CN110437375B - 一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法 - Google Patents
一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110437375B CN110437375B CN201910610217.7A CN201910610217A CN110437375B CN 110437375 B CN110437375 B CN 110437375B CN 201910610217 A CN201910610217 A CN 201910610217A CN 110437375 B CN110437375 B CN 110437375B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- panax japonicus
- molecularly imprinted
- imprinted polymer
- iva
- japonicus saponin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 235000003174 Panax japonicus Nutrition 0.000 title claims abstract description 56
- 241000168720 Panax japonicus Species 0.000 title claims abstract description 56
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 title claims abstract description 52
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 title claims abstract description 52
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 229920000344 molecularly imprinted polymer Polymers 0.000 title claims abstract description 38
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical group CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- -1 propenyl hydroxyethyl ester Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 12
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical group N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000003999 initiator Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000002608 ionic liquid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 10
- DBCAQXHNJOFNGC-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-1,1,1-trifluorobutane Chemical group FC(F)(F)CCCBr DBCAQXHNJOFNGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Substances CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 8
- OOXHUFHTZOWRPW-UHFFFAOYSA-N CCCCCCCCCCCCCCC1=CNC(C=C)=N1.Br Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC1=CNC(C=C)=N1.Br OOXHUFHTZOWRPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 28
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 17
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 12
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 12
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 5
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 4
- 238000004581 coalescence Methods 0.000 claims description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 3
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 9
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 4
- OMIGHNLMNHATMP-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl prop-2-enoate Chemical compound OCCOC(=O)C=C OMIGHNLMNHATMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 37
- YOSRLTNUOCHBEA-SGVKAIFKSA-N Chikusetsusaponin-IVa Chemical compound O([C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@]1(CCC(C[C@H]14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YOSRLTNUOCHBEA-SGVKAIFKSA-N 0.000 description 36
- YOSRLTNUOCHBEA-UHFFFAOYSA-N (3beta)-28-(beta-D-glucopyranosyloxy)-28-oxoolean-12-en-3-yl beta-D-glucopyranosiduronic acid Natural products C12CC(C)(C)CCC2(C(=O)OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)CCC(C2(CCC3C4(C)C)C)(C)C1=CCC2C3(C)CCC4OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O YOSRLTNUOCHBEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- QXSDGKCAECXLFI-UHFFFAOYSA-N copteroside D Natural products CC1(C)CCC2(CCC3(C)C(=CCC4C5(C)CCC(OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OCC(O)C(O)C7O)C(=O)O)C(C)(CO)C5CCC34C)C2C1)C(=O)OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O QXSDGKCAECXLFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 8
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 8
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 7
- QUUCYKKMFLJLFS-UHFFFAOYSA-N Dehydroabietan Natural products CC1(C)CCCC2(C)C3=CC=C(C(C)C)C=C3CCC21 QUUCYKKMFLJLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NFWKVWVWBFBAOV-UHFFFAOYSA-N Dehydroabietic acid Natural products OC(=O)C1(C)CCCC2(C)C3=CC=C(C(C)C)C=C3CCC21 NFWKVWVWBFBAOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940118781 dehydroabietic acid Drugs 0.000 description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical class CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NFWKVWVWBFBAOV-MISYRCLQSA-N dehydroabietic acid Chemical compound OC(=O)[C@]1(C)CCC[C@]2(C)C3=CC=C(C(C)C)C=C3CC[C@H]21 NFWKVWVWBFBAOV-MISYRCLQSA-N 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 2
- KOFZTCSTGIWCQG-UHFFFAOYSA-N 1-bromotetradecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCBr KOFZTCSTGIWCQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSSNTDFYBPYIEC-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylimidazole Chemical compound C=CN1C=CN=C1 OSSNTDFYBPYIEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026817 47,XYY syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N ethanol;sulfuric acid Chemical compound CCO.OS(O)(=O)=O ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 1
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001172 liquid--solid extraction Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000696 nitrogen adsorption--desorption isotherm Methods 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 238000002336 sorption--desorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002411 thermogravimetry Methods 0.000 description 1
- 150000008130 triterpenoid saponins Chemical class 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
- B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F222/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a carboxyl radical and containing at least one other carboxyl radical in the molecule; Salts, anhydrides, esters, amides, imides, or nitriles thereof
- C08F222/10—Esters
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法,包括,模板分子、功能单体、交联剂、引发剂和溶剂;所述模板分子为竹节参皂苷Iva;功能单体为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体混合物;交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯;引发剂为偶氮二异丁腈;溶剂为无水乙醇;采用无氧状态,然后向三颈瓶中加入竹节参皂苷IVa、脱氢纵酸丙烯基羟乙酯、溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体、乙二醇二甲基丙烯酸酯并用磁力搅拌进行预聚,至瓶中出现白色微球形物质。本发明中,该制备方法采用分子印迹技术与固相萃取技术的结合,达到分离提纯的专一性与高效性,确保竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物制备的高质量。
Description
技术领域
本发明涉及竹节参聚合物技术领域,尤其涉及一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法。
背景技术
竹节参中含三萜皂苷、多糖、黄酮和挥发油等成分,现代药理学研究表明,以竹节参皂苷IVa、V为代表的皂苷类成分具有抗氧化、抗炎镇痛、抗衰老、抗疲劳、降糖等多种药理活性,随着竹节参皂苷药学研究的深入,开发一种实用、高效的竹节参总皂苷提取工艺成为其开发利用的重要环节,目前对竹节参皂苷的提取工艺的研究较多,主要包括水提法、醇提法、微波法、泡沫分离法精制、丙酮沉淀法精制法、树脂吸附法精制等。
分子印迹技术具有三大特点:构效预定性、特异识别性、广泛实用性,固相萃取是用固体物质作萃取剂从样品中提取所需组成成分,将液固萃取柱和液相色谱技术结合成的一种化学分析技术,固相萃取是一种基于色谱分离的样品前处理方法,它将分离与浓缩合二为一,通过使用不同溶剂,选择性的清洗杂质或洗脱出目标物质,因此需要将分子印迹技术与固相萃取结合的方式,进而实现对竹节参分子印迹聚合物的快速高效制备生产效果。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有竹节参皂苷IVa纯化技术中存在的缺点,而提出的一种能快速分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物,包括,模板分子、功能单体、交联剂、引发剂和溶剂;
所述模板分子为竹节参皂苷Iva;
所述功能单体为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体;
所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯;
所述引发剂为偶氮二异丁腈;
所述溶剂为无水乙醇。
作为上述技术方案的进一步描述:
所述模板分子、功能单体、交联剂和引发剂的物质的量1:4:20:0.1。
一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法,包括以下步骤:
S1:抽真空,向三颈瓶内连续重复三次的充入氮气,使三颈瓶内反应体系中呈现无氧的状态,得到反应所需的环境状态;
S2:向三颈瓶中依次加入竹节参皂苷IVa、脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体、乙二醇二甲基丙烯酸酯,并用磁力搅拌棒进行同一方向的搅拌,待反应一定时长后对反应溶液进行预聚,同时在反应过程中持续不断的充入氮气;
S3:预聚结束后,向三颈瓶中加入偶氮二异丁腈,并将三颈瓶的底部浸入到装有油池内,进行油浴加热回流反应,并且在反应过程中持续不断的充入氮气,直至反应一段时间后出现白色混浊;
S4:观察白色混浊物体,记录白色浑浊物体的实时状态,然后继续反应一端时间,同时在反应过程中持续不断的充入氮气,直至三颈瓶中出现白色微球形物质,此时即可得到竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物混合液;
S5:将节参皂苷Iva分子印迹聚合物混合液取出,利用离心旋干的方式将竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物进行收集备用,并且另外单独留下一部分用于扫描电镜及高校液相分析。
作为上述技术方案的进一步描述:
所述磁力搅拌棒的旋转搅拌速度为800rad/min,预聚的反应时长为12h。
作为上述技术方案的进一步描述:
所述油浴加热的加热温度为40℃,油浴加热的加热时长为3-4h。
作为上述技术方案的进一步描述:
所述白色浑浊状态持续反应6h后即可得到白色微球形物质。
有益效果
本发明提供了一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法。具备以下有益效果:
(1):该制备方法采用分子印迹技术与固相萃取技术的结合,达到分离提纯的专一性与高效性,确保了竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物制备的高质量。
(2):该制备方法的整体制备所需设备较少,操作简单便捷,单独一人即可实现竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备操作,并且制备过程程序简单且安全稳定,不会发生意外事故。
附图说明
图1为本发明提出的脱氢纵酸丙烯基羟乙酯合成路线的流程示意图;
图2为脱氢枞酸丙烯酸羟乙酯单体核磁图谱;
图3为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯合成1H-NMR的氢核磁共振图;
图4为溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体合成1H-NMR的氢核磁共振图;
图5为竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物的制备装置图;
图6为HPLC色谱图;图中a为珠子参浸膏色谱图,b为聚合物乙醇洗脱色谱图,c为竹节参对照品色谱图;
图7为竹节参皂苷Iva标准曲线;
图8为竹节参皂苷IVa静态吸附曲线;
图9为竹节参皂苷IVa动态吸附曲线;
图10为竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物N2吸附-脱附等温线;
图11为竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物的热失重曲线。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
如图1-4所示,一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物,包括,模板分子、功能单体、交联剂、引发剂和溶剂;
模板分子为竹节参皂苷Iva;功能单体为为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体;交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯;引发剂为偶氮二异丁腈;溶剂为无水乙醇,模板分子、功能单体、交联剂和引发剂的物质的量1:4:20:0.1。
一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法,包括以下步骤:
S1:抽真空,向三颈瓶内连续重复三次的充入氮气,使三颈瓶内反应体系中呈现无氧的状态,得到反应所需的环境状态;
S2:向三颈瓶中依次加入竹节参皂苷IVa、为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体、乙二醇二甲基丙烯酸酯,并用磁力搅拌棒进行同一方向的搅拌,待反应一定时长后对反应溶液进行预聚,同时在反应过程中持续不断的充入氮气;
S3:预聚结束后,向三颈瓶中加入偶氮二异丁腈,并将三颈瓶的底部浸入到装有油池内,进行油浴加热回流反应,并且在反应过程中持续不断的充入氮气,直至反应一段时间后出现白色混浊;
S4:观察白色混浊物体,记录白色浑浊物体的实时状态,然后继续反应一端时间,同时在反应过程中持续不断的充入氮气,直至三颈瓶中出现白色微球形物质,此时即可得到竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物混合液;
S5:将节参皂苷Iva分子印迹聚合物混合液取出,利用离心旋干的方式将竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物进行收集备用,并且另外单独留下一部分用于扫描电镜及高校液相分析。
磁力搅拌棒的旋转搅拌速度为800rad/min,预聚的反应时长为12h。
油浴加热的加热温度为40℃,油浴加热的加热时长为3-4h。
白色浑浊状态持续反应6h后即可得到白色微球形物质。
如图1所示,脱氢纵酸丙烯基羟乙酯的合成路线,具体制备方法如下:
A:称取5.00g脱氢枞酸,将其置于有球形冷凝管、恒压滴定漏斗和温度计的250ml三口瓶中,加入30ml甲苯作为溶剂,使其溶解,称取4.76g二氯亚砜加入装有30ml甲苯的恒压滴定漏斗中,打开活塞,滴加结束,回流反应6h。使用旋转蒸发仪60℃下回收甲苯与二氯亚砜,得脱氢枞酸酰氯7.5g;
B:无水无氧条件下,将7.5g脱氢枞酸酰氯,2.43g无水三乙胺和8.36g丙烯酸羟乙酯置于有球形冷凝管和温度计的250ml三口瓶中,加入50ml甲苯,60℃反应12h以上。将反应液过滤除去絮状沉淀,使用旋转蒸发仪50℃下将反应液中甲苯蒸出,得红褐色油状液体;
C:用乙酸乙酯和蒸馏水等比例萃取上述红褐色油状液体,分液,水洗三次,向有机层中加入适量无水硫酸钠,使用旋转蒸发仪,60℃,将乙酸乙酯蒸出,得黄褐色油状液体,将粗产品装柱,用乙酸乙酯与石油醚的混合液作为洗脱剂,比例为1:8,收集滤液,旋干,得淡黄色油状液体,静置,析出黄色固体或白色针状结晶,即为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯。
如图2所示,溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体的合成路线,具体制备方法如下:
无水无氧条件下,将2.77g溴代十四烷,0.94g乙烯基咪唑和60ml无水乙醇置于有球形冷凝管和温度计的250ml三口瓶中,60℃反应12h以上。将反应液使用旋转蒸发仪50℃下将反应液中乙醇蒸出,得白颜色固体即为溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体。
如图3和图4所示,竹节参总皂苷的提取分离:
竹节参总皂苷的提取,
将珠子参药材于干燥箱中100℃干燥50分钟,粉碎100目,取粉末10g于100ml甲醇中,超声处理,超声参数:功率180W,频率40kHZ40min,将其过滤,取滤液,重复三次操作,合并所得滤液,减压旋干,取聚合物用50ml的热水,水温为50℃进行溶解,水饱和正丁醇萃取,重复操作三次,合并正丁醇层溶液,减压蒸干,得竹节参总皂苷。
总皂苷中竹节参皂苷IVa的鉴别:
供试品:将所得部分总皂苷用甲醇加热溶解50℃,
对照品:取竹节参皂苷IVa标品,甲醇溶解,制成每1ml含2mg竹节参皂苷Iva标品的溶液,
展开剂:正丁醇:乙酸乙酯:甲醇:甲酸:水=5:10:0.3:0.1:3.5的上层溶液,
显色剂:10%硫酸乙醇溶液,100℃显色。
竹节参总皂苷的分离纯化
将上述竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物中的模板分子洗去,洗脱液为甲醇:乙酸=9:1,超声30分钟,洗脱三次,用无水乙醇洗去聚合物表面的洗脱液,然后将聚合物转移至萃取小柱并用无水乙醇浸泡2h,取0.5g竹节参总皂苷溶于甲醇35ml,上样,进行吸附性实验依次用去离子水、70%乙醇洗脱,收集三个时间段的滤液,保存滤液、洗脱液、母液用于后续HPLC分析。
如图6所示,竹节参皂苷IVa母液、杂质液、洗脱液的高效液相色谱分析:
分别取配制好竹节参皂苷Iva对照品、珠子参提取母液、杂质液、洗脱液用滤头过滤,制备样品,进行HPLC定量分析,色谱柱:Thermo Scientific TM Hypersil TM C18(250*4.6)色谱柱;流动相:已腈-0.2%磷酸水(35%:65%);检测波长:203nm;流速:0.8ml/min;柱温:室温25℃,溶样:2mg样品溶解于10.6ml乙醇+0.7ml水+0.3mlDMSO。
如图7所示,竹节参皂苷Iva标准曲线的绘制:
称取竹节参皂苷IVa标品置于100ml容量瓶中,用乙醇定容至刻度,摇匀,即得1.0μmol/ml竹节参皂苷IVa标准溶液,取1ml标准溶液四份,分别进行稀释,
得到0.2μmlol/ml,0.4μmol/ml,0.6μmol/ml,0.8μmol/ml供试液,以峰面积对浓度做标准曲线,计算线性回归方程。
线性回归方程:Y=26.037X+0.0576;R2=0.9986。表明竹节参皂苷Iva峰面积-浓度线性关系良好。
如图8和图9所示,竹节参皂苷IVa静态和动态吸附:
将0.20g洗取模板分子的分子印迹聚合物置于100ml锥形瓶中,加乙醇30ml浸泡8h,过滤取出乙醇,加入20ml 1.0μmol/ml竹节参皂苷IVa标品溶液,摇床振荡3h,每隔30min收集上清液并补加与收集液同体积的乙醇,收集液进行HPLC分析,计算分子印迹聚合物对竹节参皂苷IVa的静态吸附量。
计算公式:Qe=(Co-Ce)V/W
Qe:静态吸附量(mg/g);
Co:吸附前竹节参皂苷IVa的起始浓度(mg/ml);
Ce:吸附竹节参皂苷IVa后达到平衡时的浓度(mg/ml);
V:竹节参皂苷IVa标准溶液体积(ml);
W:竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物的干重(g)。
如图10所示,N2吸附-脱附:
以Quantity Absorbed-Relative Pressure作图,得到N2吸附-脱附等温线。
如图11所示,热失重分析:
N2气氛下,由室温开始,每10min升高10℃,温度temperature和质量作双Y轴图,得到热失重曲线。
分解温度约为358℃,说明聚合物足够稳定。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物,其特征在于,包括,模板分子、功能单体、交联剂、引发剂和溶剂;
所述模板分子为竹节参皂苷Iva;
所述功能单体为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体;
所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯;
所述引发剂为偶氮二异丁腈;
所述溶剂为无水乙醇。
2.根据权利要求1所述的一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物,其特征在于,所述模板分子、功能单体、交联剂和引发剂的物质的量1:4:20:0.1。
3.一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:抽真空,向三颈瓶内连续重复三次的充入氮气,使三颈瓶内反应体系中呈现无氧的状态,得到反应所需的环境状态;
S2:向三颈瓶中依次加入竹节参皂苷IVa、脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体、乙二醇二甲基丙烯酸酯,并用磁力搅拌棒进行同一方向的搅拌,待反应一定时长后对反应溶液进行预聚,同时在反应过程中持续不断的充入氮气;
S3:预聚结束后,向三颈瓶中加入偶氮二异丁腈,并将三颈瓶的底部浸入到装有油池内,进行油浴加热回流反应,并且在反应过程中持续不断的充入氮气,直至反应一段时间后出现白色混浊;
S4:观察白色混浊物体,记录白色浑浊物体的实时状态,然后继续反应一端时间,同时在反应过程中持续不断的充入氮气,直至三颈瓶中出现白色微球形物质,此时即可得到竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物混合液;
S5:将节参皂苷IVa分子印迹聚合物混合液取出,利用离心旋干的方式将竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物进行收集备用,并且另外单独留下一部分用于扫描电镜及高效液相分析。
4.根据权利要求3所述的一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法,其特征在于,所述磁力搅拌棒的旋转搅拌速度为800rad/min,预聚的反应时长为12h。
5.根据权利要求3所述的一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法,其特征在于,所述油浴加热的加热温度为40℃,油浴加热的加热时长为3-4h。
6.根据权利要求3所述的一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法,其特征在于,所述白色浑浊状态持续反应6h后即可得到白色微球形物质。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910610217.7A CN110437375B (zh) | 2019-07-08 | 2019-07-08 | 一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910610217.7A CN110437375B (zh) | 2019-07-08 | 2019-07-08 | 一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110437375A CN110437375A (zh) | 2019-11-12 |
CN110437375B true CN110437375B (zh) | 2021-04-30 |
Family
ID=68429593
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910610217.7A Expired - Fee Related CN110437375B (zh) | 2019-07-08 | 2019-07-08 | 一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110437375B (zh) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080119420A1 (en) * | 2006-11-17 | 2008-05-22 | Liang Liu | Saponins Derived from Ilex Pubescens and Method of Purifying the same |
CN103570870A (zh) * | 2013-10-21 | 2014-02-12 | 南京医科大学 | 多模板单分散三七活性皂苷分子印迹聚合物及其制备方法 |
CN107219279A (zh) * | 2017-05-25 | 2017-09-29 | 济南大学 | 纳米铜/石墨烯修饰电极人参皂苷Rg1分子印迹传感器 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103542459B (zh) * | 2013-11-08 | 2015-11-18 | 海信(山东)空调有限公司 | 冷暖型变频空调器及制热运行时的除霜方法 |
-
2019
- 2019-07-08 CN CN201910610217.7A patent/CN110437375B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080119420A1 (en) * | 2006-11-17 | 2008-05-22 | Liang Liu | Saponins Derived from Ilex Pubescens and Method of Purifying the same |
CN103570870A (zh) * | 2013-10-21 | 2014-02-12 | 南京医科大学 | 多模板单分散三七活性皂苷分子印迹聚合物及其制备方法 |
CN107219279A (zh) * | 2017-05-25 | 2017-09-29 | 济南大学 | 纳米铜/石墨烯修饰电极人参皂苷Rg1分子印迹传感器 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
"分子印迹聚合物在中药活性成分分离中的应用进展";左振宇等;《Chinese Traditional and Herbal Drugs》;20171231;第48卷(第23期);第5019-5031页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110437375A (zh) | 2019-11-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Tang et al. | Application of ionic liquid for extraction and separation of bioactive compounds from plants | |
Xu et al. | Investigation of ractopamine molecularly imprinted stir bar sorptive extraction and its application for trace analysis of β2-agonists in complex samples | |
Yan et al. | Simultaneous determination of four plant hormones in bananas by molecularly imprinted solid-phase extraction coupled with high performance liquid chromatography | |
Zhai et al. | Molecularly imprinted coated graphene oxide solid-phase extraction monolithic capillary column for selective extraction and sensitive determination of phloxine B in coffee bean | |
CN103497277B (zh) | 黄芩素分子印迹聚合物及其制备方法和应用 | |
CN106632529B (zh) | 一种基于分子印迹技术的壳四糖单体分离提取方法 | |
CN106046254B (zh) | 富集京尼平苷的亲水性分子印迹聚合物及制备方法和应用 | |
CN103599755B (zh) | 苯乙醇胺a分子印迹膜及其制备方法与应用 | |
CN110437375B (zh) | 一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法 | |
CN105044254A (zh) | 硝基呋喃类分子印迹聚合物微球的制备方法及应用 | |
CN112611816A (zh) | 一种山楂标准对照物质及其制备方法、检测方法和应用 | |
CN107987079A (zh) | 苦参中苦参碱及氧化苦参碱提取纯化方法 | |
CN101721980B (zh) | 一种液相色谱柱混合填料及色谱柱 | |
CN116891559A (zh) | 一种有机框架材料的制备方法及提取总绿原酸的方法 | |
CN111505143A (zh) | 一种快速检测百菌清及其氧化还原产物的方法 | |
CN110090634A (zh) | 一种有机无机杂化整体柱的制备方法 | |
CN105268415A (zh) | 一种固相萃取填料及其在测定食品中磺胺残留的应用 | |
CN114184716B (zh) | 一种用于测定卤米松乳膏中有关物质组分的高效液相色谱分析方法 | |
CN110305333B (zh) | 一种柱[5]芳烃聚合物微球及其制备方法和应用 | |
CN110240544B (zh) | 一种绿原酸提取纯化方法及应用 | |
Liu et al. | Determination and isolation of purpurin and mollugin from Rubiae Radix ET Rhizoma based on a monolithic adsorbent prepared by bio-monomer | |
CN115197465B (zh) | 一种白桦酸聚合物整体柱的制备方法及应用 | |
CN102585117B (zh) | 一种制备表面分子印迹聚合物色谱柱的方法 | |
CN101367860B (zh) | 一种从混合植物甾醇中分离提取β-谷甾醇的方法 | |
CN112778110B (zh) | 一种高速逆流色谱法从牛樟芝发酵物中分离安卓奎诺尔的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20210430 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |