CN110476713B - 连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置及方法 - Google Patents

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Abstract

本发明可连续收集丛枝菌根真菌菌丝装置及方法，是在培养箱内装置菌根室与菌丝室，在对应处倒置种植植物，添加丛枝菌根真菌菌剂于无菌苗根系，添加菌根室下基质与上基质并间隔向菌根室内浇灌低磷营养液，向菌丝室内浇灌高磷营养液，菌丝可以穿过菌丝入口进入菌丝室内大量繁殖，更好地向植物提供磷营养以换取所需的碳源,过六十天后将菌丝室从培养箱内取出收集菌丝，然后再依次将菌丝室下基质与菌丝室上基质填充到菌丝室内培养菌丝，由于本发明利用了根系的向重力性以及菌丝的无向重力性,加之菌丝吸磷的特性,完全能够达到可连续收集到大量丛枝菌根真菌菌丝的目的，操作简单,装置可重复利用,可行性高。

Description

连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置及方法
技术领域
本发明涉及一种收集丛枝菌根真菌菌丝的装置及方法，具体是一种可连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置及方法，属于微生物领域。
背景技术
丛枝菌根真菌是土壤中广泛与植物共生的一类真菌,其与植物建立互利共生关系后，可以在培养基质中建立广泛的菌丝网络。人们在研究丛枝菌根真菌与植物互利共生的分子机制中，为了克隆菌丝中的基因和检测菌丝中基因的表达，收集菌丝是十分重要的工作。
目前收集菌丝的方法通常有两种，第一种是为建立植物根系与丛枝菌根真菌的共生体，需要经过植物种植、接菌、培养一定时间后将菌根化根系整体挖出，然后收集菌根化根系周围和培养基质中的菌丝，这样虽然易于培养和实验处理，但是收集的菌丝比较分散，而且再次收集菌丝还需要重复进行植物种植、接菌、培养等流程，十分地费时费力；第二种是为建立转型根与丛枝菌根真菌的无菌双重培养体系，建立菌丝隔室并收集菌丝隔室中的菌丝，这样虽然容易收集菌丝，但是培养条件要求高，不容易对菌丝进行各种实验处理。而目前未见公开一种简单实用并能连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置及方法。
发明内容
本发明的目的是克服目前收集丛枝菌根真菌菌丝所存在的缺陷, 公开一种可连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置及方法。
本发明可连续收集丛枝菌根真菌菌丝装置所采用的技术方案是：
在培养箱左侧内装置菌根室，在培养箱右侧内装置菌丝室，菌根室底部与培养箱对应处开有植物种植孔，在菌丝室底部与培养箱对应处开有排水孔，菌根室右壁开有菌丝出口并封有出口滤网，与菌丝出口对应的菌丝室左壁开有菌丝入口并封有入口滤网，菌丝出口的底面高于菌丝入口的底面，菌根室内填充菌根室下基质与菌根室上基质，菌丝室内填充菌丝室下基质与菌丝室上基质，培养箱上加有陶质盖板封闭。
本发明上述装置是通过以下方法实施完成的：
a.首先将菌根室放入培养箱的左侧内，将多年生植物的无菌苗根系穿过植物种植孔倒置种植，添加丛枝菌根真菌菌剂于无菌苗根系周围，依次添加粒径1～2mm的菌根室下基质至菌丝出口底面，添加粒径在3～6mm的菌根室上基质至菌根室封口处，并浇灌低磷营养液；
b.然后将菌丝室放入培养箱的右侧内，菌丝入口与菌丝出口相对应，依次添加粒径1～2mm的菌丝室下基质至菌丝入口底面，添加粒径在3～6mm的菌丝室上基质至菌丝室的封口处，浇灌高磷营养液，用陶质盖板加盖在培养箱上面；
c.每间隔七天向菌根室内浇灌低磷营养液，向菌丝室内浇灌高磷营养液，浇灌后用陶质盖板加盖在培养箱上面,由于陶质盖板具有一定的透气性，以及排水孔的排水作用，可维持菌根室和菌丝室一定的水汽压与湿度；
d.植物根系具有向重力性而菌丝没有，所以植物根系就会限制在菌根室中，而菌丝可以穿过菌丝出口与菌丝入口进入菌丝室内大量繁殖，更好地向植物提供磷营养以换取所需的碳源；
e.过六十天后将菌丝室从培养箱内取出，从菌丝室下基质中收集菌丝，然后将菌丝室放入培养箱内，再依次将菌丝室下基质与菌丝室上基质填充到菌丝室内；
f.再过二十天后即可按上述步骤进行第二次菌丝收集，如此反复即可以进行连续收集丛枝菌根真菌菌丝。
本发明将植物倒置种植在菌根室内，并接种丛枝菌根真菌，陶质盖板盖具有一定的透气性可维持菌根室和菌丝室上层一定的水汽压和湿度，方便菌丝从菌根室向菌丝室蔓延。此外菌根室的菌丝出口底面高于菌丝室的菌丝入口底面，可有效的防止菌丝室中的高磷营养液进入菌根室中，不会破坏两者的处理条件,由于利用了根系的向重力性以及菌丝的无向重力性,加之菌丝吸磷的特性,完全能够达到可连续收集到大量丛枝菌根真菌菌丝的目的。本发明操作简单,装置可重复利用,可行性高。
附图说明
附图1为本发明连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置主视剖面结构示意图。
附图2为本发明沿附图1A-A向的俯视剖面结构示意图。
培养箱1，菌根室2，菌根室下基质3，菌根室上基质4，菌丝室5，菌丝室下基质6，菌丝室上基质7，陶质盖板8，排水孔9，植物种植孔10，菌丝入口11，菌丝出口12，入口滤网13，出口滤网14。
具体实施方式
以下结合具体实施例及附图对本发明做进一步详细说明，本实施例只是为了解释本发明而不是限制本发明：
本发明可连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置所采用的技术方案是：
在培养箱1左侧内装置菌根室2，在培养箱1右侧内装置菌丝室5，菌根室2底部与培养箱1对应处开有植物种植孔10，在菌丝室5底部与培养箱1对应处开有排水孔9，菌根室2右壁开有菌丝出口12并封有出口滤网14，与菌丝出口12对应的菌丝室5左壁开有菌丝入口11并封有入口滤网13，菌丝出口12的底面高于菌丝入口11的底面，菌根室2内填充菌根室下基质3与菌根室上基质4，菌丝室5内填充菌丝室下基质6与菌丝室上基质7，培养箱1上加有陶质盖板8封闭。
本发明上述装置是通过以下具体方法实施完成的：
a.首先将菌根室2放入培养箱1的左侧内，将香根草的无菌苗根系穿过植物种植孔10倒置种植，添加摩西斗管囊霉(Funneliformis mosseae)菌剂于无菌苗根系周围，然后按体积比1:1添加粒径1.5mm的无菌沙和无菌蛭石作为菌根室下基质3至菌丝出口12底面，添加粒径4mm的无菌玻璃珠作为菌根室上基质4至菌根室2封口处，浇灌磷浓度为1/100的霍格兰氏（Hoagland）营养液；
b.然后将菌丝室5放入培养箱1的右侧内，菌丝入口11与菌丝出口12相对，依次添加粒径1.5mm的无菌陶土粒作为菌根室下基质6至菌丝入口11底面，添加粒径为4mm的无菌玻璃珠作为菌根室上基质7至菌丝室5的封口处，浇灌磷浓度为两倍的霍格兰氏营养液，用陶质盖板8加盖在培养箱1上面；
c.每间隔七天向菌根室2中浇灌磷浓度为1/100的霍格兰氏营养液，向菌丝室5中浇灌磷浓度为两倍的霍格兰氏营养液，浇灌后用陶质盖板8加盖在培养箱1的上面，由于陶质盖板8具有一定的透气性，以及排水孔9的排水作用，可维持菌根室2和菌丝室5一定的水汽压与湿度；
d.由于植物根系具有向重力性而菌丝没有，所以植物根系就会限制在菌根室2中，而菌丝可以穿过菌丝出口12与菌丝入口11进入菌丝室5内大量繁殖，更好地向植物提供磷营养以换取所需的碳源；
e.过六十天后将菌丝室5从培养箱1内取出，从菌丝室5下基质6中收集菌丝，然后将菌丝室5放入培养箱1内，再依次将菌丝室5下基质6与菌丝室5上基质7填充到菌丝室5内；
f.再过二十天后即可按上述步骤进行第二次菌丝收集，如此反复即可以进行连续收集丛枝菌根真菌菌丝。

Claims (3)

1.可连续收集丛枝菌根真菌菌丝的装置，其特征在于所采用的技术方案是：
在培养箱(1)左侧内装置菌根室(2)，在培养箱(1)右侧内装置菌丝室(5)，菌根室(2)底部与培养箱(1)对应处开有植物种植孔(10)，在菌丝室(5)底部与培养箱(1)对应处开有排水孔(9)，菌根室(2)右壁开有菌丝出口(12)并封有出口滤网(14)，与菌丝出口(12)对应的菌丝室(5)左壁开有菌丝入口(11)并封有入口滤网(13)，菌丝出口(12)的底面高于菌丝入口(11)的底面，菌根室(2)内填充菌根室下基质(3)与菌根室上基质(4)，菌丝室(5)内填充菌丝室下基质(6)与菌丝室上基质(7)，培养箱(1)上加有陶质盖板(8)封闭。
2.可连续收集丛枝菌根真菌菌丝的方法，其特征在于是按以下步骤实现的：
a.首先将菌根室(2)放入培养箱(1)的左侧内，将多年生植物的无菌苗根系穿过植物种植孔(10)倒置种植，添加丛枝菌根真菌菌剂于无菌苗根系周围，依次添加粒径1～2mm的菌根室下基质(3)至菌丝出口(12)底面，添加粒径在3～6mm的菌根室上基质(4)至菌根室(2)封口处，并浇灌低磷营养液；
b.然后将菌丝室(5)放入培养箱(1)的右侧内，菌丝入口(11)与菌丝出口(12)相对应，依次添加粒径1～2mm的菌丝室下基质(6)至菌丝入口(11)底面，添加粒径在3～6mm的菌丝室上基质(7)至菌丝室(5)的封口处，浇灌高磷营养液，用陶质盖板(8)加盖在培养箱(1)上面；
c.每间隔七天向菌根室(2)内浇灌低磷营养液，向菌丝室(5)内浇灌高磷营养液，浇灌后用陶质盖板(8)加盖在培养箱(1)上面；
d.过六十天后将菌丝室(5)从培养箱(1)内取出，从菌丝室(5)下基质(6)中收集菌丝，然后将菌丝室(5)放入培养箱(1)内，再依次将菌丝室(5)下基质(6)与菌丝室(5)上基质(7)填充到菌丝室(5)内；
e.再过二十天后即可按上述步骤进行第二次菌丝收集，如此反复即可以进行连续收集丛枝菌根真菌菌丝。
3.根据权利要求2所述的可连续收集丛枝菌根真菌菌丝的方法，其特征在于是按以下步骤实现的：
a.首先将菌根室(2)放入培养箱(1)的左侧内，将香根草的无菌苗根系穿过植物种植孔(10)倒置种植，添加摩西斗管囊霉菌剂于无菌苗根系周围，然后按体积比1:1添加粒径1.5mm的无菌沙和无菌蛭石作为菌根室下基质(3)至菌丝出口(12)底面，添加粒径4mm的无菌玻璃珠作为菌根室上基质(4)至菌根室(2)封口处，浇灌磷浓度为1/100的霍格兰氏营养液；
b.然后将菌丝室(5)放入培养箱(1)的右侧内，菌丝入口(11)与菌丝出口(12)相对，依次添加粒径1.5mm的无菌陶土粒作为菌根室下基质(6)至菌丝入口(11)底面，添加粒径为4mm的无菌玻璃珠作为菌根室上基质(7)至菌丝室(5)的封口处，浇灌磷浓度为两倍的霍格兰氏营养液，用陶质盖板(8)加盖在培养箱(1)上面；
c.每间隔七天向菌根室(2)中浇灌磷浓度为1/100的霍格兰氏营养液，向菌丝室(5)中浇灌磷浓度为两倍的霍格兰氏营养液，浇灌后用陶质盖板(8)加盖在培养箱(1)的上面；
d.过六十天后将菌丝室(5)从培养箱(1)内取出，从菌丝室(5)下基质(6)中收集菌丝，然后将菌丝室(5)放入培养箱(1)内，再依次将菌丝室(5)下基质(6)与菌丝室(5)上基质(7)填充到菌丝室(5)内；
e.再过二十天后即可按上述步骤进行第二次菌丝收集，如此反复即可以进行连续收集丛枝菌根真菌菌丝。
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