CN110487921A - 一种多兽残化合物的快速筛查方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多兽残化合物的快速筛查方法，包括如下步骤：S1：样品提取，将已经搅碎的样品置于离心管中，依次加入内标溶液、盐包和有机溶剂，依次进行涡旋混匀、超声处理和离心处理，取上清液，待净化；S2：样品净化，将步骤S1中的上清液转移至装有基质分散固相萃取填料的离心管中，依次进行涡旋混匀和离心处理，然后取上清液转移至玻璃试管中，在水浴中氮吹至干，再用有机溶剂定容，涡旋混匀后过滤，然后上机待测定。本发明提供的多兽残化合物的快速筛查方法，可同时对100种兽药同时筛查、定性和净化，前处理简单、快速，可满足目前实验室对兽药先筛查、后确证的需要。
Description
技术领域
本发明涉及一种兽残化合物的筛查方法，尤其涉及一种多兽残化合物的快速筛查方法。
背景技术
兽药在畜牧业发展中具有不可替代的作用，因其可以促进生长、提高饲料转化率、防治各类疾病、降低死亡率、提高动物产品品质而被广泛使用。农业部发布了《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单，农业部公告193号》、《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录，农业部公告176号》、《动物性食品中兽药最高残留限量，农业部公告235号》和《禁止在饲料和动物饮水中使用的物质，农业部公告1519号》，公布了禁用兽药清单。这些药物会引起敏感人群中毒，积蓄毒性，损害人体健康，给人类带来危害。例如，2009年的雨润事件以及2011年的双汇瘦肉精事件都是由禁用的β-受体激动剂引发的；近两年水产品中也多次发现孔雀石绿、呋喃、恩诺沙星等药物残留，2015年日本发现中国出口的小黄鱼中含有恩诺沙星残留，受到日本的检查。
目前对于同类兽药如β-受体激动剂、磺胺类、沙星类兽药的检测，国内外都已建立了相对成熟的检测方法、国家标准，但是对于涉及β-受体激动剂、激素类、玉米赤霉醇类、三苯甲烷、苯胺醇类等禁用兽药，以及磺胺类、沙星类、喹诺酮类、四环素类、氟喹诺酮类等限用药物同时快速筛查方法标准，目前尚没有建立相关国家标准；再次，随着科技的发展，欧、美等发达国家出现了不少新型兽药，如莫奈太尔等，我国目前也还没有制定相关法律。
现有多残留检测方法包括《SN/T 2624-2010动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》、《SN/T 2443-2010进出口动物源性食品中多种酸性和中性药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》和《SN/T 3235-2012出口动物源食品中多类禁用药物残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法》等，上述方法涉及的待测化合物，都仅涉及碱性、酸性和中性、禁用化合物等部分药物的检测。现有文献涉及的方法《高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中8类38种兽药残留》、《超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法同时快速检测水产品中37种兽药残留》和《快速高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中5类33种药物残留》涉及的化合物较少，而且基本针对限用药物的筛查。
食品基质多残留质谱快筛方法，是在高定性能力上实现快速检测的一种方式，能够有效提高分析检测的效率，同时保证定性的准确性。目前果蔬基质的多农药残留的质谱快筛的方法已应用较为广泛，在多兽药残留领域，也有与多农残检测相似的需求。但是多兽药残留检测相比多农残来说，基质组成更为复杂，限量要求更低，目前缺乏有效的快速筛查方法。虽然有一些已发表的文献，但是在检测基质、和多兽残种类上相对单一。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种多兽残化合物的快速筛查方法，解决当前筛查方法检测基质单一和兽残种类单一的问题
本发明为解决上述技术问题而采用的技术方案是提供一种多兽残化合物的快速筛查方法，包括如下步骤：S1：样品提取，将已经搅碎的样品置于离心管中，依次加入内标溶液、盐包和有机溶剂，依次进行涡旋混匀、超声处理和离心处理，取上清液，待净化；S2：样品净化，将步骤S1中的上清液转移至装有基质分散固相萃取填料的离心管中，依次进行涡旋混匀和离心处理，然后取上清液转移至玻璃试管中，在水浴中氮吹至干，再用有机溶剂定容，涡旋混匀后过滤，然后上机待测定。
进一步的，所述步骤S1中的内标溶液为同位素化合物溶液。
进一步的，所述步骤S1中有机溶剂为含有体积比0.1％甲酸的乙腈。
进一步的，所述步骤S1中涡旋混匀、超声处理和离心处理的时间均为5分钟。
进一步的，所述步骤S1和S2中离心处理的速度均为4000转每分钟。
进一步的，所述步骤S2中涡旋混匀和离心处理的时间均为5分钟。
进一步的，所述步骤S2中水浴的温度为20℃-40℃。
进一步的，所述步骤S2中有机溶剂为体积比为1:1的乙腈和水溶液。
进一步的，所述步骤S2中过滤过程使用的是0.22μm的有机相滤膜。
进一步的，所述基质分散固相萃取填料为C18或活性炭；对于动物组织，每毫升提取液加入2-10mg的C18；对于蛋和蛋黄，每毫升提取液加入10-20mg的C18；对于动物肝脏，每毫升提取液加入1-5mg的活性炭。
本发明对比现有技术有如下的有益效果：本发明提供的多兽残化合物的快速筛查方法，可以对100种兽药，同时进行净化、检测；前处理简单、快速，可以检测的化合物种类多；将适应的基质范围增加动物源性基质的80％，包括：肉、内脏、鱼和虾；将适应的兽药残留种类增加到兽药残留监控物质的90％，包括：β-受体激动剂、激素类、玉米赤霉醇类、三苯甲烷、苯胺醇类等禁用化合物，以及磺胺类、四环素类、氟喹诺酮类、大环内酯类等限用化合物。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
本发明提供的一种多兽残化合物的快速筛查方法，包括如下步骤：
S1：样品提取，将已经搅碎的样品置于离心管中，依次加入内标溶液、盐包和有机溶剂，依次进行涡旋混匀、超声处理和离心处理，取上清液，待净化；
所述内标溶液为同位素化合物溶液，所述有机溶剂为含有体积比0.1％甲酸的乙腈，所述涡旋混匀、超声处理和离心处理的时间均为5分钟，所述离心处理的速度为4000转每分钟。
S2：样品净化，将步骤S1中的上清液转移至装有基质分散固相萃取填料的离心管中，依次进行涡旋混匀和离心处理，然后取上清液转移至玻璃试管中，在水浴中氮吹至干，再用有机溶剂定容，涡旋混匀后过滤，然后上机待测定。所述基质分散固相萃取填料为C18或活性炭。C18根据基质中脂肪和蛋白质含量的多少，每mL提取液加入2-20mg范围的C18，用于净化。比如动物组织，主要是肌肉，每mL提取液加入2-10mg范围的C18比较适宜；蛋，蛋黄的脂肪含量较高，每mL提取液加入10-20mg范围的C18比较适宜。活性炭根据基质中色素含量的多少，每mL提取液加入0-5mg范围的活性炭，用于净化。虾肉等色素含量低的基质，可以不添加活性炭净化。动物肝脏提取后如果颜色较深，每mL提取液加入1-5mg范围的活性炭比较适宜。
所述涡旋混匀和离心处理的时间均为5分钟，所述离心处理的速度为4000转每分钟，所述水浴的温度为40℃以下，优选为20℃-40℃；所述有机溶剂为体积比为1:1的乙腈和水溶液，所述过滤过程使用的是0.22μm的有机相滤膜。
在实施例中，样品提取时，准确称取2.0g(精确至0.01g)已经搅碎的空白样品于50mL塑料离心管中，依次加入内标溶液、盐包和10mL含0.1％甲酸的乙腈，涡旋混匀5min，超声处理5min，4000rpm离心处理5min，取上清液，待净化。样品净化时，将上清液转移至装有基质分散固相萃取填料的50mL离心管中，涡旋混匀5min，4000rpm离心5min，上清液转移至玻璃试管中，在40℃以下水浴中氮吹至干，用体积比为1:1的乙腈和水溶液定容至1mL，涡旋混匀，用0.22μm有机相滤膜过滤，上机测定。
参见表1为猪肉基质中100种兽残化合物检测结果。本方法在净化100种兽残化合物时，采用以猪肉基质中100种化合物的平均回收率为判定依据，设计)L9(33)3因素3水平的正交实验，比较不同含量的基质分散填料对净化效果的影响。对猪肉基质中100种兽残化合物检测结果如下表所示：
对于肝脏、虾基质中100种兽残化合物具有相似的检测结果。
由上可见，本发明提供的多兽残化合物的快速筛查方法，可同时对100种兽药同时筛查、定性和净化，前处理简单、快速，可满足目前实验室对兽药先筛查、后确证的需要。本发明提供的多兽残化合物的快速筛查方法，将适应的基质范围增加动物源性基质的80％，包括：肉、内脏、鱼和虾；将适应的兽药残留种类增加到兽药残留监控物质的90％，包括：β-受体激动剂、激素类、玉米赤霉醇类、三苯甲烷、苯胺醇类等禁用化合物，以及磺胺类、四环素类、氟喹诺酮类、大环内酯类等限用化合物，并获得优异效果。
虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然其并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，当可作些许的修改和完善，因此本发明的保护范围当以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.一种多兽残化合物的快速筛查方法，包括如下步骤：
S1：样品提取，将已经搅碎的样品置于离心管中，依次加入内标溶液、盐包和有机溶剂，依次进行涡旋混匀、超声处理和离心处理，取上清液，待净化；
S2：样品净化，将步骤S1中的上清液转移至装有基质分散固相萃取填料的离心管中，依次进行涡旋混匀和离心处理，然后取上清液转移至玻璃试管中，在水浴中氮吹至干，再用有机溶剂定容，涡旋混匀后过滤，然后上机待测定。
2.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，所述步骤S1中的内标溶液为同位素化合物溶液。
3.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，所述步骤S1中有机溶剂为含有体积比0.1％甲酸的乙腈。
4.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，所述步骤S1中涡旋混匀、超声处理和离心处理的时间均为5分钟。
5.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，所述步骤S1和S2中离心处理的速度均为4000转每分钟。
6.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，所述步骤S2中涡旋混匀和离心处理的时间均为5分钟。
7.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，所述步骤S2中水浴的温度为20℃-40℃。
8.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，所述步骤S2中有机溶剂为体积比为1:1的乙腈和水溶液。
9.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，所述步骤S2中过滤过程使用的是0.22μm的有机相滤膜。
10.如权利要求1所述的筛查方法，其特征在于，所述基质分散固相萃取填料为C18或活性炭；对于动物组织，每毫升提取液加入2-10mg的C18；对于蛋和蛋黄，每毫升提取液加入10-20mg的C18；对于动物肝脏，每毫升提取液加入1-5mg的活性炭。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113049324A (zh) * | 2021-02-05 | 2021-06-29 | 上海海洋大学 | 一种适用于水产品麻醉剂或兽药的前处理方法 |
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| CN103884790A (zh) * | 2014-03-21 | 2014-06-25 | 烟台杰科检测服务有限公司 | 一种动物源性食品中兽药多残留的测定方法 |
| CN105259288A (zh) * | 2015-10-30 | 2016-01-20 | 四川新希望畜牧科技有限公司 | 一种同时检测禽肉组织中多种药物残留量的方法 |
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2018
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