CN110496127A - 一种热休克因子1的抑制剂、其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种热休克因子1(HSF1)抑制剂及其应用。具体地，本发明提供了一种式I化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有优异的抑制HSF1活性和抗肿瘤的效果。本发明还提供了含有所述化合物的药物组合物以及其在抑制HSF1方面的应用。
Description
技术领域
本发明属于药物化学和药物治疗学领域，具体地，涉及式I化合物和其在抑 制HSF1活性方面的应用。
背景技术
中国是世界上癌症发病率较高的国家之一，每年新增307万例癌症患者， 也就是说，每10秒钟就有一个人确诊。据预测，至2030年中国每年癌症患者将 达到500万人，死亡的人数达到350万人，并摧毁更多人的经济状况，并由此带 来巨大的医疗压力。因此，自主研究开发新的具有抗癌效果的药物具有重要的 现实意义和科学价值。
热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)是调控热休克蛋白(heat shockproteins,HSPs)表达的转录因子。近年的研究发现肿瘤组织HSF1的表达上调， 呈组成型激活。HSF1作为转录因子能通过多条途径促进肿瘤的发生发展。HSF1 在化学致癌物等多种致癌因素诱导的细胞癌变中发挥重要作用。HSF1能促进促 癌基因表达；促进细胞形成多倍体；促进HSP表达以降低肿瘤细胞凋亡；促进 肿瘤细胞发生上皮-间质转分化(EMT)；参与肿瘤细胞糖脂代谢。
HSF1除了在肿瘤发生发展中发挥重要作用，还参与肿瘤耐药的发生。热休 克蛋白90(Heat shock protein 90,HSP90)抑制剂和蛋白酶体抑制剂是已进入临床 试验的新型多靶点抗肿瘤药物，虽然具有较好的抗肿瘤作用，但这两类化合物 能激活HSF1，诱导热休克蛋白(HSPs)合成，导致肿瘤耐药。此外，在发生阿霉 素抵抗的肿瘤细胞，HSF1以不依赖于HSP的方式促进多药耐药基因MDR的表 达。文献报道HSF1敲除几乎不影响非转化的细胞，HSF1缺陷型原代细胞和小 鼠在正常培养、饲养环境下仍然能存活。而敲除HSF1、或使用HSF1抑制剂能 抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡，而且对HSP90抑制剂或蛋白酶体抑制 剂诱导的肿瘤细胞凋亡具有增敏作用。
因此，以HSF1为靶点的抗肿瘤药物将具有以下优点：(1)具有直接的抗肿 瘤作用，能同时抑制多种HSP表达，作用更广泛，不易形成耐药；(2)与其它能 激活HSF1/HSP的抗肿瘤药物(如HSP90抑制剂、蛋白酶体抑制剂等)联合使用， 不但能增强疗效，还能防止肿瘤耐药发生。
但目前报道的HSF1抑制剂还不多。因此，本领域迫切需要开发有效的HSF1 活性抑制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一类抑制HSF1活性的化合物及其应用。
在本发明的第一方面，提供了一种式I化合物、其光学异构体、非消旋体、 外消旋体、或其药学上可接受的盐的用途，用于制备抑制热休克因子1(HSF1)活性 的组合物或制剂，
式中，
R1各自独立地为选自下组的基团：H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10 烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取 代的5-12元杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基 -C6-C10芳基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-5-12元杂芳基；
m为0、1或2；
R4各自独立地为H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或 未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或 未取代的5-8元杂环、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-芳基、取代或未取代的 -C1-C10亚烷基-杂芳基；
n为0、1或2；
R5各自独立地为H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或 未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或 未取代的5-8元杂环、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-芳基、取代或未取代的 -C1-C10亚烷基-杂芳基；
p为0、1、2、3或4；
R6为-(L1)q-NRaRb，其中，L1各自独立地为二价连接基团，q为0-8的整数；Ra 和Rb各自独立地为H、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷 基；或者Ra和Rb与相邻的N共同构成取代或未取代的4元-8元杂环基；
除非特别说明，所述的“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的 取代基取代(优选1-3个氢原子被取代)：卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6 环烷基、苯基、苄基、C1-C4烷氧基、-OH、-NH2。
在另一优选例中，L1选自下组：-C(Rc)2-、-CO-、-O-、-NRc-、-SO2-、-SO-； -CRc＝CRc-；其中，Rc为H或C1-C3烷基或C1-C3卤代烷基。
在另一优选例中，所述的各个R1各自独立地为选自下组的基团：取代或未取 代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环基。
在另一优选例中，所述的R1为取代或未取代的5-12元杂芳基，且所述的杂芳基 包括1、2、3或4个N杂环骨架原子。
在另一优选例中，所述的R1为取代或未取代的选自下组的基团：吡啶基、苯 并吡啶基。
在另一优选例中，所述的式I化合物具有如下式II所示的结构：
其中，所述的R2和R3各自独立地为选自下组的基团：H、取代或未取代的 C1-C10烷基；或R2和R3共同构成取代或未取代的5-8元杂环基。
在另一优选例中，p为0。
在另一优选例中，所述的式I化合物具有如下式III所示的结构：
在另一优选例中，R1选自下组：
在另一优选例中，R2R3N选自下组：
在另一优选例中，所述的式I化合物选自下组：
在另一优选例中，所述的组合物或制剂可抑制HSF1进入细胞核的活性。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂可下调HSF1在细胞核中的含量。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂对HSF1的抑制不依赖于腺苷酸活化蛋 白激酶A(AMPK)。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂独立地或额外地用于促进肿瘤细胞凋 亡。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂独立地或额外地用于增强HSP90抑制剂 和蛋白酶体抑制剂的抗肿瘤效应，或防止肿瘤发生耐药。
在本发明的第二方面，提供了一种式I化合物、其光学异构体、非消旋体、外 消旋体、或其药学上可接受的盐：
式中，
R1各自独立地为选自下组的基团：H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10 烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取 代的5-12元杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基 -C6-C10芳基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-5-12元杂芳基；
m为0、1或2；
R4各自独立地为H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或 未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或 未取代的5-8元杂环、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-芳基、取代或未取代的 -C1-C10亚烷基-杂芳基；
n为0、1或2；
R5各自独立地为H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或 未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或 未取代的5-8元杂环、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-芳基、取代或未取代的 -C1-C10亚烷基-杂芳基；
p为0、1、2、3或4；
R6为-(L1)q-NRaRb，其中，L1各自独立地为二价连接基团，q为0-8的整数；Ra 和Rb各自独立地为H、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷 基；或者Ra和Rb与相邻的N共同构成取代或未取代的4元-8元杂环基；
除非特别说明，所述的“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的 取代基取代(优选1-3个氢原子被取代)：卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6 环烷基、苯基、苄基、C1-C4烷氧基、-OH、-NH2；
且所述的化合物不为下式所示结构：
在另一优选例中，L1选自下组：-C(Rc)2-、-CO-、-O-、-NRc-、-SO2-、-SO-； -CRc＝CRc-；其中，Rc为H或C1-C3烷基或C1-C3卤代烷基。
在另一优选例中，所述的各个R1各自独立地为选自下组的基团：取代或未取 代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环基。
在另一优选例中，所述的R1为取代或未取代的5-12元杂芳基，且所述的杂芳基 包括1、2、3或4个N杂环骨架原子。
在另一优选例中，所述的R1为取代或未取代的选自下组的基团：吡啶基、苯 并吡啶基。
在另一优选例中，所述的式I化合物具有如下式II所示的结构：
其中，所述的R2和R3各自独立地为选自下组的基团：H、取代或未取代的 C1-C10烷基；或R2和R3共同构成取代或未取代的5-8元杂环基。
在另一优选例中，p为0。
在另一优选例中，所述的式I化合物具有如下式III所示的结构：
在另一优选例中，R1选自下组：
在另一优选例中，R2R3N选自下组：
在另一优选例中，所述的式I化合物选自下组：
在本发明的第三方面，提供了一种组合物或制剂，所述组合物或制剂包括本 发明第二方面所述的式I化合物、其光学异构体、非消旋体、外消旋体、或其药学 上可接受的盐作为有效成分。
在另一优选例中，所述的组合物或制剂为药物组合物。
在另一优选例中，所述药物组合物中含有0.001-99wt％，较佳地0.1-90wt％，更佳地1-80wt％的式I化合物或其药学上可接受的盐，按组合物的总重量计。
在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型为口服剂型，或注射剂。
在另一优选例中，所述的口服剂型包括片剂、胶囊剂、膜剂、颗粒剂等，还 包括缓释型或非缓释型剂型。
在另一优选例中，所述的药物组合物可包含有其它药物活性成分，如TRAIL。
在另一优选例中，所述的药物组合物还可包含有其它药物活性成分，其中包 括治疗肿瘤的活性成分如顺铂、紫杉醇，或抗肿瘤的抗体等。
在本发明的第四方面，提供了一种体外非治疗性的抑制HSF1活性的方法，包 括步骤：
(a)将本发明第二方面所述的式I化合物、其光学异构体、非消旋体、外消旋体， 或其药学上可接受的盐添加到细胞培养体系中，从而抑制HSF1的活性。
在另一优选例中，所述的细胞包括正常细胞或肿瘤细胞。
在另一优选例中，所述的细胞为哺乳动物细胞。
在另一优选例中，所述的细胞为人细胞。
在本发明的第五方面，提供了一种抑制HSF1活性的方法，所述的方法包括步 骤：
(i)给需要的对象施用本发明第二方面所述的式I化合物、其光学异构体、非消 旋体、外消旋体，或其药学上可接受的盐。
在另一优选例中，所述的对象包括人和非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括：啮齿动物(如大鼠、小鼠)、灵长 动物(如猴)。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例) 中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方 案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了Dorsomorphin抑制各种刺激诱导的热休克蛋白表达以及肿瘤细 胞内源性热休克蛋白表达。
图2显示了Dorsomorphin对热刺激诱导HSP70表达的抑制作用不依赖于 AMPK。
图3显示了Dorsomorphin抑制热刺激诱导的HSF1核转位、降低肿瘤细胞核 内HSF1水平。
图4显示了过表达组成型活化的HSF1逆转Dorsomorphin诱导的细胞凋亡。
图5显示了Dorsomorphin及其衍生物的结构。
图6显示了Dorsomorphin及其衍生物抑制热刺激诱导的HSP70表达及HSF1 核转位。
图7显示了Dorsomorphin衍生物抑制肿瘤细胞活性，促进肿瘤细胞凋亡。
图8显示了Dorsomorphin增强肿瘤细胞对HSP90抑制剂及蛋白酶体抑制剂 的敏感性并抑制其诱导热休克蛋白表达。
图9显示了Dorsomorphin在体内增强17-AAG的抗肿瘤作用，抑制17-AAG 诱导HSP70表达。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入地研究，经过大量筛选，首次意外地发现了式I 化合物可以显著地抑制HSF1的活性。实验表明，Dorsomorphin(式I化合物的一 种)可以通过不依赖AMPK的途径抑制HSF1的核转位，从而可以在肿瘤细胞抑 制多种外源刺激诱导的以及内源性的热休克蛋白表达，并且能够增强肿瘤细胞 对HSP90抑制剂及蛋白酶体抑制剂的敏感性，从而增强HSP90抑制剂的抗肿瘤 作用，抑制肿瘤组织表达HSP。
此外，通过设计改变Dorsomorphin的R1、R2和R3位置的基团，本发明人合 成了20多种衍生物，并检测了在其不同浓度下，其对热刺激Hela细胞诱导HSP70 mRNA表达的抑制作用；发现这些衍生物均能抑制热刺激诱导的HSP70表达， 并对其中抑制效应与Dorsomorphin相当的衍生物进行了进一步研究，发现它们 与Dorsomorphin一样，能抑制肿瘤细胞的活性，其抑制作用呈浓度依赖性，且 均能诱导肿瘤细胞凋亡。
在此基础上完成了本发明。
术语
基团
术语“C1-C10烷基”指具有1-10个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙 基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)。代表性实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁 氧基等。
术语“C1-C4烷氧基”指具有1-4个碳原子的直链或支链烷氧基，例如甲氧基、 乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、或类 似基团。
术语“环烷基”指3至10元全碳单环、全碳5元/6元或6元/6元稠合环或多环稠 合环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完 全共轭的π电子系统。环烷基实例有环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己 二烯基、金刚烷基、环庚烷基、环庚三烯基等。
术语“3-8元单环”指具有3-8元的单环(仅有一个环结构)，所述的单环可以是 饱和或不饱和环，如环烷基、环烯基、芳环。
术语“杂环”指环骨架上至少存在一个选自下组的杂原子的饱和或不饱和 环：N、S、O或P，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键。
术语“芳环”指具有共轭的π电子系统的芳环，包括碳环芳基、杂芳基。
术语“杂芳基”指具有1个杂原子作为环原子，其余的环原子为碳的芳基，杂 原子包括氧、硫、氮。所述环可以是5元或6元或7元环。杂芳基基团的实例包 括但不限于呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吡啶基、吡咯、N-烷 基吡咯基。
术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘。术语“卤代的”是指氟代的、氯代的、溴 代的、碘代的。
在本文中，除特别说明之处，术语“取代”指基团上的一个或多个氢原子被 选自下组的取代基取代：C1-C10烷基、C3-C10环烷基、C1-C10烷氧基、卤素、 羟基、羧基(-COOH)、C1-C10醛基、C2-C10酰基、C2-C10酯基、氨基、苯基； 所述的苯基包括未取代的苯基或具有1-3个取代基的取代苯基，所述取代基选 自：卤素、C1-C10烷基、氰基、OH、硝基、C3-C10环烷基、C1-C10烷氧基、 氨基。
式I化合物
如本文所用，术语“本发明化合物”、或“化合物”指式I所示的化合物、或其 消旋体、对应异构体、或其药学上可接受的盐。应理解，该术语还包括上述组 分的混合物。
式中，各基团的定义如上所述。
式中，
R1各自独立地为选自下组的基团：H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的 C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代 或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环基、取代或未取代的-C1-C10 亚烷基-C6-C10芳基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-5-12元杂芳基；
m为0、1或2；
R4各自独立地为H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代 或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代 或未取代的5-8元杂环、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-芳基、取代或未取代的 -C1-C10亚烷基-杂芳基；
n为0、1或2；
R5各自独立地为H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代 或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代 或未取代的5-8元杂环、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-芳基、取代或未取代的 -C1-C10亚烷基-杂芳基；
p为0、1、2、3或4；
R6为-(L1)q-NRaRb，其中，L1各自独立地为二价连接基团，q为0-8的整数； Ra和Rb各自独立地为H、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环 烷基；或者Ra和Rb与相邻的N共同构成取代或未取代的4元-8元杂环基；
除非特别说明，所述的“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的 取代基取代(优选1-3个氢原子被取代)：卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6 环烷基、苯基、苄基、C1-C4烷氧基、-OH、-NH2。
一类特别优选的式I化合物为实施例中所制备化合物，尤其是化合物1、2、 4和20。
在本发明中，还包括式I化合物的药学上可接受的盐。术语“药学上可接受 的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐 包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐 的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲 酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒 石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、 谷氨酸等酸性氨基酸。
热休克因子1(heat shock factor 1，HSF1)
热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)是调控热休克蛋白(heat shockproteins,HSPs)表达的转录因子。近年的研究发现肿瘤组织HSF1的表达上调， 呈组成型激活。HSF1作为转录因子能通过多条途径促进肿瘤的发生发展。HSF1 在化学致癌物等多种致癌因素诱导的细胞癌变中发挥重要作用。HSF1能促进促 癌基因表达；促进细胞形成多倍体；促进HSP表达以降低肿瘤细胞凋亡；促进 肿瘤细胞发生上皮-间质转分化(EMT)；参与肿瘤细胞糖脂代谢。
HSF1除了在肿瘤发生发展中发挥重要作用，还参与肿瘤耐药的发生。热休 克蛋白90(Heat shock protein 90,HSP90)抑制剂和蛋白酶体抑制剂是已进入临床 试验的新型多靶点抗肿瘤药物，虽然具有较好的抗肿瘤作用，但这两类化合物 能激活HSF1，诱导热休克蛋白(HSPs)合成，导致肿瘤耐药。此外，在发生阿霉 素抵抗的肿瘤细胞，HSF1以不依赖于HSP的方式促进多药耐药基因MDR的表 达。目前关于HSPs与肿瘤耐药也有较多报道。例如：HSP27在卵巢癌细胞中表 达升高参与肿瘤对顺铂的耐药，HSP27在非小细胞肺癌对厄洛替尼(erlotinib) 的耐药中也发挥作用。在联合化疗的乳腺癌病人，HSP70和HSP27在肿瘤耐药 的发生中发挥重要作用。HSP27和HSP70的表达与肿瘤细胞对阿霉素、替尼泊 甙、放线菌素D、喜树碱、足叶乙甙的耐药也存在相关性。
HSF1敲除几乎不影响非转化的细胞，HSF1缺陷型原代细胞和小鼠在正常 培养、饲养环境下仍然能存活。而敲除HSF1、或使用HSF1抑制剂能抑制肿瘤 细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡，而且对HSP90抑制剂或蛋白酶体抑制剂诱导的 肿瘤细胞凋亡具有增敏作用。因此，以HSF1为靶点的抗肿瘤药物将具有以下优 点：(1)具有直接的抗肿瘤作用，能同时抑制多种HSP表达，作用更广泛，不易 形成耐药；(2)与其它能激活HSF1/HSP的抗肿瘤药物(如HSP90抑制剂、蛋白酶 体抑制剂等)联合使用，不但能增强疗效，还能防止肿瘤耐药发生。
HSF1活性的调控主要有以下几个方面，第一，HSF1的表达，包括mRNA 水平和蛋白水平；第二，HSF1的磷酸化，HSF1活性受多种转录后修饰调控， 尤其是其磷酸化。第三，HSF1需形成三聚体入核，结合到DNA的启动子HSE 区域才能启动下游靶基因转录。本发明人发现Dorsomorphin及其衍生物不影响 肿瘤细胞HSF1在mRNA和蛋白水平的表达(图3A-B)，也不影响热刺激诱导的 HSF1磷酸化(图3B)，但能显著抑制热刺激诱导的HSF1核转位(图3C)。在肿瘤细 胞，Dorsomorphin能显著降低细胞核内的HSF1水平。
组合物和施用方法
在本发明中，所述的药物组合物可直接用于疾病治疗，例如，用于抗肿瘤 方面的治疗。在使用本发明药物制剂时，还可同时使用其他治疗剂，如抗肿瘤 的药物等。
本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明化合物以及 药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、 葡萄糖、水、甘油、乙醇、粉剂、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。
以药物组合物为例，本发明的组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐 水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊 之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片 剂和胶囊宜在无菌条件下制造。本发明的药物组合也可以被制成粉剂用于雾化 吸入。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/ 千克体重。此外，本发明HSF1抑制剂还可与其他治疗剂一起使用。
对于本发明的药物组合物，可通过常规的方式施用于所需的对象(如人和非 人哺乳动物)。代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、注射、雾化吸入等。
使用药物组合物时，是将安全有效量的药物施用于哺乳动物，其中该安全 有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克 体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量 还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的主要优点包括：
1)发现了已知药物Dorsomorphin可以作为HSF1抑制剂的新用途；
2)提供了一类可用于制备HSF1抑制剂的新型化合物；
3)提供了一类可以抑制与HSF1和HSP相关肿瘤耐药的化合物。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说 明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方 法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York： Cold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的条件，或按照《微生物： 实验手册》(James Cappuccino和Natalie Sherman编，Pearson Education出版社) 中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
如无特别说明，实施例所用的材料和试剂均为市售产品。
材料与方法
1.肿瘤细胞系
Hela：宫颈癌细胞系；HCT116：结肠癌细胞系；Huh-7：肝癌细胞系；PC-3： 前列腺癌细胞系。以上细胞系均购自中国科学院典藏细胞库。
2.细胞热刺激处理
将细胞从37℃，5％CO2培养箱中拿出，放入42℃，5％CO2培养箱1小时 进行热刺激，取出细胞抽提RNA，检测HSPs mRNA水平，或在热刺激1小时后 将细胞放回37℃，5％CO2培养箱，5小时后制备细胞裂解液，检测HSPs蛋白表 达。
3.RNA干扰
Hela细胞接种于12孔板中，24小时后更换新的预热DMEM完全培养基， 按照ThermoFisher公司Lipofectamine 3000产品使用说明书配si AMPKα及对 照siRNA，并转染细胞，siRNA终浓度为30nM。转染48小时后，通过Western blot 检测AMPK表达、或加入10μMDorsomorphin预处理细胞半小时，42℃刺激1 小时，再在37℃恢复5小时，检测HSP70表达。
4.质粒瞬时转染细胞
Huh 7细胞铺板于12孔板中，24小时后更换新的DMEM完全培养基，按 照ThermoFisher公司Lipofectamine 3000产品使用说明书配pcDNA3.1和 pcDNA3.1-HSF1Mix并转染细胞。24小时后制备细胞裂解液或核蛋白，通过 Western Blot检测HSF1的表达；或在转染24小时后加入7.5μM Dorsomorphin刺 激细胞12小时，通过Western Blot检测HSP70及cleaved PARP的表达。
5.RNA抽提和实时定量PCR
细胞或肿瘤组织中的总RNA使用Invitrogen公司的TRIzol试剂抽提。RNA抽 提后用Takara公司的DNaseⅠ消化，以去除DNA。取2μg RNA用M-MLV逆转录 酶将mRNA逆转录得到cDNA，通过美国Applied Biosystems公司(Foster City, CA)的SYBR Green PCR system进行扩增，以β-actin(mRNA)为内参进行mRNA 丰度分析。反应条件为50℃，2分钟；95℃10分钟；[95℃，15秒，60℃1分钟]x40。
实时定量PCR使用的引物如下：
| 引物名称 | 引物序列 | SEQ ID NO: |
| hHSF1-F | CCATGAAGCATGAGAATGAGGC | 1 |
| hHSF1-R | CTTGTTGACGACTTTCTGTTGC | 2 |
| hHSP70-F | TGTCGTCCAGCACCCAGGCCAGC | 3 |
| hHSP70-R | GCTCTTGTTCAGGTCGCGCCCG | 4 |
| hHSP47-F | CGCCATGTTCTTCAAGCCA | 5 |
| hHSP47-R | CATGAAGCCACGGTTGTCC | 6 |
| hHSP27-F | GGCATTTCTGGATGTGAGCC | 7 |
| hHSP27-R | AGCAGGCAGGACATAGGTGC | 8 |
| hActin-F | GCTGCATTTAGTGGCCTCATT | 9 |
| hActin-R | GCAAGGCATAACCTGATGTGG | 10 |
6.Western Blot
用含cocktail蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液处理细胞或组织，离心去除细胞 碎片，测蛋白质浓度。取等量的蛋白(10～20μg)与4×蛋白上样缓冲液混合上样， 在恒压(80-120V)下进行SDS-PAGE电泳(凝胶厚度1.5mm，积层胶5％，分离胶 10％)，再用湿转法将蛋白质转移到PVDF膜上。用含5％脱脂奶粉的TBST溶液 封闭PVDF膜1h，然后加入一抗，4℃结合过夜。用TBST室温洗膜3次，每次5 min。加入相应的二抗于室温结合1～2h，再用TBST洗膜3次，用Thermo Scientific公司的SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate检测系统显 色。
7.细胞活性检测
采用CCK8法检测细胞活力。按照供应商(同仁化学公司)提供的方法进行。
8.裸鼠成瘤实验
HCT116细胞用无血清McCoy’s 5A培养基配制成细胞悬液，75μL(4x106个 细胞)细胞悬液与等体积Matrigel混合后接种于6周龄BALB/c(nu/nu)雄性裸鼠右 后腿外侧皮下组织，待肿瘤体积达到250mm3左右，选肿瘤大小较为一致的小 鼠，随机分为4组，分别为对照组，17-AAG组，Dorsomorphin(DM)组， 17-AAG+DM组。17-AAG采用腹腔注射，剂量为50mg/kg(溶解方法：5％DMSO+ 玉米油)，每周注射3次。DM组进行瘤体内注射，剂量为10mg/kg(用PBS溶解)， 每周注射2次。在对应的时间点，对照组小时腹腔及右后腿外侧皮下分别注射 相应的溶剂，17-AAG组右后腿外侧皮下注射PBS，DM组腹腔注射含DMSO的 玉米油。每2天测量肿瘤大小，称小鼠体重，计算肿瘤体积：V＝a2x b/2，(a： 瘤体宽度，b：瘤体长度)。3周后处死动物，取肿瘤组织，检测HSP70表达。
9.统计学分析
实验结果均以平均值±SD或平均值±SE表示，两组之间的差别用双尾非配 对t检验进行统计分析，当P值小于0.05时认为有统计学差异，P值小于0.01时认 为有极显著差异。
实施例1：Dorsomorphin在肿瘤细胞抑制多种外源刺激诱导的以及内源性 的热休克蛋白表达
首先，通过在宫颈癌细胞系Hela和结肠癌细胞系HCT116检测Dorsomorphin 对热刺激诱导热休克蛋白表达的影响，可以发现Dorsomorphin能浓度依赖性地 抑制热刺激诱导多种热休克蛋白(包括HSP70,HSP47和HSP27)在mRNA水平的 表达(图1A)，并且证实Dorsomorphin能浓度依赖性地抑制热刺激诱导Hela、 HCT116和前列腺癌细胞系PC3在蛋白水平表达HSP70(图1B)。
其次，以HSP70为热休克蛋白的代表，本发明人检测了Dorsomorphin对其 它刺激物诱导热休克蛋白表达的影响，发现Dorsomorphin也能抑制HSP90抑制 剂Benzisoxazoles(Benz.)、蛋白酶体抑制剂MG132和重金属镉(CdCl2)诱导的 HSP70表达(图1C)。
我们进一步观察了Dorsomorphin对肿瘤细胞内源性热休克蛋白表达的影 响，发现Dorsomorphin能浓度依赖性和时间依赖性地在mRNA水平和蛋白质水 平抑制HSP70表达(图1D-F)。
由此可见，Dorsomorphin不但能抑制多种外源刺激诱导的热休克蛋白表达， 而且能抑制内源性热休克蛋白表达。
实施例2：Dorsomorphin对热刺激诱导HSP70表达的抑制作用不依赖于 AMPK.
Dorsomorphin是常用的AMPK抑制剂。本发明人通过RNA干扰敲减 AMPKα(图2A)，发现AMPK敲减对于Dorsomorphin抑制热刺激诱导HSP70表达 没有影响(图2B)，说明AMPK不参与Dorsomorphin对HSP70蛋白表达的抑制。
实施例3：Dorsomorphin抑制HSF1核转位
HSPs的表达主要受转录因子HSF1调控，而HSF1活性的调控主要有以下几 个方面，第一，HSF1的表达，包括mRNA水平和蛋白水平；第二，HSF1的磷 酸化，HSF1活性受多种转录后修饰调控，尤其是其磷酸化。第三，HSF1需形 成三聚体入核，结合到DNA的启动子HSE区域才能启动下游靶基因转录。
实验结果显示，Dorsomorphin不影响肿瘤细胞HSF1在mRNA和蛋白水平的 表达(图3A-B)，也不影响热刺激诱导的HSF1磷酸化(图3B)，但能显著抑制热刺 激诱导的HSF1核转位(图3C)。在肿瘤细胞，Dorsomorphin能显著降低细胞核内 的HSF1水平。
这些结果提示Compond C对HSPs表达的抑制可能是通过抑制HSF1核转位 导致的。
实施例4：过表达组成型活化的HSF1逆转Dorsomorphin诱导的细胞凋亡
通过观察Dorsomorphin对肿瘤细胞活性的影响，本发明人发现其能浓度依 赖性的抑制Hela和HCT116细胞的活性(图4A)、诱导肿瘤细胞凋亡(图4B)。在本 发明中，进一步发现在肿瘤细胞转染组成型活化的HSF1能逆转Dorsomorphin对 肿瘤细胞HSP70蛋白表达的抑制作用、以及对肿瘤细胞的促凋亡作用(图4C)， 说明Dorsomorphin对肿瘤细胞的促凋亡作用被逆转。
结合实施例3的结果，说明Dorsomorphin通过抑制HSF1核转位抑制HSP70 的表达，从而促进肿瘤细胞凋亡。
实施例5：Dorsomorphin作为HSF1抑制剂的构效关系研究
在本发明中，进一步合成了Dorsomorphin衍生物，进一步探讨其发挥抑制 热休克蛋白表达及抗肿瘤作用的构效关系。通过设计改变Dorsomorphin的R1、 R2和R3位置的基团，合成了20种衍生物(图5,表1)。其中R1替代Dorsomorphin 骨架环吡唑并[1，5-a]嘧啶并环上3位的4-吡啶基，R1替代基团有3种，分别是 3-吡啶基、5-(2-甲氧基)吡啶基、4-异喹啉基。R2R3N替代支链上的1-哌啶基， R2R3N分别是二甲胺基、二乙胺基、3-甲基-哌啶基、2-甲基-吡咯基和1-吖丁啶 基。Dorsomorphin骨架环吡唑并[1，5-a]嘧啶并环上3位的4-吡啶基及R1的3种替 代基团分别与5种R2R3N基团组合形成20种Dorsomorphin衍生物(图5,表1)。
我们检测了不同浓度的Dorsomorphin及其衍生物对热刺激Hela细胞诱导HSP70mRNA表达的抑制作用，发现这些衍生物对热刺激诱导的HSP70表达均 具有抑制作用。在维持化合物原R1基团(4-吡啶基)不变的情况下，当R2R3N变成 二甲胺基(1#衍生物)、二乙胺基(2#衍生物)、2-甲基-吡咯基(4#衍生物)时，这 些化合物抑制HSP70表达的IC50接近或低于Dorsomorphin(表1，图6A)；当R2R3N由其它3种基团替代时，对热刺激诱导HSP70表达的抑制作用都比 Dorsomorphin弱(表1)。当R1基团由3-吡啶基、5-(2-甲氧基)吡啶基替代时，无论 R2R3N由哪种基团替代，这些衍生物(6#-15#)抑制热刺激诱导HSP70表达的IC50 都高于Dorsomorphin(表1)，说明Dorsomorphin结构上的R1基团对Dorsomorphin 发挥抑制作用的效应非常重要。当R1基团由4-异喹啉基替代时，只有R2R3N为 1-吖丁啶基基时(20#衍生物)才对HSP70mRNA的表达有较好的抑制作用，而 R2R3N为其余4基团替代都降低衍生物的抑制作用(表1，图6A)。
综上所述，Dorsomorphin的R1基团(4-吡啶基)，在其抑制热刺激诱导的HSP 表达中发挥重要作用；当R1基团为4-异喹啉基替代，同时R2R3N为1-吖丁啶基 时，对热刺激诱导的HSP表达也有较好的抑制作用。
本发明人接着检测了1#、2#、4#、20#这四个衍生物在蛋白水平对热刺激诱 导HSP表达的影响，结果表明这四个衍生物都能显著抑制热诱导的HSP70蛋白 表达，其抑制作用呈浓度依赖性(图6B)。本发明人进一步发现这四个衍生物在 Hela细胞都能抑制热刺激诱导HSF1入核(图6C)。本发明人进一步观察了1#、2#、 4#、20#衍生物对肿瘤细胞活性的影响，发现这些衍生物与Dorsomorphin一样， 能抑制肿瘤细胞的活性，其抑制作用呈浓度依赖性(图7A，7B)，并且这几个 衍生物也都能诱导肿瘤细胞凋亡(图7C)。这些结果说明1#、2#、4#、20#衍生物 与Dorsomorphin一样，通过抑制HSF1核转位而抑制热休克蛋白表达、诱导肿瘤细胞凋亡。
表1.Dorsomorphin(DM)及其衍生物对热刺激诱导HSP70表达的影响
Hela细胞用不同浓度的Dorsomorphin或其衍生物预处理30分钟，再在42℃ 刺激1小时，通过实时定量PCR检测HSP70mRNA表达。用SPSS软件计算 Dorsomorphin及其衍生物抑制HSP70表达的IC50.
实施例6：Dorsomorphin增强肿瘤细胞对HSP90抑制剂及蛋白酶体抑制剂 的敏感性并抑制这些化合物诱导热休克蛋白
HSP90抑制剂和蛋白酶体抑制剂是两类多靶点抗肿瘤药物，目前有多个药 物正在进行II期或III期临床试验。虽然这两类化合物有较好的抗肿瘤作用，但 能激活HSF1而诱导HSPs表达，而HSPs具有抗凋亡作用，这样不但消弱了这两 类化合物的抗肿瘤作用，而且导致肿瘤耐药性的产生。
鉴于Dorsomorphin能通过抑制HSF1核转位而抑制HSPs表达、诱导肿瘤细胞 凋亡，Dorsomorphin能抑制HSP90抑制剂及蛋白酶体抑制剂诱导的HSP70表达， 本发明人进一步观察了Dorsomorphin对HSP90抑制剂17-AAG以及蛋白酶体抑 制剂MG132抗肿瘤作用的影响。通过选用较低浓度的Dorsomorphin与不同浓度 17-AAG或MG132联合处理肿瘤细胞，结果显示，单独使用Dorsomorphin或单独 使用17-AAG、MG132，均能轻度抑制Hela细胞及HCT116细胞的活性。 Dorsomorphin和17-AAG或MG132联合使用能显著增强17-AAG、MG132对肿瘤 细胞活性的抑制作用(图8A，8C，8E,8G)。
并且，通过用Western blot方法检测Dorsomorphin和17-AAG或MG132联合 使用对肿瘤细胞凋亡的影响，可以发现联合用药组肿瘤细胞的cleaved PARP明 显高于17-AAG或MG132单独使用细胞(图8B,8D,8F,8H)，说明Dorsomorphin增 强了17-AAG及MG132的促凋亡作用。
本实施例中，还发现虽然17-AAG、MG132能显著促进HSP70表达，但与Dorsomorphin联合使用后肿瘤细胞HSP70表达明显降低(图8B,8D,8F,8H)。这 些结果说明Dorsomorphin不仅能提高肿瘤细胞对HSP90抑制剂和蛋白酶体抑制 剂的敏感性，增强这两类药物的抗肿瘤作用，而且能抑制它们对热休克蛋白的 诱导，有可能抑制肿瘤细胞对这两类药物产生耐药。
实施例7：Dorsomorphin增强HSP90抑制剂的抗肿瘤作用，抑制肿瘤组织 表达HSP
本实施例中，进一步利用裸鼠荷瘤模型观察Dorsomorphin是否能增强 17-AAG的抗肿瘤作用并抑制其诱导HSP70表达。用HCT116细胞使接种至裸鼠 皮下成瘤，发现与对照组相比，单独使用较低剂量Dorsomorphin或17-AAG在21 天内对肿瘤的生长抑制作用不强(图9A)，而Dorsomorphin与17-AAG联合使用， 能明显抑制肿瘤生长，瘤体体积明显小于对照组和单独用药组(图8A)，说明 Dorsomorphin的确可以增强17-AAG的抗肿瘤疗效。
通过进一步检测了肿瘤组织HSP70的表达，结果显示17-AAG组小鼠肿瘤组 织HSP70表达显著升高，Dorsomorphin与17-AAG共用能显著抑制HSP70表达(图 8B)。Dorsomorphin单独使用或与17-AAG合用对小鼠的体重没有显著影响(图 8C)。
这些结果说明Dorsomorphin能增强肿瘤细胞对HSP90抑制剂的敏感性，通 过抑制17-AAG诱导HSP70表达不仅增强17-AAG的抗肿瘤作用，而且有可能抑 制肿瘤发生耐药。
实施例8：Dorsomorphin及其衍生物的制备
本发明中，对于Dorsomophin的制备，采用本领域已知的方法。以2-氯甲基 吡啶盐酸盐(2)为原料，经氰基化、缩合和环合反应制得4-(4-吡啶基)-1H- 吡唑-5-胺(5)；以对甲氧基苯乙酸(6)为原料，经三步反应制得中间体2-(4- 甲氧基苯基)丙二醛(8)；5与8经缩合反应制得化合物6-(4-甲氧基苯基)-3- (4-吡啶基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(9)；9经脱甲基和成醚反应合成Dorsomorphin (1)，总收率24％，其结构经MS(ESI)确证。
其反应流程如下所示：
具体步骤包括：
(1)4-吡啶乙腈(3)的合成
在干燥的三颈瓶中依次加入2 1.0g(6.0mmol)、N-甲基吡咯烷酮(NMP) 5ml和氰化亚铜0.64g(7.2mmol)，氮气保护，加热至130℃回流反应3h(TLC 监测)。加浓氨水15mL淬灭反应，过滤，滤液加水50ml，用乙酸乙酯(3×30mL) 萃取，合并有机相，用饱和食盐水30mL洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减 压蒸除乙酸乙酯，所得油状物经硅胶柱层析[洗脱剂：A＝V(PE):V(EtOAc)＝10:1] 纯化得淡紫色固体3 0.63g，收率88％；MS(ESI)m/z：117.1{[M-H]+}。
(2)3-二甲氨基-2-吡啶丙烯腈(4)的合成
在干燥的茄形瓶中加入3 0.5g(4.0mmol)和DMF 5mL，搅拌至溶解；加入 N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛8mL，加热至110℃反应5h(TLC监测)。冷却至 室温，加水30mL，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，合并有机层，用饱和食盐水 洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压除去有机相，所得油状物经硅胶柱层 析(洗脱剂：A＝40:1)纯化得棕色固体4 0.70g，收率95％；MS(ESI)m/z： 174.1{[M-H]+}。
(3)5的合成
在干燥的茄形瓶中依次加入4 173mg(1.0mmol)，无水乙醇2mL和水0.3mL， 搅拌均匀，加入80％的水合肼125mg(2.0mmol)和盐酸联氨140mg(2.0mmol)， 加热至110℃反应5h。冷却至室温，加入饱和Na2CO3溶液至反应液呈碱性，用 混合溶剂[V(EtOAc)：V(EtOH)＝3：1](3×5mL)萃取，合并有机相，经无水硫 酸钠干燥，过滤，滤液减压除去溶剂得红色固体5144mg，收率90％；MS(ESI) m/z：161.1{[M-H]+}。
(4)2-(4-甲氧基苯基)丙二醛(8)的合成
在干燥的茄形瓶中加入无水DMF 3.8mL，降温至5～10℃，搅拌下缓慢滴加 POCl35mL，滴毕，升温至室温反应1h，加入对甲氧基苯乙酸(6)0.5g(3mmol)， 加热至90～95℃反应4h。冷却至室温，静置过夜，将反应液倒入碎冰10g中，搅 拌，滴加高氯酸钠1.4g的饱和水溶液(白色固定生成)，过滤，滤饼用水(2×1mL) 洗涤，干燥得(Z)-N-(3-(二甲基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)亚烯丙基)-N- 甲基甲铵(7)0.67g。
在干燥茄形瓶中加入7 0.67g，NaOH 0.23g和水6mL，升温至90℃反应 15min，待7溶解。冷却至室温，用10％盐酸调节反应液pH至5(白色沉淀产生)， 过滤，滤饼经干燥得白色固体8 0.44g，收率85％；MS(ESI)m/z：179.0{[M-H]+}。
(5)9的合成
在干燥的茄形瓶中依次加入5 0.5g(3.1mmol)，8 0.55g(3.1mmol)，无 水乙醇7.5mL和冰醋酸5mL，加热至110℃反应6h。冷却至室温(析出固体)， 过滤，滤饼用少量乙醇洗涤，干燥得淡褐色固体9 0.45g，收率54％；MS(ESI)m/z： 303.2{[M-H]+}。
(6)10的合成
在干燥的茄形瓶中加入9 0.5g(1.66mmol)和45％的冰醋酸-氢溴酸溶液 6mL，加热至130℃反应10min。冷却至室温，加入乙酸乙酯10mL，搅拌10min (固体析出)，过滤，滤饼用少量乙酸乙酯洗涤，干燥得淡黄色固体10 0.42g， 收率88％；MS(ESI)m/z：289.2{[M-H]+}。
(7)1的合成
在干燥的茄形瓶中加入10 0.5g(1.74mmol)和DMF 5mL，依次加入60％的 氢化钠0.02g(0.5mmol)，1-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐0.32g(1.74mmol)，氮 气保护，升温至45℃反应12h。加水30mL，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取，合并 有机相，用饱和食盐水30mL洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压蒸除乙酸 乙酯，所得油状物经硅胶柱层析[洗脱剂：V(CH2Cl2)：V(CH3OH)＝44：3]纯化 得类白色固体1 0.55g，收率80％；MS(ESI)m/z：400.2{[M-H]+}。
对于Dorsomorphin的衍生物的制备方法，除了将第一步反应的2替换为下表 2所述的R1-Cl和将最后一步反应的1-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐替换为下表2所示 的R2R3N-Cl盐酸盐之外，其余所需原料、试剂及制备方法同上，其结果通过 MS(ESI)确证。
表2
在本发明中，对Dorsomorphin及其衍生物制备的各个步骤的反应参数没有 特别限制。本领域技术人员可以根据不同的最终预期的化合物，对反应式中涉 及的各步骤反应的反应物、反应条件等适当作出调整。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献 被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后， 本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申 请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 中国科学院上海生命科学研究院
<120> 一种热休克因子1的抑制剂、其制备方法和应用
<130> P2018-0509
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 1
ccatgaagca tgagaatgag gc 22
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 2
cttgttgacg actttctgtt gc 22
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 3
tgtcgtccag cacccaggcc agc 23
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 4
gctcttgttc aggtcgcgcc cg 22
<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 5
cgccatgttc ttcaagcca 19
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 6
catgaagcca cggttgtcc 19
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 7
ggcatttctg gatgtgagcc 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 8
agcaggcagg acataggtgc 20
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 9
gctgcattta gtggcctcat t 21
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 10
gcaaggcata acctgatgtg g 21
Claims (10)
1.一种式I化合物、其光学异构体、非消旋体、外消旋体、或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于制备抑制热休克因子1(HSF1)活性的组合物或制剂，
式中，
R1各自独立地为选自下组的基团：H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-C6-C10芳基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-5-12元杂芳基；
m为0、1或2；
R4各自独立地为H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-芳基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-杂芳基；
n为0、1或2；
R5各自独立地为H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-芳基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-杂芳基；
p为0、1、2、3或4；
R6为-(L1)q-NRaRb，其中，L1各自独立地为二价连接基团，q为0-8的整数；Ra和Rb各自独立地为H、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基；或者Ra和Rb与相邻的N共同构成取代或未取代的4元-8元杂环基；
除非特别说明，所述的“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代(优选1-3个氢原子被取代)：卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6环烷基、苯基、苄基、C1-C4烷氧基、-OH、-NH2。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的各个R1各自独立地为选自下组的基团：取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环基。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的式I化合物具有如下式II所示的结构：
其中，所述的R2和R3各自独立地为选自下组的基团：H、取代或未取代的C1-C10烷基；或R2和R3共同构成取代或未取代的5-8元杂环基。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的式I化合物具有如下式III所示的结构：
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的式I化合物选自下组：
6.一种式I化合物、其光学异构体、非消旋体、外消旋体、或其药学上可接受的盐：
式中，
R1各自独立地为选自下组的基团：H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-C6-C10芳基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-5-12元杂芳基；
m为0、1或2；
R4各自独立地为H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-芳基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-杂芳基；
n为0、1或2；
R5各自独立地为H、卤素、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的5-8元杂环、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-芳基、取代或未取代的-C1-C10亚烷基-杂芳基；
p为0、1、2、3或4；
R6为-(L1)q-NRaRb，其中，L1各自独立地为二价连接基团，q为0-8的整数；Ra和Rb各自独立地为H、取代或未取代的C1-C10烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基；或者Ra和Rb与相邻的N共同构成取代或未取代的4元-8元杂环基；
除非特别说明，所述的“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代(优选1-3个氢原子被取代)：卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6环烷基、苯基、苄基、C1-C4烷氧基、-OH、-NH2；
且所述的化合物不为下式所示结构：
7.如权利要求6所述的化合物，其光学异构体、非消旋体、外消旋体、或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的式I化合物选自下组：
8.一种组合物或制剂，其特征在于，所述组合物或制剂包括权利要求6所述的式I化合物、其光学异构体、非消旋体、外消旋体、或其药学上可接受的盐作为有效成分。
9.一种体外非治疗性的抑制HSF1活性的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)将权利要求6所述的式I化合物、其光学异构体、非消旋体、外消旋体，或其药学上可接受的盐添加到细胞培养体系中，从而抑制HSF1的活性。
10.一种抑制HSF1活性的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：
(i)给需要的对象施用权利要求6所述的式I化合物、其光学异构体、非消旋体、外消旋体，或其药学上可接受的盐。
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| CN104768548A (zh) * | 2012-09-28 | 2015-07-08 | 范德比尔特大学 | 作为选择性bmp抑制剂的稠合杂环化合物 |
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