CN110423713B - 一种樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的生物防治方法 - Google Patents

一种樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的生物防治方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的生物防治方法,涉及植物病害生物防治技术领域。该生物防治所用的菌株为胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011,其保藏号为CGMCC No.5724。本发明微生物制剂含该菌株,用该微生物制剂浸泡樱桃和番茄果实10分钟,在2℃‑25℃下,贮藏30天,对樱桃和番茄果实产后霉烂病的相对防效达100%。本发明方法及其产品生产成本低,操作方便,无毒、无污染、无残留,是一种环境友好型的方法、菌株和微生物制剂。

Description

一种樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的生物防治方法
技术领域
本发明涉及植物病害生物防治技术领域,具体的涉及一株胶质芽孢杆菌及其对运输和贮藏中樱桃和/或番茄果实霉烂病的生物防治。
技术背景
樱桃和番茄果实霉烂病是樱桃和番茄果实运输和贮藏期发生的一种常见侵染性病害。樱桃和番茄果实在整个生长过程中一直暴露于空气中,受着各种霉菌的威胁,因樱桃和番茄果实在生长后期,果实里富含各种营养物质,极易滋生各种微生物。在樱桃和番茄果实运输和贮藏和存储过程中,一旦条件适宜,樱桃和番茄果实易发生霉烂变质,基本上丧失了利用价值,给樱桃和番茄果实生产者和经销者带来重大经济损失。研究表明,随着运输和贮藏期间的延长,樱桃和番茄果实霉变率达到50%-100%。樱桃和番茄果实霉变后,其内含物质被迅速分解,正常结构和内含物遭受破坏,果实表生白色、灰白色、灰色霉状物,果皮变黑、软腐,失去了使用价值,并且在霉烂过程中还产生霉菌毒素,严重影响人体健康。
运输和贮藏期,樱桃和番茄果实的霉烂主要由灰霉菌(Botrytis cinerea Pers)、镰刀菌(Fusarium spp.)等引起的侵染性病害,尤其是灰霉菌占主导地位。影响樱桃和番茄果实发生霉变的因素很多,除了周围空气中,运输和贮藏设施、设备、樱桃和番茄果实表面含有大量霉菌外,霉变程度受运输和贮藏期间温度、湿度影响。有研究表明,运输和贮藏过程霉烂病的病原菌—灰霉菌(Botrytis cinerea Pers)在2~31℃均能生长,20~23℃最适,其分生孢子萌发所需相对湿度85~100%,适宜相对湿度92~95%。
目前,有关运输和贮藏期间樱桃和番茄果实霉变防治技术报道的不多,大多数樱桃和番茄果实霉变防治技术集中在樱桃和番茄果实贮藏期间。目前报道的樱桃和番茄果实防止霉变的方法主要有:冷藏库贮藏、气调库贮藏、简易硅窗气调贮藏、电子保鲜法(高压电场保鲜法)、化学保鲜剂法。然而,目前常用的保鲜法需要有特殊设备和条件,化学保鲜剂还有果实不安全等因素的限制,特别是当以灰霉菌为主导病原菌时,它能在4℃左右仍然能很好生长,繁殖,引起樱桃和番茄果实在低温贮藏期继续被为害。目前,未见用生物防治或其产品来防治运输和贮藏期间樱桃和番茄果实霉烂的报道。
发明内容
为解决目前在运输和/或贮藏中防治樱桃和番茄果实霉烂措施存在需要有特殊设备和条件,成本较高,化学保鲜剂存在果实不安全,且防治效果均较差的技术难题,本发明提供了如下樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的生物防治方法及其菌株。
本发明提供一株胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011,其保藏号为:CGMCC No.5724。
本发明提供的一种防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的微生物制剂含上述胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011。
所述的防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的微生物制剂中的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×106cfu/mL以上。
本发明提供另一种用于防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的微生物制剂,所述微生物制剂为胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011发酵液,所述发酵液中胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011有效活菌数为1.0×106cfu/mL以上,所述胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的保藏号为CGMCC No.5724。
所述发酵液通过下述方法制备得到:
(1)将-80℃保存的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011接1~2环到种子培养基中,32℃培养24h,得活化的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011,按1%接种量,将活化的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011接种到种子培养基,在培养温度32℃、转速160rpm条件下,摇床培养12h,得到一级种子液,所述种子培养基为:蔗糖5~10g/L,酵母浸膏0.4~1g/L,硫酸铵1~2.5g/L,碳酸钙1~2g/L,七水硫酸镁0.5~1g/L,磷酸氢二钾1~3g/L,pH 7.0~7.5;
(2)按1~3%接种量,将一级种子液转接到种子罐内的二级种子培养基,在30~34℃,转速100rpm,通气量为1500L/h,罐压保持在0.04~0.06MPa条件下培养12h,得到二级种子液;所述二级种子培养基与步骤(1)中所述的种子培养基相同;
(3)按1~3%接种量,将二级种子液接种到发酵罐内的发酵培养基,在35~38℃,转速100rpm,通气量为1500L/h、罐压保持在0.04~0.06MPa条件下培养46~48h,培养至发酵液中胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数≧1×106cfu/ml,所述发酵培养基与步骤(1)中所述的种子培养基相同。
本发明还提供了上述各种微生物制剂的应用。
应用之一:上述含胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011(其保藏号为:CGMCC No.5724)的防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的微生物制剂在防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的应用。所述防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的微生物制剂中胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×106cfu/mL以上。用所述的防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的微生物制剂浸泡收获的樱桃果实和/或番茄果实。
应用之二:一种樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的生物防治方法,用含胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011有效活菌数为1×108cfu/mL的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的0~100倍液浸泡收获的樱桃果实和/或番茄果实,所述胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的保藏号为CGMCC No.5724。
应用之三:一种樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的生物防治方法,所用的微生物制剂为胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011发酵液,用其发酵液浸泡收获的樱桃果实和/或番茄果实,所述发酵液中胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011有效活菌数为1.0×106cfu/mL以上,所述胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的保藏号为CGMCC No.5724。所述发酵液可以用上述发酵液的方法制备得到。
上述各生物防治方法中浸泡收获的樱桃果实和/或番茄果实的时间为10分钟以上。浸泡收获的樱桃果实和/或番茄果实后捞起用清水淋洗5分钟,晾干其表面水分,按常规包装、贮藏和/或运输。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
用本发明有效活菌数为1.0×107cfu/mL以上的胶质芽孢杆菌菌株YN2011及其微生物制剂浸泡樱桃和番茄果实杀死其表面上附着或已侵入果实的霉烂病病菌,能使在运输和贮藏过程中的樱桃和番茄果实霉烂病的防效达到100%,防治效果极其显著,且生产成本低、操作方便、无毒、无污染、无残留,本发明提供了一种环境友好型的生物防治方法、菌株及其微生物制剂。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明,各实施例无特殊说明为常规方法。
实施例1本发明胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的分离纯化、鉴定和保藏
1胶质芽孢杆菌菌株YN2011的分离纯化
1.1材料
采自种植烟草的田间土壤。
1.2培养基制备
硅酸盐细菌固体培养基为:蔗糖5.0g/L,磷酸钠2.0g/L,七水硫酸镁0.5g/L,碳酸钙0.1g/L,六水氯化铁5.0mg/L,琼脂粉15g/L,pH 7.0。
将上述硅酸盐细菌固体培养基融化,分别倒入灭菌培养皿,冷却,制成平板,用于分离和保存细菌。
1.3分离培养
在无菌条件下,称取上述采自种植烟草的田间土壤10g土样溶于90mL的无菌水充分振荡并梯度稀释成l0-2、10-3、l0-4倍的土壤悬液,然后每个稀释度各取100μL均匀涂布于上述培养基平板上,37℃倒置培养3d。挑选无色、透明、半玻璃状并富有弹性的菌落,进一步纯化直至获得纯培养为止。最后将所获得的纯培养菌株转入终浓度为25%w/w的甘油中并密封保存于-80℃冰箱。
2胶质芽孢杆菌菌株YN2011的鉴定
2.1形态学鉴定
取1.3中保存的菌株用上述硅酸盐细菌固体培养基培养,32℃培养36小时,进行形态观察鉴定,菌落均呈边缘整齐的圆形凸起,无色透明,半玻璃状,表面光滑湿润,富有弹性难于挑起,粘稠易拉成丝,菌体为杆状。在牛肉膏蛋白胨培养基上生长不良。在显微镜下观察,菌体不运动,有端生芽孢,在无氮培养基上产生丰厚荚膜。与《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠等编著,科学出版社,2001年)中描述的胶质芽孢杆菌属形态特征基本一致,初步判断该菌株属于胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus),编号为YN2011,简称:菌株YN2011。
2.2生理生化鉴定
菌株YN2011革兰氏染色、芽孢染色、淀粉水解、葡萄糖利用、柠檬酸盐利用、V-P反应、硝酸盐还原、明胶液化等均呈阳性。
2.3分子鉴定结果
根据16S rDNA通用引物扩增序列,依据测序结果,菌株YN2011的16S rDNA序列经与NCBI数据库BLAST比对,菌株YN2011序列与菌株编号为YNUCC0001(AY571332)的胶质芽孢杆菌Bacillus mucilaginosus的相似度最高,达99%,结合菌株的形态特征,生理生化特性及16S rDNA序列,将菌株YN2011鉴定为胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus),为胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011。
3胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的保藏
本发明所述的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011于2012年1月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称:CGMCC),保藏号为CGMCC No.5724,分类命名:胶质芽孢杆菌Bacillus mucilaginosus,并于2012年1月12日检测为存活。该普通微生物中心地址:中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,邮编:100101。
实施例2本发明微生物制剂的制备,包括以下步骤:
(1)将-80℃保存的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011接1~2环到种子培养基中,32℃培养24h,得活化的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011,按1%接种量,将活化的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011接种到种子培养基,在培养温度32℃、转速160rpm条件下,摇床培养12h,得到一级种子液,所述种子培养基的组成为:蔗糖8g/L,酵母浸膏0.7g/L,硫酸铵1.5g/L,碳酸钙1g/L,七水硫酸镁0.8g/L,磷酸氢二钾2g/L,pH 7.5。
(2)按2%接种量,将一级种子液转接到种子罐内的二级种子培养基,在32℃,转速100rpm,通气量为1500L/h,罐压保持在0.05MPa条件下培养12h,得到二级种子液;所述二级种子培养基与步骤(1)中所述的种子培养基相同。
(3)按3%接种量,将二级种子液接种到发酵罐内的发酵培养基,在32℃,转速100rpm,通气量为1500L/h、罐压保持在0.05MPa条件下培养46~48h,培养至发酵液中胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数≧1×106cfu/ml时,该发酵液即为所述胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的发酵液,所述发酵液即为本发明微生物制剂;所述发酵培养基与步骤(1)中所述的种子培养基相同。
以下实施例3-4为本发明微生物制剂浸泡处理防治樱桃果实霉烂病的应用、实施例5-7为本发明微生物制剂浸泡处理防治番茄果实霉烂病的应用。
实施例3本发明微生物制剂浸泡处理防治大樱桃布鲁克斯的果实霉烂病的应用
1.试验时间:2019年5月-2019年6月。
2.试验地点:云南农业大学重点实验室进行。
3.供试材料:供试大樱桃品种为布鲁克斯,当天采摘成熟良好大樱桃布鲁克斯的果实。
4.用实施例2制备的本发明微生物制剂,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011发酵液的有效活菌数为1×108cfu/ml,简称:产品原液,以及用无菌水将产品原液稀释成10倍,100倍,共3个浓度处理,各处理发酵液浸泡大樱桃布鲁克斯的果实时,整个果实都浸泡10min,再以清水淋洗5分钟。每个处理总共100个果实,重复3次。分别置于2℃、4℃、10℃、15℃、20℃、25℃的条件下;以直接采摘未处理的大樱桃布鲁克斯的果实为空白对照,贮藏10-30天,每隔10天记录一次病情,共调查3次。试验处理为:
(1)2℃下贮藏
对照:直接采摘的大樱桃布鲁克斯的果实。
处理1:产品原液,其胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×108cfu/mL。
处理2:产品×10,产品原液10倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×107cfu/mL。
处理3:产品×100,产品原液100倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×106cfu/mL。
(2)4℃下贮藏
对照:直接采摘的大樱桃布鲁克斯的果实。
处理1:产品原液,其胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×108cfu/mL。
处理2:产品×10,产品原液10倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×107cfu/mL。
处理3:产品×100,产品原液100倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×106cfu/mL。
(3)10℃下贮藏
对照:直接采摘的大樱桃布鲁克斯的果实。
处理1:产品原液,其胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×108cfu/mL。
处理2:产品×10,产品原液10倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×107cfu/mL。
处理3:产品×100,产品原液100倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×106cfu/mL。
(4)15℃下贮藏
对照:直接采摘的大樱桃布鲁克斯的果实。
处理1:产品原液,其胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×108cfu/mL。
处理2:产品×10,产品原液10倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×107cfu/mL。
处理3:产品×100,产品原液100倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×106cfu/mL。
(5)20℃下贮藏
对照:直接采摘的大樱桃布鲁克斯的果实。
处理1:产品原液,其胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×108cfu/mL。
处理2:产品×10,产品原液10倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×107cfu/mL。
处理3:产品×100,产品原液100倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×106cfu/mL。
(6)25℃下贮藏
对照:直接采摘的大樱桃布鲁克斯的果实。
处理1:产品原液,其胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×108cfu/mL。
处理2:产品×10,产品原液10倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×107cfu/mL。
处理3:产品×100,产品原液100倍稀释液,其胶质芽孢杆菌(Bacillusmucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×106cfu/mL。
调查方法:各处理分别于贮藏10天、20天、30天,按如下分级标准,逐个果实调查病级,并计算病情指数和防治效果。0级:未腐烂;1级:腐烂程度1-10%;3级:腐烂程度11-20%;5级:腐烂程度21-40%;7级:腐烂程度41-70%;9级:腐烂程度71%以上。
防控效果(表1)
结果(表1)表明,胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011发酵液(以下简称:胶质芽孢杆菌菌株YN2011发酵液)浸泡大樱桃布鲁克斯果实10分钟后,在不同的温度贮藏条件下,对大樱桃布鲁克斯果实霉烂病均有很好防控效果,且随着浓度越高,防治效果越好。在产品原液(1.0×108cfu/mL)和产品×10倍液(1.0×107cfu/mL)浸泡10分钟后,即使在25℃下30天,对大樱桃布鲁克斯果实霉烂病的防效仍然达100%。
防治效果(%)=[对照病情指数–处理病情指数]×100/对照病情指数(其他实施例的防治效果均按此公式计算)。
表1.实施例3胶质芽孢杆菌菌株YN2011发酵液浸泡防治大樱桃布鲁克斯果实霉烂病效果
Figure BDA0002162504940000081
实施例4本发明微生物制剂浸泡处理防治大樱桃萨米脱的果实霉烂病的应用
实施例4除以下操作不同外,其余步骤与实施例3相同,不再赘述。
供试材料:供试大樱桃品种为萨米脱,当天采摘成熟良好大樱桃萨米脱的果实。
防治效果详见表2。
结果(表2)表明,胶质芽孢杆菌菌株YN2011发酵液浸泡大樱桃萨米脱果实10分钟后,在不同的温室贮藏条件下,对大樱桃萨米脱果实霉烂病均有很好防控效果,且随着浓度越高,防治效果越好。在产品原液(1.0×108cfu/mL)和产品×10倍液(1.0×107cfu/mL)浸泡10分钟后,即使在25℃下30天,对大樱桃萨米脱果实霉烂病的防效仍然达100%。
表2.实施例4胶质芽孢杆菌菌株YN2011发酵液防治大樱桃萨米脱果实霉烂病效果
Figure BDA0002162504940000091
实施例5本发明微生物制剂浸泡处理防治番茄京彩的果实霉烂病的应用
实施例5除以下操作不同外,其余步骤与实施例3相同,不再赘述。
供试材料:供试番茄品种为京彩,当天采摘成熟良好番茄京彩的果实。
防治效果详见表3。
结果(表3)表明,胶质芽孢杆菌菌株YN2011发酵液浸泡番茄京彩果实10分钟后,在不同的温室贮藏条件下,对番茄京彩果实霉烂病均有很好防控效果,且随着浓度越高,防治效果越好。在产品原液(1.0×108cfu/mL)和产品×10倍液(1.0×107cfu/mL)浸泡10分钟后,即使在25℃下30天,对番茄京彩果实霉烂病的防效仍然达100%。
表3.实施例5胶质芽孢杆菌菌株YN2011发酵液防治番茄京彩果实霉烂病效果
Figure BDA0002162504940000101
实施例6本发明微生物制剂浸泡处理防治番茄瑞克斯旺882的果实霉烂病的应用
实施例6除以下操作不同外,其余步骤与实施例3相同,不再赘述。
供试材料:供试番茄品种为瑞克斯旺882,当天采摘成熟良好番茄瑞克斯旺882的果实。
防治效果详见表4。
结果(表4)表明,胶质芽孢杆菌菌株YN2011发酵液浸泡番茄瑞克斯旺882果实10分钟后,在不同的温室贮藏条件下,对番茄瑞克斯旺882果实霉烂病均有很好防控效果,且随着浓度越高,防治效果越好。在产品原液(1.0×108cfu/mL)和产品×10倍液(1.0×107cfu/mL)浸泡10分钟后,即使在25℃下30天,对番茄瑞克斯旺882果实霉烂病的防效仍然达100%。
表4.实施例6胶质芽孢杆菌菌株YN2011发酵液防治番茄瑞克斯旺882果实霉烂病效果
Figure BDA0002162504940000111
实例7、本发明微生物制剂浸泡处理防治番茄瑞粉的果实霉烂病的应用
实施例7除以下操作不同外,其余步骤与实施例3相同,不再赘述。
供试材料:供试番茄品种为瑞粉,当天采摘成熟良好番茄瑞粉的果实。
防治效果见表5。
结果(表5)表明,胶质芽孢杆菌菌株YN2011发酵液浸泡番茄瑞粉果实10分钟后,在不同的温室贮藏条件下,对番茄瑞粉果实霉烂病均有很好防控效果,且随着浓度越高,防治效果越好。在产品原液(1.0×108cfu/mL)和产品×10倍液(1.0×107cfu/mL)浸泡10分钟后,即使在25℃下30天,对番茄瑞粉果实霉烂病的防效仍然达100%。
表5.实施例7胶质芽孢杆菌菌株YN2011发酵液防治番茄瑞粉果实霉烂病效果
Figure BDA0002162504940000121

Claims (10)

1.一株胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011,其保藏号为:CGMCCNo.5724。
2.防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的微生物制剂,其特征在于:所述微生物制剂含权利要求1所述的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011。
3.根据权利要求2所述的防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的微生物制剂,其特征在于:所述的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数为1.0×106cfu/mL以上。
4.一种用于防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的微生物制剂,其特征在于,所述微生物制剂为胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011发酵液,所述发酵液中胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011有效活菌数为1.0×106cfu/mL以上,所述胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的保藏号为CGMCC No.5724。
5.根据权利要求4所述的微生物制剂,其特征在于,所述发酵液通过下述方法制备得到:
(1)将-80℃保存的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011接1~2环到种子培养基中,32℃培养24h,得活化的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011,按1%接种量,将活化的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011接种到种子培养基,在培养温度32℃、转速160rpm条件下,摇床培养12h,得到一级种子液,所述种子培养基为:蔗糖5~10g/L,酵母浸膏0.4~1g/L,硫酸铵1~2.5g/L,碳酸钙1~2g/L,七水硫酸镁0.5~1g/L,磷酸氢二钾1~3g/L,pH 7.0~7.5;
(2)按1~3%接种量,将一级种子液转接到种子罐内的二级种子培养基,在30~34℃,转速100rpm,通气量为1500L/h,罐压保持在0.04~0.06MPa条件下培养12h,得到二级种子液;所述二级种子培养基与步骤(1)中所述的种子培养基相同;
(3)按1~3%接种量,将二级种子液接种到发酵罐内的发酵培养基,在35~38℃,转速100rpm,通气量为1500L/h、罐压保持在0.04~0.06MPa条件下培养46~48h,培养至发酵液中胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的有效活菌数≧1×106cfu/ml,所述发酵培养基与步骤(1)中所述的种子培养基相同。
6.权利要求2所述的防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的微生物制剂在防治樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的应用。
7.一种樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的生物防治方法,其特征在于:用含胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011有效活菌数为1×108cfu/mL的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的0~100倍液浸泡收获的樱桃果实和/或番茄果实,所述胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株YN2011的保藏号为CGMCC No.5724。
8.一种樱桃和/或番茄果实产后霉烂病的生物防治方法,其特征在于:用权利要求4或5所述的微生物制剂浸泡收获的樱桃果实和/或番茄果实。
9.根据权利要求7或8所述的生物防治方法,其特征在于,所述浸泡收获的樱桃果实和/或番茄果实的时间为10分钟以上。
10.根据权利要求9所述的生物防治方法,其特征在于,浸泡收获的樱桃果实和/或番茄果实后捞起用清水淋洗5分钟,晾干其表面水分,按常规包装、贮藏和/或运输。
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