CN110521737A - 一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及植物病害防治技术领域，具体涉及一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物及其制备和用途。本发明公开了一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物，包括按重量份计的20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液、30‑50份银杏外种皮提取物以及1‑2份吐温80，该菌剂组合物用水稀释100‑150倍后用于防治链格孢菌所致植物病害。所述菌剂组合物的制备步骤包括：银杏外种皮提取物的提取、银杏内生浅紫链霉菌发酵液的制备、银杏内生浅紫链霉菌发酵液与银杏外种皮提取物的复配。本发明能有效降低链格孢菌所致植物病害的发病率和病情指数，提高相对抑制率，具有优良的防治效果，且拥有稳定、低毒、无残留、不污染环境等优点。

Description

一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物及其制备 方法和用途
技术领域
本发明涉及植物病害防治技术领域，具体涉及一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的复配剂及其制备和用途。
背景技术
链格孢属(Alternaria Nees)是全球分布最广的半知菌类真菌之一，该属的一些种可引起多种植物病害，如黑斑病、褐斑病、茎枯病、赤星病等等，严重危害农作物生产。其致病机理主要是机械穿透、分泌降解酶破坏寄主细胞细胞壁、产生真菌毒素作用于寄主细胞、利用信号转导途径介导致病。
目前，链格孢菌的防治手段主要包括化学防治、生物防治。常用的化学药剂主要包括多菌灵、甲基托布津、代森锰锌和百菌清等，能快速有效抑制链格孢菌，但长期使用化学农药不仅容易使病原菌产生抗药性，还会造成土壤、大气等环境污染、破坏生态平衡。生物防治是利用有益微生物和微生物代谢产物对农作物病害进行有效防治的方法，具有环保、低毒的优点，但由于许多生防菌功能物质、定殖规律和作用机理不明确，其普遍存在稳定性差，药效受环境因素影响大、使用技术要求严格等问题。目前而言，仍未见有大面积应用的能有效防治各类链格孢属真菌病害的生物农药报道。
发明内容
针对以上技术问题，本发明的目的是提供一种更加安全、无污染且可明显降低链格孢菌所致植物真菌病害发病率的防治菌剂组合物。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案为：
菌剂组合物包括20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液、30-50份银杏外种皮提取物、1-2份吐温80。
菌剂组合物制备方法及用途如下：
(1)银杏外种皮提取物的提取：将采集的银杏外种皮放在室内通风处阴干，在50-65℃的恒温干燥箱内干燥3-4h，用植物粉碎机粉碎后，所得粉末以1:3-10的固液比，在50-65℃下用乙醇回流提取，粗提取物用旋转蒸发仪减压浓缩，在50-65℃下蒸干乙醇溶剂，得银杏外种皮提取物。
(2)银杏内生浅紫链霉菌发酵液的制备：将银杏内生浅紫链霉菌接种于PDA固体培养基上，用无菌蒸馏水将孢子洗下，并配成浓度为3×107个孢子/mL的孢子悬浮液，将孢子悬浮液在PDB液体培养基内培养，接菌量为每100mL培养基接种5mL孢子悬浮液，滤去菌丝体得到发酵液。
(3)复配：将20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液、30-50份银杏外种皮提取物、1-2份吐温80的复配，得到该菌剂组合物。
(4)喷施：所述菌剂组合物用水稀释100-150倍，每隔10天喷施一次，共喷五次，每株50-70ml。
优选地，菌剂组合物包括20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液、40份银杏外种皮提取物和1-2份吐温80。
优选地，所述步骤(1)中的乙醇的体积分数为70％的，回流提取3次，每次5h。
优选地，所述步骤(2)中浅紫链霉菌在PDA固体培养基中的培养条件是28℃培养6天，在PDB液体培养基中的培养条件是28℃，170r/min条件下摇床振荡培养3d。
优选地，所述菌剂组合物用水稀释120倍施用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明中银杏内生浅紫链霉菌发酵液，包含一定数量的活菌孢子及其代谢产物。其活菌孢子可在植物体内大量繁衍和定殖，有效地排斥、阻止和干扰植物病原微生物在植物上的定殖与侵染，优先占领植物体内有限的生存位点，达到抑菌控病的效果。其产生的生长代谢产物，主要包括抗生素类、生长素类物质、水解酶类和易挥发性有机化合物等物质，这些代谢产物能有效抵抗病原菌的侵入、潜伏、扩展蔓延，提高植物抗病性。
其中生长素类物质能作为激发因子首先与植物细胞内受体进行分子识别，通过构型变化激活患病植物细胞内有关酶的活性，进一步修饰胞内基质，产生激活性和适应性信号分子，并通过对特殊基因的调节激发植物细胞的防卫反应，先后诱导植保素合成相关基因、水解酶和PR蛋白基因、富含羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)和木质素合成相关基因等防卫基因的表达。
本发明中银杏外种皮提取物成分包含银杏酚、银杏酸、银杏黄酮、银杏内酯、白果酚等，其中烷基酚酸类具有良好的杀虫杀菌效果，能破坏链格孢菌细胞结构，改变其细胞膜的通透性，抑制链格孢菌生长，达到防治目的。此外，本发明对银杏外种皮的利用，有效解决了原先被丢弃的新鲜银杏外种皮导致的环境污染、资源浪费的问题。
银杏内生浅紫链霉菌及其代谢物与银杏外种皮提取物两者作用靶标不一样，银杏内生浅紫链霉菌及其代谢物主要作用于诱导植物本身抗链格孢菌基因的表达，而银杏外种皮提取物作用在于通过酚酸的强氧化性作用直接杀死链格孢菌。两者复配能够全方位增强对链格孢菌导致的植物病害的防治效果，且具有稳定的防治效果。
银杏内生浅紫链霉菌发酵液与银杏外种皮提取物都属于天然产物，相比化学防治具有低毒、无残留、对有益生物安全，不易产生抗药性和不污染环境等优点，相比微生物防治具有高效、稳定等优点。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
银杏内生浅紫链霉菌购于北京华雨丰农生物科技有限公司，以下实施例在田间土壤栽培条件下进行，采用植物品种为辣椒、马铃薯。试验开始时，在健康辣椒、马铃薯植株上分别接种病原菌链格孢菌致病孢子(10CFU/mL、25mL)进行侵染，之后进行喷施菌剂组合物处理，在最后一次喷施后第5天调查植株发病率、病情指数和相对抑制率。
发病率＝(发病株数/总株数)×100％
病情指数＝∑[(各级病叶数×相对级数值)/调查总叶数×5]×100
病情分级：0级:全叶无病斑；1级:病斑占叶面积的1/20以下；2级：病斑占叶面积的1/20-1/10以内；3级：病斑占叶面积的1/10-1/4以内：4级；病斑占叶面积的1/4-1/2以内；5级：病斑占叶面积的1/2以上。
抑制率(％)＝[(对照病指－处理病指)/对照病指]×100％
实施例1
一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物，由以下物质组成：20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液；30份银杏外种皮提取物；1份吐温80。
上述一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物制备及施用，包括以下步骤：
(1)银杏外种皮提取物的提取：将采集的银杏外种皮放在室内通风处阴干，在60℃的恒温干燥箱内干燥4h；用植物粉碎机粉碎上述干燥银杏外种皮，过40目筛；将粉碎所得的银杏外种皮粉与体积分数为70％的乙醇以1:3的固液比在65℃下回流提取3次，每次5h，合并粗提取物；用旋转蒸发仪减压浓缩上述粗提取物，在55℃下蒸干乙醇溶剂，得银杏外种皮提取物。
(2)银杏内生浅紫链霉菌发酵液制备：将银杏内生浅紫链霉菌接种于PDA固体培养基上，28℃下培养6天，使菌落表面产生大量孢子，用无菌蒸馏水将孢子洗下，并配成浓度为3×107个孢子/mL的孢子悬浮液，将孢子悬浮液在PDB液体培养基内培养，接菌量为每100mL培养基接种5mL孢子悬浮液，在28℃，170r/min条件下摇床振荡培养3d，滤去菌丝体得到发酵液。
(3)复配：将20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液、30份银杏外种皮提取物、1份吐温80复配，得到该菌剂组合物。
(4)喷施：所述菌剂组合物用水稀释100倍，采用手动式喷雾器喷施，每隔10天喷一次，共喷五次，每株60ml。
实施例2
一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物，由以下物质组成：20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液；40份银杏外种皮提取物；2份吐温80。
上述一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物制备及施用，包括以下步骤：
(1)银杏外种皮提取物的提取：将采集的银杏外种皮放在室内通风处阴干，在50℃的恒温干燥箱内干燥3h；用植物粉碎机粉碎上述干燥银杏外种皮，过40目筛；将粉碎所得的银杏外种皮粉与体积分数为70％的乙醇以1:5的固液比在60℃下回流提取3次，每次5h，合并粗提取物；用旋转蒸发仪减压浓缩上述粗提取物，60℃下蒸干乙醇溶剂，得银杏外种皮提取物。
(2)银杏内生浅紫链霉菌发酵液制备：将银杏内生浅紫链霉菌接种于PDA固体培养基上，28℃下培养6天，使菌落表面产生大量孢子，用无菌蒸馏水将孢子洗下，并配成浓度为3×107个孢子/mL的孢子悬浮液，将孢子悬浮液在PDB液体培养基内培养，接菌量为每100mL培养基接种5mL孢子悬浮液，在28℃，170r/min条件下摇床振荡培养3d，滤去菌丝体得到发酵液。
(3)复配：将20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液、40份银杏外种皮提取物、2份吐温80复配，得到该菌剂组合物。
(4)喷施：所述菌剂组合物用水稀释100倍，采用手动式喷雾器喷施，每隔10天喷一次，共喷五次，每株60ml。
实施例3
一种防治植物真菌病害的菌剂复配剂，由以下物质组成：20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液；50份银杏外种皮提取物；1份吐温80。上述一种防治植物真菌病害的菌剂复配剂制备及施用，包括以下步骤：
(1)银杏外种皮提取物的提取：将采集的银杏外种皮放在室内通风处阴干，在50℃的恒温干燥箱内干燥4h；用植物粉碎机粉碎上述干燥银杏外种皮，过40目筛；将粉碎所得的银杏外种皮粉与体积分数为70％的乙醇以1:7的固液比在50℃下回流提取3次，每次5h，合并粗提取物；用旋转蒸发仪减压浓缩上述粗提取物，在60℃下蒸干乙醇溶剂，得银杏外种皮提取物。
(2)银杏内生浅紫链霉菌发酵液制备：将银杏内生浅紫链霉菌接种于PDA固体培养基上，28℃下培养6天，使菌落表面产生大量孢子，用无菌蒸馏水将孢子洗下，并配成浓度为3×107个孢子/mL的孢子悬浮液，将孢子悬浮液在PDB液体培养基内培养，接菌量为每100mL培养基接种5mL孢子悬浮液，在28℃，170r/min条件下摇床振荡培养3d，滤去菌丝体得到发酵液。
(3)复配：将20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液、50份银杏外种皮提取物、1份吐温80复配，得到该菌剂组合物。
(4)喷施：所述菌剂组合物用水稀释100倍，采用手动式喷雾器喷施，每隔10天喷一次，共喷五次，每株70ml。
实施例4与实施例1的区别在于所述复配菌剂组合物用水稀释120倍。
实施例5与实施例2的区别在于所述复配菌剂组合物用水稀释120倍。
实施例6与实施例3的区别在于所述复配菌剂组合物用水稀释120倍。
实施例7与实施例1的区别在于所述复配菌剂组合物用水稀释150倍。
实施例8与实施例2的区别在于所述复配菌剂组合物用水稀释150倍。
实施例9与实施例3的区别在于所述复配菌剂组合物用水稀释150倍。
对比例1中试验植株未采取任何防治措施。
对比例2与实施例1的区别在于菌剂组合物中不添加银杏内生浅紫链霉菌发酵液。
对比例3与实施例1的区别在于菌剂组合物茶中不添加银杏外种皮提取物。
不同处理下辣椒及马铃薯发病率、病情指数和相对抑制率变化如表1所示。
表1不同处理下辣椒及马铃薯发病率、病情指数和相对抑制率变化
由表1数据可知，与对比例1相比，实施例1-9在使用本发明的复配剂后，辣椒和马铃薯的发病率和病情指数均有所下降，其相对抑制率均在70％以上。20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液与40份银杏外种皮提取物组合的实施例2、5、8，显现出了比其他复配比例更好的防治效果。稀释倍数为120倍的实施例4、5、6也显现了出比其他稀释倍数更好的防治效果。其中20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液与40份银杏外种皮提取物组合，并稀释120倍的实施例5施用效果最佳，其在辣椒和马铃薯的防治过程中的相对抑制率分别高达85.4％、81.7％。
与实施例1相比，对比例2未添加浅紫链霉菌发酵液，辣椒和马铃薯的发病率和病情指数均高于实施例1，相对抑制率降低。与实施例1相比，对比例3未添加浅银杏外种皮提取物，辣椒和马铃薯的发病率和病情指数亦均高于实施例1，相对抑制率降低。这表明银杏内生浅紫链霉菌发酵液与银杏外种皮提取物复配，能显著增强药剂对链格孢菌所致植物病害的防治效果。
综上所述，本发明通过喷施银杏内生浅紫链霉菌发酵液与银杏外种皮提取物菌剂组合物，能有效降低链格孢霉所致植物病害的发病率和病情指数，具有较高的相对抑制率，拥有优良的防治效果。

Claims (9)

1.一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物，其特征在于，包括按重量份计的20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液，30-50份银杏外种皮提取物。
2.根据权利要求1所述的一种防治链格孢菌所致植物真菌病害的菌剂组合物，其特征在于，所述复配剂还包括1-2份吐温80。
3.根据权利要求1所述的菌剂组合物由20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液、40份银杏外种皮提取物、1-2份吐温80组成。
4.一种如权利要求1所述的菌剂组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)银杏外种皮提取物的提取：将采集的银杏外种皮阴干，在50-65℃的恒温干燥箱内干燥3-4h，粉碎并过筛，所得粉末以1:3-7的固液比，在50-65℃下用乙醇回流提取，粗提取物用旋转蒸发仪减压浓缩，在50-65℃下蒸干乙醇溶剂，得银杏外种皮提取物；
(2)银杏内生浅紫链霉菌发酵液的制备：将银杏内生浅紫链霉菌接种于PDA固体培养基上，用无菌蒸馏水将孢子洗下，并配成孢子悬浮液，将孢子悬浮液在PDB液体培养基内培养，滤去菌丝体得到发酵液；
(3)复配：将按重量份计的20份银杏内生浅紫链霉菌发酵液、30-50份银杏外种皮提取物、1-2份吐温80进行复配，得到所述菌剂组合物。
5.根据权利要求4所述菌剂组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的乙醇的体积分数为70％，回流提取3次，每次5h。
6.根据权利要求4所述菌剂组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中浅紫链霉菌在PDA固体培养基中的培养条件是28℃培养6天，在PDB液体培养基中的培养条件是28℃，170r/min条件下摇床振荡培养3天。
7.根据权利要求4所述菌剂组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中孢子悬浮液浓度为3×107个孢子/mL，接菌量为每100mL培养基接种5mL孢子悬浮液。
8.一种如权利要求1所述的菌剂组合物在防治链格孢所致植物病害中的用途。
9.一种如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述菌剂组合物用水稀释100-150倍，每隔10天喷施一次，共喷五次，每株植物50-70ml。
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