铁、1mmol乙酰丙酮锰与10mmol 1,2-十六烷基二醇装入圆底烧瓶中混合，再分别加入6mmol油酸和6mmol油胺，并加入二苄醚10mol，在氩气保护下磁力搅拌，加热至200℃保温2h，然后再加热至300℃回流反应1h；冷却至室温后，再加入乙醇，8000rpm离心10min除去滤液；向棕黑色沉淀中加入油酸和油酰胺后，再用正己烷将沉淀物溶解分散，8000rpm离心10min除去杂质，重复在乙醇中离心去除滤液，即可得到超顺磁性铁氧体纳米颗粒。所述超顺磁性铁氧体纳米颗粒的粒径为5～30nm，用透射电子显微镜和动态光散射检测其形貌和粒径分布，如附图1所示。
本实施例所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物的制备方法为：
(1)纳米胶束的制备：分别称取超顺磁性纳米颗粒、DSPE-PEG-Mal和DSPE-PEG-COOH各50mg，分别溶解在3mL四氢呋喃中，完全溶解后将溶液混合在一起，超声10min使其混合均匀后得到有机相；在超声条件下将有机相逐滴滴加到30mL去离子水中，并用探头持续超声半小时得到混合溶液；再将混合液收集在截留分子量为3500Da的透析袋中透析24小时以形成胶束乳液，将乳液冷冻干燥得到纳米胶束粉末；
(2)载药纳米胶束的制备：将步骤(1)制得的纳米胶束粉末溶解在5mL四氢呋喃中，再避光称取20mg姜黄素溶解在3mLDMSO中，完全溶解后将两种溶液混合在一起预超声10min后继续在超声条件下将混合液逐滴滴加在30mL纯水中，用探头继续超声半小时，然后将混合液在旋转蒸发仪上蒸发掉有机溶剂，得到载药纳米聚合物胶束溶液；
(3)CRT单靶向肽载药纳米胶束的制备：称取30mg EDC和60mg NHS加入步骤(2)所得载药纳米聚合物胶束溶液中，调节pH值为5～6在室温避光下搅拌活化1小时后，再称取10mg CRT靶向肽加入到溶液中，避光冰水浴搅拌12h后，用3500Da的透析袋将混合液透析24小时，并冷冻干燥，即得到靶向转铁蛋白的CRT单靶向载药纳米复合胶束粉末；
(4)CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备：将步骤(3)制得的CRT单靶向载药纳米复合胶束溶解在纯水中，再称取10mg QSH靶向肽加入到溶液中，避光冰浴搅拌4h后，用3500Da的透析袋将混合液透析24小时，并冷冻干燥，即得到CRT-QSH双靶向的载药纳米复合胶束粉末，即为所述纳米复合药物。
本实施例制得的纳米复合药物的粒径为50～120nm，用透射电子显微镜和动态光散射检测其形貌和粒径分布，如附图2所示。
实施例2
本实施例所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物包含以下重量份的制备原料：超顺磁性铁氧体10份、功能化聚乙二醇20份、抑制分解淀粉样蛋白药1份、CRT靶向肽0.1份和QSH靶向肽0.5份；
本实施例所述超顺磁性铁氧体纳米颗粒是通过以下方法进行制备：将1mmol三乙酰丙酮铁、0.5mmol乙酰丙酮锰与5mmol 1,2-十六烷基二醇装入圆底烧瓶中混合，再分别加入3mmol油酸和3mmol油胺，并加入二苄醚5mol，在氩气保护下磁力搅拌，加热至200℃保温2h，然后再加热至300℃回流反应1h；冷却至室温后，再加入乙醇，8000rpm离心10min除去滤液；向棕黑色沉淀中加入油酸和油酰胺后，再用正己烷将沉淀物溶解分散，8000rpm离心10min除去杂质，重复在乙醇中离心去除滤液，即可得到超顺磁性铁氧体纳米颗粒。
本实施例所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物的制备方法为：
(1)纳米胶束的制备：分别称取超顺磁性纳米颗粒、DSPE-PEG-Mal和DSPE-PEG-COOH各100mg，分别溶解在3mL四氢呋喃中，完全溶解后将溶液混合在一起，超声5min使其混合均匀后得到有机相；在超声条件下将有机相逐滴滴加到30mL去离子水中，并用探头持续超声20min得到混合溶液；再将混合液收集在截留分子量为3500Da的透析袋中透析24小时以形成胶束乳液，将乳液冷冻干燥得到纳米胶束粉末；
(2)载药纳米胶束的制备：将步骤(1)制得的纳米胶束粉末溶解在10mL四氢呋喃中，再避光称取10mg姜黄素溶解在3mLDMSO中，完全溶解后将两种溶液混合在一起预超声5min后继续在超声条件下将混合液逐滴滴加在30mL纯水中，用探头继续超声20min，然后将混合液在旋转蒸发仪上蒸发掉有机溶剂，得到载药纳米聚合物胶束溶液；
(3)CRT单靶向肽载药纳米胶束的制备：称取40mg EDC和60mg NHS加入步骤(2)所得载药纳米聚合物胶束溶液中，调节pH值为5～6在室温避光下搅拌活化4小时后，再称取1mg CRT靶向肽加入到溶液中，避光冰水浴搅拌8h后，用3500Da的透析袋将混合液透析24小时，并冷冻干燥，即得到靶向转铁蛋白的CRT单靶向载药纳米复合胶束粉末；
(4)CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备：将步骤(3)制得的CRT单靶向载药纳米复合胶束溶解在纯水中，再称取5mg QSH靶向肽加入到溶液中，避光冰浴搅拌3h后，用3500Da的透析袋将混合液透析24小时，并冷冻干燥，即得到CRT-QSH双靶向的载药纳米复合胶束粉末，即为所述纳米复合药物。
实施例3
本实施例所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物包含以下重量份的制备原料：超顺磁性铁氧体8份、功能化聚乙二醇10份、抑制分解淀粉样蛋白药5份、CRT靶向肽0.5份和QSH靶向肽0.8份；
本实施例所述超顺磁性铁氧体纳米颗粒是通过以下方法进行制备：将5mmol三乙酰丙酮铁、2.5mmol乙酰丙酮锰与25mmol 1,2-十六烷基二醇装入圆底烧瓶中混合，再分别加入15mmol油酸和15mmol油胺，并加入二苄醚25mol，在氩气保护下磁力搅拌，加热至200℃保温2h，然后再加热至300℃回流反应1h；冷却至室温后，再加入乙醇，8000rpm离心10min除去滤液；向棕黑色沉淀中加入油酸和油酰胺后，再用正己烷将沉淀物溶解分散，8000rpm离心10min除去杂质，重复在乙醇中离心去除滤液，即可得到超顺磁性铁氧体纳米颗粒。本实施例所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物的制备方法为：
(1)纳米胶束的制备：分别称取超顺磁性纳米颗粒80mg、DSPE-PEG-Mal和DSPE-PEG-COOH各50mg，分别溶解在3mL四氢呋喃中，完全溶解后将溶液混合在一起，超声15min使其混合均匀后得到有机相；在超声条件下将有机相逐滴滴加到30mL去离子水中，并用探头持续超声40min得到混合溶液；再将混合液收集在截留分子量为3500Da的透析袋中透析24小时以形成胶束乳液，将乳液冷冻干燥得到纳米胶束粉末；
(2)载药纳米胶束的制备：将步骤(1)制得的纳米胶束粉末溶解在8mL四氢呋喃中，再避光称取50mg姜黄素溶解在3mLDMSO中，完全溶解后将两种溶液混合在一起预超声15min后继续在超声条件下将混合液逐滴滴加在30mL纯水中，用探头继续超声40min，然后将混合液在旋转蒸发仪上蒸发掉有机溶剂，得到载药纳米聚合物胶束溶液；
(3)CRT单靶向肽载药纳米胶束的制备：称取30mg EDC和60mg NHS加入步骤(2)所得载药纳米聚合物胶束溶液中，调节pH值为5～6在室温避光下搅拌活化2小时后，再称取5mg CRT靶向肽加入到溶液中，避光冰水浴搅拌24h后，用3500Da的透析袋将混合液透析24小时，并冷冻干燥，即得到靶向转铁蛋白的CRT单靶向载药纳米复合胶束粉末；
(4)CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备：将步骤(3)制得的CRT单靶向载药纳米复合胶束溶解在纯水中，再称取8mg QSH靶向肽加入到溶液中，避光冰浴搅拌6h后，用3500Da的透析袋将混合液透析24小时，并冷冻干燥，即得到CRT-QSH双靶向的载药纳米复合胶束粉末，即为所述纳米复合药物。
实施例4
本实施例所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物包含以下重量份的制备原料：超顺磁性铁氧体5份、功能化聚乙二醇10份、抑制分解淀粉样蛋白药2份、CRT靶向肽1份和QSH靶向肽1份；
本实施例所述超顺磁性铁氧体纳米颗粒制备方法同实施例1。本实施例所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物的制备方法为：
(1)纳米胶束的制备：分别称取超顺磁性纳米颗粒、DSPE-PEG-Mal和DSPE-PEG-COOH各50mg，分别溶解在3mL四氢呋喃中，完全溶解后将溶液混合在一起，超声10min使其混合均匀后得到有机相；在超声条件下将有机相逐滴滴加到30mL去离子水中，并用探头持续超声半小时得到混合溶液；再将混合液收集在截留分子量为3500Da的透析袋中透析24小时以形成胶束乳液，将乳液冷冻干燥得到纳米胶束粉末；
(2)载药纳米胶束的制备：将步骤(1)制得的纳米胶束粉末溶解在5mL四氢呋喃中，再避光称取20mg姜黄素溶解在3mLDMSO中，完全溶解后将两种溶液混合在一起预超声10min后继续在超声条件下将混合液逐滴滴加在30mL纯水中，用探头继续超声半小时，然后将混合液在旋转蒸发仪上蒸发掉有机溶剂，得到载药纳米聚合物胶束溶液；
(3)QSH单靶向肽载药纳米胶束的制备：步骤(2)所得载药纳米聚合物胶束溶解在纯水中，再称取10mg QSH靶向肽加入到溶液中，避光冰浴搅拌4h后，用3500Da的透析袋将混合液透析24小时，并冷冻干燥，即得到QSH单靶向载药纳米复合胶束粉末；
(4)CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备：称取30mg EDC和60mg NHS加入步骤(3)QSH单靶向肽载药纳米胶束溶液中，调节pH值为5～6在室温避光下搅拌活化1小时后，再称取10mg CRT靶向肽加入到溶液中，避光冰水浴搅拌12h后，用3500Da的透析袋将混合液透析24小时，并冷冻干燥，即得到CRT-QSH双靶向的载药纳米复合胶束粉末，即为所述纳米复合药物。
实施例5
1、体外MRI显影效果
将实施例1制得的用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物具配制成水溶液，使其中超顺磁性铁氧体的浓度为2mM，然后逐级对半稀释为5个不同的浓度梯度，浓度从高到低分别为0.20、0.10、0.05、0.025、0.0125mM的SPIO，再加一组纯水作为对照。用6个2mL的透明硬质塑料离心管分别装入1.5mL溶液，按顺序放在泡沫平板上，室温下用1.5T临床MRI扫描仪进行扫描样品，拍照记录成像效果。
MRI扫描通过常规的自旋回波SE序列扫描得到T2加权成像，脉冲重复间隔时间TR＝1500ms，回波时间TE＝1046.38，801.03，495.68，298.98，176.59，98.49，FS＝1.5。如附图3所示，随着SPIO的浓度增加，MRI图像逐渐变暗。T2弛豫效能为r2＝-2.356s-1/mM。这表明样品具有优良的MRI成像性能。
3、体外缓释
将所制得的具有诊疗一体功能的纳米体系药物精确称量溶解在PBS中，配制成不同浓度的溶液，置于透析袋中封装后，浸泡在10mL含有2％的吐温80的介质中,在37℃恒温摇床中进行体外释放。在不同的时间点取样检测药物累计释放含量并作出姜黄素体外累计缓释曲线图，结果如附图4所示。在模拟体液环境中，所述载药纳米体系在24小时内药物累计释放量能够达到78％左右。
4、细胞胞吞验证靶向性
向事先养好的并经过预处理的PC12细胞中加入含有不同浓度的FITC-SDP@CUR、FITC-SDP-CRT@CUR、FITC-SDP-CRT-QSH@CUR(其中，FITC-SDP@CUR表示绿色荧光染料FITC标记的纳米载药胶束SDP@CUR，FITC-SDP-CRT@CUR表示绿色荧光染料FITC标记的CRT单靶向纳米载药胶束SDP-CRT@CUR，FITC-SDP-CRT-QSH@CUR表示绿色荧光染料FITC标记的双靶向纳米载药胶束SDP-CRT-QSH@CUR)的培养液后常温孵育1小时，每个样品设置3个复孔，一小时后，移去培养液并用无菌的PBS洗涤三次后再用胰蛋白酶消化细胞至细胞脱落下来。随后，向每个孔中加入500μL培养基，吹打下细胞后转移至离心管中，再将离心管以1000转每分钟的转速离心5分钟使细胞沉淀下来，离心后，将上清液取出，再向离心管中加入600μL的PBS，用移液枪轻轻吹打几次使其混匀后利用流式细胞仪进行定量分析。主要原理是通过流式来检测荧光标记的纳米材料内吞后的荧光强度来判断纳米材料的内吞的量。分析结果如附图5所示，从图5可以看出，双靶向的纳米材料(SDP-CRT-QSH@CUR)的内吞量比单独的靶向纳米材料(SDP-CRT@CUR)和非靶向的纳米材料(SDP@CUR)均高，验证了材料具有良好的靶向性。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，其特征在于，所述纳米复合药物包含具有CRT靶向肽和QSH靶向肽修饰的载药纳米胶束；所述CRT靶向肽的氨基酸序列为CRTIGPSVC；所述QSH靶向肽的氨基酸序列为QSHYRHISPAQVC；所述载药纳米胶束所载药物包含抑制分解淀粉样蛋白药和超顺磁性铁氧体。
2.如权利要求1所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，其特征在于，所述纳米复合药物包含以下制备原料：超顺磁性铁氧体、功能化聚乙二醇、抑制分解淀粉样蛋白药、CRT靶向肽和QSH靶向肽；所述功能化聚乙二醇为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基。
3.如权利要求1所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，其特征在于，所述纳米复合药物包含以下重量份的制备原料：超顺磁性铁氧体5～10份、功能化聚乙二醇10～20份、抑制分解淀粉样蛋白药1～5份、CRT靶向肽0.1～1份和QSH靶向肽0.1～1份。
4.如权利要求2或3所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，其特征在于，所述抑制分解淀粉样蛋白药为姜黄素。
5.如权利要求1～4中任一项所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，其特征在于，所述纳米复合物的制备方法包括以下步骤：
(1)纳米胶束的制备：将超顺磁性铁氧体、功能化聚乙二醇与溶剂混合制得纳米胶束；
(2)载药纳米胶束的制备：将抑制分解淀粉样蛋白药负载于步骤(1)制得的纳米胶束上，得载药纳米胶束；
(3a)CRT单靶向肽载药纳米胶束的制备：将CRT靶向肽与步骤(2)所得载药纳米胶束发生酰胺化反应，得CRT单靶向肽载药纳米胶束；
或者(3b)将QSH靶向肽与步骤(2)所得载药纳米胶束发生迈克尔加成反应，得QSH单靶向肽载药纳米胶束；
(4a)CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备：将QSH靶向肽与步骤(3a)所得CRT单靶向肽载药纳米胶束发生迈克尔加成反应，得CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束，即为所述纳米复合物；
或者(4b)CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备：将CRT靶向肽与步骤(3b)所得QSH单靶向肽载药纳米胶束发生酰胺化反应，得CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束，即为所述纳米复合物。
6.如权利要求5所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，其特征在于，步骤(1)中，所述纳米胶束的制备方法为：将超顺磁性铁氧体的四氢呋喃溶液与功能化聚乙二醇的四氢呋喃溶液混合，超声混合5～15min，在超声条件下滴加去离子水，继续超声20～40min，透析，得所述纳米胶束。
7.如权利要求5所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，其特征在于，步骤(2)中，所述载药纳米胶束的制备方法为：将纳米胶束的四氢呋喃溶液和姜黄素的DMSO溶液混合，超声混合5～15min，在超声条件下滴加去离子水，继续超声20～40min，得所述载药纳米胶束。
8.如权利要求5所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，其特征在于，步骤(3a)中，所述CRT单靶向肽载药纳米胶束的制备方法为：在载药纳米胶束的水溶液中加入EDC和NHS活化1～4h，然后加入CRT靶向肽的水溶液，调节pH为5～6，冰水浴并搅拌8～24h，透析，得CRT单靶向肽载药纳米胶束；
或步骤在(3b)中，所述QSH单靶向肽载药纳米胶束的制备方法为：将载药纳米胶束和QSH靶向肽分别分散于pH＝7.4的PBS缓冲液中，将两者混合后冰水浴搅拌反应3～6h，透析，得QSH单靶向肽载药纳米胶束。
9.如权利要求5所述用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物，其特征在于，步骤(4a)中，所述CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备方法为：将步骤(3a)制得的CRT单靶向肽载药纳米胶束和QSH靶向肽分别分散于pH＝7.4的PBS缓冲液中，将两者混合后冰水浴搅拌反应3～6h，透析，得CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束；
或者步骤(4b)中，CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备方法为：将步骤(3b)制得的QSH单靶向肽载药纳米胶束的水溶液中加入EDC和NHS活化1～4h，然后加入CRT靶向肽的水溶液，调节pH为5～6，冰水浴并搅拌8～24h，透析，得CRT-QSH双靶向肽载药纳米胶束的制备方法。
10.一种用于诊疗阿尔兹海默症的药物组合物，其特征在于，包含权利要求1～9中任一项所述纳米复合药物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910939397.3A CN110559454B (zh) | 2019-09-29 | 2019-09-29 | 一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910939397.3A CN110559454B (zh) | 2019-09-29 | 2019-09-29 | 一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110559454A true CN110559454A (zh) | 2019-12-13 |
| CN110559454B CN110559454B (zh) | 2022-04-01 |
Family
ID=68783508
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910939397.3A Expired - Fee Related CN110559454B (zh) | 2019-09-29 | 2019-09-29 | 一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110559454B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112458165A (zh) * | 2020-12-27 | 2021-03-09 | 中山大学孙逸仙纪念医院 | 一种阿尔茨海默病的预测标志物、检测试剂盒及应用 |
| CN114832116A (zh) * | 2022-05-19 | 2022-08-02 | 沈阳药科大学 | 基于小胶质细胞表型调节和脑内铁清除的ros响应型纳米载体及其制备方法与应用 |
| CN115607523A (zh) * | 2022-09-30 | 2023-01-17 | 广东省第二人民医院（广东省卫生应急医院） | 用于缓解和/或治疗阿尔兹海默症的组合物及其制备方法、应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150147276A1 (en) * | 2012-06-07 | 2015-05-28 | President And Fellows Of Harvard College | Nanotherapeutics for drug targeting |
| CN109395093A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-03-01 | 广州创赛生物医用材料有限公司 | 一种用于阿尔茨海默病的诊疗一体化制剂及其制备方法 |
-
2019
- 2019-09-29 CN CN201910939397.3A patent/CN110559454B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150147276A1 (en) * | 2012-06-07 | 2015-05-28 | President And Fellows Of Harvard College | Nanotherapeutics for drug targeting |
| CN109395093A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-03-01 | 广州创赛生物医用材料有限公司 | 一种用于阿尔茨海默病的诊疗一体化制剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| NA HUANG ET AL: "PLGA nanoparticles modified with a BBB-penetrating peptide co-delivering Aβ generation inhibitor and curcumin attenuate memory deficits and neuropathology in Alzheimer’s disease mice", 《ONCOTARGET》 * |
| 郑晓瑶 等: "双级靶向纳米递药系统用于脑部疾病治疗的研究进展", 《中国药学杂志》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112458165A (zh) * | 2020-12-27 | 2021-03-09 | 中山大学孙逸仙纪念医院 | 一种阿尔茨海默病的预测标志物、检测试剂盒及应用 |
| CN114832116A (zh) * | 2022-05-19 | 2022-08-02 | 沈阳药科大学 | 基于小胶质细胞表型调节和脑内铁清除的ros响应型纳米载体及其制备方法与应用 |
| CN114832116B (zh) * | 2022-05-19 | 2024-01-26 | 沈阳药科大学 | 基于小胶质细胞表型调节和脑内铁清除的ros响应型纳米载体及其制备方法与应用 |
| CN115607523A (zh) * | 2022-09-30 | 2023-01-17 | 广东省第二人民医院（广东省卫生应急医院） | 用于缓解和/或治疗阿尔兹海默症的组合物及其制备方法、应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110559454B (zh) | 2022-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wang et al. | PEGlated magnetic polymeric liposome anchored with TAT for delivery of drugs across the blood-spinal cord barrier | |
| Wang et al. | In vivo dual-targeted chemotherapy of drug resistant cancer by rationally designed nanocarrier | |
| CN107715121B (zh) | 一种磁共振成像纳米药物载体、纳米载药系统及其制备方法 | |
| CN110559454B (zh) | 一种用于诊疗阿尔兹海默症的纳米复合药物 | |
| Yang et al. | Preparation and properties of a novel drug delivery system with both magnetic and biomolecular targeting | |
| US20130023714A1 (en) | Medical and Imaging Nanoclusters | |
| CN108066317B (zh) | 纳米药物控释体系的制备方法及其产品与应用 | |
| US20230330273A1 (en) | Magnetic nanoparticles functionalized with cathecol, production and use thereof | |
| CN107007835B (zh) | 载普鲁士蓝靶向纳米复合物及其制备方法 | |
| Luo et al. | “One-pot” fabrication of highly versatile and biocompatible poly (vinyl alcohol)-porphyrin-based nanotheranostics | |
| CN101390826B (zh) | 一种磁性肿瘤靶向聚合物纳米囊泡及其制备方法 | |
| Huang et al. | Development of NIR-II fluorescence image-guided and pH-responsive nanocapsules for cocktail drug delivery | |
| Zhang et al. | Chitosan coated gold nanorod chelating gadolinium for MRI-visible photothermal therapy of cancer | |
| Calcagno et al. | Oil core–PEG shell nanocarriers for in vivo MRI imaging | |
| CN114224838B (zh) | 一种肿瘤微环境激活的融合膜包裹的仿生纳米递送系统及其制备方法及应用 | |
| Wang et al. | Efficient exosome extraction through the conjugation of superparamagnetic iron oxide nanoparticles for the targeted delivery in rat brain | |
| Bai et al. | Modular design of Bi-specific nanoplatform engaged in malignant lymphoma immunotherapy | |
| CN109620972B (zh) | 一种用于肺癌诊断的t1-t2双模态靶向成像造影剂及制备方法 | |
| CN104147608A (zh) | 一种聚乙二醇-叶酸修饰的氨基化锂皂石纳米颗粒及其制备和应用 | |
| CN115089734B (zh) | 载促吞噬肽的碳化MOFs纳米粒和制备方法和在视网膜母细胞瘤的成像和治疗中的应用 | |
| US20190125672A1 (en) | Fabrication of Magnetic Vesicles for Biomedical Imaging and Delivery | |
| Chen et al. | Theranostic nanosystem mediating cascade catalytic reactions for effective immunotherapy of highly immunosuppressive and poorly penetrable pancreatic tumor | |
| CN109674741B (zh) | 药物载体及其制备方法 | |
| CN112870387B (zh) | 一种磁性纳米药物载体及其制备方法和应用 | |
| CN110368359B (zh) | 一种基于支化聚乙烯亚胺合成的杂化纳米水凝胶及其制备和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20220401 |