CN110475552B - 氨基吡嗪嘌呤基选择性激酶抑制剂的盐形式 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及可用作激酶抑制剂的氨基吡嗪嘌呤化合物。更具体地，本发明涉及5‑(2‑(8‑氧杂‑3‑氮杂双环[辛‑3‑基)‑9‑(戊‑3‑基)‑9H‑嘌呤‑6‑基)吡嗪‑2‑胺化合物，包括其药学上可接受的盐、制备方法、包含这些化合物的药物组合物以及这些化合物在调节磷酸肌醇3‑激酶(PI3K‑AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、DNA‑PK和ATM激酶中的用途，并且可以用作治疗剂或诊断探针并用于多种增殖性病症或疾病的治疗，包括肿瘤、癌症、血液和淋巴恶性肿瘤、免疫疾病和基因改变疾病、炎症、某些代谢疾病、心血管疾病、肥胖症、2型糖尿病、抗衰老和神经疾病。

Description

氨基吡嗪嘌呤基选择性激酶抑制剂的盐形式
优先权
本申请要求于2017年3月31日提交的标题为《氨基吡嗪嘌呤基选择性激酶抑制剂的盐形式》(SALT FORMS OF AMINO PYRAZINE PURINE BASED SELECTIVE KINASEINHIBITOR)的印度临时专利申请第201741011673号的优先权，并且通过引用并入本文。
技术领域
本发明属于可用作激酶抑制剂的氨基吡嗪嘌呤化合物技术领域。更具体地，本发明涉及5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H-嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺化合物的乙磺酸盐和草酸盐、其药学上可接受的盐、制备方法、包含这些化合物的药物组合物以及这些化合物在调节PI3K(磷酸肌醇3-激酶)、AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、DNA-PK和激酶中的用途，并且可以用作治疗剂或诊断探针并用于治疗多种疾病，包括肿瘤、癌症、血液和淋巴恶性肿瘤、免疫疾病、基因改变疾病、炎症、某些代谢疾病、心血管疾病、肥胖症、2型糖尿病、抗衰老和神经疾病。
背景技术
激酶(也称为磷酸转移酶)将磷酸基团从高能供体分子转移到靶分子。蛋白激酶改变特定蛋白的活性，参与许多细胞过程并且涉及许多医学病症。因此，调节特定激酶的活性有助于控制疾病病症。
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)AKT/PKB(丝氨酸/苏氨酸激酶亚家族)家族构成一组脂质激酶，其将磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸转化为磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸。这种转化启动了对细胞生长和存活的许多方面来说至关重要的信号转导途径，包括不同的生理过程，诸如，细胞周期进程、分化、转录、转译和凋亡[1]。
此外，PI3K是肿瘤血管生成和增强代谢活动的重要调节因子[2]。PI3K还通过对结节性硬化症1/2(TSC1/2)复合物的负调节来调节哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的活性[3]。mTOR激酶可以通过细胞应激被生长因子激活。mTOR激酶激活经由广泛的细胞功能在调节细胞生长和细胞存活方面起着主要作用，包括转译、转录、mRNA转化、蛋白稳定性、肌动蛋白细胞骨架重组和自噬[4,5,6,7]。
PI3K/AKT/mTOR途径是人类癌症中最常被激活的信号转导途径[8]。通过多种上游受体类别、PI3K的扩增、磷酸酶和张力蛋白同源(PTEN)的缺失或激活突变的调节异常都与多种癌症的发展和进展密切相关。研究mTOR激酶生物学的研究人员发现mTOR细胞信号转导的调节异常与多种疾病(包括免疫疾病、癌症、血液和淋巴恶性肿瘤、基因改变疾病、代谢疾病、心血管疾病、肥胖症、2型糖尿病和神经疾病)之间存在病理学联系[8、9]。
mTOR是289kDa的丝氨酸/苏氨酸激酶，其将促有丝分裂的刺激与细胞生长和分裂联系起来。如所提到的，mTOR是PI3K-Akt途径中的重要酶之一。mTOR是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白。雷帕霉素与FKBP12结合，然后复合物与mTOR结合并且特异性地抑制mTOR。mTOR也被命名为FKBP-RAP相关蛋白(FRAP)、RAP FKBP12靶(RAFT1)和RAP靶(RAPT1)。雷帕霉素通过mTOR抑制合成代谢信号，而TOR又负责器官排斥。
在人类中，mTOR介导来自2个来源的合成代谢信号：营养素和激活的生长因子受体。mTOR作为以下存在：
1.雷帕霉素敏感的复合物，称为mTOR复合物1(mTORC1)。mTOR的激活导致蛋白质转译增加，这是因为mTORCI磷酸化并且激活转译调节因子真核起始因子4E结合蛋白1和核糖体p70 S6激酶。因此，通过抑制mTOR，雷帕霉素使磷酸化降低并且使蛋白质合成减少。
2.第二种复合物称为mTOR复合物2(mTORC2)。mTORC2对雷帕霉素不敏感，并且与基因符号(mTOR的雷帕霉素不敏感伴侣)相互作用。mTORC2通过在S473上将其磷酸化来调节促活激酶Akt/PKB。通过PDK1的T308磷酸化和mTORC2的S473磷酸化实现AKT的完全激活。mTOR还会诱发肾细胞癌，涉及到缺氧诱导因子(HIF)。随着抑制肾细胞癌的Von Hippel-Lindau(VHL)基因功能的丧失，导致氧敏感转录因子HIF-1和HIF-2的累积。HIF-1和HIF-2的累积产生血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)和转化生长因子(TGF)的过度刺激。这导致mTOR的激活，其刺激蛋白质稳定功能和蛋白质转译功能并且增加HIF-1活性。mTOR反馈调节：多个负反馈环调节mTOR途径，并且各种研究表明mTORC1对胰岛素-PI3K-AKT途径具有负面影响。胰岛素受体底物1(IRS1)在多个位点被S6K1直接磷酸化，这损害了其功能并且导致对胰岛素PI3K-AKT途径的抑制作用。生长因子受体结合蛋白10(GRB10)是最近发现的mTOR底物，其被mTOR磷酸化激活并且通过抑制其活性形式的胰岛素受体来负向控制胰岛素-PI3K-AKT信号转导途径[10]。mTOR下游途径：由激活的mTOR激酶磷酸化的mTORC1的最佳表征的下游效应子是S6K1和4E-BP1。S6K1：核糖体蛋白S6激酶(S6K)，属于AGC激酶家族的丝氨酸/苏氨酸激酶，是细胞生长和细胞大小的重要调节因子。S6K家族由两个基因(S6K1和S6K2)组成，其共享总体为70％的序列同源性[11]。
4E-BPI：属于三个小(10至12kda)蛋白(充当通过结合和灭活eIF4E(mRNA帽结合蛋白)的转译起始抑制剂)的家族，是第二个充分表征的mTORC1靶。mTORC1在多个残基处磷酸化4E-BP1，促进eIF4E从4E-BP1解离，从而减轻4E-BP1对eIF4E依赖性转译起始的抑制作用，而雷帕霉素对mTOR的抑制被认为会导致4E-BP1去磷酸化，引起对蛋白质转译的抑制[12]。
结节性硬化症复合基因产物TSC1和TSC2共同抑制mTOR介导的下游信号转导。TSC1和TSC2突变显示VEGF增加并且针对血管生成的mTOR途径的激活。
雷帕霉素(也称为西罗莫司)是由吸水链霉菌产生的抗生素。它最初是作为针对白色念珠菌、新型隐球菌和烟曲霉菌的抗真菌药物开发的。后来，雷帕霉素被开发为免疫抑制剂和抗癌剂。雷帕霉素还抑制由PI3K或Akt诱导的人细胞的致癌转化。
DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)是核丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其在与DNA结合后被激活。DNA-PKcs和PI 3-激酶之间存在序列相似性。PI 3-激酶抑制剂显示抑制DNA-PK。
PI3K/mTOR双重抑制剂：由于上述对mTOR抑制剂的关注，开发了双重PI3K/mTOR抑制剂。由于PI3K和mTOR的激酶结构域具有高度同源性，因此这是可能的[13]。这些分子抑制mTORC1、mTORC2和PI3K，从而抑制AKT、S6K1和4E-BP1的磷酸化，因此是用于靶向由PI3K激活驱动的癌症的有吸引力的药物[14]。这些抑制剂包括正在进行I/II期临床试验的XL-765、PI-103和NVP-BEZ235[15、16]。已经发现PI-103和NVP-BEZ235在乳腺肿瘤和白血病细胞中抑制AKT以及S6K1[17]，尽管一些研究表明这种广泛的细胞信号转导抑制也可能损害正常细胞的生长[18]。
总之，mTOR途径在调节细胞生长和增殖的营养稳态中起着关键作用。mTOR通过效应分子S6K1和4E-BP1调节蛋白质转译。mTOR与其他信号转导途径(比如AKT和PI3激酶)之间的串扰使该途径的调节异常复杂化。虽然mTOR途径调节异常表现为各种病理状态，但它并不是影响该效应的唯一候选。进一步的下游信号转导非常复杂，可以通过仅靶向mTOR的治疗方案对治疗癌症不是非常有效这一事实来理解。靶向mTOR和PI3激酶的双重抑制剂在对抗该疾病方面大有可为[19]。
此外，这些发现引起了开发该级联中关键蛋白的小分子调节剂的浓厚兴趣，包括各种PI3K同种型和mTOR。PIKK(磷脂酰肌醇3-激酶相关激酶)家族内的三磷酸腺苷(ATP)结合位点的结构同源性使得能够发现针对mTOR具有不同活性程度的小分子抑制剂和I类PI3K的同种型[20]。
此外，雷帕霉素(雷帕霉素的机械靶标抑制剂(mTOR))迄今为止作为哺乳动物中潜在的抗衰老治疗剂具有最强的实验支持[21]。
另外，抑制细胞生长代表了治疗癌症的有效目标，设计抑制mTOR的新药物可能具有治疗价值。
因此，mTOR抑制剂有潜力提供具有用于治疗激酶相关病症或疾病的有用的、改进的药学性质的其他生物活性化合物。
此外，还需要在mTOR信号转导途径的上游或下游起作用的相关酶(例如，PI3K、AKT)的小分子抑制剂。
化合物5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H-嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺(化合物I，FT1518游离碱)首先在PCT/SG2010/000474(W02011078795)中进行了描述并且显示出作为用于治疗许多医学病症的药物活性剂的显著前景，并且，基于由该化合物所展示的活性谱，正在进行该化合物的临床开发。
化合物I
化学名称：5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[3，2，1)辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H-嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺
分子式：C20H26N8O
分子量：394.47
对于药物组合物的配制，必须可以以商业规模可靠地再生药物活性物质并且该药物活性物质必须足够稳固以耐受药物活性物质所暴露的条件。
此外，从制造的角度来看，药物活性物质的商业制造工艺是非常重要的，即，当采用相同的制造条件时，产生相同的化合物。
另外，药物活性物质必须以固体形式存在，并且制造条件的微小变化不应导致所产生的药物活性物质的固体形式的大变化。
另外，药物活性物质必须是稳定的。这对于通过掺入药物活性成分生产药物制剂来说是重要的。如果药物活性物质是吸湿的(“粘性的”)并且随着时间会吸水，则难以将药物活性物质配制成药物，因为每种剂量中的物质量会根据水合程度而有很大变化。此外，水合或固体形式的变化(“多晶型”)可以改变物理化学性质。
总之，针对药物制剂，药物活性剂的化学稳定性、固态稳定性和“保质期”是非常重要的因素。可取的是，药物活性剂和包含它的任何制剂都必须能够在相当长的时间内储存，而不会表现出任何物理化学特性变化，诸如，其活性、水分含量、溶解度特性、固体形式等。
关于5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H-嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺，在盐酸盐上进行了初步研究并且表明多晶型是普遍的，根据制造条件，发现该化合物采用一种以上的晶形。另外，观察到即使制造条件保持恒定，多晶型物的比例也因批次而异。从商业角度来看，这些批次间的不一致使得盐酸盐不太可取。
因此，需要开发5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H-嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的盐，这些盐克服或改善一个或多个上述问题。
总之，本领域迫切需要开发mTOR(包括mTORC1和mTORC2)和/或PI3K和/或DNA-PK的5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H-嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺小分子抑制剂的盐，其可以用于治疗疾病，诸如，动物和人类中广泛的癌症、血液和淋巴恶性肿瘤以及相关的过度增殖性疾病、免疫、基因侧化疾病、炎症、某些代谢疾病、心血管疾病、肥胖症、2型糖尿病、抗衰老治疗和神经疾病。
发明内容
根据示例性方面，本发明公开了可用作激酶抑制剂的氨基吡嗪嘌呤化合物。更具体地，本发明涉及5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H-嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺化合物，包括其药学上可接受的盐、制备方法、包含这些化合物的药物组合物、以及这些化合物在调节磷酸肌醇3-激酶(PI3K-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、DNA-PK和ATM激酶中的用途，并且可以用作治疗剂或诊断探针并用于多种增殖性病症或疾病的治疗，包括肿瘤、癌症、血液和淋巴恶性肿瘤、免疫和基因改变疾病、炎症、某些代谢疾病、心血管疾病、肥胖症、2型糖尿病和神经疾病以及衰老过程的调节。
在一个实施例中，本发明公开了化合物5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H-嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的草酸盐和乙磺酸盐(FT1518游离碱，初始前体)。
根据示例性方面，本发明涉及使用酸性抗衡离子探索的各种盐筛选实验，以评估FT-1518的成盐亲和力/倾向性。
根据进一步的示例性方面，本发明涉及成盐并且主要通过PXRD和质子NMR确认。盐筛选试验的结果和观察表明有形成甲苯磺酸盐、己二酸盐、甲磺酸盐、苹果酸盐、邻苯二甲酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、马来酸盐、硝酸盐、酒石酸盐、丙二酸盐、樟脑磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、硫酸盐和盐酸盐的可行性。可以通过使用从常见溶剂(此处为四氢呋喃)的沉淀来制备盐，例如，乙磺酸盐、苯磺酸盐、HCl、磺酸盐、硝酸盐。确认的盐中其余盐的制备可以通过在常见溶剂(丙酮)中进行溶剂蒸发(缓慢)来制备。
在一个实施例中，本发明涉及进行盐在10mM磷酸二氢钾缓冲液(pH 6.8)中的溶解度和纯度％(HPLC)、结晶度(PXRD)、质子NMR、吸湿性和假多晶型物倾向(动态蒸汽吸附)、熔点&热事件(DSC)、在熔点高达150℃之前的重量损失％(TGA)，以完全表征盐。所有盐的表征汇编用于多晶型物筛选和稳定性研究的初级盐选择。
在一个实施例中，本发明公开了所选盐(乙磺酸盐和草酸盐)的物理形式筛选，FT-I518乙磺酸盐和草酸盐的多晶型物筛选证实在实验中识别的新物理形式很少。
在一个特定实施例中，FT-I518乙磺酸盐主要形成三种形式：形式1、形式2和形式3。基于稳定性研究，FT-1518乙磺酸盐的形式1可以被确认为最常存在的物理形式。从除了乙醇之外的溶剂(乙酸乙酯和DCM)获得的形式2和形式3在暴露于40℃/75％RH的热量和湿度下7天时会转变回形式1的初始盐形式。在稳定性研究之后，只有在乙醇中冷却结晶得到的形式2保持不变。
在一个另外的实施例中，包含可接受的盐的药物活性组合物具有化学稳定性、固态稳定性、药物活性剂的“保质期”，而没有表现出物理化学特性变化，诸如，其活性、水分含量、溶解度特性、固体形式及其缺乏与5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的现有盐酸盐形式相关联的不一致性。
在一个特定实施例中，通过研究FT1518(碱)的细胞毒性、微粒体稳定性、Caco-2渗透性、血浆蛋白结合、静脉内和口服药代动力学特性、在雄性Sprague Dawley(SD)大鼠和雄性Balb/c小鼠中的FT1518-乙磺酸盐和FT1518-草酸盐、癌细胞系中FT-1518的抗增殖活性来在体内和体外完成盐的功效的药代动力研究。
在又一实施例中，与碱和草酸盐形式相比，5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的乙磺酸盐形式被发现作为乳腺癌(MCF-7)、结肠癌(HCT-16)和前列腺癌(PC-3)细胞中细胞生长的有效抑制剂。
在另外的实施例中，根据细菌回复突变试验的5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺及其优选的盐形式、以及FT 1518碱和盐形式在人类、大鼠和狗微粒体中显示出稳定性。
在又一实施例中，识别FT-1518草酸盐并且将其分离为4种物理形式，命名为形式A、形式B、形式C和形式D。当在40℃/75％RH的热量和湿度下暴露7天时，许多这些形式在稳定性研究期间转变回形式A的初始盐形式。在该时间段期间，只有从乙酸乙酯:水(9:1)浆液中获得的形式D保持不变。
在又一实施例中，选择FT1518的乙磺酸盐和草酸盐的合适的物理形式。
基于两种盐的各种物理形式的稳定性研究以及两种盐(FT-1518的乙磺酸盐和草酸盐)的物理形式在不同极性(从非极性到极性)的溶剂中的各种结晶过程，乙磺酸盐的形式1(模式1)和草酸盐的形式A似乎是最常发生且最稳定的形式。
在一些实施例中，盐是结晶的。
在一些实施例中，盐是1:1.125的乙磺酸盐(药物:抗衡离子的比例)。
在一些实施例中，盐是1:1.125的草酸盐(药物:抗衡离子的比例)。
在一些实施例中，乙磺酸盐在2θ标度值上也显示出清晰的X射线衍射峰。
在一些实施例中，乙磺酸盐试验的1H NMR(使用THF)在2.111、1.998和1.981处显示出主峰。
在一些实施例中，草酸盐在2θ标度值上也显示出清晰的X射线衍射峰。
在一些实施例中，草酸盐试验的1H NMR(使用THF)在2.0085处显示出主峰。
在又一实施例中，FT-1518乙磺酸盐：FT-1518乙磺酸盐的PXRD显示出特征性衍射图样。DSC热谱图显示在小于100℃时略微更宽的吸热峰(重结晶之后仅残留溶剂，残留溶剂可以在工艺开发中去除)，然后在231℃和246℃下有两个尖锐的吸热峰。TGA显示在高达125℃时重量损失为0.915％，表明没有溶剂化物或水合物形式。
在又一实施例中，FT-1518草酸盐：FT-1518草酸盐的PXRD显示出与乙磺酸盐不同的特征性衍射图样。DSC热谱图在117℃左右显示出一个吸热峰，然后是降解，表明吸热峰。TGA数据显示出当加热至125℃时重量损失大约为0.44％。
根据本发明的另一示例性方面，FT-1518盐的物理形式的稳定性研究：基于为了理解多晶型风险及其对稳定性的影响而执行的实验，FT-1518乙磺酸盐显示出非常低的多晶型风险。当使用各种结晶技术在各种溶剂中重结晶时，Ft-1518草酸盐显示出很少的多晶型物或物理形式。但是，仅在乙酸乙酯:水(9:1)浆液中，即使在40℃/75％RH下进行稳定性研究之后，新的物理形式仍然存在。
本发明还提供了一种包括上述盐的药物组合物。
在示例性实施例中，本发明描述了一种抑制蛋白激酶的方法，该方法包括将蛋白激酶或其片段或复合物或其功能等同物和/或其辅因子暴露于有效量的氨基吡嗪嘌呤化合物的药学上可接受的盐。
在本发明的另一示例性实施例中，描述了一种治疗或预防哺乳动物病症的方法，其中，抑制一种或多种蛋白激酶或其片段或复合物或其功能等同物预防、抑制或改善病症的病理或症状，该方法包括施用治疗有效量的氨基吡嗪嘌呤化合物的药学上可接受的盐。
在本发明的一个实施例中，描述了一种治疗疾病病症的方法，其中，该病症选自由以下组成的组：炎症、类风湿性关节炎、牛皮癣、动脉粥样硬化、结肠炎、炎性肠病、胰腺炎、多发性硬化、自身免疫疾病、狼疮、过敏性脑脊髓炎、移植排斥、子宫内膜异位、平滑肌瘤、多囊卵巢综合征、错构瘤、结节性硬化症、阿尔茨海默症、亨廷顿舞蹈病、帕金森病、胰岛素依赖型糖尿病、肥胖症、糖尿病视网膜病变、心肌肥厚和常染色体显性多囊肾病。
本发明的又一示例性实施例描述了过度增殖性疾病，其中，该过度增殖性疾病包括：诸如肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质癌、神经母细胞瘤、嗜铬细胞瘤、骨瘤、骨样骨瘤、骨软骨瘤、成骨细胞瘤、内生软骨瘤、骨巨细胞瘤、动脉瘤骨囊肿、骨纤维异常增生、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、纤维肉瘤、胶质瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤和神经鞘瘤、优选的间变性星形细胞瘤、星形细胞瘤、中枢神经细胞瘤、脉络脉络丛癌、脉络脉络丛乳头状瘤、脉络丛肿瘤、胚胎发育不良神经上皮肿瘤、室管膜瘤、纤维星形细胞瘤、巨细胞胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(GBM)、脑胶质瘤病、胶质肉瘤、血管外皮细胞瘤、成神经管细胞瘤、髓上皮瘤、脑膜癌病、神经母细胞瘤、神经细胞瘤、少突星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、视神经鞘膜瘤、小儿室管膜瘤、毛细胞性星形细胞瘤、松果体母细胞瘤、松果体细胞瘤、多形性间变性神经母细胞瘤、多形性黄色星形细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、蝶骨嵴脑膜瘤、室管膜下巨细胞星形细胞瘤、室管膜下瘤、三侧视网膜母细胞瘤的癌症和肿瘤，胰腺、肝脏、乳腺、前列腺癌，以及睾丸、卵巢、肠道、胃、子宫、子宫内膜、颈部、咽喉、膀胱、外阴起源的肿瘤，血癌，白血病，淋巴癌，B细胞恶性肿瘤，华氏巨球蛋白血症，多发性骨髓瘤，肺癌，肾癌，宫颈癌，结肠癌和直肠癌，皮肤癌，黑素瘤和各种其他癌症，其中，PI3K和mTOR机制的组合调节将在各种非限制性示例中带来显著的改善和治疗效率。
本发明的又一示例性实施例描述了药物组合物和盐，其中，该药物组合物和盐可以是各种形式，诸如，单独与赋形剂、稀释剂、载体、保湿剂、胶囊、片剂、注射剂(静脉内、肌肉、皮下注射剂)、口服、外用的组合，其与多核苷酸、其他生物制剂组合，用于靶向给药、粉末、悬浮液、凝胶、水凝胶、锭剂，与冷沉淀、放射疗法、粘合剂的组合，用于人类、动物和这种其他生物体的治疗、姑息治疗，其中，该药物组合物和盐可以用于减轻可以通过调节PI3K和/或mTOR途径来控制的各种疾病。
本发明还描述了神经疾病，其中，神经疾病包括阿尔茨海默症、帕金森病、亨廷顿舞蹈病和皮克病、认知障碍和癫痫炎性疾病，包括肠道易激综合征、溃疡性结肠炎、克罗恩病、类风湿性关节炎、牛皮癣，但是不仅限于这些。
本发明的又一示例性实施例涉及化合物在制备用于治疗动物病症的药物中的用途，其中，抑制一种或多种蛋白激酶或其片段或复合物或其功能等同物能预防、抑制或改善病症的病理或症状。
在本发明的另一实施例中，提供了一种治疗或预防医学病症的方法，包括向有此需要的患者施用治疗有效量的本发明的盐。在一些实施例中，医学病症是癌症和相关的过度增殖性疾病、免疫疾病、炎症、某些代谢疾病、心血管疾病、肥胖症、2型糖尿病、神经疾病和抗衰老。
在一个实施例中，本发明提供了本发明的盐在治疗医学病症中的用途。在一些实施例中，医学病症是癌症和相关的过度增殖性疾病、免疫疾病、炎症、某些代谢疾病、心血管疾病、肥胖症、2型糖尿病和神经疾病。
在一个另外的实施例中，本发明提供了本发明的盐在制备用于治疗医学病症的药物中的用途。在一些实施例中，医学病症是癌症和相关的过度增殖性疾病、免疫疾病、炎症、某些代谢疾病、心血管疾病、肥胖症、2型糖尿病和神经疾病。
总之，本发明涉及可用作激酶抑制剂的氨基吡嗪嘌呤化合物。更具体地，本发明涉及化合物5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H-嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺(FT1518游离碱，初始前体)的草酸盐和乙磺酸盐，包括其药学上可接受的盐、制备方法、包含这些化合物的药物组合物以及这些化合物在调节磷酸肌醇3-激酶(PI3K-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、DNA-PK和激酶中的用途，并且可以用作治疗剂或诊断探针并用于多种增殖性病症或疾病的治疗，包括肿瘤、癌症、免疫疾病、炎症、某些代谢疾病、心血管疾病、肥胖症、2型糖尿病和神经疾病。
下面参照用于说明的示例描述了本发明的多个方面。然而，相关领域的技术人员将认识到，可以在没有一个或多个具体细节的情况下或者利用其他方法、组件、材料等实践本发明。其他情况下，没有详细地示出众所周知的结构、材料或操作以避免混淆本发明的特征。此外，所描述的特征/方面可以按照各种组合来实践，但是为了简明起见，本文仅描述了一些组合。
附图说明
图1描绘了根据实施例的FS00067855阳离子…乙磺酸根阴离子，其存在于晶格N-H…O中并且伸展在1d晶格N-H…O相互作用中。
图2描绘了根据实施例的结合在乙磺酸盐晶体的晶格中的水分子的说明性示例。
图3描绘了根据实施例的具有乙磺酸盐晶体的氢的ORTEP结构。
图4描绘了根据实施例的乙磺酸盐的结构精修。
图5描绘了根据实施例的FS00067855阳离子…草酸根阴离子和甲醇溶剂化物，其分别存在于晶格N-H…O和O-H…O中。
图6描绘了根据实施例的不含氢的草酸盐的ORTEP结构的说明性示例。
图7描绘了根据实施例的具有氢的草酸盐的ORTEP结构。
图8描绘了根据实施例的草酸盐的结构精修。
在附图中，相同的附图标记通常表示相同的、功能类似和/或结构类似的元件。元件第一次出现的附图通常由对应附图标记的最左边的数字指示。
具体实施方式
要理解的是，本公开不限于适用于在以下说明中阐述或在附图中图示的构造细节和组件布置。本公开能够具有其他实施例，并且能够以各种方式实践或执行。而且，要理解的是，本文使用的措辞和术语是为了描述的目的，并且不应该被认为是限制性的。
在本文中使用“包括”、“具有”及其变型意味着涵盖其后列举的项及其等同物以及附加项。本文中的术语“一”和“一个”不表示数量的限制，而是表示存在至少一个所引用的项。进一步地，在本文中使用术语“第一”、“第二”和“第三”等不表示任何顺序、数量或重要性，而是用于将一个元件与另一元件区分开。
如本文使用的，单数形式“一”、和“该”包括单数和复数个所指物，除非上下文另有明确规定。通过示例，“剂量”是指一个或多于一个剂量。
本文使用的术语“包括”与“包含”同义，并且是包含性的或开放式的并不排除另外的、未引用的构件、元件或方法步骤。
本说明书中引用的所有文献均通过引用全部并入本文。具体地，本文具体引用的所有文献的教导通过引用并入本文。
参照附图描述本发明的示例实施例。
在附图中，相同的附图标记通常表示相同的、功能类似和/或结构类似的元件。元件第一次出现的附图通常由对应附图标记的最左边的数字指示。
定义
除非另有说明，否则以下术语在本申请中如下面所定义的那样使用。
术语“肿瘤”或“肿瘤组织”是指由不受控制的细胞分裂引起的异常组织块。肿瘤或肿瘤组织包括“肿瘤细胞”，其是具有异常生长特性且没有功能性身体机能的肿瘤细胞。肿瘤、肿瘤细胞和肿瘤组织可以是良性或恶性的。
短语“差异地存在”是指与对照受试者相比，取自患者的样品中存在标记物的量的差异。生物标记物可以在频率、数量或两个方面都差异地存在。
“诊断”表示识别病理状况。
术语“检测”等可以用于检测标记物或生物标记物的上下文中。
标记物的“测试量”是指待测样品中存在的标记物的量。测试量可以是绝对量(例如，μg/ml)或相对量(例如，信号的相对强度)。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用以指代氨基酸残基的聚合物。例如，可以通过添加碳水化合物残基来修改“多肽”、“肽”和“蛋白质”以形成糖蛋白。
术语“受试者”、“患者”或“个体”通常是指人类或哺乳动物。“样品”是指多核苷酸、抗体片段、多肽、肽类、基因组DNA、RNA或cDNA，多肽、细胞、组织及其衍生物可以包括体液或可溶性细胞制剂、或培养基、染色体、细胞器或者从细胞分离或提取的膜。
如本文使用的，“药学上可接受的盐”是指保留上述化合物的所需生物活性的盐，并且包括药学上可接受的酸加成盐和碱加成盐。如化学式(I)所示的化合物的合适的药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸或有机酸制备。例如，无机酸是盐酸、硫酸和磷酸。适当的有机酸可以选自脂族、脂环族、芳族、杂环羧酸和磺酸类有机酸，其示例为甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、烷基磺酸、芳基磺酸[22]。在固体试剂的情况下，本领域技术人员要理解的是，本发明化合物、试剂和盐可以按照不同的结晶或多晶形式存在，所有这些形式都在本发明的范围和指定化学式内。
如本文使用的，“前药”是指通常通过代谢方式(例如，通过水解、还原或氧化)在生物系统内进行转化的化合物。例如，包含羟基的化学式(I)的化合物的酯前药可以通过体内水解转化为母体分子[23][24]。
如本文使用的，“治疗有效量”或“有效量”是足以实现有益或期望的临床结果的量。有效量可以分一次或多次给药施用。有效量通常足以改善、稳定、逆转、减轻、减缓或延迟疾病状态的进展。
如本文使用的，“功能等同物”是指本文描述的特定蛋白激酶物种的变型。此外，激酶可以具有同种型，使得给定激酶同种型的一级、二级、三级或四级结构与原型激酶不同，分子保持作为蛋白激酶的生物活性。同种型可能来自群体内的正常等位变异，并且包括诸如氨基酸取代、添加、截短、缺失或重复等突变。另外，“功能等同物”还可以包括在转录水平生成的变型。其他功能等同物可以包括具有改变的转译后修饰的激酶。
向人类或动物施用所述化合物可以通过任何可接受的肠内给药方式，诸如，口服或直肠给药，或者通过肠胃外给药，诸如，皮下、肌肉、静脉内和皮内途径给药。注射可以是推注或者经由恒定或间歇输注。活性化合物包括在药学上可接受的载体或稀释剂中，其量足以向患者递送治疗有效剂量。
可以按照使化合物具有生物可利用性的任何形式或方式施用化合物。制备制剂领域的技术人员可以根据所选化合物的特定特征、待治疗病症的阶段、待治疗的病症和其他相关情况来容易地选择适当的给药形式和方式。
本公开还提供了一种药物包或药盒，其包括装有药物组合物的一种或多种成分的一个或多个容器。在这种药物包或药盒中，可以找到具有单位剂量或更多的药学上可接受的化合物的容器。药盒可以包括组合物，该组合物包括有效剂量的化合物作为浓缩物(包括冻干组合物)，其中，可以在使用之前进一步稀释浓缩物，或者可以按照使用浓度来提供浓缩物，其中，小瓶可以包括一个或多个剂量。此外，在药盒中，可以在无菌小瓶中提供单剂量，使得医生可以直接采用小瓶，其中，小瓶将具有所需量和浓度的化合物。另外，还可以与这种容器一起提供书面材料，诸如，使用说明书或者由管理药品或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定的通知，该通知反映了该机构批准制造、使用或销售以用于人类或动物给药。
化合物可以与一种或多种另外的药物组合一起使用或施用以治疗所提到的病症/疾病。组分可以按照相同的制剂或不同的制剂施用。如果按照不同的制剂施用，则化合物可以与其他药物依次或同时施用。当与一种或多种另外的药物组合施用时，化合物可以用于组合治疗。因此，一种或多种化合物可以同时(作为组合制剂)或依次施用以提供所需效果。当每种化合物的治疗效果不同并且两种药物的组合效果提供改善的治疗效果时，这是特别可取的。
用于肠胃外注射的本教导的药物组合物包括药学上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液以及用于在使用之前重构为无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。例如，合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或媒介物包括水、乙醇、多元醇(诸如，丙烯、乙二醇、甘油、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油和可注射的有机酯，诸如，油酸乙酯。通过使用包衣材料(例如，卵磷脂)，通过在分散的情况下保持所需的粒度以及通过使用表面活性剂，可以保持药物组合物的适当流动性。
这些组合物还可以包含佐剂，诸如，防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过包括各种抗菌剂和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)，可以确保对微生物的活动的预防。还可能需要包括等渗剂，诸如，糖、氯化钠等。通过包括延迟吸收的试剂(诸如，单硬脂酸铝和明胶)，可以实现可注射药物形式的延长吸收。
如果需要，并且为了更有效地分布，可以将化合物掺入缓释或靶向递送系统，诸如，聚合物基质、脂质体、纳米颗粒和微球。
可注射制剂可以例如通过细菌截留过滤器过滤或者通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，该灭菌剂可以仅在使用之前溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这种固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体(诸如，柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或a)填充剂或增量剂，诸如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇，b)粘合剂，诸如，例如，羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂，诸如，甘油，d)崩解剂，诸如，琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞剂，诸如，石蜡，f)吸收促进剂，诸如，季铵化合物，g)润湿剂，诸如，例如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，诸如，高岭土和膨润土，以及i)润滑剂，诸如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物混合。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包括缓冲剂。
类似类型的固态组合物也可以用作使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。
片剂、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和外壳来制备，诸如，肠溶包衣和药物配制领域熟知的其他包衣。它们可以可选地包含乳浊剂，并且还可以是仅仅或优选地在肠道的某一部分可选地以延迟方式释放活性成分的组合物。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型可以包含本领域常见的惰性稀释剂，例如，水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，诸如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽、花生、玉米、胚芽、橄榄、蓖麻和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脂肪酸脱水山梨糖醇的酯及其混合物。
除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包括佐剂，诸如，润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
除了活性化合物之外，悬浮液可以包含悬浮剂，例如，乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄芪胶及其混合物。
用于直肠或阴道给药的组合物优选为栓剂，其可以通过将本发明的化合物与合适的无刺激性赋形剂或载体(诸如，可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备，该赋形剂或载体在室温下为固体但在体温下为液体，因此在直肠或阴道腔内融化并释放出活性化合物。
用于局部施用本发明的化合物的剂型包括粉剂、贴剂、喷雾剂、软膏和吸入剂。在无菌条件下将活性化合物与药学上可接受的载体和可能需要的任何所需的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。
施用的化合物的量将优选地治疗和减轻或缓解病症。治疗有效量可以由主治诊断医生通过使用常规技术和观察在类似情况下获得的结果容易地确定。在确定治疗有效量时，要考虑许多因素，包括但不限于动物种类、其大小、年龄和一般健康状况、所涉及的具体病症、病症的严重程度、待治疗患者的反应、施用的具体化合物、给药方式、所施用制剂的生物利用度、所选剂量方案、其他药物的使用和其他相关情况。
实验实施例：
化合物FT-1518本质上是结晶的，并且发现在正常室温条件下是非吸湿性的。使用各种方法对该药物的结晶形式进行盐筛选研究，然后进行评估以确认成盐。
该化合物易溶于二甲基亚砜、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、乙醇、二氯甲烷、甲醇、1,4-二恶烷、四氢呋喃、丙酮、异丙醇；溶于乙酸乙酯、乙腈、甲苯和乙酸异丙酯、0.11N HCl；微溶于甲基叔丁基醚；以及不溶于乙醚、正己烷、正庚烷和净化水。
基于化合物的pKa(碱性)值在1.70和4.07附近选择酸性抗衡离子以执行盐筛选。基于盐筛选的各种方法(诸如，沉淀、溶剂蒸发和反溶剂沉淀技术)，进行了许多实验。使用分析技术(诸如，粉末XRD和质子NMR)来确认成盐。盐筛选试验的结果和观察证实了形成甲苯磺酸盐、己二酸盐、甲磺酸盐、苹果酸盐、邻苯二甲酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、马来酸盐、硝酸盐、酒石酸盐、丙二酸盐、樟脑磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、硫酸盐和盐酸盐的可能性。
基于在pH 6.8缓冲液中的溶解度，考虑草酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐和马来酸盐用于进一步评估。基于改善了许多倍的溶解度和FT-1518的入选盐的2％w/v水溶液的pH，选择FT-1518的乙磺酸盐和草酸盐用于进一步筛选物理形式和形式选择。在乙磺酸盐和草酸盐之间，将基于物理化学和药代动力性质(已经由FTG进行)选择一种盐。
FT-1518乙磺酸盐和草酸盐本质上是结晶的，并且发现在环境条件下是非吸湿性的。使用各种结晶条件和溶液介导的物理形式筛选条件对这些盐的结晶形式进行物理形式筛选研究，然后评估这些实验期间的任何物理形式变化。
FT-1518乙磺酸盐和草酸盐的多晶型筛选识别了新的物理形式存在。与有机溶剂相比，所识别的盐在水性介质中显示出更高的溶解度。
FT-1518乙磺酸盐证明在用于重结晶的大多数溶剂中存在形式1(如指定的那样)。在从THF、丙酮、乙醇、乙腈、甲醇、THF:水(9:1)进行溶剂蒸发期间、在THF、甲苯和THF:甲苯(1:1)中进行浆液实验期间，在溶剂中形成形式1。它还以两种其他形式存在：形式2和形式3。在乙酸乙酯(在25℃和40℃下的浆液)、二氯甲烷和乙醇(冷却结晶)中获得形式2。然而，在甲醇中获得形式3(冷却结晶)。基于稳定性研究，FT-1518乙磺酸盐的形式1被推断为最常出现的物理形式，而形式2 3在暴露于热量和湿度(40℃/75％RH)7天时转变回初始盐形式1。在稳定性研究之后，在乙醇中冷却结晶获得的形式2保持不变。
识别FT-1518草酸盐并将其分离为4种物理形式，命名为形式A、形式B、形式C和形式D。FT-1518草酸盐在大多数使用各种方法进行重结晶的溶剂中显示出形式A。当使用溶剂蒸发(缓慢)方法在丙酮、乙腈、乙醇和THF中进行化合物的重结晶时，分离出形式A；乙酸乙酯和正己烷使用浆液法；在乙腈和四氢呋喃中使用冷却结晶。在使用溶剂蒸发方法在1,4-二恶烷中重结晶时仅分离出形式B。在溶剂蒸发和冷却结晶技术中都可以在甲醇中仅分离出形式C。在乙酸乙酯和水(9:1)浆液方法中仅分离出形式D。当在40℃/75％RH的热量和湿度下暴露7天时，除了在乙酸乙酯:水(9:1)浆液中获得的形式D之外的所有形式在稳定性研究期间转变回形式A。
表征方法
通过TGA进行热分析(制造商：TA Instruments，型号：Q5000)
在TA Instruments Q500仪器上进行热重分析(TGA)。在标准铝盘中使用约5至10mg的样品大小。在25mL/min的干燥氮气下以10℃/min将样品从环境温度加热至300℃。
通过DSC进行热分析(制造商：TA Instruments，型号：Q2000)
在TA Instruments Q2000仪器上进行差示扫描量热法(DSC)分析。称取约3至5mg的样品大小，放入标准铝DSC盘中；该盘用销孔密封。在50mL/min的干燥氮气下以10℃/min将样品从环境温度加热至300℃。如果由于挥发性液体或气体而发生干扰，则将进行开放盘分析。
pXRD(制造商：Bruker，型号：D8 Advance)
使用配备有90位自动转换器旋转样品台和LYNXEYE检测器的Bruker D8 Advance衍射仪获得X射线粉末衍射数据。辐射为电压和电流分别为40kV和40mA。在2.000°至40.00°2θ的室温下收集数据；步长为0.02°，并且步长时间为0.2s。衍射光束配备有0.23soller狭缝可编程发散(0.3°)和防散射(3.96°)狭缝和0.02mm镍过滤器。在零背景样品架上制备样品，并以每分钟15转的旋转时间旋转载物台。
通过HPLC进行溶解度测定和化学纯度测定
下面给出的参数用于FT-1518及其盐的HPLC分析，用于测定溶解度和化学纯度。
表A：设备列表
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动态/重量蒸汽吸附(DVS)分析
使用来自TA仪器的VTI-SA+-水分吸附分析仪获得吸附等温线。通过仪器对照将样品温度保持在25℃。通过混合干燥和潮湿氮气流来控制湿度，总流速为200mL/分钟。通过微量天平不断监测样品根据％RH的重量变化。
通常，在环境条件下，在配衡的网状不锈钢篮中称取5至20mg的样品。在40％RH和25℃下加载和卸载样品。如所概述的那样执行水分吸附等温线。标准等温线在25℃下以10％RH间隔在0至90％RH范围内执行。在40℃下将样品从环境室条件干燥至0％RH。
表征
结晶形式的表征
使用pXRD、DSC、TGA、吸附-解吸等温线、质谱+ESI扫描模式)、FT-1518的1H-NMR(在DMSO-D6中)研究结晶药物物质FT1518的固态性质。在图1和2中分别显示了质谱+ESI扫描模式)、FT-1518的1H-NMR(在DMSO-D6中)的结果。
在表1中示出了药物FT 1518物质的评估初始参数。
表1：结晶形式的药物物理参数
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FT-1518在各种介质中的定性溶解度
将2mg量的API加入玻璃小瓶中，在涡旋的同时添加少量溶剂，直至获得澄清溶液(在室温下或加热至50至60℃)。在表2中总结了药物在各种溶剂中的近似定性溶解度。
表2：定性溶解度研究的总结表
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盐筛选
抗衡离子的选择
基于定量溶解度数据，发现该化合物几乎不溶于净化水并且可溶于有机溶剂中。选择酸性抗衡离子是因为弱碱性pKa值为1.70和4.07(预测值为0.43和4.07)。选择酸性抗衡离子以筛选FT1518化合物的成盐倾向。理论上，pKa值小于化合物的碱性pKa值2个单位的抗衡离子对于成盐来说是理想的。
表3：用于盐筛选的所选抗衡离子表
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盐可行性试验
优化药物和抗衡离子可溶的常见溶剂方法并且执行盐筛选。所以，抗衡离子的定性溶解度也在一些溶剂中执行。按化学计量，选择1:1.125的药物和抗衡离子比例以在盐筛选实验期间制备溶液。
表4：单盐筛选所需的化学计量(1:1.125)当量的抗衡离子
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注意：-NA-不适用
在执行盐筛选之前，在各种抗衡离子溶液中检查FT-I518的溶解度，以获得各个抗衡离子中成盐的可行性的估计。
表5：FT1518在包含抗衡离子的水性介质中的定性溶解度研究的总结表
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使用常规溶剂/溶剂混合物条件，使用各种组合执行成盐的各种方法，比如，冷却结晶、溶剂蒸发(缓慢)、反溶剂沉淀和从溶液进行盐沉淀。
盐筛选试验
使用最常见的溶剂技术。选择药物和抗衡离子分别可溶解的常见溶剂体系。
针对少数盐筛选试验，还评估了反溶剂沉淀和离子交换方法。
添加了将药物(约30mg)溶解在适量的有机溶剂和抗衡离子溶液中的常见方法。然后，在50℃至60℃下加热几分钟并使其平衡至室温，观察是否由于结晶或溶液沉淀而发生任何成盐。
所筛选盐的初始筛选名单
基于溶解度、2％w/v水溶液的pH、化学和物理稳定性等特性，筛选出制备的盐。
首先，使用HPLC，在pH6.8 0.01M磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钾缓冲液)中测定所形成的盐的平衡溶解度和化学％纯度。
表6：所筛选盐的溶解度和化学纯度％
盐的名称 pH 6.8缓冲液中的溶解度(mg/mL) 纯度％
FT-1518的游离碱 0.02 97.22
马来酸盐 1.87 96.99
甲磺酸盐 5.85 96.77
酒石酸盐 8.54 96.82
琥珀酸盐 0.34 96.80
富马酸盐 2.62 97.29
己二酸盐 0.19 97.63
草酸盐 10.21 96.68
甲苯磺酸盐 0.88 96.27
硝酸盐 0.47 95.04
丙二酸盐 1.55 97.56
樟脑磺酸盐 8.32 96.56
HCl盐 0.57 96.89
乙磺酸盐 77.98 97.75
硫酸盐 35.38 97.34
苯磺酸盐 5.5 96.54
基于溶解度，盐的偏好如下面所给出的，其表明溶解度增加了许多倍或显著增加：
乙磺酸盐>硫酸盐>草酸盐>酒石酸盐>樟脑磺酸盐>甲磺酸盐>苯磺酸盐>富马酸盐>马来酸盐>丙二酸盐
基于溶解度的入选盐在开放条件下在40℃/75％RH下保持7天，然后通过HPLC、PXRD(以便理解物理形式风险)和2％w/v水分散体/溶液中的pH来分析％纯度。
表7：基于溶解度和纯度％入选的盐在40℃/75％RH下的1周稳定性
盐的名称 纯度％ XRD 2％w/v水分散体/溶液的pH
FT-1518 97.82 与初始形式相同 -
草酸盐 97.04 与初始形式相同 2.6(分散)
硫酸盐 97.85 与初始形式相同 1.8(可溶)
富马酸盐 95.81 与初始形式相同 -
酒石酸盐 96.89 与初始形式相同 -
甲磺酸盐 97.07 与初始形式相同 2.2(分散)
樟脑磺酸盐 97.00 与初始形式相同 2.6(湿质量)
乙磺酸盐 98.07 与初始形式相同 2.1(可溶)
苯磺酸盐 98.22 一些形式转化(多晶型的风险) 2.4(分散)
入选盐的总结：
基于稳定性和溶解度，
乙磺酸盐>硫酸盐>草酸盐>樟脑磺酸盐>甲磺酸盐>苯磺酸盐将是盐选择的选择顺序。
基于pH观察，偏好顺序
草酸盐>樟脑磺酸盐>苯磺酸盐>甲磺酸盐>乙磺酸盐>硫酸盐
优选顺序：
草酸盐>乙磺酸盐>樟脑磺酸盐>甲磺酸盐＝苯磺酸盐
乙磺酸盐试验
表8：通过乙烷磺酸盐进行的盐可行性试验的总结表
乙磺酸盐试验的总结
当从四氢呋喃图3、4和5中沉淀时，通过PXRD和1H NMR证实了乙磺酸盐。
草酸盐试验
表9：通过草酸盐进行的盐可行性试验的总结表
草酸盐试验的总结
当从甲醇和IPA重结晶时，通过PXRD和1H NMR证实了草酸盐。图6、7、8和9。
所选盐的物理形式筛选
为了继续进行盐的选择和物理形式筛选以便进一步开发，筛选FT-1518的乙磺酸盐和草酸盐。
FT-1518的乙磺酸盐和草酸盐的初始表征
FT-1518乙磺酸盐的表征
使用pXRD、DSC和TGA研究非晶药物物质FT-1518的固态性质，结果分别显示在针对乙磺酸盐的图10、11和12中和针对草酸盐的图13、14和15中。
初始表征的总结：
FT-1518乙磺酸盐：FT-1518乙磺酸盐的PXRD显示出特征性衍射图样。DSC热谱图显示在小于100℃时略微更宽的吸热峰(重结晶之后仅残留溶剂，残留溶剂可以在工艺开发中去除)，然后在231℃和246℃下有两个尖锐的吸热峰。TGA显示在高达125℃时重量损失为0.915％，表明没有溶剂化物或水合物形式。
FT-1518草酸盐：FT-1518草酸盐的PXRD显示出与乙磺酸盐不同的特征性衍射图样。DSC热谱图在117℃左右显示出一个吸热峰，然后是降解，表明吸热峰。TGA数据显示出当加热至125℃时重量损失大约为0.44％。
FT-1518游离碱、乙磺酸盐和草酸盐的溶解度
定性溶解度：
将称取量的API加入玻璃小瓶中，在涡旋的同时添加少量溶剂，直至获得澄清溶液(在室温下或加热至50℃至60℃)。在表10、11和12中分别总结了FT-1518的游离碱、乙磺酸盐和草酸盐在各种溶剂中的近似动力学溶解度。
表10：游离碱的动力学/视觉溶解度研究的总结表
表11：乙磺酸盐的动力学/视觉溶解度研究的总结表
表12：草酸盐的动力学/视觉溶解度研究的总结表
FT-1518的盐和游离碱的pH与溶解度研究：
在2mL体积的缓冲液(pH为1.2至7.4)和净化水中，增量地添加化合物(游离碱或乙磺酸盐或草酸盐)，直至化合物在介质中不再进一步溶解，并且化合物在溶液中保持不溶解或过量。将样品在环境室温下保持过夜以饱和/平衡。通过0.45μm PVDF或尼龙膜过滤器过滤分散体，并使用RP-HPLC分析滤液以测定化合物在各种缓冲液和净化水中的溶解度。
表13：pH与溶解度研究的总结表
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FT-1518乙磺酸盐的物理形式筛选研究
FT-1518乙磺酸盐的冷却结晶
通过在50℃至55℃下加热，将称取量的药物少量(足以溶解API的体积)溶解在溶剂中。获得的澄清溶液保持在冷藏条件下进行蒸发。在表14中提到了执行冷却结晶的实验条件。
表14：FT-1518乙磺酸盐的冷却结晶实验
样品 体积(mL) 初始 1天 3天
DCM 10 可溶 形成晶体 形成晶体
乙醇 4 可溶 形成晶体 形成晶体
甲醇 2 可溶 形成晶体 形成晶体
乙腈 1 可溶 仍然是溶液 仍然是溶液
在图17至22中示出了通过冷却结晶实验进行的物理形式筛选样品的PXRD、TGA和DSC结果的叠加。
表15：FT-1518乙磺酸盐的冷却结晶实验的结果
通过冷却结晶进行的FT-1518乙磺酸盐的多晶型筛选的总结：
在乙醇和DCM的结晶样品中获得新形式。基于甲醇结晶样品的DSC，推断出可以结晶成具有更高的单一熔点的形式，在甲醇中最稳定的FT-1518的乙磺酸盐形式。
FT-1518乙磺酸盐的溶剂蒸发筛选
通过在50℃至55℃下加热，将化合物溶解在各种溶剂中以制备溶液。然后，在热板上在50℃下加热以蒸发溶剂以浓缩溶液并使其处于室温下直至完全蒸发掉溶剂或在浓缩时发生重结晶。在表16中提到了实验的细节。在图23至33中分别示出了PXRD、DSC和TGA结果的叠加。
表16：FT-1518乙磺酸盐的溶剂蒸发实验
样品 体积(mL) 初始 1小时 3天
丙酮 8 分散 分散 形成晶体
1,4-二恶烷 21 不溶 不溶 形成晶体
DCM 10 可溶 可溶 形成晶体
乙醇 4 可溶 可溶 形成晶体
甲醇 2 可溶 可溶 形成晶体
乙腈 1 可溶 可溶 形成晶体
表17：FT-1518乙磺酸盐的溶剂蒸发实验的结果
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通过溶剂蒸发进行的FT-1518乙磺酸盐的多晶型筛选的总结：
在除了DCM之外的各种溶剂中，在研究期间未观察到多晶型物的变化。因此，在这些实验中获得的所有残基可以是稳定形式。在DCM样品中观察到几个峰的变化。
FT-1518乙磺酸盐的浆液转化实验
使用溶剂、水性介质和溶剂:水二元混合物评估盐的水合物和溶剂化物形成倾向。将药物物质分散在水和四氢呋喃的二元混合物、溶剂中，并使用具有过量药物物质的瓶旋转装置在25℃和40℃下进行浆液转化7天。
表18中列出了所执行的实验。在室温和40℃下从悬浮液中分离固体，空气干燥并通过DSC、TGA和pXRD分析，并且其叠加分别在图34至44中显示并在表19中汇编。
表18：FT-1518乙磺酸盐的浆液转化(水合)实验
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表19：FT-1518乙磺酸盐的浆液转化实验的结果
DT-1518乙磺酸盐的假多晶型形式筛选的总结：
25℃下的浆液：在各种溶剂中，在研究期间未观察到多晶型物的变化。因此，在这些实验中获得的所有残基可以是稳定形式。
40℃下的浆液：在各种溶剂中，在研究期间未观察到多晶型物的变化。在乙酸乙酯的浆液中可能存在新的形式。即使在25℃下，该样品也显示出接近8°衍射角的清晰分裂。
FT-1518草酸盐的物理形式筛选研究
FT-15185草酸盐的冷却结晶
通过在50℃至55℃下加热，将称取量(75mg)的药物物质少量(足以溶解API的体积)溶解在溶剂中。获得的澄清溶液保持在冷藏条件下进行蒸发。在表20中提到了执行冷却结晶的实验条件。
表20：FT-1518草酸盐的冷却结晶实验
样品 体积(mL) 初始 2天
四氢呋喃(THF) 5 可溶 形成晶体
甲醇 8 可溶 形成晶体
乙醇 8 可溶 形成晶体
乙腈 1.3 可溶 形成晶体
在图45至53中示出了通过冷却结晶实验的物理形式筛选样品的PXRD、TGA和DSC结果的叠加。
表21：FT-1518草酸盐的冷却结晶实验的结果
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通过冷却结晶的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的总结
在表46中总结了FT-1518草酸盐的冷却结晶的结果。在甲醇、乙腈和乙醇的结晶样品中可能形成新形式。这通过PXRD中的新衍射图样和DSC的变化得到证实。
FT-1518草酸盐的溶剂蒸发筛选
通过在50℃至55℃下加热，将化合物(大约75mg)溶解在各种溶剂中以制备溶液。然后，在热板上在50℃下加热以蒸发溶剂以浓缩溶液并使其处于室温下直至完全蒸发掉溶剂或在浓缩时发生重结晶。在表22中提到了实验的细节。在图54至64中分别示出了PXRD、DSC和显微镜结果的叠加。
表22：FT-1518草酸盐的溶剂蒸发实验
样品 体积(mL) 初始 1小时 2天
丙酮 20 可溶 沉淀 形成晶体
1,4-二恶烷 10 可溶 沉淀 形成晶体
THF 5 可溶 可溶 形成晶体
甲醇 8 可溶 可溶 形成晶体
乙醇 8 可溶 可溶 形成晶体
乙腈 1.3 可溶 可溶 形成晶体
表23：FT-1518草酸盐的溶剂蒸发实验
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通过溶剂蒸发进行的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的总结：
在各种溶剂中执行FT-1518的草酸盐的溶剂蒸发实验。从PXRD和DSC获得的结果显示，在从THF、甲醇、1,4-二恶烷和乙醇获得的样品中观察到一些多晶型变化。
FT-1518草酸盐的浆液转化实验
在少数溶剂中评估化合物的假多晶型物(溶剂化物或水合物)形成倾向。将药物物质(大约75mg)分散在溶剂中，并使用具有过量药物物质的瓶旋转装置在25℃和40℃下进行浆液转化7天。在表50中示出了实验细节。在图65至78中示出了PXRD、TGA和DSC的结果。
表24：FT-1518草酸盐的浆液转化(溶剂化物形成)实验
表25：40℃下的FT-1518乙磺酸盐的浆液转化实验的结果
通过FT-1518草酸盐进行的浆液转化的溶剂形式筛选的总结：
25℃下的浆液：在25℃下在乙酸乙酯:水(90:10)浆液样品中可能存在新的多晶型形式。在乙酸乙酯和正己烷中，在这些实验中获得的残基可以是稳定形式。
40℃下的浆液：在25℃下在乙酸乙酯:水(90:10)浆液样品中可能存在新的多晶型形式，与在25°浆液中获得的类似。在乙酸乙酯和正己烷中，在这些实验中获得的残基可以是稳定形式。
为FT-1518的乙磺酸盐和草酸盐分配的模式
为来自不同筛选实验的结晶样品分配各种模式，以分别识别片剂号26和27中的FT-1518的乙磺酸盐和草酸盐的物理形式。
表26：为FT-1518乙磺酸盐分配的模式
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表27：为FT-1518草酸盐分配的模式
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固态稳定性
稳定性研究设计
将从各种结晶方法中结晶的物理形式在开放条件下暴露于40℃/75％RH 7天以理解在热量和湿度存在下新物理形式的物理稳定性并且还知道是否存在稳定形式的FT-1518的乙磺酸盐和草酸盐的任何形式转化。
在表28中总结了研究设计。
表28：FT-1518乙磺酸盐和草酸盐的固态稳定性的研究设计
存储条件 1周
40℃±2℃/75％±5％RH、开放 √
√＝pXRD
稳定性研究的结果
分别在表29和30中总结了FT-1518的各种物理形式的乙磺酸盐和草酸盐关于通过pXRD评估的热量和湿度的固态稳定性研究的结果。
表29：FT1518乙磺酸盐的固态稳定性的结果
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表30：FT1518草酸盐的固态稳定性的结果
FT-1518盐的物理形式的稳定性研究的总结：
基于为了理解多晶型风险及其对稳定性的影响而执行的实验，FT-1518乙磺酸盐显示出非常低的多晶型风险。
当使用各种结晶技术在各种溶剂中重结晶时，Ft-1518草酸盐显示出很少的多晶型物或物理形式。但是，仅在乙酸乙酯:水(9:1)浆液中，即使在40℃/75％RH下进行稳定性研究之后，新的物理形式仍然存在。
盐筛选、物理形式筛选和选择的推断
盐筛选
使用酸性抗衡离子探索各种盐筛选实验以评估FT-1518的成盐亲和力/倾向性。
主要通过PXRD和质子NMR确认成盐。盐筛选试验的结果和观察表明有形成甲苯磺酸盐、己二酸盐、甲磺酸盐、苹果酸盐、邻苯二甲酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、草酸盐、马来酸盐、硝酸盐、酒石酸盐、丙二酸盐、樟脑磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、硫酸盐和盐酸盐的可行性。
可以通过使用从常见溶剂(此处为四氢呋喃)的沉淀来制备盐，例如，乙磺酸盐、苯磺酸盐、HCl、磺酸盐、硝酸盐。确认的盐中其余盐的制备可以通过在常见溶剂(丙酮)中进行溶剂蒸发(缓慢)来制备。
基于盐筛选结果，所有确认的盐的放大将以约100至200mg规模执行，并且将进行每种盐的完整表征。将进行盐在10mM磷酸二氢钾缓冲液(pH 6.8)中的溶解度和纯度％(HPLC)、结晶度(PXRD)、质子NMR、吸湿性和假多晶型物倾向(动态蒸汽吸附)、熔点&热事件(DSC)、在熔点高达150℃之前的重量损失％(TGA)，以完全表征盐。所有盐的表征汇编将用于多晶型物筛选和稳定性研究的初级盐选择。
所选盐(乙磺酸盐和草酸盐)的物理形式筛选
FT-1518乙磺酸盐和草酸盐的多晶型筛选证实在实验中识别的新物理形式很少。
FT-I518乙磺酸盐主要形成三种形式：形式1、形式2和形式3。基于稳定性研究，FT-1518乙磺酸盐的形式1可以被确认为最常存在的物理形式。从除了乙醇之外的溶剂(乙酸乙酯和DCM)获得的形式2和形式3在暴露于40℃/75％RH的热量和湿度下7天时会转变回形式1的初始盐形式。在稳定性研究之后，只有在乙醇中冷却结晶得到的形式2保持不变。
识别FT-1518草酸盐并且将其分离为4种物理形式，命名为形式A、形式B、形式C和形式D。当在40℃/75％RH的热量和湿度下暴露7天时，许多这些形式在稳定性研究期间转变回形式A的初始盐形式。在该时间段期间，只有从乙酸乙酯:水(9:1)浆液中获得的形式D保持不变。
选择FT1518的乙磺酸盐和草酸盐的合适物理形式
基于为了理解多晶型风险及其对稳定性的影响而执行的实验，FT-1518乙磺酸盐显示出非常低的多晶型风险。但是，基于物理形式的稳定性研究。
当使用各种结晶技术在各种溶剂中重结晶时，Ft-1518草酸盐显示出很少的多晶型物或物理形式。但是，仅在乙酸乙酯:水(9:1)浆液中，即使在40℃/75％RH下进行稳定性研究之后，新的物理形式仍然存在。
基于两种盐的各种物理形式的稳定性研究以及两种盐(FT-1518的乙磺酸盐和草酸盐)的物理形式在不同极性(从非极性到极性)的溶剂中的各种结晶过程，乙磺酸盐的形式1(模式-1)和草酸盐的形式A似乎是最常发生且最稳定的形式。
基于上述对盐的物理形态选择的研究和药代动力学研究(由FTG进行)，将选择针对进一步开发更好的盐。
所进行的实验的简要概述：
在Mysore的Vipragen Biosciences私限企业(印度)中执行体外和体内实验。动物购自Bangalore(印度)的Adita Biosys。所有实验动物协议均由机构动物道德委员会(IAEC)批准。该实验是根据1998年12日15日发表在印度公报中的动物实验管制及监督委员会(CPCSEA)实验动物设施指南的建议进行的。
药代动力学工作流程：
在研究期间，如所描述的那样在动物设施SOP中维持饲养条件。采购的动物隔离7天，然后适应5天。该研究进行了两天。使用10至12周龄(18至25g)的雄性Balb/c小鼠以及8至10周龄(220至280g)的雄性Sprague Dawley大鼠。在配料之前将食物保持4至12小时，并且在配料之后4小时将食物返回所有动物且随意供水。FT1518的剂量如下：小鼠：10mg/kg静脉内(i.v)和50mg/kg口服(p.o)；大鼠：5mg/kg静脉内(i.v)和10mg/kg口服(p.o)。在静脉内和口服研究中使用的制剂是10％二甲基亚砜(DMSO)+30％聚乙二醇400(PEG400)+60％水和0.5％甲基纤维素(MC)+0.1％吐温80。在包含K2EDTA作为抗凝血剂的eppendorf管中，在24h内在小鼠(心脏穿刺)和颈静脉(大鼠)中，在预定时间点收集血液。从血液分离出血浆并且存储在-80℃直至进行生物分析。
体外测试工作流程：
根据相应实验的研究协议执行所有体外实验，比如，蛋白质结合、微粒体稳定性、细胞毒性。
FT1518(碱)、FT1518-乙磺酸盐和FT1518-草酸盐在雄性Balb/c小鼠中的静脉内和口服药代动力学曲线
种类：BALB/C小鼠
性别：雄性
剂量：IV(10mg/kg)，单剂量
PO(50mg/kg)，单剂量
制剂：
·IV-DMSO:PEG400:水(10:30:60v/v)
·PO-0.5％甲基纤维素和0.1％吐温80的水溶液
采样时间点：
IV：配料之后5分钟、30分钟、1h、2、4、8和24h
PO：配料之后10分钟、30分钟、1h、2、4、8和24h。
PK分析：Phoenix软件(Pharsight产品)。使用非隔室分析(NCA)来估计PK参数。
碱在小鼠中的药代动力学曲线
FT1518碱和盐的药代动力学参数的比较
FT1518(碱)、FT1518-乙磺酸盐和FT1518-草酸盐在雄性Sprague Dawley(SD)大鼠中的静脉内和口服药代动力学曲线
种类：SD大鼠
性别：雄性
剂量：IV(5mg/kg)，单剂量
PO(10mg/kg)，单剂量
制剂：
·IV-DMSO:PEG400:水(10:30:60v/v)
·PO-0.5％甲基纤维素和0.1％吐温80的水溶液
采样时间点：
IV：配料之后5分钟、15分钟、30分钟、1h、2、4、8和24h
PO：配料之后10分钟、15分钟、30分钟、1h、2、4、8和24h。
PK分析：Phoenix软件(Pharsight产品)。使用非隔室分析(NCA)来估计PK参数。
FT1518碱在SD大鼠中的药代动力学曲线
微粒体稳定性
在3μM的浓度下测试所有化合物。
MLM：小鼠肝脏微粒体；PHLM：合并人肝微粒体；RLM：大鼠肝脏微粒体
√FT1518、FT1518-乙磺酸盐和FT1518-草酸盐在PHLM和RLM中非常稳定
血浆蛋白结合
在10μM的浓度下测试所有化合物。
√FT1518、FT1518乙磺酸盐和FT1518草酸盐在小鼠和人类血浆中都显示出中等的血浆蛋白结合。
caco-2渗透性
在10μM的浓度下测试所有化合物(n＝3)。
√FT1518碱、FT1518-乙磺酸盐和FT1518-草酸盐在caco-2试验中显示出高渗透性。外排比例<2表明化合物可能不是P-gp或BCRP外排转运体的底物
FT1518和盐在癌细胞系中的反增殖作用
FT1518-碱、FT1518-乙磺酸盐和FT1518-草酸盐在MDA-MB-231(乳腺癌)和U-87(恶性胶质瘤)中显示出>10000nM的IC50值。
肝清除率：
FT1518乙磺酸盐：就肝血流量而言，FT1518乙磺酸盐分别在小鼠中显示出较高的肝清除率并且在人类中显示出中等的肝清除率；在大鼠和狗中显示出较低的肝清除率。
FT1518草酸盐：就肝血流量而言，FT1518草酸盐在人类、小鼠和大鼠中显示出中等的肝清除率；在狗中显示出较低的肝清除率。
大鼠中的药代动力学：
单剂量施用FT1518导致1592ng/ml的Cmax、AUC-3442(ng.h/mL)和44％的生物利用度。
FT1518乙磺酸盐：1768ng/ml的Cmax、AUC-9684(ng.h/mL)和>100％的生物可利用率。
FT1518草酸盐:1980ng/ml的Cmax、AUC-5288(ng.h/mL)和68％的生物可利用率。
Ames测试：
在细菌反向突变试验中，碱和盐形式的基因毒性均为阴性。
小鼠中的急性毒性研究：
在Balb/c小鼠中，FT1518和FT1518乙磺酸盐在90mg/kg下耐受良好。
体外试验：
FT 1518碱形式分别在乳腺癌(MCF-7)、结肠癌(HCT-116)和前列腺癌(PC-3)系中显示出246、63和42μM的IC50。
FT 1518乙磺酸盐分别在乳腺癌(MCF-7)、结肠癌(HCT-116)和前列腺癌(PC-3)系中显示出33、64和67μM的IC50。
FT1518草酸盐在前列腺癌细胞系中的IC50值为183μM。
乙磺酸盐单晶X射线衍射分析
通过使用显微镜(晶体质量)进行初步分析，然后在单晶X射线衍射技术中进行细胞检查。从该分析中我们发现晶体质量不好(微褪色)，在细胞检查期间观察到由于这种适度衍射引起的孪晶。因此，我们收集了大约15个小时的数据来建立晶体结构坐标。
FS00067855-乙磺酸盐的X射线晶体结构在单斜晶空间群P21/n中溶解和精修，其中，不对称单元中的四分子的乙磺酸盐和水合物(z’＝1)为1:1:1的化学计量比。通过晶格中的N-H…O离子氢相互作用和结合在空隙中的水分子来关联乙磺酸根阴离子和FS00067855阳离子(图1至图4)
图1：FS00067855阳离子…乙磺酸根阴离子存在于晶格N-H…O中并且伸展在1d晶格N-H…O中。
图2：水分子结合在晶格中。
图3：具有氢的ORTEP结构。
图4：乙磺酸盐的结构精修
乙磺酸盐的晶体数据和结构精修
标识码 乙磺酸盐
实验式 C22 H34 N8 O5 S
式量 522.63
温度 298(2)K
波长
晶体系 单斜晶
空间群 P 21/n
晶胞大小
体积
Z 4
密度(计算得到的) 1.332Mg/m3
吸收系数 0.173mm-1
F(000) 1112
晶体大小 0.36x 0.24x 0.12mm3
数据收集的θ范围 1.976至25.493°
索引范围 -13<＝h<＝13、-13<＝k<＝13、-24<＝l<＝24
所收集的衍射点 39089
独立衍射点 4802[R(int)＝0.0622]
完成度 θ＝25.000°100.0％
精修方法 F2上的全矩阵最小二乘法
数据/限制/参数4802/2/340
F2上的拟合优度1.066
最终R指数[I>2sigma(I)] R1＝0.0916,wR2＝0.2493
R指数(所有数据) R1＝0.1502,wR2＝0.2963
消光系数 n/a
最大差异峰和孔
数据块：乙磺酸盐键合精度：C-C＝0.0116A波长＝0.71073细胞：a＝11.54(4)b＝11.33(3)c＝19.98(7)α＝90β＝94.3(2)γ＝90温度：298K计算的报告体积2605(15)2606(13)空间群P 21/n P 21/n霍尔群-P 2yn-P 2yn部分式C20 H27 N8 O,C2 H5 O3 S,H2 O？求和式C22 H34 N8 O5 S C22 H34 N8 O5 S Mr 522.63 522.63Dx,g cm-3 1.333 1.332Z4 4Mu(mm-1)0.173 0.173F000 1112.0 1112.0 F000’1112.93h,k,lmax 13,13,24 13,13,24Nref 4842 4802Tmin,Tmax 0.951,0.979Tmin’0.940校正法＝未给出数据完整性＝0.992Theta(max)＝25.493R(衍射点)＝0.0906(2911)wR2(衍射点)＝0.2947(4802)S＝1.060Npar＝345生成以下警报。每个警报具有格式test-name_ALERT_alert-type_alert-level。点击超链接了解测试的更多细节。警报级别ASHFSU01_ALERT_2_A到su比例的参数变化的绝对值>0.20到su比例的参数变化的绝对值给定为0.250可能需要另外的精修周期。PLAT080_ALERT_2_A最大变化/误差............0.25为什么？PLAT245_ALERT_2_A U(iso)H5A比U(eq)O5小...0.670AngSq PLAT245_ALERT_2_A U(iso)H5B比U(eq)O5小...0.698AngSq PLAT360_ALERT_2_A较短C(sp3)-C(sp3)键C11-C12..1.20Ang.PLAT410_ALERT_2_A较短的H...H内接触H10..H11B..1.76Ang.PLAT417_ALERT_2_A较短的D-H..H-D间H5A..H5B..1.30Ang.PLAT417_ALERT_2_A较短的D-H..H-D间H5B..H5B..1.13Ang.警报级别Bβ角度上的PLAT149_ALERT_3_B s.u.太大........0.20度PLAT234_ALERT_4_B较大的Hirshfeld差异C11--C12..0.26Ang.PLAT241_ALERT_2_B与C11检查的邻域相比’MainMol’Ueq较高PLAT241_ALERT_2_B与C13检查的邻域相比’MainMol’Ueq较高PLAT242_ALERT_2_B与C10检查的邻域相比’MainMol’Ueq较低PLAT340_ALERT_3_B C-C键上的低键合精度...............0.0116Ang.PLAT360_ALERT_2_B较短的C(sp3)-C(sp3)键C21-C22..1.26Ang.警报级别C PLAT084_ALERT_3_C较高的wR2值(即>0.25)...................0.29报告a上的PLAT148_ALERT_3_C s.u.–轴线较大(太大)......0.040b上的Ang.PLAT148_ALERT_3_C s.u.-轴线较大(太大)......0.0300c上的Ang.PLAT148_ALERT_3_C s.u.-轴线较大(太大)......0.070Ang.PLAT193_ALERT_1_C细胞和衍射温度相差....5度PLAT213_ALERT_2_C原子C11具有ADP最大/最小比例.....3.7prolat PLAT213_ALERT_2_C原子C13具有ADP最大/最小比例.....3.2prolatPLAT220_ALERT_2_C非溶剂Resd 1C Ueq(max)/Ueq(min)范围6.0比例PLAT222_ALERT_3_C非溶剂Resd 1H Uiso(max)/Uiso(min)范围5.4比例PLAT241_ALERT_2_C与C20检查的邻域相比’MainMol’Ueq较高PLAT243_ALERT_4_C与C22检查的邻域相比’Solvent’Ueq较高PLAT244_ALERT_4_C与S1检查的邻域相比’Solvent’Ueq较低PLAT245_ALERT_2_C U(iso)H1B小于U(eq)N1...0.012AngSq PLAT250_ALERT_2_C平均U(i,j)张量的较大的U3/U1比例....2.1注意PLAT352_ALERT_3_C短N-H(X0.87,N1.01A)N1-H1B..0.76Ang.PLAT360_ALERT_2_C短C(sp3)-C(sp3)键C10-C11..1.39Ang.PLAT360_ALERT_2_C短C(sp3)-C(sp3)键C10-C13..1.35Ang.PLAT397_ALERT_2_C C-O-C角度120与Deg偏离O1 101.6度PLAT410_ALERT_2_C较短的H...H间接触H10..H13A..1.97Ang.PLAT413_ALERT_2_C较短的XH3..XHn间H12C..H14C..2.14Ang.PLAT417_ALERT_2_C较短的D-H..H-D间H5A..H5A..2.12Ang.警报级别G PLAT002_ALERT_2_G位点3上的距离或角度限制的量注意PLAT072_ALERT_2_GSHELXL WGHT中的第一参数通常较大0.14报告PLAT152_ALERT_1_G提供和计算的体积s.u.相差...2个单位PLAT172_ALERT_4_G CIF-嵌入式资源文件包含DFIX报告2报告PLAT199_ALERT_1_G报告_cell_measurement_temperature.....(K)293检查PLAT343_ALERT_2_GC10检查的主要残基的异常sp3角度范围PLAT343_ALERT_2_G C11检查的主要残基的异常sp3角度范围PLAT344_ALERT_2_G C22检查的溶剂/离子中的异常sp3角度范围PLAT793_ALERT_4_G模型在C17下具有手征性(Centro SPGR)R验证PLAT793_ALERT_4_G模型在C18下具有手征性(Centro SPGR)S验证PLAT860_ALERT_3_G最小二乘约束的数量.............2注意8警报级别A＝最有可能有严重的问题-溶解或解释7警报级别B＝可能有严重的问题，仔细考虑21警报级别C＝检查。确保这不是由疏忽或疏漏造成的11警报级别G＝一般信息/检查它是不是意外的东西3。
草酸盐单晶X射线衍射分析
通过使用显微镜(晶体质量)进行初步分析，然后在单晶X射线衍射技术中进行细胞检查。从该分析中我们发现晶体质量良好并且观察到适度的衍射。因此，进一步地，我们收集了大约12个小时的数据来建立晶体结构坐标。
FS00067855-草酸盐的X射线晶体结构在单斜晶空间群P21/n中溶解和精修，其中，不对称单元中的四分子的草酸盐和甲醇溶剂化物(Z’＝1)为1:1:1的化学计量比。单草酸根阴离子与FS00067855的阳离子通过分叉的R1 2(5)环基序中的N-H…O离子氢键相互作用，并且甲醇溶剂化物通过晶格中的单点O-H…O相互作用与草酸根阴离子连接(图5至图8)。
图5：FS00067855阳离子…草酸根阴离子和甲醇溶剂化物分别存在于晶格N-H…O和O-H…O中。
图6：没有氢的草酸盐的ORTEP结构。
图7：具有氢的草酸盐的ORTEP结构。
图8：具有氢的草酸盐的结构精修。
草酸盐的晶体数据和结构精修
标识码 草酸盐
实验式 C23 H32 N8 O6
式量 516.56
温度 298(2)K
波长
晶体系 单斜晶
空间群 P 21/n
晶胞大小
体积
Z 4
密度(计算得到的) 1.354Mg/m3
吸收系数 0.100mm-1
F(000) 1096
晶体大小 0.24x 0.15x 0.10mm3
数据收集的θ范围 2.140至25.447°.
索引范围 -15<＝h<＝15、-12<＝k<＝12、-21<＝l<＝23
所收集的衍射点 39830
独立衍射点 4659[R(int)＝0.0920]
完成度 θ＝25.242°99.9％
精修方法 F2上的全矩阵最小二乘法
数据/限制/参数4659/1/352
F2上的拟合优度1.028
最终R指数[I>2sigma(I)] R1＝0.0627,wR2＝0.1248
R指数(所有数据) R1＝0.1230,wR2＝0.1520
消光系数 n/a
最大差异峰和孔0.358和-0.40。仅为了说明，仅示出了曲线图、图表、块和子框图的代表性数量/类型。在数量和类型上，许多环境通常包含更多的块和子块图或系统和子系统，取决于环境的设计目的。
数据块：草酸盐键合精度：C-C＝0.0046A波长＝0.71073细胞：a＝12.9096(8)b＝10.3149(6)c＝19.0837(11)α＝90β＝94.023(3)γ＝90温度：296K计算的报告体积2535.0(3)2534.9(3)空间群P 21/n P 21/n霍尔群-P 2yn-P 2yn部分式C20 H27 N8 O,C2 H O4,CH4 O？求和式C23 H32 N8 O6 C23 H32 N8 O6 Mr 516.57 516.56Dx,g cm-3 1.354 1.354Z4 4Mu(mm-1)0.100 0.100F000 1096.0 1096.0F000’1096.49h,k,lmax 15,12,23 15,12,23Nref 4691 4659Tmin,Tmax 0.982,0.990Tmin’0.976校正法＝未给出数据完整性＝0.993Theta(max)＝25.447R(衍射点)＝0.0627(2805)wR2(衍射点)＝0.1520(4659)S＝1.028Npar＝352生成以下警报。每个警报具有格式test-name_ALERT_alert-type_alert-level点击超链接以了解测试的更多细节。警报级别CPLAT052_ALERT_1_C关于吸收系数的信息请不要给出方法！PLAT193_ALERT_1_C细胞和衍射温度相差....2度PLAT220_ALERT_2_C非溶剂Resd 1C Ueq(max)/Ueq(min)范围3.3比例PLAT242_ALERT_2_C与C16检查的邻域相比’MainMol’Ueq较低PLAT250_ALERT_2_C平均U(i,j)张量的较大U3/U1比例....2.3注意PLAT340_ALERT_3_C C-C键上的低键合精度...............0.0046Ang.PLAT397_ALERT_2_C C-O-C角度与120Deg偏离O1 101.5度警报级别G PLAT002_ALERT_2_G AtSite2上的距离或角度限制的数量注意PLAT007_ALERT_5_G未精修供体H原子的数量..............1报告PLAT172_ALERT_4_G The CIF嵌入式资源文件包含DFIX记录1报告PLAT793_ALERT_4_G模型在C12下具有手征性(Centro SPGR)S验证PLAT793_ALERT_4_G模型在C13下具有手征性(Centro SPGR)R验证PLAT860_ALERT_3_G最小二乘约束的数量.............1注意0警报级别A＝最有可能有严重的问题-溶解或解释0警报级别B＝可能有严重的问题，仔细考虑7警报级别C＝检查。确保这不是由疏忽或疏漏造成的6警报级别G＝一般信息/检查它是不是意外的东西2警报类型1CIF构造/语法误差，不一致或缺失的数据5警报类型2结构模型可能是错误的或不足的指示符2警报类型3结构质量可能较低的指示符3警报类型4改进、方法、查询或建议1警报类型5。
虽然已经详细示出和描述了本发明的特定实施例以说明本发明原理，但是要理解，在不脱离这种原理的情况下，可以以其他方式体现本发明。
贯穿本说明书对“一个实施例”、“实施例”或类似语言的引用意味着结合该实施例描述的特定特征、结构或特性包括在本发明的至少一个实施例中。因此，贯穿本说明书出现的短语“在一个实施例中”、“在实施例中”和类似语言可以但不是必须全部指代相同的实施例。
本公开不限于所描述的特定系统、设备和方法，因为这些可以变化。说明书中使用的术语仅用于描述特定版本或实施例，并不旨在限制范围。
本公开不限于本申请中描述的特定实施例，其旨在作为各个方面的说明。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以进行许多修改和变化，这对本领域技术人员来说是显而易见的。除了本文列举的那些之外，本公开的范围内的功能等同的方法和装置对于本领域技术人员而言从前面的描述中是显而易见的。这种修改和变化旨在落入所附权利要求的范围内。本公开仅受所附权利要求的条款以及这种权利要求所赋予的等同物的全部范围的限制。要理解，本公开不限于特定方法、试剂、化合物、组合物或生物系统，其当然可以变化。还要理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施例，而不是限制性的。
如本领域技术人员将理解的，出于任何和所有目的，诸如就提供书面描述而言，本文公开的所有范围还涵盖任何和所有可能的子范围及其子范围的组合。
示例实施例：根据本公开的各个方面的图。
参照下面简要描述的附图描述本发明的示例实施例。
图1图示了TF-1518的质谱(+ESI扫描模式)
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图2图示了FT-1518的1H-NMR(在DMSO-D6中)
图3图示了乙磺酸盐试验的PXRD叠加(使用丙酮)
图4图示了乙磺酸盐试验的PXRD叠加(使用THF)
图5图示了乙磺酸盐试验的1H NMR(使用THF)
图6图示了草酸盐试验的PXRD叠加(使用乙醇)
图7图示了草酸盐试验的PXRD叠加(使用甲醇、IPA)
图8图示了草酸盐试验的1H NMR(使用乙醇)
图9图示了草酸盐试验的1H NMR(使用IPA)
图10图示了乙磺酸盐的pXRD衍射图
图11图示了乙磺酸盐的DSC热谱图
图12图示了乙磺酸盐的TGA热谱图
图13图示了草酸盐的pXRD衍射图
图14图示了草酸盐的DSC热谱图
图15图示了草酸盐的TGA热谱图
图16图示了通过冷却结晶的FT-1518乙磺酸盐的多晶型筛选的pXRD的叠加
图17图示了通过冷却结晶在二氯甲烷中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图18图示了通过冷却结晶在二氯甲烷中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图19图示了通过冷却结晶在乙醇中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图20图示了通过冷却结晶在乙醇中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图21图示了通过冷却结晶在甲醇中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图22图示了通过冷却结晶在甲醇中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图23图示了通过溶剂蒸发的FT-1518乙磺酸盐的物理形式筛选的pXRD的叠加
图24图示了通过溶剂蒸发在乙醇中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图25图示了通过溶剂蒸发在乙醇中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图26图示了通过溶剂蒸发在二氯甲烷中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
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图27图示了通过溶剂蒸发在二氯甲烷中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图28图示了通过溶剂蒸发在乙腈中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图29图示了通过溶剂蒸发在乙腈中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图30图示了通过溶剂蒸发在四氢呋喃:水(9:1)中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图31图示了通过溶剂蒸发在四氢呋喃:水(9:1)中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图32图示了通过溶剂蒸发在甲醇中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图33图示了通过溶剂蒸发在甲醇中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图34图示了RT下的FT-1518乙磺酸盐浆液转化实验的PXRD结果
图35图示了通过25℃下的浆液在乙酸乙酯中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图36图示了通过25℃下的浆液在乙酸乙酯中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图37图示了通过25℃下的浆液在四氢呋喃中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图38图示了通过25℃下的浆液在四氢呋喃中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图39图示了通过25℃下的浆液在甲苯中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图40图示了通过25℃下的浆液在甲苯中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图41图示了通过25℃下的浆液在THF:甲苯(1:1)中结晶的FT-1518乙磺酸盐的TGA
图42图示了通过25℃下的浆液在THF:甲苯(1:1)中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
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图44图示了通过40℃下的浆液在THF:甲苯(1:1)中结晶的FT-1518乙磺酸盐的DSC
图45图示了通过冷却结晶的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的pXRD的叠加
图46图示了通过在THF中冷却结晶的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的TGA
图47图示了通过在THF中冷却结晶的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的DSC
图48图示了通过在甲醇中冷却结晶的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的TGA
图49图示了通过在甲醇中冷却结晶的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的DSC
图50图示了通过在乙腈中冷却结晶的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的TGA
图51图示了通过在乙腈中冷却结晶的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的DSC
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图52图示了通过在乙醇中冷却结晶的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的TGA
图53图示了通过在乙醇中冷却结晶的FT-1518草酸盐的多晶型筛选的DSC
图54图示了通过溶剂蒸发的FT-1518草酸盐的物理形式筛选的pXRD的叠加
图55图示了通过溶剂蒸发使用丙酮结晶的FT-1518草酸盐的DSC
图56图示了通过溶剂蒸发使用丙酮结晶的FT-1518草酸盐的DSC
图57图示了通过溶剂蒸发使用甲醇结晶的FT-1518草酸盐的TGA
图58图示了通过溶剂蒸发使用甲醇结晶的FT-1518草酸盐的DSC
图59图示了通过溶剂蒸发使用乙腈结晶的FT-1518草酸盐的TGA
图60图示了通过溶剂蒸发使用乙腈结晶的FT-1518草酸盐的DSC
图61图示了通过溶剂蒸发使用四氢呋喃结晶的FT-1518草酸盐的TGA
图62图示了通过溶剂蒸发使用四氢呋喃结晶的FT-1518草酸盐的DSC
图63图示了通过溶剂蒸发使用乙醇结晶的FT-1518草酸盐的TGA
图64图示了通过溶剂蒸发使用乙醇结晶的FT-1518草酸盐的DSC
图65图示了RT下的FT-1518草酸盐浆液转化实验的PXRD结果
图66图示了40℃下的FT-1518草酸盐浆液实验的PXRD结果
图67图示了在乙酸乙酯中在25℃下成浆液的FT-1518草酸盐的TGA结果
图68图示了在乙酸乙酯中在25℃下成浆液的FT-1518草酸盐的DSC结果
图69图示了在正己烷中在25℃下成浆液的FT-1518草酸盐的TGA结果
图70图示了在正己烷中在25℃下成浆液的FT-1518草酸盐的DSC结果
图71图示了在乙酸乙酯:水(9:1)中在25℃下成浆液的FT-1518草酸盐的TGA结果
图72图示了在乙酸乙酯:水(9:1)中在25℃下成浆液的FT-1518草酸盐的DSC结果
图73图示了在乙酸乙酯中在40℃下成浆液的FT-1518草酸盐的TGA结果
图74图示了在乙酸乙酯中在40℃下成浆液的FT-1518草酸盐的DSC结果
图75图示了在正己烷中在40℃下成浆液的FT-1518草酸盐的TGA结果
图76图示了在正己烷中在40℃下成浆液的FT-1518草酸盐的DSC结果
图77图示了在乙酸乙酯:水(9:1)中在40℃下成浆液的FT-1518草酸盐的TGA结果
图78图示了在乙酸乙酯:水(9:1)中在40℃下成浆液的FT-1518草酸盐的DSC结果
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[24]F.J.LEINWEBER在1987年发表的DRUG METAB.RES.第18卷。

Claims (4)

1.一种5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺（FT1518）的药学上可接受的盐，其特征在于，所述盐为5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的乙磺酸盐或草酸盐，所述5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的乙磺酸盐或草酸盐具有改善的生物利用度、化学稳定性和固态稳定性；所述5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的乙磺酸盐从四氢呋喃溶剂中沉淀获得，所述5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的草酸盐从丙酮溶剂中缓慢蒸发沉淀获得。
2.根据权利要求1所述的药学上可接受的盐，其中，所述药学上可接受的盐具有结晶性质，对于乙磺酸盐，药物与抗衡离子的比例为1:1.125；对于草酸盐，药物与抗衡离子的比例为1:1.125。
3.一种5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，制备步骤包括从四氢呋喃溶剂中沉淀5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的乙磺酸盐，或者通过从丙酮作为溶剂缓慢蒸发来沉淀5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的草酸盐。
4.一种根据权利要求3所述的方法，其中，5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的乙磺酸盐的酸性抗衡离子是pKa值为1.68的乙烷磺酸，5-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[辛-3-基)-9-(戊-3-基)-9H嘌呤-6-基)吡嗪-2-胺的草酸盐的酸性抗衡离子是pKa值为1.25和4.23的草酸。
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