CN110420274A - 一种治疗犬冠状病毒病的药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗犬冠状病毒病的中药组合物及其制备方法和应用,它由以下重量份的中药组成忽布筋骨草9~28重量份,白猪栗根30~80重量份,蛇白蔹5~15重量份,剑叶耳草10~30重量份。本发明的中药组合物采用特定的配伍,四种药物联合使用,相辅相成,协调作用,具有标本兼治,整体疗效高,疗程短,不易产生耐药性,残留低,毒副作用小等优点,有效的治疗犬冠状病毒病。
Description
技术领域
本发明属于中兽药技术领域,涉及一种治疗犬冠状病毒病的药物组合物,本发明还涉及该中药组合物的制备方法及应用。
背景技术
犬冠状病毒病是由犬冠状病毒(CCV)引起的一种急性肠道性传染病,以呕吐、腹泻、脱水及易复发为特点。本病可感染犬、貂和狐狸等犬科动物,不同品种、性别和年龄犬都可感染。病犬和带毒犬是主要传染源,病毒经呼吸道和消化道传染给健康犬及其他易感动物。本病一年四季均可发生,但多发于冬季。气候突变,卫生条件差,犬群密度大,断奶转舍及长途运输等均可诱发本病。
该病传染性强、传播速度快,几天后可蔓延全群,潜伏期1-3天。临床症状轻重不一,有的无明显症状,有的可呈现致死性胃肠炎症状。病犬表现嗜睡、衰弱、厌食,初期可见有持续性数天呕吐,随后出现腹泻,粪便呈稀粥样或水样、黄绿色或桔红色、恶臭,有时粪便中混有少量粘液和血液,病犬表现高度脱水、消瘦、眼球下陷、皮肤弹力下降。多数病犬体温变化不大。成年犬发病一般不死亡,幼犬发病率、死亡率较高。犬冠状病毒传染性强、传播速度快,对幼犬危害极大,如不及时控制,会造成死亡,并且极易复发,给养狗业带来极大的经济损失。
目前对于犬冠状病毒感染无特效药,主要采用对症疗法,如止吐、止泻、补液,用抗生素防止继发感染,但是,抗生素为抗细菌药物,不能有效的抗病毒,因此,不能达到从根本上治疗由犬冠状病毒引起的犬冠状病毒病。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗犬冠状病毒病的药物组合物,该中药组合物能迅速杀灭肠道病毒,减少腹泻次数,减轻脱水症状,避免加重中毒,且安全,达到标本兼治的目的。
本发明的另一个目的是提供上述治疗犬冠状病毒病的药物组合物的制备方法。
本发明还有一个目的在于提上述药物组合物在制备治疗犬冠状病毒病的药物中的应用。本发明的中药组合物可清热解毒、涩肠止泻、凉血止血、降逆止呕,达到治疗犬冠状病毒病的目的。
本发明的目的是通过以下方式实现的:
一种治疗犬冠状病毒病的药物组合物,它由以下重量份的中药材制成:忽布筋骨草9~28重量份,白猪栗根30~80重量份,蛇白蔹5~15重量份,剑叶耳草10~30重量份。
优选的,上述组合物由下列重量份的中药材制成:忽布筋骨草9~16重量份,白猪栗根28~45重量份,蛇白蔹5~10重量份,剑叶耳草10~20重量份。
特别优选的,上述组合物由以下重量份的中药材制成:忽布筋骨草11~13重量份,白猪栗根35~40重量份,蛇白蔹7~9重量份,剑叶耳草12~15重量份。
本发明所述的治疗犬冠状病毒病的药物组合物可与药学可接受的辅料制成所需剂型。
优选的,所述的剂型为口服液。
所述的治疗犬冠状病毒病的药物组合物的制备方法,该方法包括以下步骤:
将组合物重量份配比的忽布筋骨草、白猪栗根、蛇白蔹和剑叶耳草混合,加水煎煮2~3次,将煎液合并后浓缩至稠状;再加乙醇调至乙醇浓度为60%~70%,充分搅匀后,冷藏进行沉淀,过滤,收集滤液,并回收滤液中的乙醇;在上述回收乙醇后的药液中,再加乙醇调至乙醇浓度为75%~80%,搅匀后,冷藏,进行沉淀,过滤,收集滤液;并回收滤液中的乙醇,再将上述滤液浓缩至无醇味,药液浓缩。
所述的治疗犬冠状病毒病的口服液的制备方法,包括以下步骤:
将组合物重量份配比的忽布筋骨草、白猪栗根、蛇白蔹、剑叶耳草混合加水煎煮2~3次,将煎液合并后浓缩至稠状,再加乙醇调至乙醇浓度为60%~70%,充分搅匀后,冷藏进行沉淀,过滤,收集滤液并回收滤液中的乙醇;在上述回收乙醇后的药液再加乙醇调至乙醇浓度为75%~80%,搅匀,冷藏沉淀,过滤,收集滤液并回收乙醇后,再浓缩至无醇味,药液浓缩;得到浓度为每毫升含1~2克生药量的药液,加入防腐剂0.1%~0.2%,无菌分装即得。
优选防腐剂为苯甲酸。
优选乙醇为95%的乙醇。
上述治疗犬冠状病毒病的药物组合物在制备抑制小肠推进的中兽药物中应用具有显著效果。
上述治疗犬冠状病毒病的药物组合物在制备治疗犬冠状病毒病的药物中应用具有显著效果。
上述忽布筋骨草,为唇形科植物白苞筋骨草Ajugalupulina Maxim的全草,味辛、苦。白猪栗根,为壳斗科植物高山栲CastanopsisdelavayiFranch.的根,味辛、涩。蛇白蔹,为葡萄科植物东北蛇葡萄Ampelopsis brevipedunculata(maxim)Trautv.根皮,味辛、苦。剑叶耳草,为茜草科植物剑叶耳草Hedyotislancea(Thunb.)O.Kuntze的全草,味甘。
本发明的有益效果:本方为疫毒热痢而设。疫毒熏灼,胃肠受损,故持续呕吐、腹泻,严重脱水;气血与疫毒相搏击,化为脓血,故下痢赤白相间或呈桔红色、恶臭。方中忽布筋骨草,清热凉血解毒,主治肠痈,为主药;辅以白猪栗根涩肠止泻;蛇白蔹解毒敛疮,治胃肠溃烂,亦能止血止呕,为佐药;剑叶耳草入脾经,健脾止呕,亦能止血,为使药。诸药配伍,能清热解毒、涩肠止泻、凉血止血、降逆止呕,用于疫毒热痢,具有良好的治疗作用。
下面就本发明的临床效果进一步说明本发明的疗效。
一、本发明对小肠推进运动试验
1、药品
(1)本发明高剂量组:实施例2制备获得的中药口服液,每毫升含1克生药的浓度,给药剂量(20g/kg)。
(2)本发明中剂量组:实施例2制备获得的中药口服液,每毫升含1克生药的浓度,给药剂量(10g/kg)。
(3)本发明低剂量组:实施例2制备获得的中药口服液,每毫升含1克生药的浓度,给药剂量(5g/kg)。
(4)白猪栗根组:仅采用30克白猪栗根药材,按照本发明实施例2制备方法获得的白猪栗根口服液,每毫升含1克生药的浓度。
(5)蛇白蔹组:仅采用5克蛇白蔹药材,按照本发明实施例2制备方法获得的蛇白蔹口服液,每毫升含1克生药的浓度。
(6)白猪栗根和蛇白蔹复合中药组:白猪栗根30克、蛇白蔹5克;按照本发明实施例2制备方法获得的白猪栗根和蛇白蔹复合中药口服液,每毫升含1克生药的浓度。
(7)西药对照组:易蒙停(盐酸洛派丁胺胶囊),购自于泰州市人民医院。
2、试验方法
取ICR小鼠48只,雌雄各半,随机分成正常对照组、西药对照组、本发明高剂量组、中剂量组、低剂量组,白猪栗根组,蛇白蔹组,白猪栗根和蛇白蔹复合中药组,共8组,每组6只。按组分别灌胃,分别给予相应药物0.2mL/10gB.W,正常对照组给予等体积生理盐水,每日一次,连续4天。各组小鼠在给药后第三天开始禁食24小时。实验第四天,给药后1小时,灌胃10%阿拉伯胶制成5%活性炭悬液0.2mL/10gB.W,20分钟后,脱颈椎处死小鼠,打开腹腔,分离肠系膜,剪取上至幽门,下至回盲部之间的肠管,置于平底托盘上,轻轻将小肠拉成直线,测量肠道长度作为“小肠总长度”,从幽门至炭末前沿的距离作为“炭末在肠道推进距离”,计算炭末推进百分率,用spss软件进行组间t检验。
炭末推进率(%)=炭末在小肠推进距离/小肠总长度×100%。结果见表1。
表1对小肠推进运动的影响(X±SD)
注:与正常对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
从表1可见,本发明药物高剂量组、中剂量组比白猪栗根组,白猪栗根和蛇白蔹复合中药组以及易蒙停对小肠推进功能有明显抑制作用,蛇白蔹组单独使用,对小肠推进功能和正常对照组相似。本发明中药组合物对小肠推进功能有显著的抑制作用,可用于抑制小肠推进作用的中兽药中。
二、本发明组合物对犬冠状病毒抗病毒试验
1、药品
(1)白猪栗根组:仅采用白猪栗根药材90克,按照本发明实施例4制备方法获得的白猪栗根口服液,每毫升含1.5克生药的浓度。
(2)蛇白蔹组:仅采用蛇白蔹药材15克,按照本发明实施例4制备方法获得的蛇白蔹口服液,每毫升含1.5克生药的浓度。
(3)剑叶耳草组:仅采用剑叶耳草药材30克,按照本发明实施例4制备方法获得的剑叶耳草口服液,每毫升含1.5克生药的浓度。
(4)忽布筋骨草组:仅采用忽布筋骨草药材27克,按照本发明实施例4制备方法获得忽布筋骨草口服液,每毫升含1.5克生药的浓度。
(5)白猪栗根、蛇白蔹和剑叶耳草复合中药组:采用白猪栗根药材90克、蛇白蔹药材15克和剑叶耳草药材30克,按照本发明实施例4制备方法获得复合中药口服液,每毫升含1.5克生药的浓度。
(6)白猪栗根、忽布筋骨草和剑叶耳草复合中药组:采用白猪栗根药材90克、忽布筋骨草药材27克和剑叶耳草药材30克,按照本发明实施例4制备方法获得复合中药口服液,每毫升含1.5克生药的浓度。
(7)白猪栗根、蛇白蔹和忽布筋骨草复合中药组:采用白猪栗根药材90克、蛇白蔹药材15克和忽布筋骨草药材27克,按照本发明实施例4制备方法获得复合中药口服液,每毫升含1.5克生药的浓度。
(8)本发明组:本发明实施例4制备得到的口服液,每毫升含1.5克生药的浓度。
(9)西药对照组:金刚烷胺由江苏扬子江药业有限公司提供,将其/配成0.2mg/mL浓度。
(10)正常对照组:
2、毒株:由临床病例采集,并经鉴定确定为犬冠状病毒。
3、试验方法
将各组中药、西药和病毒液等体积混合后,每孔100μL加到单层vero细胞的96孔板上,每日观察细胞病变效应(CPE)。在培养72h后,用MTT法检测570nm处的D值,计算病毒对细胞的损伤抑制率(即细胞保护率),损伤抑制率=(中药组D值-病毒对照组D值)/(空白对照组D值-病毒对照组D值)×100%,结果见表3。
表3对细胞损伤抑制率
注:与西药对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
结果显示,本发明中药组合物对犬冠状病毒的抗病毒作用相比其他复合中药组的治疗效果更为显著,说明本发明中药组合物四种药物联合使用,相辅相成,具有协同治疗作用,且治疗效果较为显著。
三、下面结合临床实验数据说明本发明的有益效果:
1、一般资料自2017年6月至2018年12月间共收集55例犬冠状病毒病的宠物犬,50-70日龄,体重均在1.3公斤左右,每例宠物犬病程均为3-5天,随机分为:治疗组45例,对照组10例。两组病情资料无显著差异,具有可比性。
2、治疗方法
2.1、对照组10例采用常规的治疗方案,方案如下:单克隆抗体肌肉注射,每2天一次,用药2次,每次用药量为4mL;静脉滴注乳酸钠林格液,每天1次,用药量为250mL补液、补离子,纠正酸中毒;病犬呕吐、出血严重者,补给适量止血敏和爱茂尔;疗程5天。单克隆抗体购自于山东绿都生物科技有限公司,乳酸钠林格液购自于辰欣药业股份有限公司,止血敏和爱茂尔均购自于山西兆益生物有限公司。
2.2、治疗组45例采用口服本发明实施例1的口服液,每次服药量为3mL,早中晚各一次,疗程5天。
2.3、观察项目:治疗前后犬只的腹泻、呕吐、脱水及精神情况的改善程度,观察1个月内有无反复。
2.4、统计学方法采用SPSS统计软件进行分析。
3、疗效标准与治疗结果
3.1、疗效标准:疗效标准参照《兽医病症判断疗效标准》中有关疗效标准。痊愈:临床症状全部消失,实验室检查正常。好转:临床症状减轻,实验室检查改善或正常。无效:临床症状无明显好转或加重。
3.2、治疗统计结果见表2
表2治疗组与对照组的疗效对比
通过上述实验数据表明,总有效率治疗组为88.8%,对照组为80%,两组比较,差异不显著(P>0.05),因此本发明制得的药物能够安全有效的治疗犬冠状病毒病。
二、本发明对临床犬冠状病毒病的疗效观察
应用实例1:2017年1月5日,江苏宿迁泗水古城宠物医院,有一只德国牧羊犬就诊,体重3.2公斤,开始精神沉郁,厌食,软便,轻微呕吐,随后发展成为频繁呕吐,剧烈腹泻,排出恶臭的酱油样血便,经犬冠状病毒试纸条检测为阳性。
治疗:用常规疗法抗病毒、补水、补离子、止血、止吐等,无明显效果,选用本发明药物进行治疗(实施例1所得中药组合物),每次口服6毫升,每天3次,连用3天,患狗腹泻停止,开始吃食,恢复正常。
应用实例2:无锡大幅宠物医院,2017年10月13日,有一只博美犬就诊,公,2.2公斤,厌食,抑郁,并呕吐,随后出现腹泻,大便初呈黄色随后呈酱红色,恶臭,出现明显脱水、盐代谢障碍,疑为犬冠状病毒感染,用冠状病毒试纸条试纸检测为阳性。
治疗:用本发明药物(实施例2所得中药组合物)每次口服4毫升,每天3次,连用2天,进行治疗,第二天腹泻停止,第三天开始吃食,精神好转,第四天即痊愈。
应用实例3:江苏常州宠物医院,2018年4月17日有一只哈士奇就诊,公,8.1公斤,精神差,嗜睡,衰弱,厌食,呕吐,先吐出食物,而后吐出黄绿色流体。发病一天后开始腹泻,粪便稀且呈黄绿色,最后成酱油色血便。
治疗:先用犬冠状病毒单克隆抗体、病毒灵等治疗,无明显效果,选用本发明药物(实施例3所得中药组合物)进行治疗,每次口服8毫升,每天3次,第3天腹泻停止,在应用本发明药物口服的同时,并进行补液,补离子,纠正酸中毒,连用4天,患犬腹泻停止即痊愈。
本发明口服液在江苏、安徽、上海等宠物医院应用,共治疗病犬756只,康复658只,平均治愈率87.03%,均取得了很好的效果。
本发明是一种纯中药制剂,经毒性试验,无毒副作用,安全可靠,标本兼治,疗程短,治愈率高,不易产生耐药性,避免了兽药残留和社会公害的发生,填补了治疗犬冠状病毒病的空白。
三、安全性评价
取ICR小鼠25只,体重在22~25克,按体重随机分成5组,每组5只,雌雄各半,口服溶液给药(按实施例2制备得到的中药组合物),其中4组的给药量分别为0.2毫升/只、0.4毫升/只、0.6毫升/只和0.8毫升/只,每天口服2次,连续给药5天,停药后连续观察20天。其余一组为对照组,对照组自由饮水。结果所有小鼠健存,其活动、饮食、毛发、排泄物未发现异常,未见毒性反应。对小鼠口腔和破损皮肤进行刺激性试验,未见有刺激性反应和其它不良反应。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1
组方:忽布筋骨草11克,白猪栗根35克,蛇白蔹7克,剑叶耳草13克。
具体制备方法如下:
将忽布筋骨草、白猪栗根、蛇白蔹、剑叶耳草4味中药混合,加总药材5倍重量的水,浸泡24小时,煎煮2次,煎液合并后浓缩至稠状,加质量浓度为95%乙醇调至乙醇浓度为60%,充分搅匀后,冷藏沉淀,过滤,收集滤液并回收滤液中的乙醇,在上述回收乙醇后的药液再加质量浓度为95%的乙醇调至乙醇浓度为75%,搅匀,冷藏,沉淀,过滤,收集滤液并回收乙醇后,再浓缩至无醇味,药液浓缩;得到浓度为每毫升含1克生药量的药液,加入药液重量比为0.1%的防腐剂苯甲酸,调pH=7.0,制成口服液,无菌分装即得。
实施例2
组方:忽布筋骨草13克,白猪栗根40克,蛇白蔹8克,剑叶耳草15克。
具体制备方法如下:
忽布筋骨草、白猪栗根、蛇白蔹、剑叶耳草混合,加4种中药材总重量的4倍水浸泡24小时,煎煮3次,煎液合并后浓缩至稠状,加质量浓度为95%乙醇调至乙醇浓度65%,充分搅匀,冷藏,沉淀48小时,过滤,收集滤液并回收滤液中的乙醇。在上述回收乙醇后的药液再加质量浓度为95%乙醇至78%,搅匀后冷藏沉淀48小时,过滤,收集滤液并回收乙醇,再浓缩至无醇味,药液继续浓缩,达到每毫升含1克生药浓度,加入药液重量百分比为0.15%的防腐剂苯甲酸,调pH=7.0,制成口服液,无菌分装即得。
实施例3
组方:忽布筋骨草18克,白猪栗根30克,蛇白蔹10克,剑叶耳草20克。
具体制备方法如下:
将忽布筋骨草、白猪栗根、蛇白蔹、剑叶耳草混合,加4种中药材总重量的5倍水浸泡24小时,煎煮3次,煎液合并后浓缩至稠状,加质量浓度为95%的乙醇调至乙醇浓度70%,充分搅匀,冷藏,沉淀48小时,过滤,收集滤液并回收乙醇。在上述回收乙醇后的药液再加质量浓度为95%的乙醇至乙醇浓度80%,搅匀冷藏沉淀48小时,过滤,收集滤液并回收乙醇,再浓缩至无醇味,药液继续浓缩,达到每毫升含2克生药浓度,加入防腐剂0.1%苯甲酸,调pH=7.0,制成口服液,无菌分装即得。
实施例4
组方:忽布筋骨草15克,白猪栗根40克,蛇白蔹10克,剑叶耳草15克。
具体制备方法如下:
将忽布筋骨草、白猪栗根、蛇白蔹、剑叶耳草混合,加4种中药材总重量的5倍水浸泡24小时,煎煮2次,煎液合并后浓缩至稠状,加质量浓度为95%的乙醇调至乙醇浓度为60%,充分搅匀,冷藏,沉淀48小时,过滤,收集滤液并回收乙醇。在上述回收乙醇后的药液再加质量浓度为95%乙醇至乙醇浓度为80%,搅匀冷藏沉淀48小时,过滤,收集滤液并回收乙醇,再浓缩至无醇味,药液继续浓缩,达到每毫升含1.5克生药浓度,加入防腐剂苯甲酸重量比为0.2%,调pH=7.0,制成口服液,无菌分装即得。
实施例5
组方:忽布筋骨草13克,白猪栗根45克,蛇白蔹9克,剑叶耳草15克。
具体制备方法如下:
将忽布筋骨草、白猪栗根、蛇白蔹、剑叶耳草混合,加4种中药材总重量的5倍水浸泡26小时,煎煮2次,煎液合并后浓缩至稠状,加质量浓度为95%的乙醇调至乙醇浓度为70%,充分搅匀,冷藏,沉淀48小时,过滤,收集滤液并回收乙醇。在上述回收乙醇后的药液再加质量浓度为95%乙醇至乙醇浓度为75%,搅匀冷藏沉淀48小时,过滤,收集滤液并回收乙醇,再将上述滤液浓缩至无醇味,药液浓缩即得。
Claims (10)
1.一种治疗犬冠状病毒病的药物组合物,其特征在于,该组合物由以下重量份的中药制成:忽布筋骨草9~28重量份,白猪栗根30~80重量份,蛇白蔹5~15重量份,剑叶耳草10~30重量份。
2.根据权利要求1所述的治疗犬冠状病毒病的药物组合物,其特征在于,该组合物由以下重量份的中药制成:忽布筋骨草9~16重量份,白猪栗根28~45重量份,蛇白蔹5~10重量份,剑叶耳草10~20重量份。
3.根据权利要求1所述的治疗犬冠状病毒病的药物组合物,其特征在于,该组合物由以下重量份的中药制成:忽布筋骨草11~13重量份,白猪栗根35~40重量份,蛇白蔹7~9重量份,剑叶耳草12~15重量份。
4.根据权利要求1所述的治疗犬冠状病毒病的药物组合物,其特征在于,所述的组合物与药学可接受的辅料制成所需剂型。
5.根据权利要求4所述的治疗犬冠状病毒病的药物组合物,其特征在于,所述的剂型为口服液。
6.一种权利要求1、2或3所述的治疗犬冠状病毒病的药物组合物的制备方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
将忽布筋骨草、白猪栗根、蛇白蔹和剑叶耳草混合,加水煎煮2~3次,将煎液合并后浓缩至稠状;再加乙醇调至乙醇浓度为60%~70%,冷藏沉淀,过滤,收集滤液,并回收滤液中的乙醇;在上述回收乙醇后的药液中,再加乙醇调至乙醇浓度为75%~80%,搅匀后,冷藏,沉淀,过滤,收集滤液;并回收滤液中的乙醇,再将上述滤液浓缩至无醇味,药液浓缩。
7.一种权利要求5所述的治疗犬冠状病毒病的口服液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
将忽布筋骨草、白猪栗根、蛇白蔹、剑叶耳草混合加水煎煮2~3次,将煎液合并后浓缩至稠状,再加乙醇调至乙醇浓度为60%~70%,冷藏沉淀,过滤,收集滤液并回收滤液中的乙醇;在上述回收乙醇后的药液再加乙醇调至乙醇浓度为75%~80%,搅匀,冷藏,沉淀,过滤,收集滤液并回收乙醇后,再浓缩至无醇味,药液浓缩;得到浓度为每毫升含1~2克生药量的药液,加入防腐剂0.1%~0.2%,无菌分装即得。
8.根据权利要求6或7所述的制备方法,其特征在于,所述的乙醇为质量浓度为95%的乙醇。
9.一种权利要求1、2或3所述的治疗犬冠状病毒病的药物组合物在制备抑制小肠推进的中兽药物中的应用。
10.权利要求1、2或3所述的治疗犬冠状病毒病的药物组合物在制备治疗犬冠状病毒病的药物中应用。
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20191108 |
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