CN110542676A - 一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，通过将拉曼显微镜，特制光纤，三维六角调节架、激光器进行组装从而对微纳药物实现单细胞水平上的靶向药物递送和实时拉曼检测。本发明首先利用光学操控的方法实现的微纳药物靶向递送不仅递送速率快、靶向性好，可定量递送，而且适用性广，操作灵活简便，不仅可以运用在贴壁细胞上，还可以解决悬浮细胞因其自身布朗运动而难以进行靶向药物递送的问题；其次利用拉曼检测不仅可以实现单细胞的活性检测，而且检测过程无需化学试剂染色或标记，无损伤，简便高效。利用这种装置实现的单细胞同步靶向药物递送和拉曼检测在细胞学研究、药物研发等领域上将具有重大意义。

Description

一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学 方法

技术领域

本发明属于光学微纳操控技术、拉曼探测技术与生物医药技术的交叉技术领域，特别是涉及一种在单细胞水平上利用光纤光镊与拉曼显微镜同时实现对微纳药物颗粒的光学靶向递送与靶细胞实时探测的方法。

背景技术

单细胞的靶向药物递送和实时检测在当今细胞学和生物医学领域占据着越来越重要的位置，如药物开发、组织工程和基因工程，尤其是癌症治疗，都离不开细胞的靶向药物递送和实时探测的发展。为了提高靶向药物的特异性、安全性和有效性，研究者们开发了多种靶向药物系统。例如，由微型合成装置组成的化学驱动的微米/纳米马达，它可以通过系统的内部燃料(过氧化氢)和马达上修饰的金属纳米颗粒发生化学反应而产生的喷射氢泡推动马达运动。为了实现无毒、无燃料的药物递送，研究人员们探索了一些利用物理方法提供动力的药物递送系统，如磁驱动、光驱动和超声驱动系统，通过在药物颗粒上沉积一些相应的金属化合物以响应磁场、光场或超声波进而带动药物颗粒的运动。但是，上述物理驱动系统需要对药物颗粒进行复杂的修饰与加工，而且它们一般适用于系统中所有药物颗粒的宏观控制，不能对系统中单个药物颗粒进行精确操纵和定量的控制药物颗粒的精准递送。此外，为了检测靶向药物对细胞的影响，一般采用化学标记、荧光成像、代谢物检测等方法对细胞进行检测，但这些方法不仅需要对细胞进行标记，而且难以实现单个细胞的精确的检测。因此我们需要探索一种安全、方便、灵活、高效的方法，既能实现可控性强的靶向药物递送，还可以实现单细胞水平上更加安全高效的检测。

光纤光镊，作为一种简单、灵活且功能强大的操控工具，已经广泛应用于微纳操控领域，如操控微/纳米介电粒子、细菌、单细胞，甚至DNA。因此，将光纤光镊技术如果应用于单细胞的靶向药物递送将非常令人期待，而拉曼显微镜作为一种非侵入性光学检测工具，无需任何的化学试剂或荧光染料的标记就可以获得单细胞的活性特征，已广泛应用于单细胞的健康、凋亡和死亡的鉴定。因此如果可以将光纤光镊技术，和拉曼检测技术相结合应运与药物靶向治疗领域，将很好的解决体外靶向药物递送和实施探测的一系列问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，解决了现有技术中在单细胞水平上难以实现微纳药物颗粒快速精准的、可定量的靶向递送和安全高效实时探测的问题，操作简单，方便，对生物环境无毒，无损伤。

本发明所采用的技术方案是，一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，按照以下步骤进行：

S1.光纤光镊的制备：采用熔融拉制法拉制出一根尖端具有小弧度抛物线连接小锥角的光纤和一根尖端具有大弧度抛物线连接大锥角的光纤；

S2.将两个六角调节架相向的架在拉曼显微镜的载物台左右两侧，六角调节架倾斜角选取范围为10~20度，并高于载物台0.5 ~ 1.5 cm，将S1中拉制好的带有小锥角尖端的光纤置在左侧调节架上，具有大锥角尖端的光纤置在右侧调节架上，两个光纤前端相向而置并处于载物台中心，末端各连接一个980nm的激光器；

S3.培养细胞：在实验前将细胞取出并将细胞培养基换为PBS溶液置于拉曼显微镜载物台上的载玻片上，随后将用PBS作为溶液的药物颗粒滴入细胞中；

S4.单细胞药物颗粒的靶向递送：如果是贴壁细胞，调节载物台左侧光纤将其尖端浸入细胞与药物颗粒的混合液并于药物颗粒持平，打开光纤末端连接的980nm激光器，调节六角调节架或载物台，对药物颗粒进行捕获与递送；

如果是悬浮细胞，调节载物台两侧光纤分别将其尖端浸入细胞与药物颗粒的混合液并于药物颗粒持平，同时处于同一显示界面上，打开右侧光纤末端连接的980nm激光器，调节六角调节架或载物台对悬浮细胞进行捕获，随后打开左侧光纤末端连接的980nm激光器，调节六角调节架或载物台对药物颗粒进行捕获与递送；

S5.单细胞拉曼检测：利用拉曼显微镜对靶细胞进行实时探测。

进一步的，所述S1中，光纤为单模光纤，单模光纤为DC/PC连接方式，内径9 μm，包层直径125 μm。

进一步的，所述S1中，熔融拉制法拉制中熔融仪器为酒精灯，熔融拉制法的具体步骤为熔融，拉制，拉断。

进一步的，将光纤放在酒精灯外焰进行熔融，熔融时间为40~50s。

进一步的，以0.4mm/s~0.7mm/s的速度对光纤进行拉制，拉制时间8~12s。

进一步的，S5的具体过程是：靶细胞拉曼检测时运用532nm激光作为激发光，功率为5 ~ 15mW，积分时间为1 ~ 10s、积分次数为1 ~ 8次。

进一步的，S2中拉曼显微镜为共聚焦拉曼显微镜。

进一步的，所述S4中，贴壁细胞为HeLa细胞，种植在1.5 × 1.5 cm 的细胞爬片上。

进一步的，所述S4中，悬浮细胞为K562细胞。

进一步的，所述S4中，递送药物颗粒时的激光功率设置范围为20~50mW，捕获细胞时激光功率设置为20~40mW。

本发明采用熔融拉制法将两根单模光纤分别拉制为具有小弧度抛物线连接小锥角的尖端和具有大弧度抛物线连接大锥角的尖端，具有这两种尖端的光纤分别对微纳颗粒和大尺寸细胞的捕获与递送效果好。搭建实验装置，在拉曼显微镜载物台两侧相向搭建两个六角调节架，将所拉制的光纤搭建在六角调节架上，即可以通过调节六角调节架就可以调节光纤移动，以便对药物颗粒和细胞的的递送。在所安置的光纤末端连接980nm激光器以提供能量，利用光纤尖端所产生的光力即可对药物颗粒或细胞进行捕获或递送，最后利用拉曼显微镜对细胞进行活性探测。这种利用光纤光镊进行的光学操控药物颗粒的方法操作方便，简单灵活，而且对药物颗粒的制备限制少。整个设备功能强大，可以解决了单个细胞难以同时进行靶向药物递送和活性检测的难题。

本发明的有益效果：

1，基于光纤光镊与拉曼显微镜的组装，很好的解决了单细胞难以进行定量的靶向药物递送和无标记活性探测的问题，适用性广，操作灵活。

2，利用光学操控即可对微纳药物颗粒进行递送，无需对药物颗粒进行复杂的修饰，对药物颗粒的运用广度大大增加。

3，可以实现单细胞水平上药物递送，而且递送速率快、靶向性好、精准性高，可定量递送。

4，不仅可以实现贴壁细胞的药物递送与检测，还解决悬浮细胞由于其自身的布朗运动难以进行靶向药物递送与细胞检测的问题。

5，利用拉曼检测不仅可以实现单细胞的活性检测，而且检测过程无需化学试剂染色或标记，所实现的细胞活性探测具有无标记、无损伤的特点，可实时的探测到任一单细胞的活性，在细胞学研究、药物研发等领域上将具有重大意义。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明中用于靶向药物递送的光纤的光学图片。a为小锥角的光纤头，b为大锥角的光纤头。

图2是本发明设备的结构示意图。

图3是本发明实施例1中利用光纤光镊对直径为3 μm的药物颗粒进行靶向药物递送的一系列光学图片。a-h为时间顺序各个阶段的过程示意图。

图4是本发明实施例1中用拉曼显微镜记录的靶细胞的拉曼信号随时间的变化。

图5是本发明实施例2中利用光纤光镊对五颗直径为3 μm的药物颗粒进行的一次性递送的一系列光学图片。a-d为时间顺序各个阶段的过程示意图。

图6是本发明实施例2中用拉曼显微镜记录的靶细胞旁时靶细胞的拉曼信号随时间的变化。

图7是本发明实施例3中利用一根光纤光镊对悬浮细胞进行捕获的光学图片，和利用另一根光纤光镊对所捕获的悬浮细胞进行靶向药物递送的一系列光学图片。a-h为时间顺序各个阶段的过程示意图。

图8是本发明实施例4中用拉曼显微镜记录的靶细胞旁时靶细胞的拉曼信号随时间的变化。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

1-1，本实施例子提供一种光纤尖端呈抛物线连接锥角的光线光镊的制作方法和实验设备的组装方法，其过程如下。

（1）用光纤钳子剪断光纤一端的耦合器，从裸头处算，拔掉长约4dm光纤涂覆层塑料，再拔掉长约2.5mm的包层得到裸光纤。

（2）点燃酒精灯，将火焰高度控制在1cm以下，然后将裸光纤的中端放在酒精灯外焰进行加热，待40s光纤熔融之后，以0.6mm/s的速度拉制10s，最后用快速拉断光纤，即可形成小弧度抛物线连接小锥角的光纤头，如图1a所示。如果光纤锥角端延伸有小于1 μm尖端，用蘸有酒精灯的擦镜纸顺着光纤方向进行擦拭即可去掉小尖端。

（3）取另一根单模光纤，用光纤钳子剪断光纤一端的耦合器，从裸头处算，拔掉长约4dm光纤涂覆层塑料，再拔掉长约2.5mm的光纤包层得到裸光纤。

（4）点燃酒精灯，将火焰高度控制在1cm以下，然后将裸光纤的中端放在酒精灯外焰进行加热，待50s光纤熔融之后，以0.5mm/s的速度拉制8s，最后快速拉断光纤，即可形成大弧度抛物线连接大锥角的光纤头，如图1b所示。如果光纤锥角端延伸有直径小于1 μm尖端，用蘸有酒精灯的擦镜纸顺着光纤方向进行擦拭即可去掉小尖端。

(5) 将两台购自日本神津精密有限公司，型号为（FM6-51-L/R）的六角调节架架（即图中的微型调节台）在Horiba XploRA PLUS共聚焦拉曼显微镜载物台左右两侧，六角调节架上平面高于拉曼显微镜载物台上平面0.5cm~1.5cm，六角调节架倾斜角选取范围为10~20度，将拉制好的锥形光纤在距离尖端1cm处套上一个毛细血管并固定在六角调节架的上平面，用光纤耦合器在光纤末端各耦合一个980nm的激光器，拉曼显微镜连接入电脑以便成像。

图1为本发明所拉制光纤的光学图片，光纤尖端图。

1-2，提供另一种光纤尖端呈抛物线连接锥角的光线光镊的制作方法，与1-1类似，不同之处为：光纤熔融时间为43s，通过0.4 mm/s的速度拉制12s，得到小弧度抛物线连接小锥角的光纤头。光纤熔融时间为48s，通过0.7 mm/s的速度拉制11s，形成大弧度抛物线连接大锥角的光纤头。

图2为本次发明所组装的设备图。

实施例2

2-1，本实施例子提供一种运用光纤光镊与拉曼显微镜进行单个贴壁细胞逐步靶向药物递送和同步拉曼探测的方法。

S1. 海拉细胞培养在具有10%胎牛血清，1%双抗的DMEM培养基中，并置于温度为37°C，二氧化碳浓度为5%的培养箱中。实验前12小时将海拉细胞转移到直径为1.2cm的细胞爬片上，再放进相同培养环境的培养箱中。

S2. 实验时将细胞爬片取出并置于拉曼显微镜的载物台上，吸去培养液，用PBS溶液洗涤四次，然后将洗涤后的细胞爬片置于拉曼显微镜载物台上的载玻片上，在上面滴上1ml PBS溶液。

S3. 选取载有阿霉素药物的直径为3um，孔径为9nm，孔体积0.5 mL/g的二氧化硅颗粒作为载药颗粒，现配载药颗粒浓度为3×10^-8 ~ 3.5×10^-8 g/mL。之后吸去细胞爬片上的PBS溶液，用注射器注入1mL载药颗粒溶液。

S4. 拉曼显微镜调为成像界面，物镜放大倍数设置为50×（NA = 0.5），调节显微镜焦平面以看清海拉细胞，移动载物台以迅速寻找周围1000 μm内不存在药物颗粒的海拉细胞作为靶细胞。

S5. 三维调节六角调节架，将带有小抛物线、小锥角的光纤尖端浸入细胞与药物颗粒的混合溶液中，并将光纤尖端调整到靶细胞旁边并置于同一平面上。

S6. 打开光纤末端连接的980nm激光器并设置功率为30mW，调节六角调节架或控制拉曼显微镜载物台的移动以让光纤尖端端靠近药物颗粒。

S7. 当光纤尖端慢慢接近药物颗粒约0.5~2 um时光纤会将药物颗粒捕获在光纤前端的平衡点处，随后继续调节光纤或载物台的相对移动就可以使光纤带动药物颗粒靠近靶细胞。

S8. 随着光纤的移动慢慢靠近靶向细胞，药物颗粒也逐渐靠近靶细胞直至接触靶细胞，随后关闭激光器，移开光纤，药物颗粒就可以留在靶向药物旁边。从第一颗药物颗粒递送到靶细胞时起，每隔五分钟对靶细胞进行一次拉曼测试并递加一颗药物颗粒直至细胞活性大大减弱。

S9. 靶细胞拉曼检测时运用532nm激光作为激发光，功率为10mW，积分时间为5s，积分次数为5次。

图3为利用光纤光镊对靶细胞进行靶向药物递送的过程示意图。图a-h为时间顺序各个阶段的过程示意图，如图所示，在光纤的操控下，一个药物颗粒被非接触性从显示界面外分别递送到距离靶向细胞115、27 um处，直至和靶向细胞接触，随后有四颗药物颗粒陆续的被递送到靶向细胞旁。图4是我们对靶细胞所测得的拉曼信号，可以从图中看出相应峰值的衰减进而推出细胞生命状态的变化。

2-2，提供另一种运用光纤光镊与拉曼显微镜进行单个贴壁细胞逐步靶向药物递送和同步拉曼探测的方法，与2-1类似，不同之处为：S7中激光功率设置20mW；S10中，激光功率为15mW，积分时间1s，积分次数8次。

2-3，提供又一种运用光纤光镊与拉曼显微镜进行单个贴壁细胞逐步靶向药物递送和同步拉曼探测的方法，与2-1类似，不同之处为：S7中激光功率设置50mW；S10中，激光功率5mW，积分时间10s，积分次数1次。

实施例3

3-1，本实施例子提供一种运用光纤光镊与拉曼显微镜进行单个贴壁细胞的多个药物颗粒同时递送和同步拉曼探测的方法。

步骤S1-S5与实施例2-1的S1-S5相同；

S6. 打开光纤末端连接的980nm激光器并设置功率为40mW，调节六角调节架或控制拉曼显微镜载物台的移动以让光纤尖端端靠近药物颗粒。

S7. 当光纤尖端慢慢接近药物颗粒约0.5~2 um时光纤会将药物颗粒捕获在光纤前端的平衡点处，随后继续调节光纤或载物台的相对移动让被捕获的药物颗粒靠近第二个需要捕获的药物颗粒，当被捕获的药物颗粒与需要被捕获的药物颗粒距离约1um时，第二颗药物颗粒就会被捕获在第一颗药物颗粒末端，以此类推，我们可以在光纤末端顺着光传播的方向一次性捕获五颗或更多的药物颗粒。

S8. 当多颗药物颗粒捕获完成后，就可以继续操控光纤或载物台使被捕获的药物颗粒逐渐靠近靶细胞完成递送，并对靶细胞每五分钟进行一次拉曼检测。

S9. 靶细胞拉曼检测时用532nm激光作为激发光，功率设置为10mW，积分时间为5s，积分次数为5次。

图5a-5d为利用光纤光镊对靶细胞进行多个药物颗粒同时靶向递送的过程示意图。如图所示，在光纤的操控下，五颗药物颗粒被非接触性捕获在光纤光镊的后面，并从显示器界面外分别递送到距离靶向细胞130、65 um处，直至和靶细胞接触，图6是我们每五分钟对完成药物靶向递送的细胞测的拉曼信号，可以从图中看出相应峰值的衰减进而推出当细胞周围有五颗药物颗粒时其生命状态的变化。

3-2，提供另一种运用光纤光镊与拉曼显微镜进行单个贴壁细胞的多个药物颗粒同时递送和同步拉曼探测的方法，与3-1类似，不同之处是，S6中激光功率设置20mW；S9中，激光功率为15mW，积分时间1s，积分次数8次。

3-3，提供又一种运用光纤光镊与拉曼显微镜进行单个贴壁细胞的多个药物颗粒同时递送和同步拉曼探测的方法，与3-1类似，不同之处是，S6中激光功率设置50mW；S9中，激光功率5mW，积分时间10s，积分次数1次。

实施例4

4-1，本实施例子提供一种运用光纤光镊与拉曼显微镜进行单个悬浮细胞定量靶向药物递送和同步拉曼探测的方法。

S1. 将两台购自日本神津精密有限公司，型号为（FM6-51-L/R）的六角调节架架在Horiba XploRA PLUS共聚焦拉曼显微镜载物台左右两侧，六角调节架上平面高于拉曼显微镜载物台上平面0.5cm~1.5cm，六角调节架倾斜角选取范围为10~20度，将具有小锥角的光纤在距离尖端1cm处套上一个毛细血管并固定在左侧六角调节架的上平面，具有大锥角的光纤在距离尖端1cm处套上一个毛细血管并固定在右侧六角调节架的上平面。用光纤耦合器在光纤末端各耦合一个980nm的激光器，拉曼显微镜与电脑连接以便成像。

S2. K562细胞培养在具有10%胎牛血清，1%双抗的DMEM培养基中，并置于温度为37°C，二氧化碳浓度为5%的培养箱中。实验时将K562细胞离心去除培养基，再置于PBS溶液中，吹打均匀后抽取0.5 ml细胞悬浮液置于拉曼显微镜的载玻片上。

S3. 选取载有阿霉素药物的直径为3um，孔径为9nm，孔体积0.5 mL/g的二氧化硅颗粒作为载药颗粒，现配载药颗粒浓度为2×10^-8 ~ 2×10^-8 g/mL。之后用注射器将0.5 mL载药颗粒溶液注入载玻片上的悬浮细胞溶液中。

S4. 拉曼显微镜调为成像界面，物镜放大倍数设置为50×（NA = 0.5），调节显微镜焦平面直至看清K562细胞，迅速调节六角调节架，将拉曼显微镜旁两根光纤的尖端调入混合液中并处于同一平面但互不接触。

S5. 打开右侧光纤末端连接的980nm激光器并设置功率为30mW，调节六角调节架或控制拉曼显微镜载物台的移动以让带有大锥角尖端的光纤靠近运动的K562细胞。

S6. 当光纤尖端接近K562细胞约5um时，细胞就在光纤光压力的作用下捕获其沿光轴的轴心上。

S7. 保持右侧光纤不动，移动通有30 mW 980 nm激光的左侧光纤以捕获药物颗粒并将其移动到捕获的悬浮细胞旁，随后关闭左侧光纤的激光，药物颗粒就可以留在悬浮细胞旁。

S9. 利用拉曼显微镜的532nm激光对靶细胞进行探测，功率为10mW，积分时间为5s，积分次数为5次。

图7a-7h为利用光纤光镊对靶细胞进行靶向药物递送的过程示意图。如图所示，一个悬浮细胞被右侧光纤操控保持不动，10颗药物颗粒分6次被递送到靶细胞旁。图8是我们对靶细胞测得的拉曼信号，可以从图中看出相应峰值的衰减进而推出细胞生命状态的变化。

4-2提供另一种运用光纤光镊与拉曼显微镜进行单个悬浮细胞定量靶向药物递送和同步拉曼探测的方法，与4-1类似，不同之处是，S5中激光功率设置20mW；S9中，激光功率为15mW，积分时间1s，积分次数8次。

4-3提供又一种运用光纤光镊与拉曼显微镜进行单个悬浮细胞定量靶向药物递送和同步拉曼探测的方法，与4-1类似，不同之处是，S5中激光功率设置50mW；S9中，激光功率5mW，积分时间10s，积分次数1次。

本说明书中的各个实施例均采用相关的方式描述，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处。尤其，对于系统实施例而言，由于其基本相似于方法实施例，所以描述的比较简单，相关之处参见方法实施例的部分说明即可。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，其特征在于，按照以下步骤进行：

S1.光纤光镊的制备：采用熔融拉制法拉制出一根尖端具有小弧度抛物线连接小锥角的光纤和一根尖端具有大弧度抛物线连接大锥角的光纤；

S2.将两个六角调节架相向的架在拉曼显微镜的载物台左右两侧，六角调节架倾斜角选取范围为10~20度，并高于载物台0.5 ~ 1.5 cm，将S1中拉制好的带有小锥角尖端的光纤置在左侧调节架上，具有大锥角尖端的光纤置在右侧调节架上，两个光纤前端相向而置并处于载物台中心，末端各连接一个980nm的激光器；

S3.培养细胞：在实验前将细胞取出并将细胞培养基换为PBS溶液置于拉曼显微镜载物台上的载玻片上，随后将用PBS作为溶液的药物颗粒滴入细胞中；

S4.单细胞药物颗粒的靶向递送：如果是贴壁细胞，调节载物台左侧光纤将其尖端浸入细胞与药物颗粒的混合液并于药物颗粒持平，打开光纤末端连接的980nm激光器，调节六角调节架或载物台，对药物颗粒进行捕获与递送；

如果是悬浮细胞，调节载物台两侧光纤分别将其尖端浸入细胞与药物颗粒的混合液并于药物颗粒持平，同时处于同一显示界面上，打开右侧光纤末端连接的980nm激光器，调节六角调节架或载物台对悬浮细胞进行捕获，随后打开左侧光纤末端连接的980nm激光器，调节六角调节架或载物台对药物颗粒进行捕获与递送；

S5.单细胞拉曼检测：利用拉曼显微镜对靶细胞进行实时探测。

2.根据权利要求1所述的一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，其特征在于，所述S1中，光纤为单模光纤，单模光纤为DC/PC连接方式，内径9 μm，包层直径125 μm。

3.根据权利要求1所述的一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，其特征在于，所述S1中，熔融拉制法拉制中熔融仪器为酒精灯，熔融拉制法的具体步骤为熔融，拉制，拉断。

4.根据权利要求3所述的一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，其特征在于，将光纤放在酒精灯外焰进行熔融，熔融时间为40~50s；以0.4mm/s~0.7mm/s的速度对光纤进行拉制，拉制时间8~12s。

5.根据权利要求1所述的一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，其特征在于，S5的具体过程是：靶细胞拉曼检测时运用532nm激光作为激发光，功率为5~ 15mW，积分时间为1 ~ 10s、积分次数为1 ~ 8次。

6.根据权利要求1所述的一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，其特征在于，S2中拉曼显微镜为共聚焦拉曼显微镜。

7.根据权利要求1所述的一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，其特征在于，所述S4中，贴壁细胞为HeLa细胞，种植在1.5 × 1.5 cm 的细胞爬片上。

8.根据权利要求1所述的一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，其特征在于，所述S4中，悬浮细胞为K562细胞。

9.根据权利要求1所述的一种可同时实现单细胞靶向药物递送和实时探测的全光学方法，其特征在于，所述S4中，递送药物颗粒时的激光功率设置范围为20~50mW，捕获细胞时激光功率设置为20~40mW。