CN110437375B - 一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法 - Google Patents
一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法，包括，模板分子、功能单体、交联剂、引发剂和溶剂；所述模板分子为竹节参皂苷Iva；功能单体为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体混合物；交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；引发剂为偶氮二异丁腈；溶剂为无水乙醇；采用无氧状态，然后向三颈瓶中加入竹节参皂苷IVa、脱氢纵酸丙烯基羟乙酯、溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体、乙二醇二甲基丙烯酸酯并用磁力搅拌进行预聚，至瓶中出现白色微球形物质。本发明中，该制备方法采用分子印迹技术与固相萃取技术的结合，达到分离提纯的专一性与高效性，确保竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物制备的高质量。
Description
技术领域
本发明涉及竹节参聚合物技术领域，尤其涉及一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法。
背景技术
竹节参中含三萜皂苷、多糖、黄酮和挥发油等成分，现代药理学研究表明，以竹节参皂苷IVa、V为代表的皂苷类成分具有抗氧化、抗炎镇痛、抗衰老、抗疲劳、降糖等多种药理活性，随着竹节参皂苷药学研究的深入，开发一种实用、高效的竹节参总皂苷提取工艺成为其开发利用的重要环节，目前对竹节参皂苷的提取工艺的研究较多，主要包括水提法、醇提法、微波法、泡沫分离法精制、丙酮沉淀法精制法、树脂吸附法精制等。
分子印迹技术具有三大特点：构效预定性、特异识别性、广泛实用性，固相萃取是用固体物质作萃取剂从样品中提取所需组成成分，将液固萃取柱和液相色谱技术结合成的一种化学分析技术，固相萃取是一种基于色谱分离的样品前处理方法，它将分离与浓缩合二为一，通过使用不同溶剂，选择性的清洗杂质或洗脱出目标物质，因此需要将分子印迹技术与固相萃取结合的方式，进而实现对竹节参分子印迹聚合物的快速高效制备生产效果。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有竹节参皂苷IVa纯化技术中存在的缺点，而提出的一种能快速分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物，包括，模板分子、功能单体、交联剂、引发剂和溶剂；
所述模板分子为竹节参皂苷Iva；
所述功能单体为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体；
所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；
所述引发剂为偶氮二异丁腈；
所述溶剂为无水乙醇。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述模板分子、功能单体、交联剂和引发剂的物质的量1:4:20:0.1。
一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法，包括以下步骤：
S1：抽真空，向三颈瓶内连续重复三次的充入氮气，使三颈瓶内反应体系中呈现无氧的状态，得到反应所需的环境状态；
S2：向三颈瓶中依次加入竹节参皂苷IVa、脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体、乙二醇二甲基丙烯酸酯，并用磁力搅拌棒进行同一方向的搅拌，待反应一定时长后对反应溶液进行预聚，同时在反应过程中持续不断的充入氮气；
S3：预聚结束后，向三颈瓶中加入偶氮二异丁腈，并将三颈瓶的底部浸入到装有油池内，进行油浴加热回流反应，并且在反应过程中持续不断的充入氮气，直至反应一段时间后出现白色混浊；
S4：观察白色混浊物体，记录白色浑浊物体的实时状态，然后继续反应一端时间，同时在反应过程中持续不断的充入氮气，直至三颈瓶中出现白色微球形物质，此时即可得到竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物混合液；
S5：将节参皂苷Iva分子印迹聚合物混合液取出，利用离心旋干的方式将竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物进行收集备用，并且另外单独留下一部分用于扫描电镜及高校液相分析。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述磁力搅拌棒的旋转搅拌速度为800rad/min，预聚的反应时长为12h。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述油浴加热的加热温度为40℃，油浴加热的加热时长为3-4h。
作为上述技术方案的进一步描述：
所述白色浑浊状态持续反应6h后即可得到白色微球形物质。
有益效果
本发明提供了一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物及其制备方法。具备以下有益效果：
(1)：该制备方法采用分子印迹技术与固相萃取技术的结合，达到分离提纯的专一性与高效性，确保了竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物制备的高质量。
(2)：该制备方法的整体制备所需设备较少，操作简单便捷，单独一人即可实现竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备操作，并且制备过程程序简单且安全稳定，不会发生意外事故。
附图说明
图1为本发明提出的脱氢纵酸丙烯基羟乙酯合成路线的流程示意图；
图2为脱氢枞酸丙烯酸羟乙酯单体核磁图谱；
图3为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯合成1H-NMR的氢核磁共振图；
图4为溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体合成1H-NMR的氢核磁共振图；
图5为竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物的制备装置图；
图6为HPLC色谱图；图中a为珠子参浸膏色谱图，b为聚合物乙醇洗脱色谱图，c为竹节参对照品色谱图；
图7为竹节参皂苷Iva标准曲线；
图8为竹节参皂苷IVa静态吸附曲线；
图9为竹节参皂苷IVa动态吸附曲线；
图10为竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物N2吸附-脱附等温线；
图11为竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物的热失重曲线。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
如图1-4所示，一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物，包括，模板分子、功能单体、交联剂、引发剂和溶剂；
模板分子为竹节参皂苷Iva；功能单体为为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体；交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；引发剂为偶氮二异丁腈；溶剂为无水乙醇，模板分子、功能单体、交联剂和引发剂的物质的量1:4:20:0.1。
一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法，包括以下步骤：
S1：抽真空，向三颈瓶内连续重复三次的充入氮气，使三颈瓶内反应体系中呈现无氧的状态，得到反应所需的环境状态；
S2：向三颈瓶中依次加入竹节参皂苷IVa、为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体、乙二醇二甲基丙烯酸酯，并用磁力搅拌棒进行同一方向的搅拌，待反应一定时长后对反应溶液进行预聚，同时在反应过程中持续不断的充入氮气；
S3：预聚结束后，向三颈瓶中加入偶氮二异丁腈，并将三颈瓶的底部浸入到装有油池内，进行油浴加热回流反应，并且在反应过程中持续不断的充入氮气，直至反应一段时间后出现白色混浊；
S4：观察白色混浊物体，记录白色浑浊物体的实时状态，然后继续反应一端时间，同时在反应过程中持续不断的充入氮气，直至三颈瓶中出现白色微球形物质，此时即可得到竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物混合液；
S5：将节参皂苷Iva分子印迹聚合物混合液取出，利用离心旋干的方式将竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物进行收集备用，并且另外单独留下一部分用于扫描电镜及高校液相分析。
磁力搅拌棒的旋转搅拌速度为800rad/min，预聚的反应时长为12h。
油浴加热的加热温度为40℃，油浴加热的加热时长为3-4h。
白色浑浊状态持续反应6h后即可得到白色微球形物质。
如图1所示，脱氢纵酸丙烯基羟乙酯的合成路线，具体制备方法如下：
A：称取5.00g脱氢枞酸，将其置于有球形冷凝管、恒压滴定漏斗和温度计的250ml三口瓶中，加入30ml甲苯作为溶剂，使其溶解，称取4.76g二氯亚砜加入装有30ml甲苯的恒压滴定漏斗中，打开活塞，滴加结束，回流反应6h。使用旋转蒸发仪60℃下回收甲苯与二氯亚砜，得脱氢枞酸酰氯7.5g；
B：无水无氧条件下，将7.5g脱氢枞酸酰氯，2.43g无水三乙胺和8.36g丙烯酸羟乙酯置于有球形冷凝管和温度计的250ml三口瓶中，加入50ml甲苯，60℃反应12h以上。将反应液过滤除去絮状沉淀，使用旋转蒸发仪50℃下将反应液中甲苯蒸出，得红褐色油状液体；
C：用乙酸乙酯和蒸馏水等比例萃取上述红褐色油状液体，分液，水洗三次，向有机层中加入适量无水硫酸钠，使用旋转蒸发仪，60℃，将乙酸乙酯蒸出，得黄褐色油状液体，将粗产品装柱，用乙酸乙酯与石油醚的混合液作为洗脱剂，比例为1：8，收集滤液，旋干，得淡黄色油状液体，静置，析出黄色固体或白色针状结晶，即为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯。
如图2所示，溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体的合成路线，具体制备方法如下：
无水无氧条件下，将2.77g溴代十四烷，0.94g乙烯基咪唑和60ml无水乙醇置于有球形冷凝管和温度计的250ml三口瓶中，60℃反应12h以上。将反应液使用旋转蒸发仪50℃下将反应液中乙醇蒸出，得白颜色固体即为溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体。
如图3和图4所示，竹节参总皂苷的提取分离：
竹节参总皂苷的提取，
将珠子参药材于干燥箱中100℃干燥50分钟，粉碎100目，取粉末10g于100ml甲醇中，超声处理，超声参数：功率180W，频率40kHZ40min，将其过滤，取滤液，重复三次操作，合并所得滤液，减压旋干，取聚合物用50ml的热水，水温为50℃进行溶解，水饱和正丁醇萃取，重复操作三次，合并正丁醇层溶液，减压蒸干，得竹节参总皂苷。
总皂苷中竹节参皂苷IVa的鉴别：
供试品：将所得部分总皂苷用甲醇加热溶解50℃，
对照品：取竹节参皂苷IVa标品，甲醇溶解，制成每1ml含2mg竹节参皂苷Iva标品的溶液，
展开剂：正丁醇：乙酸乙酯：甲醇：甲酸：水＝5：10：0.3：0.1：3.5的上层溶液，
显色剂：10％硫酸乙醇溶液，100℃显色。
竹节参总皂苷的分离纯化
将上述竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物中的模板分子洗去，洗脱液为甲醇：乙酸＝9:1，超声30分钟，洗脱三次，用无水乙醇洗去聚合物表面的洗脱液，然后将聚合物转移至萃取小柱并用无水乙醇浸泡2h，取0.5g竹节参总皂苷溶于甲醇35ml，上样，进行吸附性实验依次用去离子水、70％乙醇洗脱，收集三个时间段的滤液，保存滤液、洗脱液、母液用于后续HPLC分析。
如图6所示，竹节参皂苷IVa母液、杂质液、洗脱液的高效液相色谱分析：
分别取配制好竹节参皂苷Iva对照品、珠子参提取母液、杂质液、洗脱液用滤头过滤，制备样品，进行HPLC定量分析，色谱柱:Thermo Scientific TM Hypersil TM C18(250*4.6)色谱柱；流动相:已腈-0.2％磷酸水(35％:65％)；检测波长:203nm；流速:0.8ml/min；柱温：室温25℃，溶样：2mg样品溶解于10.6ml乙醇+0.7ml水+0.3mlDMSO。
如图7所示，竹节参皂苷Iva标准曲线的绘制：
称取竹节参皂苷IVa标品置于100ml容量瓶中，用乙醇定容至刻度，摇匀，即得1.0μmol/ml竹节参皂苷IVa标准溶液，取1ml标准溶液四份，分别进行稀释,
得到0.2μmlol/ml,0.4μmol/ml,0.6μmol/ml,0.8μmol/ml供试液，以峰面积对浓度做标准曲线，计算线性回归方程。
线性回归方程：Y＝26.037X+0.0576；R2＝0.9986。表明竹节参皂苷Iva峰面积-浓度线性关系良好。
如图8和图9所示，竹节参皂苷IVa静态和动态吸附：
将0.20g洗取模板分子的分子印迹聚合物置于100ml锥形瓶中，加乙醇30ml浸泡8h，过滤取出乙醇，加入20ml 1.0μmol/ml竹节参皂苷IVa标品溶液，摇床振荡3h,每隔30min收集上清液并补加与收集液同体积的乙醇，收集液进行HPLC分析，计算分子印迹聚合物对竹节参皂苷IVa的静态吸附量。
计算公式：Qe＝(Co-Ce)V/W
Qe：静态吸附量(mg/g)；
Co：吸附前竹节参皂苷IVa的起始浓度(mg/ml)；
Ce：吸附竹节参皂苷IVa后达到平衡时的浓度(mg/ml)；
V：竹节参皂苷IVa标准溶液体积(ml)；
W：竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物的干重(g)。
如图10所示，N2吸附-脱附：
以Quantity Absorbed-Relative Pressure作图，得到N2吸附-脱附等温线。
如图11所示，热失重分析：
N2气氛下，由室温开始，每10min升高10℃，温度temperature和质量作双Y轴图，得到热失重曲线。
分解温度约为358℃，说明聚合物足够稳定。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物，其特征在于，包括，模板分子、功能单体、交联剂、引发剂和溶剂；
所述模板分子为竹节参皂苷Iva；
所述功能单体为脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体；
所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；
所述引发剂为偶氮二异丁腈；
所述溶剂为无水乙醇。
2.根据权利要求1所述的一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物，其特征在于，所述模板分子、功能单体、交联剂和引发剂的物质的量1:4:20:0.1。
3.一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：抽真空，向三颈瓶内连续重复三次的充入氮气，使三颈瓶内反应体系中呈现无氧的状态，得到反应所需的环境状态；
S2：向三颈瓶中依次加入竹节参皂苷IVa、脱氢纵酸丙烯基羟乙酯和溴化十四烷基乙烯基咪唑离子液体、乙二醇二甲基丙烯酸酯，并用磁力搅拌棒进行同一方向的搅拌，待反应一定时长后对反应溶液进行预聚，同时在反应过程中持续不断的充入氮气；
S3：预聚结束后，向三颈瓶中加入偶氮二异丁腈，并将三颈瓶的底部浸入到装有油池内，进行油浴加热回流反应，并且在反应过程中持续不断的充入氮气，直至反应一段时间后出现白色混浊；
S4：观察白色混浊物体，记录白色浑浊物体的实时状态，然后继续反应一端时间，同时在反应过程中持续不断的充入氮气，直至三颈瓶中出现白色微球形物质，此时即可得到竹节参皂苷Iva分子印迹聚合物混合液；
S5：将节参皂苷IVa分子印迹聚合物混合液取出，利用离心旋干的方式将竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物进行收集备用，并且另外单独留下一部分用于扫描电镜及高效液相分析。
4.根据权利要求3所述的一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，所述磁力搅拌棒的旋转搅拌速度为800rad/min，预聚的反应时长为12h。
5.根据权利要求3所述的一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，所述油浴加热的加热温度为40℃，油浴加热的加热时长为3-4h。
6.根据权利要求3所述的一种分离纯化竹节参皂苷IVa的分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于，所述白色浑浊状态持续反应6h后即可得到白色微球形物质。
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| CN103570870A (zh) * | 2013-10-21 | 2014-02-12 | 南京医科大学 | 多模板单分散三七活性皂苷分子印迹聚合物及其制备方法 |
| CN107219279A (zh) * | 2017-05-25 | 2017-09-29 | 济南大学 | 纳米铜/石墨烯修饰电极人参皂苷Rg1分子印迹传感器 |
Non-Patent Citations (1)
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