CN110551126B - 氨基酸修饰的s,r-七环醛,其合成,活性及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了S,R‑七环醛‑AA(AA表示:L‑Ala残基、L‑Phe残基、L‑Ile残基、L‑Leu残基、L‑Trp残基、L‑Cys残基、L‑Asp残基、L‑Pyr残基、Gly残基、L‑His残基、L‑Lys残基、L‑Met残基、L‑Asn残基、L‑Pro残基、L‑Gln残基、L‑Arg残基、L‑Ser残基、L‑Thr残基、L‑Val残基、L‑Tyr残基)，公开了它的制备方法,公开了它的抗静脉血栓活性。因而本发明公开了它在制备抗静脉血栓药物中的应用。

Description

氨基酸修饰的S,R-七环醛,其合成,活性及应用

技术领域

本发明涉及(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮，涉及它的制备方法，涉及它的抗静脉血栓活性。因而本发明涉及它们在制备抗静脉血栓药物中的应用。本发明属于生物医药领域。

背景技术

静脉血栓已成为当下发病率高和死亡率高的疾病。其中静脉血栓症主要包括深静脉血栓和肺栓塞。深静脉血栓和肺栓塞发病的患者数超过了心肌梗塞和中风发病的总人数，而且比乳腺癌和艾滋病所引起死亡的总人数高。由于静脉血栓症的发病率随年龄增长呈指数态增加，所以对我国这样的老龄化国家的人民健康的威胁尤其严重。如果把人口基数考虑进去，对我国国计民生的绝对负面影响尤其严重。于是，静脉血栓症的预防及治疗一直是医药领域所关注的重点。目前的抗栓药物，虽然能够用有效的抑制血栓的形成，但由于其影响止血功能或出血风险，降低了其安全性并限制了临床疗效。β-咔啉类生物碱的多种生物活性包括抑制血小板聚集的活性都已公开。发明人也曾经公开了一系列具有抗动脉血栓活性的β-咔啉-3-甲酰寡肽，它们的静脉给药剂量为5μmol/kg。发明人对它们的活性有两点不满意。第一点是，静脉注射使它们进入血液循环并迅速达到高的血药浓度。正是由于高浓度，它们迅速到达血浆和组织而增加发生不良反应的风险。这是静脉给药本身的固有缺陷，只能通过发明可口服的化合物才能解决。第二点是，虽然在咔啉的1-位引入甲基，可使口服有效剂量降低为0.01μmol/kg，但是这样的化合物仅表现出了抗动脉血栓活性，没有抗静脉血栓活性。静脉血栓是肿瘤患者和接受各种手术的患者普遍并发症，可是患者致残或致死，需要终生服用抗静脉血栓药物。由于现有的抗静脉血栓药物，例如华法林可引起致命的出血副反应。此外，因为静脉血栓形成和动脉血栓形成的机理完全不同，所以对动脉血栓有效的化合物往往对静脉血栓无效。于是，发明对静脉血栓有效的化合物成为抗血栓药物的前沿。发明人假设，两个β-咔啉药效团融合，例如1个(S)-1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸和1个(R)-1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸经分子间缩合为(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,R)-[1-羰甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(简称S,R-七环醛)，S,R-七环醛应有强的抗静脉血栓活性，发明人进一步假设，用20种氨基酸修饰这种新型七环醛，应具有更强的抗静脉血栓活性。于是，发明人提出本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供下式的(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(AA表示:L-Ala残基、L-Phe残基、L-Ile残基、L-Leu残基、L-Trp残基、L-Cys残基、L-Asp残基、L-Pyr残基、Gly残基、L-His残基、L-Lys残基、L-Met残基、L-Asn残基、L-Pro残基、L-Gln残基、L-Arg残基、L-Ser残基、L-Thr残基、L-Val残基、L-Tyr残基)。

本发明的第二个内容是提供(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(AA表示:L-Ala残基、L-Phe残基、L-Ile残基、L-Leu残基、L-Trp残基、L-Cys残基、L-Asp残基、L-Pyr残基、Gly残基、L-His残基、L-Lys残基、L-Met残基、L-Asn残基、L-Pro残基、L-Gln残基、L-Arg残基、L-Ser残基、L-Thr残基、L-Val残基、L-Tyr残基)的合成方法，该方法包括：

(1)将L-色氨酸苄酯在三氟醋酸的催化下与1,1,3,3-四甲氧基丙烷进行Pictet-Spengler缩合,得到1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯(1)；

(2)在甲醇溶液中1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯在Pd/C催化下,与H₂反应脱去苄酯得到1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸(2)；

(3)在2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATu)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下，1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸在N,N-二甲基甲酰胺(无水DMF)中进行分子间缩合为(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-二甲氧乙基-2-基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(3)；

(4)(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-二甲氧乙基-2-基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮，在冰醋酸、水的条件下，将缩醛转变为醛基得到(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-羰甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(4)；

(5)(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-羰甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮在氰基硼氢化钠为还原剂的条件下，与5种天然氨基酸苄酯进行氨化还原反应，得到(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA苄酯]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮系列化合物(5a-e)。AA表示：L-Ala残基、L-Phe残基、L-Ile残基、L-Leu残基、L-Trp残基；

(6)(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-羰甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮在氰基硼氢化钠为还原剂的条件下，与15种天然氨基酸甲酯进行氨化还原反应，得到(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA甲酯]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮系列化合物(5f-t)；AA表示：L-Cys残基、L-Asp残基、L-Pyr残基、Gly残基、L-His残基、L-Lys残基、L-Met残基、L-Asn残基、L-Pro残基、L-Gln残基、L-Arg残基、L-Ser残基、L-Thr残基、L-Val残基、L-Tyr残基；

(7)将5a-t在浓度2N的NaOH溶液中脱除保护得到(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮系列化合物(6a-t)。

本发明的第三个内容是评价(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮抗静血栓形成的活性。

附图说明

图1.(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮的合成路线.i)CH₂Cl₂,1,1,3,3-四甲氧基丙烷,三氟乙酸,室温6小时；ii)氢气,Pd/C,室温反应10小时；iii)DCC,HoBt,室温反应10h；iv)水,冰醋酸,浓盐酸,0℃下反应1小时；v)NaBH₃CN,室温反应10小时,AA-OBzl(5a中的AA为L-Ala残基；5b中的AA为L-Phe残基；5c中的AA为L-Ile残基；5d中的AA为L-Leu残基；5e中的AA为L-Trp残基)；vi)NaBH₃CN,室温反应10小时,AA-OMe(5f中的AA为L-Cys残基；5g中的AA为L-Asp残基；5h中的AA为L-Pyr残基；5i中的AA为Gly残基；5j中的AA为L-His残基；5k中的AA为L-Lys残基；5l中的AA为L-Met残基；5m中的AA为L-Asn残基；5n中的AA为L-Pro残基；5o中的AA为L-Gln残基；5p中的AA为L-Arg残基；5q中的AA为L-Ser残基；5r中的AA为L-Thr残基；5s中的AA为L-Val残基；5t中的AA为L-Tyr残基)；vii)2N NaOH,0℃下反应1小时,6a-t的合成路线(6a中的AA为L-Ala残基；6b中的AA为L-Phe残基；6c中的AA为L-Ile残基；6d中的AA为L-Leu残基；6e中的AA为L-Trp残基；6f中的AA为L-Cys残基；6g中的AA为L-Asp残基；6h中的AA为L-Pyr残基；6i中的AA为Gly残基；6j中的AA为L-His残基；6k中的AA为L-Lys残基；6l中的AA为L-Met残基；6m中的AA为L-Asn残基；6n中的AA为L-Pro残基；6o中的AA为L-Gln残基；6p中的AA为L-Arg残基；6q中的AA为L-Ser残基；6r中的AA为L-Thr残基；6s中的AA为L-Val残基；6t中的AA为L-Tyr残基)。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯(1)

冰浴搅拌下，在5g(17.0mmol)L-Trp-OBzl中加入150mLCH₂Cl₂，5mL1,1,3,3-四甲氧基丙烷，5mL三氟醋酸。反应14h后点TLC板监测原料点消失，有新点产生(CH₂Cl₂:CH₃OH＝30:1)，终止反应。将反应液分别用饱和NaHCO₃萃洗3次，饱和NaCl萃洗3次，合并CH₂Cl₂层，无水NaSO₄干燥2h，减压过滤，滤液减压浓缩后用硅胶柱层析进行纯化(CH₂Cl₂:CH₃OH＝100:1)，得5.87g(87％)标题化合物，为棕红色油状物。ESI-MS(m/e):393[M+H]^-。

实施例2制备1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸(2)

在3.96g(10.0mmol)1中，加入150mL CH₃OH溶解，加入400mg Pd/C，充入氢气后室温搅拌反应，反应18h后点TLC板监测原料点消失，有新点产生(CH₂Cl₂:CH₃OH＝30:1)，终止反应。减压过滤，滤液减压浓缩后得2.726g(8.9mmol)黄色固体，产率89％。ESI-MS(m/e):303[M-H]^-。

实施例3制备(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,R)-[1-二甲氧乙基-2-基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1’,4’-二酮(3)

在886mg(2.91mmol)2中，加入50mL无水DMF溶解，加入1.29g(3.4mmol)HATu，然后用三甲基吡啶将反应液的pH调至8-9，反应24h后点TLC板监测原料点变浅，有新点产生(CH₂Cl₂:CH₃OH＝60:1)，终止反应；反应液减压浓缩，用乙酸乙酯溶解，先后分别用饱和NaHCO₃溶液，饱和NaCl溶液，5％KHSO₄溶液，饱和NaCl溶液，5％NaHCO₃溶液，饱和NaCl溶液萃洗3次，合并乙酸乙酯层，用无水硫酸钠干燥2h后，减压过滤，滤液减压浓缩后得深黄色固体。硅胶柱层析进行异构体的分离：(石油醚:乙酸乙酯,2.5:1)得278mg(0.48mmol)黄色固体，¹HNMR NOESY谱鉴定为SR构型；¹HN MR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.975(s,1H),10.950(s,1H),7.484(d,J＝7.8Hz,1H),7.434(d,J＝7.8Hz,1H),7.370(d,J＝8.0Hz,1H),7.329(d,J＝7.8Hz,1H),7.070(t,J＝7.8Hz,2H),6.981(m,2H),5.837(m,1H),5.206(m,1H),4.517(t,J＝5.5Hz,1H),4.470(dd,J＝1.5Hz,J＝4.2Hz,1H),4.360(dd,J＝1.5Hz,J＝4.2Hz,1H),4.169(dd,J＝1.8Hz,J＝2.4Hz,1H),3.470(dd,J＝1.2Hz,J＝5.7Hz,1H),3.288(m,1H),3.273(s,3H),3.191(s,3H),3.124(s,3H),3.075(s,3H),2.841(dd,J＝4.2Hz,J＝5.7Hz,1H),2.769(dd,J＝4.2Hz,J＝5.7Hz,1H),2.527(dt,J＝1.5Hz,J＝5.4Hz,1H),2.419(dt,J＝1.5Hz,J＝5.4Hz,1H),2.172(m,2H)。

实施例4(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-羰甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(4)

在200mg(0.35mmol)3中，加入3mL冰醋酸、2mL水、1mL浓盐酸，全程冰浴下反应1h，有黄色固体析出，TLC点板检测原料点消失，终止反应。后处理：在冰浴搅拌的条件下，使用2M NaOH调节反应液pH值至中性，将反应液用乙酸乙酯萃取，反复3次，收集乙酸乙酯层，使用饱和碳酸氢钠水溶液萃洗乙酸乙酯层3次，收集酯层用无水硫酸钠干燥12h，减压过滤，将滤液减压浓缩至干，得到151mg(90.9％)标题化合物，为土黄色固体，ESI-MS(m/e):479[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.072(s,1H),10.933(s,1H),9.786(s,1H),9.632(s,1H),7.486(t,J＝8.4Hz,2H),7.385(d,J＝8.4Hz,2H),7.110(t,J＝7.2Hz,2H),7.016(t,J＝6.0Hz,2H),6.095(t,J＝6.0Hz,1H),5.484(s,1H),4.546(dd,J＝4.2Hz,11.4Hz,1H),4.406(d,J＝9Hz,1H),3.616(s,1H),3.451(dd,J＝2.1Hz,12.0Hz,1H),3.215(dd,J＝3.0Hz,17.1Hz,2H),3.047(d,J＝5.1Hz,2H),2.887(d,J＝12.6Hz,1H),2.840(d,J＝12.6Hz,1H)。

实施例5制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Ala-OBzl]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5a)

在100mg(0.2mmol)4中加入3mL二氯甲烷和2mL甲醇溶液，再加入90mg(0.5mmol)的Ala-OBzl·HCl，在冰浴下用N-甲基吗啡啉(NMM)调节反应液pH值为8-9，室温下搅拌2h，在冰浴下加入9.3mg(0.15mmol)的氰基硼氢化钠，室温下反应1h后，再在冰浴下加入9.3mg(0.15mmol)的氰基硼氢化钠，室温下反应1h后，再在冰浴下加入12.4mg(0.2mmol)的氰基硼氢化钠，室温下反应12h，TLC点板检测原料点消失，终止反应，将反应液减压浓缩至干，用乙酸乙酯复溶，用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠水溶液各萃洗三次，收集乙酸乙酯层，用无水硫酸钠干燥12h，减压过滤，将滤液减压浓缩，得到黄色油状物，经过硅胶柱层析纯化，条件为Cl₂CH₂:CH₃OH＝150:1-40:1，得16.7mg(10.7％)标题化合物，为土黄色球状固体，TLC条件为Cl₂CH₂:CH₃OH＝30:1,Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):807[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):805[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.513(s,1H),9.983(s,1H),7.580(d,J＝7.7Hz,1H),7.520(d,J＝7.9Hz,2H),7.375(m,11H),7.217(d,J＝5.7Hz,2H),7.152(m,2H),6.038(dd,J＝4.8Hz,J＝10.5Hz,1H),5.323(s,1H),5.277(d,J＝7.6Hz,2H),5.206(s,2H),4.431(dd,J＝3.9Hz,J＝11.1Hz,1H),4.201(dd,J＝2.4Hz,J＝10.8Hz,1H),3.796(dd,J＝2.4Hz,J＝15.0Hz,1H),3.632(d,J＝4.0Hz,1H),3.529(m,2H),3.016(d,J＝11.6Hz,1H),2.895(m,4H),2.750(m,1H),2.453(d,J＝14.1Hz,1H),2.204(m,1H),1.901(m,1H),1.520(d,J＝6.8Hz,3H),1.422(d,J＝6.9Hz,3H)。

实施例6制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Phe-OBzl]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5b)

采用实例5的方法从205mg(0.5mmol)Phe-OBzl·HCl和100mg(0.2mmol)4得到18.0mg(9.3％)标题化合物，为浅黄色固体，TLC条件为酸乙酯：石油醚＝1:1,Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):959[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):957[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.098(s,1H),9.905(s,1H),7.612(d,J＝7.2Hz,1H),7.589(d,J＝4.8Hz,1H),7.521(d,J＝6.3Hz,1H),7.498(d,J＝7.2Hz,1H),7.229(m,2H),7.137(m,2H),5.950(dd,J＝4.5Hz,J＝9.0Hz,1H),5.677(dd,J＝3.6Hz,J＝9.0Hz,1H),4.431(ddd,J＝1.2Hz,J＝4.8Hz,J＝11.4Hz,1H),4.163(m,1H),3.867(d,J＝3.3Hz,1H),3.840(s,3H),3.810(m,4H),3.784(s,3H),3.765(m,1H),3.746(s,3H),3.648(dd,J＝4.5Hz,J＝11.0Hz,1H),2.852(m,10H),2.481(m,1H),2.151(m,2H),1.982(m,2H),1.525(m,1H)。

实施例7制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Ile-OBzl]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5c)

采用实例5的方法从128mg(0.5mmol)Ile-OBzl·HCl和100mg(0.2mmol)4得到27.8mg(15.1％)标题化合物，为无色球状固体，TLC条件为乙酸乙酯：石油醚＝1:1,Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):891[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):889[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.451(s,1H),9.846(s,1H),7.546(m,3H),7.373(m,10H),7.220(d,J＝7.3Hz,2H),6.006(d,J＝5.8Hz,1H),5.383(d,J＝6.0Hz,1H),5.266(d,J＝13.5Hz,2H),5.202(s,2H),4.430(d,J＝7.8Hz,1H),4.186(d,J＝10.4Hz,1H),3.777(d,J＝14.3Hz,1H),3.626(d,J＝15.2Hz,1H),3.400(d,J＝3.8Hz,1H),3.328(s,1H),3.014(d,J＝12.1Hz,1H),2.921(d,J＝12.8Hz,1H),2.854(s,1H),2.816(m,1H),2.685(m,1H),2.546(m 1H),2.206(m,1H),1.904(m,6H),1.601(m,3H),1.348(m,3H),1.081(d,J＝6.5Hz,3H),1.016(d,J＝7.3Hz,3H),0.975(d,J＝8,7Hz,3H),0.963(d,J＝3.6Hz,3H)。

实施例8制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Leu-OBzl]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5d)

采用实例5的方法从128mg(0.5mmol)Leu-OBzl·HCl和100mg(0.2mmol)4得到24.1mg(13.3％)标题化合物，位微黄色固体，TLC条件为酸乙酯：石油醚＝1:1,Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):891[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):889[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.407(s,1H),9.728(s,1H),7.578(d,J＝7.2Hz,1H),7.527(d,J＝6.6Hz,1H),7.504(d,J＝7.2Hz,1H),7.360(m,11H),7.240(m,1H),7.198(m,1H),7.152(m,1H),7.128(m,1H),6.013(dd,J＝4.8Hz,J＝9.9Hz,1H),5.376(d,J＝5.9Hz,1H),5.262(d,J＝1.6Hz,2H),5.180(s,2H),4.424(dd,J＝3.3Hz,J＝11.1Hz,1H),4.187(dd,J＝3.3Hz,J＝11.1Hz,1H),3.773(dd,J＝3.6Hz,J＝15.6Hz,1H),3.609(dd,J＝4.3Hz,J＝15.6Hz,1H),3.505(dd,J＝4.8Hz,J＝8.9Hz,1H),3.408(t,J＝7.1Hz,1H),2.979(t,J＝14.4Hz,2H),2.890(m,2H),2.818(m,2H),2.624(m,1H),2.524(m,1H),2.200(m,1H),1.858(m,6H),1.704(m,3H),1.617(m,2H),1.023(d,J＝6.9Hz,3H),1.005(d,J＝4.2Hz,3H),0.982(d,J＝3.6Hz,3H),0.962(d,J＝6.6Hz,3H)。

实施例9制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Trp-OBzl]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5e)

采用实例5的方法从147mg(0.5mmol)Trp-OBzl·HCl和100mg(0.2mmol)4得到10mg(4.6％)标题化合物，为深黄色固体，TLC条件为石油醚：丙酮＝1:1,Rf＝0.35；ESI-MS(m/e):1037[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):1035[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝8.230(s,1H),8.103(s,1H),7.604(m,2H),7.196(m,26H),5.781(s,1H),5.371(s,1H),5.128(s,2H),4.945(m,2H),4.037(m,2H),3.720(m,2H),3.568(m,2H),3.414(m,2H),3.312(m,2H),3.114(m,3H),2.693(m,1H),1.845(m,4H),1.744(m,2H),1.615(m,2H)。

实施例10制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Cys-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5f)

采用实例5的方法从120mg(0.5mmol)Cys(Bzl)-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到78.6mg(42.1％)标题化合物，为黄色油状物，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝40:1，Rf＝0.35；ESI-MS(m/e):897[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):895[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.058(s,1H),10.978(s,1H),7.511(d,J＝7.6Hz,1H),7.450(d,J＝7.6Hz,1H),7.373(m,2H),7.314(m,10H),7.097(t,J＝7.0Hz,2H),7.021(t,J＝7.0Hz,2H),5.782(t,J＝6.6Hz,1H),5.259(m,1H),4.445(dd,J＝7.1Hz,J＝14.2Hz,1H),4.330(d,J＝11.2Hz,1H),3.743(m,4H),3.622(m,8H),3.526(t,J＝6.3Hz,4H),3.353(m,2H),3.225(t,J＝6.0Hz,1H),2.847(m,1H),2.662(m,6H),2.046(m,4H)。

实施例11制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Asp(OMe)-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5g)

采用实例5的方法从80mg(0.5mmol)Asp(OMe)-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到790.8mg(45.8％)标题化合物，为黄色固体，TLC条件为石油醚：丙酮＝1:1,Rf＝0.25；ESI-MS(m/e):743[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):741[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.098(s,1H),9.905(s,1H),7.612(d,J＝7.2Hz,1H),7.589(d,J＝4.8Hz,1H),7.521(d,J＝6.3Hz,1H),7.498(d,J＝7.2Hz,1H),7.229(m,2H),7.137(m,2H),5.950(dd,J＝4.5Hz,J＝9.0Hz,1H),5.677(dd,J＝3.6Hz,J＝9.0Hz,1H),4.431(ddd,J＝1.2Hz,J＝4.8Hz,J＝11.4Hz,1H),4.163(m,1H),3.867(d,J＝3.3Hz,1H),3.840(s,3H),3.810(m,4H),3.784(s,3H),3.765(m,1H),3.746(s,3H),3.648(dd,J＝4.5Hz,J＝11.0Hz,1H),2.852(m,10H),2.481(m,1H),2.151(m,2H),1.982(m,2H),1.525(m,1H)。

实施例12制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Pyr-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5h)

采用实例5的方法从90mg(0.5mmol)Glu(OMe)-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到74.7mg(48.9％)标题化合物，为黄色固体，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝30:1，Rf＝0.2；ESI-MS(m/e):735[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):733[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.239(s,1H),10.113(s,1H),7.565(d,J＝7.6Hz,1H),7.485(m,3H),7.219(t,J＝7.6Hz,2H),7.132(m,2H),6.018(m,1H),5.287(m,1H),4.409(m,1H),4.183(m,1H),4.104(m,1H),3.862(s,3H),3.823(s,3H),3.753(m,1H),3.720(s,3H),3.596(m,1H),3.536(m,2H),3.382(m,1H),2.785(m,9H),2.361(m,2H),2.174(m,6H),1.915(m,3H)。

实施例13制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Gly-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5i)

采用实例5的方法从50mg(0.5mmol)Gly-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到58.7mg(45.2％)标题化合物，为无色球状固体，TLC条件为石油醚：丙酮＝1:1,Rf＝0.35；ESI-MS(m/e):627[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):625[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.082(s,1H),11.062(s,1H),7.495(d,J＝12.6Hz,1H),7.470(d,J＝12.6Hz,1H),7.377(d,J＝1.7Hz,1H),7.350(d,J＝1.9Hz,1H),7.088(t,J＝15.0Hz,2H),7.000(dt,J＝1.9Hz,J＝7.2Hz,2H),5.777(m,1H),5.283(m,1H),4.446(dd,J＝4.5Hz,J＝11.4Hz,1H),4.336(dd,J＝3.0Hz,J＝11.6Hz,1H),3.616(s,3H),3.498(s,3H),3.379(s,2H),3.228(s,2H),2.850(m,1H),2.721(m,1H),2.633(m,2H),2.230(m,2H),2.076(m,4H)。

实施例14制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-His-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5j)

采用实例5的方法从90mg(0.5mmol)His-OMe·2HCl和100mg(0.2mmol)4得到56.5mg(34.5％)标题化合物，为黄色固体，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝6:1，Rf＝0.2；ESI-MS(m/e):787[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):785[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.161(s,1H),11.009(s,1H),7.518(d,J＝7.8Hz,2H),7.437(d,J＝6.9Hz,2H),7.458(d,J＝9.7Hz,2H),7.083(t,J＝7.2Hz,2H),6.990(m,2H),6.763(s,1H),6.668(s,1H),5.761(m,1H),5.268(m,1H),4.422(d,J＝7.7Hz,1H),4.314(d,J＝9.8Hz,1H),3.554(s,3H),3.36(m,5H),3.172(m,2H),2.744(m,9H),2.031(m,5H)。

实施例15制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Lys-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5k)

采用实例5的方法从150mg(0.5mmol)Lys(Z)-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到黄色油状物，经过硅胶柱层析纯化，条件为二氯甲烷：甲醇＝150:1-50:1，得到107mg(49.6％)，为无色固体，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝30:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):1037[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):1035[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.207(s,1H),9.817(s,1H),7.553(d,J＝7.5Hz,1H),7.512(d,J＝7.5Hz,1H),7.358(d,J＝7.5Hz,1H),7.347(m,11H),7.157(m,4H),6.024(dd,J＝5.4Hz,J＝9.3Hz,1H),5.372(dd,J＝5.4Hz,J＝9.3Hz,1H),5.090(m,4H),4.986(m,1H),4.858(m,1H),4.429(dd,J＝6.7Hz,J＝15.4Hz,1H),4.154(m,1H),3.809(s,3H),3.729(s,3H),3.596(dd,J＝4.5Hz,J＝15.4Hz,1H),3.467(m,1H),3.351(m,1H),3.231(m,4H),2.998(m,1H),2.836(m,4H),2.674(m,1H),2.430(m,1H),1.956(m,2H),1.817(m,4H),1.576(m,7H),1.418(m,3H)。

实施例16制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Met-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5l)

采用实例5的方法从85mg(0.5mmol)Met-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到86.5mg(53.1％)标题化合物，为黄色球状固体，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝20:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):775[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):773[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.250(s,1H),9.725(s,1H),7.541(d,J＝7.8Hz,1H),7.469(t,J＝7.2Hz,2H),7.395(d,J＝7.8Hz,1H),7.172(m,2H),7.075(m,2H),5.979(dd,J＝5.4Hz,J＝9.0Hz 1H),5.486(d,J＝7.0Hz,1H),4.386(dd,J＝3.9Hz,J＝11.1Hz,1H),4.057(dd,J＝1.8Hz,J＝11.3Hz,1H),3.783(s,3H),3.671(s,3H),3.553(m,4H),3.430(m,2H),2.958(m,1H),2.857(m,1H),2.776(m,2H),2.711(m,1H),2.409(m,2H),2.108(s,3H),2.090(s,3H),2.002(m,5H),1.840(m,4H),1.743(m,2H)。

实施例17制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Asn-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5m)

采用实例5的方法从85mg(0.5mmol)Asn-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到53.3mg(33.3％)标题化合物，为无色固体，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝8:1，Rf＝0.2；ESI-MS(m/e):769[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):767[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.012(s,1H),10.976(s,1H),7.492(d,J＝14.2Hz,1H),7.467(d,J＝14.3Hz,1H),7.369(d,J＝15.7Hz,4H),7.086(t,J＝7.2Hz,2H),7.002(m,2H),6.844(d,J＝8.8Hz,2H),6.668(s,1H),5.762(m,1H),5.313(m,1H),4.422(d,J＝7.3Hz,1H),4.300(d,J＝9.8Hz,1H),4.075(m,3H),3.879(m,2H),3.519(m,2H),3.169(d,J＝5.3Hz,3H),2.971(t,J＝11.7Hz,1H),2.656(m,3H),2.361(m,4H),2.182(m,2H),2.000(m,4H),1.132(t,J＝7.1Hz,3H),0.975(d,J＝7.0Hz,3H)。

实施例18制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Pro-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5n)

采用实例5的方法从70mg(0.5mmol)Pro-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到65.4mg(44.5％)标题化合物，为深黄色固体，TLC条件为石油醚：丙酮＝2:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):707[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):705[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.827(s,1H),8.826(s,1H),7.606(d,J＝8.0Hz,1H),7.551(d,J＝7.5Hz,1H),7.513(d,J＝7.5Hz,1H),7.372(d,J＝7.7Hz,1H),7.200(m,2H),7.113(m,2H),6.081(dd,J＝3.0Hz,J＝11.7Hz,1H),5.229(d,J＝7.9Hz,1H),4.469(dd,J＝1.4Hz,J＝14.5Hz,1H),4.222(dd,J＝6.7Hz,J＝13.2Hz,1H),3.924(m,1H),3.874(s,3H),3.854(m,1H),3.831(s,3H),3.773(m,1H),3.630(dd,J＝4.6Hz,J＝15.6Hz,1H),3.302(m,2H),3.100(m,2H),2.960(m,2H),2.367(m,2H),2.286(m,6H),1.991(m,3H),1.815(m,5H),1.654(m,1H),1.415(m,1H)。

实施例19制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Gln-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5o)

采用实例5的方法从90mg(0.5mmol)Gln-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到50.2mg(30.2％)标题化合物，为黄色固体，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝8:1，Rf＝0.2；ESI-MS(m/e):797[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):795[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.012(s,1H),10.976(s,1H),7.492(d,J＝14.2Hz,1H),7.467(d,J＝14.3Hz,1H),7.369(d,J＝15.7Hz,4H),7.086(t,J＝7.2Hz,2H),7.002(m,2H),6.844(d,J＝8.8Hz,2H),6.668(s,1H),5.762(m,1H),5.313(m,1H),4.422(d,J＝7.3Hz,1H),4.300(d,J＝9.8Hz,1H),4.075(m,3H),3.879(m,2H),3.519(m,2H),3.169(d,J＝5.3Hz,3H),2.971(t,J＝11.7Hz,1H),2.656(m,3H),2.361(m,4H),2.182(m,2H),2.000(m,4H),1.132(t,J＝7.1Hz,3H),0.975(d,J＝7.0Hz,3H)。

实施例20制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Arg-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5p)

采用实例5的方法从120mg(0.5mmol)Arg(NO₂)-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到47.6mg(25.1％)标题化合物，为无色球状固体，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝10:1，Rf＝0.2；ESI-MS(m/e):915[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):913[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMS O-d₆):δ/ppm＝11.052(s,1H),10.942(s,1H),8.527(m,2H),7.888(m,4H),7.505(d,J＝7.8Hz,1H),7.449(d,J＝7.8Hz,1H),7.358(d,J＝7.8Hz,2H),7.089(t,J＝7.2Hz,2H),6.999(t,J＝7.2Hz,2H),5.795(t,J＝6.6Hz,1H),5.256(m,1H),4.431(dd,J＝4.3Hz,J＝11.2Hz,1H),4.328(dd,J＝3.2Hz,J＝11.6Hz,1H),3.623(s,3H),3.498(dd,J＝3.7Hz,J＝15.6Hz,1H),3.340(s,3H),3.265(m,2H),3.144(m,5H),3.030(m,3H),2.815(dd,J＝11.7Hz,J＝15.3Hz 1H),2.637(m,4H),2.427(m,1H),2.172(m,1H),2.018(m,4H),1.855(m,1H),1.561(m,4H),1.447(m,3H)。

实施例21制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Ser-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5q)

采用实例5的方法从60mg(0.5mmol)Ser-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到70mg(48.9％)标题化合物，为无色球状固体，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝20:1，Rf＝0.25；ESI-MS(m/e):687[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):685[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.103(s,1H),11.021(s,1H),7.499(d,J＝7.7Hz,1H),7.457(d,J＝7.7Hz,1H),7.087(t,J＝6.9Hz,2H),6.998(t,J＝6.6Hz,2H),5.792(m,1H),5.270(m,1H),4.841(t,J＝5.7Hz,1H),4.807(t,J＝5.0Hz,1H),4.432(dd,J＝4.5Hz,J＝11.0Hz,1H),4.320(dd,J＝2.8Hz,J＝11.1Hz,1H),3.614(s,3H),3.535(m,6H),3.442(s,3H),3.381(m,1H),3.310(m,1H),3.137(m,2H),2.731(m,5H),2.051(m,5H)。

实施例22制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Thr-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5r)

采用实例5的方法从70mg(0.5mmol)Thr-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到黄色油状物，经过硅胶柱层析纯化，条件为二氯甲烷：甲醇＝100:1-30:1，得到75mg(50.7％)标题化合物，为黄色固体，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝20:1，Rf＝0.2；ESI-MS(m/e):715[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):713[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.078(s,1H),10.963(s,1H),7.498(d,J＝7.8Hz,1H),7.460(d,J＝7.8Hz,1H),7.364(d,J＝7.8Hz,2H),7.088(t,J＝6.9Hz,2H),6.998(t,J＝7.4Hz,2H),5.812(t,J＝6.6Hz,1H),5.262(m,1H),4.756(m,1H),4.660(m,1H),4.435(dd,J＝4.1Hz,J＝11.0Hz,1H),4.319(dd,J＝2.8Hz,J＝11.4Hz,1H),3.842(m,1H),3.699(m,1H),3.626(s,3H),3.506(m,1H),3.426(s,3H),3.379(m,2H),3.305(m,1H),3.329(m,1H),3.141(d,J＝4.8Hz,1H),2.745(m,6H),2.081(m,6H),1.124(d,J＝6.3Hz,3H),1.000(d,J＝6.3Hz,3H)。

实施例23制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Val-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5s)

采用实例5的方法从70mg(0.5mmol)Val-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到74.0mg(50.1％)标题化合物，为无色球状固体，TLC条件为石油醚：乙酸乙酯＝1:1,Rf＝0.2；ESI-MS(m/e):711[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):709[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.419(s,1H),9.867(s,1H),7.576(d,J＝7.2Hz,1H),7.523(d,J＝4.5Hz,1H),7.497(d,J＝4.8Hz,1H),7.367(d,J＝7.6Hz,1H),7.211(ddd,J＝1.4Hz,J＝2.4Hz,J＝6.6Hz,1H),7.198(m,1H),7.134(m,2H),6.001(dd,J＝4.2Hz,J＝10.2Hz,1H),5.416(d,J＝7.3Hz,1H),4.437(dd,J＝3.0Hz,J＝10.8Hz,1H),4.215(dd,J＝3.0Hz,J＝10.8Hz,1H),3.816(s,3H),3.770(m,1H),3.755(s,3H),3.617(dd,J＝4.4Hz,J＝15.6Hz,1H),3.287(d,J＝5.2Hz,1H),3.121(d,J＝5.5Hz,1H),2.993(dd,J＝10.5Hz,J＝14.4Hz,1H),2.811(m,1H),2.630(dd,J＝5.4Hz,J＝11.1Hz,2H),2.202(m,3H),1.937(m,1H),1.836(m,1H),1.611(m,2H)。

实施例24制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Tyr-OMe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(5t)

采用实例5的方法从100mg(0.5mmol)Tyr-OMe·HCl和100mg(0.2mmol)4得到92.5mg(53.4％)标题化合物，为无色固体，TLC条件为二氯甲烷：甲醇＝30:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):839[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):837[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝10.138(s,1H),8.420(s,1H),7.477(t,J＝7.1Hz,2H),7.362(dd,J＝2.9Hz,J＝6.0Hz,1H),7.063(m,12H),6.783(m,3H),5.903(dd,J＝5.4Hz,J＝8.1Hz,1H),5.301(dd,J＝3.6Hz,J＝9.3Hz,1H),4.226(dd,J＝3.6Hz,J＝10.5Hz,1H),3.378(s,3H),3.758(m,1H),3.739(s,3H),3.574(m,1H),3.482(m,1H),3.363(m,3H),3.110(dd,J＝4.5Hz,J＝14.1Hz,1H),3.030(dd,J＝3.6Hz,J＝13.5Hz,1H),2.941(m,1H),2.878(m,1H),2.823(m,1H),2.767(m,1H),2.722(d,J＝3.9Hz,1H),2.648(m,2H),2.564(m,1H),2.436(t,J＝7.2Hz,1H),2.139(m,1H),1.680(m,1H),1.765(m,1H),1.434(m,1H)。

实施例25制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Ala]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6a)

在100mg(0.12mmol)化合物5a中冰浴搅拌的条件下缓慢加入4mL的氢氧化钠水溶液，冰浴下搅拌2h后，TLC点板检测原料点消失，终止反应，使用饱和硫酸氢钾水溶液调节pH值到7，减压抽滤，收集滤饼晾干，得到70.4mg(90.6％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):627[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):625[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.845(s,1H),11.339(s,1H),7.469(m,2H),7.379(m,2H),7.095(m,2H),6.996(m,2H),5.924(m,1H),5.346(m,1H),3.69(m,4H),2.887(m,4H),2.45(m,1H),2.20(m,1H),1.89(m,2H),1.332(d,J＝6.5Hz,3H),1.188(d,J＝6.5Hz,3H)。

实施例26制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Phe]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6b)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5b得到55.7mg(68.6％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):779[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):777[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.411(s,1H),11.148(s,1H),7.526(d,J＝7.5Hz,1H),7.416(d,J＝7.5Hz,1H),7.369(d,J＝7.5Hz,2H),7.256(d,J＝16.5Hz,2H),7.233(d,J＝16.5Hz,2H),7.052(m,10H),5.762(m,1H),5.292(m,1H),4.377(d,J＝8.4Hz,1H),4.275(d,J＝8.4Hz,1H),3.593(m,2H),3.361(m,5H),3.03(m,3H),2.860(m,4H),2.633(m,3H),2.244(m,3H),2.111(m,2H)。

实施例27制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Ile]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6c)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5c得到50.8mg(63.6％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):711[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):709[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.387(s,1H),11.177(s,1H),7.504(d,J＝7.2Hz,1H),7.428(d,J＝7.2Hz,1H),7.369(t,J＝7.2Hz,2H),7.100(t,J＝7.2Hz,2H),7.005(dd,J＝7.2Hz,J＝13.2Hz,2H),5.844(m,1H),5.316(m,1H),4.431(t,J＝11.7Hz,2H),3.498(m,2H),3.221(m,3H),2.965(m,3H),2.339(m,4H),2.192(m,1H),1.795(m,1H),1.629(m,2H),1.497(m,2H),1.329(m,2H),1.172(m 2H),0.913(m,3H),0.867(m,3H),0.824(m,3H),0.780(m,3H)。

实施例28制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Leu]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6d)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5d得到22.0mg(27.6％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):711[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):709[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.294(s,1H),11.219(s,1H),7.466(m,4H),7.110(t,J＝15.0Hz,2H),7.010(dd,J＝2.7Hz,J＝7.7Hz,2H),5.788(m,1H),5.286(m,1H),4.507(dd,J＝4.4Hz,J＝12.3Hz,1H),4.417(dd,J＝4.4Hz,J＝12.3Hz,1H),3.666(m,3H),3.269(m,3H),3.035(m,3H),2.838(m,4H),2.312(m,3H),1.773(m,2H),1.583(m,4H)。

实施例29制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Trp]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6e)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5e得到60.6mg(73.4％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):857[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):855[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.149(s,1H),11.013(s,1H),10.885(s,1H),10.772(s,1H),7.569(d,J＝6.7Hz,1H),7.475(m,1H),7.311(m,6H),7.005(m,8H),5.874(m,1H),5.371(m,1H),4.528(m,3H),3.872(m,1H),3.561(m,4H),3.064(m,2H),2.922(m,4H),2.035(m,2H),2.118(m,6H)。

实施例30制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Cys]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6f)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5f得到43.1mg(44.8％)的目标化合物，为黄色油状物，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):691[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):689[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.058(s,1H),10.978(s,1H),7.511(d,J＝7.6Hz,1H),7.450(d,J＝7.6Hz,1H),7.373(m,2H),7.097(t,J＝7.0Hz,2H),7.021(t,J＝7.0Hz,2H),5.782(m,1H),5.259(m,1H),4.445(m,1H),4.330(m,1H),3.622(m,8H),3.526(m,4H),3.225(m,1H),2.847(m,1H),2.662(m,6H),2.046(m,4H)。

实施例31制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Asp]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6g)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5g得到79.3mg(82.4％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):715[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):713[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.138(s,1H),11.123(s,1H),7.528(d,J＝7.9Hz,1H),7.449(d,J＝7.9Hz,1H),7.383(d,J＝7.9Hz,2H),7.114(t,J＝7.9Hz,2H),7.023(m,2H),5.798(m,1H),5.358(m,1H),4.388(m,2H),3.785(m,1H),3.623(m,3H),3.536(m,1H),3.483(m,1H),3.425(m,2H),3.372(m,1H),3.326(m,2H),3.077(m,5H),2.286(m,4H)。

实施例32制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Pyr]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6h)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5h得到81.1mg(84.3％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):707[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):705[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.187(s,1H),11.079(s,1H),7.470(d,J＝7.5Hz,2H),7.346(d,J＝7.5Hz,2H),7.089(m,2H),6.994(m,2H),5.855(m,1H),5.603(m,1H),4.579(m,2H),4.278(m,2H),3.704(m,3H),3.167(m,2H),2.972(m,3H),2.227(m,10H),1.934(m,2H),1.727(m,2H)。

实施例33制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Gly]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6i)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5i得到86.5mg(89.9％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):598[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):596[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.575(s,1H),11.345(s,1H),7.464(d,J＝6.3Hz,J＝13.2Hz,2H),7.377(t,J＝14.3Hz,2H),7.087(t,J＝14.3Hz,2H),6.99(d,J＝6.3Hz,J＝13.2Hz,2H),5.864(m,1H),5.338(m,1H),4.458(m,1H),4.383(m,1H),3.379(s,2H),3.118(m,4H),2.969(m,4H),2.800(m,2H),2.618(m,2H),2.366(m,2H),2.169(m,2H)。

实施例34制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-His]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6j)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5j得到56.7mg(58.8％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):759[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):757[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.161(s,1H),11.009(s,1H),7.518(d,J＝7.8Hz,2H),7.437(d,J＝6.9Hz,2H),7.458(d,J＝9.7Hz,2H),7.083(t,J＝7.2Hz,2H),6.990(m,2H),6.763(s,1H),6.668(s,1H),5.761(m,1H),5.268(m,1H),4.422(m 1H),4.314(m,1H),3.563(m,2H),3.172(m,2H),2.744(m,9H),2.031(m,5H)。

实施例35制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Lys]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6k)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5k得到49.8mg(67.2％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):741[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):739[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.180(s,1H),11.136(s,1H),7.464(d,J＝7.5Hz,1H),7.386(d,J＝7.5Hz,1H),7.266(m,3H),7.067(m,3H),5.911(m,1H),5.485(m,1H),4.559(m,2H),2.990(m,8H),2.759(m,4H),2.242(m,5H),1.681(m,4H),1.547(m,3H),1.410(m,5H)。

实施例36制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Met]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6l)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5l得到82.2mg(85.3％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):747[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):745[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.397(s,1H),11.268(s,1H),7.495(d,J＝7.7Hz,2H),7.376(d,J＝7.7Hz,2H),7.110(m,2H),7.015(m,2H),5.978(m,1H),5.378(m,1H),4.562(m,2H),4.017(m,1H),3.023(m,6H),2.666(m,4H),2.355(m,3H),2.169(m,2H),2.060(s,3H),2.016(s,3H),1.943(m,3H)。

实施例37制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Asn]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6m)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5m得到75.2mg(81.1％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):713[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):711[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.012(s,1H),10.976(s,1H),7.492(d,J＝14.2Hz,1H),7.467(d,J＝14.3Hz,1H),7.369(d,J＝15.7Hz,4H),7.086(t,J＝7.2Hz,2H),7.002(m,2H),6.844(d,J＝8.8Hz,2H),6.668(s,1H),5.762(m,1H),5.313(m,1H),4.422(m,1H),4.300(m,1H),3.873(m,2H),3.500(m,2H),3.169(m,3H),2.971(m,1H),2.361(m,4H),2.182(m,2H),2.000(m,4H)。

实施例38制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Pro]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6n)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5n得到77.4mg(80.6％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):679[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):677[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.447(s,1H),11.413(s,1H),7.539(d,J＝8.0Hz,1H),7.499(d,J＝8.0Hz,1H),7.395(d,J＝8.0Hz,2H),7.125(t,J＝7.2Hz,2H),7.027(t,J＝7.2Hz,2H),5.928(m,1H),5.421(m,1H),4.604(m,2H),4.293(m,2H),3.588(m,7H),3.322(m,6H),3.077(m,3H),3.383(m,3H),2.050(m,2H),1.918(m,2H)。

实施例39制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Gln]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6o)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5o得到74.0mg(79.6％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):741[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):739[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.012(s,1H),10.976(s,1H),7.492(d,J＝14.2Hz,1H),7.467(d,J＝14.3Hz,1H),7.369(d,J＝15.7Hz,4H),7.086(t,J＝7.2Hz,2H),7.002(m,2H),6.844(d,J＝8.8Hz,2H),6.668(s,1H),5.762(m,1H),5.313(m,1H),4.422(m,1H),4.300(m,1H),3.879(m,1H),3.519(m,2H),3.169(m,3H),2.971(m,1H),2.656(m,3H),2.361(m,4H),2.182(m,2H),2.000(m,4H)。

实施例40制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Arg]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6p)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5p得到62.7mg(72.0％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):797[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):795[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.244(s,1H),11.224(s,1H),9.15(m,2H),8.614(m,2H),8.037(m,5H),7.487(d,J＝7.5Hz,2H),7.397(d,J＝7.5Hz,2H),7.118(t,J＝7.5Hz,2H),7.022(t,J＝7.5Hz,2H),5.904(m,1H),5.482(m,1H),4.563(m,2H),3.940(m,2H),3.185(m,8H),3.024(m,6H),2.279(m,2H),1.875(m,4H),1.598(m,4H)。

实施例41制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Ser]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6q)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5q得到75.9mg(79.2％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):659[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):657[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.912(s,1H),11.861(s,1H),7.455(d,J＝7.5Hz,1H),7.442(d,J＝7.5Hz,2H),7.380(d,J＝7.5Hz,1H),7.056(m,2H),6.964(m,2H),5.949(m,1H),5.334(m,1H),4.547(m,1H),4.369(m,1H),3.515(m,4H),2.844(m,6H),2.632(m,2H),2.277(m,1H),1.997(m,6H)。

实施例42制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Thr]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6r)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5r得到68.2mg(70.8％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):687[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):685[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.465(s,1H),11.332(s,1H),7.490(d,J＝8.0Hz,2H),7.384(d,J＝8.0Hz,2H),7.097(d,J＝8.0Hz,2H),7.019(m,2H),5.885(m,1H),5.404(m,1H),4.587(m,2H),4.109(m,2H),3.987(m,1H),3.871(m,2H),3.744(m,1H),3.572(m,5H),3.067(m,4H),2.261(m,2H),1.296(m,3H),1.250(m,3H)。

实施例43制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Val]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6s)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5s得到89.6mg(93.3％)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):683[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):681[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.556(s,1H),11.228(s,1H),7.502(d,J＝7.7Hz,1H),7.425(d,J＝7.7Hz,1H),7.369(t,d,J＝7.2Hz,2H),7.094(d,J＝7.2Hz,2H),6.999(dd,d,J＝7.2Hz,2H),5.849(m,1H),5.321(m,1H),4.467(m,1H),4.389(m,1H),3.470(d,J＝12.0Hz,2H),3.347(dd,J＝11.2Hz,J＝19.1Hz,2H),3.208(d,J＝3.8Hz,1H),2.988(m,4H),2.801(m,2H),2.370(m,3H),2.148(m,2H),1.939(m,1H),1.004(d,d,J＝6.8Hz,3H),0.957(d,d,J＝6.8Hz,3H),0.856(d,d,J＝6.8Hz,3H),0.846(d,d,J＝6.8Hz,3H)。

实施例44制备化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-Tyr]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮(6t)

采用实例25的方法从100mg(0.10mmol)化合物5t得到69.9mg(72.4)的标题化合物，为黄色固体粉末，TLC条件为乙酸乙酯：水：冰醋酸＝3:1:1，Rf＝0.3；ESI-MS(m/e):811[M+H]⁺,ESI-MS(m/e):809[M+H]^-。¹HNMR(300MH_Z，DMSO-d₆):δ/ppm＝11.220(s,1H),11.196(s,1H),7.427(m,4H),7.09(m,10H),6.698(m,5H),5.884(m,1H),5.400(m,1H),4.194(m,2H),3.636(m,2H),3.183(m,6H),3.040(m,8H),2.313(m,2H)。

实施例45评价6a-t抗静脉血栓活性

1)实验材料：

乌拉坦(氨基甲酸乙酯，CAS：51-79-6，国药集团化学试剂有限公司)、生理盐水(石家庄四药有限公司)华法林钠(CAS：129-06-6，百灵威科技有限公司)；

2)实验动物：

SD品系大鼠，雄性，250±20g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

3)实验方法：

实验采用大鼠下腔静脉结扎模型。

4)分组及给药剂量：

4化合物剂量为1μmol/kg；6a-t系列化合物剂量为0.1μmol/kg；阳性对照华法林的剂量为4.87μmol/kg，阴性对照为羧甲基纤维素钠。

5)所用试剂配制：

麻醉剂为生理盐水配制的20％的乌拉坦溶液。

6)实验操作：

实验大鼠在手术前适应环境并禁食一天，以0.3mL/100g体重的剂量对大鼠进行灌胃给药，采用灌胃方式进行给药，给药30min后于手术前2min用20％的乌拉坦溶液进行腹腔给药麻醉。将大鼠固定于大鼠固定板上，从颈动脉取血2mL，用于血液相关指标的测定。将大鼠腹部备皮且消毒后沿腹白线打开腹腔，下至凝固腺，上至露出肝脏一角即可。将腹腔内小肠等器官拖出，暴露出下腔静脉，拖出的器官用浸润过生理盐水的纱布包裹。钝性分离血管周围结缔组织，暴露下腔静脉及其分支，在肾静脉下方将腹主动脉和下腔静脉剥离开，然后用被生理盐水浸湿的缝合线在下腔静脉与左肾静脉的交汇处将下腔静脉结扎，按解剖位置将肠等器官放回腹腔，用缝合线逐层缝合腹腔。

术后将大鼠置于25～28℃的环境中循环4h，打开腹腔后，逐个将其分支结扎，从下腔静脉与左肾静脉的交汇处的结扎处开始取出2cm下腔静脉，从中取出血栓。计算血重并利用t检验的方式统计结果。手术以每组两只交替进行。

7)实验结果：

利用大鼠下腔静脉结扎模型评价4、6a-t系列化合物的体内抗静脉血栓形成的活性。口服给予的阴性对照羧甲基纤维素钠组的血栓湿重为16.1±2.4mg，而口服给予的阳性对照4.87μmol/kg的华法林组的血栓湿重为4.7±1.2mg，这两组数据具有显著性差距P<0.01，这表明该模型建立成功。

在1μmol/kg口服给药的剂量下，4的血栓湿重为4.4±1.2mg，与阴性对照羧甲基纤维素钠组(血栓湿重为38.1±7.6mg)相比具有显著差异P<0.01，并且与阳性对照4.87μmol/kg的华法林组(血栓湿重为4.7±1.2mg)相比没有显著性差异P>0.05，这表明4可以抑制体内静脉血栓的形成，表现出良好的抗静脉血栓活性。

在0.1μmol/kg口服给药剂量下，6a-t系列化合物组中，所有化合物组的血栓湿重与阴性对照羧甲基纤维素钠组相比均具有显著性差异P<0.05。并且除6a、6j、6m、6q、6r以外，其余系列化合物的血栓湿重与4(血栓湿重为4.4±1.2mg)相比没有显著性差异P>0.05，与阳性对照4.87μmol/kg的华法林组(血栓湿重为4.7±1.2mg)相比没有显著性差异P>0.05，这表明通过氨基酸修饰后得到的目标化合物具有更好的抑制体内静脉血栓形成的活性。本发明具有意想不到的技术效果。

表1 6a-t的抗静脉血栓活性

a)与羧甲基纤维素钠比P<0.01；b)与4.87μmol/kg华法林比P>0.05；n＝12

实施例46评价化合物6l抗静脉血栓的剂量依赖关系

1)实验材料：

乌拉坦(氨基甲酸乙酯，CAS：51-79-6，国药集团化学试剂有限公司)、生理盐水(石家庄四药有限公司)华法林钠(CAS：129-06-6，百灵威科技有限公司)；

2)实验动物：

SD品系大鼠，雄性，250±20g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

3)实验方法：

实验采用大鼠下腔静脉结扎模型。

4)分组及给药剂量：

6l为三个剂量分别是0.1μmol/kg、0.01μmol/kg、0.001μmol/kg；阳性对照华法林剂量为4.87μmol/kg，阴性对照为生理盐水。

5)所用试剂配制：

麻醉剂为用生理盐水配制的20％的乌拉坦水溶液，抗凝剂为用生理盐水配制的42mg/100mL的肝素钠水溶液。

6)实验操作：

实验大鼠在手术前适应环境并禁食一天，以0.3mL/100g体重的剂量对大鼠进行灌胃给药，采用灌胃方式进行给药，给药30min后于手术前2min用20％的乌拉坦溶液进行腹腔给药麻醉。将大鼠固定于大鼠固定板上，从颈动脉取血2mL，用于血液相关指标的测定。将大鼠腹部备皮且消毒后沿腹白线打开腹腔，下至凝固腺，上至露出肝脏一角即可。将腹腔内小肠等器官拖出，暴露出下腔静脉，拖出的器官用浸润过生理盐水的纱布包裹。钝性分离血管周围结缔组织，暴露下腔静脉及其分支，在肾静脉下方将腹主动脉和下腔静脉剥离开，然后用被生理盐水浸湿的缝合线在下腔静脉与左肾静脉的交汇处将下腔静脉结扎，按解剖位置将肠等器官放回腹腔，用缝合线逐层缝合腹腔。

术后将大鼠置于25～28℃的环境中循环4h，打开腹腔后，逐个将其分支结扎，从下腔静脉与左肾静脉的交汇处的结扎处开始取出2cm下腔静脉，从中取出血栓。计算血重并利用t检验的方式统计结果。手术以每组两只交替进行。

7)实验结果及讨论：

利用大鼠下腔静脉结扎模型评价化合物6l的体内抗静脉血栓形成的活性是否存在剂量依赖关系。口服给予的阴性对照生理盐水组的血栓湿重为13.4±4.3mg，而口服给予的阳性对照4.87μmol/kg的华法林组的血栓湿重为4.9±2.0mg，这两组数据具有显著性差距P<0.01，这表明该模型建立成功。

(0.1μmol/kg)6l组的栓重与生理盐水组相比P<0.01,与华法林相比P>0.05,说明在0.1μmol/kg的剂量下化合物6l表现出了优秀的抗静脉血栓活性。在降低10剂量之后，(0.01μmol/kg)6l组的栓重与生理盐水组相比P<0.01，且与(0.1μmol/kg)6l组相比P<0.01，说明在降低10倍计量后化合物6l仍具有抗静脉血栓活性，在降低100倍剂量后，化合物(0.001μmol/kg)6l组的栓重与生理盐水组相比P>0.05，说明已经不具有抗静脉血栓活性。

表2三种剂量的化合物6l的抗静脉血栓活性

a)与生理盐水相比P<0.01,与4.87μmol/kg华法林比P>0.05；b)与生理盐水比P<0.01,与(0.1μmol/kg)6l比P<0.01；c)与生理盐水比P>0.05；n＝12。

Claims (2)

1.一种下式化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮在制备抗静脉血栓药物中的应用，

式中AA表示:L-Ala残基、L-Phe残基、L-Ile残基、L-Leu残基、L-Trp残基、L-Cys残基、L-Asp残基、L-Pyr残基、Gly残基、L-His残基、L-Lys残基、L-Met残基、L-Asn残基、L-Pro残基、L-Gln残基、L-Arg残基、L-Ser残基、L-Thr残基、L-Val残基、L-Tyr残基。

2.权利要求1所述的一种化合物(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮在制备抗静脉血栓药物中的应用，其特征在于所述化合物的制备方法包括以下步聚：

(1)将L-色氨酸苄酯在三氟醋酸的催化下与1,1,3,3-四甲氧基丙烷进行Pictet-Spengler缩合,得到1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯；

(2)在甲醇溶液中1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯在Pd/C催化下,与H₂反应脱去苄酯得到1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸；

(3)在2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N-羟基苯并三唑存在下，1-(2,2-二甲氧基乙基)-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-3-羧酸在无水N,N-二甲基甲酰胺中进行分子间缩合为(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-二甲氧乙基-2-基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮；

(4)(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-二甲氧乙基-2-基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮，在冰醋酸、水的条件下，将缩醛转变为醛基得到(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-羰甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮；

(5)(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-羰甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮在氰基硼氢化钠为还原剂的条件下，与5种天然氨基酸苄酯进行氨化还原反应，得到(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA苄酯]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮系列化合物5a-e,AA表示：L-Ala残基、L-Phe残基、L-Ile残基、L-Leu残基、L-Trp残基；

(6)(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[1-羰甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮在氰基硼氢化钠为还原剂的条件下，与15种天然氨基酸甲酯进行氨化还原反应，得到(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA甲酯]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮系列化合物5f-t；AA表示：L-Cys残基、L-Asp残基、L-Pyr残基、Gly残基、L-His残基、L-Lys残基、L-Met残基、L-Asn残基、L-Pro残基、L-Gln残基、L-Arg残基、L-Ser残基、L-Thr残基、L-Val残基、L-Tyr残基；

(7)将5a-t在浓度2N的NaOH溶液中脱除保护得到(2S,5S)-四氢吡嗪[1,2:1,6]并双{(1S,1R)-[乙基-AA]-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶[3,4-b]并吲哚}-1,4-二酮系列化合物6a-t。

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