CN110438047A - 一种降解水中石油烃的复合菌剂制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明是一种降解水中石油烃的复合菌剂制备方法，属于石油烃污染治理技术领域，解决目前石油泄漏造成的水污石油烃污染物缺乏具有合适比例的混合菌剂来降解，导致水中石油烃污染难以治理的问题。本发明首先配制适合枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌的培养基，将两种微生物在培养基中培养24‑48h，至菌液浓度在波长为600nm的分光光度计下吸光度大于1.00；其次，按照枯草芽孢杆菌∶铜绿假单胞菌＝1∶2的体积比提取菌液，混合后放入转速为4000rpm的离心机中离心20min；然后，将离心得到的菌块加入到已高温灭菌的0.9％氯化钠溶液中，混合均匀，制得用于水中石油烃降解的复合菌剂，利用不同菌种之间的协同降解效果，提高微生物对水中石油烃的降解能力，提高水体环境质量。

Description

一种降解水中石油烃的复合菌剂制备方法

技术领域

本发明是一种降解水中石油烃的复合菌剂制备方法，属于石油烃污染治理技术领域。

背景技术

随着人类对石油的大量开采和加工，越来越多的石油烃污染物进入江河湖海的水体中，对水环境造成了污染。尤其近年来油船泄漏污染事故频发，大量的原油进入海水中，对生态系统造成了严重的威胁。石油烃漂浮在海面上阻碍了大气和海水之间的气体交换，抑制了海洋植物的光合作用。石油附着在海鸟或海兽的皮毛上使动物失去游泳或飞翔能力。海洋中的生物摄入石油烃后，生长受到干扰，如果进入人体更会对人类健康造成威胁。

目前，治理石油烃污染常用的措施分为物理方法、化学方法、生物方法等。物理方法主要是用机械装置消除海面上石油烃污染，通常使用清污船和回收装置，或使用围栏将污染区域围住等。这种方法成本高，效率低，很难消除石油烃对环境的污染。化学方法主要有燃烧法、乳化剂、凝油剂等。通过燃烧或加入外加剂控制石油烃的含量。这种方法只能处理低浓度石油烃，且会产生二次污染。加入的凝油剂等本身带有毒性，对海洋生物也会产生危害。生物方法主要是利用部分微生物能够吞噬石油烃达到治理污染的目的。对比物理化学方法，生物方法对人和环境的影响较小，且费用仅为物理、化学修复的30％～50％。海洋中降解石油烃微生物的分布多为近海或者石油污染严重的区域。海洋本土微生物的繁殖受自然环境影响较大，对石油烃的降解能力不稳定。

不同种属的微生物对石油烃的降解能力区别较大。例如，乙酸钙不动杆菌和粘质沙雷氏菌可以降解C₂₂-C₃₀和C₂₀-C₂₈的石油物质，而热带念珠菌可以降解C₁₂-C₃₂的石油物质。研究表明，芽孢杆菌属对石油烃降解能力强，尤其对非烃和沥青质降解效果较好。另外，一种微生物生长代谢的产物可能会对其它微生物的生长产生影响。将不同微生物按照适当的比例混合，能够提高混合菌群对石油烃的降解能力。

因此，本发明利用枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌对石油烃的降解能力，将两种菌按照一定比例混合，利用不同菌种之间的协同降解效果，制得复合菌液，通过离心得到复合菌，并加入0.9％氯化钠溶液混合均匀，制得复合菌剂。

发明内容

(1)技术问题

本发明目的是提供一种降解水中石油烃的复合菌剂制备方法，该方法是利用枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌的混合菌液对石油烃具有很好的降解效果，通过调整两种菌液的复配比例，制得对水中石油烃降解效果最大的石油烃降解菌剂，解决目前石油泄漏造成的水污石油烃污染物缺乏具有合适比例的混合菌剂来降解，导致水中石油烃污染难以治理的问题，提高水体环境质量。

(2)技术方案

鉴于目前石油泄漏产生的水中石油烃污染治理困难，常规的物理和化学方法治理效率低，成本大，容易造成二次污染等问题，本发明利用微生物对石油烃的降解能力，提供一种高效降解水中石油烃的新方法，从而持续高效的降解水中石油烃，净化水体环境。本发明技术方案如下：首先配制适合枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌的培养基，将两种微生物在培养基中培养24-48h，至菌液浓度在波长为600nm的分光光度计下吸光度大于1.00；其次，按照枯草芽孢杆菌∶铜绿假单胞菌＝1∶2的体积比提取菌液，混合后放入转速为4000rpm的离心机中离心20min；然后，将离心得到的菌块加入到已高温灭菌的0.9％氯化钠溶液中，混合均匀，制得用于水中石油烃降解的复合菌剂。

(3)有益效果

目前水污染问题已经成为我们必须面对的重要问题之一。随着人类对石油资源的不断开采和加工，油船泄漏问题频发，对水环境造成的压力剧增。一般的物理吸附法和化学燃烧法不仅成本高，容易产生二次污染，而且效率很低。本发明提供的降解水中石油烃的方法是利用微生物对石油烃的降解能力，将枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌复合，利用不同菌种之间的协同降解效果，提高微生物对水中石油烃的降解能力。枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌能够吞噬石油烃进行繁衍，可持续能力强，且不会对水中生物造成不利影响。根据本发明提供的制备方法，可以制得高效降解水中石油烃的复合菌剂，用于治理被石油烃污染的江河湖海水体，修复被污染的生态系统，恢复正常功能。

具体实施方式

本发明提供一种降解水中石油烃的复合菌剂制备方法，具体实施步骤如下：

(1)采用牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g和蒸馏水1L配制枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌培养基；

(2)将枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌分别在培养基中培养24-48h，使菌液浓度在波长为600nm的分光光度计下的吸光度值均大于1.00；

(3)在无菌操作台中，按照枯草芽孢杆菌∶铜绿假单胞菌＝1∶2的体积比用移液枪吸取对应体积的菌液，置于同一个离心管中，放入转速为4000rpm的离心机中离心20min；

(4)取9.0g氯化钠，1L蒸馏水，配制浓度为0.9％的氯化钠溶液，在121℃下灭菌20min，冷却至室温；

(5)将离心后的复合菌液取出后倒去上清液，得到复合菌块，用移液枪将菌块加入到已灭菌的0.9％氯化钠溶液中，混合均匀制得降解水中石油烃的复合菌剂。

Claims (1)

1.一种降解水中石油烃的复合菌剂制备方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：

(1)采用牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g和蒸馏水1L配制枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌培养基；

(2)将枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌分别在培养基中培养24-48h，使菌液浓度在波长为600nm的分光光度计下的吸光度值均大于1.00；

(3)在无菌操作台中，按照枯草芽孢杆菌∶铜绿假单胞菌＝1∶2的体积比用移液枪吸取对应体积的菌液，置于同一个离心管中，放入转速为4000rpm的离心机中离心20min；

(4)取9.0g氯化钠，1L蒸馏水，配制浓度为0.9％的氯化钠溶液，在121℃下灭菌20min，冷却至室温；

(5)将离心后的复合菌液取出后倒去上清液，得到复合菌块，用移液枪将菌块加入到已灭菌的0.9％氯化钠溶液中，混合均匀制得降解水中石油烃的复合菌剂。