CN110403994A - 白头翁汤醇提物在制备治疗食管癌药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及白头翁汤醇提物在制备治疗食管癌药物中的应用，可有效解决食管癌的治疗用药问题，所述的白头翁汤醇提物是，将白头翁15g、黄连15g、黄柏12g、秦皮12g作原料药物，加原料药物重量15倍、体积浓度95%乙醇浸泡7天，负压过滤，恒温旋蒸，水浴蒸发，置于干燥箱内负压真空干燥，即得白头翁汤醇提物。本发明原料丰富，易生产制备，白头翁汤醇提物具有抗食管癌细胞活性，特别是对食管癌EC‑1、Eca109、TE‑1、EC9706有显著的抑制作用，可有效用于制备治疗食管癌的药物，是治疗食管癌药物上的创新，开拓了白头翁汤的新用途，有巨大的经济和社会效益。
Description
技术领域
本发明涉及医药，特别是一种白头翁汤醇提物在制备治疗食管癌药物中的应用。
背景技术
食管癌是全球十大恶性肿瘤之一，每年新增病例可达480000例,同时其死亡率高居所有肿瘤的第6位,5年生存率仅为20％。我国每年新增病例在25万左右，占食管癌总发病率的半数以上。食管癌属于食道正常组织之外的赘生物，切除是其首选治疗方。但是，食管癌增殖速度较快，呈弥漫性增长，很难做到真正意义上的彻底切除。目前采用以手术为主、多学科综合治疗的方式，如放、化疗、免疫治疗、中医治疗等。随着化疗药物毒副作用及肿瘤的MDR现象的增多，中医在治疗食管癌中发挥着越来越重要的作用。
白头翁汤源于张仲景《伤寒论·厥阴篇》，为中医四大经典之一《伤寒论》中清热类代表性方剂，原方由白头翁6g、黄连9g、黄柏9g、秦皮9g组成，其药物配比及用法对临床治疗具有较高价值和指导意义。根据现代药理研究，白头翁汤主要成分由白头翁皂苷类、盐酸小檗碱类、秦皮素类和黄芩苷类组成，白头翁皂苷和黄芩苷类均含有羧基，盐酸小檗碱类含有羟基，在含有极性的溶剂中具有较高溶解度。水是一种强的极性溶剂，极性大于乙醇，但疏于油，可以提取药物中的无机盐、有机盐、生物碱盐、糖类、氨基酸及苷类物质，为常用的制备溶剂，但对脂类物质提取效果差。乙醇即具有亲水性又具有亲脂性，穿透能力强于水，难溶于水的亲脂性成分也能溶于乙醇，在临床应用上，使用除了乙醇外的有机溶剂，均需要进行残留量检测，因此采用有机溶剂提取药物时多选用乙醇作为提取剂。实验室前期研究发现，白头翁汤水煎物对食管癌细胞生长有一定的抑制作用。为了更好发挥白头翁汤药用价值，探究白头翁汤醇提物对食管癌细胞的作用，本研究运用醇提和水煎药物制备方法、MTT法、RTCA检测、流式细胞分析、Western blot分析等方法，探寻白头翁汤醇提物对食管癌TE-1、EC-1、Eca109、EC9706细胞恶性表型、周期以及EGFR-PLC-γ1-PKCα信号通路上蛋白表达的影响，探究白头翁汤最佳组方治疗食管癌的作用机制，以期为中医临床治疗食管癌提供参考。但至今未见有公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种白头翁汤醇提物在制备治疗食管癌药物中的应用，可有效解决食管癌的治疗用药问题。
本发明解决的技术方案是，一种白头翁汤醇提物在制备治疗食管癌药物中的应用，所述的白头翁汤醇提物是，将白头翁15g、黄连15g、黄柏12g、秦皮12g作原料药物，加原料药物重量15倍、体积浓度95％乙醇浸泡7天，负压过滤，恒温旋蒸，水浴蒸发，置于干燥箱内负压真空干燥，即得白头翁汤醇提物。
本发明原料丰富，易生产制备，白头翁汤醇提物具有抗食管癌细胞活性，特别是对食管癌EC-1、Eca109、TE-1、EC9706有显著的抑制作用，可有效用于制备治疗食管癌的药物，是治疗食管癌药物上的创新，开拓了白头翁汤的新用途，有巨大的经济和社会效益。
附图说明
图1为本发明白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC-1细胞作用的量效关系图。
图2为本发明白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC9706细胞作用的量效关系图。
图3为本发明白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌ECa109细胞作用的量效关系图。
图4为本发明白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌TE-1细胞作用的量效关系图。
图5为本发明白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC-1细胞作用的时效关系图。
图6为本发明白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC9706细胞作用的时效关系图。
图7为本发明白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌ECa109细胞作用的时效关系图。
图8为本发明白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌TE-1细胞作用的时效关系图。
图9为本发明醇提和水煎白头翁汤对EC-1细胞增殖能力的影响图。
图10为本发明醇提和水煎白头翁汤对EC9706细胞增殖能力的影响图。
图11为本发明醇提和水煎白头翁汤Eca109细胞增殖能力的影响图。
图12为本发明醇提和水煎白头翁汤TE-1细胞增殖能力的影响图。
图13为本发明醇提和水煎白头翁汤对EC-1细胞浸润作用的影响图。
图14为本发明醇提和水煎白头翁汤对EC9706细胞浸润作用的影响图。
图15为本发明醇提和水煎白头翁汤对Eca109细胞浸润作用的影响图。
图16为本发明醇提和水煎白头翁汤对TE-1细胞浸润作用的影响图。
图17为本发明醇提和水煎白头翁汤对EC-1细胞迁移能力的影响图。
图18为本发明醇提和水煎白头翁汤对EC9706细胞迁移能力的影响图。
图19为本发明醇提和水煎白头翁汤对Eca109细胞迁移能力的影响图。
图20为本发明醇提和水煎白头翁汤对TE-1细胞迁移能力的影响图。
具体实施方式
以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，白头翁汤《伤寒论》原方为白头翁6g、黄连9g、黄柏9g、秦皮9g为基础，经试验调整为白头翁15g、黄连15g、黄柏12g和秦皮12g作原料药物，加原料药物重量15倍、体积浓度95％乙醇浸泡7天，负压过滤，恒温旋蒸，水浴蒸发，置于干燥箱内负压真空干燥，即得白头翁汤醇提物。
该白头翁汤醇提物经实验具有抗食管癌细胞活性，特别是对食管癌EC-1、Eca109、TE-1、EC9706细胞有显著的抑制作用，有效用于制备治疗食管癌的药物，并经实验取得了非常好的有益技术效果，有关试验资料如下：
1、实验材料和方法
1.1、实验材料
白头翁汤醇提物和水提物，其中白头翁汤水提物是，按白头翁15g、黄连15g、黄柏12g、秦皮12g称量药物，以生药15倍重量的超纯水浸泡30min；武火煮开，文火煮40min；恒温旋蒸，定体积，大约在生药量的2倍；低温高速离心3000rpm/30min；0.22μm微孔滤器过滤；取1mL药液测定溶质质量，定浓度；-20℃冰箱保存备用；本发明白头翁汤醇提物按药物干燥品(g)：DMSO(mL)＝0.3︰1的比例溶解白头翁汤醇提物，充分溶解后用不含FBS的1640培养基稀释成10000μg/mL的母液，0.22μm微孔滤器过滤，-20℃保存备用。
1.2、实验方法
1.2.1细胞培养从液氮罐中取出四种食管癌细胞，水浴锅37℃快速解冻，移入不含FBS培养基的离心管里，3000r/min离心3min.吸弃上清液，向离心管内加入10mL含胎牛血清10％的培养液，放入5％CO2，37℃，饱和湿度的CO2培养箱培养24小时，换液；待细胞融合率生长至70％以上时处理。
1.2.2MTT实验以1×104cells/孔的密度接种食管癌细胞于96孔培养板，放入5％CO2，37℃，饱和湿度的CO2培养箱培养24小时。弃去上清，设药物组和对照组，每组3个复孔，药物浓度为1200μg/mL、600μg/mL、300μg/mL、150μg/mL、75μg/mL、37.5μg/mL、18.75μg/mL，继续培养48h，后弃上清，加10％MTT无血清培养基100μl/孔，继续培养4h，后弃上清，加150μl/孔DMSO，用酶标仪以570nm/630nm测定光吸收值(OD值)，按照肿瘤细胞生长抑制率＝[(对照组OD值-药物组)/对照组OD值]×100％公式计算方药对食管癌细胞的抑制率。待水煎和醇提白头翁汤对EC-1、Eca109、TE-1、EC9706细胞每一梯度有显著的抑制作用，使用SPSS软件计算出水煎和醇提白头翁汤对四种细胞的IC50值(半数抑制量)。量效实验完成后，检测EC-1、Eca109、TE-1、EC9706四种细胞在IC50值浓度的药液中不同时间段的生长情况。细胞接种同上，细胞接种24h后，吸去每孔上清液，设药物组和对照组，每组3个复孔，横排每行依次加入含10％FBS培养基，IC50值药物浓度的含10％FBS的培养基。分别12h、24h、36h、48h、60h测定细胞的OD值。
1.2.3细胞周期实验以1×106cells/皿细胞密度种植细胞于培养皿中，细胞悬液10mL/皿，细胞设对照组和醇提组，于37℃、5％CO2、饱和湿度培养箱中培养24h后，弃去上清。药物组加入含药物IC50药物浓度的含10％胎牛血清培养液10mL，空白对照组加等量含血清培养基，继续培养48h。弃各皿上清，用PBS洗细胞一次，加入3mL0.25％含胰蛋白酶37℃消化3min，镜下观察细胞收缩变圆，多数细胞脱壁，加等量含血清培养基终止消化，将细胞悬液转至15mL离心管中，2000r/min离心3min，洗3次，每次去上清后用2mL PBS弹打，计数，最终以1×106cells/管保留细胞，用1mL PBS+2.4mL无水乙醇固定细胞，4℃固定24h以上。离心，2000rpm，3min，弃上清，用2mL PBS洗两遍，洗去固定液，加入50μl RNAase，再加入450μl PI染色液，弹打均匀，4℃避光30min。300目尼龙网过滤细胞后上机，用CellQuest Pro获取，用MODFIT软件分析，得出细胞在各细胞周期分布的比例。
1.2.4细胞增殖、浸润、迁移实验
先将matrigel基质胶4℃融化，使用预冷的无血清培养基按1:40体积比例稀释matrigel胶，冰上操作，防止matrigel胶凝固，超净台内将做浸润实验的CIM-Plate板上室和下室从包装袋中取出，将CIM夹具放在超净台上，使蓝色标志点位于夹具的左上方，将上室平稳地放到夹具对应的凹槽中，采用反向加样法，每孔先加入50μl稀释好的matrigel胶，再吸出30μl，整个过程避免产生气泡，孔中最终保留20μl matrigel胶包被CIM-Plate上室。将CIM-Plate上室连同夹具放入37℃培养箱中使其凝固(约4小时)，凝固时上室置于CIM夹具上，保证悬空不触碰电极。
待matrigel胶凝固后，开始细胞浸润、迁移、增殖实验：
(1)待matrigel胶凝固后，将CIM夹具放在超净台上，使蓝色标志点位于夹具的左上方，将做浸润和迁移实验的CIM-Plate板下室平稳放到CIM夹具对应凹槽中，在下室对照组每孔中加入165μl含血清培养基，加药组每孔加入含有IC50浓度药液的含血清培养基165μl，各组三个复孔，注意加液时避免产生气泡，使加入的培养基在下室的孔内形成凸出的弯月面。
(2)将夹具连同下室沿逆时针旋转90度，然后分别将迁移板上室和铺有matrigel胶的浸润板上室中传感器一面置于各自下室上并按压扣上，放置时注意上、下室贴有蓝点的孔相对应，要避免气泡的产生。将上室放到下室上之后，立即用手向下按压，可听到两次卡扣卡入的声音。
(3)在迁移和浸润板上室中均加入30μl无血清培养基，将CIM装置置于培养箱中平衡1小时，平衡后放到实时无标记细胞功能分析仪上，系统自动进行扫描(“Scan Plate”)→检查是否接触良好(在“Message”页面显示Connection OK)→开始检测基线(Background)确定所选择的孔接触正常，所有孔的Cell Index低于0.063。
(4)在板子平衡期间制备细胞悬液：将细胞培养皿从培养箱中取出，弃去原培养基，加入5mL不含血清培养基，十字摇晃洗细胞，吸去培养基，重复再洗一遍，吸去培养基，加入3mL含0.25％EDTA的胰酶消化细胞，待细胞变圆脱壁后加入0.5mL血清中止消化，将细胞液转移到15mL离心管中，1000转/分离心10分钟，加入10mL无血清培养基重悬细胞，计数，调整细胞浓度为5×104cells/mL。
(5)将测好基线的CIM迁移板和浸润板从仪器上取出，上室每孔加入100μl含5×103cells无血清细胞悬液，加药组另加入IC50浓度的药液5μl。
(6)细胞接种后将CIM迁移和浸润板在超净台上静置30分钟，待细胞沉降后将迁移和浸润板放回实时无标记细胞功能分析仪上，系统自动扫描“Scan Plate”后，开始细胞迁移和浸润实时动态检测，每隔10分钟测量一次，各检测48小时。
(7)细胞增殖：在超净台内取出E-Plate16板，每孔加入50μl培养基，放到实时无标记细胞功能分析仪上进行自动扫描和基线检测，将做迁移和浸润实验后余下的细胞用含血清培养基制备1×105cells/mL细胞悬液，将测好基线的E-Plate板从仪器上取出，每孔中加入100μl含1×104cells含血清细胞悬液，静置30分钟，放到培养箱中的实时无标记细胞功能分析仪上开始检测。待第二天20-24小时加药组加入IC50浓度的药液5μl，继续检测。
1.2.5软琼脂克隆形成实验
将0.6％底层琼脂液，以3mL/孔均匀铺于6孔板中，室温凝固12h，从培养箱中取出细胞，胰酶消化后收集细胞悬液，调细胞浓度为1×104cells/mL，将0.6％琼脂溶液分别与2×1640和2×DMEM培养基以1:1比例配制成0.3％上层琼脂液，每孔加2mL上层琼脂与50μl细胞悬液的混合液，加药组再加入IC50浓度的药液10μl，37℃细胞培养箱中培养，2周后于显微镜下观察细胞克隆情况。
1.2.6western blot分析
分别以1×106个细胞/皿接种四种细胞到Φ10cm培养皿中，每种细胞分别设置空白对照组、白头翁汤水煎物组、白头翁汤醇提物组，置于37℃，5％CO2饱和湿度的培养箱中培养24小时后，以各治法组IC50值的药物浓度处理细胞，空白对照组加入新的含10％胎牛血清的DMEM或RPMI1640培养基。继续培养48小时后，弃上清，预冷PBS洗2次，收获细胞；四种细胞分别提取蛋白，Bradford法测蛋白浓度，20μg/孔上样，SDS-PAGE凝胶电泳，转至硝酸纤维素膜，封闭1h，加入一抗反应4h，洗涤30min，加入二抗反应2h，洗涤30min，用增强化学发光(ECL)试剂曝光、显影、定影、洗片，重复3次。
2.实验列项
2.1白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC-1、EC9706、Eca109和TE-1细胞生长的量效关系
白头翁汤抑制食管癌四种细胞增殖活性的量效关系见表1-4，图1-4。
表1白头翁汤在不同浓度下抑制EC-1细胞活性的量效关系(X±S)
表2白头翁汤在不同浓度下抑制EC9706细胞活性的量效关系(X±S)
表3白头翁汤在不同浓度下抑制Eca109细胞活性的量效关系(X±S)
表4白头翁汤在不同浓度下抑制TE-1细胞活性的量效关系(X±S)
白头翁汤醇提物和水煎剂对四种食管癌细胞(EC9706、ECa109、EC-1、TE-1)增殖的半数抑制浓度
| 细胞 | 白头翁汤醇提物组IC50抑制浓度(μg/mL) | 白头翁汤水煎剂组IC50抑制浓度(μg/mL) |
| EC9706 | 180.372 | 249.058 |
| ECa109 | 14.252 | 53.053 |
| EC-1 | 131.807 | 189.664 |
| TE-1 | 150.404 | 207.445 |
由图1-4和以上结果可以看出，随着药物浓度增加，白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌细胞增殖抑制作用越强，呈现剂量-效应依赖关系，白天翁汤醇提物的IC50抑制浓度均低于水煎剂的IC50抑制浓度，因此白头翁汤醇提物的抑制作用更强。
2.2白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC-1、EC9706、Eca109和TE-1细胞生长的时效关系
将醇提和水煎白头翁汤药物分别配置成药物浓度为相应食管癌细胞IC50值浓度的含药血清培养基，将其用于培养细胞，分别在5个不同时间点记录其抑制率，记录时间分别为12h、24h、36h、48h、60h。结果如下表。白头翁汤抑制食管癌四种细胞增殖活性的量效关系见表5-8，图5-8。
表5白头翁汤抑制EC-1细胞活性的时效关系
表6白头翁汤抑制EC9706细胞活性的时效关系
表7白头翁汤抑制Eca109细胞活性的时效关系
表8白头翁汤抑制TE-1细胞活性的时效关系
通过浓度梯度、抑制率和标准差3组数据，做出时效关系曲线图，横坐标为作用时间，纵坐标为细胞活性抑制率。
由图5-8和表5-8可以看出，随着作用时间增加，白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌细胞增殖抑制作用越强，呈现时间-效应依赖关系，且白头翁汤醇提物的抑制作用更强。
2.3白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞增殖的影响
将食管癌四种细胞分别细胞种植于Eplate 16孔板中，放在RTCA上测定增殖细胞量，通过细胞指数体现。将白头翁汤醇提物和水煎药物分别配置成药物浓度为EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞IC50值浓度的含药血清培养基，再分别将其用于四种细胞的加药组，记录EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞空白组和醇提组48h内的增殖情况。以时间为横坐标，细胞指数为纵坐标，结果如图9-12。
由图9-12可见，在不加药的情况下，EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞中，TE-1细胞增殖能力最强。随着作用时间增加，醇提和水煎白头翁汤对食管癌细胞EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞的增殖能力均呈不同程度的抑制作用，且对四种细胞，随着作用时间延长，醇提物较水煎物对食管癌细胞增殖的抑制作用更强。
2.4白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞浸润的影响
将食管癌四种细胞分别细胞种植于CIM-plate 16孔板中，放在RTCA上测定增殖细胞量，通过细胞指数体现。将白头翁汤醇提物和水煎物分别配置成药物浓度为EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞IC50值浓度的含药血清培养基，再分别将其用于四种细胞的加药组，记录EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞空白组和醇提组48h内的浸润情况。以时间为横坐标，细胞指数为纵坐标，结果如图13-16。
由图13-16可见，在不加药的情况下，EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞中，TE-1细胞浸润能力最强。随着作用时间增加，水煎和醇提白头翁汤对食管癌细胞EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞的浸润能力均呈不同程度的抑制作用，但水煎物比醇提物对食管癌细胞的浸润抑制作用更强。
2.5白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞迁移的影响
将食管癌四种细胞分别细胞种植于CIM-plate 16孔板中，放在RTCA上测定增殖细胞量，通过细胞指数体现。将白头翁汤醇提物和水煎物分别配置成药物浓度为EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞IC50值浓度的含药血清培养基，再分别将其用于四种细胞的加药组，记录EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞空白组和醇提组48h内的增殖情况。以时间为横坐标，细胞指数为纵坐标，结果如图17-20。
由图17-20可见，在不加药的情况下，EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞中，TE-1细胞迁移能力最强。随着作用时间增加，醇提和水煎白头翁汤对食管癌细胞EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞的浸润能力均呈不同程度的抑制作用。
2.6白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞克隆形成的影响
以500个细胞/孔将食管癌EC-1、EC9706、ECa109和TE-1细胞种于6孔板中，培养15天后细胞克隆球形态和大小均有明显变化，与空白组相比，用药组细胞克隆球体积变小，形态不规则。
根据细胞克隆球的个数(A)，计算出细胞克隆的形成率＝(A/500)*100％。从下表可以看出醇提物组细胞克隆形成率较水煎组低，因此白头翁汤醇提物较水煎物对食管癌细胞克隆形成有更强抑制作用。
表9白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌四种细胞克隆形成率的影响
2.7白头翁汤醇提物对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞形态的影响
白头翁汤醇提物IC50值药物浓度作用于人食管癌EC-1、EC9706、Eca109和TE-1细胞，药物作用48小时后，倒置显微镜下观察细胞形态变化，与空白对照组比较，加药组贴壁细胞变圆，棱角变模糊，细胞汇合率降低，生长缓慢，细胞间隙加大，部分细胞壁破损，细胞死亡。
2.8白头翁汤醇提物和水煎物对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞周期的影响
表10白头翁汤醇提物对Eca109细胞周期的作用数据及分析
| 组别 | G0/G1期(％) | S期(％) | G2/M期(％) |
| 空白组 | 34.01±4.39 | 47.22±3.05 | 18.77±1.34 |
| 醇提组 | 79.45±4.26 | 16.17±4.62 | 4.38±0.58 |
表11白头翁汤醇提物对EC9706细胞周期的作用数据及分析
| 组别 | G0/G1期(％) | S期(％) | G2/M期(％) |
| 空白组 | 54.87±4.50 | 36.79±4.74 | 8.34±0.58 |
| 醇提组 | 74.00±3.57 | 25.69±3.11 | 0.31±0.53 |
表12白头翁汤醇提物对EC-1细胞周期的作用数据及分析
| 组别 | G0/G1期(％) | S期(％) | G2/M期(％) |
| 空白组 | 48.82±4.09 | 43.36±4.39 | 7.82±0.33 |
| 醇提组 | 99.60±0.69 | 0 | 0.40±0.70 |
表13白头翁汤醇提物对TE-1细胞周期的作用数据及分析
| 组别 | G0/G1期(％) | S期(％) | G2/M期(％) |
| 空白组 | 63.73±1.88 | 28.60±2.33 | 7.67±0.58 |
| 醇提组 | 54.91±3.19 | 36.85±3.22 | 8.24±0.44 |
2.9水煎和醇提白头翁汤对食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1四种细胞中EGFR、PLC-γ1和PKCα蛋白表达的影响
用含10％FBS小牛血清的培养基和IC50浓度的醇提以及水煎白头翁汤药物分别处理食管癌EC-1、EC9706、Eca109、TE-1细胞，48小时后，提取蛋白，以westernblot法分析各蛋白表达。
2.9.1醇提和水煎白头翁汤对食管癌EC-1细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα蛋白表达的影响
分别把EC-1细胞空白组、水煎组和醇提组的EGFR、PLC-γ1和PKCα的灰度值除以对应的β-actin蛋白的灰度值，得出每一组的蛋白指标，分析三次结果取平均值。与EGFR蛋白空白组比较，EGFR蛋白水煎组和醇提组表达无明显差异(P>0.05)；与PLC-γ1蛋白空白组比较，PLC-γ1蛋白水煎组水煎组和醇提组表达显著降低(P<0.01)；与PKCα蛋白空白组比较，PKCα蛋白水煎组表达降低(P<0.05)，醇提组表达显著降低(P<0.01)。见表14。
表14食管癌EC-1细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα的表达
注：与空白组比较，◆P<0.05，◆◆P<0.01。
从数据可以得出，加药组与空白对照组，各药物作用组对人食管癌EC-1细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα的蛋白表达均有不同程度抑制作用，通过比较白头翁汤对EC-1细胞对EGFR、PLC-γ1和PKCα的表达，发现白头翁汤水煎物对EC-1细胞在PLC-γ1蛋白表达的抑制最明显。
2.9.2醇提和水煎白头翁汤对食管癌EC9706细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα蛋白表达的影响
分别把EC9706细胞空白组、水煎组和醇提组的EGFR、PLC-γ1和PKCα的灰度值除以对应的β-actin蛋白的灰度值，得出每一组的蛋白指标，分析三次结果取平均值。与EGFR蛋白空白组比较，EGFR蛋白水煎组和醇提组表达降低(P<0.05)；与PLC-γ1蛋白空白组比较，PLC-γ1蛋白水煎组和醇提组表达均显著降低(P<0.01)；与PKCα蛋白空白组比较，PKCα蛋白水煎组表达无明显差异(P>0.05)，醇提组表达降低(P<0.05)。见表15。
表15食管癌EC9706细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα的表达
注：与空白组比较，◆P<0.05，◆◆P<0.01。
从数据可以得出，加药组与空白对照组，各药物作用组对人食管癌EC9706细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα的蛋白表达均有不同程度抑制作用，通过比较白头翁汤对EC9706细胞对EGFR、PLC-γ1和PKCα的表达，发现白头翁汤醇提物组对EC9706细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα的蛋白表达的抑制均较水煎组强，且对PLC-γ1蛋白表达的抑制最明显。
2.9.3水煎和醇提白头翁汤对食管癌ECa109细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα蛋白表达的影响
分别把Eca109细胞空白组、水煎组和醇提组的EGFR、PLC-γ1和PKCα的灰度值除以对应的β-actin蛋白的灰度值，得出每一组的蛋白指标，分析三次结果取平均值。与EGFR蛋白空白组比较，EGFR蛋白水煎组表达降低(P<0.05)，醇提组表达显著降低(P<0.01)；与PLC-γ1蛋白空白组比较，PLC-γ1蛋白水煎组和醇提组表达均显著降低(P<0.01)；与PKCα蛋白空白组比较，PKCα蛋白水煎组表达无明显差异(P>0.05)，醇提组表达降低(P<0.05)。见表16。
表16食管癌Eca109细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα的表达(n＝3)
注：与空白组比较，◆P<0.05，◆◆P<0.01。
从数据可以得出，加药组与空白对照组，各药物作用组对人食管癌Eca109细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα的蛋白表达均有不同程度抑制作用，通过比较白头翁汤对Eca109细胞对EGFR、PLC-γ1和PKCα的表达，发现白头翁汤醇提物组对ECa109细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα的蛋白表达的抑制均较水煎组强，且对Eca109细胞在PLC-γ1蛋白表达的抑制最明显。
2.9.4水煎和醇提白头翁汤对食管癌TE-1细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα蛋白表达的影响
分别把TE-1细胞空白组、水煎组和醇提组的EGFR、PLC-γ1和PKCα的灰度值除以对应的β-actin蛋白的灰度值，得出每一组的蛋白指标，分析三次结果取平均值。与EGFR蛋白空白组比较，EGFR蛋白水煎组无明显差异(P>0.05)，醇提组表达降低(P<0.05)；与PLC-γ1蛋白空白组比较，PLC-γ1蛋白水煎组和醇提组表达均显著降低(P<0.01)；与PKCα蛋白空白组比较，PKCα蛋白水煎组和醇提组表达均降低(P<0.05)。见表17。
表17食管癌TE-1细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα的表达(n＝3)
注：与空白组比较，◆P<0.05，◆◆P<0.01。
从数据可以得出，加药组与空白组，各药物作用组对人食管癌TE-1细胞EGFR、PLC-γ1和PKCα的蛋白表达均有不同程度抑制作用，通过比较白头翁汤对TE-1细胞对EGFR、PLC-γ1和PKCα的表达，发现白头翁汤醇提物组对TE-1细胞EGFR、PLC-γ1的蛋白表达的抑制均较水煎组强，且对TE-1细胞在PLC-γ1蛋白表达的抑制最明显。
3.结论
白头翁汤源自《伤寒论·厥阴篇》，原文云：“热利下重者，白头翁汤主之”，“下利欲饮水者，以有热故也，白头翁汤主之”。“热利”说明可治疗火热病因，“下重”说明有湿邪病因，“下利欲饮水”说明热毒炽盛。火为阳邪，其性趋上，易侵害人体上部，煎灼津液，耗伤人体阴气，易损害目，口、咽喉等部位。火毒炽盛，导致津亏液少，失于濡养，引发目赤、口干、咽喉肿痛等；湿为阴邪，其性黏腻、停滞，易损伤阳气，最易伤及脾阳，导致水湿内生、停聚，湿阻胸膈，则导致气机不畅而胸膈满闷，气不行则湿不化，其体胶着难解，其病缠绵难愈。湿热搏结，热因湿困，反复煎灼津液，迁延日久，炼液成痰，导致热毒互结、湿浊困阻病机。现代药理药理对白头翁汤中单味药物的研究显示，四味药物均具有抗炎、抗肿瘤的作用。通过临床研究发现白头翁汤在抗菌、抗炎方面疗效显著，主要针对热毒内蕴、湿浊阻滞病机导致的里急后重，腹痛腹泻，肛门灼热，下痢脓血等症状。
根据食管癌细胞分化程度不同，可分为低、中、高分化3种类型，分化程度越低恶性程度越高。分化程度不同其细胞形态也有所差异，EC9706分化程度较高，EC-1、TE-1分化程度居中，Eca109分化程度偏低。低分化食管鳞癌细胞多为长椭圆形，长梭形和不规则形，细胞体积较小，核分裂较多，胞浆少，细胞排列不规则，极向消失，细胞内无角化珠；中分化食管鳞癌细胞多呈卵圆形，椭圆形或多角形，核分裂较常见，细胞极向消失，排列紊乱，少有细胞间桥，细胞内角化珠较少，细胞多形性明显；高分化食管鳞癌细胞有明显的角化现象，细胞体积较大，细胞排列紧密，极向消失，细胞内胞浆较多，细胞形态多为多角形或圆形，细胞核分裂较少，细胞多形性不明显。在IC50浓度白头翁汤药物培养后，四种细胞均出现大量漂浮细胞，数量显著减少，贴壁细胞变圆或棱角变得模糊，汇合率下降，原有的分裂象大幅减少，细胞膜内物质流失严重，失去原有细胞活性。由此可知，醇提白头翁汤对于分化程度和分裂能力不同的食管癌细胞的生长均有明显抑制作用。
从量效、时效结果可知，以不同浓度梯度的醇提白头翁汤分别作用于食管癌EC-1，EC9706，Eca109，TE-1四种细胞，细胞活性的抑制率随着浓度的提高而增强，呈现剂量-效应正相关，药物对细胞生长的抑制率均随着时间的增长而提高，在60小时，抑制率达到最高。在0～48小时阶段，醇提白头翁汤对食管癌EC-1，EC9706，Eca109，TE-1四种细胞活性的抑制率随时间的增加明显上升，在48～60小时阶段，随着时间增加抑制率增长逐渐减缓。说明白头翁汤对食管癌EC-1，EC9706，Eca109，TE-1四种细胞的抑制作用主要集中表现在加药后48小时内，且四种细胞醇提组的IC50值均比水煎组小，说明在对食管癌EC-1，EC9706，Eca109，TE-1四种细胞半数抑制的情况下，醇提白头翁汤比水煎白头翁汤的有效抑制成分更多。
食管癌细胞的增殖、浸润、迁移及克隆形成是其主要的生物学特性之一。实验表明，水煎和醇提白头翁汤对食管癌EC-1，EC9706，Eca109，TE-1四种细胞的增殖、浸润、迁移和克隆形成具有不同抑制作用。在增殖和克隆形成方面，白头翁汤可明显抑制四种细胞增殖和克隆形成。在浸润和迁移方面，其中分化程度较偏低的EC-1、TE-1和Eca109细胞浸润和迁移能力下降显著，而分化程度较高的EC9706细胞，其本身浸润和迁移能力相对较差，白头翁汤药物对其浸润和迁移能力有一定影响但不甚明显。说明醇提白头翁汤可以更有效抑制食管癌细胞的增殖和克隆形成，且对分化程度偏低的食管癌细胞的扩散和转移能力有较明显抑制，对临床治疗食管癌用药具有一定的参考价值。
细胞周期是指一次细胞分裂结束，到下一次细胞分裂完成所经历的过程。一个细胞周期包括G0期，G1期，G2期，M(或G0)期。在G1期，细胞物质代谢比较活跃，主要是为S期和G2期做好能量和物质基础，G1期过后，并不是所有的细胞都进入S期，增殖细胞进入S期继续分裂；部分细胞暂停分裂进入休止期，在需要时继续增殖；不增殖细胞则停止在G1期，分化或衰亡。研究表明肿瘤的病变机制与其细胞周期的异常变化密切相关。醇提白头翁汤可以更好的抑制分化程度不同的食管癌细胞增殖分裂，对于食管癌EC-1、EC9706和Eca109细胞增殖分裂的抑制作用主要集中在G1期，对于TE-1细胞增殖分裂的抑制作用主要集中在S期。由此可知，对于不同分化程度的食管癌细胞，白头翁汤对其细胞周期的阻滞可有相同的抑制能力，对分化程度较低的Eca109细胞、分化程度居中的EC-1和分化程度较高的EC9706细胞，白头翁汤对其细胞分裂的抑制均主要阻滞于G1期。
运用蛋白质免疫印迹法，检测到食管癌EC-1，EC9706，Eca109，TE-1四种细胞中EGFR、PLC-γ1和PKCα蛋白均有有很高程度的表达，与空白组作比较，分别检测水煎和醇提白头翁汤药物培养的四种细胞中EGFR、PLC-γ1和PKCα蛋白表达水平，发现食管癌EC-1，EC9706，Eca109，TE-1四种细胞中，EGFR、PLC-γ1和PKCα蛋白表达均出现下降，且醇提白头翁作用后EGFR、PLC-γ1和PKCα蛋白表达下降较水煎白头翁汤的多，说明白头翁汤醇提物对蛋白表达较水煎物有更强抑制作用。
总之，通过对食管癌细胞EC-1、EC9706、Eca109和TE-1细胞恶性表型及生长信号通路的研究，发现白头翁汤醇提物可以有效抑制食管癌细胞EGFR-PLC-γ1-PKCα信号通路中蛋白的表达，有效用于制备治疗食管癌的药物，实现白头翁汤醇提物在制备抑制食管癌EC-1、Eca109、TE-1、EC9706细胞活性药物中的应用，是治疗食管癌药物上的一大创新，开拓了白头翁汤药用价值和商业价值，经济和社会效益巨大。
Claims (1)
1.一种白头翁汤醇提物在制备治疗EC-1、Eca109、TE-1、EC9706细胞食管癌药物中的应用，所述的白头翁汤醇提物是，将白头翁15g、黄连15g、黄柏12g、秦皮12g作原料药物，加原料药物重量15倍、体积浓度95%乙醇浸泡7天，负压过滤，恒温旋蒸，水浴蒸发，置于干燥箱内负压真空干燥，即得。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111228384A (zh) * | 2020-03-02 | 2020-06-05 | 河南中医药大学 | 治疗食管癌的组合物及其应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103860669A (zh) * | 2014-03-18 | 2014-06-18 | 于法周 | 一种含白头翁水提物的药物组合物及其应用 |
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103860669A (zh) * | 2014-03-18 | 2014-06-18 | 于法周 | 一种含白头翁水提物的药物组合物及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 刘峰: "《<伤寒论>方剂对人食管癌TE-1、EC-1、EC109、EC9706细胞株生物学特性的影响》", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
| 王峰等: "《Stathmin基因在食管鳞癌中的表达及生物学意义》", 《南方医科大学学报》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111228384A (zh) * | 2020-03-02 | 2020-06-05 | 河南中医药大学 | 治疗食管癌的组合物及其应用 |
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