CN110484560B - 一种含有hvul2h20083.2基因的耐贫瘠水稻的生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种含有HVUL2H20083.2基因的耐贫瘠水稻的生产方法，属于转基因作物领域。本发明将青稞的HVUL2H20083.2基因转入水稻，提高了水稻的耐贫瘠能力，进而有利于水稻在土壤贫瘠的地区的推广，具有良好的应用价值。

Description

一种含有HVUL2H20083.2基因的耐贫瘠水稻的生产方法

技术领域

本发明涉及转基因作物领域。

背景技术

水稻(Oryza sativa L.)是人类主要的粮食作物之一，缺氮喜好生长于土壤肥沃的地区，我国的东北大米之所以深受消费者青睐，主要在于东北的黑土地很肥沃，氮源丰富。

人们使用常规的驯化或杂交等育种方式，有一定概率能够获得耐贫瘠的水稻，但其效率较低。

转基因育种相比传统的驯化或杂交育种，效率更高，目前已经有相关的成功尝试。例如：孙辉等人(孙辉，黄其满，苏金.谷氨酰胺合成酶基因GS1和GS2的高效表达增强转基因水稻对氮素缺乏的耐性[J].植物生理与分子生物学学报，2005，31(5).)将谷氨酰胺合成酶基因GS1和GS2转进水稻中，提高了水稻的的耐缺氮能力，即提高了其对贫瘠的耐受性。

对目的基因的正确选择，是耐贫瘠水稻育种成功的关键。目前应用于耐贫瘠水稻育种的目的基因还较少。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种新的目的基因在转基因耐贫瘠水稻生产中的应用；本发明中的耐贫瘠，指的是耐受缺氮环境。

本发明的技术方案包括：

一种重组质粒，它是含有HVUL2H20083.2基因的质粒。

如前述的重组质粒，它的骨架质粒是武汉伯远生物科技有限公司的载体pBWA(V)BS-CCDB，得到的完整重组质粒的序列如SEQ ID NO.6所示。

一种重组大肠杆菌，它是含有前述重组质粒的大肠杆菌。

一种重组农杆菌，它是含有前述重组质粒的农杆菌。

HVUL2H20083.2基因在提高水稻耐贫瘠能力中的用途。

如前述的用途，所述用途是提高缺氮环境下水稻组织中过氧化物酶含量；和/或，所述用途是加快缺氮环境下水稻组织中超氧化物歧化酶相关抗逆境反应。

如前述的用途，所述用途是提高缺氮环境下提高水稻组织中可溶性蛋白含量。前述重组质粒、重组大肠杆菌、重组农杆菌在提高水稻耐贫瘠能力中的用途。

一种耐贫瘠水稻的生产方法，它是将前述的重组质粒通过前述重组农杆菌转入水稻中，即得。

如前述的生产方法，其特征在于，它还包括通过大肠杆菌复制所述重组质粒的步骤。

本发明将HVUL2H20083.2基因转入水稻中，在缺氮条件下，加快了超氧化物歧化酶相关抗逆相应，提高了水稻过氧化物酶和可溶性蛋白的水平，理论上增加了水稻的抗缺氮胁迫的能力。本发明将HVUL2H20083.2基因转入水稻，可以得到耐贫瘠水稻，能大大增加水稻的种植范围。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过具体实施方式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1：酶切验证电泳图。

图2：POD水平检测图。

图3：SOD水平检测图。

图4：Pro水平检测图。

图5：MDA水平检测图。

图6：STP水平检测图。

具体实施方式

实施例1转基因水稻构建方法

(一)重组农杆菌准备

1.目的基因获取

本发明的目的基因HVUL2H20083.2是Uniprot注释为TGACG motif-bindingfactor 4的基因，其序列如SEQ ID NO.1所示(具体见说明书末尾)。

使用如下引物扩增青稞DNA：

N-4(c+)：cagtCACCTGCaaaacaacatgacctcggcgcagtacgc(SEQ ID NO.2)

N-4(c-)：cagtCACCTGCaaaatacattagcttatggccgactcgc(SEQ ID NO.3)

PCR程序为：98℃5min，98℃10s、60℃30s、72℃72s，共30个循环，再72℃维持10min，16℃保持2min。

将1188bp电泳片段切下，进行胶回收，总体积20ul的水溶解回收DNA(回收产物标记为：rDNA)，检测无误后与载体进行连接。

2.重组载体构建

(1)酶切：载体pBWA(V)BS-CCDB(武汉伯远生物科技有限公司)用Eco31I酶切，扩增的片段用AarI进行酶切，回收后连接。

(2)连接：连接体系如下：

Total：10ul

H2O：4ul

Buffer：1ul

T4-ligase：1ul

pBWA(V)BS-ccDB：1ul

目的片段：3ul。

所得重组质粒命名为：pBWA(V)BS-青稞耐贫瘠N-1质粒。

3.转化感受态：

将5-10ul连接产物转化大肠杆菌感受态；转化涂(卡纳霉素)抗性平皿，37℃培养12小时，进行菌斑PCR鉴定。

4.验证

(1)菌斑PCR鉴定

正向菌检引物：TCGTGCTGGGGGACTACTTC(SEQ ID NO.4)；

反向菌检引物：TATAATTGCGGGACTCTA(SEQ ID NO.5)；

目标条带为310bp左右的片段。

(2)酶切验证

将提取的质粒用Eco32I酶切，酶切体系如下：

总体积：10ul

质粒：3ul

Eco32I：0.5ul

Buffer：1ul

H2O：5.5ul

37℃酶切2小时后电泳，电泳图如图1所示。图中左侧泳道为EcorV酶切条带，条带大小为：1106，1789，2161，4324bp；图中右侧泳道为Marker[DL5000]，对应条带大小为：5000，3000，2000，1000，750，500，250，100bp。

(3)测序验证

取1-3个阳性条带对应的菌液，取50ul送样测序，其余50ul菌液接种到含有5-10ml(卡纳霉素)抗性LB中，试管摇菌，待测序结果出来后，对应测序正确的取一管提取质粒。

测序正确的序列如SEQ ID NO.6所示(具体序列见说明书末)。

5.转化农杆菌

将前述测序正确的菌液对应质粒转入农杆菌中，在含卡纳霉素的固体培养基上培养，挑取单菌落，并使用第4节的方法验证菌落是否带有目的基因，带有目的基因的即为重组农杆菌；再将重组农杆菌置于培养液中振荡培养，得重组农杆菌悬浮液。

(二)水稻转化

1.以水稻成熟胚为材料诱导愈伤组织；

2.使用农杆菌悬浮液浸染愈伤组织；

3.使用潮霉素筛选培养基筛选：

(1)将晾干的愈伤转入筛选培养基上进行第一次筛选；

(2)将长有抗性愈伤的初始愈伤转导新培养基，进行第二次筛选。

4.挑取抗性愈伤，诱导分化和生根，得到水稻苗，通过PCR验证，阳性苗即为本发明的耐贫瘠水稻。

以下用实验例的形式验证本发明所得耐贫瘠水稻的耐贫瘠(缺氮)能力。

实验例1耐贫瘠效果验证

本实验的目的在于检测本发明的水稻在缺氮胁迫下的生理状态，以及一些生理指标变化。生理指标包括：过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、可溶性总蛋白(STP)。

POD是以过氧化氢为电子受体的催化底物氧化的酶，与呼吸作用、光合作用等相关。

SOD能消除生物体在新陈代谢过程中产生的活性氧等有害物质。缺氮能增加植物体内活性氧含量，降低SOD活性，加强膜脂过氧化作用。

Pro存在于多种植物蛋白质中，尤其与细胞壁的形成有关，广泛参与植物体在干旱、高温、低温、盐渍等逆境响应；Pro还具有很强的水合能力，其水溶液具有很高的水势，有利于防止渗透胁迫条件下蛋白质脱水变性。

MDA是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤。其在逆境中上升表明植物在逆境中受到的损伤加重。

STP是重要的渗透调节物质和营养物质，他们的增加和积累能提高细胞的保水能力，对细胞的生命物质及生物膜起到保护作用。

1.材料与方法

1.1材料命名

对照组-CK；实施例1制备得到的耐贫瘠水稻-N1。

1.2缺氮营养液配方

营养液按照Hoagland配方配制；将Ca(NO₃)₂·4H₂O和NH₄NO₃去除补充CaCl₂，浓度为2mM/L。

1.3处理方式

将CK和N1分别置于缺氮营养液中培养96小时。

1.4取材方法

将材料在相应时间点(48h、96h)将材料整株取材，液氮速冻。

2.测定方法

对逆境处理下的转基因和非转基因材料叶片进行POD、SOD、Pro、MDA、可溶性总蛋白的检测。

2.1检测仪器

酶标仪(450nm)，高精度微量加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL，37℃恒温箱，离心机等

2.2试剂耗材

植物(Plant)过氧化物酶(POD)-微量测试Kit

植物(Plant)超氧化物歧化酶(SOD)-微量测试Kit

植物(Plant)脯氨酸(proline)-微量测试Kit

植物(Plant)丙二醛(MDA)-微量测试Kit

植物(Plant)可溶性蛋白(STP)-微量测试Kit

2.3样本前处理

取0.5-1.0g新鲜样本于研钵中，加入等体积0.1mol/L的PBS溶液研磨后于2500r/min离心，取上清备用

2.4过氧化物酶(POD)测定

1)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2)设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3)样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4)除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7)每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

2.5超氧化物歧化酶(sOD)测定

1)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃保存。

2)设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3)样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4)除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7)每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

2.6脯氨酸(proline)测定

1)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2)设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3)样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4)除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7)每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

2.7丙二醛(MDA)测定

1)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2)设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3)样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4)除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7)每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

2.8可溶性蛋白(STP)测定

1)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2)设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3)样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4)除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6)每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7)每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值

3.结果

1)POD测定结果如图2所示，可见，N1组与CK组相比，其POD高于CK组，说明N1组抗逆能力高于CK组。

2)SOD测定结果如图3所示，可见，N1组在缺氮处理48h后，SOD水平有显著降低，而CK组有略微上升。逆境处理下SOD含量会表现先增加后降低的趋势，该结果表明逆境处理下，N1组SOD含量增加处理时长低于48h，N1组对逆境响应早于CK组，其抗逆响应更加及时，表明其抗逆能力优于CK组。

3)Pro测定结果如图4所示，N1组在盐碱处理后，Pro水平相比对照明显上升。Pro含量增加，结合水的能力增多，表明植物N1的抗逆能力增加。

4)MDA测定结果如图5所示，N1组在盐碱逆境胁迫下，MDA的累计变化较为平缓，说明N1组植物对逆境的适应能力高于CK组，表明N1组抗逆能力高于CK组。

5)STP测定结果如图6所示，N1组STP含量在96h内均高于CK组，表明N1组细胞渗透势高于处理组，说明N1组对逆境的适应能力高于CK组。

4.结论

本发明将HVUL2H20083.2基因转入水稻中，在缺氮条件下，加快了超氧化物歧化酶相关抗逆相应，提高了水稻过氧化物酶和可溶性蛋白的水平。

本发明将HVUL2H20083.2基因转入水稻，可以得到耐贫瘠水稻，能大大增加水稻的种植范围，理论上能减少水稻因缺氮带来的减产，具有良好的应用前景。

附录：本发明涉及的一些DNA序列

1.HVUL2H20083.2(SEQ ID NO.1)

2.重组质粒(SEQ ID NO.6)

SEQUENCE LISTING

<110> 西藏自治区农牧科学院农业研究所

<120> 一种含有HVUL2H20083.2基因的耐贫瘠水稻的生产方法

<130> GY462-2019P017055CC

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1188

<212> DNA

<213> 青稞(Hordeum vulgare Linn.)

<400> 1

atgacctcgg cgcagtacgc gccggcgccc ctcaggatgg ggatgtacga gcgcgcccaa 60

ccgccgcagc agcaccagca gcagcagcag cagcaccagc tgcagccggt gctgggcatg 120

tggagcagcg agccctacaa ggtcgacagc ggcggccagg ccaccagcgg gtccagcatc 180

atggagcccg acgccaagtt cgaccacgca gggctagacg aagatccgca gatggacgaa 240

ctggagacgg cgggcgacgc cgatcaggaa gccagcaagc caagagaaaa ggtcttgaga 300

agactcgcac agaacagaga agctgcccgc aaaagccgcc tcagaaaaaa ggcttacatc 360

cagcagctag agtcgagccg gataaaactg gcgcagctgg agcaagagct gcagcgcgcg 420

aggcagcagc agggggtgta cgggggcagc aacccgggga cgagcctgca gcgccaccac 480

gggggctcgg ccggcctcgg gttcgcggcg gcggggcaga tgatggaccc cggcgtggcg 540

gcgttcgaga tcaagtacgg gcactgggtg gacgagcaga agcggcacac ggagcagctg 600

cggagcgcgc tgcagcaggg gcagggcacg tcggagctgg agctgcagat gatggtggag 660

accgggctcg ccaacgacga cgacctcttc cggatcaagg gcgccgccgc gcagtccgac 720

gtcttctgcg tcatgtcggg gctctggagg tcccccgccg agcgcttctt cctctggatc 780

ggcggcttcc ggccgtccga ggtcctcaag atcttgagcc cgcagctgca tccgatgacg 840

gaggcgcagt cggtggcggt gtacgggctg cagctgacgt cggcgcaggc ggaagacgcg 900

ctgtcgcagg ggatgcagaa gctgcagcag acgctggccg agtccctgac cgacccattc 960

gccgcccccg acgcctacat ggtcggtgcc gtggagaagc tcaagggcct cgtcggcttc 1020

gtgcagcagg cggaccacct ccggctggag acgctgcaga acatgcacag gatcctgacg 1080

acgcggcagg cggccaaggg cttgctcgtg ctgggggact acttccagcg cctccgcgcg 1140

ctcagcacgc tctgggcggc ccgcccgcgc gagtcggcca taagctaa 1188

<210> 2

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 2

cagtcacctg caaaacaaca tgacctcggc gcagtacgc 39

<210> 3

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 3

cagtcacctg caaaatacat tagcttatgg ccgactcgc 39

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 4

tcgtgctggg ggactacttc 20

<210> 5

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 5

tataattgcg ggactcta 18

<210> 6

<211> 9380

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 6

tagaatagca tcggtaacat gagcaaagtc tgccgcctta caacggctct cccgctgacg 60

ccgtcccgga ctgatgggct gcctgtatcg agtggtgatt ttgtgccgag ctgccggtcg 120

gggagctgtt ggctggctgg tggcaggata tattgtggtg taaacaaatt gacgcttaga 180

caacttaata acacattgcg gacgttttta atgttagact gaattaacgc cgaattaatt 240

cgggggatct ggattttagt actggatttt ggttttagga attagaaatt ttattgatag 300

aagtatttta caaatacaaa tacatactaa gggtttctta tatgctcaac acatgagcga 360

aaccctatag gaaccctaat tcccttatct gggaactact cacacattat tatggagaaa 420

ctcgagtcaa atctcggtga cgggcaggac cggacggggc ggtaccggca ggctgaagtc 480

cagctgccag aaacccacgt catgccagtt cccgtgcttg aagccggccg cccgcagcat 540

gccgcggggg gcatatccga gcgcctcgtg catgcgcacg ctcgggtcgt tgggcagccc 600

gatgacagcg accacgctct tgaagccctg tgcctccagg gacttcagca ggtgggtgta 660

gagcgtggag cccagtcccg tccgctggtg gcggggggac acgtacacgg tcgactcggc 720

cgtccagtcg taggcgttgc gtgccttcca ggggcccgcg taggcgatgc cggcgacctc 780

gccgtccacc tcggcgacga gccagggata gcgctcccgc agacggacga ggtcgtccgt 840

ccactcctgc ggttcctgcg gctcggtacg gaagttgacc gtgcttgtct cgatgtagtg 900

gttgacgatg gtgcagaccg ccggcatgtc cgcctcggtg gcacggcgga tgtcggccgg 960

gcgtcgttct gggctcatgg tagactcgag agagatagat ttgtagagag agactggtga 1020

tttcagcgtg tcctctccaa atgaaatgaa cttccttata tagaggaagg tcttgcgaag 1080

gatagtggga ttgtgcgtca tcccttacgt cagtggagat atcacatcaa tccacttgct 1140

ttgaagacgt ggttggaacg tcttcttttt ccacgatgct cctcgtgggt gggggtccat 1200

ctttgggacc actgtcggca gaggcatctt gaacgatagc ctttccttta tcgcaatgat 1260

ggcatttgta ggtgccacct tccttttcta ctgtcctttt gatgaagtga cagatagctg 1320

ggcaatggaa tccgaggagg tttcccgata ttaccctttg ttgaaaagtc tcaatagccc 1380

tttggtcttc tgagactgta tctttgatat tcttggagta gacgagagtg tcgtgctcca 1440

ccatgttatc acatcaatcc acttgctttg aagacgtggt tggaacgtct tctttttcca 1500

cgatgctcct cgtgggtggg ggtccatctt tgggaccact gtcggcagag gcatcttgaa 1560

cgatagcctt tcctttatcg caatgatggc atttgtaggt gccaccttcc ttttctactg 1620

tccttttgat gaagtgacag atagctgggc aatggaatcc gaggaggttt cccgatatta 1680

ccctttgttg aaaagtctca atagcccttt ggtcttctga gactgtatct ttgatattct 1740

tggagtagac gagagtgtcg tgctccacca tgttggcaag ctgctctaga catggagtca 1800

aagattcaaa tagaggacct aacagaactc gccgtaaaga ctggcgaaca gttcatacag 1860

agtctcttac gactcaatga caagaagaaa atcttcgtca acatggtgga gcacgacaca 1920

cttgtctact ccaaaaatat caaagataca gtctcagaag accaaagggc aattgagact 1980

tttcaacaaa gggtaatatc cggaaacctc ctcggattcc attgcccagc tatctgtcac 2040

tttattgtga agatagtgga aaaggaaggt ggctcctaca aatgccatca ttgcgataaa 2100

ggaaaggcca tcgttgaaga tgcctctgcc gacagtggtc ccaaagatgg acccccaccc 2160

acgaggagca tcgtggaaaa agaagacgtt ccaaccacgt cttcaaagca agtggattga 2220

tgtgatatct ccactgacgt aagggatgac gcacaatccc actatccttc gcaagaccct 2280

tcctctatat aaggaagttc atttcatttg gagagaacac gggggacttt gcaacatgac 2340

ctcggcgcag tacgcgccgg cgcccctcag gatggggatg tacgagcgcg cccaaccgcc 2400

gcagcagcac cagcagcagc agcagcagca ccagctgcag ccggtgctgg gcatgtggag 2460

cagcgagccc tacaaggtcg acagcggcgg ccaggccacc agcgggtcca gcatcatgga 2520

gcccgacgcc aagttcgacc acgcagggct agacgaagat ccgcagatgg acgaactgga 2580

gacggcgggc gacgccgatc aggaagccag caagccaaga gaaaaggtct tgagaagact 2640

cgcacagaac agagaagctg cccgcaaaag ccgcctcaga aaaaaggctt acatccagca 2700

gctagagtcg agccggataa aactggcgca gctggagcaa gagctgcagc gcgcgaggca 2760

gcagcagggg gtgtacgggg gcagcaaccc ggggacgagc ctgcagcgcc accacggggg 2820

ctcggccggc ctcgggttcg cggcggcggg gcagatgatg gaccccggcg tggcggcgtt 2880

cgagatcaag tacgggcact gggtggacga gcagaagcgg cacacggagc agctgcggag 2940

cgcgctgcag caggggcagg gcacgtcgga gctggagctg cagatgatgg tggagaccgg 3000

gctcgccaac gacgacgacc tcttccggat caagggcgcc gccgcgcagt ccgacgtctt 3060

ctgcgtcatg tcggggctct ggaggtcccc cgccgagcgc ttcttcctct ggatcggcgg 3120

cttccggccg tccgaggtcc tcaagatctt gagcccgcag ctgcatccga tgacggaggc 3180

gcagtcggtg gcggtgtacg ggctgcagct gacgtcggcg caggcggaag acgcgctgtc 3240

gcaggggatg cagaagctgc agcagacgct ggccgagtcc ctgaccgacc cattcgccgc 3300

ccccgacgcc tacatggtcg gtgccgtgga gaagctcaag ggcctcgtcg gcttcgtgca 3360

gcaggcggac cacctccggc tggagacgct gcagaacatg cacaggatcc tgacgacgcg 3420

gcaggcggcc aagggcttgc tcgtgctggg ggactacttc cagcgcctcc gcgcgctcag 3480

cacgctctgg gcggcccgcc cgcgcgagtc ggccataagc taatgtaact agctctgtct 3540

tcagtactgg gcccgaagac tgaccagctc gaatttcccc gatcgttcaa acatttggca 3600

ataaagtttc ttaagattga atcctgttgc cggtcttgcg atgattatca tataatttct 3660

gttgaattac gttaagcatg taataattaa catgtaatgc atgacgttat ttatgagatg 3720

ggtttttatg attagagtcc cgcaattata catttaatac gcgatagaaa acaaaatata 3780

gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc ggtgtcatct atgttactag atcgggccat 3840

ccgcactgta gcggatggcc taaaaaaaaa actagaagag acgagtctga gactcagcgt 3900

ctcggtcgca gtcataactt cgtatagcat acattatacg aagttatggg ccgcattacc 3960

ctgttatccc taggccgcat aacttcgtat agcctacatt ataggatgga gggatatcct 4020

ctcttaaggt agcgagcaag ctctaagagg agtgtcgaca agcttggcac tggccgtcgt 4080

tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca 4140

tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca 4200

gttgcgcagc ctgaatggcg aatgctagag cagcttgagc ttggatcaga ttgtcgtttc 4260

ccgccttcag tttaaactat cagtgtttga caggatatat tggcgggtaa acctaagaga 4320

aaagagcgtt tattagaata acggatattt aaaagggcgt gaaaaggttt atccgttcgt 4380

ccatttgtat gtgcatgcca accacagggt tcccctcggg atcaaagtac tttgatccaa 4440

cccctccgct gctatagtgc agtcggcttc tgacgttcag tgcaggagat gatcgcggcc 4500

gggtacgtgt tcgagccgcc cgcgcatgtc tcaaccgtgc ggctgcatga aatcctggcc 4560

ggtttgtctg atgccaagct ggcggcctgg ccggccagct tggccgctga agaaaccgag 4620

cgccgccgtc taaaaaggtg atgtgtattt gagtaaaaca gcttgcgtca tgcggtcgct 4680

gcgtatatga tgcgatgagt aaataaacaa atacgcaagg ggaacgcatg aaggttatcg 4740

ctgtacttaa ccagaaaggc gggtcaggca agacgaccat cgcaacccat ctagcccgcg 4800

ccctgcaact cgccggggcc gatgttctgt tagtcgattc cgatccccag ggcagtgccc 4860

gcgattgggc ggccgtgcgg gaagatcaac cgctaaccgt tgtcggcatc gaccgcccga 4920

cgattgaccg cgacgtgaag gccatcggcc ggcgcgactt cgtagtgatc gacggagcgc 4980

cccaggcggc ggacttggct gtgtccgcga tcaaggcagc cgacttcgtg ctgattccgg 5040

tgcagccaag cccttacgac atatgggcca ccgccgacct ggtggagctg gttaagcagc 5100

gcattgaggt cacggatgga aggctacaag cggcctttgt cgtgtcgcgg gcgatcaaag 5160

gcacgcgcat cggcggtgag gttgccgagg cgctggccgg gtacgagctg cccattcttg 5220

agtcccgtat cacgcagcgc gtgagctacc caggcactgc cgccgccggc acaaccgttc 5280

ttgaatcaga acccgagggc gacgctgccc gcgaggtcca ggcgctggcc gctgaaatta 5340

aatcaaaact catttgagtt aatgaggtaa agagaaaatg agcaaaagca caaacacgct 5400

aagtgccggc cgtccgagcg cacgcagcag caaggctgca acgttggcca gcctggcaga 5460

cacgccagcc atgaagcggg tcaactttca gttgccggcg gaggatcaca ccaagctgaa 5520

gatgtacgcg gtacgccaag gcaagaccat taccgagctg ctatctgaat acatcgcgca 5580

gctaccagag taaatgagca aatgaataaa tgagtagatg aattttagcg gctaaaggag 5640

gcggcatgga aaatcaagaa caaccaggca ccgacgccgt ggaatgcccc atgtgtggag 5700

gaacgggcgg ttggccaggc gtaagcggct gggttgtctg ccggccctgc aatggcactg 5760

gaacccccaa gcccgaggaa tcggcgtgac ggtcgcaaac catccggccc ggtacaaatc 5820

ggcgcggcgc tgggtgatga cctggtggag aagttgaagg ccgcgcaggc cgcccagcgg 5880

caacgcatcg aggcagaagc acgccccggt gaatcgtggc aagcggccgc tgatcgaatc 5940

cgcaaagaat cccggcaacc gccggcagcc ggtgcgccgt cgattaggaa gccgcccaag 6000

ggcgacgagc aaccagattt tttcgttccg atgctctatg acgtgggcac ccgcgatagt 6060

cgcagcatca tggacgtggc cgttttccgt ctgtcgaagc gtgaccgacg agctggcgag 6120

gtgatccgct acgagcttcc agacgggcac gtagaggttt ccgcagggcc ggccggcatg 6180

gccagtgtgt gggattacga cctggtactg atggcggttt cccatctaac cgaatccatg 6240

aaccgatacc gggaagggaa gggagacaag cccggccgcg tgttccgtcc acacgttgcg 6300

gacgtactca agttctgccg gcgagccgat ggcggaaagc agaaagacga cctggtagaa 6360

acctgcattc ggttaaacac cacgcacgtt gccatgcagc gtacgaagaa ggccaagaac 6420

ggccgcctgg tgacggtatc cgagggtgaa gccttgatta gccgctacaa gatcgtaaag 6480

agcgaaaccg ggcggccgga gtacatcgag atcgagctag ctgattggat gtaccgcgag 6540

atcacagaag gcaagaaccc ggacgtgctg acggttcacc ccgattactt tttgatcgat 6600

cccggcatcg gccgttttct ctaccgcctg gcacgccgcg ccgcaggcaa ggcagaagcc 6660

agatggttgt tcaagacgat ctacgaacgc agtggcagcg ccggagagtt caagaagttc 6720

tgtttcaccg tgcgcaagct gatcgggtca aatgacctgc cggagtacga tttgaaggag 6780

gaggcggggc aggctggccc gatcctagtc atgcgctacc gcaacctgat cgagggcgaa 6840

gcatccgccg gttcctaatg tacggagcag atgctagggc aaattgccct agcaggggaa 6900

aaaggtcgaa aagatctctt tcctgtggat agcacgtaca ttgggaaccc aaagccgtac 6960

attgggaacc ggaacccgta cattgggaac ccaaagccgt acattgggaa ccggtcacac 7020

atgtaagtga ctgatataaa agagaaaaaa ggcgattttt ccgcctaaaa ctctttaaaa 7080

cttattaaaa ctcttaaaac ccgcctggcc tgtgcataac tgtctggcca gcgcacagcc 7140

gaagctcccg gatacggtca cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg 7200

tcagggcgcg tcagcgggtg ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag 7260

cgatagcgga gtgtatactg gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg 7320

caccatatgc ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgt 7380

tcatccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta 7440

tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag 7500

aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg 7560

tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg 7620

tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg 7680

cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga 7740

agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc 7800

tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt 7860

aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact 7920

ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg 7980

cctaactacg gctacactag aaggacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt 8040

accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt 8100

ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct 8160

ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg 8220

gtcatgcatt ctaggtacta aaacaattca tccagtaaaa tataatattt tattttctcc 8280

caatcaggct tgatccccag taagtcaaaa aatagctcga catactgttc ttccccgata 8340

tcctccctga tcgaccggac gcagaaggca atgtcatacc acttgtccgc cctgccgctt 8400

ctcccaagat caataaagcc acttactttg ccatctttca caaagatgtt gctgtctccc 8460

aggtcgccgt gggaaaagac aagttcctct tcgggctttt ccgtctttaa aaaatcatac 8520

agctcgcgcg gatctttaaa tggagtgtcc tcttcccagt tttcgcaatc cacatcggcc 8580

agatcgttat tcagtaagta atccaattcg gctaagcggc tgtctaagct attcgtatag 8640

ggacaatccg atatgtcgat ggagtgaaag agcctgatgc actccgcata cagctcgata 8700

atcttttcag ggctttgttc atcttcatac tcttccgagc aaaggacgcc atcggcctca 8760

ctcatgagca gattgctcca gccatcatgc cgttcaaagt gcaggacctt tggaacaggc 8820

agctttcctt ccagccatag catcatgtcc ttttcccgtt ccacatcata ggtggtccct 8880

ttataccggc tgtccgtcat ttttaaatat aggttttcat tttctcccac cagcttatat 8940

accttagcag gagacattcc ttccgtatct tttacgcagc ggtatttttc gatcagtttt 9000

ttcaattccg gtgatattct cattttagcc atttattatt tccttcctct tttctacagt 9060

atttaaagat accccaagaa gctaattata acaagacgaa ctccaattca ctgttccttg 9120

cattctaaaa ccttaaatac cagaaaacag ctttttcaaa gttgttttca aagttggcgt 9180

ataacatagt atcgacggag ccgattttga aaccgcggtg atcacaggca gcaacgctct 9240

gtcatcgtta caatcaacat gctaccctcc gcgagatcat ccgtgtttca aacccggcag 9300

cttagttgcc gttcttccga atagcatcgg taacatgagc aaagtctgcc gccttacaac 9360

ggctctcccg ctgacgccgt 9380

Claims (6)

1.HVUL2H20083.2基因在提高水稻耐贫瘠能力中的用途；其特征在于：所述耐贫瘠指的是耐受缺氮环境；所述HVUL2H20083.2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用途是提高缺氮环境下水稻组织中过氧化物酶含量；和/或，所述用途是加快缺氮环境下水稻组织中超氧化物歧化酶相关抗逆境反应。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用途是提高缺氮环境下提高水稻组织中可溶性蛋白含量。

4.含有HVUL2H20083.2基因的重组质粒、重组大肠杆菌或重组农杆菌在提高水稻耐贫瘠能力中的用途；其特征在于：所述耐贫瘠指的是耐受缺氮环境；所述HVUL2H20083.2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.一种耐贫瘠水稻的生产方法，其特征在于，它是将重组农杆菌转入水稻中，即得；所述耐贫瘠指的是耐受缺氮环境；所述重组农杆菌含有核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的质粒。

6.如权利要求5所述的生产方法，其特征在于，它还包括通过大肠杆菌复制所述质粒的步骤。

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