CN110402247A - 化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抑制LRRK2激酶活性的新化合物、它们的制备方法、含有它们的组合物及它们在治疗或预防与LRRK2激酶活性相关或以LRRK2激酶活性为特征的疾病中的用途，例如，帕金森病、阿尔茨海默病和肌萎缩侧索硬化(ALS)。

Description

化合物
技术领域
本发明涉及抑制LRRK2激酶活性的新化合物、它们的制备方法、含有它们的组合物及它们在治疗与LRRK2激酶活性相关或以LRRK2激酶活性为特征的疾病中的用途，例如，帕金森病、阿尔茨海默病和肌萎缩侧索硬化(ALS)。
背景技术
帕金森氏病(PD)是一种神经变性疾病，其特征在于在脑黑质区域的多巴胺能神经元的选择性变性和细胞死亡。帕金森氏病通常被认为是散发性的且病因不明，但是，在过去的15年中，对这一疾病的遗传基础和相关致病机制的理解已经有了重要的发展。该研发的一个领域是了解富含亮氨酸的重复激酶2(LRRK2)蛋白。在家族性研究中，LRRK2基因中的一些错义突变与常染色体显性帕金森氏病密切相关(参见WO2006068492和WO2006045392；Trinh和Farrer 2013，Nature Reviews in Neurology 9：445-454；Paisan-Ruiz等人，2013，J.Parkinson’s Disease 3：85-103)。LRRK2中的G2019S突变是最常见的错义突变并且与临床表型相关，其非常类似于散发性帕金森氏病。所述LRRK2 G2019S突变也存在于大约1.5％的散发性帕金森氏病病例中(参见Gilks等人，2005，Lancet，365：415-416)。除了在LRRK2中已知的致病编码突变，已鉴定了额外的LRRK2氨基酸编码变体，其也与发展帕金森氏病的风险有关(参见Ross等人，2011 Lancet Neurology 10：898-908)。此外，全基因组关联研究(GWAS)已将LRRK2确定为帕金森氏病易感基因座，这表明LRRK2可能也与不具有导致LRRK2蛋白中氨基酸置换的突变的散发性帕金森氏病的病例有关。(参见Satake等人，2009Nature Genetics 41:1303-1307；Simon-Sanchez等人2009 Nature Genetics 41:1308-1312)。
LRRK2是ROCO蛋白家族的一个成员且该家族的所有成员共享5个保守结构域。最常见的致病突变G2019S发生在LRRK2的高度保守的激酶结构域。这一突变在重组LRRK2蛋白的体外酶测试(参见Jaleel等人，2007，Biochem J，405：307-317)以及在从G2019S PD患者来源的细胞中纯化的LRRK2蛋白(参见Dzamko等人，2010Biochem.J.430：405-413)中使得LRRK2激酶活性升高。使得在不同的残基(R1441)上氨基酸置换的不太常见的LRRK2致病突变也已显示出通过降低LRRK2的GTP酶结构域水解GTP的速率来提高LRRK2激酶活性(参见Guo等人，2007 Exp Cell Res.313：3658-3670；West等人，2007 Hum.Mol Gen.16：223-232)。此外，LRRK2的Rab蛋白生理底物的磷酸化已被证明通过LRRK2的一系列帕金森病致病突变而增加(参见Steger等人，2016 eLife 5 e12813)。因此，该证据表明，所述激酶以及LRRK2的GTP酶活性对于发病机制至关重要，且所述LRRK2激酶结构域可调节整体LRRK2的功能(参见Cookson，2010 Nat.Rev.Neurosci.11：791-797)。
有证据表明，增加的LRRK2激酶活性与细胞培养模型中的神经元毒性相关(参见Smith等人，2006 Nature Neuroscience 9：1231-1233)并且激酶抑制剂化合物防止LRRK2介导的细胞死亡(参见Lee等人，2010 Nat.Med.16：998-1000)。据报道，LRRK2可作为小胶质细胞介导的α-突触核蛋白清除的负调节因子(参见Maekawa等，2016 BMC Neuroscience17:77)，提示LRRK2抑制剂可能有助于清除神经毒性形式的α-突触核蛋白以治疗帕金森病。
已经发现，来源于LRRK2 G2019S帕金森氏病患者的诱导性多功能干细胞(iPSC)呈现在轴突生长(neurite outgrowth)上的缺陷和对鱼藤酮增加的易感性，其可通过G2019S突变的遗传校正或用LRRK2激酶活性的小分子抑制剂处理细胞进行改善(参见Reinhardt等人，2013 Cell Stem Cell 12：354-367)。已经报道线粒体DNA损伤作为死后帕金森氏病样本的黑质中易受攻击的多巴胺神经元的分子标记(参见Sanders等2014Neurobiol.Dis.70：214-223)。与iSPC中LRRK2 G2019S突变相关的增加水平的这种线粒体DNA损伤通过G2019S突变的遗传校正得以阻止(参见Sanders等人，2014 Neurobiol.Dis.62：381-386)。
额外的证据将LRRK2功能与自噬溶酶体通路的功能障碍相联系(参见Manzoni和Lewis，2013 Faseb J.27:3234-3429)。LRRK2蛋白导致在侣伴蛋白介导的自噬方面的缺陷，其消极影响了细胞降解α-突触核蛋白的能力(Orenstein等人，2013 NatureNeurosci.16394-406)。在其他细胞模型中，选择性LRRK2抑制剂已经显示出刺激大自噬(macroautophagy)(参见Manzoni等人，2013 BBAMol.Cell Res.1833：2900-2910)。这些数据表明，LRRK2激酶活性的小分子抑制剂可能在治疗以细胞蛋白质稳态的缺陷为特征的疾病中有效，所述疾病由异常自噬/溶酶体降解通路引起，包括以下形式：与GBA突变有关的帕金森氏病(参见Swan和Saunders-Pullman 2013 Curr.Neurol.Neurosci Rep.13：368)、其他α-突触核蛋白病、Tau蛋白病、阿尔茨海默氏病(参见Li等人，2010 Neurodegen.Dis.7：265-271)和其他神经变性疾病(参见Nixon 2013 Nat.Med.19：983-997)和戈谢病(参见Westbroek等人，2011 Trends.Mol.Med.17：485-493)。作为自噬的启动子，LRRK2激酶的小分子抑制剂也可用于治疗其他疾病，包括糖尿病，肥胖症，运动神经元疾病，癫痫和一些癌症(参见Rubinsztein等人，2012 Nat.Rev.Drug Discovery 11：709-730)，肺部疾病，如慢性阻塞性肺病和特发性肺纤维化(参见Araya等人，2013 Intern.Med.52：2295-2303)和自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(参见Martinez等人，2016 Nature 533：115-119)。作为自噬和吞噬过程的启动子，LRRK2激酶的小分子抑制剂也可用于增加宿主在一系列细胞内细菌感染、寄生虫感染和病毒感染的治疗中的反应，包括疾病，如结核病(See Rubinsztein等人,2012 Nat.Rev.Drug Discovery 11:709-730；Araya et al.,2013 Intern.Med.52:2295-2303；Gutierrez,Biochemical Society Conference；Leucine rich repeat kinase2:ten years along the road to therapeutic intervention,Henley BusinessSchool,UK 12 July 2016)、HIV、西尼罗河病毒和基孔肯雅病毒(参见Shoji-Kawata等，2013 Nature 494：201-206)。LRRK2抑制剂可单独用于治疗这些疾病，或与直接靶向感染因子的药物组合使用。此外，相比于正常受试者的成纤维细胞，在尼曼-皮克C型(NPC)疾病患者的成纤维细胞中也已观察到显著升高的LRRK2 mRNA水平，这表明，异常LRRK2功能可能在溶酶体疾病中起作用(参见Reddy等人，2006 PLOS One 1(1):e19 doi：10.1371/journal.pone.0000019–supporting information Dataset S1)。这一观察结果表明，LRRK2抑制剂可能在治疗NPC中有效。
所述LRRK2的PD相关的G2019S突变形式也已经报道提高了微管蛋白相关的Tau的磷酸化(参见Kawakami等人，2012 PLoS ONE 7：e30834，doi 10.1371)，且已提出了疾病模型，其中LRRK2作用于Tau和α-突触核蛋白的致病作用的上游(参见Taymans&Cookson，2010，BioEssays 32：227-235)。为了支持这点，在转基因小鼠模型中，LRRK2的表达已与增加的不溶性Tau的聚集和增加的Tau磷酸化相关(参见Bailey等人，2013 Acta Neuropath.126:809-827)。据报道，PD致病突变蛋白LRRK2 R1441G的过表达导致在转基因小鼠模型中帕金森氏病症状和Tau的高度磷酸化(参见Li，Y.等人2009，Nature Neuroscience 12：826-828)。因此，这些数据表明，激酶催化活性的LRRK2抑制剂可用于治疗以Tau的高度磷酸化为特征的tau蛋白病，例如嗜银颗粒病、皮克氏病、皮质基底节变性、进行性核上性麻痹以及与17号染色体相关的遗传性额颞性痴呆及帕金森综合症(FTDP-17)(参见Goedert，M和Jakes，R(2005)Biochemica et BiophysicaActa 1739，240-250)。此外，LRRK2抑制剂可能在治疗以降低的多巴胺水平为特征的其他疾病(例如与药物成瘾性相关的戒断症状/复发)中有效(参见Rothman等人，2008，Prog.Brain Res，172：385)。
其他研究也显示了LRRK2的G2019S突变型的过表达导致在转基因小鼠模型中脑室下区(SVZ)神经祖细胞的细胞增殖和迁移的缺陷(参见Winner等人，2011Neurobiol.Dis.41：706-716)并减少轴突长度和分支的细胞培养模型(参见Dachsel等人，2010 Parkinsonism&Related Disorders 16：650-655)。此外，据报道，在中风的啮齿动物模型中，在局部缺血损伤之后，促进SVZ神经祖细胞细胞增殖和迁移的试剂也提高神经系统预后(参见Zhang等人，2010 J.Neurosci.Res.88：3275-3281)。这些结果表明，抑制LRRK2异常活性的化合物可在神经元损伤(如缺血性中风、外伤性脑损伤、脊髓损伤)后用于旨在刺激中枢神经系统功能的恢复的治疗。
在LRRK2上的突变也已经得到确定，其在临床上与从轻度认知损伤(MCI)到阿尔茨海默氏病的转变有关(参见WO2007149798)。这些数据表明，LRRK2激酶活性的抑制剂可用于治疗疾病，例如阿尔茨海默氏病、其他痴呆和相关的神经变性疾病。
在一些疾病组织和疾病模型中也观察到了正常的LRRK2蛋白的异常调节。miR-205对LRRK2的翻译控制的正常机制在一些散发性PD病例中被扰乱，其中在PD脑样品中miR-205水平的显著降低与这些样品中升高的LRRK2蛋白水平同时发生(参见Cho等人，(2013)Hum.Mol.Gen.22：608-620)。因此，LRRK2抑制剂可用于治疗具有升高的正常LRRK2蛋白水平的散发性PD患者。
在狨猴的帕金森氏病试验模型中，LRRK2 mRNA的升高是以与诱导运动障碍的L-多巴的水平相关的方式观察到的(参见Hurley，M.J等人，2007 Eur.J.Neurosci.26：171-177)。这表明，LRRK2抑制剂可用于改善这种运动障碍。
已经报道了在ALS患者肌活检样品中显著升高的LRRK2 mRNA水平(参见Shtilbans等人，2011 Amyotrophic Lateral Sclerosis 12：250-256)。提出LRRK2激酶活性的升高水平可以是ALS特有的特征。因此，该观察结果表明，LRRK2抑制剂可用于治疗ALS。
还有证据表明，LRRK2激酶活性可能在介导小神经胶质促炎症反应中发挥作用(参见Moehle等人，2012，J.Neuroscience 32:1602-1611)。这一观察结果表明了LRRK2抑制剂在治疗导致一系列神经变性疾病(包括帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、多发性硬化、HIV-诱导的痴呆、肌萎缩侧索硬化、缺血性发作、外伤性脑损伤和脊髓损伤)的异常神经炎症机制中可能的效用。一些证据还表明，LRRK2在体外调节神经元祖分化中发挥作用(参见Milosevic，J.等人，2009 Mol.Neurodegen.4：25)。该证据表明，LRRK2的抑制剂可在体外生成神经元祖细胞中具有效用，其用在CNS障碍的基于细胞的治疗的后续治疗应用中。
据报道，具有LRRK2 G2019S突变的帕金森氏病患者表现出增加的患非皮肤癌的频率，包括肾癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌以及急性髓性白血病(AML)。因为有证据显示在LRRK2中的G2019S突变提高LRRK2激酶结构域的催化活性，因此，LRRK2的小分子抑制剂可用于治疗癌症，例如肾癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌(例如实体瘤)和血液癌症(参见AML；Saunders-Pullman等人，2010，Movement Disorders，25:2536-2541；Inzelberg等人，2012 Neurology78：781-786)。在乳头状肾癌和甲状腺癌中还报道了LRRK2的扩增和过表达，其中LRRK2与MET癌基因之间的协同效应可能促进肿瘤细胞生长和存活(参见Looyenga等人，2011 PNAS108：1439-1444)。
一些研究表明，常见的LRRK2的遗传关联性随着对强直性脊柱炎(参见Danoy P，等人，2010.PLoS Genet.；6(12):e1001195；和麻风病感染.(参见Zhang FR，等人2009，N EnglJ Med.361:2609-18.)的敏感性变化。这些发现表明，LRRK2的抑制剂可用于治疗强直性脊柱炎和麻风病感染。
对克罗恩病的三个全基因组相关扫描的荟萃分析确定了许多与该疾病相关的基因座，包括含有LRRK2基因的基因座(参见Barrett等人，2008，Nature Genetics，40：955-962)。也已出现了以下证据，即LRRK2是IFN-γ靶基因，其可参与与克罗恩病的发病机制相关的信号传导通路(参见Gardet等人，2010，J.Immunology，185：5577-5585)。这些发现表明，LRRK2的抑制剂可用于治疗克罗恩病。
作为IFN-γ靶基因，LRRK2也在T细胞机制中发挥作用，所述机制是其他免疫系统疾病(例如多发性硬化和类风湿关节炎)的基础。LRRK2抑制剂的其他潜在效用来自以下所报道的发现：B淋巴细胞构成LRRK2表达细胞的主要群体(参见Maekawa等人2010，BBRC 392：431-435)。这表明，LRRK2抑制剂可有效治疗免疫系统疾病，其中B细胞耗竭在例如以下疾病中是(或可能是)有效的：例如淋巴瘤、白血病、多发性硬化(参见Ray等人，2011J.Immunol.230：109)、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、单纯红细胞再生障碍、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、埃文斯综合征(Evans syndrome)、血管炎、大疱性皮肤病、I型糖尿病、干燥综合征、德维克病和炎性肌病(参见Engel等人，2011Pharmacol.Rev.63：127-156；Homam等人，2010 J.Clin.Neuromuscular Disease 12：91-102)。
WO2016036586和WO2017012576公开了一系列描述为LRRK2激酶抑制剂的化合物及其在治疗疾病中的用途，尤其包括帕金森氏病。新的治疗方法存在未满足的需求，这些治疗将停止或减缓疾病进展，该疾病进展涉及运动(例如控制步态功能障碍、僵住(冻结)和姿势失衡)和非运动症状(例如PD相关性痴呆)，减少升级使用有症状的药物的需要和目前可用治疗的相关长期不良反应(例如运动障碍和开/关波动)，保持更长时间的独立性。
发明内容
在第一方面，本发明提供式(I)的化合物及其盐：
其中
X1为CR6，其中R6为H或C1-3烷基，该烷基任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：羟基、卤素和C1-3烷氧基；
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
R3选自:
a)N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
氧代，
卤素，
羟基,
C1-6烷基，该烷基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和环丙基，和
C1-6烷氧基，该烷氧基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，
其中当N-连接的4-6元杂环基环包含可取代的氮原子时，该取代基基团还包括任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，条件是该4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子；
b)NHR7；
c)OR7；
R4和R5独立地选自H、羟基和卤素；
R7独立地选自:
C4-6环烷基，该环烷基任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团，和
包含氮或氧的4-6元杂环基，其任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团；且
R8和R9独立地选自H、卤素、甲基、乙基、甲氧基和羟基。
在本发明的其他方面，本发明提供了药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
本发明的另一方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)。
发明详述
本发明的前述和其他方面现就本文所提供的说明和方法进行详细描述。应理解，本发明可以不同形式体现并且不应解释为仅限于本文所提及的实施方案。相反地，提供这些实施方案使得本公开充分且完整并将本发明的范围充分传达给本领域技术人员。
在本文中用于本发明描述中的术语仅是为了描述具体实施方案而不旨在限制本发明。如在本发明实施方案和所附权利要求的描述中所用，单数形式的“一”、“一个”和“该”旨在包括复数形式，除非上下文中另外明确提及。此外，如本文所用，“和/或”是指和包括一或多个相关的所列项目的任意和所有可能的组合。将进一步理解，当用于本说明书时，术语“包含”和/或“包括”指定所述特征、整数、步骤、操作、元素和/或成分的存在，但不排除一或多个其他特征、整数、步骤、操作、元素、成分和/或它们的组的存在或添加。
通常，本文所用命名和在本文所述的有机化学、药物化学、生物学中的实验室操作是本领域熟知的和常用的。除非另外提及，本文所用的全部技术和科学术语与本领域所属技术领域的一般技术人员通常所理解的具有相同的含义。在本文所用术语存在多个定义的情况下，除非另外提及，否则以本节中的那些为准。
A.定义
如本文所用，“烷基”是指具有指定碳原子数的一价饱和烃链。例如，C1-3烷基是指具有1-3个碳原子的烷基。烷基可为直链或支链的。在一些实施方案中，支链烷基可能具有一个、两个或三个分支。示例性烷基包括，但不限于，甲基、乙基和丙基(正丙基和异丙基)。
如本文所用，“烷氧基”是指基团-O-烷基。例如，C1-6烷氧基含有1-6个碳原子。C1-3烷氧基含有1-3个碳原子。示例性的烷氧基包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己基氧基。
如本文所用，“环烷基”是指具有指定数量碳原子的饱和单环烃环。例如，C3-6环烷基含有3-6个作为环成员的碳原子。C3-6环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
如本文所用，“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。“卤”是指卤素基团：氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)或碘(-I)。
如本文所用，“卤代烷基”是指本文所定义的烷基，其具有选自F、Cl、Br或I的一或多个卤素原子，其通过替代与碳原子相连的氢原子取代在该烷基的任意或全部碳原子上，该卤素原子可相同或不同。例如，C1-3卤代烷基是指被一个或多个卤素原子取代的C1-3烷基。在一些实施方案中，“卤代烷基”是指被一个或多个独立地选自F或Cl的卤素原子取代的烷基。示例性的卤代烷基包括，但不限于，氯甲基、溴乙基、三氟甲基和二氯甲基。
如本文所用，“杂环基”或“杂环基环”是通过从饱和单环中除去氢原子衍生的一价基团，该环由环碳原子和1个或多个独立地选自氮、氧或硫的环杂原子组成。在一个实施方案中，该环由环碳原子和1至3个独立选自氮、氧或硫的环杂原子组成。在一个实施方案中，所述环杂原子独立地选自氮或氧。可以指定环原子数。例如，“4-6元杂环基”是指由4-6个环原子组成的如上定义的杂环基。术语N-连接的4-6元杂环基是指如上定义的4-6元杂环基环，其含有至少一个氮环原子，通过该氮原子环与核连接。还可以存在其它环杂原子(氮、氧或硫)。术语含氮杂环基是指含有至少一个氮环原子的如上定义的杂环基环。还可以存在其他环杂原子(氮、氧或硫)。术语含氧杂环基应以类似方式解释。杂环基环的实例包括，但不限于，氮杂环丁烷基，四氢呋喃基(包括，例如，四氢呋喃-2-基和四氢呋喃-3-基)、吡咯烷基(包括，例如，吡咯烷-1-基和吡咯烷-3-基)、哌啶基(包括，例如，哌啶-3-基和哌啶-4-基)、吗啉基(包括，例如，吗啉-2-基和吗啉-4-基)。
如本文所用，提及基团中的“取代的”是指在基团中与成员原子(例如，碳原子)相连的一或多个氢原子被取代基所替代，所述取代基选自所定义的取代基的基团。应理解，术语“取代的”包括隐含的规定，即这种取代依照取代的原子和取代基允许的化合价并且该取代形成稳定的化合物(即不会自发进行转化的化合物，例如通过重排、环化或消除，且其足够稳定到从反应混合物中分离出来)。当提及一个基团可含有一个或多个取代基时，该基团中的一个或多个(根据需要)成员原子可被取代。此外，在基团中单一成员原子可被超过一种取代基取代，只要这种取代符合该原子允许的化合价。取代的杂环基环的实例包括，但不限于，
如本文所述，"任选取代的"表示特定基团可为未取代的，或可如进一步定义所取代。
如本文所用，术语“疾病”是指身体状态或一些器官的任意改变，中断或干扰其功能的实施和/或引起症状，例如被折磨的人或与人有接触的那些人的不适、功能障碍、疼痛或甚至死亡。疾病还可包括愠怒、病痛、不安、弊病、障碍、不健康、生病、抱怨、interdisposition和/或做作(affectation)。
如本文所用，针对疾病的“治疗”或“处理”是指：(1)改善疾病或该疾病的一种或多种生物表现，(2)干扰(a)引起疾病或对该疾病负责的生物学级联的一个或多个点，或(b)该疾病的一种或多种生物表现，(3)减轻一种或多种症状或与该疾病相关的影响，(4)减缓该疾病的进展或该疾病的一种或多种生物表现，和/或(5)降低疾病或该疾病生物表现的严重程度的可能性。对症治疗是指第(1)、(3)和(5)点涉及的治疗。疾病改变治疗是指第(2)和(4)点定义的治疗。
如本文所用，“预防”或“防止”是指预防性给药以降低疾病或其生物表现发作的可能性或延迟该疾病或其生物表现的发作。
如本文所用，“受试者”是指哺乳动物受试者(例如，狗、猫、马、牛、绵羊、山羊、猴等)和人受试者，包括男性和女性受试者且包括新生儿、婴儿、少年、青少年、成人和老年受试者且还包括各种种族和族裔，包括，但不限于，白人、黑人、亚洲人、美洲印第安人和西班牙裔。
如本文所用，“药学上可接受的盐”是指保留目标化合物的所需生物活性并表现出最小的不希望的毒理学效应的盐。这些药学上可接受的盐可在该化合物的最终分离和纯化过程中原位制备或者通过单独地将其游离酸或游离碱形式的纯化的化合物分别与合适的碱或酸反应进行制备。
如本文所用，提及本发明化合物或其他药物活性剂的“治疗有效量”是指在合理的医学判断范围内，足以治疗或预防患者疾病但足够低地避免严重副作用(在合理的利益/风险比)的量。化合物的治疗有效量将根据所选择的具体化合物(例如考虑化合物的效力、有效性和半衰期)；所选择的给药途径；所治疗的疾病；所治疗的疾病的严重性；所治疗的患者的年龄、体型、体重和身体疾病；所治疗的患者的医疗史；治疗持续时间；并行疗法的性质；所需的治疗效果；和类似因素而变化，但仍可由本领域技术人员进行常规确定。
B.化合物
在第一方面，本发明提供式(I)的化合物及其盐：
其中
X1为CR6，其中R6为H或C1-3烷基，该烷基任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：羟基、卤素和C1-3烷氧基；
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
R3选自:
a)N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
氧代，
卤素，
羟基,
C1-6烷基，该烷基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和环丙基，和
C1-6烷氧基，该烷氧基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，
其中当N-连接的4-6元杂环基环包含可取代的氮原子时，该取代基基团还包括任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，条件是该4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子；
b)NHR7；和
c)OR7；
R4和R5独立地选自H、羟基和卤素；
R7独立地选自:
C4-6环烷基，该环烷基任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团，和
包含氮或氧的4-6元杂环基，其任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团；且
R8和R9独立地选自H、卤素、甲基、乙基、甲氧基和羟基。
在一个实施方案中，R1选自C1-3烷基和C1-3烷氧基。在一个实施方案中，R1选自甲基或甲氧基。在一个实施方案中，R1为甲基。
在一个实施方案中，R2选自H、卤素和C1-3烷基。在一个实施方案中，R2选自C1-3烷基。在一个实施方案中，R2选自H、卤素和甲基。在一个实施方案中，R2选自H、氟、氯和甲基。在一个实施方案中，R2选自H、氯和甲基。在一个实施方案中，R2选自氯和甲基。在一个实施方案中，R2为甲基。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-6烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和环丙基，和
C1-6烷氧基，该烷氧基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，
其中当N-连接的4-6元杂环基环包含可取代的氮原子时，该取代基基团还包括任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，条件是该4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
氧代，
卤素，
羟基,
C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，和
C1-3烷氧基，该烷氧基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其选自吗啉基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基和哌嗪基，任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，和
C1-3烷氧基，该烷氧基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其选自吗啉基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基和哌嗪基，任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
羟基,
C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，和
C1-3烷氧基，该烷氧基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
在一个实施方案中，R3为N-连接的吗啉基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
羟基,
C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，和
C1-3烷氧基，该烷氧基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其选自吗啉基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基和哌嗪基。
在一个实施方案中，R3为(2-羟基甲基)-吗啉-4-基。
在一个实施方案中，R3为(2-羟基乙基)-吗啉-4-基。
在一个实施方案中，R3为(2-羟基甲基)-6-甲基-吗啉-4-基。
在一个实施方案中，R3为3-甲基-吗啉-4-基。
在一个实施方案中，R3为3-羟基3-甲基氮杂环丁烷-1-基。
在一个实施方案中，R3为3-羟基吡咯烷-1-基。
在一个实施方案中，R3为
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其包含可取代的氮原子，取代有另外的任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，且条件是该另外的4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子。
在一个实施方案中，R3为N-连接的4-6元杂环基环，其包含可取代的氮原子，在所述可取代的氮原子上取代有氧杂环丁烷基基团。
在一个实施方案中，R4和R5独立地选自H和卤素。在一个实施方案中，R4和R5独立地选自H和氟。在一个实施方案中，R4和R5都为氢。
在一个实施方案中，R6为H或未取代的C1-3烷基。在一个实施方案中，R6为H或甲基。在一个实施方案中，R6为H。
在一个实施方案中，R8和R9都为H。
在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其盐，其中R1、R2、R4、R5、X1、R6、R8和R9如上定义，且R3为N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷基(该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基)和C1-3烷氧基(该烷氧基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基)。在该实施方案中，R1、R2、R4、R5、X1、R6、R8和R9可进一步如上述任一个实施方案所定义。例如，R1可选自C1-3烷基和C1-3烷氧基和/或R2可选自H、卤素和C1-3烷基和/或R6可为H，和/或R8和R9可为H。
在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其为实施例1至156任一项的化合物，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明涉及选自以下的化合物
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供((2R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇。
在一个实施方案中，本发明提供选自以下的化合物
(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇，
1-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇，
4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)哌嗪-2-酮，
(6-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇，
1-(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇，和
4-(4-(1-(6-((S)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)四氢呋喃-3-醇，
4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉,
1-(1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙醇,
1-(1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙醇,
(4-(6-(5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇，和
1-((1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇；
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇，
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供1-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)哌嗪-2-酮，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供(6-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供(6-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供4-(4-(1-(6-((S)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)四氢呋喃-3-醇，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供1-(1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙醇，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供1-(1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙醇，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供(4-(6-(5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供1-((1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((R)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇。
在一个实施方案中，本发明提供((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((R)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇。
在一个实施方案中，本发明提供((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐为实施例1至156任一个的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，式(I)的化合物为实施例1至156任一个的化合物。在一个实施方案中，本发明提供实施例1至156任一个的化合物或其药学上可接受的盐。
除了本文所述化合物的游离碱形式，该化合物的盐形式也在本发明的范围内。本文所述化合物的盐或药学上可接受的盐可在该化合物的最终分离和纯化过程中原位制备或者通过单独地将其游离碱形式的纯化的化合物分别与合适的碱或酸反应进行制备。有关合适的药用的盐的综述参见Berge等人，J.Pharm，Sci.，66，1-19，1977；P L Gould，International Journal of Pharmaceutics，33(1986)，201-217；和Bighley等人，Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，Marcel Dekker Inc，New York 1996，第13卷，第453-497页。
某些式(I)的化合物含有碱性基团并因此能够通过用合适的酸处理形成药学上可接受的酸加成盐。合适的酸包括药学上可接受的无机酸和药学上可接受的有机酸。示例性的药学上可接受的酸加成盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、甲基硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、氨基磺酸盐、磷酸盐、乙酸盐、羟基乙酸盐、苯基乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、异丁酸盐、戊酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙烯酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、水杨酸盐、对氨基水杨酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、庚酸盐、邻苯二甲酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、扁桃酸盐、鞣酸盐、甲酸盐、硬脂酸盐、抗坏血酸盐、棕榈酸盐、油酸盐、丙酮酸盐、双羟萘酸盐、丙二酸盐、月桂酸盐、戊二酸盐、谷氨酸盐、丙酸酯月桂硫酸盐(estolate)、甲磺酸盐(methanesulfonate，mesylate)、乙磺酸盐(ethanesulfonate，esylate)、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate，besylate)、对氨基苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐(p-toluenesulfonate，tosylate)和萘-2-磺酸盐。在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐包括L-酒石酸盐、乙二磺酸盐(ethanedisulfonate，edisylate)、硫酸盐、磷酸盐、对甲苯磺酸盐(p-toluenesulfonate，tosylate)、盐酸盐、甲磺酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、苯磺酸盐、马来酸盐、氢溴酸盐、L-乳酸盐、丙二酸盐和S-樟脑-10-磺酸盐。在一些实施方案中，这些盐中的一些形成溶剂合物。在一些实施方案中，这些盐中的一些是结晶的。
某些式(I)化合物或其盐可以以立体异构形式存在(例如，它们可以含有一个或多个不对称碳原子)。单独的立体异构体(对映异构体和非对映异构体)及其混合物包括在本发明的范围内。可以通过常规方法将不同的异构形式彼此分离或拆分，或者可以通过常规合成方法或通过立体特异性或不对称合成获得任何给定的异构体。
某些式(I)的化合物能够以互变异构形式存在。例如，某些化合物显示酮-烯醇互变异构现象。在一些情况下，一对互变异构形式中只有一个落在式(I)中。这种交替的互变异构体也构成本发明的一部分。
本发明还包括同位素标记的化合物和盐，其与式(I)化合物或其盐相同，除了以下事实不同：一个或多个原子被具有与自然界中最常见的原子质量或质量数不同的原子替代。可掺入式(I)化合物或其盐的氢、碳、氮、氟的同位素的实例，例如3H、11C、14C和18F。这种同位素标记的式(I)化合物或其盐用于药物和/或底物组织分布测定。例如，11C和18F同位素用于PET(正电子发射断层扫描)。PET用于脑部成像。同位素标记的式(I)化合物及其盐通常可通过进行下文公开的操作制备，用易得的同位素标记试剂替代非同位素标记的试剂。在一个实施方案中，式(I)化合物或其盐不是同位素标记的。
一些式(I)化合物或其盐可以固体或液体形式存在。在固体状态下，式(I)化合物或盐可以结晶或非结晶形式或其混合物的形式存在。对于结晶形式的式(I)化合物或盐，本领域技术人员将理解，可形成药学上可接受的溶剂合物，其中在结晶过程中溶剂分子被掺入晶格中。溶剂合物可包括非水溶剂，例如乙醇、异丙醇、DMSO、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯，或它们可包括水作为掺入该晶格中的溶剂。其中水是被掺入到该晶格的溶剂的溶剂合物通常被称为“水合物”。水合物包括化学计量的水合物以及含有可变量的水的组合物。
本领域技术人员还将理解，以结晶形式存在的一些式(I)化合物、其药学上可接受的盐或其溶剂合物(包括其各种溶剂合物)可呈现多态性(即能够以不同的晶体结构存在)。这些不同的结晶形式通常被称为“多晶型物”。多晶型物具有相同的化学组成，但是在堆积、几何排列和结晶固态的其他描述性性质上不同。因此，多晶型物可具有不同的物理性质，例如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶出性质。多晶型物通常呈现出不同的熔点、IR光谱和X射线粉末衍射图，其可用于鉴定。本领域技术人员将理解，例如通过改变或调整在制备化合物中所用的反应条件或试剂，可产生不同的多晶型物。例如，温度、压力或溶剂的改变可导致多晶型物。此外，一种多晶型物可在一定条件下自发地转化成另一多晶型物。
本领域技术人员也理解，本发明可含有式(I)化合物或其药学上可接受的盐的各种氘代形式。与碳原子相连的各可用氢原子可独立地被氘原子替代。本领域技术人员将知道如何合成式(I)化合物或其药学上可接受的盐的氘代形式。市售可得的氘代起始原料可用于制备式(I)化合物或其药学上可接受的盐的氘代形式，或它们可使用采用了氘代试剂(例如氘代氢化锂铝)的常规技术进行合成。
C.使用方法
式(I)化合物或其药学上可接受的盐是LRRK2激酶活性抑制剂并因此被认为在治疗或预防以下神经性疾病中具有潜在用途：帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、痴呆(包括路易体痴呆和血管性痴呆、HIV-诱导的痴呆)、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、年龄相关的记忆功能障碍、轻度认知损伤、嗜银颗粒病、皮克氏病、皮质基底节变性、进行性核上性麻痹、与17号染色体有关的遗传性额颞性痴呆及帕金森综合症(FTDP-17)、药物成瘾相关的戒断症状/复发、L-多巴诱导的运动障碍、缺血性发作、外伤性脑损伤、脊髓损伤和多发性硬化。其它潜在可通过抑制LRRK2治疗的疾病包括，但不限于，溶酶体疾病(例如，尼曼-皮克C型疾病、戈谢病)、克罗恩病、癌症(包括甲状腺癌、肾癌(包括乳头状肾癌)、乳腺癌、肺癌和前列腺癌、白血病(包括急性髓性白血病(AML))和淋巴瘤)、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、单纯红细胞再生障碍、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、埃文斯综合征、血管炎、大疱性皮肤病、I型糖尿病、肥胖症、癫痫、肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病、特发性肺纤维化、舍格伦综合征(Sjogren's syndrome)、Devic疾病、炎性肌病、强直性脊柱炎、细菌感染(包括麻风)、病毒感染(包括结核病、HIV、西尼罗河病毒和基孔肯雅病毒)和寄生虫感染。
本发明的一个方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防上述疾病(即神经学疾病和以上列出的其它疾病)。在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防帕金森病。在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗帕金森病。在另一实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防阿尔茨海默病。在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗阿尔茨海默病。在另一实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗其用于治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)。
在一个实施方案中，本发明提供((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)。
在另一实施方案中，本发明提供((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或其药学上可接受的盐，其用于治疗帕金森病。
本发明的另一方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防上述疾病(即神经学疾病和以上列出的其它疾病)的药物中的用途。本发明的另一方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防帕金森病的药物中的用途。本发明的另一方面提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。在另一实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防阿尔茨海默病的药物中的用途。在一个实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的用途。在另一实施方案中，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)的药物中的用途。
在一个实施方案中，本发明提供((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)的药物中的用途。
在另一实施方案中，本发明提供((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防帕金森病的药物中的用途。
在另一实施方案中，本发明提供((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。
本发明的另一方面提供治疗或预防以上列出的疾病的方法(即选自神经学疾病和以上列出的其它疾病)，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面提供治疗或预防帕金森病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面提供治疗或预防阿尔茨海默病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面提供治疗阿尔茨海默病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的另一方面提供治疗结核病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，所述受试者为人。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)的方法，其包括向需要的人给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的人给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的人给药治疗有效量的选自以下的化合物
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的人给药治疗有效量的6-(1-((R)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的人给药治疗有效量的6-(1-((R)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的人给药治疗有效量的((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的人给药治疗有效量的((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇或其药学上可接受的盐。
在本发明的上下文，帕金森病的治疗是指散发性帕金森病和/或家族性帕金森病的治疗。在一个实施方案中，帕金森病的治疗是指家族性帕金森病的治疗。家族性帕金森病患者为经历以下一种或多种LRRK2激酶突变的患者：G2019S突变、N1437H突变、R1441G突变、R1441C突变、R1441H突变、Y1699C突变、S1761R突变、或I2020T突变。在另一实施方案中，家族性帕金森病患者在与帕金森病相关的LRRK2位点表达其它编码突变(如G2385R)或非编码单核苷酸多态性。在一个更具体实施方案中，家族性帕金森病包括表达LRRK2激酶中的G2019S突变或R1441G突变的患者。在一个实施方案中，帕金森病的治疗是指家族性帕金森病的治疗，包括表达具有G2019S突变的LRRK2激酶的患者。在另一实施方案中，家族性帕金森病患者表达异常高水平的正常LRRK2激酶。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括向需要的表达LRRK2激酶中的G2019S突变的人给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明提供治疗帕金森病的方法，其包括测试人的LRRK2激酶中的G2019S突变且向需要的表达LRRK2激酶中的G2019S突变的人给药治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
治疗帕金森氏病可以是对症的或可为缓和疾病的。在一个实施方案中，治疗帕金森氏病是指对症治疗。在一个实施方案中，治疗帕金森氏病是指缓和疾病的治疗。
本发明化合物也可用于治疗根据以下的一种或多种与疾病进展相关的精细特征被确定为易于进展成重症帕金森病的患者：例如家族史、嗅觉障碍、便秘、认知缺陷、步态或从分子、生化、免疫或成像技术中获得的疾病进展的生物指示。在上下文中，治疗可以是对症的或缓和疾病的。
在本发明的上下文中，治疗阿尔茨海默氏病是指治疗散发性阿尔茨海默氏病和/或家族性阿尔茨海默氏病。治疗阿尔茨海默氏病可以是对症的或可以是缓和疾病的。在一个实施方案中，治疗阿尔茨海默氏病是指对症治疗。
在本发明的上下文，痴呆(包括路易体痴呆和血管性痴呆、HIV-诱导的痴呆)、肌萎缩侧索硬化(ALS)、年龄相关的记忆功能障碍、轻度认知缺损、嗜银颗粒疾病、皮克氏病、皮质基底节变性、进行性核上性麻痹、与17号染色体有关的遗传性额颞性痴呆及帕金森综合症(FTDP-17)、多发性硬化、溶酶体疾病(例如、尼曼-皮克C型疾病、戈谢病)、克罗恩病、癌症(包括甲状腺癌、肾(包括乳头状肾)、乳腺癌、肺癌和前列腺癌、白血病(包括急性骨髓性白血病(AML))和淋巴瘤)、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、单纯红细胞再生障碍、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、埃文斯综合征、血管炎、大疱性皮肤疾病、1型糖尿病、肥胖症、癫痫、肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病、特发性肺纤维化、舍格伦综合征、Devic疾病、炎性肌病、强直性脊柱炎的治疗，可为对症的或改变疾病的。在某些实施方案中，这些疾病的治疗是指对症治疗。
本发明还提供了LRRK2抑制剂在体外生成神经元祖细胞中的用途，其用在CNS障碍的基于细胞的治疗的后续治疗应用中。
当式(I)化合物或其药学上可接受的盐旨在用于治疗帕金森氏病时，其可与宣称用于对症治疗帕金森氏病的药物组合使用。这种其他治疗剂的合适的实例包括L-多巴和多巴胺激动剂(例如普拉克索、罗匹尼罗)。
当式(I)化合物或其药学上可接受的盐旨在用于治疗阿尔茨海默氏病时，其可与宣称用于缓和疾病的或对症治疗阿尔茨海默氏病的药物组合使用。这种其他治疗剂的合适的实例可以是对症药物，例如已知改变胆碱能传递的那些，例如M1毒蕈碱性受体激动剂或变构调节剂、M2毒蕈碱性拮抗剂、乙酰胆碱酯酶抑制剂(如四氢氨基吖啶、多奈哌齐盐酸盐、利伐斯的明和加兰他敏)、烟碱性受体激动剂或变构调节剂(例如α7激动剂或变构调节剂或α4β2激动剂或变构调节剂)、PPAR激动剂(例如PPARγ激动剂)、5-HT4受体部分激动剂、5-HT6受体拮抗剂例如SB-742457或5HT1A受体拮抗剂和NMDA受体拮抗剂或调节剂或疾病缓和剂(例如β或γ-分泌酶抑制剂例如司马西特)、线粒体稳定剂、微管稳定剂或Tau病理的调节剂，例如Tau聚集抑制剂(例如亚甲基蓝和REMBERTM)，NSAIDS，例如tarenflurbil，tramiprosil；或抗体例如巴匹珠单抗或索拉珠单抗；蛋白聚糖例如tramiprosate。
当式(I)的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗细菌感染、寄生虫感染或病毒感染时，它可与声称可用作直接针对传染因子的对症治疗的药物组合使用。
当式(I)化合物或其药学上可接受的盐与其他治疗剂组合使用时，所述化合物可以任意方便的途径依次或同时给药。
在其他方面，本发明还提供了组合，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及其他治疗剂或药剂。
上文提及的组合可方便地用在药物制剂的形式中并因此包含上述组合以及药学上可接受的载体或赋形剂的药物制剂构成了本发明的其他方面。这种组合的单一组分可在单独或组合的药物制剂中依次或同时给药。
当式(I)化合物或其药学上可接受的盐与治疗同一疾病状态的第二治疗活性剂组合使用时，各化合物的剂量可能与该化合物单独使用时的量不同。适当的剂量将由本领域技术人员容易地理解。
D.组合物
式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可在给药于受试者之前配制为药物组合物。根据一方面，本发明提供包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。根据另一方面，本发明提供制备药物组合物的方法，其包括将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的赋形剂混合。
药物组合物可以每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂型存在。这种单位可含有，例如，0.1mg、0.5mg或1mg-50mg、100mg、200mg、250mg、500mg、750mg或1g的本发明化合物，其取决于所治疗的疾病、给药途径和受试者的年龄、体重和症状，或者药物组合物可以每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂型存在。在另一实施方案中，所述单位剂量组合物是含有本文所述的每日剂量或亚剂量或其适当分数的活性成分的那些。此外，这种药物组合物可通过本领域技术人员熟知的任意方法制备。
式(I)的化合物的治疗有效量将取决于许多因素，包括，例如，预期接受者的年龄和体重、需要治疗的精确症状及其严重性、制剂的性质和给药途径且最终将由开具药品处方的医务人员决定。但是，用于治疗本发明所述疾病的式(I)的化合物的治疗有效量通常将在每天0.1至100mg/kg接受者体重的范围内和更通常在每天1-10mg/kg体重的范围内。因此，对于70kg成人哺乳动物，每日的实际量通常为70至700mg且该量以每天单一剂量进行给药或以每天若干亚剂量进行给药，例如每天给药2、3、4、5或6个剂量。或者所述给药可间歇进行，例如每隔一天一次、每周一次或每月一次。药学上可接受的盐或溶剂合物等的治疗有效量可确定为式(I)化合物本身的治疗有效量的比例。可以设想，类似的剂量将适用于治疗上文提及的其他疾病。
本发明的药物组合物可含有一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药物组合物可含有一种以上的本发明化合物。例如，在一些实施方案中，所述药物组合物可含有两种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。此外，所述药物组合物可任选地还包含一种或多种额外的活性药物成分(API)。
如本文所用，“药学上可接受的赋形剂”是指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，其参与提供药物组合物形状和硬度。混合时，各赋形剂可与该药物组合物的其他成分相容，使得避免当给药至受试者时显著降低本发明化合物功效的相互作用和将形成不是药学上可接受的药物组合物的相互作用。
可将本发明化合物和药学上可接受的赋形剂或赋形剂配制成适于以所需给药途径给药至受试者的剂型。例如，剂型包括适于以下的那些：(1)口服给药(包括口腔或舌下)，例如片剂、胶囊剂、小胶囊剂、丸剂、锭剂、粉剂、糖浆剂、酏剂、混悬液、溶液、乳液、囊剂和扁囊剂；(2)胃肠外给药(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)，例如无菌溶液、混悬液和用于重构的粉剂；(3)经皮给药，例如透皮贴剂；(4)直肠给药，例如栓剂；(5)经鼻吸入，例如干粉、气雾剂、混悬液和溶液；和(6)局部给药(包括口腔、舌下或透皮)，例如乳膏剂、软膏剂、洗剂、溶液、糊剂、喷雾剂、泡沫剂和凝胶剂。这种组合物可以本领域已知的任意方法进行制备，例如通过将式(I)化合物与载体或赋形剂结合。
适于口服给药的药物组合物可作为离散单元存在，例如胶囊剂或片剂；粉剂或颗粒剂；在水性或非水液体中的溶液或混悬液；可食用泡沫剂或搅打剂(whip)；或水包油液体乳液或油包水液体乳液。
合适的药学上可接受的赋形剂将根据所选具体的剂型而变化。此外，可根据在组合物中所起的具体功能来选择合适的药学上可接受的赋形剂。例如，可根据促进制备均一剂型的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。可根据促进制备稳定的剂型的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。可根据在给药至受试者后促进本发明的一种或多种化合物从身体的一个器官或部分携带或运输至身体的另一器官或部分的能力来选择某些药学上可接受的赋形剂。某些药学上可接受的赋形剂可根据其提高患者顺应性的能力进行选择。
合适的药学上可接受的赋形剂包括下列赋形剂类型：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、粒化剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、增甜剂、调味剂、掩味剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域技术人员将理解，某些药学上可接受的赋形剂可以以多于一种功能和以替代性功能来使用，取决于所述赋形剂在制剂中存在多少和在制剂中存在何种其它成分。
具有本领域的知识和技术的技术人员能够选择出以适当量用于本发明的合适的药学上可接受的赋形剂。此外，有许多本领域技术人员可用的资源，这些资源描述了药学上可接受的赋形剂且其可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)，The Handbook of Pharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited)，和The Handbook of Pharmaceutical Excipients(the American Pharmaceutical Association and thePharmaceutical Press)。
本发明的药物组合物使用本领域技术人员已知的技术和方法制备。通常用于本领域的一些方法描述在Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack PublishingCompany)中。
一方面，本发明涉及固体口服剂型，例如片剂或胶囊剂，其包含治疗有效量的本发明化合物以及稀释剂或填充剂。合适的稀释剂和填充剂包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶化淀粉)、纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)、硫酸钙和磷酸氢钙。口服固体剂型还可包含粘合剂。合适的粘合剂包括淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶化淀粉)、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、西黄蓍胶、瓜尔胶、聚维酮和纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)。口服固体剂型还可包含崩解剂。合适的崩解剂包括交聚维酮、淀粉羟乙酸钠、交联羧甲基纤维素、海藻酸和羧甲基纤维素钠。口服固体剂型还可包含润滑剂。合适的润滑剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和滑石。
在一些实施方案，本发明涉及药物组合物，其包含0.01至1000mg的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和0.01至5g一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在另一实施方案中，本发明涉及用于治疗神经变性疾病的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。在另一实施方案中，本发明涉及用于治疗帕金森病的药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
E.制备化合物的方法
在制备式(I)的化合物或其盐中所用的方法取决于所需化合物。作为选择特定取代基以及特定取代基的各种可能的位点的这种因素在制备本发明特定化合物所遵循的路径中均发挥作用。本领域技术人员很容易鉴定出那些因素。
一般而言，本发明化合物可通过本领域已知的标准技术和已知的类似方法进行制备。用于制备式(I)的化合物的一般方法如下所述。下文中总的实验方案中所述的起始原料和试剂是市售可得的或可通过本领域技术人员已知的方法进行制备。
本领域技术人员将理解，如果本文所述取代基与本文所述的合成方法不相容，则可将该取代基用对该反应条件稳定的合适的保护基进行保护。所述保护基可在该反应顺序的合适的点脱除，得到所需的中间体或目标化合物。使用这种合适的保护基来保护和脱保护不同的取代基的合适的保护基和方法是本领域技术人员熟知的；其实例可见于T.Greene和P.Wuts，Protecting Groups in Chemical Synthesis(第3版)，John Wiley&Sons，NY(1999)。在一些情况下，可特异性地选择在所用反应条件下反应性的取代基。在这些情况下，该反应条件将所选取代基转化成另一取代基，其可用作中间体化合物或为目标化合物的所需取代基。
一般方案1提供制备本发明化合物的示例性合成方法。
一般方案1
一般方案1提供制备代表式(I)的化合物的化合物3的示例性合成。在一般方案1中，R1、R2、R3、R4、R5、R8、R9和X1如式I中定义。
步骤(i)可为取代反应，其通过将化合物1与化合物2使用合适的碱如Cs2CO3在合适的溶剂如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中在合适的温度如约100℃反应以提供化合物3。
步骤(i)也可为偶联反应，其使用合适的试剂如CuI和N,N'-二甲基-环己烷-1,2-二胺在合适的碱如K3PO4的存在下在合适的溶剂如甲苯中在合适的温度如回流条件以提供化合物3。
步骤(i)也可为偶联反应，其使用合适的试剂如Pd2dba3和二-叔丁基(2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯]-2-基)膦在合适的碱如叔丁醇钠的存在下在合适的溶剂如甲苯中在合适的温度如100℃以提供化合物3。
一般方案2
一般方案2提供制备中间体1的示例性合成。保护基P1，可为任何合适的保护基例如，四氢-2H-吡喃-2-基(THP)、(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基(SEM)或乙酰基(Ac)。
中间体5可在步骤(i)中获得，其通过将起始材料4与合适的试剂如DHP在合适的酸如TsOH的存在下在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如20℃至40℃反应。
步骤(ii)为中间体5和硼酸或酯的交叉偶联反应，其使用合适的钯催化剂如Pd(dppf)Cl2在合适的碱如Na2CO3的存在下在合适的溶剂如1,4-二噁烷中在合适的温度如60℃至100℃。
步骤(iii)涉及在合适的溶剂如THF中在合适的温度如-60℃至-10℃与合适的氧化试剂如H2O2反应以提供中间体7。
步骤(iv)为在合适的催化剂如Pd/C的存在下在极性溶剂如MeOH中在合适的温度如25℃至80℃与合适的还原试剂如氢的反应。
步骤(v)可为在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如0℃至25℃与氧化剂如DMP的氧化反应以得到中间体8。
步骤(vi)和(vii)涉及在合适的溶剂如DCM中在合适的温度如-78℃至0℃与氟化剂如DAST的反应。
步骤(viii)(ix)和(x)为脱保护反应。通常，中间体与合适的酸如HCl在合适的溶剂如1,4-二噁烷中在合适的温度如25℃至40℃反应以得到中间体1。
步骤(xi)涉及在合适的还原剂如NaBH3CN存在下在合适的溶剂如MeOH和CH2Cl2中在合适的温度如室温与二氢呋喃-3(2H)-酮或取代的二氢呋喃-3(2H)-酮的反应。
一般方案3
一般方案3提供制备中间体2的示例性合成。
当R3为N-连接的4-6元杂环基环或NHR7时；步骤(i)可为使用合适的碱如TEA在合适的溶剂如EtOH中在合适的温度如25℃至100℃与不同胺的反应以提供中间体2。
当R3为OR7，步骤(i)为偶联反应。醇(R7OH)通过合适的碱如氢化钠在合适的溶剂如THF中在合适的温度如0℃脱质子化以得到过渡中间体。然后中间体13与过渡中间体在合适的溶剂如THF中在合适的温度如室温反应。
实施例
一般实验方法
以下描述和实施例阐明了本发明。这些实施例不旨在限制本发明的范围，而是为本领域技术人员制备和使用本发明化合物、组合物和方法提供指导。尽管描述了本发明的具体实施方案，但是本领域技术人员将理解，在不脱离本发明的精神和范围的前提下可作出各种变化和修改。
本申请中描述的化合物的化学名称通常从ChemDraw Ultra(ChambridgeSoft)和生成/或通常遵循IUPAC命名法的原理。
用微波照射加热反应混合物是在Smith Creator(购自Personal Chemistry，Forboro/MA，现属于Biotage)、Emrys Optimizer(购自Personal Chemistry)或Explorer(由CEM Discover提供，Matthews/NC)微波上实现的。
常规技术可在本文中用于反应的后处理和实施例产品的纯化。
提及有关有机层或有机相的干燥的下述实施例可以是指用硫酸镁或硫酸钠干燥所述溶液并根据常规技术过滤掉所述干燥剂。产品通常可通过减压蒸发除去溶剂而获得。
在实施例中化合物的纯化可通过常规方法实现，例如色谱法和/或使用合适的溶剂进行重结晶。色谱方法是本领域技术人员已知的且包括例如柱色谱、快速色谱、HPLC(高效液相色谱)和MDAP(质量定向的自动制备，也称为质量定向的LCMS纯化)。MDAP描述于例如W.Goetzinger等人，Int.J.Mass Spectrom.，2004，238、153-162。
Analtech Silica Gel GF和E.Merck Silica Gel 60 F-254薄层板用于薄层色谱。无论快速色谱还是重力色谱均是在E.Merck Kieselgel 60(230-400目)硅胶上进行的。制备型HPLC使用Gilson制备系统进行，其使用Luna 5u C18(2)100A反相柱，用10-80梯度(0.1％FA的乙腈溶液/0.1％的FA水溶液)或10-80梯度(乙腈/水)洗脱。在本申请中用于纯化的CombiFlash系统购自Isco，Inc。CombiFlash纯化使用预填充的SiO2柱、具有在254nm处UV波长的检测器和混合的溶剂来实施。
本文所用术语“CombiFlash”、“Biotage75”和“Biotage ”是指市售可得的使用预填充的硅胶筒的自动化纯化系统。
最终化合物用LCMS(下文所列条件)或NMR进行表征。1H NMR或19FNMR谱使用BrukerAvance 400MHz光谱仪记录。CDCl3是氘代氯仿，DMSO-d6是六氘代二甲亚砜，和CD3OD(或MeOD)是四氘代甲醇。化学位移以内标物四甲基硅烷(TMS)或NMR溶剂的低磁场百万分之一(ppm)记录。NMR数据的缩写如下：s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，dd＝双二重峰，dt＝双三重峰，app＝表观，br＝宽峰。J是指NMR偶合常数，以赫兹计量。
所有的温度以摄氏度记录。所有其他的缩写描述于ACS Style Guide(AmericanChemical Society，Washington，DC，1986)中。
绝对立体化学可通过本领域技术人员已知的方法测定，例如X射线或振动圆二色性(VCD)。
当描述对映体或非对映体并且手性中心的绝对立体化学未知时，在手性中心使用“*”表示手性中心的绝对立体化学未知，即所绘制的化合物可能是单一R对映体或单一S对映体。当已知对映体或非对映体的手性中心的绝对立体化学时，适当地使用粗体楔形符号或散列楔形符号而不在手性中心使用“*”。
当描述几何或顺式反式异构体并且异构体的绝对构型未知时，在与几何或顺式-反式异构相关的原子之一上使用“*”表示在该原子或其周围的绝对构型是未知的，即所绘制的化合物可以是单一顺式异构体或单一反式对映体。
在后续的操作中，各起始原料之后，通常提供所涉及的中间体。这仅仅是为本领域技术人员提供帮助。该起始原料未必是从所提及的批次制备的。
LCMS条件：
1)酸性方法：
a.仪器：HPLC：Waters UPC2和MS：Qda
流动相：水，包含0.1％FA/0.1％MeCN
柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1x 50mm和1.7μm 2.1x 100mm检测：MS和光电二极管阵列检测器(PDA)
b.仪器：HPLC：Shimadzu和MS：2020
流动相：水，包含0.1％FA/0.1％MeCN
柱：Sunfire C18 5μm 50x 4.6mm和Sunfire C18 5μm 150x 4.6mm
检测：MS和光电二极管阵列检测器(PDA)
2)碱性条件：
仪器：HPLC：Agilent 1260和MS：6120
流动相：0.1％NH4OH于H2O中/0.1％NH4OH于ACN中
柱：Xbridge C18 5μm 50x 4.6mm和Xbridge C18 5μm 150x 4.6mm
检测：MS和光电二极管阵列检测器(DAD)
制备型HPLC条件
仪器：Waters仪器
柱：Xbridge Prep C18柱OBD(10μm，19x 250mm),Xbrige prep C18 10μm OBD TM19x 150mm，Sunfire Prep C18 10 x 250mm 5μm，XBRIDGE Prep C18 10 x 150mm 5μm等
酸性方法:
流动相：水，包含0.1％TFA/乙腈.
碱性方法:
流动相：水，包含0.1％NH4OH/乙腈。
手性制备型HPLC:
Thar SFC Prep 80(TharSFC ABPR1，TharSFC SFC Prep 80 CO2泵，TharSFC共溶剂泵，TharSFC冷却热交换器和循环浴，TharSFC质量流量计，TharSFC静态混合器，TharSFC注射模块，Gilson紫外检测器，TharSFC馏分收集模块
手性HPLC分析：
仪器：Thar SFC Prep 80(TharSFCABPR1，TharSFC SFC Prep 80 CO2泵，TharSFC共溶剂泵，TharSFC冷却热交换器和循环浴，TharSFC质量流量计，TharSFC静态混合器，TharSFC注射模块，Gilson紫外检测器，TharSFC馏分收集模块
手性-HPLC分析:
柱和流动相：描述于以下实施例。
缩写和资源来源
以下缩写和资源在下文使用：
Ac-乙酰基
MeCN-乙腈
Atm–气氛
Aq.–水性
BINAP–2,2'-二(二苯基膦基)-1,1'-联萘
Boc-叔丁基氧基羰基
Boc2O–二碳酸二叔丁基酯
Bn–苄基
t-Bu–叔丁基
conc.–浓
DAST-N,N-二乙基氨基三氟化硫
DCE-1,2-二氯乙烷
DCM–二氯甲烷
DEA-二乙醇胺
DMEDA–N,N′-二甲基乙二胺
戴斯-马丁高碘烷–1,1,1-三(乙酰基氧基)-1,1-二氢-1,2-苯并二氧杂环戊烯(benziodoxol)-3-(1H)-酮
DHP–3,4-二氢-2H-吡喃
DIBAL-H–氢化二异丁基铝
DIEA–N,N-二异丙基乙基胺
DIPEA–N,N-二异丙基乙基胺
DMA–N,N-二甲基乙酰胺
DMAP–4-二甲基氨基吡啶
DMEDA—N,N'-二甲基乙二胺
DMF–N,N-二甲基甲酰胺
DMP–戴斯-马丁高碘烷
DMSO–二甲基亚砜
DPPF–1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁
EA–乙酸乙酯
EDC–1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐
EDCI–3-(乙基亚氨基亚甲基氨基)-N,N-二甲基丙-1-胺
EtOH/EtOH–乙醇
Et2O–乙醚
EtOAc–乙酸乙酯
Et3N–三乙胺
FA–甲酸
HEP-庚烷
Hex-己烷
HOAc—乙酸
HATU–2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HOBT–羟基苯并三唑
IPA–异丙醇
iPrOH/iPrOH–异丙醇
m-CPBA–间氯过苯甲酸
MOMCl—单氯二甲基醚
Me-甲基
MeOH-甲醇
MsCl–甲磺酰氯
NaHMDS–二(三甲基甲硅烷基)氨基钠
NIS–N-碘代琥珀酰亚胺
NMP–1-甲基-2-吡咯烷酮
NMO–4-甲基吗啉4-氧化物
PE–石油醚
PMB–对甲氧基苄基
Pd2(dba)3–三(二亚苄基丙酮)二钯
Pd(dppf)Cl2–1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)二氯甲烷复合物
Ph3P–三苯基膦
PhNTf2–N,N-二-(三氟甲磺酰基)苯胺
PPTS–吡啶鎓对甲苯磺酸盐
PTSA–对甲苯磺酸
rt/RT–室温
Rt–保留时间
sat.–饱和
SEM-Cl–2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物
SFC–超临界流体色谱法
TBAI–四丁基碘化铵
TBDPSCl—叔丁基(氯)二苯基硅烷
TEA–三乙胺
TFA–三氟乙酸
TFAA–三氟乙酸酐
THF–四氢呋喃
TLC–薄层色谱法
TsCl-4-甲苯磺酰氯
TsOH–对甲苯磺酸
描述1
(S)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐(D1)
向(S)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(500mg，2.30mmol)在二噁烷(4mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，5mL)且在室温搅拌2小时。TLC显示反应完成。将反应混合物浓缩以得到标题化合物(粗的，430mg，产率>100％)，其为白色固体。
描述2
4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(D2)
向NaI(11.9g，79.7mmol)在HI(55％，50mL)中的溶液中分批添加4,6-二氯-2-甲基嘧啶(10.0g，61.3mmol)。所得悬浮液加热至40℃且搅拌1小时。将反应混合物冷却且过滤。将固体用水洗涤，然后用甲醇(50mL)洗涤。将混合物过滤以得到标题化合物(9.0g，产率42％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.07(s，1H)，2.67(s，3H)。
LCMS：(流动相：5-95％乙腈，以2.5分钟)，Rt＝1.59分钟，MS计算值：346；MS实测值：347[M+H]+。
在单独的批次中，向NaI(40g，26.8mmol)在HI(55％，200mL)中的溶液中添加4,6-二氯-2-甲基嘧啶(33g，20.6mmol)。所得悬浮液在40℃搅拌24小时，然后倒入冰水(500mL)中且过滤。滤饼用冰水洗涤三次以得到粗产物(67.3g，产率：96％)，其为黄色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.07(s，1H)，2.67(s，3H)。
描述3
(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D3)
向(S)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐(430mg粗物质，2.80mmol)在CH3OH(5mL)中的溶液中添加4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(1.10g，3.10mmol)和TEA(850mg，8.40mmol)。所得混合物温热至60℃保持2小时。TLC显示反应完成。反应混合物用水(20mL)稀释且用EtOAc(20mL×2)萃取。将合并的有机层浓缩。粗物质通过硅胶柱纯化(PE:EA＝5:1)以得到标题化合物(760mg，产率81％)，其为白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.79(s，1H)，4.18-4.01(m，3H)，3.79-3.58(m，4H)，3.08-2.99(m，1H)，2.92-2.84(m，1H)，2.46(s，3H)，1.97-1.90(m，1H)。
描述4
(2S)-4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-2-(((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)甲基)-吗啉 (D4)
向(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(760mg，2.30mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加DHP(774mg，9.20mmol)和TsOH(396mg，2.30mmol)。所得混合物在50℃搅拌过夜。TLC显示反应完成。将混合物用水洗涤(20mL)且水性部分用DCM(20mL×2)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗物质通过柱纯化(PE：EA＝5：1)以得到标题化合物(750mg，产率78％)，其为淡黄色油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.79(s，1H)，4.63-4.61(m，1H)，4.15-4.00(m，3H)，3.901-3.77(m，2H)，3.73-3.51(m，4H)，3.11-2.78(m，2H)，2.46(s，3H)，1.88-1.48(m，6H)。
描述5
6-溴-5-甲基-1H-吲唑(D5)
在冰浴中向5-溴-2,4-二甲基苯胺(15.0g，75.0mmol)在氯仿(150mL)中的溶液中添加Ac2O(15.0，150mmol)、KOAc(8.00g，82.5mmol)、18-冠醚-6(10.0g，37.5mmol)和亚硝酸异戊酯(26.3g，225mmol)。将反应混合物回流36小时，然后浓缩以去除溶剂。将残余物溶于EtOAc(500mL)，用水洗涤(100mL)，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。将残余物溶于THF(100mL)且添加NaOH(4M，40.0mL，160mmol)。将混合物在室温搅拌1h。真空去除溶剂且残余物在EtOAc(400mL)和水(200mL)之间分配。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc从10:1至5:1)以得到标题化合物(5.1g，产率32％)，其为橙色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ10.20(br s，1H)，7.99(s，1H)，7.75(s，1H)，7.61(s，1H)，2.50(s，3H)。
或者，向5-溴-2,4-二甲基苯胺(242g，1.25mol)在氯仿(5L)中的溶液中添加Ac2O(510g，5.0mol)。将混合物搅拌4h且添加KOAc(245g，2.5mol)和18-冠醚-6(99g，0.375mol)。在N2保护下将亚硝酸异戊酯(293g，2.5mol)缓慢添加至反应混合物。反应混合物保持回流过夜，浓缩且重新溶解于EtOAc，用水(3L)和NaCl水溶液(1L)洗涤。溶液用Na2SO4干燥且浓缩。粗物质与其它批次(250g)合并且在PE/EtOAc(1L/200mL)中搅拌。将沉淀过滤，用PE/EA(5/1)洗涤以得到固体(300g)。将母液在PE/EA(5/1)溶液中搅拌且得到125g产物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.70(s，1H)，8.02(s，1H)，7.57(s，1H)，2.77(s，3H)，2.52(s，3H)。
在0-5℃向上述中间体(33.0g，130.4mmol)在THF(330mL)中的溶液中滴加NaOH水溶液(5.0M，130mL)。所得混合物然后在室温搅拌2小时，然后用EtOAc(400mL)稀释。分离的有机部分用盐水(400mL)和水(400mL)洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩以得到标题产物(27.5g)，其为黄色固体。
LC-MS[流动相：从30％水(0.1％FA)和70％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]Rt＝0.32分钟；MS计算值：211.06，MS实测值：213.2[M+2H]+。
描述6
6-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(D6)
在室温向6-溴-5-甲基-1H-吲唑(5.10g，24.2mmol)在无水DCM(120mL)中的溶液中添加DHP(4.10g，48.4mmol)、TsOH(0.800g，4.80mmol)和Mg2SO4(5.0g)。将反应混合物加热至35℃且搅拌1小时。将反应混合物过滤且滤液用Na2CO3溶液(10％，100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE：EtOAc＝50/1至20/1)以得到标题化合物(6.0g，产率84％)，其为橙色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.90(s，1H)，7.84(s，1H)，7.55(s，1H)，5.63(dd，J＝9.6，3.0Hz，1H)，4.05-4.00(m，1H)，3.78-3.70(m，1H)，2.58-2.44(m，4H)，2.20-2.02(m，2H)，1.78-1.65(m，3H)。
LCMS：(流动相：5-95％CH3CN)，Rt＝2.19分钟，经3分钟；MS计算值：294；MS实测值：295[M+1]+。
或者，向6-溴-5-甲基-1H-吲唑(27.0g，127.9mmol)在DCM(405mL)中的溶液中添加DHP(21.5g，255.8mmol)和TsOH H2O(4.86g，25.58mmol)在室温。反应混合物在加热45℃且搅拌3小时。反应混合物用NaHCO3水溶液淬灭至pH～9。分离水相且用DCM(200mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(300mL)和水(300mL)洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc从40:1至20:1)以得到标题产物(25.0g，产率：66.2％)，其为黄色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.84(s，1H)，7.77(s，1H)，7.48(s，1H)，5.57(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，3.96-3.94(m，1H)，3.70-3.65(m，1H)，2.46-2.39(m，4H)，2.09-1.97(m，2H)，1.71-1.47(m，3H)。
描述7
4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸 叔丁酯(D7)
向6-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(5.50g，18.6mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(6.90g，22.3mmol)和Na2CO3(4.90g，46.5mmol)在二噁烷(150mL)和水(130mL)中的悬浮液中添加Pd(dppf)Cl2(658mg，0.900mmol)。混合物用N2脱气3次，然后在80℃搅拌过夜。真空去除溶剂且残余物在EtOAc(300mL)和水(200mL)之间分配。分离的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc＝10:1)以得到标题化合物(7.3g，产率99％)，其为浅棕色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.92(s，1H)，7.48(s，1H)，7.28(s，1H)，5.67(dd，J＝9.6，2.8Hz，1H)，5.63(br s，1H)，4.07-4.01(m，3H)，3.78-3.70(m，1H)，3.67-3.64(m，2H)，2.62-2.53(m，1H)，2.45-2.39(m，2H)，2.34(s，3H)，2.18-2.12(m，1H)，2.07-2.02(m，1H)，1.81-1.73(m，2H)，1.69-1.61(m，1H)，1.52(s，9H)。
或者，在28℃向6-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(25.09g，84.7mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(28.8g，93.2mmol)和Na2CO3(22.4g，211.7mmol)在二噁烷(375mL)和水(60mL)中的悬浮液中添加Pd(dppf)Cl2(3.89g，4.23mmol)。所得混合物用Ar2脱气3次，然后在80℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，然后用EtOAc(250mL)和水(300mL)稀释。分离水相且用EtOAc(250mL)萃取。合并的有机相用盐水(300mL)洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc从30:1至10:1)以得到标题产物(27.0g，产率：80.2％)，其为淡黄色胶状物。
LC-MS[流动相：从30％水(0.1％FA)和70％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]Rt＝0.69分钟；MS计算值：397.5，MS实测值：398.5[M+H]+。
描述8
4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D8)
在H2下向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(80g，粗物质)在MeOH(2L)中的溶液中添加Pd/C(10g，12％/W)。反应混合物脱气3次，在室温搅拌2天，过滤且浓缩以得到粗产物，其为白色固体。(65.8g)
LC-MS[流动相：流动相：从30％水(0.1％FA)和70％CH3CN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，经2.0分钟]，Rt＝0.63分钟；MS计算值：399.2，MS实测值：400.5[M+H]+。
或者，在Ar2下向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(27.0g，67.8mmol)在MeOH(540mL)中的溶液中添加Pd/C(4.05g，15％/W)，反应混合物用H2脱气3次。然后将混合物在室温搅拌16小时。反应混合物通过硅藻土过滤且浓缩以得到标题产物(25.3g，产率：93.5％)，其为白色固体。
LC-MS[流动相：从30％水(0.1％FA)和70％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]Rt＝0.65分钟；MS计算值：399.2，MS实测值：400.5[M+H]+。
描述9
5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(D9)
向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(55.4g，139mmol)在MeOH(150mL)中的溶液中添加HCl/MeOH(5M，200mL)。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩，用Na2CO3水溶液处理且用NaOH水溶液碱化至pH>12。将混合物过滤以得到所需产物，其为白色固体。(29.3g，产率＝98％)
LC-MS[流动相：流动相：从90％水(0.1％FA)和10％CH3CN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，经2.0分钟]，Rt＝0.85分钟；MS计算值：215，MS实测值：216[M+H]+。
或者，在0℃向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(25.3g，63.3mmol)在DCM(250mL)中的溶液中滴加HCl/MeOH(5M，200mL)。将反应混合物在室温搅拌16小时。TLC(DCM/MeOH＝10/1)显示反应完成。将反应混合物浓缩以得到白色固体(18.0g)。将盐酸盐(12g)溶于水(50mL)且将NaOH(3.2g)缓慢添加至溶液。将混合物在室温搅拌30分钟且过滤以得到标题产物(8.0g，产率：58.7％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.8(br，1H)，8.48(s，1H)，7.90(s，1H)，7.28(s，1H)，3.18(d，J＝12Hz，2H)，2.96(t，J＝21.6Hz，1H)，2.80(t，J＝12.4Hz，2H)，2.39(s，1H)，1.79-1.68(m，4H)
描述10
5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D10)
在0℃向5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑_(900mg，4.18mmol)、二氢呋喃-3(2H)-酮(900mg，10.5mmol)、分子筛(747mg)在MeOH/CH2Cl2(9mL/36mL)中的搅拌混合物中添加AcOH(88.0mg，1.46mmol)和NaBH3CN(525mg，8.36mmol)。将反应混合物温热至室温且搅拌过夜，然后过滤。滤液用NaHCO3水溶液(10mL)洗涤，干燥，过滤且浓缩。通过柱色谱法纯化(洗脱液：PE:EtOAc＝1:1，然后是CH2Cl2:MeOH＝20:1)得到所需产物，其为白色固体(1.13g，产率：94％)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.29分钟；MS计算值：285；MS实测值：286[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.7(br，1H)，7.79(s，1H)，7.40(s，1H)，7.19(s，1H)，3.74-3.50(m，6H)，3.02-2.71(m，3H)，2.40(s，3H)，1.65-1.57(m，6H)
描述11
(R)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐(D11)
向(R)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(500mg，2.30mmol)的溶液添加HCl/二噁烷(4M，10mL)且在室温搅拌1h。TLC显示反应完成。将反应浓缩以得到标题化合物(420mg，产率>100％)，其为白色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.67(s，1H)，9.38(s，1H)，3.94-3.88(m，1H)，3.77-3.67(m，2H)，3.45-3.33(m，2H)，3.13(t，J＝12.6Hz，2H)，2.95-2.87(m，1H)，2.78-2.67(m，1H)。
描述12
(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D12)
向(R)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐(423mg粗物质，2.30mmol)在CH3OH(10mL)中的溶液中添加4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(954mg，2.75mmol)和TEA(835mg，8.25mmol)。所得混合物温热至70℃且搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物浓缩以去除溶剂，倒入水(40mL)中且用EtOAc(40mL×2)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过柱纯化(PE:EA＝2:1)以得到标题化合物(639mg，产率83％)，其为白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.79(s，1H)，4.22-4.01(m，3H)，3.79-3.56(m，4H)，3.08-2.98(m，1H)，2.88-2.84(m，1H)，2.46(s，3H)，2.09-2.04(m，1H)。
或者，向(R)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐(355mg粗物质，2.31mmol)和4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(800mg，2.31mmol)在EtOH/THF(10mL/10mL)中的溶液中添加DIEA(1.49g，11.6mmol)。所得混合物在室温搅拌2天，然后浓缩且通过柱纯化(PE:EtOAc＝2:1)以得到标题产物，其为白色固体(387mg，产率：50％)
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.28分钟；MS计算值：335.01；MS实测值：336.2[M+H]+。
描述13和14
反式-3-羟基-4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D13)和4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D14)
在N2下且内部温度低于5℃下向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(21.0g，52.8mmol)在无水THF(200mL)中的溶液中添加BH3-THF溶液(1M，211mL，211mmol)。将混合物温热至室温且搅拌过夜。TLC显示起始材料耗尽。在低于10℃(内部温度)小心滴加NaOH的溶液(2M，79mL，158mmol)，然后在相同温度滴加H2O2(30％，20.0mL，151mmol)。将混合物在室温搅拌1小时，然后在冰浴中用150mL 10％Na2S2O3溶液淬灭且搅拌20分钟。去除溶剂且残余物用EtOAc(200mL×2)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过柱色谱纯化(PE:EtOAc从10:1至2:1)以得到标题化合物(16.5g，产率75％)，其为白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.92(s，1H)，7.53(s，1H)，7.42(s，1H)，5.70-5.67(m，1H)，4.49-4.44(m，1H)，4.30-4.17(m，1H)，4.05-3.91(m，2H)，3.82-3.72(m，1H)，3.04-2.96(m，1H)，2.86-2.72(m，2H)，2.63-2.53(m，1H)，2.47(s，3H)，2.21-2.16(m，1H)，2.07-2.02(m，1H)，1.99-1.67(m，6H)，1.52(s，9H)。
描述15
(顺式)-3-氟-4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸 叔丁酯(D15)
在N2下在-65℃向(反式)-3-羟基-4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(24.5g，59.0mmol)在无水DCM(200mL)中的溶液中添加DAST(38.0g，236mmol)。将混合物逐渐温热至室温且搅拌2小时。反应混合物小心倒入Na2CO3水溶液(10％，300mL)中且搅拌20分钟。分离有机层且水层用DCM(250mL×2)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥且蒸发。粗物质通过柱色谱纯化(PE:EtOAc＝10:1)以得到标题化合物(11.8g，产率48％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.92(s，1H),7.52(s，1H)，7.41(s，1H)，5.74-5.67(m，1H)，4.80-4.59(m，2H)，4.21(br s，1H)，4.07-3.99(m，1H)，3.80-3.71(m，1H)，3.25-3.19(m，1H)，2.89-2.79(m，2H)，2.65-2.51(m，1H)，2.45(s，3H)，2.19-2.15(m，1H)，2.15-2.04(m，1H)，1.93-1.88(m，1H)，1.80-1.74(m，5H)，1.52(s，9H)。
LCMS[5-95％MeCN]：Rt＝2.25分钟，经3分钟；MS计算值：417；MS实测值：418[M+H]+。
描述16
(顺式)-6-(3-氟哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑盐酸盐(D16)
将(顺式)-3-氟-4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.50g，6.00mmol)在HCl/二噁烷(6M，40mL)中的混合物在室温搅拌6小时。将反应混合物冷却至0℃且过滤。将固体用冷1,4-二噁烷(5mL)洗涤以得到标题化合物(1.4g，产率100％)，其为白色固体，将其直接用于下一步。
LC-MS[5-95％MeCN]：Rt＝1.73分钟；MS计算值：233，MS实测值：234[M+H]+。
描述17
(顺式)-3-氟-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D17)
在冰浴中向(顺式)-6-(3-氟哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑盐酸盐(500mg，2.14mmol)在CH3OH(5mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加KOH(242mg，4.29mmol)和(Boc)2O(700mg，3.21mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。反应混合物用水(30mL)稀释且用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层浓缩。残余物通过柱色谱纯化(PE：EtOAc＝20：1)以得到标题化合物(180mg，产率：25％)，其为无色油状物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.98(s，1H)，7.96(s，1H)，7.56(s，1H)，7.39(s，1H)，4.76-4.54(m，2H)，4.27-4.10(m，1H)，3.25-3.14(m，1H)，2.91-2.76(m，2H)，2.48(s，3H)，1.97-1.84(m，1H)，1.71-1.62(m，1H)，1.51(s，9H)。
描述18和19
(顺式)-3-氟-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(单一顺式异构体1)(D18)和(顺式)-3-氟-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(单一顺式异构体2)(D19)
(顺式)-3-氟-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(140mg，0.420mmol)通过手性制备型HPLC分离，使用以下方法(Chiralpak IB 5um，20x250nm，超临界CO2：i-PrOH＝80：20，流速：20mL/min，205nm，温度：30℃)以得到(顺式)-3-氟-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(单一顺式异构体1)(D18)(68mg，产率48％)，其为白色固体，和(顺式)-3-氟-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(单一顺式异构体2)(D19)(47mg，产率33％)，其为白色固体。
单一顺式异构体1(D18)
LCMS[流动相：5-95％MeCN in 2.5分钟]：Rt＝1.64分钟；MS计算值：333，MS实测值：332[M-H]-。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.07(s，1H)，7.97(s，1H)，7.56(s，1H)，7.39(s，1H)，4.78-4.53(m，2H)，4.32-4.12(m，1H)，3.26-3.13(m，1H)，2.93-2.75(m，2H)，2.47(s，3H)，1.94-1.79(m，1H)，1.69-1.60(m，1H)，1.49(s，9H)。
手性HPLC[Chiralpak IB 5μm 4.6×250mm，相：Hex/IPA＝80/20，流速：1mL/min，温度：30℃]：Rt：6.142分钟，100％ee。
单一顺式异构体2(D19)
LCMS[流动相：5-95％MeCN in 2.5分钟]：Rt＝1.64分钟；MS计算值：333MS实测值：332[M-H]-。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.45(s，1H)，7.97(s，1H)，7.56(s，1H)，7.39(s，1H)，4.75-4.55(m，2H)，4.26-4.16(m，1H)，3.24-3.17(m，1H)，2.90-2.74(m，2H)，2.46(s，3H)，1.93-1.87(m，1H)，1.70-1.61(m，1H)，1.50(s，9H)。
手性HPLC[Chiralpak IB 5μm 4.6×250mm，相：Hex/IPA＝80/20，流速：1mL/min，温度：30℃]：Rt：7.671分钟，100％ee。
描述20
6-((3S,4R)-3-氟哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D20)
在0℃向(顺式)-3-氟-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D18，100mg，0.30mmol)在MeOH(1.5mL)中的溶液中添加HCl/MeOH(5M，1mL)。将反应混合物温热至室温，搅拌过夜，浓缩以去除溶剂，用Na2CO3溶液(5mL)中和且用EtOAc萃取3次。将合并的有机相干燥，过滤且浓缩以得到粗产物，其为白色固体。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.49分钟；MS计算值：233，MS实测值：234[M+H]+。
描述21
6-((3S,4R)-3-氟哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D21)
标题化合物通过类似于D20所述的步骤制备，起始于(顺式)-3-氟-4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D19)的悬浮液。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.29分钟；MS计算值：279.1，MS实测值：280.2[M+H]+。
描述22
1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(D22)
将4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(2.00g，5.80mmol)、氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(700mg，6.38mmol)和TEA(1.76g，17.4mmol)在i-PrOH(12mL)中的悬浮液加热至75℃且搅拌1h。将反应混合物浓缩且残余物用水(50mL)研磨，过滤且干燥以得到标题化合物(1.2g，产率71％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.69(s，1H)，5.79(d，J＝6.4Hz，1H)，4.59-4.52(m，1H)，4.22-4.18(m，2H)，3.72(dd，J＝9.6，4.4Hz，2H)，2.29(s，3H)。
LCMS[流动相：5-95％MeCN in 2.5分钟]:Rt＝1.18分钟，MS计算值：291；MS实测值：292[M+H]+。
描述23
4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(D23)
向NaI(1.10g，7.34mmol)在HI(55％，7.5mL)中的溶液中添加4,6-二氯-2-甲氧基嘧啶(1.00g，5.59mmol)。将反应混合物加热至40℃且搅拌10h，然后倒入冰水(50mL)中且过滤以得到粗固体。残余物通过柱色谱纯化(PE：EtOAc＝10：1)以得到标题产物(640mg，产率31.7％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(s，1H)，4.00(s，3H)。
描述24
1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(D24)
标题化合物通过类似于D22所述的步骤制备，在85℃起始于4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶、氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐和TEA在i-PrOH中的悬浮液。
LCMS(5-95％MeCN，以2.5分钟)Rt＝1.27分钟，[M+H]+＝216。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.86(s，1H)，4.84-4.79(m，1H)，4.34-4.30(m，2H)，3.98-3.95(m，2H)，3.92(s，3H)，3.13(br s，1H)。
描述25
(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D25)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，在室温起始于4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶和(R)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐在异丙醇和DIPEA中的溶液。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.92分钟；MS计算值：351.1，MS实测值：352.0[M+H]+。
描述26
4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D26)
向5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(1.00g，4.64mmol)和Et3N(930mg，9.20mmol)在CH2Cl2(80mL)中的搅拌溶液中添加Boc2O(1.00g，4.60mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h。LC-MS显示反应完成。将反应混合物浓缩至干。残余物通过硅胶色谱法纯化，用PE:EtOAc＝3:1洗脱以得到所需产物，其为白色固体(900mg，产率：61％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.77(s，1H)，7.89(s，1H)，7.50(s，1H)，7.28(s，1H)，4.12-4.07(m，2H)，3.17(s，1H)，2.94-2.84(m，2H)，2.40(s，3H)，1.77(d，J＝12.0Hz，2H)，1.55-1.47(m，2H)，1.43(s，9H)。
描述27
6-溴-5-硝基-1H-吲唑(D27)
向1-(6-溴-5-硝基-1H-吲唑-1-基)乙酮(2.2g，7.8mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加NaOH水溶液(5M，6mL)。所得混合物在室温搅拌1h。添加DCM(100mL)以萃取所需化合物。有机溶液用水(30mL)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩以得到标题化合物(1.0g，产率：53％)，其为棕色固体，将其直接用于下一步。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.74(s，1H)，8.63(s，1H)，8.35(s，1H)，8.07(s，1H)。
描述28
6-溴-5-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(D28)
在室温向6-溴-5-硝基-1H-吲唑(1.03g，4.26mmol)和DHP(717mg，8.54mmol)在DCM(10mL)中的悬浮液中添加TsOH.H2O(146mg，0.77mmol)。所得混合物在室温(25℃)搅拌20分钟。反应混合物用DCM(50mL)稀释，然后用饱和Na2CO3(30mL)和盐水洗涤，用MgSO4干燥且浓缩。粗产物通过柱色谱纯化(PE:EtOAc＝5:1)以得到标题化合物(1.08g，产率：78％)，其为橙色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.35(s，1H)，8.14(s，1H)，8.00(s，1H)，5.75-5.71(m，1H)，4.04-3.99(m 1H)，3.82-3.74(m，1H)，2.54-2.41(m，1H)，2.21-2.08(m，2H)，1.85-1.66(m，3H)。
描述29
4-(5-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸 叔丁酯(D29)
在室温向6-溴-5-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(1.08g，3.31mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.08g，3.48mmol)和Na2CO3(878mg，8.28mmol)在1,4-二噁烷(12mL)和水(2.5mL)中的悬浮液中添加Pd(dppf)Cl2(121mg，0.166mmol)。所得混合物在100℃在N2气氛下搅拌过夜。将反应混合物冷却且过滤。将滤液浓缩且粗产物通过柱色谱纯化(PE:EtOAc＝5:1)以得到标题化合物(1.2g，产率：85％)，其为橙色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.48(s，1H)，8.17(s，1H)，7.43(s，1H)，5.76-5.61(m，2H)，4.13-4.01(m 3H)，3.83-3.74(m，1H)，3.72-3.65(m，2H)，2.58-2.45(m，1H)，2.41-2.28(m，2H)，2.22-2.06(m，2H)，1.85-1.65(m，3H)，1.51(s，9H)。
描述30
4-(5-氨基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D30)
在室温向4-(5-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(1.0g，2.3mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，100mg)。所得混合物在50℃在H2气氛(1atm)搅拌3小时。将反应混合物冷却且过滤。将滤液浓缩以得到标题化合物(876mg，产率：94％)，其为白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.82(s，1H)，7.28(s，1H)，6.98(s，1H)，5.66-5.62(m，1H)，4.41-4.24(m，2H)，4.07-4.01(m 1H)，3.79-3.71(m，1H)，3.57(s，2H)，2.92-2.75(m，3H)，2.64-2.48(m，1H)，2.20-2.10(m，1H)，2.07-1.93(m，3H)，1.83-1.63(m，5H)，1.50(s，9H)。
描述31
5-氯-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(D31)
在冰浴中(0℃–5℃)将NaNO2(165mg，2.39mmol)在水(5mL)中的溶液滴加至4-(5-氨基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(870mg，2.17mmol)在浓HCl(3mL)中的溶液中。然后所得混合物在冰浴中再搅拌15分钟。然后在60℃将混合物一次性添加至CuCl(387mg，3.91mmol)在水(5mL)中的悬浮液中。所得混合物在60℃搅拌30分钟，冷却且逐渐用饱和Na2CO3(50mL)处理且搅拌15分钟。将氨水(30％，5mL)添加至混合物且搅拌5分钟。然后将混合物用EtOAc(30mL×3)萃取且合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥且浓缩以得到标题化合物(400mg，产率：78％)，其为淡黄色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.15(br s，1H)，8.01(s，1H)，7.86(s，1H)，7.43(s，1H)，3.10-3.06(m，3H)，2.69-2.62(m，2H)，1.81-1.77(m，2H)，1.62-1.47(m，2H)。
描述32
5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D32)
向5-氯-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(410mg，1.74mmol)在MeOH/CH2Cl2(2mL/10mL)中的溶液中添加二氢呋喃-3(2H)-酮(300mg，3.48mmol)、AcOH(35mg，0.52mmol)、4A分子筛(0.500g)和NaBH3CN(220mg，3.48mmol)。将反应混合物在室温搅拌2天。LC-MS显示反应完成。反应混合物用水(50mL)淬灭且用CH2Cl2(3x 50mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到所需粗产物，其为黄色固体(540mg)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.76分钟；MS计算值：305.80，MS实测值：306.1[M+H]+。
描述33
顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D33)
向6-((3S,4R)-3-氟哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D20)(200mg，0.86mmol)在MeOH/CH2Cl2(40mL/8mL)中的溶液中添加二氢呋喃-3(2H)-酮(120mg，1.37mmol)、AcOH(12mg，0.2mmol)、4A分子筛(0.5g)和NaBH3CN(90mg，1.37mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜，然后倒入水(50mL)中且用CH2Cl2(2x 50mL)萃取。合并的有机层用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥且过滤。将滤液浓缩以得到所需产物，其为白色固体(180mg，产率：69％)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.72分钟；MS计算值：303.37，MS实测值：304.2[M+H]+。
描述34
顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D34)
标题化合物通过类似于D33所述的步骤制备，起始于MeOH/CH2Cl2中的6-((3S,4R)-3-氟哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D21)、二氢呋喃-3(2H)-酮、AcOH、4A分子筛和NaBH3CN。
描述35:
1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(D35)
向4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(1.50g，4.14mmol)在i-PrOH(12mL)中的溶液中添加3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(616mg，4.97mmol)和TEA(1.25g，12.4mmol)。将反应混合物在室温搅拌5小时，用H2O(30mL)稀释且用EtOAc(30mL x 2)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝1/1)以得到标题化合物(1.2g，92％)，其为白色固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ6.33(s，1H)，4.01-3.99(m，4H)，3.89(s，3H)，2.48(s，1H)，1.64-1.59(m，3H)。
描述36:
4-(1-(6-(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H- 吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D36)
将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.790mmol)、1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(306mg，0.950mmol)、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(224mg，1.58mmol)、CuI(150mg，0.790mmol)和K3PO4(335mg，1.58mmol)在甲苯(3mL)中的混合物在100℃搅拌2小时，然后用EtOAc(30mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝2:1)以得到标题化合物(310mg，77％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A1(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5mL/min]：Rt＝2.647分钟；MS计算值：508，MS实测值：509[M+H]+。
描述37:
1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮 杂环丁烷-3-醇(D37)
向4-(1-(6-(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(310mg，0.610mmol)在MeOH(6mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(6M，3mL)。将混合物在室温搅拌2小时，然后用饱和NaHCO3(30mL)稀释，用DCM(30mLx 2)萃取，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题产物(227mg，91％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A1(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5mL/min.]：Rt＝1.811分钟；MS计算值：408，MS实测值：409[M+H]+。
描述38:
(S)-1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吡咯烷-3-醇(D38)
将4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(550mg，1.52mmol)、(S)-吡咯烷-3-醇盐酸盐(145mg，1.67mmol)和TEA(460mg，4.56mmol)在i-PrOH(12mL)中的溶液在室温搅拌18小时，然后浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝1/1)以得到标题化合物(358mg，73％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.45(s，1H)，4.60(s，1H)，3.89(s，3H)，3.72-3.50(m，5H)，2.10-2.04(m，2H)。
描述39:
(S)-4-(1-(6-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6- 基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D39)
标题化合物通过类似于D36所述的步骤制备，在100℃起始于4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯、(S)-1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吡咯烷-3-醇、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺在甲苯中的混合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)，6.62(s，1H)，4.64(s，1H)，4.32-4.21(br s，2H)，4.15(s，3H)，3.72(b rs，4H)，3.01-2.95(m，1H)，2.87(br s，2H)，2.47(s，3H)，2.16-2.12(m，2H)，1.89-1.86(m，2H)，1.72-1.62(m，2H)，1.60(s，9H)。
描述40:
(S)-1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吡咯 烷-3-醇(D40)
将(S)-4-(1-(6-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(124mg，0.240mmol)在HCl/Et2O(4M，1mL)和MeOH(1mL)中的溶液在室温搅拌过夜，然后浓缩以得到标题产物(99mg，100％)，其为黄色固体。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：2.1x 50mm；Waters ACQUITY UPLC BEH；流动相：B(MeCN)；A(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；流速：0.5mL/min；梯度(B％)，经3分钟]：Rt＝1.37分钟；MS计算值：408，MS实测值：409[M+H]+。
描述41:
(R)-1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吡咯烷-3-醇(D41)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于4,6-二碘代-2-甲基嘧啶，(R)-吡咯烷-3-醇盐酸盐和TEA在i-PrOH中的溶液。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.43(s，1H)，4.60(s，1H)，3.89(s，3H)，3.77-3.36(m，4H)，2.16-2.03(m，2H)，1.77(br s，1H)。
描述42:
(R)-4-(1-(6-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6- 基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D42)
标题化合物通过类似于D36所述的步骤制备，在100℃起始于4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯、(R)-1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吡咯烷-3-醇、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺在甲苯中的混合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.07(s，1H)，7.52(s，1H)，6.62(s，1H)，4.64(s，1H)，4.29-4.25(br s，2H)，4.11(s，3H)，3.77-3.66(m，4H)，2.99-2.95(m，1H)，2.85(brs，2H)，2.47(s，3H)，2.13(br s，2H)，1.89-1.86(m，2H)，1.70-1.65(m，2H)，1.59(s，9H)。
描述43:
(R)-1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吡咯 烷-3-醇(D43)
标题化合物通过类似于D37所述的步骤制备，起始于(R)-4-(1-(6-(3-羟基吡咯烷-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯在HCl/Et2O和MeOH中的溶液。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：2.1x 50mm；Waters ACQUITY UPLC BEH；流动相：B(MeCN)；A(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；流速：0.5mL/min；梯度(B％)，经3分钟.]：Rt＝1.37分钟；MS计算值：408，MS实测值：409[M+H]+。
描述44:
4-苄基-N-甲氧基-N-甲基吗啉-2-甲酰胺(D44)
在室温将4-苄基吗啉-2-甲酸(10.00g，45.25mmol)、4-甲基-吗啉(13.24g，135.8mmol)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(13.24g，135.8mmol)在DCM(250mL)中的混合物用EDCl(26.00g，135.8mmol)处理。将反应混合物在室温搅拌18小时，然后倒入饱和NaHCO3(200mL)溶液中且用DCM(200mL x 2)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题化合物(11.74g，98％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CD3Cl)δ7.32-7.23(m，5H)，4.02-3.99(m，1H)，3.99-3.77(m，2H)，3.68(s，3H)，3.58-3.50(m，2H)，3.17(s，3H)，2.94-2.89(m，1H)，2.68-2.63(m，1H)，2.34-2.19(m，2H)。
描述45:
1-(4-苄基吗啉-2-基)乙酮(D45)
向4-苄基-N-甲氧基-N-甲基吗啉-2-甲酰胺(11.7g，44.5mmol)在THF(300mL)中的溶液中添加CH3MgBr的溶液(45.00mL，133.4mmol，3.0M在醚中)。将反应混合物在0℃搅拌1小时且在室温搅拌5h，然后冷却至0℃且用饱和NH4Cl(200mL)淬灭。将混合物用EtOAc(200mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚:EtOAc＝5:1)以得到标题化合物(5.83g，60％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CD3Cl)δ7.34-7.23(m，5H)，4.01(dd，J＝10.0，2.8HZ，1H)，3.96-3.91(m，1H)，3.72-3.66(m，1H)，3.52(q，J＝13.2HZ，2H)，3.99(td，J＝11.6，4.0HZ，1H)，2.64(td，J＝14.4，2.0HZ，1H)，2.17(s，3H)，2.23-2.15(m，1H)，2.04-1.65(m，1H)。
描述46:
1-(4-苄基吗啉-2-基)乙醇(D46)
在0℃向1-(4-苄基吗啉-2-基)乙酮(5.83g，26.6mmol)在MeOH(60mL)中的溶液中分批添加NaBH4(1.52g，39.9mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后用H2O(80mL)淬灭，浓缩以去除溶剂且用EtOAc(100mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题化合物(5.66g，96％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CD3Cl)δ7.35-7.23(m，5H)，3.92-3.83(m，1H)，3.71-3.66(m，2H)，3.56-3.54(m，3H)，2.80(m，1H)，2.63(d，J＝11.2Hz，1H)，2.62-2.01(m，3H)，1.13(dJ＝6.4Hz，3H)。
描述47:
1-(吗啉-2-基)乙醇盐酸盐(D47)
向1-(4-苄基吗啉-2-基)乙醇(1.44g，6.51mmol)和Pd/C(1.10g)在MeOH(40mL)中的混合物滴加浓HCl(10滴)。反应混合物在室温在H2下搅拌过夜，然后过滤且浓缩以得到标题化合物(900mg，82％)，其为绿色油状物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.85-3.78(m，1H)，3.57-3.07(m，4H)，2.90-2.55(m，3H)，1.06-0.99(m，3H)。
描述48:
1-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇(D48)
向4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(1.07g，2.95mmol)和1-(吗啉-2-基)乙醇盐酸盐(450mg，2.68mmol)在i-PrOH(30mL)中的溶液中添加TEA(814mg，8.06mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜，用水(100mL)稀释且用EtOAc(50mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚:EtOAc＝3/1)以得到标题化合物(800mg，82％)，其为无色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4A c+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟-5-95-POS；流速1.5mL/min，停止时间4min]：Rt＝1.934分钟；MS计算值：365，MS实测值：366[M+H]+。
描述49和50:
1-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇(异构体A，D49和异构体B，D50)
1-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇(D48，800mg)通过手性-HPLC分离以得到几何异构体A(D49，335mg，42％)，其为无色油状物。
手性分离:
方法：柱：Chiralpak IC；5μm 250mm x 4.6mm；相：IC，超临界CO2:EtOH＝70:30；流速：15mL/min，波长：230nm。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ6.62-6.15(m，1H)，4.32-3.82(m，6H)，3.62-3.22(m，2H)，3.04-1.92(m，3H)，1.25-1.22(m，3H)。
手性HPLC[Chiralpak IC 5μm 4.6x 250mm；相：Hex:EtOH＝70:30；流速：1.0mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝8.658分钟。(异构体A)
描述51:
4-(1-(6-(2-(1-羟基乙基)吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6- 基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D51)
标题化合物通过类似于D36所述的步骤制备，在100℃起始于4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯、1-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇(异构体A，D49)、N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4在甲苯中的混合物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)，A1(0.1％FA)；梯度(B％)，经4分钟-5-95-POS；流速：1.5mL/min.]：Rt＝2.752分钟；MS计算值：552，MS实测值：553[M+H]+。
描述52:
1-(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2- 基)乙醇(D52)
将4-(1-(6-(2-(1-羟基乙基)吗啉代)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D51)(140mg，0.25mmol)在HCl(g)/MeOH(2M，2mL)中的混合物在室温搅拌2小时且浓缩。将残余物溶于MeOH(15mL)，用AmberlystA-21树脂(1g)在室温处理0.5小时，过滤且浓缩以得到标题化合物(116mg，100％)，其为无色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A1(0.1％FA)；梯度(B％)，经4分钟-5-95-POS；流速：1.5mL/min]：Rt＝1.884分钟；MS计算值：452，MS实测值：453[M+H]+。
描述53:
6-(1-(3-氘四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D53)
向5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(430mg，2.00mmol)、二氢呋喃-3(2H)-酮(860mg，10.0mmol)在DCM(8mL)中的混合物中添加NaBD3CN(264mg，4.0mmol)和4滴HOAc。将混合物在室温搅拌2小时，过滤且浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物(148mg，26％)，其为黄色固体。
1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.26(s，1H)，7.69(s，1H)，7.43(s，1H)，4.07-3.88(m，4H)，3.79-3.73(m，1H)，3.47-3.44(m，1H)，3.18-3.12(m，1H)，2.89-2.82(m，2H)，2.49(s，3H)，2.36-2.28(m，1H)，2.12-1.87(m，6H)。
1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.30(s，1H)，7.73(s，1H)，7.44(s，1H)，4.21(d，J＝11.2Hz，1H)，4.13–4.07(m，1H)，3.88(d，J＝11.2Hz，1H)，3.76(dd，J＝7.6，16Hz，1H)，3.70(d，J＝12.8Hz，1H)，3.61(d，J＝12.4Hz，1H)，3.35–3.27(m，3H)，2.52(s，3H)，2.46–2.42(m，1H)，2.27–2.18(m，3H)，2.20–1.97(m，2H)
描述54:
1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(D54)
向4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(1.00mg，2.89mmol)、3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(430mg，3.47mmol)在DMSO(12mL)中的溶液中添加TEA(876mg，8.67mmol)。将混合物在60℃搅拌4小时，用H2O(20mL)稀释且用EtOAc(30mLx2)萃取。将合并的有机层过滤且浓缩。残余物通过柱色谱法在硅胶上纯化(石油醚/EtOAc＝1/1)以得到标题化合物(842mg，95％)，其为黄色油状物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ6.49(s，1H)，3.98(s，4H)，2.61(s，1H)，2.45(s，3H)，1.59(s，3H)。
描述55:
3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(D55)
在室温向1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-甲酸(5.00g，24.9mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加HATU(11.4g，29.8mmol)。30分钟后，在室温分别滴加N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(2.40g，24.8mmol)和DIEA(12.8g，99.5mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。TLC显示反应完成。将混合物倒入水(100mL)中且用EtOAc(3x 100mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x 150mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到粗产物，其为淡黄色油状物(6.0g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.13～4.11(m，2H)，4.07～4.02(m，2H)，3.66(s，4H)，3.20(s，3H)，1.47(s，9H)。
描述56:
3-乙酰基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(D56)
在-78℃向3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(6.0g，24.6mmol)在THF(50mL)中的溶液中滴加MeMgBr(3M在THF中，16mL，49.1mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。TLC显示反应完成。然后混合物通过水(100mL)淬灭且用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x 150mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，用PE/EtOAc＝5/1洗脱以得到所需产物，其为无色油状物(3.8g，产率：77％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.06～4.04(m，4H)，4.07～4.02(t，1H)，2.18(s，3H)，1.43(s，9H)。
描述57:
3-(1-羟基乙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(D57)
在室温向3-乙酰基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(3.80g，19.1mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中分三份添加NaBH4(1.40g，38.1mmol)。将混合物在室温搅拌2.0小时。TLC显示反应完成。混合物通过冰-水(100mL)淬灭且用EtOAc(3x 100mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x150mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩至干以得到所需产物，其为无色油状物(3.8g，产率：98％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.94～3.81(m，4H)，3.66～3.62(m，1H)，2.66(s，1H)，2.48(s，1H)，1.43(s，9H)，1.14～1.13(d，J＝6Hz，3H)。
描述58:
1-(氮杂环丁烷-3-基)乙醇(D58)
在室温向3-(1-羟基乙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.30g，11.4mmol)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中添加TFA(20mL)。将混合物在室温搅拌16小时。TLC(PE/EtOAc＝1/1)显示反应完成。将反应混合物浓缩至干以得到产物，其为黄色油状物，将其用于下一步而不用进一步纯化(5.7g)。
描述59:
1-(1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙醇(D59)
向1-(氮杂环丁烷-3-基)乙醇(5.70g，23.5mmol)在异丙醇(60mL)中的溶液中添加4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(4.0mg，11.42mmol)和DIEA(20mL，235.3mmol)。将混合物在室温搅拌16h。LC-MS显示反应完成。将反应混合物浓缩且通过硅胶色谱法纯化，用PE/EtOAc＝10/1～EtOAc洗脱以得到所需产物，其为白色固体(2.2g，产率：61％)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.80分钟；MS计算值：319.14，MS实测值：320.0[M+H]+。
描述60:
3-(2-(甲氧基(甲基)氨基)-2-氧代乙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(D60)
标题化合物通过类似于D55所述的步骤制备，起始于DMF中的2-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸、HATU、N,O-二甲基羟胺盐酸盐和DIEA的溶液。
描述61:
3-(2-氧代丙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(D61)
标题化合物通过类似于D56所述的步骤制备，起始于在-78℃在THF中的3-(2-(甲氧基(甲基)氨基)-2-氧代乙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯和MeMgBr的混合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.09(t，J＝8.4Hz，2H)，3.53-3.50(m，2H)，2.88-2.77(m，3H)，2.14(s，3H)，1.42(s，9H)。
描述62:
3-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(D62)
标题化合物通过类似于D57所述的步骤制备，起始于在0℃MeOH中的3-(2-氧代丙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯和NaBH4的混合物。
描述63:
1-(氮杂环丁烷-3-基)丙-2-醇(D63)
将3-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.980g，4.55mmol)在TFA(5mL)中的溶液在室温搅拌16h。在减压下去除溶剂以得到所需产物，其为淡黄色油状物(0.75g)，将其直接用于下一步而不用纯化。
描述64:
1-(1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)丙-2-醇(D64)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于1-(氮杂环丁烷-3-基)丙-2-醇、4,6-二碘代-2-甲基嘧啶和DIEA在异丙醇中的混合物。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)，以3.0分钟]：纯度：98％@254nm；Rt＝0.76分钟；MS计算值：334.0，MS实测值：334.1[M+H]+。
描述65:
3-(2-(甲氧基(甲基)氨基)-2-氧代乙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(D65)
标题化合物通过类似于D55所述的步骤制备，起始于在DMF中的2-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸、N,O-二甲基羟基-胺盐酸盐、HOBt、EDCl和DIPEA的混合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.14-4.09(m，2H)，3.70(s，3H)，3.62-3.58(m，2H)，3.16(s，3H)，2.95-2.75(m，2H)，1.43(s，9H)。
描述66:
3-(2-氧代丙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(D66)
标题化合物通过类似于D56所述的步骤制备，起始于3-(2-(甲氧基(甲基)氨基)-2-氧代乙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯在THF中的溶液和CH3MgBr。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.12-4.07(m，2H)，3.54-3.50(m，2H)，2.88-2.77(m，3H)，2.14(s，3H)，1.42(s，9H)。
描述67:
3-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(D67)
标题化合物通过类似于D57所述的步骤制备，起始于3-(2-氧代丙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯在MeOH(20mL)中的溶液和NaBH4。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.13-4.03(m，2H)，3.62.3.58(m，2H)，2.69-2.67(m，1H)，1.78-1.73(m，2H)，1.43(s，9H)，1.28-1.18(m，3H)。
描述68:
1-(氮杂环丁烷-3-基)丙-2-醇2,2,2-三氟乙酸盐(D68)
标题化合物通过类似于D58所述的步骤制备，起始于3-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯在DCM中的溶液和CF3COOH。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.21-3.73(m，5H)，1.40-1.25(m，5H)。
描述69:
1-(1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)丙-2-醇(D69)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于1-(氮杂环丁烷-3-基)丙-2-醇2,2,2-三氟乙酸盐、4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶和DIPEA在EtOH/THF中的混合物。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2分钟]：Rt＝1.32分钟；MS计算值：349，MS实测值：350[M+H]+。
描述70
顺式-1-(6-氯-2-甲氧基嘧啶-4-基)-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)- 5-甲基-1H-吲唑(D70)
将顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D33)(69.0mg，0.230mmol)、4,6-二氯-2-甲氧基嘧啶(45.0mg，0.250mmol)和Cs2CO3(225mg，0.690mmol)在DMF(5mL)中的混合物在40℃搅拌过夜，然后倒入水(50mL)中且用EtOAc(30mLx 3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到粗物质，其为黄色固体。(100mg)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.159分钟；MS计算值：445；MS实测值：446[M+H]+。
描述71
顺式-1-(6-氯-2-甲氧基嘧啶-4-基)-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)- 5-甲基-1H-吲唑(D71)
标题化合物通过类似于D70所述的步骤制备，在40℃起始于顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D34)、4,6-二氯-2-甲氧基嘧啶和Cs2CO3在DMF中的混合物。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.149分钟；MS计算值：445；MS实测值：446[M+H]+。
描述72
1-(氮杂环丁烷-3-基氧基)丙-2-醇盐酸盐(D72)
将3-(2-羟基丙氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.00g，4.33mmol)在HCl/MeOH(3M，6mL)中的混合物在室温搅拌2小时且浓缩以得到标题化合物(567mg，100％)，其为黄色油状物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.49-3.90(m，6H)，3.46-3.31(m，2H)，1.28-1.06(m，3H)。
描述73
1-((1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇(D73)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，在60℃起始于4,6-二碘代-2-甲基嘧啶、1-(氮杂环丁烷-3-基氧基)丙-2-醇盐酸盐和TEA在DMSO中的混合物。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ6.49(s，1H)，4.48-4.44(m，1H)，4.26-4.22(m，2H)，4.01-3.94(m，3H)，3.45-3.41(m，1H)，3.27-3.23(m，1H)，2.46(s，3H)，2.32(br s，1H)，1.18(d，J＝6.4MHz，3H)。
描述74和75
1-((1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇(单一未知对映 体1，D74；和单一未知对映体2，D75)
1-((1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇(D73)(756mg，2.16mmol)通过制备型HPLC分离以得到单一未知对映体1(303mg，40％)；和单一未知对映体异构体2(315mg，42％)。
手性制备型HPLC：柱：Chiralpak IC 5μm 20x 150mm；相：超临界CO2:EtOH＝80:20，流速：20mL/min；波长：230nm。
单一未知对映体1(D74)
手性HPLC[柱：Chiralpak IC 250mm x 4.6mm 5um；流动相：Hex：EtOH＝80:20；流速:1mL/min；温度：30℃]：Rt＝9.448分钟。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A1(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5mL/min]：Rt＝1.527分钟；MS计算值：349，MS实测值：350[M+H]+。
单一未知对映体2(D75)
手性HPLC[柱：Chiralpak IC 250mm x 4.6mm 5um；流动相：超临界CO2：EtOH＝80:20；流速：1mL/min；温度：30℃]：Rt＝11.255分钟。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A1(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5mL/min]：Rt＝1.527分钟；MS计算值：349，MS实测值：350[M+H]+。
描述76
4-(1-(6-(3-(2-羟基丙氧基)氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H- 吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D76)
将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(130mg，0.410mmol)、1-((1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇(单一未知对映体1，D74)(172mg，0.49mmol)、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(116mg，0.820mmol)、CuI(78.0mg，0.410mmol)和K3PO4(174mg，0.820mmol)在甲苯(3mL)中的混合物在100℃搅拌2小时。将混合物用EtOAc(30mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝1:1)以得到标题化合物(143mg，65％)，其为黄色油状物。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.76(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.60(s，1H)，4.51-4.48(m，1H)，4.38-4.27(m，4H)，4.15-4.01(m，4H)，3.47-3.44(m，1H)，3.30-3.24(m，1H)，2.97-2.84(m，3H)，2.62(s，3H)，2.47-2.42(m，3H)，2.25(br s，1H)，2.05(s，1H)，1.90-1.86(m，2H)，1.52(s，9H)，1.19(d，J＝6.4MHz，3H)。
描述77
1-((1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁 烷-3-基)氧基)丙-2-醇(D77)
向4-(1-(6-(3-(2-羟基丙氧基)氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D76，143mg，0.270mmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(2mL)。将混合物在室温搅拌2小时，然后浓缩以得到化合物(110mg，94％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A1(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5mL/min]：Rt＝1.744分钟；MS计算值：436，MS实测值：437[M+H]+。
描述78
4-(1-(6-(3-(2-羟基丙氧基)氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H- 吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D78)
标题化合物通过类似于D76所述的步骤制备，在100℃起始于4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯、1-((1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇(单一未知对映体2，D75)、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4在甲苯中的混合物。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.76(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)，6.60(s，1H)，4.51-4.50(m，1H)，4.36-4.32(m，4H)，4.13-4.00(m，4H)，3.47-3.44(m，1H)，3.29-3.24(m，1H)，2.97-2.84(m，3H)，2.60(s，3H)，2.47-2.42(m，3H)，2.24(br s，1H)，2.05(s，1H)，1.90-1.85(m，2H)，1.50(s，9H)，1.20(d，J＝8.4Hz，3H)。
描述79
1-((1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁 烷-3-基)氧基)丙-2-醇(D79)
标题化合物通过类似于D77所述的步骤制备，起始于4-(1-(6-(3-(2-羟基丙氧基)氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D78)在MeOH和HCl/二噁烷中的溶液。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A1(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5mL/min]：Rt＝1.743分钟；MS计算值：436，MS实测值：437[M+H]+。
描述80和81
(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-6-甲基吗啉-2-基)甲醇(D80和D81)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于(6-甲基吗啉-2-基)甲醇和4,6-二碘代-2-甲基嘧啶在异丙醇和DIEA中的溶液。
残余物通过硅胶色谱法纯化，用PE/EtOAc＝5/1洗脱以得到两种所需产物，为白色固体(异构体1，D80：510mg，产率：38％和异构体2，D81：320mg，产率：24％)。
异构体1(D80)
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.240分钟；MS计算值：349.17，MS实测值：350.0[M+H]+
异构体2(D81)
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.166分钟；MS计算值：349.17，MS实测值：350.0[M+H]+。
描述82
(R)-4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(D82)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶和(S)-3-甲基吗啉。
描述83
(S)-4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(D83)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶和(S)-3-甲基吗啉。
描述84
(R)-4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(D84)
向4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(700mg，2.1mmol)和(R)-3-甲基吗啉(280mg，2.77mmol)在异丙醇(10mL)中的混合物中添加DIPEA(1mL)。将反应混合物加热至85℃，搅拌过夜且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，用PE:EtOAc＝20:1～5:1洗脱以得到所需产物，其为无色油状物(420mg，产率：66％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.74(s，1H)，4.26(d，J＝4.0Hz，1H)，3.99(dd，J＝11.6Hz，3.6Hz，2H)，3.78～3.65(m，2H)，3.53(td，J＝11.6Hz，3.2Hz，1H)，3.20(td，J＝13.2Hz，4.0Hz，1H)，2.46(s，3H)，1.28(d，J＝6.8Hz，3H)。
描述85
(S)-4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(D85)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于4,6-二碘代-2-甲基嘧啶和(S)-3-甲基吗啉和DIPEA在异丙醇和THF中的溶液。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.99分钟；MS计算值：319.0，MS实测值：320.2[M+H]+。
描述86
1-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲 唑(D86)
将5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(1.0g,3.5mol)、4,6-二氯-2-甲基嘧啶(570mg，3.5mmol)和Cs2CO3(3.42g，10.5mmol)在DMF(20mL)中的混合物在50℃搅拌5h，然后用水(50mL)稀释且用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机层用水(3x 50mL)、盐水(50mL)洗涤，干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，用EtOAc:MeOH＝1:1洗脱以得到粗产物。粗产物从MeOH/CH2Cl2＝7/1重结晶以得到标题产物，其为白色固体(390mg，27％产率)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10分钟]：Rt＝5.18分钟；MS计算值：411.9，MS实测值：412.2[M+H]+
描述87
4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉(D87)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶和吗啉在Et3N和EtOH中的混合物。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.89分钟；MS计算值：321.0，MS实测值：322.2[M+H]+。
描述88
(E)-((丁-2-烯-1-基氧基)甲基)苯(D88)
在0℃向NaH(4.0g，100mmol)在DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加(E)-丁-2-烯-1-醇(6.0g，85.4mmol)。30分钟后在0℃滴加BnBr(15.6g，91.6mmol)在DMF(10mL)且将反应混合物恢复至室温且搅拌过夜。TLC显示反应完成。反应混合物用水(100mL)稀释且用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机层用水(3x 100mL)和盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到残余物。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(PE:EtOAc＝100:1)以得到标题化合物(12.5g，产率：92.5％)，其为无色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.34～7.27(m，5H)，5.76～5.69(m，1H)，5.66～5.60(m，1H)，4.49(s，2H)，3.96～3.95(m，2H)，1.73～1.71(m，3H)。
描述89
2-((苄基氧基)甲基)-3-甲基氧杂环丙烷(D89)
分三份向(E)-((丁-2-烯-1-基氧基)甲基)苯(12.50g，76.90mmol)在CH2Cl2(100mL)中的溶液中添加m-CPBA(20.00g，115.4mmol)。混合物在室温搅拌过夜。TLC显示反应完成。将反应混合物过滤且滤液用Na2S2O3(2x 50mL)和盐水(100mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(PE)以得到标题化合物(13.2g，产率：96.3％)，其为淡黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.36～7.27(m，5H)，4.62～4.53(m，2H)，3.71～3.67(m，1H)，3.51～3.47(m，2H)，2.92～2.89(m，2H)，1.33～1.32(d，J＝4.8Hz，3H)。
描述90
3-氨基-1-(苄基氧基)丁-2-醇(D90)
向2-((苄基氧基)甲基)-3-甲基氧杂环丙烷(13.0g，72.8mmol)在MeOH(40mL)中的溶液中添加NH3·H2O(25mL)。将反应混合物在95℃搅拌过夜。LC-MS显示反应完成。反应混合物用水(200mL)稀释且用EtOAc(3x 250mL)萃取。合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到粗产物(12g)，其为白色固体。
LC-MS[流动相：从55％水(0.1％FA)和55％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.678分钟；MS计算值：195.13，MS实测值：196.2[M+H]+。
描述91
N-(4-(苄基氧基)-3-羟基丁-2-基)-2-氯乙酰胺(D91)
在0℃向3-氨基-1-(苄基氧基)丁-2-醇(12.0g，61.5mmol)在无水THF(300mL)中的搅拌溶液中添加Et3N(9.50g，93.8mmol)。10分钟后，在0℃添加2-氯乙酰氯(7.00g，61.9mmol)且搅拌10分钟。将反应混合物调节至室温且搅拌2h。LC-MS显示反应完成。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(100mL)淬灭且用EtOAc(3x 100mL)萃取。合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到残余物。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(PE:EtOAc＝5:1～2:1)以得到标题化合物(12.0g，产率：72％)，其为无色油状物。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.010分钟；MS计算值：271.10，MS实测值：272.1[M+H]+。
描述92
顺式-6-((苄基氧基)甲基)-5-甲基吗啉-3-酮(D92)
向N-(4-(苄基氧基)-3-羟基丁-2-基)-2-氯乙酰胺(9.0g，44.3mmol)在t-BuOH(250mL)中的溶液中分三份添加t-BuOK(3.70g，44.3mmol)。在N2下将反应混合物在室温搅拌过夜。LC-MS显示反应完成。反应混合物用水(200mL)稀释且用CH2Cl2(3x 300mL)萃取。合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到残余物。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(PE:EtOAc＝1:1)以得到标题化合物(5.0g，产率：64％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.38～7.30(m，5H)，6.75(m，1H)，4.62～4.49(m，2H)，4.28～4.11(m，2H)，4.01～3.97(m，1H)，3.61～3.52(m，2H)，3.47～3.41(m，1H)，1.17～1.16(m，3H)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.948分钟；MS计算值：235.12，MS实测值：236.2[M+H]+。
描述93
顺式-2-((苄基氧基)甲基)-3-甲基吗啉(D93)
在0℃向顺式-6-((苄基氧基)甲基)-5-甲基吗啉-3-酮(3.20g，13.2mmol)在无水THF(80mL)中的溶液中滴加BH3·THF(40mL，40mmol)。将反应混合物调节至室温且在N2下搅拌过夜。TLC显示反应完成。反应混合物用水(50mL)淬灭且用CH2Cl2(3x 200mL)萃取。合并的有机层用盐水(400mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到残余物。将残余物溶于MeOH(80mL)和HCl(5mL)且在回流搅拌2h。将反应混合物浓缩以得到残余物。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(EtOAc:MeOH＝10:1)以得到标题化合物(2.4g，产率：80％)，其为黄色油状物。
描述94
顺式-(3-甲基吗啉-2-基)甲醇(D94)
向顺式-2-((苄基氧基)甲基)-3-甲基吗啉(2.2g，10mmol)在MeOH(80mL)中的溶液中添加HCl(5mL，5mmol)和Pd/C(200mg)。反应混合物在室温在H2下搅拌过夜。LC-MS显示反应完成。将反应混合物过滤且浓缩以得到粗产物。(1.71g)，其为黄色油状物。
LC-MS[流动相：从95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.322分钟；MS计算值：131.09，MS实测值：132.2[M+H]+。
描述95
(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D95)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶和(R)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐在异丙醇和DIPEA中的溶液。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.92分钟；MS计算值：351.1，MS实测值：352.0[M+H]+。
描述96
(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D96)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶和(S)-吗啉-2-基甲醇盐酸盐在异丙醇和DIPEA中的溶液。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.91分钟；MS计算值：351.1，MS实测值：352.0[M+H]+。
描述97
(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(D97)
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，起始于(S)-吗啉-3-基甲醇盐酸盐和4,6-二碘代-2-甲基嘧啶在EtOH/THF和DIEA中的溶液。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：纯度96％，Rt＝1.400分钟；MS计算值：351.14，MS实测值：351.9[M+H]+。
描述98
(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(D 98 )
标题化合物通过类似于D3所述的步骤制备，在70℃起始于(S)-吗啉-3-基甲醇盐酸盐和4,6-二碘代-2-甲基嘧啶在DMF和DIEA中的溶液。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：纯度98％，Rt＝0.925分钟；MS计算值：351.14，MS实测值：351.9[M+H]+。
描述99
4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
向5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(D9，1.00g，4.64mmol)和Et3N(930mg，9.20mmol)在CH2Cl2(80mL)中的搅拌溶液中添加Boc2O(1.00g，4.60mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h。LC-MS显示反应完成。将混合物浓缩至干且通过硅胶色谱法纯化，用PE:EtOAc＝3:1洗脱以得到所需产物，其为白色固体(900mg，产率：61％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.77(s，1H)，7.89(s，1H)，7.50(s，1H)，7.28(s，1H)，4.12-4.07(m，2H)，3.17(s，1H)，2.94-2.84(m，2H)，2.40(s，3H)，1.77(d，J＝12.0Hz，2H)，1.55-1.47(m，2H)，1.43(s，9H)。
描述100
4-(5-甲基-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸 叔丁酯
在0℃在N2下向4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D99，7.00g，22.2mmol)在THF(100mL)中的溶液中滴加N-环己基-N-甲基环己烷胺(5.60g，28.9mmol)。将反应混合物在0℃搅拌15分钟后，滴加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(4.40g，26.6mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜，用水淬灭且浓缩。残余物用EtOAc(100mL)稀释且用盐水(100mL)洗涤。有机溶液用无水Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(PE:EtOAc＝5:1)以得到标题产物(7.50g，产率：76.0％)，其为无色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.98(s，1H)，7.55(s，1H)，7.48(s，1H)，5.71(s，2H)，4.33～4.29(m，2H)，3.64(t，J＝8.4Hz，2H)，2.91～2.85(m，3H)，2.46(s，3H)，1.90～1.87(m，2H)，1.75～1.62(m，2H)，1.53(s，9H)，0.96(t，J＝8.4Hz，2H)，0.00(s，9H)。
描述101
4-(3-氘-5-甲基-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-吲唑-6-基)哌啶- 1-甲酸叔丁酯
在-65℃在N2下向4-(5-甲基-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D100，7.50g，16.8mmol)在无水THF(80.0mL)中的溶液中添加n-BuLi(1.6M在己烷中，15.8mL，25.2mmol)。将反应混合物在-65℃～-40℃搅拌5h，然后用D2O(2mL)淬灭，用EtOAc(200mL)稀释，用饱和NH4Cl(200mL)和盐水(200mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(PE：EtOAc＝5:1)以得到标题产物(5.40g)，其为黄色油状物。
1H NMR显示得到的油未完全氘化。残余物与n-BuLi反应且用D2O再淬灭一次以得到标题产物(2.5g，产率：33％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.98(s，0.06H)，7.55(s，1H)，7.48(s，1H)，5.71(s，2H)，4.33～4.29(m，2H)，3.64(t，J＝8.0Hz，2H)，2.92～2.85(m，3H)，2.46(s，3H)，1.90～1.87(m，2H)，1.74～1.62(m，2H)，1.53(s，9H)，0.96(t，J＝8.4Hz，2H)，0.00(s，9H)。
描述102
3-氘-5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑
将4-(3-氘-5-甲基-2-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-2H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D101)在HCl(g)/MeOH(15.0mL)中的混合物在35℃搅拌5h，然后浓缩。残余物用EtOAc(30.0mL)稀释且在室温搅拌过夜。所得悬浮液过滤以得到标题产物的HCl盐(950mg)，其为白色固体。将固体3-氘-5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑HCl盐(550mg)溶于MeOH(50.0mL)且添加K2CO3(1.50g)。所得悬浮液在室温搅拌60分钟，用CH2Cl2(300mL)稀释，用盐水(50.0mL x 2)洗涤，用无水Na2SO4干燥且浓缩以得到标题产物(1.10g)，其为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.78(s，1H)，7.89(s，0.01H)，7.49(s，1H)，7.29(s，1H)，4.11(S，1H)，3.07(d，J＝12.4Hz，2H)，2.86～2.80(m，1H)，2.66～2.61(m，2H)，2.38(s，3H)，1.71(d，J＝12.4Hz，2H)，1.57～1.46(m，2H)。
描述103
3-氘-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑
向3-氘-5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(1.00g，4.62mmol)在CH2Cl2(20.0mL)和MeOH(20.0mL)中的溶液中添加二氢呋喃-3(2H)-酮(796mg，9.25mmol)、乙酸(83.0mg，1.39mmol)和分子筛(500mg)，然后添加NaBH3CN(581mg，9.25mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜，用饱和NH4Cl淬灭且过滤。将滤液浓缩且通过硅胶色谱法纯化(CH2Cl2：MeOH＝20:1)以得到标题产物(1.20g，产率：91.0％)，其为淡黄色固体。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％TFA)，经2.0分钟]：Rt＝1.08分钟；MS计算值：286.2，MS实测值：287.2[M+H]+。
描述104和105
(S)-3-氘-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑和(R)-3-氘-5-甲 基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑
化合物5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D103，1.00g，3.49mmol)通过SFC纯化以得到标题产物，其通过已知的手性中间体通过手性HPLC系统鉴定：(S)-3-氘-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(峰1，D104，400mg，产率：40％)，其为白色固体，和(R)-3-氘-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(峰2，D105，350mg，产率：35％)，其为白色固体。
峰1(D104)：(S)-3-氘-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑:
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ10.70(br，1H)，7.95(s，0.02H)，7.52(s，1H)，7.38(s，1H)，4.03～3.93(m，2H)，3.86～3.71(m，2H)，3.21-3.17(m，1H)，3.13～3.05(m，1H)，2.99～2.96(m，1H)，2.88～2.80(m，1H)，2.44(s，3H)，2.31～2.20(m，2H)，2.17～2.08(m，1H)，2.02～1.80(m，5H)。
手性HPLC[方法：柱：OJ，柱尺寸：3×100mm，3um(Daicel)(UPC)。注射：1μl，流动相：CO2/MeOH/DEA：90/10/0.01，流速：2.0mL/min，波长：UV 254nm，温度：35℃]：Rt＝1.749分钟，ee：99.44％
峰2(D105)：(R)-3-氘-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑：
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ10.76(br，1H)，7.95(s，0.02H)，7.52(s，1H)，7.38(s，1H)，4.03～3.93(m，2H)，3.86～3.71(m，2H)，3.21-3.18(m，1H)，3.13～3.06(m，1H)，2.99～2.96(m，1H)，2.88～2.80(m，1H)，2.44(s，3H)，2.31～2.21(m，2H)，2.16～2.08(m，1H)，2.02～1.80(m，5H)。
手性HPLC[方法：柱：OJ，柱尺寸：3×100mm，3μm(Daicel)(UPC)。注射：1μl，流动相：超临界CO2/MeOH/NH3·H2O＝90/10/0.01，流速：2.0mL/min，波长：UV 254nm，温度：35℃]：Rt＝1.507分钟，ee：97.88％
描述106
1-苄基哌啶-2,2,6,6-d4-4-醇
将BnNH2·TFA(9.00g，40.7mmol)在CD2O(20％在D2O中)(10.7mL)中的溶液在室温搅拌10分钟，然后添加烯丙基三甲基硅烷(6.90g，61.1mmol)。将反应混合物在40℃在N2下搅拌过夜，用H2O(10mL)稀释，用K2CO3碱化至pH＝10且用EtOAc萃取三次。合并的有机相用Na2SO4干燥且浓缩。粗产物通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝10/1)以得到标题产物，其为淡黄色油状物(5.40g，产率68.0％)，其直接用于下一步。
描述107
4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4
向1-苄基哌啶-2,2,6,6-d4-4-醇(5.40g，27.7mmol)在EtOAc(100mL)中的混合物中添加(Boc)2O(7.20g，33.2mmol)和Pd/C(600mg)。将反应混合物在室温在H2下搅拌过夜，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(PE/EtOAc＝3/1)以得到标题产物，其为无色油状物(4.30g，产率：75.0％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.86～3.81(m，1H)，1.85～1.81(m，2H)，1.71(br，2H)，1.45(s，9H)。
描述108
4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4
向4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4(6.40g，31.2mmol)在二氯甲烷(DCM)(300mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(19.8g，46.8mmol)。将混合物在室温搅拌2小时，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(PE/EtOAc＝4/1)以得到标题产物，其为浅黄色固体(6.00g，产率：94.0％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.43(s，4H)，1.49(s，9H)。
描述109
4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4
向4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4(270mg，1.33mmol)在THF(8mL)中的溶液中添加1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(521mg，1.46mmol)。将混合物冷却至-78℃且在相同温度滴加LiHMDS(1.00M，1.60mL)。将反应混合物在室温在N2下搅拌过夜，用饱和NH4Cl淬灭，用EtOAc萃取三次，干燥且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(PE/EtOAc＝20/1)以得到标题产物，其为无色油状物(490mg，粗物质)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.74(s，1H)，2.42(s，2H)，1.46(s，9H)。
描述110
5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊 烷-2-基)-1H-吲唑
向6-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(10.0g，33.9mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的溶液中添加4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(10.3g，40.6mmol)、KOAc(10.0g，101.7mmol)和Pd(dppf)Cl2(2.40g，3.40mmol)。将反应混合物在100℃在N2下搅拌2小时。TLC(EtOAc:石油醚＝1:10)显示反应完成。将反应混合物倒入水(400mL)中，用EtOAc(100mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩至干。残余物通过硅胶色谱法纯化(EtOAc：石油醚＝1:20至1:10)以得到标题产物5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑(8.50g，73.3％产率)，其为白色固体。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％T FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.79分钟；MS计算值：342.2；MS实测值：343.2[M+H]+。
描述111
4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸 叔丁酯-2,2,6,6-d4
向4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4(D110，490mg，1.46mmol)在二噁烷(10mL)/H2O(2mL)中的混合物中添加5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑(D6，500mg，1.46mmol)、PdCl2(dppf)(107mg，0.150mmol)和K3PO4(620mg，2.92mmol)。将反应混合物在85℃在N2下搅拌过夜，然后过滤且滤液用EtOAc萃取三次。将合并的有机溶液干燥且浓缩。粗产物通过硅胶柱纯化(PE/EtOAc＝6/1)以得到标题产物，其为白色固体(183mg，产率：34％)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2分钟]：Rt＝1.40分钟；MS计算值：401.2，MS实测值：402.5[M+H]+。
描述112
4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯-2,2,6, 6-d4
向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4(D111，183mg，0.456mmol)在MeOH(10mL)中的混合物中添加Pd/C(20mg)。将混合物在室温在H2下搅拌过夜且过滤。将滤液浓缩以得到标题产物，其为白色固体(180mg，产率：98.0％)，将其制剂用于下一步。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2分钟]：Rt＝1.37分钟；MS计算值：403.2，MS实测值：404.5[M+H]+。
描述113
5-甲基-6-(哌啶-4-基-2,2,6,6-d4)-1H-吲唑
在室温向4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4(D112，180mg，0.450mmol)在DCM(4.00mL)中的溶液中滴加TFA(2.00mL)。将反应混合物在室温搅拌6小时，然后浓缩，溶于MeOH(15mL)，用K2CO3碱化至pH＝8，过滤且浓缩。粗产物通过硅胶柱纯化(DCM/MeOH＝8/1)以得到标题产物，其为淡黄色固体(100mg，产率：97.0％)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2分钟]：Rt＝0.70分钟；MS计算值：219.1，MS实测值：220.4[M+H]+。
描述114
4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d 4
向5-甲基-6-(哌啶-4-基-2,2,6,6-d4)-1H-吲唑(D113，160mg，0.73mmol)在MeOH(20mL)中的混合物中添加NaOH(58.4mg，1.46mmol)在H2O(5mL)中的溶液。然后滴加(Boc)2O(318mg,1.46mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，用EtOAc萃取三次。将合并的有机层干燥且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝3/1)以得到标题产物，其为白色固体(140mg，产率：62.0％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.95(s，1H)，7.52(s，1H)，7.30(s，1H)，2.97～2.91(m，1H)，2.44(s，3H)，1.83～1.79(m，2H)，1.64～1.58(m，2H)，1.51(s，9H)。
描述115
(R)-4-(1-(6-(2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-间-乙基-1H-吲唑- 6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4
在N2下将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4(D114，140mg，0.440mmol)、(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D12，161mg，0.480mmol)、DMEDA(58.0mg，0.660mmol)、CuI(100mg，0.520mmol)和K3PO4(140mg，0.660mmol)在甲苯(10mL)中的混合物在90℃搅拌3小时，然后浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(PE/EtOAc＝2:1)以得到标题产物，其为淡黄色固体(132mg，产率：57.0％)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2分钟]：Rt＝1.78分钟；MS计算值：526.3，MS实测值：527.5[M+H]+。
描述116
(R)-(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基-2,2,6,6-d4)-1H-吲唑-1-基)嘧啶- 4-基)吗啉-2-基)甲醇
在室温向(R)-4-(1-(6-(2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯-2,2,6,6-d4(D115，132mg，0.250mmol)在DCM(3.00mL)中的溶液中滴加TFA(1.00mL)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，浓缩，溶于MeOH，用K2CO3碱化至pH～8，过滤且浓缩。粗产物通过制备型HPLC纯化(Waters 2767，Inertsil ODS-320×250mm，10μM，流动相：MeCN/H2O(10mM NH4HCO3)，从19:81至95:5，流速：20mL/min，254nm)以得到标题产物，其为白色固体(65mg，产率：57％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.33～4.27(m，2H)，4.07～4.04(m，1H)，3.80～3.66(m，4H)，3.15～3.08(m，1H)，2.98～2.92(m，2H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.04(br，1H)，1.84～1.78(m，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2分钟]：Rt＝1.11分钟；MS计算值：426.2，MS实测值：427.5[M+H]+。
描述117
1-(1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙醇
将3-甲基氮杂环丁烷-3-醇2,2,2-三氟乙酸盐(1.70g，8.00mmol)、4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(2.88g，8.00mmol)和DIPEA(2.06g，16.0mmol)在EtOH/THF(10mL/10mL)中的混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(PE:EtOAc＝5:1)以得到标题产物，其为白色固体(1.00g，38.0％产率)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2分钟]：Rt＝1.25分钟；MS计算值：335，MS实测值：336[M+H]+。
描述118
4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉
将4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(1.00g，2.90mol)、吗啉(870mg，10.0mmol)和Et3N(1.00mL)在i-PrOH(20mL)和THF(5mL)中的混合物在40℃搅拌过夜且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(PE:EtOAc＝5:1)以得到标题产物，其为灰白色固体(720mg，82％产率)。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.45分钟；MS计算值：305，MS实测值：306.2[M+H]+。
描述119
(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇
在室温向4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(471mg，1.30mmol)和(R)-吗啉-3-基甲醇盐酸盐(200mg，1.30mmol)在异丙醇(10.0mL)中的溶液中添加DIPEA(504mg，3.90mmol)。将反应混合物在70℃搅拌48h，然后浓缩至干。残余物通过硅胶色谱法纯化，用PE:EtOAc(2:1)洗脱以得到标题产物，其为白色固体(280mg，产率：64％)，将其直接用于下一步。
描述120
(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇
在室温向4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(400mg，1.20mmol)和(S)-吗啉-3-基甲醇盐酸盐(184mg，1.20mmol)在THF/EtOH＝1/1(30.0mL)中的溶液中添加DIEA(465mg，3.60mmol)。将反应混合物在70℃搅拌24h，然后浓缩至干。残余物通过硅胶色谱法纯化，用PE:EtOAc＝1:1洗脱以得到标题产物，其为白色固体(230mg，产率：59％)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.80分钟；MS计算值：335.0，MS实测值：336.0[M+H]+。
描述121
反式-3-((6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氨基)环丁醇
将反式-3-氨基环丁醇盐酸盐(328mg，2.67mmol)、4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(923mg，2.67mmol)和K2CO3(1.10g，8.01mmol)在DMF(20mL)中的混合物在35℃搅拌16小时，然后真空浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(DCM至DCM/MeOH＝20/1)以得到标题产物(690mg，85.0％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.53(s，1H)，5.11-5.07(m，1H)，4.57-4.54(m，1H)，4.19-4.13(m，1H)，3.76-3.69(m，1H)，2.46(s，3H)，2.44-2.39(m，2H)，2.29-2.22(m，2H)。
描述122
4-(1-(6-((反式-3-羟基环丁基)氨基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6- 基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(206mg，0.655mmol)，反式-3-((6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(200mg，0.655mmol)、N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(93.0mg，0.655mmol)、CuI(62.0mg，0.327mmol)和K3PO4(278mg，1.31mmol)在甲苯(4mL)中的混合物在100℃搅拌2小时，然后用EtOAc(60mL)稀释，用水(20mL)、氢氧化铵(2.00mL)和盐水(20.0mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(DCM至DCM/MeOH＝30/1)以得到标题产物(150mg，46％)，其为黄色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.72(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)，6.64(s，1H)，5.20(s，1H)，4.61-4.58(m，1H)，4.33-4.27(m，3H)，3.00-2.86(m，2H)，2.58(s，3H)，2.54-2.42(m，5H)，2.34-2.31(m，2H)，1.93-1.85(m，4H)，1.71-1.64(m，2H)，1.50(s，9H)。
描述123
反式-3-((2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氨基) 环丁醇
向4-(1-(6-((反式-3-羟基环丁基)氨基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(150mg，0.305mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将反应混合物在室温搅拌1小时，用DCM(100mL)稀释且用饱和NaHCO3调节至pH>7。分离的水层用DCM/MeOH＝10/1(60mL x 3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题产物(120mg，100％)，其为黄色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.95(s，1H)，8.28(s，1H)，7.75(s，1H)，7.60(s，1H)，5.16-5.06(m，1H)，4.33-4.06(m，1H)，3.38-3.35(m，2H)，3.15-3.11(m，2H)，2.97-2.90(m，1H)，2.76-2.67(m，2H)，2.49(s，3H)，2.42(s，3H)，2.38-2.36(m，1H)，2.21-2.15(m，4H)，1.79-1.74(m，2H)，1.63-1.55(m，2H)。
描述124
顺式-3-((6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氨基)环丁醇
将顺式-3-((6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(215mg，1.73mmol)、4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(500mg，1.44mmol)和TEA(436mg，4.32mmol)在DMSO(10.0mL)中的混合物在60℃搅拌5小时，然后用H2O(30.0mL)稀释，用EtOAc(30mL x 2)萃取，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(石油醚/EtOAc＝1:1)以得到包含DMSO的标题产物(569mg，100％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.58(s，1H)，5.73(s，1H)，4.09-4.13(m，1H)，3.69-3.49(m，1H)，2.87-2.80(m，2H)，2.42(s，3H)，1.91-1.84(m，2H)。
描述125
4-(1-(6-((顺式-3-羟基环丁基)氨基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6- 基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D99，227mg，0.720mmol)、顺式-3-((6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(220mg，0.720mmol)、N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(102mg，0.720mmol)、CuI(68.0mg，0.360mmol)和K3PO4(305mg，1.44mmol)在甲苯(3.00mL)中的混合物在100℃搅拌3小时，然后用EtOAc(60mL)稀释，用NH3H2O(30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝1:1)以得到标题产物(277mg，78.0％)，其为黄色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac+5％MeCN/水)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝2.426分钟；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+。
描述126
顺式-3-((2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氨基) 环丁醇
向4-(1-(6-((顺式-3-羟基环丁基)氨基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(277mg，0.560mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TFA(1mL)。将混合物在室温搅拌2小时，然后用饱和NaHCO3调节至pH＝9～10，用H2O(30mL)稀释且用DCM(30mL x 2)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题产物(209mg，95％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.08(s，1H)，7.53(s，1H)，6.70(s，1H)，4.17-4.08(m，1H)，3.64-3.60(m，2H)，3.16-3.06(m，4H)，3.00-2.94(m，1H)，2.61(s，3H)，2.46(s，3H)，2.25-2.05(m，7H)，1.98-1.85(m，3H)。
描述127
1-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙酮
在室温向4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(2.1g，6.0mmol)和2-乙酰基吗啉-4-鎓氯化物(1.0g，6.0mmol)在THF/EtOH＝1/1(30mL/30mL)中的溶液中添加DIEA(3.10g，24.0mmol)。将反应混合物在室温搅拌5h且浓缩至干。残余物通过硅胶色谱法纯化，用PE:EtOAc＝10:1洗脱以得到标题产物，其为白色固体(1.50g，产率：71.0％)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.04分钟；MS计算值：347.0，MS实测值：348.0[M+H]+。
描述128
1-(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧 啶-4-基)吗啉-2-基)乙酮
向1-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙酮(1.20g，3.50mmol)和5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(1.00g，3.50mmol)在甲苯(50.0ml)中的搅拌溶液中添加CuI(1.00g，5.30mmol)、K3PO4·3H2O(1.90g，7.00mmol)和N,N’-二甲基乙二胺(617mg，7.00mmol)。将反应混合物在100℃搅拌5h且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，用PE:EtOAc(1:2)洗脱以得到标题产物，其为淡黄色固体(570mg，产率：32.0％)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％T FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.83分钟；MS计算值：504.6，MS实测值：505.3[M+H]+。
描述129
(R)-6-碘-2-甲基-N-(四氢呋喃-3-基)嘧啶-4-胺
向4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(1.99g，5.75mmol)和(R)-四氢呋喃-3-胺(500mg，1.44mmol)在DMSO(15.0mL)中的溶液中添加TEA(1.74g，17.3mmol)。将反应混合物在60℃搅拌过夜，用H2O(60mL)稀释且用EtOAc(100mL x 3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(石油醚/EtOAc＝5/1)以得到标题产物，其为黄色固体。(1.35g，77.0％)
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.64(s，1H)，5.00-4.94(m，1H)，4.42-3.33(m，1H)，3.97-3.84(m，3H)，3.83-3.68(m，1H)，2.48(s，3H)，2.39-2.27(m，1H)，1.89-1.81(m，1H)。
描述130
(R)-4-(5-甲基-1-(2-甲基-6-((四氢呋喃-3-基)氨基)嘧啶-4yl)-1H-吲唑-6- 基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.630mmol)、(R)-6-碘-2-甲基-N-(四氢呋喃-3-基)嘧啶-4-胺(210mg，0.690mmol)、CuI(60.0mg，0.320mmol)、K3PO4(267mg，1.26mmol)和N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(89.0mg，0.630mmol)在甲苯(3.00mL)中的混合物在100℃在N2下搅拌3小时，用EtOAc(50.0mL)稀释，用NH3·H2O(30mL x 3)洗涤。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝1/1)以得到标题产物(295mg，95％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.75(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)，6.77(s，1H)，5.14-5.13(m，1H)，4.44-4.32(m，3H)，4.15-4.10(m，2H)，4.03-3.85(m，1H)，3.77-3.73(m，1H)，3.00-2.83(m，3H)，2.60(s，3H)，2.47(s，3H)，2.05(s，2H)，1.96-1.87(m，4H)，1.51(s，9H)。
描述131
(R)-2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-N-(四氢呋喃-3-基)嘧 啶-4-胺
向(R)-4-(5-甲基-1-(2-甲基-6-((四氢呋喃-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D132，295mg，0.600mmol)在DCM(4.00mL)中的溶液中添加TFA(1.00mL)。将混合物在室温搅拌1小时，用饱和NaHCO3调节至pH>7，用H2O(50mL)稀释且用EtOAc(30mL x 3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题产物(235mg，100％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.82(s，1H)，8.08(s，1H)，7.53(s，1H)，6.77(s，1H)，5.19-5.17(m，1H)，4.45(s，1H)，4.03-3.86(m，3H)，3.77-3.68(m，1H)，3.55-3.49(m，2H)，3.09-3.03(m，3H)，2.61(s，3H)，2.47(s，3H)，2.10-1.92(m，7H)。
描述132
(S)-6-碘-2-甲基-N-(四氢呋喃-3-基)嘧啶-4-胺
标题产物通过类似于D129所述的步骤制备，起始于(S)-四氢呋喃-3-胺、4,6-二碘代-2-甲基嘧啶和TEA在DMSO中的溶液。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac+5％MeCN在水中)；梯度(B％)，经4分钟-5-95-POS；流速1.5mL/min，停止时间4min]：Rt＝1.801分钟]：MS计算值：305，MS实测值：306[M+H]+。
描述133
(S)-4-(5-甲基-1-(2-甲基-6-((四氢呋喃-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-6- 基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
标题产物通过类似于D130所述的步骤制备，起始于4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D99)、(S)-6-碘-2-甲基-N-(四氢呋喃-3-基)嘧啶-4-胺(D132)、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4在甲苯中的混合物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.74(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)，5.13(br s，1H)，4.03-3.88(m，4H)，3.77-3.73(m，1H)，2.97-2.85(m，4H)，2.59(s，3H)，2.47(s，3H)，2.39-2.33(m，2H)，1.94-1.88(m，5H)，1.50(s，9H)。
描述134
(S)-2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-N-(四氢呋喃-3-基)嘧 啶-4-胺
标题产物通过类似于D133所述的步骤制备，起始于(S)-4-(5-甲基-1-(2-甲基-6-((四氢呋喃-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D135)在DCM中的溶液。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)，(0.02％NH4Ac+5％MeCN在水中)；梯度(B％)，经4分钟-10-95-POS；流速1.5mL/min，停止时间4min]：Rt＝1.644分钟；MS计算值：392，MS实测值：393[M+H]+。
描述135
3-(苄基氧基)环丁醇
向3-(苄基氧基)环丁酮(5.00g，28.4mmol)在MeOH(30.0mL)中的混合物中添加NaBH4(3.20g，85.1mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜，用饱和NH4Cl(100mL)稀释且用EtOAc(100mL x 3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题产物(4.98g，98.0％)，其为黄色油状物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.36-7.28(m，5H)，4.41(s，2H)，3.90-3.86(m，1H)，3.65-3.58(m，1H)，2.73-2.67(m，2H)，2.19-2.17(m，1H)，1.96-1.89(m，2H)。
描述136
4-(3-(苄基氧基)环丁氧基)-6-碘-2-甲基嘧啶
向3-(苄基氧基)环丁醇(2.00g，11.0mmol)在THF(16.0mL)中的溶液中添加NaH(560mg，14.0mmol，60.0％在矿物油中)。在0℃1小时后，添加4,6-二碘代-2-甲氧基嘧啶(3.20g，9.30mmol)。反应混合物逐渐调节至室温且搅拌3小时，然后用10滴饱和NH4Cl淬灭且用EtOAc(30mL x 3)萃取。合并的有机层用水(100mL)洗涤且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝5/1)以得到标题产物(2.70g，72.0％)，其为无色油状物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ7.37-7.28(m，5H)，7.00(s，1H)，4.86-4.83(m，1H)，4.44(s，2H)，3.82-3.78(m，1H)，2.89-2.83(m，2H)，2.54(s，3H)，2.19-2.12(m，2H)。
描述137
4-(1-(6-(3-(苄基氧基)环丁氧基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基) 哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D99，945mg，3.00mmol)、4-(3-(苄基氧基)环丁氧基)-6-碘-2-甲基嘧啶(D136,1.30g，3.30mmol)、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(426mg，3.00mmol)、CuI(285mg，1.50mmol)和K3PO4(1.30g，6.00mmol)在甲苯(4.00mL)中的混合物在100℃搅拌2小时，用EtOAc(50mL)稀释且用NH3·H2O(30x 3mL)洗涤。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝1:1)以得到标题产物(1.55g，88.0％)，其为无色油状物。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.72(s，1H)，8.08(s，1H)，7.51(s，1H),7.36-7.35(m，5H)，7.06(s，1H)，4.92-4.87(m，1H)，4.47(s，3H)，4.33(br s，2H)，3.86-3.83(m，1H)，3.01-2.83(m，6H)，2.67(s，3H)，2.47(s，3H)，2.25-2.22(m，2H)，1.89-1.86(m，2H)，1.51(s，9H)。
描述138
1-(6-(3-(苄基氧基)环丁氧基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H- 吲唑
向4-(1-(6-(3-(苄基氧基)环丁氧基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D137，1.55g，2.70mmol)在DCM(6.00mL)中的溶液中添加TFA(4.00mL)。将反应混合物在室温搅拌2小时，用饱和NaHCO3调节至pH>7，用H2O(50mL)稀释且用EtOAc(30mL x 3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题产物(1.28g，100％)，其为无色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac+5％MeCN在水中)；梯度(B％)，以2.5分钟s.70-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝1.59分钟；MS计算值：483，MS实测值：484[M+H]+。
描述139
3-((2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氧基)环丁醇
将1-(6-(3-(苄基氧基)环丁氧基)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(1.28g，2.60mmol)和Pd(OH)2(256mg，20.0％W)在MeOH(50.0mL)中的混合物在50℃在50Psi氢化4天，然后过滤且浓缩以得到标题产物(1.00g，96.0％)，其为白色固体。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac+5％MeCN在水中)；梯度(B％)，经4分钟。05-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝1.671分钟；MS计算值：393，MS实测值：394[M+H]+。
描述140
4-(4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)四氢呋喃-3- 醇
向5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(1.20g，4.01mmol)在DMF(15.0mL)中的溶液中添加Cs2CO3(3.90g，12.0mmol)和3,6-二氧杂双环[3.1.0]己烷(1.38g，16.0mmol)。将反应混合物在80℃搅拌18小时，冷却，用水(150mL)稀释且用EtOAc(40.0mL x 3)萃取。合并的有机溶液用盐水(100mL x 2)洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过色谱法纯化(MeOH/DCM＝1/100～1/10)以得到标题产物，其为黄色固体(660mg，43.0％产率)。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.52分钟；MS计算值：385.24，MS实测值：386.4[M+H]+。
描述141
4-(4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)四氢呋喃-3-醇
向4-(4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)四氢呋喃-3-醇(D140，400mg，1.04mmol)在CH2Cl2(10.0mL)中的溶液中滴加TFA(2.00mL)。反应混合物在室温搅拌过夜，浓缩，用EtOAc(20.0mL)稀释，用饱和NaHCO3(20.0mL x 2)和盐水(20.0mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(CH2Cl2：MeOH＝10:1)以得到标题产物(250mg，产率：80.0％)，其为淡黄色固体。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]：Rt＝3.48分钟；MS计算值：301.2，MS实测值：302.2[M+H]+。
描述142
6-(1-(4-氟四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲 唑:
在-70℃向4-(4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)四氢呋喃-3-醇(600mg，1.57mmol)在DCM(15.0mL)中的溶液中添加DAST(756mg，4.70mmol)。将反应混合物温热至10℃，然后在30℃保持1小时，倒入饱和NaHCO3(50mL)中且用DCM(20mL x3)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥且浓缩。残余物通过色谱法纯化(MeOH/DCM＝1/100～1/30)以得到标题产物(350mg，58％产率)。
LC-MS[流动相：从40％水(0.1％FA)和60％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.25分钟；MS计算值：387.23，MS实测值：388.4[M+H]+。
描述143
6-(1-(4-氟四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑
向6-(1-(4-氟四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(D142，350mg，0.900mmol)在DCM(6.00mL)中的溶液中添加TFA(3.00mL)。将反应混合物在5～10℃搅拌18小时，浓缩，重新溶解于DCM(10mL)，用饱和NaHCO3(30mL)处理且用DCM(15mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥且浓缩以得到粗产物(280mg)，其为黄色固体，将其用于下一步而不用进一步纯化。
描述144
4-(4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)二氢呋喃-3 (2H)-酮
在-65℃在N2下向DMSO(1.50g，19.5mmol)在CH2Cl2(30.0mL)中的溶液中滴加草酰氯(1.20g，9.34mmol)在CH2Cl2(5.00mL)中的溶液。将反应混合物在-65℃～-60℃搅拌20分钟后，滴加4-(4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)四氢呋喃-3-醇(D140，3.00g，7.78mmol)在CH2Cl2(5.00mL)中的溶液。在-60℃～-55℃20分钟后，滴加Et3N(3.90g，38.9mmol)。将反应混合物在-55℃搅拌20分钟，然后用水淬灭，用CH2Cl2(60mL)稀释且用盐水(2×60mL)洗涤。有机层用无水Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(CH2Cl2：MeOH＝80:1)以得到标题产物(2.09g，产率：67.0％)，其为淡黄色固体。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.96分钟；MS计算值：383.2，MS实测值：384.4[M+H]+。
描述145
4-(4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)四氢呋喃-3- 醇
向4-(4-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)二氢呋喃-3(2H)-酮(D144，2.00g，5.22mmol)在MeOH(20.0mL)中的溶液中添加NaBH4(592mg，15.7mmol)。将反应混合物在室温搅拌60分钟，然后用1N HCl水溶液淬灭，用CH2Cl2(100mL)稀释，用饱和NaHCO3(100mL)和盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(CH2Cl2：MeOH＝10:1)以得到标题产物(1.60g，产率：80.0％)，其为白色固体。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.68分钟；MS计算值：385.2，MS实测值：386.5[M+H]+。
描述146
4-氧代四氢呋喃-3-甲酸甲酯
在0℃向NaH(3.30g，85.5mmol)在DMF(5.00mL)中的悬浮液中滴加2-羟基乙酸甲酯(7.50g，85.5mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟后，在0℃滴加丙烯酸甲酯(8.30mL，93.0mmol)。将反应混合物调节至室温且搅拌过夜，用水(200mL)稀释且用EtOAc(200mL x3)萃取。合并的有机层用水(400mL x 3)和盐水(400mL)洗涤，浓缩且通过硅胶柱色谱法纯化(PE:EtOAc＝10:1)以得到标题产物，其为无色油状物(2.20g，18.0产率)。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.78分钟；MS计算值：144.04，MS实测值：145.4[M+H]+。
描述147
3-甲基-4-氧代四氢呋喃-3-甲酸甲酯
在0℃向4-氧代四氢呋喃-3-甲酸甲酯(1.90g，13.2mmol)在DMF(20.0mL)中的溶液中分两份添加NaH(633mg，15.8mmol)。30分钟后在0℃滴加MeI(1.67mL，26.4mmol)。将反应混合物调节至室温且搅拌过夜，用饱和NH4Cl淬灭且用EtOAc(100mL x 3)萃取。合并的有机层用水(150mL x 3)和盐水(150mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩且通过硅胶柱色谱法纯化(PE:EtOAc＝15:1)以得到标题产物，其为无色油状物(750mg，36.1％产率)。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.97分钟；MS计算值：158.06，MS实测值：159.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.62～4.59(d，J＝9.6Hz，1H)，4.16～4.12(d，J＝17.2Hz，1H)，4.04～3.99(d，J＝17.2Hz，1H)，3.97～3.95(d，J＝9.6Hz，1H)，3.76(s，3H)，1.42(s，3H)。
描述148
4-甲基二氢呋喃-3(2H)-酮
将3-甲基-4-氧代四氢呋喃-3-甲酸甲酯(200mg，1.26mmol)在10％H2SO4(5.00mL)中的混合物在100℃搅拌1h，用水(10mL)稀释且用EtOAc(20mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥且浓缩以得到粗产物(150mg)。
描述149
5-甲基-6-(1-(4-甲基四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑
向4-甲基二氢呋喃-3(2H)-酮(150mg，1.50mmol)和5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑(D9，322mg，1.50mmol)在CH2Cl2(20.0mL)和MeOH(5.00mL)中的溶液中添加AcOH(54.0mg，0.900mmol)和NaBH3CN(235mg，3.80mmol)。将反应混合物在45℃搅拌过夜，用水(20.0mL)稀释且用CH2Cl2(20.0mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(30.0mL)洗涤，干燥，浓缩且通过硅胶柱色谱法纯化(PE:EtOAc＝1:5)以得到标题产物，其为白色固体(45.0mg，10.0％产率)
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.65分钟；MS计算值：299.20，MS实测值：300.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ10.11(brs，1H)，7.95(s，1H)，7.52(s，1H)，7.38(s，1H)，4.00～3.94(m，2H)，3.74～3.68(m，2H)，3.13～3.10(m，1H)，2.86～2.77(m，3H)，2.44(s，3H)，2.36～2.32(m，1H)，2.21～2.17(m，1H)，2.10～2.07(m，1H)，1.86～1.81(m，4H)，1.07～1.06(d，J＝6.8Hz，3H)。
描述150
N-(2-羟基乙基)-4-甲基苯磺酰胺
在0℃向2-氨基乙醇(3.52g，57.6mmol)和TEA(13.2g，131mmol)在DCM(250mL)中的溶液中滴加TsCl(10.0g，52.4mmol)在DCM(50mL)中的溶液。反应混合物在室温搅拌过夜且用H2O(200mL)稀释。有机层用1NHCl(150mL)和盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到标题产物(10.0g，89.0％)，其为无色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.76(d，J＝8.0Hz，2H)，7.32(d，J＝7.6Hz，2H)，4.91(t，J＝5.8Hz，1H)，3.70(t，J＝3.6Hz，2H)，3.12-3.08(m，2H)，2.43(s，3H)，1.90(s，1H)。
描述151
N-(2-羟基乙基)-4-甲基-N-(2-甲基烯丙基)苯磺酰胺
将N-(2-羟基乙基)-4-甲基苯磺酰胺(9.00g，41.9mmol)，3-溴-2-甲基丙-1-烯(6.78g，50.2mmol)和K2CO3(11.6g，83.7mmol)在丙酮(100mL)中的混合物回流过夜，用H2O(150mL)稀释且用EtOAc(100mL x 2)萃取。合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩以得到标题产物(10.7g，95％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.72(d，J＝8.4Hz，2H)，7.32(d，J＝8.4Hz，2H)，4.91(d，J＝15.6Hz，2H)，3.73(s，2H)，3.72-3.68(m，2H)，3.20(t，J＝5.6Hz，2H)，2.43(s，3H)，2.28(t，J＝6.0Hz，1H)，1.74(s，3H)。
描述152
N-(2-羟基乙基)-4-甲基-N-((2-甲基氧杂环丙烷-2-基)甲基)苯磺酰胺
在0℃向N-(2-羟基乙基)-4-甲基-N-(2-甲基烯丙基)苯磺酰胺(10.5g，39.0mmol)在DCM(150mL)中的溶液中添加m-CPBA(10.1g，58.6mmol)。将反应混合物在室温搅拌5小时，用饱和Na2SO3(100mL)淬灭且用DCM(100mL x 2)萃取。合并的有机层用饱和Na2CO3(50mL x2)和盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩以得到标题产物(11.1g，100％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.69(d，J＝8.0Hz，2H)，7.33(d，J＝8.0Hz，2H)，3.81-3.71(m，2H)，3.44-3.38(m，2H)，3.29-3.20(m，2H)，3.07-3.01(m，1H)，2.98(d，J＝4.4Hz，1H)，2.72(d，J＝4.4Hz，1H)，2.44(s，3H)，1.40(s，3H)。
描述153
(2-甲基-4-甲苯磺酰基吗啉-2-基)甲醇
在0℃向N-(2-羟基乙基)-4-甲基-N-((2-甲基氧杂环丙烷-2-基)甲基)苯-磺酰胺(11.1g，38.9mmol)在DCM(100mL)中的溶液中滴加BF3·Et2O(6.63g，46.7mmol)。将反应混合物调节至室温且搅拌2小时，然后浓缩且通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝1/1)以得到标题产物(11.1g，100％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.62(d，J＝8.0Hz，2H)，7.34(d，J＝8.0Hz，2H)，3.93-3.87(m，1H)，3.79-3.74(m，1H)，3.58-3.50(m，2H)，3.27-3.22(m，1H)，3.01(d，J＝12.4Hz，1H)，2.78(d，J＝11.2Hz，1H)，2.69-2.62(m，1H)，2.44(s，3H)，1.28(s，3H)。
描述154
(2-甲基吗啉-2-基)甲醇
将(2-甲基-4-甲苯磺酰基吗啉-2-基)甲醇(D153，2.00g，7.02mmol)和Mg粉(3.37g，14.0mmol)在MeOH(100mL)中的混合物声处理3小时，然后过滤且用MeOH(20mL x 2)洗涤。将滤液浓缩以得到标题产物(粗物质，8.00g)，其为白色固体，将其直接用于下一步。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac+5％MeCN在水中)；梯度(B％)，经4分钟。05-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝0.603分钟；MS计算值：131，MS实测值：132[M+H]+。
描述155
(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-2-甲基吗啉-2-基)甲醇
将4,6-二碘代-2-甲基嘧啶(1.54g，6.32mmol)、(2-甲基吗啉-2-基)甲醇(D154，8.00g，粗物质)和TEA(2.13g，21.1mmol)在DMSO(20.0mL)中的混合物在60℃搅拌4小时，用H2O(100mL)稀释且用EtOAc(50mL x 3)萃取。合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝5/1至2/1)以得到标题产物(1.00g，45.0％产率，两步)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.78(s，1H)，3.83-3.79(m，2H)，3.76-3.66(m，2H)，3.58(d，J＝11.6Hz，1H)，3.50-3.46(m，2H)，3.43-3.37(m，1H)，2.46(s，3H)，1.22(s，3H)。
描述156
4-(1-(6-(2-(羟基甲基)-2-甲基吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑- 6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D99，904mg，2.87mmol)、(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-2-甲基吗啉-2-基)甲醇(D155，1.00g，2.87mmol)、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(80.0mg，0.570mmol)、CuI(55.0mg，0.290mmol)和K3PO4(1.21g，5.73mmol)在甲苯(10mL)中的混合物在100℃搅拌4小时，用EtOAc(100mL)稀释，用NH3·H2O(30mL x 2)和盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(石油醚/EtOAc＝1/1)以得到标题产物(1.10g，71.0％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.51(s，1H)，6.93(s，1H)，4.35-4.29(m，1H)，4.00(d，J＝12.4Hz，1H)，3.86-3.78(m，3H)，3.64-3.58(m，2H)，3.49-3.44(m，2H)，3.02-2.85(m，3H)，2.61(s，3H)，2.47(s，3H)，1.89-1.64(m，5H)，1.50(s，9H)，1.27(s，3H)。
描述157
(2-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗 啉-2-基)甲醇
在0℃向4-(1-(6-(2-(羟基甲基)-2-甲基吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(D156，1.10g，1.87mmol)在DCM(8.00mL)中的溶液中添加TFA(4.00mL)。将反应混合物在室温搅拌1小时，倒入饱和Na2CO3(30.0mL)中且用DCM(50.0mL x 3)萃取。将合并的有机层浓缩且通过硅胶色谱柱纯化(DCM/MeOH＝15/1)以得到标题产物(700mg，86.0％)，其为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)，6.94(s，1H)，4.00(d，J＝10.8Hz，1H)，3.85-3.78(m，3H)，3.63(d，J＝11.7Hz，2H)，3.49-3.44(m，2H)，3.34(d，J＝12.4Hz，2H)，3.01-2.95(m，1H)，2.92-2.85(m，2H)，2.61(s，3H)，2.47(s，3H)，1.94-1.83(m，4H)，1.27(s，3H)。
描述158
5-溴-2,4-二甲基苯胺
向剧烈搅拌的1-溴-2,4-二甲基-5-硝基苯(540g，2.35mol)在THF(4L)中的溶液中添加Fe粉(1600g，17.9mol)和浓HCl(500ml)。将反应混合物在室温搅拌4小时，然后用K2CO3淬灭且过滤。滤饼用EtOAc洗涤。将有机溶液合并且用Na2SO4干燥且浓缩以得到标题产物(粗物质，457g，产率：97.3％)，其为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.88(s，1H)，6.85(s，1H)，3.49(s，2H)，2.25(s，3H)，2.07(s，3H)。
实施例1和2
((2S)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，E1；和单一未知异构体2，E2)
向5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(150mg，0.526mmol)、(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(178mg，0.531mmol)、CuI(101mg，0.53mmol)和K3PO4(225mg，1.06mmol)在无水甲苯(4mL)中的混合物中添加N,N'-二甲基乙二胺(93mg，1.06mmol)。悬浮液用Ar脱气且在95℃回流4小时。TLC显示反应完成。将冷却的反应混合物过滤且滤饼用CH2Cl2洗涤。将合并的将滤液浓缩且残余物通过柱色谱纯化(洗脱液：PE:EtOAc＝1:1，然后是CH2Cl2:MeOH＝50:1至25:1)以得到所需混合物，其为黄色固体(144mg，产率：55％)。
LC-MS[流动相：从95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12.0分钟]：Rt＝5.74分钟；MS计算值：492.28；MS实测值：493.7[M+H]+。
通过手性制备型HPLC手性分离外消旋((2S)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.x 15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液)得到标题产物(单一未知异构体1)，其为黄色固体(71.19mg，产率：49％)，和另一异构体(单一未知异构体2)，其为黄色固体(74.34mg，产率：51％)。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.94(s，1H)，4.31-4.29(m，2H)，4.06(d，J＝5.2Hz，1H)，4.00-3.93(m，2H)，3.84-3.68(m，6H)，3.22-2.82(m，6H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.29-2.10(m，3H)，2.01-1.94(m，5H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：纯度98％；Rt＝5.40分钟；MS计算值：492.28，MS实测值：493.8[M+H]+。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.32-4.29(m，2H)，4.06(d，J＝5.2Hz，1H)，4.00-3.95(m，2H)，3.84-3.68(m，6H)，3.22-2.82(m，6H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.29-2.10(m，4H)，2.01-1.93(m，5H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：Rt＝5.40分钟；MS计算值：492.28，MS实测值：493.9[M+H]+。
实施例3和4
((2R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，E3；和单一未知异构体2，E4)
向5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(150mg，0.526mmol)、(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(178mg，0.530mmol)、CuI(101mg，0.530mmol)和K3PO4(225mg，1.06mmol)在无水甲苯(4mL)中的混合物中添加N,N'-二甲基乙二胺(93.0mg，1.06mmol)。悬浮液用Ar脱气且在95℃回流3.5小时。将冷却的反应混合物过滤且滤饼用CH2Cl2洗涤。将合并的将滤液浓缩且通过柱色谱法纯化(PE:EtOAc＝1:1，然后是CH2Cl2:MeOH＝50:1至25:1)以得到混合物，其为黄色固体，其为手性混合物(134mg，产率：51％)。
LC-MS[流动相：从95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12.0分钟]：Rt＝5.76分钟；MS计算值：492.28；MS实测值：493.8[M+H]+。
混合物(134mg)通过HPLC分析(方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.X 15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:ETOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃；样品溶液：X mg/ml在ETOH中)且通过手性制备型HPLC分离(柱：ChiralPak AD-H Daicelchemical Industries，Ltd，250x 30mm I.D.，5μm；流动相A：超临界CO2，流动相B：乙醇(0.1％NH3H2O)；A:B＝60:40，在50mL/min；柱温：38℃；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温度：25℃；波长：220nm)以得到单一未知异构体1，其为棕色固体(61.6mg，产率：45％)，；和单一未知异构体2，其为棕色固体(59.4mg，产率：44％)。
单一异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.94(s，1H)，4.31-4.29(m，2H)，4.06(d，J＝5.2Hz，1H)，4.00-3.93(m，2H)，3.84-3.68(m，6H)，3.22-2.82(m，6H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.29-2.10(m，3H)，2.01-1.94(m，5H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：纯度98％；Rt＝5.40分钟；MS计算值：492.28，MS实测值：493.8[M+H]+。
手性HPLC[柱：OD 4.6x 250mm，5μm(Daicel)(CA-HPLC-182)，流动相：己烷/EtOH(0.2％DEA)＝90/10，流速：1mL/min，温度：35℃]：Rt＝27.170分钟，纯度：100％。
进一步的分析表征异构体1的结构为((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((R)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇。
单一异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.32-4.29(m，2H)，4.06(d，J＝5.2Hz，1H)，4.00-3.95(m，2H)，3.84-3.68(m，6H)，3.22-2.82(m，6H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.29-2.10(m，4H)，2.01-1.93(m，5H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：纯度96％；Rt＝4.32分钟；MS计算值：492.28，MS实测值：493.6[M+H]+。
手性HPLC[柱：OD 4.6x 250mm，5μm(Daicel)(CA-HPLC-182)，流动相：己烷/EtOH(0.2％DEA)＝90/10，流速：1mL/min，温度：35℃]：Rt＝25.022分钟，纯度：100％。
进一步的分析表征异构体2的结构为((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇。
实施例5和6
顺式-1-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(单一未知异构体1，E5；和单一未知异构体2，E6)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D34)和1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N'-二甲基乙二胺。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.86(s，1H)，8.07(s，1H)，7.53(s，1H)，6.47(s，1H)，4.88～4.75(m，2H)，4.44～4.39(m，2H)，4.11(s，3H)，4.02～3.92(m，3H)，3.90～3.88(m，1H)，3.82～3.80(m，1H)，3.69～3.60(m，1H)，3.44～3.40(m，1H)，3.17～3.08(m，2H)，2.82～2.79(m，1H)，2.47(s，3H)，2.25～2.19(m，3H)，2.11～2.05(m，1H)，1.95～1.91(m，2H)，1.89～1.77(m，1H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ301.70(s)
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.76分钟；MS计算值：482.55，MS实测值：483.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：1.712分钟，ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.86(s，1H)，8.07(s，1H)，7.53(s，1H)，6.47(s，1H)，4.86～4.73(m，2H)，4.43～4.39(m，2H)，4.11(s，3H)，4.03～3.97(m，3H)，3.90～3.88(m，1H)，3.81～3.77(m，1H)，3.72～3.68(m，1H)，3.24～3.15(m，2H)，3.10～3.08(m，1H)，3.02～2.99(m，1H)，2.47(s，3H)，2.23～2.17(m，3H)，2.15～2.07(m，1H)，1.98～1.93(m，2H)，1.89～1.79(m，1H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ301.80(s)
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和0％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.74分钟；MS计算值：482.55，MS实测值：483.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：2.542分钟，ee：100％
实施例7和8
顺式-1-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(单一未知异构体1，E7；和单一未知异构体1，E8)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D33)、1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N'-二甲基乙二胺。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：超临界CO2::EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.75(s，1H)，8.19(s，1H)，7.67(s，1H)，6.51(s，1H)，5.15～5.11(m，2H)，4.71～4.68(m，2H)，4.38～4.36(m，2H)，4.29～4.27(m，1H)，4.12(br，2H)，4.07(s，3H)，3.93～3.90(m，4H)，3.88～3.86(m，1H)，3.78～3.75(m，2H)，3.37～3.35(m，1H)，2.65(s，3H)，2.52～2.47(m，1H)，2.46～2.44(m，2H)，2.04～2.00(m，1H)。
19F NMR(376MHz，MeOD)δ77.06(s)，185(s)，TFA盐
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]：Rt＝4.89分钟；MS计算值：482.55，MS实测值：483.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：1.913分钟，ee 100％。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.71(s，1H)，8.19(s，1H)，7.66(s，1H)，6.49(s，1H)，5.14～5.01(m，2H)，4.88～4.86(m，2H)，4.38～4.36(m，2H)，4.35～4.30(m，1H)，4.27～4.12(m，2H)，4.09(s，3H)，3.93～3.85(m，4H)，3.77～3.75(m，1H)，3.60～3.57(m，2H)，3.40～3.37(m，1H)，2.52(s，3H)，2.47～2.45(m，1H)，2.34～2.30(m，2H)，2.05～2.01(m，1H)。
19F NMR(376MHz，MeOD)δ77.12(s)，185(s)，TFA盐
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和0％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]：Rt＝4.26分钟；MS计算值：482.55，MS实测值：483.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：3.046分钟，ee99％
实施例9和10
1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(单一未知对映体1，E9；和单一未知对映体2，E10)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在90℃起始于5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑和-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇在甲苯/THF中的溶液、DMEDA、CuI和K3PO4。
手性分离:
方法：AD-H，0.46cm I.D.×15cm L，流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝60:40，流速：0.5mL/min，254nm，温度：25℃
单一未知对映体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，δ8.06(s，1H)，δ7.50(s，1H)，δ6.47(s，1H)，δ4.84(s，1H)，δ4.41～4.39(m，2H)，δ4.12(s，3H)，δ4.02～3.92(m，4H)，δ3.81～3.70(m，1H)，δ3.68～3.64(m，1H)，δ3.15～3.12(d，J＝12.8Hz，1H)，δ3.06～3.02(m，1H)，δ2.97～2.97(d，J＝6.4Hz，1H)，δ2.83～2.80(m，1H)，δ2.45(s，3H)，δ2.24～2.21(m，2H)，δ2.08～2.05(m，1H)，δ1.90～1.84(m，6H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度100％，Rt＝4.44分钟；MS计算值：464.5，MS实测值：465.3[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D.×15cm L，流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，254nm，温度：25℃]：Rt＝1.345分钟，ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，δ8.06(s，1H)，δ7.50(s，1H)，δ6.47(s，1H)，δ4.83(s，1H)，δ4.44～4.40(m，2H)，δ4.12(s，3H)，δ4.02～3.91(m，4H)，δ3.83～3.81(m，1H)，δ3.71～3.66(m，1H)，δ3.15～3.13(d，J＝12.8Hz，1H)，δ3.03～3.01(m，1H)，δ2.93～2.91(d，J＝6.4Hz，1H)，δ2.83～2.81(m，1H)，δ2.46(s，3H)，δ2.24～2.18(m，2H)，δ2.08～2.06(m，1H)，δ1.93～1.81(m，6H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度100％，Rt＝4.42分钟；MS计算值：464.5，MS实测值：465.3[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D.×15cm L，流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃]：Rt＝2.193分钟，ee：100％
实施例11和12
1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(单一未知对映体1，E11；和单一未知对映体2，E12)
向1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(227mg，0.560mmol)、二氢呋喃-3(2H)-酮(239mg，2.78mmol)和AcOH(1滴)在DCE(8mL)中的溶液中添加NaBH3CN(70.0mg，1.11mmol)。将混合物在室温搅拌20小时，然后用饱和NaHCO3溶液(3滴)淬灭且浓缩。通过硅胶色谱柱纯化(DCM/MeOH＝15:1)得到标题化合物(127mg，47％)，其为白色固体。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.63(s，1H)，8.33(s，1H)，7.66(s，1H)，6.44(s，1H)，5.76(s，1H)，4.11-4.09(m，1H)，4.00-3.89(m，10H)，3.80-3.78(m，2H)，3.67-3.65(m，1H)，3.17(s，3H)，2.45-2.33(m，6H)，1.91(s，2H)，1.45(s，4H)。
手性分离
方法：柱：Chiralpak IF；5μm 20x 150mm；相：超临界CO2:EtOH＝70:30；流速:12mL/min，波长：230nm。
单一未知对映体1：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.72(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.45(s，1H)，4.43(br s，1H)，4.07(s，6H)，3.99-3.90(m，2H)，3.85-3.79(m，1H)，3.72(t，J＝7.6Hz，1H)，3.48(s，1H)，3.18-3.15(m，1H)，3.08-3.05(m，1H)，2.96-2.93(m，1H)，2.86-2.81(m，1H)，2.44(s，3H)，2.27-2.21(m，2H)，2.14-2.07(m，1H)，1.98-1.89(m，5H)，1.61(s，3H)。
手性HPLC[柱：Chiralpak IF，5μm 250mm x 4.6mm；流动相：Hex:EtOH＝70:30；流速：1mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝11.319分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4AC)；梯度(B％)]：Rt＝3.477分钟，MS计算值：478，MS实测值：479[M+H]+。
单一未知对映体2：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.71(s，1H)，8.04(s，1H)，7.48(s，1H)，6.44(s，1H)，4.45(br s，1H)，4.07(s，6H)，4.01-3.90(m，2H)，3.85-3.79(m，1H)，3.71(t，J＝8.0Hz，1H)，3.48(s，1H)，3.17-3.14(m，1H)，3.07-3.04(m，1H)，2.95-2.92(m，1H)，2.84-2.78(m，1H)，2.44(s，3H)，2.28-2.21(m，2H)，2.12-2.07(m，1H)，1.96-1.82(m，5H)，1.60(s，3H)。
手性HPLC[柱：Chiralpak IF，5μm 250mm x 4.6mm；流动相：Hex:EtOH＝70:30；流速：1mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝14.219分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4AC)；梯度(B％)]：Rt＝3.489分钟，MS计算值：478，MS实测值：479[M+H]+。
实施例13和14
顺式-1-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(单一未知异构体1，E13；和单一未知异构体2，E14)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D33)，1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N'-二甲基乙二胺。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；在EtOH中的样品
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.89(s，1H)，8.06(s，1H)，7.52(s，1H)，6.59(s，1H)，4.94～4.79(m，2H)，4.43～4.39(m，2H)，4.02～3.99(m，3H)，3.94～3.91(m，1H)，3.84～3.80(m，1H)，3.77～3.73(m，1H)，3.28～3.26(m，1H)，3.20～3.17(m，1H)，3.10～3.04(m，2H)，2.63(s，3H)，2.47(s，3H)，2.33～2.29(m，1H)，2.21～2.18(m,2H)，2.10～2.09(m,1H)，1.99～1.86(m，3H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ183.29(s)
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度100％；Rt＝2.80分钟；MS计算值：466.5，MS实测值：467.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：4.807分钟，ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.89(s，1H)，8.06(s，1H)，7.52(s，1H)，6.59(s，1H)，4.93～4.81(m，2H)，4.42～4.40(m，2H)，4.01～3.98(m，3H)，3.94～3.91(m，1H)，3.83～3.81(m，1H)，3.75～3.71(m，1H)，3.48～3.46(m，1H)，3.18～3.15(m，2H)，2.87～2.84(m，1H)，2.63(s，3H)，2.47(s，3H)，2.28～2.27(m，1H)，2.26～2.24(m,2H)，2.12～2.10(m,1H)，1.97～1.88(m，3H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ183.29(s)
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10分钟]：纯度100％；Rt＝2.82分钟；MS计算值：466.5，MS实测值：467.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.138分钟，ee：100％
实施例15和16
顺式-1-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(单一未知异构体3，E15；和单一未知异构体4，E16)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D34)和1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基乙二胺。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.88(s，1H)，8.06(s，1H)，7.52(s，1H)，6.59(s，1H)，4.93～4.76(m，2H)，4.42～4.38(m，2H)，4.00～3.98(m，3H)，3.92～3.90(m，1H)，3.83～3.81(m，1H)，3.75～3.72(m，1H)，3.46(m，1H)，3.16～3.07(m，2H)，2.84～2.82(m，2H)，2.63(s，3H)，2.47(s，3H)，2.28～2.24(m，2H)，2.19～2.09(m,1H)，1.96～1.85(m，3H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ183.18(s)
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度98％；Rt＝2.89分钟；MS计算值：466.5，MS实测值：467.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：2.261分钟，ee：100％
单一未知异构体4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.89(s，1H)，8.06(s，1H)，7.52(s，1H)，6.59(s，1H)，4.94～4.79(m，2H)，4.43～4.39(m，2H)，4.00～3.97(m，3H)，3.94～3.90(m，1H)，3.82～3.80(m，1H)，3.75～3.73(m，1H)，3.28～3.26(m，1H)，3.20～3.17(m，1H)，3.10～3.06(m，2H)，2.63(s，3H)，2.47(s，3H)，2.34～2.26(m，1H)，2.25～2.18(m,2H)，2.12～2.05(m，1H)，1.97～1.89(m，3H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ183.18(s)
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度98％；Rt＝2.94分钟；MS计算值：466.5，MS实测值：467.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：3.538分钟，ee：100％
实施例17和18:
(3S)-1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-3-醇(单一未知异构体1，E17；和单一未知异构体2，E18)
标题化合物通过类似于E11和E12所述的步骤制备，在室温起始于(S)-1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-3-醇、二氢呋喃-3(2H)-酮、NaBH3CN和AcOH在DCM中的混合物。
手性分离:
方法：柱：Chiralpak ID；5μm 250mm x 4.6mm；相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝50:50；10mL/min，214nm。
单一未知异构体1:
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.76(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.61(s，1H)，4.64(s，1H)，4.13(s，3H)，4.01-3.92(m，2H)，3.86-3.67(m，5H)，3.17-3.13(m，1H)，3.05-3.01(m，1H)，2.95-2.92(m，1H)，2.86-2.80(m，1H)，2.46(s，3H)，2.28-2.06(m，5H)，1.96-1.83(m，5H),1.71(s，1H)。
手性HPLC[Chiralpak ID 5um，4.6x 250mm；相：Hex:EtOH:DEA＝70:30:0.2；流速：1.0mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝9.793分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝3.891分钟，MS计算值：478，MS实测值：479[M+H]+。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.76(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)，6.62(s，1H)，4.64(s，1H)，4.13(s，3H)，3.99-3.92(m，2H)，3.86-3.67(m，5H)，3.17-3.15(m，1H)，3.03-3.02(m，1H)，2.95-2.93(m，1H)，2.86-2.80(m，1H)，2.46(s，3H)，2.25-2.07(m，5H)，1.94-1.83(m，5H),1.66(s，1H)。
手性HPLC(Chiralpak ID 5μm，4.6x 250mm；相：Hex:EtOH:DEA＝70:30:0.2；流速：1.0mL/min；波长：230nm；温度：30℃)：Rt＝14.573分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝4.004分钟，MS计算值：478，MS实测值：479[M+H]+。
实施例19和20:
(3R)-1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-3-醇(单一未知异构体1，E19；和单一未知异构体2，E20)
标题化合物通过类似于E11和E12所述的步骤制备，在室温起始于在DCM中的(R)-1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-3-醇、二氢呋喃-3(2H)-酮、NaBH3CN和AcOH(2滴)。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟-5-95-POS；流速1.5mL/min，停止时间4min]：Rt＝2.126分钟；MS计算值：478，MS实测值：479[M+H]+。
手性分离：
方法：柱：Chiralpak ID；5μm 250mm x 4.6mm；相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝50:50；10mL/min，254nm。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.76(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.61(s，1H)，4.63(s，1H)，4.12(s，3H)，4.01-3.92(m，2H)，3.86-3.66(m，5H)，3.17-3.14(m，1H)，3.05-3.01(m，1H)，2.94-2.92(m，1H)，2.85-2.80(m，1H)，2.46(s，3H)，2.28-2.06(m，5H)，1.96-1.83(m，6H)。
手性HPLC[Chiralpak ID 5μm 4.6x 250mm；相：Hex：EtOH：DEA＝50:50:0.2；流速：1.0mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝9.793分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝4.012分钟，MS计算值：478，MS实测值：479[M+H]+。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.76(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.61(s，1H)，4.64(s，1H)，4.13(s，3H)，4.13-3.92(m，2H)，3.86-3.67(m，5H)，3.17-3.14(m，1H)，3.05-3.02(m，1H)，2.95-2.92(m，1H)，2.84-2.81(m，1H)，2.46(s，3H)，2.28-2.08(m，5H)，2.06-2.86(m，5H),1.72(s，1H)。
手性HPLC[Chiralpak ID 5um 4.6x 250mm；相：Hex：EtOH：DEA＝50:50:0.2；流速：1.0mL/min；波长：230nm；温度：30℃)]：Rt＝14.573分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝2.349分钟，MS计算值：478，MS实测值：479[M+H]+。
实施例21、22、23和24
1-(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇(单一未知异构体1，E21；单一未知异构体2，E22；单一未知异构体3，E23；单一未知异构体4，E24)
标题化合物通过类似于E11和E12所述的步骤制备，起始于1-(4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇、二氢呋喃-3(2H)-酮、NaBH3CN在DCM和AcOH中的溶液。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)，6.85(s，1H)，4.40-4.24(m，2H)，4.13(s，3H)，4.06-3.67(m，7H)，3.46-3.41(m，1H)，3.27-2.83(m，6H)，2.46(s，3H)，2.34-1.93(m，8H)，1.29(d，J＝8.4Hz，3H)。
手性分离:
方法：CHIRALPAK IA-3 5cm I.D.x 25cm L；相：EtOH/NH3H2O＝100/0.1(V/V)；流速：60mL/min；波长：254nm；温度：35℃
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)，6.85(s，1H)，4.38-4.23(m，2H)，4.13(s，3H)，4.05-3.83(m，4H)，3.71-3.65(m，3H)，3.46-3.42(m，1H)，3.18-2.80(m，6H)，2.46(s，3H)，2.33-2.27(m，2H)，2.05-1.96(m，2H)，1.90-1.79(m，5H)，1.28(d，J＝6.4Hz，3H)。
手性HPLC[CHIRALPAK IA-3 0.46cm I.D.x 25cm L；相：EtOH/DEA＝100/0.1(V/V)；流速：0.3mL/min；波长：254nm；温度：35℃]：Rt＝17.973分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝4.237分钟，MS计算值：522，MS实测值：523[M+H]+。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)，6.85(s，1H)，4.35-4.23(m，2H)，4.12(s，3H)，4.04-3.92(m，4H)，3.85-3.79(m，1H)，3.72-3.65(m，2H)，3.46-3.42(m，1H)，3.18-2.80(m，6H)，2.46(s，3H)，2.32-2.10(m，2H)，2.04-2.02(m，2H)，1.92-1.82(m，5H)，1.28(d，J＝6.8Hz，3H)。
手性HPLC[CHIRALPAK IA-3 0.46cm I.D.x 25cm L；相：EtOH/DEA＝100/0.1(V/V)；流速：0.3mL/min；波长：254nm；温度：35℃]：Rt＝19.116分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝3.637分钟，MS计算值：522，MS实测值：523[M+H]+。
单一未知异构体3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)，6.85(s，1H)，4.38-4.23(m，2H)，4.12(s，3H)，4.04-3.92(m，4H)，3.85-3.79(m，1H)，3.72-3.65(m，2H)，3.46-3.42(m，1H)，3.16-2.80(m，6H)，2.46(s，3H)，2.29-2.03(m，4H)，1.94-1.80(m，5H)，1.28(d，J＝6.4Hz,3H)。
手性HPLC[CHIRALPAK IA-3 0.46cm I.D.x 25cm L；相：EtOH/DEA＝100/0.1(V/V)；流速：0.3mL/min；波长：254nm；温度：35℃]：Rt＝23.611分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝3.648分钟，MS计算值：522，MS实测值：523[M+H]+。
单一未知异构体4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)，6.85(s，1H)，4.38-4.23(m，2H)，4.12(s，3H)，4.08-3.92(m，4H)，3.85-3.79(m，1H)，3.71-3.65(m，2H)，3.46-3.42(m，1H)，3.19-2.80(m，6H)，2.46(s，3H)，2.30-2.04(m，4H)，2.00-1.80(m，5H)，1.28(d，J＝6.4Hz，3H)。
手性HPLC[CHIRALPAK IA-3 0.46cm I.D.x 25cm L；相：EtOH/DEA＝100/0.1(V/V)；流速：0.3mL/min；波长：254nm；温度：35℃]：Rt＝25.808分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝3.647分钟，MS计算值：522，MS实测值：523[M+H]+。
实施例25和26
((2S)-4-(6-(5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，E25；和单一未知异构体2，E26)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑、(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4在甲苯中的混合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.16(s，1H)，7.81(s，1H)，7.04(s，1H)，4.40-4.27(m，3H)，4.14-4.09(m，3H)，3.87-3.63(m，6H)，3.42-3.39(m，1H)，3.30-3.25(m，1H)，3.17-3.11(m，1H)，3.04-2.96(m，2H)，2.73(s，3H)，2.41-2.23(m，6H)。
手性分离：
方法：柱：Chiralpak ID；5μm 20x 150mm；相：超临界CO2:EtOH＝70:30，流速：12mL/min；波长：230nm。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.90(s，1H)，8.07(s，1H)，7.74(s，1H)，6.95(s，1H)，4.34-4.25(m，2H)，4.10-3.93(m，3H)，3.86-3.64(m，6H)，3.23-2.92(m，6H)，2.63(s，3H)，2.25-2.21(m，2H)，2.17-2.09(m，4H)，1.99-1.95(m，3H)。
手性HPLC[柱：Chiralpak IF 5μm 4.6x 250mm；相：Hex：EtOH＝70:30；流速：1.0mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝11.319分钟
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝4.053分钟，MS计算值：512，MS实测值：513[M+H]+。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.90(s，1H)，8.07(s，1H)，7.75(s，1H)，6.96(s，1H)，4.33-4.27(m，2H)，4.11-3.95(m，3H)，3.87-3.68(m，6H)，3.21-2.92(m，6H)，2.63(s，3H)，2.33-2.24(m，2H)，2.15-2.08(m，2H)，1.98-1.85(m，5H)。
手性HPLC[柱：Chiralpak IF 5μm 4.6x 250mm；相：Hex：EtOH＝70:30；流速：1.0mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝14.219分钟
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝4.068分钟，MS计算值：512，MS实测值：513[M+H]+。
实施例27和28
1-(6-(5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(单一未知对映体1，E27；和单一未知对映体2，E28)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑，1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基乙二胺。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知对映体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.9(s，1H)，8.07(s，1H)，7.74(s，1H)，6.59(s，1H)，4.83(s，1H)，4.43～4.39(t，2H)，4.02～3.94(m，4H)，3.84～3.82(m，1H)，3.73～3.69(m，1H)，3.20～2.95(m，4H)，2.61(s，3H)，2.29～2.26(m，2H)，2.13～2.10(m，3H)，2.07～1.85(m，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝3.01分钟；MS计算值：468.20，MS实测值：469.20[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.435分钟，ee 100％。
单一未知对映体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.92(s，1H)，8.07(s，1H)，7.73(s，1H)，6.59(s，1H)，4.84(s，H)，4.42～4.38(t，2H)，4.02～3.96(m，4H)，3.86～3.82(m，1H)，3.73～3.69(m，1H)，3.20～2.95(m，4H)，2.69(s，3H)，2.32～2.23(m，2H)，2.13～2.08(m，3H)，1.94～1.84(m，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝3.03分钟；MS计算值：468.20，MS实测值：469.2[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：6.459分钟，ee 100％。
实施例29和30
1-(6-(5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基-嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(单一未知对映体1，E29；和单一未知对映体2，E30)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑和1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基乙二胺。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.76分钟；MS计算值：484.20，MS实测值：485.2[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知对映体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.83(s，1H)，8.08(s，1H)，7.74(s，1H)，6.48(s，1H)，4.86～4.84(m，1H)，4.43～4.40(m，2H)，4.11(s，3H)，4.04～3.91(m，4H)，3.84～3.81(m，1H)，3.71～3.66(m，1H)，3.15～3.11(m，2H)，3.06～3.01(m，1H)，2.94～2.91(m，1H)，2.31～2.21(m，3H)，2.11～2.01(m，3H)，1.94～1.89(m，1H)，1.83～1.77(m，2H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]：Rt＝3.56分钟；MS计算值：484.20，MS实测值：485.3[M+H]+。
手性HPLC[AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：3.429分钟，ee：100％。
单一未知对映体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.83(s，1H)，8.08(s，1H)，7.74(s，1H)，6.48(s，1H)，4.85～4.83(m，1H)，4.44～4.40(m，2H)，4.11(s，3H)，4.04～3.93(m，4H)，3.84～3.81(m，1H)，3.71～3.66(m，1H)，3.16～3.12(m，2H)，3.04～3.01(m，1H)，2.94～2.91(m，1H)，2.32～2.21(m，3H)，2.07～2.00(m，3H)，1.94～1.90(m，1H)，1.82～1.78(m，2H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]：纯度：100％@254nm；Rt＝3.57分钟；MS计算值：484.20，MS实测值：485.3[M+H]+。
手性HPLC[AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：3.677分钟，ee：100％。
实施例31和32
1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(单一未知对映体1，E31；和单一未知对映体2，E32)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在90℃起始于5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑，1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇在甲苯/THF中的溶液、DMEDA、CuI和K3PO4。
手性分离：
方法：AD-H，0.46cm I.D.×15cm L，流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃
单一未知对映体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，δ8.05(s，1H)，δ7.49(s，1H)，δ6.58(s，1H)，δ4.83(s，1H)，δ4.42～4.38(m，2H)，δ4.02～3.94(m，4H)，δ3.84～3.82(m，1H)，δ3.74～3.70(m，1H)，δ3.49(s，1H)，δ3.21～3.18(d，J＝10.4Hz，1H)，δ3.06～3.04(m，1H)，δ2.98～2.96(d，J＝9.6Hz，1H)，δ2.85～2.82(m，1H)，δ2.61(s，3H)，δ2.45(s，3H)，δ2.26～2.21(m，2H)，δ2.11～2.09(m，1H)，δ1.96～1.91(m，6H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝3.99分钟；MS计算值：448.5，MS实测值：449.4[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D.×15cm L，流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，254nm，温度：25℃]：Rt＝1.961分钟，ee：100％
单一未知对映体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，δ8.05(s，1H)，δ7.52(s，1H)，δ6.58(s，1H)，δ4.82(s，1H)，δ4.42～4.38(m，2H)，δ4.01～3.93(m，4H)，δ3.84～3.81(m，1H)，δ3.74～3.70(m，1H)，δ3.21～3.18(m，2H)，δ3.05～2.96(m，2H)，δ2.84～2.82(m，1H)，δ2.61(s，3H)，δ2.45(s，3H)，δ2.26～2.20(m，2H)，δ2.12～2.09(m，1H)，δ1.97～1.91(m，6H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝3.98分钟；MS计算值：448.5，MS实测值：449.4[M+H]+。
手性HPLC[手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D.×15cm L，流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，254nm，温度：25℃]：Rt＝2.686分钟，ee：99.4％
实施例33和34
((2S)-4-(6-(6-(1-(3-氘-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，E33；和单一未知异构体2，E34)
将6-(1-(3-氘四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(120mg，0.420mmol)、(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(167mg，0.500mmol)、N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(119mg，0.840mmol)、CuI(80.0mg，0.420mmol)和K3PO4(178mg，0.840mmol)在甲苯(3mL)中的混合物在100℃搅拌2小时，然后用EtOAc(30mL)稀释，用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(DCM/MeOH＝15/1)以得到所需产物(30mg，14％)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.94(s，1H)，4.32-4.27(m，2H)，4.07-3.94(m，3H)，3.86-3.65(m，6H)，3.21-2.82(m，5H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.30-2.21(m，3H)，2.14-2.08(m，1H)，1.98-1.91(m，5H)。
手性分离:
方法：柱：Chiralpak ID；5μm 20x 150mm；相：超临界CO2:IPA＝50:50；流速：8mL/min，波长：254nm。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.94(s，1H)，4.32-4.29(m，2H)，4.07-3.94(m，3H)，3.86-3.65(m，6H)，3.22-3.08(m，2H)，3.00-2.83(m，3H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.31-2.22(m，2H)，2.15-2.09(m，1H)，1.94-1.93(m，5H)，1.27-1.20(m，1H)。
手性HPLC[柱：Chiralpak IE，5μm 250mm x 4.6mm；流动相：Hex:IPA＝50:50；流速：1mL/min；波长230nm；温度：30℃]：Rt＝7.891分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.1％FA)；梯度(B％)]：Rt＝2.954分钟，MS计算值：493，MS实测值：494[M+H]+。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.32-4.29(m，2H)，4.08-3.94(m，3H)，3.86-3.66(m，6H)，3.21-3.07(m，2H)，3.00-2.83(m，3H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.28-2.22(m，2H)，2.15-2.09(m，1H)，1.94(br s，5H)，1.69-1.62(m，1H)。
手性HPLC[柱：Chiralpak IE，5μm 250mm x 4.6mm；流动相：Hex:IPA＝50:50；流速：1mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝10.583分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.1％FA)；梯度(B％)]：Rt＝2.324分钟，MS计算值：493，MS实测值：494[M+H]+。
实施例35和36
((2R)-4-(6-(6-(1-(3-氘-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，E35；和单一未知异构体2，E36)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于6-(1-(3-氘四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑，(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺在甲苯和DMSO中的混合物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟-10-95-POS；流速：1.5mL/min，停止时间4min]：Rt＝2.057分钟；MS计算值：493，MS实测值：494[M+H]+。
手性分离：
方法：柱：Chiralpak ID；5μm 20x 150mm；相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝50:50，流速：8mL/min；波长：214nm
单一未知异构体1
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.32-4.29(m，2H)，4.08-3.99(m，3H)，3.84-3.67(m，6H)，3.21-3.08(m，2H)，3.00-2.92(m，2H)，2.86-2.83(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.31-2.24(m，2H)，2.14-2.08(m，1H)，1.94-1.92(m，5H)。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)，以6min]：Rt＝3.927分钟；MS计算值：493，MS实测值：494[M+H]+。
手性HPLC[Chiralpak ID 5μm 4.6x 250mm；相：Hex:IPA:DEA＝50:50:0.2；流速：1.0mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝9.239分钟。
单一未知异构体2
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.94(s，1H)，4.34-4.28(m，2H)，4.05-3.98(m，3H)，3.86-3.67(m，6H)，3.20-3.08(m，2H)，3.00-2.92(m，2H)，2.87-2.82(m，1H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.30-2.26(m，2H)，2.23-2.12(m，1H)，2.08-1.93(m，5H)。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)，以6min]：Rt＝3.947分钟；MS计算值：493，MS实测值：494[M+H]+。
手性HPLC[Chiralpak ID 5μm 4.6x 250mm；相：Hex:IPA:DEA＝50:50:0.2；流速：1.0mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝14.337分钟。
实施例37和38
3-甲基-1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-醇(单一未知对映体1，E37；和单一未知对映体2，E38)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑，1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇，N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4在甲苯中的混合物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A1(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5mL/min]：Rt＝2.325分钟；MS计算值：462，MS实测值：463[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：Chiralpak ID 5μm 20x 150mm；相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝60:40，流速：8mL/min；波长：214nm。
单一未知对映体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.59(s，1H)，4.10-3.93(m，6H)，3.86-3.74(m，2H)，3.23-3.22(m，1H)，3.08-2.98(m，2H)，2.86-2.83(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.29-2.09(m，4H)，1.94-1.88(m，5H)，1.78-1.62(m，2H)。
手性HPLC[柱：Chiralpak ID 250mm x 4.6mm 5um；流动相：Hex:IPA:DEA＝60:40:0.2；流速:1mL/min；；波长：230nm；温度＝环境温度]：Rt＝7.126分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.1％FA)；梯度(B％)]：Rt＝2.741分钟，MS计算值：462，MS实测值：463[M+H]+。
单一未知对映体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.59(s，1H)，4.09-3.94(m，6H)，3.87-3.70(m，2H)，3.20(d，J＝10.8Hz，1H)，3.05-2.96(m，2H)，2.85-2.81(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.36-2.20(m，3H)，2.14-2.09(m，1H),1.97-1.92(m，5H)，1.70(br s，2H)。
手性HPLC[柱：Chiralpak ID 250mm x 4.6mm 5um；流动相：Hex:IPA:DEA＝60:40:0.2；流速:1mL/min；；波长：230nm；温度＝环境温度]：Rt＝9.805分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.1％FA)；梯度(B％)]：Rt＝3.866分钟，MS计算值：462，MS实测值：463[M+H]+。
实施例39、40、41和42
1-(1-(6-(5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙醇(单一未知异构体1，E39；单一未知异构体2，E40；单一未知异构体3，E41；单一未知异构体4，E42)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于1-(1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙醇、5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4·3H2O、N,N'-二甲基乙二胺。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.95分钟；MS计算值：496.24，MS实测值：497.2[M+H]+。
手性分离
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.91(s，1H)，8.06(s，1H)，7.73(s，1H)，6.58(s，1H)，4.20～4.18(m，2H)，4.17～3.96(m，5H)，3.91～3.82(m，2H)，3.73～3.71(m，1H)，3.17～2.95(m，4H)，2.75(br s，1H)，2.62(s，3H)，2.29～2.26(m，2H)，2.11～2.03(m，3H)，1.93～1.85(m，3H)，1.23～1.22(d，J＝6Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]：纯度：>97％@254nm；Rt＝4.19分钟；MS计算值：496.24，MS实测值：497.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.256分钟，ee100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.91(s，1H)，8.06(s，1H)，7.73(s，1H)，6.58(s，1H)，4.18(br s，2H)，4.07～3.91(m，5H)，3.89～3.82(m，2H)，3.73～3.71(m，1H)，3.20～2.95(m，4H)，2.77～2.75(m，1H)，2.62(s，3H)，2.29～2.26(m，2H)，2.11～2.02(m，3H)，1.94～1.85(m，3H)，1.23～1.22(d，J＝6Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]：纯度：100％@254nm；Rt＝4.20分钟；MS计算值：496.24，MS实测值：497.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.524分钟，ee97％。
单一未知异构体3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.91(s，1H)，8.06(s，1H)，7.73(s，1H)，6.58(s，1H)，4.20～4.17(m，2H)，4.07～3.96(m，5H)，3.89～3.82(m，2H)，3.73～3.71(m，1H)，3.20～2.95(m，4H)，2.77～2.75(m，1H)，2.62(s，3H)，2.29～2.26(m，2H)，2.11～2.03(m，3H)，1.93～1.85(m，3H)，1.23～1.22(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]:纯度：100％@254nm；Rt＝4.19分钟；MS计算值：496.24，MS实测值：497.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.777分钟，ee97％。
单一未知异构体4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.91(s，1H)，8.06(s，1H)，7.73(s，1H)，6.58(s，1H)，4.21～4.17(m，2H)，4.05～3.94(m，5H)，3.88～3.82(m，2H)，3.73～3.69(m，1H)，3.20～2.98(m，4H)，2.77～2.75(m，1H)，2.61(s，3H)，2.29～2.26(m，2H)，2.09～2.03(m，3H)，1.93～1.85(m，3H)，1.23～1.22(d，J＝6Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]：纯度：>86％@254nm；Rt＝4.16分钟；MS计算值：496.24，MS实测值：497.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：6.022分钟，ee98％。
实施例43，44，45和46
1-(1-(6-(5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)丙-2-醇(单一未知异构体1，E43；单一未知异构体2，E44；单一未知异构体3，E45；单一未知异构体4，E46)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑、1-(1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)丙-2-醇、N,N'-二甲基-乙烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4·3H2O在甲苯中的混合物。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：纯度：99％@254nm；Rt＝0.88分钟；MS计算值：510.2，MS实测值：511.2[M+H]+。
手性分离:
方法：AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：超临界CO2：EtOH(0.1％NH3H2O)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.91(s，1H)，8.06(s，1H)，7.73(s，1H)，6.55(s，1H)，4.30-4.26(m，2H)，4.01-3.96(m，2H)，3.89-3.80(m，4H)，3.74-3.70.(m，1H)，3.21-2.96(m，5H)，2.61(s，3H)，2.33-2.24(m，2H)，2.14-2.08(m，3H),1.98-1.64(m，5H)，1.25(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度100％，Rt＝4.16分钟；MS计算值：510.3，MS实测值：511.2[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：5.103分钟；ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.91(s，1H)，8.06(s，1H)，7.73(s，1H)，6.55(s，1H)，4.30-4.26(m，2H)，4.01-3.96(m，2H)，3.89-3.80(m，4H)，3.74-3.70.(m，1H)，3.21-2.96(m，5H)，2.61(s，3H)，2.33-2.24(m，2H)，2.14-2.08(m，3H),1.98-1.64(m，5H)，1.25(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度100％，Rt＝4.15分钟；MS计算值：510.2，MS实测值：511.2[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：5.246分钟；ee：100％
单一未知异构体3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.91(s，1H)，8.06(s，1H)，7.73(s，1H)，6.55(s，1H)，4.30-4.26(m，2H)，4.01-3.96(m，2H)，3.89-3.80(m，4H)，3.74-3.70.(m，1H)，3.21-2.96(m，5H)，2.61(s，3H)，2.33-2.24(m，2H)，2.14-2.08(m，3H),1.98-1.64(m，5H)，1.25(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度94％，Rt＝4.17分钟；MS计算值：510.2，MS实测值：511.2[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：5.596分钟；ee：99.9％
单一未知异构体4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.91(s，1H)，8.06(s，1H)，7.73(s，1H)，6.55(s，1H)，4.30-4.26(m，2H)，4.01-3.96(m，2H)，3.89-3.80(m，4H)，3.74-3.70.(m，1H)，3.21-2.96(m，5H)，2.61(s，3H)，2.33-2.24(m，2H)，2.14-2.08(m，3H)，1.98-1.64(m，5H)，1.25(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度92％，Rt＝4.14分钟；MS计算值：510.2，MS实测值：511.2[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：5.735分钟；ee：99.7％
实施例47和48:
1-(6-(5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(单一未知对映体1，E47；和单一未知对映体2，E48)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑，1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇、N,N'-二甲基-环己烷-1,2-二胺、CuI、K3PO4在甲苯中的悬浮液。
手性分离:
方法：柱：Chiralpak IA；5μm 20x 150mm；相：超临界CO2:EtOH＝70:30；流速:11mL/min，波长：254nm
单一未知对映体1
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.83(s，1H)，8.08(s，1H)，7.75(s，1H)，6.49(s，1H)，4.11(s，3H)，4.09-4.06(m，4H)，4.01-3.92(m，2H)，3.82(q，J＝8.0Hz，1H)，3.69(t，J＝7.6Hz，1H)，3.16-3.02(m，3H)，2.95-2.92(m，1H)，2.27(q，J＝12Hz，2H)，2.21-2.01(m，4H)，1.96-1.89(m，1H)，1.87-1.75(m，2H)，1.62(s，3H)。
LCMS[柱：Phenomenex Kinetex 5μm EVO，C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)，以6min]：Rt＝3.669分钟，MS计算值：498，MS实测值：499[M+H]+。
手性HPLC[柱：Chiralpak IA，5μm 250mm x 4.6mm；流动相：Hex:EtOH＝70:30；流速：1mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝7.142分钟
单一未知对映体2
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.83(s，1H)，8.08(s，1H)，7.74(s，1H)，6.48(s，1H)，4.11(s，3H)，4.10-4.06(m，4H)，4.01-3.92(m，2H)，3.82(q，J＝8.0Hz，1H)，3.70(t，J＝7.6Hz，1H)，3.17-3.03(m，3H)，2.95-2.92(m，1H)，2.27(q，J＝12Hz，3H)，2.21-2.00(m，3H)，1.95-1.90(m，1H)，1.82-1.79(m，2H)，1.62(s，3H)。
LCMS[柱：Phenomenex Kinetex 5μm EVO，C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)，以6min]：Rt＝3.672分钟；MS计算值：498，MS实测值：499[M+H]+。
手性HPLC[柱：Chiralpak IA，5μm 250mm x 4.6mm；流动相：Hex:EtOH＝70:30；流速：1mL/min；波长：230nm；温度：30℃]：Rt＝9.859分钟。
实施例49至52
1-(1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)丙-2-醇(单一未知异构体1，E49；单一未知异构体2，E50；单一未知异构体3，E51；单一未知异构体4，E52)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于1-(1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)丙-2-醇、5-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)-1H-吲唑在甲苯中的溶液、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4。
手性分离:
方法：AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：超临界CO2：异丙醇(0.1％NH3H2O)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.43(s，1H)，4.29-4.28(m，2H)，4.26(s，3H)，3.98-3.68(m，7H)，3.16-2.82(m，5H)，2.45(s，3H)，2.24-1.63(m，11H)，1.24-1.22(m，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]，纯度：98.55％；Rt＝3.72分钟；MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：HEP：异丙醇(0.05％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：5.234分钟；ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.43(s，1H)，4.29-4.28(m，2H)，4.26(s，3H)，3.98-3.68(m，7H)，3.16-2.82(m，5H)，2.45(s，3H)，2.24-1.63(m，11H)，1.24-1.22(m，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度：100％；Rt＝3.71分钟；MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：HEP：异丙醇(0.05％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：5.420分钟；ee：90.7％
单一未知异构体3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.43(s，1H)，4.29-4.28(m，2H)，4.26(s，3H)，3.98-3.68(m，7H)，3.16-2.82(m，5H)，2.45(s，3H)，2.24-1.63(m，11H)，1.24-1.22(m，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度：100％；Rt＝3.74分钟；MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：HEP：异丙醇(0.05％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：6.645分钟；ee：100％
单一未知异构体4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.43(s，1H)，4.29-4.28(m，2H)，4.26(s，3H)，3.98-3.68(m，7H)，3.16-2.82(m，5H)，2.45(s，3H)，2.24-1.63(m，11H)，1.24-1.22(m，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度：100％；Rt＝3.71分钟；MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：HEP：异丙醇(0.05％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：7.015分钟；ee：97.7％
实施例53和54
4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)哌嗪-2-酮(单一未知异构体1，E53；单一未知异构体2，E54)
将顺式-1-(6-氯-2-甲氧基嘧啶-4-基)-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D70，100mg，0.220mmol)、哌嗪-2-酮(24.0mg，0.240mmol)和Et3N(67.0mg，0.660mmol)在DMF(3mL)中的混合物在40℃搅拌过夜。将反应混合物倒入水(50mL)中且用EtOAc(30mLx3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化(A：水，B：MeCN，A:B＝80:20至A:B＝5:95)以得到标题产物，其为白色固体。(35mg，产率30％)。手性混合物通过手性制备型HPLC分离。
手性分离:
方法：AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：超临界CO2：EtOH(0.1％NH3H2O)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.84(s，1H)，8.08(s，1H)，7.54(s，1H)，6.84(s，1H)，6.04(s，1H)，4.88～4.77(m，1H)，4.33(s，2H)，4.11(s，3H)，4.01(s，3H)，3.99～3.98(m，1H)，3.93～3.91(m，1H)，3.74～3.72(m，1H)，3.52(s，2H)，3.23～3.20(m，1H)，3.18～3.14(m，2H)，3.09～3.02(m，1H)，2.48(s，3H)，2.34～2.31(m，1H)，2.29～2.22(m，1H)，2.20～2.08(m，1H)，1.96～1.88(m，3H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-183.33。
LC-MS[流动相：从95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度100％，Rt＝4.37分钟；MS计算值：509.5，MS实测值：510.4[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D.x 15cm L，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：3.207分钟，ee：100％。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.84(s，1H)，8.08(s，1H)，7.54(s，1H)，6.84(s，1H)，6.03(s，1H)，4.88～4.76(m，0.54H)，4.33(s，2H)，4.11(s，3H)，4.01(s，3H)，3.99～3.98(m，1H)，3.93～3.91(m，1H)，3.74～3.72(m，1H)，3.52(s，2H)，3.44(s，1H)，3.16～3.14(m，2H)，2.82～2.81(m，1H)，2.48(s，3H)，2.26～2.23(m，2H)，2.09(s，1H)，1.96～1.88(m，3H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-183.22。
LC-MS[流动相：从95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度100％，Rt＝4.36分钟；MS计算值：509.5，MS实测值：510.4[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D.x 15cm L，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：5.775分钟，ee：100％。
实施例55
4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)哌嗪-2-酮(单一未知异构体3)
标题化合物通过类似于E53和E54所述的步骤制备，在40℃起始于顺式-1-(6-氯-2-甲氧基嘧啶-4-基)-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D71)、哌嗪-2-酮和NEt3在DMF中的混合物。
手性分离:
方法：AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.84(s，1H)，8.08(s，1H)，7.54(s，1H)，6.84(s，1H)，6.04(s，1H)，4.93～4.88(m，0.57H)，4.33(s，2H)，4.11(s，3H)，4.01(s，3H)，3.99～3.98(m，1H)，3.93～3.91(m，1H)，3.74～3.72(m，1H)，3.52(s，2H)，3.43～3.42(m，1H)，3.16～3.14(m，2H)，2.83～2.79(m，1H)，2.48(s，3H)，2.26～2.23(m，2H)，2.11～2.09(m，1H)，1.96～1.88(m，3H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-183.22。
LC-MS[流动相：从95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度100％，Rt＝4.39分钟；MS计算值：509.5，MS实测值：510.4[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm I.D x 15cm L，相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃]：Rt：1.732分钟，ee：100％。
实施例56和57
1-((1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇(单一未知异构体1，E56；和单一未知异构体2，E57)
向1-((1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇(D77,110mg，0.250mmol)、二氢呋喃-3(2H)-酮(108mg，1.26mmol)和AcOH(1滴)在DCE(6mL)中的溶液中添加NaBH3CN(32.0mg，0.500mmol)。将混合物在室温搅拌20小时，然后用饱和NaHCO3溶液(3滴)淬灭且浓缩。通过硅胶色谱柱纯化(DCM/MeOH＝15/1)得到标题产物(49mg，39％)，其为无色油状物。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A1(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5mL/min]：Rt＝2.025分钟；MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
手性分离：
方法：Chiralpak IA 250mm x 4.6mm 5um；流动相：超临界CO2::IPA(0.1％NH3H2O)＝70:30；流速:1mL/min；波长：230nm；温度＝环境温度
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.60(s，1H)，4.52-4.49(m，1H)，4.47-4.32(m，2H)，4.06-3.94(m，5H)，3.87-3.73(m，2H)，3.47-3.44(m，1H)，3.29-3.20(m，2H)，3.08-2.98(m，2H)，2.87-2.83(m，1H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.30-2.12(m，4H)，2.01-1.89(m，5H)，1.19(d，J＝8.8Hz，3H)。
手性HPLC[Chiralpak IA 250mm x 4.6mm 5um；流动相：Hex:IPA:DEA＝70:30:0.2；流速:1mL/min；波长：230nm；温度＝环境温度]：Rt＝8.726分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.1％FA)；梯度(B％)]：Rt＝2.784分钟，MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.60(s，1H)，4.52-4.47(m，1H)，4.37-4.31(m，2H)，4.06-3.94(m，5H)，3.87-3.70(m，2H)，3.47-3.44(m，1H)，3.29-3.17(m，2H)，3.05-2.96(m，2H)，2.86-2.81(m，1H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.29-2.09(m，4H)，2.00-1.87(m，5H)，1.19(d，J＝6.0Hz，3H)。
手性HPLC[Chiralpak IA 250mm x 4.6mm 5um；流动相：Hex:IPA:DEA＝70:30:0.2；流速:1mL/min；波长：230nm；温度＝环境温度]：Rt＝10.678分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.1％FA)；梯度(B％)]：Rt＝3.012分钟，MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
实施例58和59
1-((1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇(单一未知异构体3，E58；和单一未知异构体4，E59)
标题化合物通过类似于E56和E57所述的步骤制备，起始于1-((1-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)丙-2-醇(D79)、二氢呋喃-3(2H)-酮和AcOH(cat.)在DCE中的溶液和NaBH3CN。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm；Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)A1(0.02％NH4Ac+5％MeCN)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5mL/min]：Rt＝2.036分钟；MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：Chiralpak IA 5μm 20x 150mm；相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝70:30，流速:10mL/min；波长：254nm。
单一未知异构体3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.60(s，1H)，4.53-4.47(m，1H)，4.36-4.32(m，2H)，4.06-3.94(m，5H)，3.87-3.70(m，2H)，3.49-3.44(m，1H)，3.29-3.18(m，2H)，3.06-2.97(m，2H)，2.86-2.81(m，1H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.26-1.91(m，4H)，1.66-1.57(m，5H)，1.19(d，J＝6.4Hz，3H)。
手性HPLC[柱：Chiralpak IA 250mmx4.6mm 5um；流动相：Hex:EtOH:DEA＝70:30:0.2；F:1mL/min；WL：230nm；T＝30℃]：Rt＝9.520分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝4.045分钟，MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
单一未知异构体4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.60(s，1H)，4.51-4.47(m，1H)，4.36-4.32(m，2H)，4.06-3.94(m，5H)，3.87-3.71(m，2H)，3.47-3.44(m，1H)，3.29-3.20(m，2H)，3.06-2.98(m，2H)，2.86-2.82(m，1H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.16-2.02(m，4H)，1.94-1.88(m，5H)，1.19(d，J＝6.4Hz，3H)。
手性HPLC[柱：Chiralpak IA 250mm x 4.6mm 5um；流动相：Hex:EtOH:DEA＝70:30:0.2；流速:1mL/min；波长：230nm；温度＝30℃]：Rt＝11.039分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)A(0.02％NH4Ac)；梯度(B％)]：Rt＝4.041分钟，MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
实施例60至63
(6-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，E60；单一未知异构体2，E61；单一未知异构体3，E62；单一未知异构体4，E63)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑，(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-6-甲基吗啉-2-基)甲醇(异构体1，D80)在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基乙二胺。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.93(s，1H)，4.36～4.32(m，2H)，3.99～3.94(m，2H)，3.84～3.72(m，6H)，3.20～3.18(m，1H)，3.05～2.96(m，2H)，2.84～2.81(m，2H)，2.68～2.65(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.26～2.23(m，2H)，2.13～2.09(m，2H)，1.96～1.93(m，5H)，1.30～1.29(d，J＝6Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：纯度：100％@254nm；Rt＝1.12分钟；MS计算值：506.64，MS实测值：507.4[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：2.187分钟，ee 100％。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.93(s，1H)，4.35～4.32(m，2H)，3.99～3.94(m，2H)，3.84～3.70(m，6H)，3.21～3.18(m，1H)，3.05～2.96(m，2H)，2.84～2.80(m，2H)，2.68～2.65(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.26～2.25(m，2H)，2.13～2.08(m，2H)，1.93～1.92(m，5H)，1.30～1.29(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：纯度：100％@254nm；Rt＝1.12分钟；MS计算值：506.64，MS实测值：507.4[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：2.730分钟，ee 99％。
单一未知异构体3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.93(s，1H)，4.35～4.32(m，2H)，3.99～3.94(m，2H)，3.84～3.70(m，6H)，3.21～3.18(m，1H)，3.05～2.96(m，2H)，2.84～2.81(m，2H)，2.68～2.64(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.28～2.23(m，2H)，2.13～2.07(m，2H)，1.96～1.91(m，5H)，1.30～1.29(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：纯度：100％@254nm；Rt＝1.13分钟；MS计算值：506.64，MS实测值：507.4[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.122分钟，ee100％。
单一未知异构体4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.93(s，1H)，4.35～4.32(m，2H)，3.99～3.94(m，2H)，3.84～3.70(m，6H)，3.21～3.18(m，1H)，3.04～2.96(m，2H)，2.84～2.80(m，2H)，2.68～2.65(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.26～2.21(m，2H)，2.15～2.10(m，2H)，1.93～1.92(m，5H)，1.30～1.29(d，J＝6Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：纯度：100％@254nm；Rt＝1.12分钟；MS计算值：506.64，MS实测值：507.4[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.848分钟，ee100％。
实施例64至67
(6-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体5，E64；单一未知异构体6，E65；单一未知异构体7，E66；单一未知异构体8，E67)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑，(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-6-甲基吗啉-2-基)甲醇(异构体2，D81)在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基乙二胺。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体5
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.77(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.92(s，1H)，4.07～4.00(m，2H)，3.98～3.90(m，3H)，3.86～3.82(m，2H)，3.74～3.68(m，4H)，3.34～3.29(m，1H)，3.21～3.17(m，1H)，3.05～2.97(m，2H)，2.84～2.80(m，1H)，2.62(s，3H)，2.46(s，3H)，2.28～2.22(m，2H)，2.12～2.10(m，1H)，1.96～1.93(m，5H)，1.26～1.25(d，J＝6Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝1.08分钟；MS计算值：506.64，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：2.286分钟，ee 100％。
单一未知异构体6
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.77(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.92(s，1H)，4.05～4.00(m，2H)，3.97～3.94(m，3H)，3.89～3.82(m，2H)，3.74～3.66(m，4H)，3.34～3.31(m，1H)，3.21～3.19(m，1H)，3.05～2.96(m，2H)，2.85～2.82(m，1H)，2.62(s，3H)，2.46(s，3H)，2.27～2.23(m，2H)，2.13～2.08(m，1H)，1.96～1.91(m，5H)，1.26～1.25(d，J＝6Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝1.08分钟；MS计算值：506.64，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：3.222分钟，ee 99％。
单一未知异构体7
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.92(s，1H)，4.05～4.00(m，2H)，3.97～3.93(m，3H)，3.87～3.82(m，2H)，3.73～3.65(m，4H)，3.34～3.32(m，1H)，3.22～3.20(m，1H)，3.06～2.95(m，2H)，2.88～2.82(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.26～2.21(m，2H)，2.14～2.10(m，1H)，1.97～1.92(m，5H)，1.26～1.25(d，J＝6Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝1.07分钟；MS计算值：506.64，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：3.316分钟，ee 100％。
单一未知异构体8
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.77(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.92(s，1H)，4.06～4.04(m，2H)，3.99～3.94(m，3H)，3.86～3.82(m，2H)，3.73～3.65(m，4H)，3.34～3.31(m，1H)，3.20～3.18(m，1H)，3.04～2.96(m，2H)，2.84～2.81(m，1H)，2.62(s，3H)，2.46(s，3H)，2.26～2.22(m，2H)，2.11～2.10(m，1H)，1.94～1.92(m，5H)，1.26～1.25(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝1.07分钟；MS计算值：506.64，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：3.929分钟，ee 95.7％
实施例68和69
(3R)-3-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉(单一未知异构体1，E68；和单一未知异构体2，E69)
向5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(87mg，0.26mmol)和(R)-4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(74mg，0.26mmol)在甲苯(20mL)中的溶液中添加CuI(74mg，0.39mmol)、K3PO4(138mg，0.520mmol)和N,N’-二甲基乙二胺(46mg，0.52mmol)。将反应混合物在100℃搅拌4h。LC-MS显示反应完成。将反应混合物浓缩以去除溶剂，溶于CH2Cl2(20mL)和水(20mL)且用饱和NH4OH溶液(50mL)处理。分离有机层，水层用CH2Cl2(2x20mL)萃取。合并的有机层用盐水(2x 50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化，用EtOAc洗脱以得到所需产物，其为白色固体(100mg，产率：78％)。
LC-MS[流动相：从40％水(0.1％NH4OH)和60％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.6分钟]：纯度98％，Rt＝1.27分钟；MS计算值：492.61，MS实测值：493.3[M+H]+。
外消旋(3R)-3-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉(100mg)通过手性制备型HPLC分离[方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D×15cm L；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3·H2O)＝70:30；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液]以得到以下两种白色固体。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.79(s，1H)，4.45(s，1H)，4.11～4.00(m，4H)，3.98～3.92(m，3H)，3.83～3.73(m，4H)，3.69～3.57(m，1H)，3.35～3.29(m，1H)，3.14～3.05(m，1H)，3.03～3.00(m，1H)，2.94～2.92(m，1H)，2.84～2.80(m，1H)，2.45(s，3H)，2.24～2.21(m，2H)，2.10～2.06(m，1H)，2.01～1.89(m，5H)，1.21～1.20(d，J＝4.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％NH4OH)和20％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.6分钟]：Rt＝2.27分钟；MS计算值：492.61，MS实测值：493.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝70:30；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：4.320分钟，ee 100％。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.75(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.79(s，1H)，4.68(s，1H)，4.11～4.02(m，4H)，3.99～3.92(m，3H)，3.83～3.71(m，4H)，3.69～3.55(m，1H)，3.36～3.29(m，1H)，3.17～3.05(m，1H)，3.03～3.01(m，1H)，2.95～2.93(m，1H)，2.84～2.81(m，1H)，2.46(s，3H)，2.27～2.19(m，2H)，2.11～2.06(m，1H)，2.01～1.89(m，5H)，1.21～1.20(d，J＝4.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％NH4OH)和20％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.6分钟]：Rt＝2.29分钟；MS计算值：492.61，MS实测值：493.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝70:30；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：4.960分钟，ee 100％。
实施例70和71
(3S)-3-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉(单一未知异构体1，E70；和单一未知异构体2，E71)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑和(S)-4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4·3H2O和N,N’-二甲基乙二胺。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：纯度98％，Rt＝0.87分钟；MS计算值：492.61，MS实测值：493.4[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝70:30；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.75(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.79(s，1H)，4.45(s，1H)，4.11～4.01(m，4H)，3.99～3.92(m，3H)，3.85～3.71(m，4H)，3.69～3.55(m，1H)，3.37～3.30(m，1H)，3.16～3.05(m，1H)，3.03～3.01(m，1H)，2.95～2.92(m，1H)，2.83～2.81(m，1H)，2.46(s，3H)，2.24～2.19(m，2H)，2.09～2.08(m，1H)，1.98～1.89(m，5H)，1.350～1.333(d，J＝6.8Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％NH4OH)和20％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.6分钟]：Rt＝2.29分钟；MS计算值：492.61，MS实测值：493.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝70:30；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：4.311分钟，ee 100％。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.75(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.79(s，1H)，4.45(s，1H)，4.11～4.08(m，4H)，3.99～3.93(m，3H)，3.83～3.71(m，4H)，3.69～3.55(m，1H)，3.35～3.29(m，1H)，3.17～3.05(m，1H)，3.03～3.01(m，1H)，2.95～2.93(m，1H)，2.84～2.83(m，1H)，2.45(s，3H)，2.27～2.19(m，2H)，2.10～2.07(m，1H)，1.91～1.87(m，5H)，1.34～1.33(d，J＝6.8Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％NH4OH)和20％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.6分钟]：纯度：70％，Rt＝2.29&2.31分钟；MS计算值：492.61，MS实测值：493.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝70:30；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：4.814分钟，ee 99％。
实施例72
(3R)-3-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲 唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于在甲苯中的5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑和(R)-4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉、DMEDA、CuI和K3PO4的混合物。
LC-MS[流动相：80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.17分钟；MS计算值：476.3，MS实测值：477.3[M+H]+。
实施例73
(3S)-3-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲 唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于在甲苯中的5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑和(S)-4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉、DMEDA、CuI和K3PO4。
LC-MS[流动相：80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.19分钟；MS计算值：476.3，MS实测值：477.3[M+H]+。
实施例74和75
4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧 啶-4-基)吗啉(单一未知异构体1，E74；和单一未知异构体2，E75)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉和5-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)-1H-吲唑在甲苯中的溶液、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4·3H2O。
LC-MS[流动相：流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.81分钟；MS计算值：478.5，MS实测值：479.4[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.83(s，1H)，4.12(s，3H)，4.00～3.93(m，2H)，3.91～3.83(m，5H)，3.79～3.67(m，5H)，3.17～3.14(m，1H)，3.05～3.01(m，1H)，2.95～2.92(m，1H)，2.86～2.80(m，1H)，2.46(s，3H)，2.27～2.19(m，2H)，2.11～2.07(m，1H)，1.94～1.81(m，5H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]，纯度：100％；Rt＝3.67分钟；MS计算值：478.5，MS实测值：479.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：4.590分钟，ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.83(s，1H)，4.12(s，3H)，4.00～3.93(m，2H)，3.91～3.83(m，5H)，3.79～3.67(m，5H)，3.17～3.14(m，1H)，3.05～3.01(m，1H)，2.95～2.92(m，1H)，2.86～2.80(m，1H)，2.46(s，3H)，2.28～2.19(m，2H)，2.11～2.07(m，1H)，1.96～1.89(m，5H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10分钟]：纯度：98.6％；Rt＝3.70分钟；MS计算值：478.5，MS实测值：479.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.611分钟，ee：100％
实施例76和77
4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉(单一未知异构体1，E76；和单一未知异构体2，E77)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉和5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑在甲苯中的溶液、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4·3H2O。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.77分钟；MS计算值：462.5，MS实测值：463.3[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.04(s，1H)，7.49(s，1H)，6.94(s，1H)，3.99～3.94(m，2H)，3.86～3.84(m，5H)，3.80～3.70(m，5H)，3.21～3.18(m，1H)，3.05～2.96(m，2H)，2.85～2.82(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.29～2.25(m，2H)，2.24～2.20(m，1H)，2.12～1.93(m，5H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度：100％；Rt＝3.51分钟；MS计算值：462.5，MS实测值：463.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：2.771分钟，ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.79(s，1H)，8.04(s，1H)，7.49(s，1H)，6.94(s，1H)，4.01～3.94(m，2H)，3.86～3.84(m，5H)，3.80～3.70(m，5H)，3.21～3.18(m，1H)，3.05～2.96(m，2H)，2.85～2.82(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.29～2.24(m，2H)，2.23～2.20(m，1H)，2.13～1.92(m，5H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝3.53分钟；MS计算值：462.5，MS实测值：463.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：3.332分钟，ee：99％
实施例78至81
顺式-(3-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，E78；单一未知异构体2，E79；单一未知异构体3，E80；单一未知异构体4，E81)
向顺式-(3-甲基吗啉-2-基)甲醇(84.0mg，0.500mmol)(D94)和1-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(206mg，0.500mmol)在DMF(25mL)中的溶液中添加DIPEA(260mg，2.00mmol)。将反应混合物在80℃搅拌过夜，然后在100℃搅拌一天，用水(50mL)稀释且用EtOAc(3x 100mL)萃取。合并的有机层用水(3x150mL)和盐水(200mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到残余物。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(CH2Cl2:MeOH＝40:1)以得到标题化合物(160mg，产率：63％)，其为白色固体。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.12分钟；MS计算值：506.30，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.91(s，1H)，4.10～4.06(m，1H)，4.00～3.94(m，2H)，3.85～3.61(m，7H)，3.25～3.19(m，2H)，3.06～2.97(m，2H)，2.84～2.82(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.28～2.23(m，2H)，2.13～2.10(m，1H)，1.93～1.92(m，6H)，1.15～1.14(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.30分钟；MS计算值：506.30，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：1.882分钟，ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.91(s，1H)，4.10～4.06(m，1H)，4.00～3.94(m，2H)，3.85～3.60(m，7H)，3.21～3.19(m，2H)，3.06～2.97(m，2H)，2.84～2.62(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.28～2.22(m，2H)，2.13～2.10(m，1H)，1.94～1.92(m，6H)，1.15～1.14(d，J＝6.8Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.22分钟；MS计算值：506.30，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：2.248分钟，ee：100％
单一未知异构体3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.91(s，1H)，4.10～4.06(m，1H)，4.00～3.94(m，2H)，3.85～3.63(m，7H)，3.21～3.19(m，2H)，3.06～2.97(m，2H)，2.84(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.28～2.22(m，2H)，2.13～2.11(m，1H)，1.94～1.92(m，6H)，1.15～1.14(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.26分钟；MS计算值：506.30，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：3.221分钟，ee：100％
单一未知异构体4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.91(s，1H)，4.10～4.06(m，1H)，4.01～3.94(m，2H)，3.87～3.61(m，7H)，3.26～3.19(m，2H)，3.06～2.97(m，2H)，2.84～2.82(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.27～2.23(m，2H)，2.13～2.11(m，1H)，1.94～1.92(m，6H)，1.15～1.14(d，J＝6.8Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.28分钟；MS计算值：506.30，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：3.709分钟，ee：100％
实施例82和83
((2R)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，E82；和单一未知异构体2，E83)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇和5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑在甲苯中的溶液、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4·3H2O。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.76分钟；MS计算值：508.6，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.84(s，1H)，4.27(s，2H)，4.24(s，3H)，4.12～4.04(m，1H)，3.98～3.95(m，2H)，3.93～3.91(m，2H)，3.83～3.69(m，4H)，3.16～3.14(m，2H)，3.05～2.96(m，3H)，2.83(m，1H)，2.46(s，3H)，2.24～2.22(m，2H)，2.10～2.08(m，1H)，1.96～1.89(m，6H)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.77分钟；MS计算值：508.6，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.060分钟，ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.84(s，1H)，4.30(s，2H)，4.28(s，3H)，4.12～4.04(m，1H)，3.98～3.95(m，2H)，3.93～3.91(m，2H)，3.83～3.67(m，4H)，3.16～3.14(m，2H)，3.05～2.93(m，3H)，2.83(m，1H)，2.46(s，3H)，2.24～2.21(m，2H)，2.08(s，1H)，1.96～1.89(m，6H)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]，纯度：99％；Rt＝0.77分钟；MS计算值：508.6，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.621分钟，ee：99％
实施例84和85
((2S)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，E84；和单一未知异构体2，E85)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇和5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑在甲苯中的溶液、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4·3H2O。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.77分钟；MS计算值：508.6，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性分离：
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.84(s，1H)，4.27(s，2H)，4.12(s，3H)，4.04(m，1H)，3.98～3.95(m，2H)，3.93～3.91(m，2H)，3.83～3.67(m，4H)，3.16～3.14(m，2H)，3.05～2.93(m，3H)，2.83(m，1H)，2.45(s，3H)，2.24～2.21(m，2H)，2.10～2.07(m，1H)，1.90～1.89(m，6H)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.77分钟；MS计算值：508.6，MS实测值：509.2[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：4.877分钟，ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.73(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.84(s，1H)，4.30(s，2H)，4.13(s，3H)，4.09～4.04(m，1H)，3.98～3.95(m，2H)，3.93～3.91(m，2H)，3.83～3.66(m，4H)，3.16～3.14(m，2H)，3.99～2.93(m，3H)，2.84(m，1H)，2.46(s，3H)，2.25～2.23(m，2H)，2.10～2.06(m，1H)，1.91～1.76(m，6H)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.77分钟；MS计算值：508.6，MS实测值：509.2[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：5.646min，ee：99％
实施例86和87
((3R)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(单一未知异构体1，E86；和单一未知异构体2，E87)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑和(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基乙二胺。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.08分钟；MS计算值：508.61，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝70:30；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.72(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.86(s，1H)，4.55(m，1H)，4.11(s，3H)，4.04～4.03(m，1H)，3.98～3.91(m，6H)，3.83～3.81(m，1H)，3.70～2.61(m，3H)，3.40(m，1H)，3.17～3.14(m，1H)，3.04(m，1H)，2.96～2.93(m，1H)，2.84(m，1H)，2.46(m，3H)，2.22～2.19(m，2H)，2.10～2.08(m，1H)，1.91(m，5H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：纯度：100％@254nm；Rt＝4.29分钟；MS计算值：508.61，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝70:30；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：1.428分钟，ee 100％。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.72(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.86(s，1H)，4.55(m，1H)，4.11(s，3H)，4.04～4.03(m，1H)，3.98～3.91(m，6H)，3.83～3.81(m，1H)，3.70～2.61(m，3H)，3.40(m，1H)，3.17～3.14(m，1H)，3.04(m，1H)，2.96～2.93(m，1H)，2.84(m，1H)，2.46(m，3H)，2.22～2.19(m，2H)，2.10～2.08(m，1H)，1.91(m，5H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.30分钟；MS计算值：508.61，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝70:30；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：1.726分钟，ee 99.7％。
实施例88和89
((3S)-4-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(单一未知异构体1，E88；和单一未知异构体2，E89)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在100℃起始于5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑和(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基乙二胺。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.210分钟；MS计算值：508.61，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AS-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3H2O)＝70:30；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.72(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.86(s，1H)，4.58～4.54(m，1H)，4.11(s，3H)，4.04～4.03(m，1H)，3.98～3.91(m，5H)，3.83～3.81(m，1H)，3.79～2.67(m，2H)，3.62～3.58(m，1H)，3.42～3.39(m，1H)，3.17～3.14(m，1H)，3.05～3.01(m，1H)，2.95～2.93(m，1H)，2.83～2.82(m，1H)，2.45(m，3H)，2.26～2.22(m，2H)，2.12～2.07(m，2H)，1.91～1.86(m，6H)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％NH4OH)和50％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.6分钟]：纯度：94％@254nm；Rt＝0.95分钟；MS计算值：508.61，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AS-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝70:30；流速：0.5mL；波长：UV254 nm；温度：25℃]：Rt：3.689分钟，ee 100％。
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.72(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.86(s，1H)，4.55～4.52(m，1H)，4.11(s，3H)，4.03～4.02(m，1H)，3.98～3.90(m，5H)，3.85～3.81(m，1H)，3.79～2.67(m，2H)，2.62～3.59(m，1H)，3.43～3.40(m，1H)，3.17～3.14(m，1H)，3.05～3.02(m，1H)，2.95～2.93(m，1H)，2.85～2.80(m，1H)，2.46(s，3H)，2.28～2.22(m，2H)，2.19～2.07(m，2H)，1.96～1.84(m，6H)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％NH4OH)和50％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.6分钟]：Rt＝0.92分钟；MS计算值：508.61，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AS-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝70:30；流速：0.5mL；波长：UV254 nm；温度：25℃]：Rt：3.806分钟，ee 99％。
实施例90和91
(2R)-2-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉(单一未知异构体1，E90；和单一未知异构体2，E91)
在室温向1-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(100mg，0.240mmol)和(R)-2-甲基吗啉盐酸盐(33.0mg，0.240mmol)在DMF(30mL)中的溶液中添加DIEA(155mg，1.20mmol)。将反应混合物在80℃搅拌过夜。LC-MS显示反应完成。将反应混合物冷却至室温，用水(50mL)稀释且用EtOAc(3x 50mL)萃取。合并的有机层用水(3x 50mL)、盐水(50mL)洗涤，干燥且过滤且浓缩以得到残余物。残余物通过硅胶色谱法纯化，用EtOAc:MeOH(20:1)洗脱以得到所需产物，其为黄色固体(100mg，产率：86％)。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.81分钟；MS计算值：476.6，MS实测值：477.3[M+H]+。
手性分离：
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1_
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.93(s，1H)，4.28(s，2H)4.02～3.94(m，3H)，3.84～3.82(m，1H)，3.74～3.64(m，3H)，3.21～3.17(m，1H)，3.05～2.96(m，3H)，2.84(s，1H)，2.74～2.68(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.26(s，2H)，2.25～2.23(m，1H)，2.13～1.91(m，5H)，1.28～1.26(d，J＝8.0Hz，3H)
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：纯度：99％；Rt＝0.8分钟；MS计算值：476.6，MS实测值：477.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：2.027分钟，ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.93(s，1H)，4.29(s，2H)4.01～3.94(m，3H)，3.84～3.82(m，1H)，3.74～3.64(m，3H)，3.21～3.17(m，1H)，3.05～2.96(m，3H)，2.84(s，1H)，2.74～2.68(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.26(s，2H)，2.24～2.23(m，1H)，2.13～1.92(m，5H)，1.28～1.26(d，J＝8.0Hz，3H)
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：纯度：99％；Rt＝0.8分钟；MS计算值：476.6，MS实测值：477.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：2.460分钟，ee：98％
实施例92和93
(2S)-2-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉(单一未知异构体1，E92；单一未知异构体2，E93)
标题化合物通过类似于E90和E91所述的步骤制备，在80℃起始于1-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑和(S)-2-甲基吗啉盐酸盐在DMF和DIEA中的溶液。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.97分钟；MS计算值：476.6，MS实测值：477.3[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.93(s，1H)，4.28(s，2H)4.02～3.94(m，3H)，3.84～3.82(m，1H)，3.72～3.64(m，3H)，3.19(s，1H)，3.05～3.02(m，3H)，2.82(s，1H)，2.74～2.68(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.25(s，2H)，2.24(s，1H)，2.09～1.94(m，5H)，1.28～1.26(d，J＝8.0Hz，3H)
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]，纯度：99％；Rt＝0.8分钟；MS计算值：476.6，MS实测值：477.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：1.919分钟，ee：100％
单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.80(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.93(s，1H)，4.28(s，2H)4.01～3.94(m，3H)，3.86～3.82(m，1H)，3.74～3.62(m，3H)，3.21～3.18(m，1H)，3.09～2.97(m，3H)，2.84(s，1H)，2.74～2.68(m，1H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.25(s，2H)，2.13(s，1H)，2.12～1.92(m，5H)，1.28～1.26(d，J＝8.0Hz，3H)
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：纯度：99％；Rt＝0.8分钟；MS计算值：476.6，MS实测值：477.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt：2.465分钟，ee：100％
实施例94
((R)-4-(6-(3-氘-5-甲基-6-(1-((R)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于(R)-3-氘-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D105)、(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D12)、CuI和K3PO4在甲苯和DMEDA中的悬浮液。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，8.05(s，0.01H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.32～4.29(m，2H)，4.08～3.94(m，3H)，3.86～3.68(m，6H)，3.21～2.92(m，5H)，2.88～2.80(m，1H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.30～2.18(m，2H)，2.16～2.08(m，1H)，2.00～1.92(m，5H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：Rt＝4.88分钟；MS计算值：493.3，MS实测值：494.4[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD，柱尺寸：4.6x 250mm，5μm.注射：10μl，流动相：CO2/EtOH/MeCN/DEA60/34/6/0.08，流速：2.8mL/min，波长：UV 254nm，温度：35℃]：Rt＝13.383分钟，ee：100％
实施例95
((R)-4-(6-(3-氘-5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于(S)-3-氘-5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D104)、(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D12)、CuI和K3PO4在甲苯和DMEDA中的悬浮液。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，8.05(s，0.01H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.32～4.29(m，2H)，4.08～3.94(m，3H)，3.86～3.66(m，6H)，3.24～3.20(m，1H)，3.15～2.92(m，4H)，2.89～2.79(m，1H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.30～2.23(m，2H)，2.15～2.08(m，1H)，2.04～1.93(m，5H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：Rt＝4.75分钟；MS计算值：493.3，MS实测值：494.5[M+H]+。
手性HPLC[方法：柱：AD，柱尺寸：4.6x 250mm，5μm(UPC)。注射：10μl，流动相：CO2/EtOH/MeCN/DEA60/34/6/0.08，流速：2.8mL/min，波长：UV 254nm，温度：35℃]：Rt＝19.055分钟，ee：99.42％
实施例96
((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基-2,2,6,6-d4)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
将(R)-(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基-2,2,6,6-d4)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D116，55mg，0.13mmol)、(R)-四氢呋喃-3-基-4-甲基苯磺酸酯(D12，63mg，0.26mmol)、K2CO3(36mg，0.26mmol)在MeCN(10mL)中的混合物在100℃搅拌过夜，然后过滤。滤液通过制备型HPLC纯化(Waters 2767/Qda，Waters XBridge Prep C1810μmOBDTM 19x 250nm，流速：30mL/min，254nm，流动相：MeCN/H2O(0.1％NH3·H2O)，从5:95至95:5)以得到标题产物，其为白色固体(5.0mg，产率：13％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.95(s，1H)，4.31～4.27(m，2H)，4.08～4.04(m，1H)，3.99～3.93(m，2H)，3.84～3.67(m，7H)，3.12～3.04(m，2H)，2.97～2.84(m，2H)，2.63(s，3H)，2.45(s，3H)，2.17～2.10(br，1H)，1.96～1.89(m，4H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：Rt＝4.941分钟；MS计算值：496.3，MS实测值：497.4[M+H]+。
手性HPLC[方法：柱：AD，5μm，4.6x 250cm(Daicel)。注射：10μl，流动相：CO2/EtOH/MeCN/DEA60/34/6/0.08，流速：2.8mL/min，波长：UV254nm，温度：35℃]：Rt＝19.195分钟，ee：99.28％
实施例97、98、99和100
1-(1-(2-甲氧基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙醇(单一未知异构体1，Rt＝1.821分钟；单一未知异构体2，Rt＝1.997分钟；单一未知异构体3，Rt＝4.235分钟；单一未知异构体4，Rt＝4.530分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于1-(1-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙醇(D117)和5-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)-1H-吲唑(D10)在甲苯中的溶液和N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4，在回流保持4小时。
手性分离:
方法：AD-H，0.46cm x 15cm，相：超临界CO2：EtOH(0.05％NH3.H2O)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长:：254nm，温度：25℃
峰1(E97)：单一未知异构体1，Rt＝1.821分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.45(s，1H)，4.21-3.68(m，11H)，3.17-2.74(m，5H)，2.45(s，3H)，2.29-1.85(m，10H)，1.21(t，J＝6.0Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10分钟]：Rt＝3.31分钟；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm x 15cm，相：HEP：EtOH(0.05％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt＝1.821分钟；ee：96.5％
峰2(E98)：单一未知异构体2，Rt＝1.997分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.45(s，1H)，4.21-3.68(m，11H)，3.17-2.74(m，5H)，2.45(s，3H)，2.29-1.85(m，10H)，1.21(t，J＝6.0Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10分钟]：Rt＝3.35分钟；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm x 15cm，相：HEP：EtOH(0.05％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt＝1.997分钟；ee：98.5％。
峰3(E99)：单一未知异构体3，Rt＝4.235分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.45(s，1H)，4.21-3.68(m，11H)，3.17-2.74(m，5H)，2.45(s，3H)，2.29-1.85(m，10H)，1.21(t，J＝6.0Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10分钟]：Rt＝3.42分钟；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm x 15cm，相：HEP：EtOH(0.05％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，W：254nm，T：25℃]：Rt＝4.235分钟；ee：100％。
峰4(E100)：单一未知异构体4，Rt＝4.530分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.74(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.45(s，1H)，4.21-3.68(m，11H)，3.17-2.74(m，5H)，2.45(s，3H)，2.29-1.85(m，10H)，1.21(t，J＝6.0Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10分钟]：Rt＝3.39分钟；MS计算值：492，MS实测值：493[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm x 15cm，相：HEP：EtOH(0.05％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt＝4.530分钟，ee：97.5％。
实施例101和102
顺式-((2R)-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(源自峰2，D34)(单一未知异构体1，Rt＝2.984分钟；单一未知异构体2，Rt＝3.948分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在90℃在N2保护下起始于顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(峰2，D34)，(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D12)、CuI、K3PO4和N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺在甲苯中的溶液。
手性分离:
方法：AD-H，0.46cm x 15cm，相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃
峰1(E101)：单一未知异构体1，Rt＝2.984分钟
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.85(s，1H)，8.16(s，1H)，7.62(s，1H)，7.04(s，1H)，4.94～4.92(m，1H)，4.43～4.42(m，1H)，4.39～4.30(m，1H)，4.05～3.98(m，3H)，3.90～3.74(m，1H)，3.69～3.65(m，1H)，3.64～3.59(m，6H)，3.47～3.45(m，1H)，3.25～3.19(m，2H)，3.10～3.07(m，1H)，2.88～2.82(m，2H)，2.60(s，3H)，2.47(s，3H)，2.35～2.29(m，1H)，2.18～2.15(m，2H)，2.03～1.95(m，1H)。
19F NMR(376MHz，MeOD)：δ-184.80。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：Rt＝7.78分钟；MS计算值：510.6，MS实测值：511.3[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm x 15cm，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt＝2.984分钟，ee：100％。
峰2(E102)：单一未知异构体2，Rt＝3.948分钟
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.85(s，1H)，8.15(s，1H)，7.61(s，1H)，7.04(s，1H)，4.88～4.74(m，1H)，4.43～4.42(m，1H)，4.39～4.30(m，1H)，4.05～3.98(m，2H)，3.90～3.87(m，1H)，3.78～3.69(m，2H)，3.66～3.60(m，5H)，3.30～3.28(m，2H)，3.27～3.19(m，2H)，2.88～2.82(m，1H)，2.60(s，3H)，2.47(s，3H)，2.25～2.29(m，2H)，2.18～2.15(m，1H)，2.03～1.95(m，3H)。
19F NMR(376MHz，MeOD)：δ-184.80。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：Rt＝7.80分钟；MS计算值：510.6，MS实测值：511.3[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm x 15cm，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt＝3.948分钟，ee：98.1％。
实施例103和104
顺式-((2S)-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(源自峰1，D33)(单一未知异构体1，Rt＝5.134分钟；单一未知异构体2，Rt＝5.400分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，在90℃在N2下起始于顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(峰1，D33)、(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D3)、CuI、K3PO4和N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺在甲苯中的溶液。
手性分离:
AD-H，0.46cm x 15cm，流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃
峰1(E103)：单一未知异构体1，Rt＝5.134分钟
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.85(s，1H)，8.15(s，1H)，7.59(s，1H)，7.04(s，1H)，4.78～4.71(m，1H)，4.43～4.42(m，1H)，4.39～4.30(m，1H)，4.05～3.98(m，2H)，3.90～3.79(m，1H)，3.77～3.75(m，2H)，3.66～3.61(m，4H)，3.25～3.19(m，3H)，3.10～3.07(m，2H)，2.88～2.82(m，1H)，2.60(s，3H)，2.47(s，3H)，2.35～2.29(m，2H)，2.18～2.15(m，1H)，2.03～1.95(m，3H)。
19F NMR(376MHz，MeOD)：δ-184.82。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：Rt＝7.92分钟；MS计算值：510.6，MS实测值：511.3[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm x 15cm，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt＝5.134分钟，ee：100％。
峰2(E104)：单一未知异构体2，Rt＝5.400分钟
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.85(s，1H)，8.15(s，1H)，7.59(s，1H)，7.04(s，1H)，4.78～4.71(m，1H)，4.43～4.42(m，1H)，4.39～4.30(m，1H)，4.05～3.98(m，2H)，3.90～3.79(m，1H)，3.77～3.75(m，2H)，3.66～3.61(m，4H)，3.47～3.45(m，1H)，3.25～3.19(m，2H)，3.10～3.07(m，1H)，2.88～2.82(m，2H)，2.60(s，3H)，2.47(s，3H)，2.35～2.29(m，2H)，2.18～2.15(m，1H)，2.03～1.95(m，3H)。
19F NMR(376MHz，MeOD)：δ-184.82。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：Rt＝7.90分钟；MS计算值：510.6，MS实测值：511.3[M+H]+。
手性HPLC[AD-H，0.46cm x 15cm，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt＝5.400分钟，ee：99.1％。
实施例105和106
顺式-((2S)-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(源自峰2，D34)(单一未知异构体1，Rt＝5.082分钟；单一未知异构体2，Rt＝5.826分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(源自峰2，D34)，(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D3)、CuI和K3PO4在甲苯中的溶液和N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺，在90℃在N2下保持2小时。
手性分离:
方法：AD-H，0.46cm x 15cm，流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃
峰1(E105)：单一未知异构体1，Rt＝5.082分钟
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.85(s，1H)，8.15(s，1H)，7.59(s，1H)，7.04(s，1H)，4.79～4.71(m，1H)，4.43～4.42(m，1H)，4.39～4.30(m，1H)，4.05～3.98(m，2H)，3.90～3.79(m，1H)，3.77～3.75(m，2H)，3.66～3.61(m，4H)，3.47～3.45(m，1H)，3.25～3.19(m，2H)，3.10～3.07(m，1H)，2.88～2.82(m，2H)，2.60(s，3H)，2.47(s，3H)，2.35～2.29(m，2H)，2.18～2.15(m，1H)，2.03～1.95(m，3H)。
19F NMR(376MHz，MeOD)：δ-184.74。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：Rt＝7.89分钟；MS计算值：510.6，MS实测值：511.3[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm x 15cm，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，波长：254nm，温度：25℃]：Rt＝5.134分钟，ee：100％。
峰2(E106)：单一未知异构体2，Rt＝5.826分钟
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.85(s，1H)，8.15(s，1H)，7.61(s，1H)，7.04(s，1H)，4.98～4.94(m，1H)，4.43～4.42(m，1H)，4.39～4.30(m，1H)，4.05～3.98(m，2H)，3.90～3.87(m，2H)，3.78～3.69(m，1H)，3.66～3.60(m，5H)，3.58～3.47(m，1H)，3.25～3.19(m，2H)，3.10～3.07(m，1H)，2.88～2.82(m，1H)，2.60(m，5H)，2.47(s，3H)，2.25～2.29(m，1H)，2.18～2.15(m，2H)，2.03～1.95(m，1H)。
19F NMR(376MHz，MeOD)：δ-184.74。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以12分钟]：Rt＝7.80分钟；MS计算值：510.6，MS实测值：511.3[M+H]+。
手性HPLC[方法：AD-H，0.46cm x 15cm，相：HEP：EtOH(0.1％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/分钟，波长：254nm，温度：25℃]：Rt＝5.400分钟，ee：100％。
实施例107和108
顺式-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)-哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉(源自峰1，D33)(单一未知异构体1，Rt＝2.541分钟；单一未知异构体2，Rt＝2.985分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于顺式-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉(源自峰1，D33)，4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉(D118)、CuI、K3PO4在甲苯/THF和DMEDA中的混合物，在80℃保持2小时。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝1.24分钟；MS计算值：480.6，MS实测值：481.4[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD，柱尺寸：0.46cm×15cm.流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：UV 254nm，温度：25℃
峰1(E107)：单一未知异构体1，Rt＝2.541分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.88(s，1H)，8.06(s，1H)，7.52(s，1H)，6.95(s，1H)，4.93～4.79(m，1H)，4.00～3.99(m，1H)，3.92～3.90(m，1H)，3.80～3.79(m，5H)，3.72～3.71(m，5H)，3.29～3.26(m，1H)，3.20～3.17(m，1H)，3.07～3.04(m，2H)，2.63(s，3H)，2.48(s，3H)，2.22～2.20(m，1H)，2.11～2.09(m，1H)，1.99～1.96(m，1H)，1.90～1.86(m，2H)，1.58～1.56(m，1H)。
19F NMR(376.5MHz，CDCl3)：δ183.28(s)
LC-MS[流动相：95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10.0分钟]：Rt＝4.88分钟；MS计算值：480.6，MS实测值：481.3[M+H]+。
手性HPLC[方法：柱：AD，柱尺寸：0.46cm×15cm.注射：2μl，流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：UV 254nm，温度：25℃]：Rt＝2.541分钟，ee：100％
峰2(E108)：单一未知异构体2，Rt＝2.985分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.88(s，1H)，8.06(s，1H)，7.52(s，1H)，6.95(s，1H)，4.95～4.82(m，1H)，4.00～3.99(m，1H)，3.92～3.90(m，1H)，3.80～3.79(m，5H)，3.72～3.71(m，5H)，3.46～3.49(m，1H)，3.19～3.09(m，2H)，2.87～2.85(m，1H)，2.63(s，3H)，2.48(s，3H)，2.27～2.25(m，2H)，2.13～2.10(m，1H)，1.96～1.93(m，2H)，1.89～1.86(m，1H)。
19F NMR(376.5MHz，CDCl3)：δ183.18(s)
LC-MS[流动相：95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10.0分钟]：Rt＝4.91分钟；MS计算值：480.6，MS实测值：481.3[M+H]+。
手性HPLC[方法：柱：AD，柱尺寸：0.46cm×15cm.注射：2μl，流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：UV 254nm，温度：25℃]：Rt＝2.985分钟，ee：100％
实施例109和110
顺式-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)-哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉(源自峰2，D34)(单一未知异构体1，Rt＝2.174分钟，单一未知异构体2，Rt＝3.041分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉、CuI、K3PO4在甲苯/THF和DMEDA中的混合物，在80℃保持2小时。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％NH4OH)和50％CH3CN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％CH3CN(0.1％NH4OH)，经2.0分钟]：Rt＝1.48分钟；MS计算值：480.6，MS实测值：481.4[M+H]+。
手性制备型HPLC
方法：AD-H，0.46cm I.D.×15cm L，流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60:40，流速：0.5mL/min，254nm，温度：25℃
峰1(E109)：单一未知异构体1
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.88(s，1H)，8.06(s，1H)，7.53(s，1H)，6.95(s，1H)，4.94～4.83(m，1H)，4.00～3.99(m，1H)，3.94～3.92(m，1H)，3.90～3.71(m，10H)，3.49～3.46(m，1H)，3.17～3.12(m，2H)，2.86～2.84(m，1H)，2.63(s，3H)，2.48(s，3H)，2.29～2.24(m，2H)，2.11～2.10(m，1H)，1.99～1.89(m，3H)。
19F NMR(376.5MHz，CDCl3)：δ183.17(s)
LC-MS[流动相：95％水(0.1％FA)和5％CH3CN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以9.0分钟]：Rt＝4.85分钟；MS计算值：480.6，MS实测值：481.3[M+H]+。
手性HPLC[AD柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L.注射：2μl，流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：UV 254nm，温度：25℃]：Rt＝2.174分钟，ee：100％
峰2(E110)：单一未知异构体2
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.88(s，1H)，8.06(s，1H)，7.53(s，1H)，6.95(s，1H)，4.94～4.82(m，1H)，4.00～3.99(m，1H)，3.94～3.92(m，1H)，3.90～3.71(m，10H)，3.29～3.05(m，4H)，2.63(s，3H)，2.48(s，3H)，2.34～2.31(m，1H)，2.21～2.18(m，1H)，2.11～2.09(m，1H)，1.99～1.09(m，3H)。
19F NMR(376.5MHz，CDCl3)：δ183.28(s)
LC-MS[流动相：95％水(0.1％FA)和5％CH3CN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％CH3CN(0.1％FA)，以9.0分钟]：Rt＝4.84分钟；MS计算值：480.6，MS实测值：481.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD柱尺寸：0.46cm I.D.×15cm L.注射：2μl流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：UV 254nm，温度：25℃]：Rt＝3.041分钟，ee：100％
实施例111和112
((3R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(单一未知异构体1，Rt＝6.040分钟；单一未知异构体2，Rt＝6.445分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(D119)和5-甲基-6-(四氢呋喃-3-基)-1H-吲唑(D10)在甲苯中的溶液和N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4.3H2O，在100℃保持4小时。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.80分钟；MS计算值：492.3，MS实测值：493.2[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
峰1(E111)：单一未知异构体1，Rt＝6.040分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.77(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.97(s，1H)，4.65～4.63(m，1H)，4.11-3.96(m，7H)，3.87～3.84(m，1H)，3.86～3.61(m，3H)，3.43～3.67(m，1H)，3.22～3.18(m，1H)，3.07～3.00(m，2H)，2.84～2.81(m，1H)，2.62(s，3H)，2.49(s，3H)，2.33～2.31(m，2H)，2.25-2.17(m，1H)，1.97～1.93(m，5H)。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.88分钟；MS计算值：492.3，MS实测值：493.3[M+H]+。
手性HPLC[AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝6.040分钟，ee：100％
峰2(E112)：单一未知异构体2，Rt＝6.445分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.77(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.97(s，1H)，4.65～4.63(m，1H)，4.11-3.96(m，7H)，3.87～3.84(m，1H)，3.86～3.61(m，3H)，3.43～3.67(m，1H)，3.22～3.18(m，1H)，3.07～3.00(m，2H)，2.84～2.81(m，1H)，2.62(s，3H)，2.49(s，3H)，2.33～2.31(m，2H)，2.25-2.17(m，1H)，1.97～1.93(m，5H)。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.88分钟；MS计算值：492.3，MS实测值：493.3[M+H]+。
手性HPLC[AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝6.445分钟，ee：99％
实施例113和114
((3S)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(单一未知异构体1，Rt＝5.102分钟；单一未知异构体2，Rt＝5.288分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-3-基)甲醇(D120)和5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D10)在甲苯中的溶液、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基乙二胺，在100℃保持5h。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.86分钟；MS计算值：492.3，MS实测值：493.4[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液
峰1(E113)：单一未知异构体1，Rt＝5.102分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.77(s，1H)，8.04(s，1H)，7.49(s，1H)，6.97(s，1H)，4.63(br，1H)，4.11～3.94(m，7H)，3.86～3.83(m，1H)，3.74～3.61(m，3H)，3.43～3.37(m，1H)，3.21～3.19(d，J＝8.0Hz，1H)，3.06～2.96(m，2H)，2.86～2.82(m，1H)，2.62(s，3H)，2.46(s，3H)，2.26～2.23(m，2H)，2.13～2.10(m，1H)，1.94～1.92(m，5H)。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.84分钟；MS计算值：492.3，MS实测值：493.2[M+H]+。
手性HPLC[AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝5.102分钟，ee：100％。
峰2(E114)：单一未知异构体2，Rt＝5.288分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.77(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.97(s，1H)，4.64(br，1H)，4.10～3.94(m，7H)，3.86～3.83(m，1H)，3.74～3.61(m，3H)，3.43～3.37(m，1H)，3.21～3.19(d，J＝8.0Hz，1H)，3.06～2.97(m，2H)，2.86～2.82(m，1H)，2.62(s，3H)，2.46(s，3H)，2.26～2.24(m，2H)，2.13～2.11(m，1H)，1.93(s，5H)。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.84分钟；MS计算值：492.3，MS实测值：493.2[M+H]+。
手性HPLC[AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.05％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝5.288分钟，ee：99.3％。
实施例115和116
顺式-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)-哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉(源自峰2，D34)(单一未知异构体1，Rt＝1.588分钟；单一未知异构体2，Rt＝2.669分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于顺式-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉(源自峰2，D34)、4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉(D87)、CuI、K3PO4在甲苯/THF和DMEDA中的混合物，在80℃在N2下保持2小时。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％NH4OH)和50％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.0分钟]：Rt＝1.51分钟；MS计算值：496，MS实测值：497[M+H]+。
手性分离:
方法：AD-H，0.46cm×15cm，流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60:40，流速：0.5mL/min，254nm，温度：25℃
峰1(E115)：单一未知异构体1，Rt＝1.588分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.85(s，1H)，8.06(s，1H)，7.53(s，1H)，6.83(s，1H)，4.92～4.76(m，1H)，4.11(s，3H)，4.00～3.96(m，1H)，3.92～3.90(m，1H)，3.83～3.71(m，10H)，3.46～3.44(m，1H)，3.17～3.12(m，2H)，2.84～2.82(m，1H)，2.48(s，3H)，2.26～2.22(m，2H)，2.10～2.09(m，1H)，1.94～1.92(m，2H)，1.86～1.81(m，1H)。
19F NMR(376.5MHz，CDCl3)：δ183.21(s)
LC-MS[流动相：95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]：Rt＝5.16分钟；MS计算值：496.6，MS实测值：497.3[M+H]+。
手性HPLC[方法：柱：AD，柱尺寸：0.46cm×15cm.注射：2μl，流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：UV 254nm，温度：25℃]：Rt＝1.588分钟，ee：100％
峰2(E116)：单一未知异构体2，Rt＝2.669分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.85(s，1H)，8.06(s，1H)，7.53(s，1H)，6.83(s，1H)，4.89～4.76(m，1H)，4.11(s，3H)，4.00～3.97(m，1H)，3.92～3.90(m，1H)，3.85～3.72(m，10H)，3.20～3.04(m，4H)，2.48(s，3H)，2.32～2.31(m，1H)，2.21～2.19(m，1H)，2.08～2.07(m，1H)，1.96～1.83(m，3H)。
19F NMR(376.5MHz，CDCl3)：δ183.32(s)
LC-MS[流动相：95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以9.0分钟]：Rt＝4.98分钟；MS计算值：496.6，MS实测值：497.3[M+H]+。
手性HPLC[方法：柱：AD，柱尺寸：0.46cm×15cm.注射：2μl，流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：UV 254nm，温度：25℃]：Rt＝2.669分钟，ee：100％
实施例117和118
((2R)-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(源自峰2，D34)(单一未知异构体1，Rt＝1.249分钟；单一未知异构体2，Rt＝1.410分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(源自峰2，D34)和(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D25)在甲苯和N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4·3H2O中的溶液，在100℃保持4h。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.80分钟；MS计算值：526.3，MS实测值：527.3[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H，柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
峰1(E117)：单一未知异构体1，Rt＝1.249分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.85(s，1H)，8.07(s，1H)，7.53(s，1H)，6.91(s，1H)，4.90～4.89(m，0.5H)，4.79-4.77(m，0.5H)，4.28～4.25(m，2H)，4.11(s，3H)，4.07～4.05(m，1H)，3.99～3.97(m，1H)，3.92～3.88(m，1H)，3.87～3.74(m，2H)，3.71～3.62(m，4H)，3.45～3.43(m,1H)，3.17～3.07(m，3H)，3.00-2.94(m，1H)，2.83～2.81(m，1H)，2.48(s，3H)，2.29～2.20(m，2H)，2.12-2.06(m，1H)，2.00～1.89(m，3H)，1.87-1.80(m，1H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)：δ183.222(s)
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.96分钟；MS计算值：526.3，MS实测值：527.2[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H，柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝1.249分钟，ee：100％
峰2(E118)：单一未知异构体2，Rt＝1.410分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.85(s，1H)，8.07(s，1H)，7.53(s，1H)，6.91(s，1H)，4.90～4.89(m，0.5H)，4.79-4.77(m，0.5H)，4.28～4.25(m，2H)，4.11(s，3H)，4.07～4.05(m，1H)，3.99～3.97(m，1H)，3.92～3.88(m，1H)，3.87～3.74(m，2H)，3.71～3.62(m，4H)，3.45～3.43(m,1H)，3.17～3.07(m，3H)，3.00-2.94(m，1H)，2.83～2.81(m，1H)，2.48(s，3H)，2.29～2.20(m，2H)，2.12-2.06(m，1H)，2.00～1.89(m，3H)，1.87-1.80(m，1H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)：δ183.222(s)
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.96分钟；MS计算值：526.3，MS实测值：527.2[M+H]+。
手性HPL[柱：AD-H，柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝1.410分钟，ee：100％
实施例119和120
((2R)-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(源自峰1，D33)(单一未知异构体1，Rt＝3.879分钟；单一未知异构体2，Rt＝6.171分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于顺式-6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(源自峰1，D33)和(R)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D25)在甲苯中的溶液和N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4·3H2O，在100℃保持4h。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.88分钟；MS计算值：526.3，MS实测值：527.3[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
峰1(E119)：单一未知异构体1，Rt＝3.879分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.85(s，1H)，8.08(s，1H)，7.54(s，1H)，6.85(s，1H)，4.89～4.76(m，1H)，4.31～4.24(m，2H)，4.12(s，3H)，4.07～4.04(m，1H)，3.99～3.98(m，1H)，3.92～3.89(m，1H)，3.82～3.68(m，6H)，3.25～2.94(m，6H)，2.48(s，3H)，2.33-2.28(m，1H)，2.23～2.17(m，1H)，2.09～2.17(m，1H)，1.96～1.81(m，4H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)：δ183.331(s)
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.88分钟；MS计算值：526.3，MS实测值：527.2[M+H]+。
手性HPLC[AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝3.879分钟，ee：100％
峰2(E120)：单一未知异构体2，Rt＝6.171分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.85(s，1H)，8.07(s，1H)，7.54(s，1H)，6.85(s，1H)，4.91～4.78(m，1H)，4.31～4.24(m，2H)，4.12(s，3H)，4.07～4.05(m，1H)，3.99～3.98(m，1H)，3.92～3.89(m，1H)，3.82～3.68(m，6H)，3.46～3.43(m，1H)，3.17～3.12(m，3H)，3.00～2.94(m，1H)，2.84～2.82(m，1H)，2.48(s，3H)，2.27～2.21(m，2H)，2.11～2.08(m，1H)，1.95～1.80(m，4H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)：δ183.236(s)。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.87分钟；MS计算值：526.3，MS实测值：527.2[M+H]+。
手性HPLC[AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝6.171分钟，ee：100％。
实施例121和122
((2S)-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(源自峰1，D33)(单一未知异构体1，Rt＝2.412分钟；单一未知异构体2，Rt＝4.104分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(源自峰1，D33)和(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇在甲苯(D96)中的溶液、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基乙二胺，在100℃保持4h。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.849分钟；MS计算值：526.60，MS实测值：527.2[M+H]+
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46×15cm；流动相：超临界CO2
:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
峰1(E121)：单一未知异构体1，Rt＝2.412分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.72(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.86(s，1H)，4.58～4.54(m，1H)，4.31～4.21(m，2H)，4.11(s，3H)，4.11～3.66(m，9H)，3.25～2.94(m，6H)，2.48(m，3H)，2.33～1.86(m，7H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-183.33(s)
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.975分钟；MS计算值：526，MS实测值：527.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝2.367分钟，ee 100％。
峰2(E122)：单一未知异构体2，Rt＝4.104分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.85(s，1H)，8.07(s，1H)，7.53(s，1H)，6.84(s，1H)，4.90-4.89(m，1H)，4.77-4.76(m，2H)，4.28(s，3H)，4.24-4.11(m，1H)，4.07-4.05(m，1H)，3.99-3.98(m，1H)，3.88-3.80(m，2H)，3.78-2.68(m，4H)，3.45-3.42(m，1H)，3.17-3.09(m，3H)，3.00-2.94(m，1H)，2.83-2.81(m，1H)，2.48(s，3H)，2.28～2.20(m，2H)，2.11-2.05(m，1H)，1.96-1.83(m，4H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ-183.33(s)
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％NH4OH)和50％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.6分钟]：Rt＝0.92分钟；MS计算值：508.61，MS实测值：509.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝3.806分钟，ee 99％
实施例123和124
((2S)-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(源自峰2，D34)(单一未知异构体1，Rt＝2.740分钟；单一未知异构体2，Rt＝10.595分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(峰2，D34)和(S)-(4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇在甲苯(D96)中的溶液、CuI、K3PO4和N,N’-二甲基乙二胺，在100℃保持4h。
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％FA)和40％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.88分钟；MS计算值：526.3，MS实测值：527.2[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
峰1(E123)：单一未知异构体1，Rt＝2.740分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.85(s，1H)，8.08(s，1H)，7.54(s，1H)，6.85(s，1H)，4.90～4.77(m，1H)，4.31～4.24(m，2H)，4.12(s，3H)，4.08～4.05(m，1H)，4.00～3.98(m，1H)，3.93～3.89(m，1H)，3.83～3.68(m，6H)，3.45～3.43(m，1H)，3.18～3.10(m，3H)，3.01～2.94(m，1H)，2.84～2.81(m，1H)，2.48(s，3H)，2.26-2.20(m，2H)，2.11～2.09(m，1H)，1.96～1.80(m，4H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)：δ183.222(s)
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％NH4OH)和40％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.6分钟]：Rt＝0.88分钟；MS计算值：526.3，MS实测值：527.2[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝2.740分钟，ee 100％
峰2(E124)：单一未知异构体2，Rt＝10.595分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.85(s，1H)，8.07(s，1H)，7.54(s，1H)，6.85(s，1H)，4.89～4.77(m，1H)，4.31～4.24(m，2H)，4.12(s，3H)，4.08～4.05(m，1H)，3.99～3.98(m，1H)，3.91～3.88(m，1H)，3.82～3.68(m，6H)，3.25～2.94(m，6H)，2.48(s，3H)，2.33-2.29(m，1H)，2.23～2.18(m，1H)，2.11～2.08(m，1H)，1.96～1.82(m，4H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)：δ183.338(s)
LC-MS[流动相：从60％水(0.1％NH4OH)和40％MeCN(0.1％NH4OH)至5％水(0.1％NH4OH)和95％MeCN(0.1％NH4OH)，经2.6分钟]：Rt＝0.87分钟；MS计算值：526.3，MS实测值：527.2[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝10.595分钟，ee 100％。
实施例125和126
4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)-哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉(源自峰1，D33)(单一未知异构体1，Rt＝2.237分钟；单一未知异构体2，Rt＝3.319分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于顺式-4-(6-(6-(3-氟-1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉(源自峰1，D33)、4-(6-碘-2-甲氧基嘧啶-4-基)吗啉(D87)、CuI、K3PO4在甲苯/THF和DMEDA中的混合物，在80℃在N2下保持2小时。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝1.23分钟；MS计算值：480.6，MS实测值：481.4[M+H]+。
手性分离:
方法：AD-H，0.46cm×15cm，流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60:40，流速：0.5mL/min，254nm，温度：25℃
峰1(E125)：单一未知异构体1，Rt＝2.237分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.85(s，1H)，8.06(s，1H)，7.53(s，1H)，6.83(s，1H)，4.88～4.75(m，1H)，4.11(s，3H)，3.99～3.96(m，1H)，3.92～3.88(m，1H)，3.79～3.76(m，5H)，3.72～3.71(m，5H)，3.25～3.22(m，1H)，3.19～3.16(m，1H)，3.09～3.11(m，1H)，3.04～3.01(m，1H)，2.48(s，3H)，2.32～2.28(m，1H)，2.23～2.17(m，1H)，2.09～2.08(m，1H)，1.94～1.92(m，2H)，1.83～1.81(m，1H)。
19F NMR(376.5MHz，CDCl3)：δ183.33(s)
LC-MS[流动相：95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10.0分钟]：Rt＝5.14分钟；MS计算值：496.6，MS实测值：497.3[M+H]+。
手性HPLC[方法：柱：AD柱尺寸：0.46cm×15cm.注射：2μl，流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：UV 254nm，温度：25℃]：Rt＝2.237分钟，ee：100％
峰2(E126)：单一未知异构体2，Rt＝3.319分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.85(s，1H)，8.06(s，1H)，7.53(s，1H)，6.83(s，1H)，4.92～4.76(m，1H)，4.11(s，3H)，4.00～3.96(m，1H)，3.92～3.90(m，1H)，3.79～3.76(m，5H)，3.72～3.71(m，5H)，3.44～3.43(m，1H)，3.17～3.12(m，2H)，2.84～2.82(m，1H)，2.48(s，3H)，2.26～2.22(m，2H)，2.10～2.09(m，1H)，1.94～1.92(m，2H)，1.86～1.81(m，1H)。
19F NMR(376.5MHz，CDCl3)：δ183.22(s)
LC-MS[流动相：95％水(0.1％FA)和5％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10.0分钟]：Rt＝5.09分钟；MS计算值：496.6，MS实测值：497.3[M+H]+。
手性HPLC[方法：柱：AD，柱尺寸：0.46cm×15cm.注射：2μl，流动相：HEP:EtOH(0.1％DEA)＝60:40，流速：0.5mL/min，波长：UV 254nm，温度：25℃]：Rt＝3.319分钟，ee：100％
实施例127和128
1-(6-(5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲基-嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(单一未知异构体1；和单一未知异构体2)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D32)，1-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(D54)、N,N'-二甲基环-己烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4在甲苯中的混合物，在100℃保持3小时。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：2.1mm x 50mm；Waters ACQUITY UPLC BEH；流动相：B(MeCN)；A(0.02％NH4Ac+5％MeCN在水中)；流速：0.5ml/min；梯度(B％)，以2.5分钟s.2.5分钟-5-95-POS]：Rt＝1.620分钟；MS计算值：483，MS实测值：484[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：CHIRALPAK IA；5.0cm x 25cm；流动相：EtOH/MeCN(0.1％NH3·H2O)＝90/10；流速：60ml/min，波长：254nm。
峰1(E127)：单一未知异构体1，Rt＝5.529分钟
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.92(s，1H)，8.20(s，1H)，7.85(s，1H)，6.65(s，1H)，4.06-3.91(m，6H)，3.78(q，J＝8.4Hz，1H)，3.70(q，J＝6.8Hz，1H)，3.30-3.20(m，2H)，3.09-2.99(m，2H)，2.58(s，3H)，2.35-2.30(m，2H)，2.17-2.15(m，1H)，2.00-1.85(m，5H)，1.55(s，3H)。
手性HPLC[柱：CHIRALPAK IA 0.46 cm x 15cm；流动相：EtOH/DEA＝100/0.1；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：35℃]：Rt＝5.529分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4AC在水中)；梯度(B％)]：Rt＝3.830分钟，MS计算值：482，MS实测值：483[M+H]+。
峰2(E128)：单一未知异构体2，Rt＝6.048分钟
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.92(s，1H)，8.20(s，1H)，7.85(s，1H)，6.65(s，1H)，4.06-3.91(m，6H)，3.78(q，J＝8.4Hz，1H)，3.70(q，J＝6.8Hz，1H)，3.30-3.20(m，2H)，3.09-2.99(m，2H)，2.58(s，3H)，2.35-2.30(m，2H)，2.17-2.15(m，1H)，2.00-1.85(m，5H)，1.55(s，3H)。
手性HPLC[柱：CHIRALPAK IA 0.46 cm x 15cm；流动相：EtOH/DEA＝100/0.1；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：35℃]：Rt＝6.048分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4AC在水中)；梯度(B％)]：Rt＝3.818分钟，MS计算值：482，MS实测值：483[M+H]+。
实施例129和130
((2R)-4-(6-(5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1；和单一未知异构体2)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于5-氯-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D32)、(R)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D12)、N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺、CuI和K3PO4在甲苯中的混合物，在100℃保持4.5小时。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.90(s，1H)，8.07(s，1H)，7.74(s，1H)，6.95(s，1H)，4.32-4.29(m，2H)，4.09-3.95(m，3H)，3.85-3.65(m，6H)，3.22-2.93(m，5H)，2.63(s,3H)，2.33-1.71(m，9H)。
手性分离:
方法：柱：CHIRALPAK AD-H；0.46cm x 15cm；流动相：EtOH/MeCN(0.1％NH3·H2O)＝80/20；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：35℃
峰1(E129)：单一未知异构体1，Rt＝6.253分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.90(s，1H)，8.07(s，1H)，7.75(s，1H)，6.95(s，1H)，4.32-4.29(m，2H)，4.09-3.95(m，3H)，3.85-3.65(m，6H)，3.22-2.92(m，6H)，2.63(s，3H)，2.33-1.71(m，9H)。
手性HPLC[柱：CHIRALPAK AD-H；0.46cm x 15cm；流动相：EtOH/ACN/DEA＝80/20/0.1；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：35℃]：Rt＝6.253分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.1％FA在水中)；梯度(B％)]：Rt＝3.191分钟，MS计算值：512，MS实测值：513[M+H]+。
峰2(E130)：单一未知异构体2，Rt＝8.943分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.90(s，1H)，8.07(s，1H)，7.75(s，1H)，6.95(s，1H)，4.32-4.29(m，2H)，4.09-3.95(m，3H)，3.85-3.65(m，6H)，3.22-2.92(m，6H)，2.63(s，3H)，2.33-1.71(m，9H)。
手性HPLC[柱：CHIRALPAK AD-H；0.46cm×15cm；流动相：EtOH/MeCN/DEA＝80/20/0.1；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：35℃]：Rt＝8.943分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.1％FA在水中)；梯度(B％)]：Rt＝3.186分钟，MS计算值：512，MS实测值：513[M+H]+。
实施例131和132
反式-3-((2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(单一未知异构体1，Rt＝12.140分钟；和单一未知异构体2，Rt＝15.228分钟)
向反式-3-((2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(D123，120mg，0.306mmol)、二氢呋喃-3(2H)-酮(132mg，1.53mmol)和催化剂HOAc在4mL DCE中的混合物添加NaBH3CN(39.0mg，0.612mmol)。将反应混合物在室温搅拌6h，然后真空浓缩。残余物通过柱色谱在硅胶上纯化(DCM/MeOH＝40/1至20/1)以得到标题化合物(120mg，85.0％)，其为无色油状物。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.70(s，1H)，8.32(s，1H)，7.77(s，1H)，7.65(s，1H)，5.15(br s，1H)，4.31-4.29(m，1H)，4.17-4.16(m，1H)，4.03-3.98(m，3H)，3.80-3.77(m，1H)，3.66-3.64(m，1H)，3.56-3.52(m，2H)，3.29-3.23(m，4H)，2.52(s，3H)，2.43(s，3H)，2.33-2.27(m，2H)，2.25-2.19(m，4H)，2.10-2.05(m，2H)，1.93-1.87(m，2H)。
手性分离:
方法：柱：250mm x 4.6mm 5μm；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝80:20；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：30℃
峰1(E131)：单一未知异构体1，Rt＝12.140分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，8.07(s，1H)，7.50(s，1H)，6.64(s，1H)，5.19(br s，1H)，4.62-4.59(m，1H)，4.30-4.28(m，1H)，4.01-3.94(m，2H)，3.86-3.80(m，1H)，3.74-3.71(m，1H)，3.22-3.18(m，1H)，3.04-2.97(m，2H)，2.86-2.82(m，1H)，2.61(s，3H)，2.51-2.44(m，5H)，2.35-2.21(m，4H)，2.13-2.11(m，1H)，1.94-1.87(m，5H)。
手性HPLC[柱：250mm x 4.6mm 5μm；流动相：Hex:EtOH:DEA＝80:20:0.2；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：30℃]：Rt＝12.140分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.1％TFA在水中)；梯度(B％)]：Rt＝2.450分钟，MS计算值：462，MS实测值：463[M+H]+。
峰2(E132)：单一未知异构体2，Rt＝15.228分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，8.07(s，1H)，7.50(s，1H)，6.64(s，1H)，5.19(br s，1H)，4.62-4.59(m，1H)，4.30-4.28(m，1H)，4.01-3.94(m，2H)，3.86-3.80(m，1H)，3.75-3.71(m，1H)，3.22-3.18(m，1H)，3.06-2.98(m，2H)，2.86-2.82(m，1H)，2.61(s，3H)，2.51-2.44(m，5H)，2.35-2.21(m，4H)，2.15-2.10(m，1H)，1.94-1.87(m，5H)。
手性HPLC[柱：250x 4.6mm，5μm；流动相：Hex:EtOH:DEA＝80:20:0.2；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：30℃]：Rt＝15.228分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.1％FA在水中)；梯度(B％)]：Rt＝2.439分钟，MS计算值：462，MS实测值：463[M+H]+。
实施例133和134
顺式-3-((2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(单一未知异构体1，Rt＝10.500分钟；和单一未知异构体2，Rt＝14.311分钟)
标题化合物通过类似于E131和E132所述的步骤制备，起始于顺式-3-((2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氨基)环丁醇(D126)、二氢呋喃-3(2H)-酮和催化剂AcOH在DCM中的溶液和NaBH3CN，在室温过夜。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 30mm 5μm，Dikwa Diamonsil plus；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac+5％MeCN在水中)；梯度(B％)，经4分钟。10-95-POS；流速：1.5ml/min]：Rt＝1.979分钟；MS计算值：462，MS实测值：463[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：250x 4.6mm 5μm；流动相：超临界CO2:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝70:30；流速：1mL/min，波长：254nm；温度：30℃
峰1(E133)：单一未知异构体1，Rt＝10.500分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，8.04(s，1H)，7.49(s，1H)，6.66(s，1H)，5.30(br s，1H)，4.17-4.12(m，1H)，4.02-3.94(m，2H)，3.86-3.80(m，3H)，3.71(d，J＝11.2Hz，1H)，3.05-2.80(m，5H)，2.60(s，3H)，2.45(s，3H)，2.30-2.08(m，3H)，1.96-1.86(m，7H)。
手性HPLC[柱：250x 4.6mm 5μm；流动相：Hex:EtOH:DEA＝70:30:0.2；流速：1mL/min，波长：254nm；温度：30℃]：Rt＝10.500分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac在水中)；梯度(B％)]：Rt＝3.391分钟，MS计算值：462，MS实测值：463[M+H]+。
峰2(E134)：单一未知异构体2，Rt＝14.311分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.49(s，1H)，6.66(s，1H)，5.21(br，1H)，4.18-4.13(m，1H)，4.02-3.70(m，5H)，3.20(d，J＝10.8Hz，1H)，3.06-2.82(m，5H)，2.60(s，3H)，2.45(s，3H)，2.30-2.09(m，3H)，1.99-1.86(m，7H)。
手性HPLC[柱：250x 4.6mm 5μm；流动相：Hex:EtOH:DEA＝70:30:0.2；流速：1mL/min；波长：254nm；温度：30℃]：Rt＝14.311分钟。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac在水中)；梯度(B％)]：Rt＝3.284分钟，MS计算值：462，MS实测值：463[M+H]+。
实施例135、136、137、138、139、140、141和142
1-(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙醇(单一未知异构体1；单一未知异构体2；单一未知异构体3；单一未知异构体4；单一未知异构体5；单一未知异构体6；单一未知异构体7；单一未知异构体8)
向1-(4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)乙酮(D128，570mg，1.13mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中添加NaBH4(107mg，2.83mmol)。当LC-MS显示反应完成，反应混合物用水(20mL)淬灭且用CH2Cl2(50mL x2)萃取。合并的有机层用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥且过滤。将滤液浓缩且通过柱色谱法纯化(PE：EtOAc＝1:3)以得到所需产物，其为淡黄色固体(560mg，产率：97.0％)。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝0.94分钟，MS计算值：506.3，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性分离:
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：超临界CO2
:EtOH(0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5ml/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液
峰1(E135)：单一未知异构体1，Rt＝4.984min
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.96(s，1H)，4.36～4.27(m，2H)，4.05～3.93(m，4H)，3.86～3.81(m，1H)，3.75～3.67(m，2H)，3.47～3.42(m，1H)，3.22～2.96(m，5H)，2.86～2.82(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.27～2.08(m，4H)，1.97～1.92(m，5H)，1.30(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.12分钟；MS计算值：506.3，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：Hex:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝4.984分钟，ee：100％。
峰2(E136)：单一未知异构体2，Rt＝5.123min
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.78(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.96(s，1H)，4.36～4.26(m，2H)，4.04～3.93(m，4H)，3.86～3.80(m，1H)，3.75～3.66(m，2H)，3.47～3.42(m，1H)，3.21～2.97(m，5H)，2.86～2.82(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.26～2.10(m，4H)，1.97～1.93(m，5H)，1.30(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.12分钟；MS计算值：506.3，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：Hex:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝5.123分钟，ee：98.2％。
峰3(E137)：单一未知异构体3，Rt＝5.284min
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.77(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.96(s，1H)，4.36～4.27(m，2H)，4.05～3.93(m，4H)，3.86～3.80(m，1H)，3.75～3.67(m，2H)，3.47～3.42(m，1H)，3.22～2.97(m，5H)，2.86～2.82(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.26～2.09(m，4H)，1.97～1.92(m，5H)，1.30(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.12分钟；MS计算值：506.3，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：Hex:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝5.284分钟，ee：97.7％。
峰4(E138)：单一未知异构体4，Rt＝5.439min
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.79(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.37～4.25(m，2H)，4.10～4.07(m，1H)，4.00～3.94(m，2H)，3.85～3.68(m，4H)，3.37～3.33(m，1H)，3.21～3.19(m，1H)，3.12～2.97(m，3H)，2.90～2.84(m，2H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.27～2.10(m，4H)，1.94～1.92(m，5H)，1.30(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.10分钟；MS计算值：506.3，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：Hex:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝5.439分钟，ee：97.1％。
峰5(E139)：单一未知异构体5，Rt＝5.546min
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.77(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.96(s，1H)，4.36～4.27(m，2H)，4.05～3.93(m，4H)，3.86～3.80(m，1H)，3.75～3.67(m，2H)，3.47～3.42(m，1H)，3.21～2.97(m，5H)，2.86～2.82(m，1H)，2.63(s，3H)，2.46(s，3H)，2.30～2.10(m，4H)，1.94～1.92(m，5H)，1.30(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.12分钟；MS计算值：506.3，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：Hex:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝5.546分钟，ee：100％。
峰6(E140)：单一未知异构体6，Rt＝6.033min
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.79(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.37～4.25(m，2H)，4.10～4.07(m，1H)，4.02～3.94(m，2H)，3.85～3.66(m，4H)，3.36～3.33(m，1H)，3.22～3.19(m，1H)，3.11～2.97(m，3H)，2.90～2.83(m，2H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.27～2.10(m，4H)，1.94～1.92(m，5H)，1.30(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.11分钟；MS计算值：506.3，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：Hex:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝6.033分钟，ee：99.3％。
峰7(E141)：单一未知异构体7，Rt＝6.335min
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.79(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.37～4.25(m，2H)，4.10～4.06(m，1H)，4.02～3.94(m，2H)，3.87～3.66(m，4H)，3.37～3.32(m，1H)，3.21～3.18(m，1H)，3.12～2.97(m，3H)，2.90～2.82(m，2H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.26～2.10(m，4H)，1.94～1.92(m，5H)，1.30(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.11分钟；MS计算值：506.3，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：Hex:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝6.335分钟，ee：100％。
峰8(E142)：单一未知异构体8，Rt＝6.937min
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.79(s，1H)，8.05(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.37～4.25(m，2H)，4.09～4.06(m，1H)，4.01～3.94(m，2H)，3.86～3.65(m，4H)，3.36～3.33(m，1H)，3.22～3.19(m，1H)，3.11～2.97(m，3H)，2.90～2.83(m，2H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.25～2.10(m，4H)，1.94～1.92(m，5H)，1.30(d，J＝6.4Hz，3H)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.6分钟]：Rt＝1.10分钟；MS计算值：506.3，MS实测值：507.3[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：Hex:EtOH(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5ml；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝6.937分钟，ee：98.5％。
实施例143
2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-N-((R)-四氢呋喃-3-基)嘧啶-4-胺
向(R)-2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-N-(四氢呋喃-3-基)嘧啶-4-胺(D131，235mg，0.600mmol)、二氢呋喃-3-酮(258mg，3.00mmol)和NaBH3CN(76.0mg，1.20mmol)在DCM(4.00mL)中的混合物中添加AcOH(催化剂)。将反应混合物在40℃搅拌过夜，然后用饱和NaHCO3(4滴)淬灭且浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化(x-bridgeC18，5μm，21.2x 150mm，25-80％MeCN-H2O(0.1％NH4HCO3)，流速：15ml/min，GT12分钟s.)以得到标题产物(102mg，37.0％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.79(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.77(s，1H)，5.11-5.09(m，1H)，4.45(s，1H)，4.03-3.90(m，4H)，3.83-3.70(m，4H)，3.21-3.19(m，1H)，3.06-2.97(m，2H)，2.87-2.82(m，1H)，2.61(s，3H)，2.46(s，3H)，2.40-1.92(m，4H)，1.61(s，6H)。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac在水中)；梯度(B％)，以6min]：Rt＝3.661分钟；MS计算值：462，MS实测值：463[M+H]+。
实施例144
2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-N-((S)-四氢呋喃-3-基)嘧啶-4-胺
标题化合物通过类似于E143所述的步骤制备，起始于(S)-2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)-N-(四氢呋喃-3-基)嘧啶-4-胺(D133)、二氢呋喃-3(2H)-酮和催化剂AcOH在DCM中的溶液和NaBH3CN，在室温过夜。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ8.79(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.77(s，1H)，5.17(br s，1H)，4.44(br，1H)，4.03-3.71(m，8H)，3.27-2.82(m，4H)，2.61(s，3H)，2.46(s，3H)，2.40-2.19(m，4H)，2.04-1.86(m，6H)。
LCMS[柱：C18；柱尺寸：4.6mm x 50mm；流动相：B(MeCN)：A(0.1％FA在水中)；梯度(B％)，以6min]：Rt＝2.585分钟；MS计算值：462，MS实测值：463[M+H]+。
实施例145、146、147和148
3-((2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氧基)环丁醇(单一未知异构体1，单一未知异构体2，单一未知异构体3；和单一未知异构体4)
向3-((2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)氧基)环丁醇(D139，500mg，1.27mmol)、二氢呋喃-3(2H)-酮(546mg，6.35mmol)和NaBH3CN(160mg，2.54mmol)在DCM(10.0mL)中的溶液中添加催化剂AcOH。将反应混合物在40℃搅拌3小时，用饱和NaHCO3(4滴)处理且浓缩。残余物通过硅胶色谱柱纯化(DCM/MeOH＝20:1)以得到标题产物(330mg，56.0％)，其为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.77(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)，7.05(s，1H)，4.87-4.83(m，1H)，4.12-4.09(m，1H)，4.05-3.79(m，6H)，3.49(s，3H)，3.29-2.87(m，6H)，2.70(s，3H)，2.46(s，3H)，2.41-2.36(m，3H)，2.20-2.13(m，3H)。
产物通过手性-HPLC分离以得到异构体1(1mg，0.3％)、异构体4(29mg，9％)和异构体2和3的混合物(100mg，30％)。
手性分离:
方法：柱：Superchiral S-AD，柱尺寸：250mm x 4.6mm，5μm；相：超临界CO2/IPA/NH3·H2O＝70/30/0.3；流速：12ml/min；波长：214nm。
峰1(E145)：单一未知异构体1
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD，柱尺寸：250mm x 4.6mm，5μm；相：Hex/IPA/DEA＝70/30/0.3；流速：12ml/min；波长：214nm]：Rt＝7.307分钟。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.77(s，1H)，8.08(s，1H)，7.51(s，1H)，7.04(s，1H)，5.44-5.38(m，1H)，4.71-4.65(m，1H)，4.03-3.70(m，4H)，3.22-2.81(m，4H)，2.70(s，3H)，2.59-2.49(m，4H)，2.46(s，3H)，2.26-2.11(m，3H)，1.94(s，6H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac在水中)；梯度(B％)]：Rt＝3.853分钟，MS计算值：463，MS实测值：464[M+H]+。
峰4(E148)：单一未知异构体4
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD，柱尺寸：250mm x 4.6mm，5μm；相：Hex/IPA/DEA＝70/30/0.3；流速：12ml/min；波长：214nm]：Rt＝11.055分钟。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.76(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)，7.06(s，1H)，4.89-4.81(m，1H)，4.13-4.08(m，1H)，4.02-3.70(m，4H)，3.22-3.19(m，1H)，3.06-2.98(m，4H)，2.88-2.81(m，1H)，2.69(s，3H)，2.46(s，3H)，2.30-2.10(m，5H)，1.97-1.83(m，6H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac在水中)；梯度(B％)]：Rt＝2.876分钟，MS计算值：463，MS实测值：464[M+H]+。
将异构体2和异构体3的混合物(100mg)进一步通过手性HPLC分离以得到手性纯的异构体2(30mg，30％)和异构体3(1mg，1％)。
手性制备型HPLC：柱：Superchiral S-AD，柱尺寸：250x 4.6mm，5μm；相：超临界CO2/EtOH/NH3·H2O＝80/20/0.3；流速：14ml/min；波长：214nm。
峰2(E146)：单一未知异构体2
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD，柱尺寸：250x 4.6mm，5μm；相：Hex/EtOH/DEA＝80/20/0.3；流速：14ml/min；波长：214nm。]：Rt＝20.253分钟。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.77(s，1H)，8.07(s，1H)，7.51(s，1H)，7.06(s，1H)，4.89-4.81(m，1H)，4.13-4.08(m，1H)，4.02-3.70(m，4H)，3.22-3.19(m，1H)，3.06-2.98(m，4H)，2.88-2.81(m，1H)，2.69(s，3H)，2.46(s，3H)，2.30-2.10(m，5H)，1.97-1.83(m，6H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6mm x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac在水中)；梯度(B％)]：Rt＝3.494分钟，MS计算值：463，MS实测值：464[M+H]+。
峰3(E147)：单一未知异构体3
手性HPLC[柱：Superchiral S-AD，柱尺寸：250x 4.6mm，5μm；相：Hex/EtOH/DEA＝80/20/0.3；流速：14ml/min；波长：214nm]：Rt＝16.535分钟。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.77(s，1H)，8.08(s，1H)，7.51(s，1H)，7.04(s，1H)，5.44-5.38(m，1H)，4.71-4.65(m，1H)，4.03-3.70(m，4H)，3.22-2.81(m，4H)，2.70(s，3H)，2.59-2.49(m，4H)，2.46(s，3H)，2.26-2.11(m，3H)，1.94(s，6H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6mm x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac在水中)；梯度(B％)]：Rt＝3.612分钟，MS计算值：463，MS实测值：464[M+H]+。
实施例149和150
((2S)-4-(6-(6-(1-(4-氟四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-1-基)-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(单一未知异构体1，Rt＝5.761分钟；单一未知异构体2，Rt＝6.008分钟)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于在甲苯中的6-(1-(4-氟四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑(D143)、(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇、CuI、K3PO4和DMEDA的混合物，在90℃在N2下保持2小时。根据合成途径和生物数据，产物可为顺式构型。
LC-MS[流动相：从50％水(0.1％FA)和50％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝0.36分钟；MS计算值：510.28，MS实测值：511.3[M+H]+。
手性分离：
方法：柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；流动相：超临界CO2:IPA(0.1％NH3·H2O)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃；EtOH中的样品溶液。
峰1(E149)：单一未知异构体1，Rt＝5.761分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.79(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)，6.96(s，1H)，5.30～5.14(m，1H)，4.33～3.93(m，6H)，3.78～3.65(m，5H)，3.36～3.32(m，1H)，3.11～3.08(m，2H)，2.98～2.87(m，3H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.35～2.29(m，2H)，2.00～1.80(m，5H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ176.32(s，1F)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝1.07分钟；MS计算值：510.28，MS实测值：511.4[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝5.761分钟，ee 99.53％。
峰2(E150)：单一未知异构体2，Rt＝6.008分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.72(s，1H)，7.99(s，1H)，7.44(s，1H)，6.89(s，1H)，5.24～5.08(m，1H)，4.23～3.83(m，6H)，3.74～3.58(m，5H)，3.29～3.25(m，1H)，3.13～3.04(m，2H)，2.89～2.76(m，3H)，2.57(s，3H)，2.39(s，3H)，2.28～2.22(m，2H)，1.94～1.75(m，5H)。
19F NMR(376MHz，CDCl3)δ176.32(s，1F)。
LC-MS[流动相：从80％水(0.1％FA)和20％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝1.07分钟；MS计算值：510.28，MS实测值：511.4[M+H]+。
手性HPLC[柱：AD-H；柱尺寸：0.46cm×15cm；注射：2μl；流动相：HEP:IPA(0.1％DEA)＝60:40；流速：0.5mL/min；波长：UV 254nm；温度：25℃]：Rt＝6.008分钟，ee：99.09％。
实施例151、152、153和154
4-(4-(1-(6-((S)-2-(羟基甲基)吗啉代)-2-甲基嘧啶-4-基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)四氢呋喃-3-醇(单一未知异构体1，单一未知异构体2，单一未知异构体3；和单一未知异构体4)
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于4-(4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)四氢呋喃-3-醇(D141)，(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D3)、CuI和K3PO4在甲苯和THF中的悬浮液和N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺，在80℃在N2下保持3h。
LC-MS[流动相：从70％水(0.1％FA)和30％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经2.0分钟]：Rt＝1.09分钟；MS计算值：508.3，MS实测值：509.4[M+H]+。
手性分离:
AD-H 4.6×250mm，5um(Daicel)，流动相：超临界CO2/EtOH(0.2％NH3·H2O)＝60/40，流速：0.5mL/min，温度：35℃
峰1(E151)：单一未知异构体1，Rt＝3.380分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.79(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.49～4.45(m，1H)，4.33～4.27(m，2H)，4.17～4.13(m，1H)，4.08～3.99(m，2H)，3.79～3.66(m，6H)，3.38～3.33(m，1H)，3.15～3.07(m，1H)，2.98～2.83(m，4H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.37～2.28(m，2H)，1.96～1.88(m，4H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.24分钟；MS计算值：508.3，MS实测值：509.4[M+H]+。
手性HPLC[AD-H 4.6×250mm，5um(Daicel)，流动相：己烷/EtOH(0.2％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，温度：35℃]：Rt＝3.380分钟，ee：98.44％
峰2(E152)：单一未知异构体2，Rt＝4.123分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.79(s，1H)，8.06(s，1H)，7.50(s，1H)，6.95(s，1H)，4.49～4.45(m，1H)，4.32～4.28(m，2H)，4.18～4.14(m，1H)，4.08～4.00(m，2H)，3.79～3.67(m，6H)，3.37～3.34(m，1H)，3.15～3.08(m，1H)，2.98～2.83(m，4H)，2.64(s，3H)，2.46(s，3H)，2.36～2.28(m，2H)，1.96～1.86(m，4H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.22分钟；MS计算值：508.3，MS实测值：509.4[M+H]+。
手性HPLC[AD-H 4.6mm×250mm，5μm(Daicel)，相：己烷/EtOH(0.2％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，温度：35℃]：Rt＝4.123分钟，ee：97.32％
峰3(E153)：单一未知异构体2，Rt＝4.881分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.80(s，1H)，8.06(s，1H)，7.51(s，1H)，6.96(s，1H)，4.33～4.26(m，3H)，4.09～3.96(m，4H)，3.83～3.66(m，5H)，3.27～3.24(m，1H)，3.15～3.07(m，1H)，2.98～2.83(m，4H)，2.64(s，3H)，2.51～2.46(m，1H)，2.46(s，3H)，2.37～2.30(m，1H)，1.94～1.86(m，4H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.21分钟；MS计算值：508.3，MS实测值：509.4[M+H]+。
手性HPLC[AD-H 4.6mm×250mm，5μm，相：己烷/EtOH(0.2％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，温度：35℃]：Rt＝4.881分钟，ee：99.38％
峰4(E154)：单一未知异构体2，Rt＝6.712分钟
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.88(s，1H)，8.07(s，1H)，7.54(s，1H)，6.95(s，1H)，4.66～4.62(m，1H)，4.32～4.29(m，2H)，4.21～4.16(m，2H)，4.08～4.01(m，3H)，3.98～3.94(m，1H)，3.80～3.68(m，5H)，3.45～3.41(m，1H)，3.15～2.92(m，5H)，2.62(s，3H)，2.47(s，3H)，2.47～2.36(m，2H)，2.17～2.11(m，2H)。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，经9分钟]：Rt＝4.20分钟；MS计算值：508.3，MS实测值：509.4[M+H]+。
手性HPLC[AD-H 4.6×250mm，5um(Daicel)，流动相：己烷/EtOH(0.2％DEA)＝60/40，流速：0.5mL/min，温度：35℃]：Rt＝6.712分钟，ee：98.66％
实施例155
((2S)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-(4-甲基四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
标题化合物通过类似于E1和E2所述的步骤制备，起始于5-甲基-6-(1-(4-甲基四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑(D149)和(S)-(4-(6-碘-2-甲基嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D3)在甲苯中的悬浮液、CuI、K3PO4·3H2O和DMEDA，在100℃保持4h。
LC-MS[流动相：从90％水(0.1％FA)和10％MeCN(0.1％FA)至5％水(0.1％FA)和95％MeCN(0.1％FA)，以10.0分钟]：Rt＝4.38分钟；MS计算值：506.3，MS实测值：507.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.66(s，1H)，8.10(s，1H)，7.54(s，1H)，6.97(s，1H)，4.37～4.29(m，3H)，4.09～4.07(m，3H)，3.90～3.87(m，1H)，3.78～3.70(m，7H)，3.22～3.17(m，3H)，3.07～3.02(m，4H)，2.70(s，3H)，2.70～2.62(m，2H)，2.46(s，3H)，2.12～2.09(m，2H)，1.37～1.35(d，J＝7.2Hz，3H)。
实施例156
(2-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
在封闭管中将(2-甲基-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇(D157，350mg，0.800mmol)、甲磺酸(R)-四氢呋喃-3-基酯(400mg，2.41mmol)和K2CO3(443mg，3.21mmol)在MeCN(7.00mL)中的混合物在100℃搅拌40小时。反应混合物用H2O(30mL)稀释，用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层浓缩且通过硅胶色谱柱纯化(DCM/MeOH＝20/1)以得到产物(115mg，28.0％)，其为黄色固体。产物进一步通过制备型HPLC纯化(Kinete EVO C18 SN H16-100024 phenomenex，Waters-2 Kinete EVO C18，5μm，21.2mm x 150mm梯度：B％(20-80％)，A(0.1％NH4HCO3在水中)，B(MeCN)，UV：214nm，流速15ml/min，12min-GT 7.5分钟s)以得到标题产物(60.0mg，15.0％)，其为黄色固体。
1HNMR(400MHz，CD3OD)：δ8.77(s，1H)，8.14(s，1H)，7.58(s，1H)，7.00(s，1H)，4.58(br s，1H)，4.05-4.00(m，1H)，3.95-3.71(m，7H)，3.63-3.50(m，4H)，3.46-3.38(m，2H)，3.25-3.24(m，1H)，3.08-3.07(m，1H)，2.73-2.66(m，2H)，2.59(s，3H)，2.48(s，3H)，2.30-2.26(m，1H)，2.08-1.96(m，4H)，1.23(s，3H)。
LC-MS[柱：C18；柱尺寸：4.6mm x 50mm；流动相：B(MeCN)，A(0.02％NH4Ac在水中)；梯度(B％)]：Rt＝3.453分钟，MS计算值：506，MS实测值：507[M+H]+。
F.测试和数据
如上所述，本发明化合物是LRRK2激酶抑制剂并可用于治疗由LRRK2介导的疾病。本发明化合物的生物学活性和/或性质可通过使用任意合适的测试方法测定，包括用于确定作为LRRK2激酶抑制剂的候选化合物的活性的测试以及组织和体内模型。
1.测试
a.全长G2019人LRRK2抑制质谱分析测试
这种富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)抑制的测定基于肽‘LRRKtide’(LRRKtide：RLGRDKYKT*LRQIRQ且“*”是指磷酸化位点)和磷酸化‘LRRKtide’的直接测量，其使用高通量RapidFire质谱分析测试。抑制剂是降低LRRKtide向磷酸-LRRKtide转化的化合物。
人G2019 LRRK2质粒制备
用于PCR克隆的引物:
pHTBV-F:SEQ ID No：1
LRRK2 wt-F1:SEQ ID No：2
LRRK2 wt-R1：SEQ ID No：3
LRRK2 wt-F2：SEQ ID No：4
LRRK2 wt-R2：SEQ ID No：5
LRRK2 wt-F3:SEQ ID No：6
pHTBV-R：SEQ ID No：7
pHTBV1-N-Flag-hu LRRK2通过用上述引物从pcDNA3.1(+)_人_LRRK2(NCBI参考序列：NP_940980.3)PCR扩增具有N末端Flag标签的全长LRRK2序列而产生，且克隆到BamHI和KpnI位点之间的pHTBV1mcs3载体(vector)中。
G2019全长Flag-LRRK2编码序列为SEQ ID No：8。
人G2019全长N末端flag标记的LRRK2蛋白的翻译氨基酸序列为SEQ ID No：9。
昆虫细胞培养
在500-ml摇瓶(Erlenmeyer，Corning)中的SF 900II SFM中，将Sf9昆虫细胞(Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA)维持在27℃。将细胞维持在指数生长期并且每周传代两次。对于更大的体积，将细胞在2升摇瓶(Erlenmeyer，Corning)中生长，同时在27℃培养摇床上以120rpm搅拌。
BacMam病毒的产生
为了产生重组BacMam病毒，通过基因型正常的人LRRK2 BacMam质粒转化DH10Bac感受态细胞(10361-012，Invitrogen)以产生重组杆状病毒DNA。将Sf9昆虫细胞与重组杆状病毒DNA和cellfectin(10362-100，Invitrogen)的混合物共转染。在27℃温育4小时后，用含有5％HI FBS的Sf-900 III SFM培养基(10100147，Invitrogen)代替转染培养基。细胞进一步孵育4天。收集含有杆状病毒的感染的细胞培养基(P0病毒原液)并通过以200-300ulP0进一步感染200ml Sf9细胞扩增。
通过BacPAKRapid滴度对BacMam病毒滴度进行定量
根据制造商的方案，使用BacPAKPapid Titer试剂盒(631406，Clontech)测定作为噬菌斑形成单位(pfu)/ml测量的病毒滴度。将以3×105个细胞/孔接种于96孔板中的Sf9细胞与连续稀释的病毒原液一起在27℃孵育1小时，每孔加入50μl甲基纤维素覆盖物，随后孵育43～47h。然后将细胞固定在4％多聚甲醛(PFA)中。用稀释的正常山羊血清封闭细胞后，将小鼠抗gp64抗体加入到细胞中。温育30分钟后，将细胞用含有0.1％Triton-X100(PBST)的磷酸盐缓冲液洗涤，并用山羊抗小鼠抗体/HRP缀合物再孵育30分钟。随后是蓝色过氧化物酶底物，其通过深蓝色检测单个感染的细胞和感染细胞的病灶。
蛋白质表达和纯化
a)Flag标记的全长G2019人LRRK2的表达
将HEK293 6E细胞在具有5％CO2的潮湿气氛的37℃培养箱中以110rpm旋转在定轨摇床中孵育。在转导当天，细胞活力高于98％，细胞密度在1x106～1.5x106个细胞/ml的范围内。
将HEK293 6E细胞以1,000rpm离心10分钟，然后将细胞以1×106个细胞/ml的密度重悬于含有0.1％F-68(Invitrogen:24040-032)但不含抗生素(G418)的新鲜Freestyle293表达培养基(Invitrogen:12338)中。
具有Flag-hu LRRK2(基因型正常)基因的BacMam病毒以40,000g离心2小时，然后重新悬浮于新鲜的Freestyle 293表达培养基中。将重悬的病毒以10的MOI加入细胞中。将细胞以110rpm旋转在定轨摇床中，在具有5％CO2的空气中的潮湿气氛的37℃培养箱中孵育。在转导后大约48小时，通过以4,000rpm离心20分钟收集培养物，并且将沉淀物冷冻用于纯化。
b)Flag标记的全长G2019人LRRK2的纯化
将细胞沉淀物与蛋白酶抑制剂(Roche：04693132001)和benzonase(MerckMillipore：70746-3CN)一起以供应商建议的推荐浓度重新悬浮于(20mL/升细胞培养物)裂解缓冲液(50mM TrisHCl pH7.5(4℃)、500mM NaCl、0.5mM EDTA、0.1％TritonX-100、10％甘油，新鲜添加2mM DTT)中。将悬浮细胞在冰上超声破碎30分钟(2秒开/4秒关，20％幅度)，并在4℃以10,000rpm离心30分钟。将上清液与每升1ml抗Flag磁珠(Sigma-Aldrich：M8823)的细胞培养物在4℃孵育3小时，然后用5mL(5柱体积)结合缓冲液(50mM Tris pH7.5@4C、500mM NaCl、0.5mM EDTA、0.1％TritonX-100、10％甘油、新鲜添加2mM DTT)洗涤磁珠三次。用洗脱缓冲液(50mM Tris pH7.5@4C、500mM NaCl、0.5mM EDTA、0.1％TritonX-100、10％甘油，新鲜添加2mM DTT，250ug/ml Flag肽(Sigma-Aldrich：F3290))在4℃洗脱Flag标记的LRRK2蛋白2小时。通过Zeba Spin脱盐柱，7K MWCO(Thermo-Fisher：89893)去除Flag肽，并将洗脱的LRRK2蛋白的缓冲液交换到存储缓冲液中(50mM Tris pH7.5@4C、150mM NaCl、0.5mM EDTA、0.02％Triton X–100、2mM DTT和50％甘油)，使用Amicon超级离心过滤装置(100kD)(Merck：UFC910096)。将含有LRRK2蛋白的级分合并、等分并在-80℃保存。通过Bradford蛋白测定确定蛋白浓度，并通过NuPAGNovex 4-12％双Tris蛋白凝胶(Invitrogen：NP0322BOX)分析蛋白纯度。
测定方案
1)将10mM测试化合物溶于100％DMSO中，并以1:4连续稀释。然后将100nL的该稀释系列加入到384孔v形底聚丙烯板中，不包括第6和18列。将100nL DMSO加入第6和18列中作为对照孔。测定稀释度得出100μM测试化合物的最高最终测定浓度。
2)使用多点混合分配器将50ul在实验室级水中的1％甲酸加入第18列中作为预先停止的测定对照。
3)使用多点混合分配器，将在测定缓冲液(50mM Hepes(pH 7.2)、10mM MgCl2、150mM NaCl、5％甘油、0.0025％triton X-100和1mM DTT)中的5uL含有50nM纯化的重组全长Flag-LRRK2的‘酶溶液’添加至除了所有孔中，得到25nM LRRK2酶的最终测定浓度。这导致第6列(酶加DMSO)给出0％抑制，而第18列给出100％抑制(预先停止的对照)。然后将测试板在室温孵育30分钟。
4)使用多点混合分配器将5uL‘底物溶液’(含有50uM LRRKtide肽底物和4mM ATP)加入到板的所有孔中，得到25uM LRRKtide和2mM ATP的最终测定浓度。然后将测试板在室温孵育1小时。(根据不同酶批次的反应速率和线性，孵育可能会有所不同)。
5)向所有孔(除了第18列)中加入50ul在实验室级水中的1％甲酸以淬灭反应，并将板以3000rpm离心10分钟。然后在连接到AB Sciex API 4000三重四极杆质谱仪的Agilent RapidFire高通量固相萃取系统上分析测试板，具有以下设定：
RapidFire设定:
·Sip高度＝2mm，抽吸＝500ms，上样时间＝3000ms，洗脱时间＝3000ms，再平衡＝500ms，
·流速：泵1＝1.5mL/min，泵2＝1.25mL/min，泵3＝0.8mL/min
质谱仪设定
·LRRKtide检测设定：Q1质量644.8Da，Q3质量638.8，分布电势76伏特，碰撞能量37伏特，CXP 34伏特
·磷酸-LRRKtide检测设定：Q1质量671.4Da，Q3质量638.8，分布电势76伏特，碰撞能量37伏特，CXP 34伏特。
·使用C4柱，运行缓冲液为：A(水相)0.1％甲酸的水溶液B(有机相)0.1％甲酸，80％乙腈，20％水
·碰撞气体：12，气帘气：25,离子源气体(1)：60,离子源气体(2)：60,离子喷雾电压：5500，温度：600，Interfaec Heater：ON.
·分辨力Q1：低，分辨力Q3：低。
6)使用ActivityBase软件(IDBS)分析数据。使用以下公式计算从LRRKtide转化为磷酸-LRRKtide的转化百分比：
转化％＝(磷酸-LRRKtide产物峰面积/(磷酸-LRRKtide产物峰面积+LRRKtide底物峰面积))*100
b.重组细胞的LRRK2 AlphaScreen测定
为了确定在细胞中化合物抑制LRRK2激酶活性的活性，采用观测到的LRRK2 Ser935磷酸化的LRRK2激酶-依赖性调节(Dzamko等人，2010，Biochem.J.430：405-413)以开发在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的LRRK2 Ser935磷酸化的定量的基于384孔板的免疫测定，所述细胞系被设计用以过表达重组全长LRRK2蛋白。
表达全长重组LRRK2的BacMam病毒购自Invitrogen并通过在补充有3％胎牛血清的Sf-900 III SFM培养基中以0.3的MOI培养SF-9细胞4-5天进行扩增。然后将感染的细胞培养物以2000g离心20分钟，通过抗-gp64菌斑试验确定病毒上清液滴度并在4℃储存。
通过标准方法(PerkinElmer)将亲和纯化的抗-磷酸化LRRK2 Ser935羊多克隆抗体(Dzamko等人，2010，Biochem.J.430：405-413)进行生物素化。抗-LRRK2兔多克隆抗体购自Novus Biologicals。AlphaScreen蛋白AIgG试剂盒(包含受体和供体珠粒)购自PerkinElmer。
SH-SY5Y细胞在含10％透析的胎牛血清的DMEM/F12培养基中生长并通过用0.5％胰蛋白酶-EDTA在37℃处理5分钟进行收集，然后以1000rpm离心4分钟。将该细胞沉淀物以200,000细胞/ml再悬于Opti-MEM减血清培养基(Invitrogen)中并与BacMam LRRK2病毒以MOI＝50进行混合。然后将50μl细胞溶液分散于384孔板的各孔中并在37℃，5％CO2培养24小时。
将连续稀释的测试化合物在Opti-MEM减血清培养基(Invitrogen)中制备并将5.6ul从化合物板转移至细胞测试板以实现10uM的最高最终测试浓度。在一些孔中使用DMSO作为对照。将细胞在37℃，5％CO2培养60分钟。然后除去该培养基并将细胞通过加入20ul细胞裂解缓冲液(Cell Signaling Technology)裂解并在4℃培养20分钟。然后将10ul的抗体/受体珠粒混合物[(1/1000生物素化-pS935 LRRK2抗体，1/1000总-LRRK2抗体，1/100受体珠粒在AlphaScreen检测缓冲液(25mM Hepes(pH 7.4)，0.5％Triton X-100，1mg/ml葡聚糖500和0.1％BSA)中]加至各孔并将板在环境温度避光培养2小时。然后将10μl的供体珠粒溶液(1/33.3供体珠粒在AlphaScreen检测缓冲液中)加至各孔。在环境温度避光培养额外的2小时后，将该板在EnVisionTM板读取器上在发射520-620nm和激发680nm处进行读取。剂量响应曲线数据基于S形剂量-响应模型。
c.FASSIF溶解度测试
可以在pH 6.5的禁食状态模拟肠介质(FaSSIF)中评估化合物溶解度。将一定量的试验化合物与一定体积的FaSSIF混合以制备约1mg/ml的悬浮液。将悬浮液在37℃下在水浴振荡器中温育24小时。在第4小时和第24小时，将悬浮液以14K rpm离心15分钟。取出100μl上清液并用相同体积的50％乙腈水溶液稀释，并用UPLC(超高效液相色谱法)分析。基于测试化合物的峰面积计算FaSSIF溶解度。
FaSSIF(170ml)制剂将100mg卵磷脂和274mg(anhydequiv)NaTaurocholate溶解在约150ml pH6.5缓冲液中。用pH6.5缓冲液使溶液达到170ml的体积。
pH6.5缓冲溶液(1L)制剂将4.083g KH2PO4和7.456g KCl溶解在800ml水中，随后加入100ml 0.1M NaOH。用水将溶液调至1L体积。测量缓冲溶液的pH值并调节至6.50±0.1。
UPLC校准和溶解度计算的标准溶液2μM、20μM和200μM DMSO(50％ACN水)溶液。
UPLC方法和参数
仪器：Waters ACQUITY UPLC System
柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18(1.7μm，2.1×50mm)
流动相：A：水中的0.1％TFA/B：CAN中的0.1％TFA
梯度：0分钟(A95％/B 5％)，2分钟(A5％/B 95％)，2.5分钟(A5％/B95％)，2.6分钟(A95％/B 5％)，3分钟(A95％/B 5％)
流速：0.8mL/min；柱温：40℃；注射体积：1.0μL；UV检测：280nm
d.CLND溶解度测试
基于已知方案，可以通过CLND(化学发光氮检测)溶解度测定来评估化合物的动力学溶解度(参见，例如，Bhattachar S.N.；Wesley J.A.；Seadeek C.,Evaluation of theChemiluminescent Nitrogen Detector for Solubility Determinations to SupportDrug Discovery,J.Pharm.Biomed.Anal.2006(41):152-157；Kestranek A,Chervenek A,Logenberger J,Placko S.Chemiluminescent Nitrogen Detection(CLND)to MeasureKinetic Aqueous Solubility,CurrProtoc Chem Biol.,2013,5(4):269-80)。通常，用pH7.4磷酸盐缓冲盐水将5μl 10mM DMSO的测试化合物储备溶液稀释至100μl，在室温下平衡1小时，通过Millipore MultiscreenHTS-PCF滤板(MSSL BPC)过滤。通过适当校准的流动注射化学发光氮检测来定量滤液。
2.测试数据
实施例E1-E67、E74-E77、E94、E95、E100、E110、E127、E129、E136、E149、E99、E141、E102、E143、E155、E132、E140、E156、E106、E113、E128、E137、E142、E131、E144、E133、E139、E114、E145、E147和E148的化合物，在重组细胞LRRK2 AlphaScreen测定中测试并显示pIC50≥6。
实施例E1、E4-E9、E11、E13、E14、E17、E19、E21、E22、E24、E25、E29、E30、E34、E44、E47-E50、E53-E55、E60、E63、E64、E74-E76、E126、E103、E119、E124、E97、E98、E130、E104、E116、E150、E153、E105、E107、E138、E152、E96、E101、E134、E135和E151的化合物在重组细胞LRRK2 AlphaScreen测定中测试并显示pIC50≥7。
实施例E5、E29、E53、E55、E117、E121、E120、E118、E123、E115、E122和E125的化合物在重组细胞LRRK2 AlphaScreen测定中测试并显示pIC50≥8。
在重组细胞LRRK2 AlphaScreen测定中实施例5显示pIC50为8.3。此外，实施例E1、E4、E34、E35、E36、E96、E138显示pIC50分别为6.9、7.0、7.0、6.7、6.8、7.0和7.2。
实施例E1-E6、E13、E14、E16、E30、E33、E34、E39-E46、E117、E125、E150、E113、E128、E142、E133、E139、E111和E146的化合物在全长G2019人LRRK2抑制质谱分析测定中测试并显示pIC50≥6.0。
实施例E121、E123、E122、E126、E103、E119、E124、E130、E104、E116、E153、E105、E107、E138、E101、E134、E135、E94、E95、E127、E129、E136、E149、E141、E102、E155、E140、E156、E106和E137的化合物在全长G2019人LRRK2抑制质谱分析测定中测试并显示pIC50≥7.0。
实施例E120，E118和E115的化合物在全长G2019人LRRK2抑制质谱分析测定中测试并显示pIC50≥8.0。
实施例E1、E4、E34、E 95和E138的化合物在全长G2019人LRRK2抑制质谱分析测定中测试且显示pIC50分别为7.1、7.6、7.2、7.4和7.6。
在FaSSIF溶解度测定和/或CLIND溶解度测定中测试了本发明的某些化合物。与WO2017/012576中公开的化合物相比，测试的化合物表现出意想不到的溶解度增加的趋势。在至少一种溶解度测定中，溶解度增加对于本发明的一些化合物尤其显著。说明性地，本发明的实施例E1、E4、E103、E135、E136和E137的FaSSIF(在24小时)溶解度分别是WO 2017/012576的实施例E183、E182、E177、E267、E268和E269的约2.5至15倍。本发明的实施例E4、E102、E121、E134、E135和E136的CLIND溶解度分别是WO 2017/012576的实施例E182、E176、E171、E266、E267和E268的约3至16倍。
3.序列表
SEQ ID NO：1用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物：pHTBV-F
SEQ ID NO：2用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物：LRRK2 wt-F1
SEQ ID NO：3用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物：LRRK2 wt-R1
SEQ ID NO：4用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物：LRRK2 wt-F2
SEQ ID NO：5用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物：LRRK2 wt-R2
SEQ ID NO：6用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物：LRRK2 wt-F3
SEQ ID NO：7用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物：pHTBV-R
SEQ ID NO：8G2019全长Flag-LRRK2编码序列
SEQ ID NO：9人G2019全长LRRK2 flag标记蛋白的翻译蛋白序列
SEQ ID NO：10：‘LRRKtide’肽
H-RLGRDKYKTLRQIRQ-OH
序列表
<110> 葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司
<120> 化合物
<130> PC66268
<150> PCT/CN2017/072590
<151> 2017-01-25
<160> 10
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物: pHTBV-F
<400> 1
gatctcgacg ggcgcggatc caccatggat tacaaggatg acgacgat 48
<210> 2
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物: LRRK2 wt-F1
<400> 2
catggattac aaggatgacg acgataagat ggctagtggc agctgtcag 49
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<212> DNA
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<220>
<223> 用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物: LRRK2 wt-R1
<400> 3
gttcacgaga tccactattc agtaagagtt ccaccaattt gggactg 47
<210> 4
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<212> DNA
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<220>
<223> 用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物: LRRK2 wt-F2
<400> 4
gaatagtgga tctcgtgaac aag 23
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<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物: LRRK2 wt-R2
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gtcagacaaa ctgcttggaa ccagc 25
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<223> 用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物: LRRK2 wt-F3
<400> 6
ctggttccaa gcagtttgtc tgaccacagg cctgtgatag 40
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<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 用于人G2019 LRRK2质粒制备的PCR克隆的引物: pHTBV-R
<400> 7
gttctagcca agcttggtac cctattactc aacagatgtt cgtctc 46
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<212> DNA
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<223> G2019全长Flag-LRRK2编码序列
<400> 8
atggattaca aggatgacga cgataagatg gctagtggca gctgtcaggg gtgcgaagag 60
gacgaggaaa ctctgaagaa gttgatagtc aggctgaaca atgtccagga aggaaaacag 120
atagaaacgc tggtccaaat cctggaggat ctgctggtgt tcacgtactc cgagcacgcc 180
tccaagttat ttcaaggcaa aaatatccat gtgcctctgt tgatcgtctt ggactcctat 240
atgagagtcg cgagtgtgca gcaggtgggt tggtcacttc tgtgcaaatt aatagaagtc 300
tgtccaggta caatgcaaag cttaatggga ccccaggatg ttggaaatga ttgggaagtc 360
cttggtgttc accaattgat tcttaaaatg ctaacagttc ataatgccag tgtaaacttg 420
tcagtgattg gactgaagac cttagatctc ctcctaactt caggtaaaat caccttgctg 480
atactggatg aagaaagtga tattttcatg ttaatttttg atgccatgca ctcatttcca 540
gccaatgatg aagtccagaa acttggatgc aaagctttac atgtgctgtt tgagagagtc 600
tcagaggagc aactgactga atttgttgag aacaaagatt atatgatatt gttaagtgcg 660
ttaacaaatt ttaaagatga agaggaaatt gtgcttcatg tgctgcattg tttacattcc 720
ctagcgattc cttgcaataa tgtggaagtc ctcatgagtg gcaatgtcag gtgttataat 780
attgtggtgg aagctatgaa agcattccct atgagtgaaa gaattcaaga agtgagttgc 840
tgtttgctcc ataggcttac attaggtaat tttttcaata tcctggtatt aaacgaagtc 900
catgagtttg tggtgaaagc tgtgcagcag tacccagaga atgcagcatt gcagatctca 960
gcgctcagct gtttggccct cctcactgag actattttct taaatcaaga tttagaggaa 1020
aagaatgaga atcaagagaa tgatgatgag ggggaagaag ataaattgtt ttggctggaa 1080
gcctgttaca aagcattaac gtggcataga aagaacaagc acgtgcagga ggccgcatgc 1140
tgggcactaa ataatctcct tatgtaccaa aacagtttac atgagaagat tggagatgaa 1200
gatggccatt tcccagctca tagggaagtg atgctctcca tgctgatgca ttcttcatca 1260
aaggaagttt tccaggcatc tgcgaatgca ttgtcaactc tcttagaaca aaatgttaat 1320
ttcagaaaaa tactgttatc aaaaggaata cacctgaatg ttttggagtt aatgcagaag 1380
catatacatt ctcctgaagt ggctgaaagt ggctgtaaaa tgctaaatca tctttttgaa 1440
ggaagcaaca cttccctgga tataatggca gcagtggtcc ccaaaatact aacagttatg 1500
aaacgtcatg agacatcatt accagtgcag ctggaggcgc ttcgagctat tttacatttt 1560
atagtgcctg gcatgccaga agaatccagg gaggatacag aatttcatca taagctaaat 1620
atggttaaaa aacagtgttt caagaatgat attcacaaac tggtcctagc agctttgaac 1680
aggttcattg gaaatcctgg gattcagaaa tgtggattaa aagtaatttc ttctattgta 1740
cattttcctg atgcattaga gatgttatcc ctggaaggtg ctatggattc agtgcttcac 1800
acactgcaga tgtatccaga tgaccaagaa attcagtgtc tgggtttaag tcttatagga 1860
tacttgatta caaagaagaa tgtgttcata ggaactggac atctgctggc aaaaattctg 1920
gtttccagct tataccgatt taaggatgtt gctgaaatac agactaaagg atttcagaca 1980
atcttagcaa tcctcaaatt gtcagcatct ttttctaagc tgctggtgca tcattcattt 2040
gacttagtaa tattccatca aatgtcttcc aatatcatgg aacaaaagga tcaacagttt 2100
ctaaacctct gttgcaagtg ttttgcaaaa gtagctatgg atgattactt aaaaaatgtg 2160
atgctagaga gagcgtgtga tcagaataac agcatcatgg ttgaatgctt gcttctattg 2220
ggagcagatg ccaatcaagc aaaggaggga tcttctttaa tttgtcaggt atgtgagaaa 2280
gagagcagtc ccaaattggt ggaactctta ctgaatagtg gatctcgtga acaagatgta 2340
cgaaaagcgt tgacgataag cattgggaaa ggtgacagcc agatcatcag cttgctctta 2400
aggaggctgg ccctggatgt ggccaacaat agcatttgcc ttggaggatt ttgtatagga 2460
aaagttgaac cttcttggct tggtccttta tttccagata agacttctaa tttaaggaaa 2520
caaacaaata tagcatctac actagcaaga atggtgatca gatatcagat gaaaagtgct 2580
gtggaagaag gaacagcctc aggcagcgat ggaaattttt ctgaagatgt gctgtctaaa 2640
tttgatgaat ggacctttat tcctgactct tctatggaca gtgtgtttgc tcaaagtgat 2700
gacctggata gtgaaggaag tgaaggctca tttcttgtga aaaagaaatc taattcaatt 2760
agtgtaggag aattttaccg agatgccgta ttacagcgtt gctcaccaaa tttgcaaaga 2820
cattccaatt ccttggggcc catttttgat catgaagatt tactgaagcg aaaaagaaaa 2880
atattatctt cagatgattc actcaggtca tcaaaacttc aatcccatat gaggcattca 2940
gacagcattt cttctctggc ttctgagaga gaatatatta catcactaga cctttcagca 3000
aatgaactaa gagatattga tgccctaagc cagaaatgct gtataagtgt tcatttggag 3060
catcttgaaa agctggagct tcaccagaat gcactcacga gctttccaca acagctatgt 3120
gaaactctga agagtttgac acatttggac ttgcacagta ataaatttac atcatttcct 3180
tcttatttgt tgaaaatgag ttgtattgct aatcttgatg tctctcgaaa tgacattgga 3240
ccctcagtgg ttttagatcc tacagtgaaa tgtccaactc tgaaacagtt taacctgtca 3300
tataaccagc tgtcttttgt acctgagaac ctcactgatg tggtagagaa actggagcag 3360
ctcattttag aaggaaataa aatatcaggg atatgctccc ccttgagact gaaggaactg 3420
aagattttaa accttagtaa gaaccacatt tcatccctat cagagaactt tcttgaggct 3480
tgtcctaaag tggagagttt cagtgccaga atgaattttc ttgctgctat gcctttcttg 3540
cctccttcta tgacaatcct aaaattatct cagaacaaat tttcctgtat tccagaagca 3600
attttaaatc ttccacactt gcggtcttta gatatgagca gcaatgatat tcagtaccta 3660
ccaggtcccg cacactggaa atctttgaac ttaagggaac tcttatttag ccataatcag 3720
atcagcatct tggacttgag tgaaaaagca tatttatggt ctagagtaga gaaactgcat 3780
ctttctcaca ataaactgaa agagattcct cctgagattg gctgtcttga aaatctgaca 3840
tctctggatg tcagttacaa cttggaacta agatcctttc ccaatgaaat ggggaaatta 3900
agcaaaatat gggatcttcc tttggatgaa ctgcatctta actttgattt taaacatata 3960
ggatgtaaag ccaaagacat cataaggttt cttcaacagc gattaaaaaa ggctgtgcct 4020
tataaccgaa tgaaacttat gattgtggga aatactggga gtggtaaaac caccttattg 4080
cagcaattaa tgaaaaccaa gaaatcagat cttggaatgc aaagtgccac agttggcata 4140
gatgtgaaag actggcctat ccaaataaga gacaaaagaa agagagatct cgtcctaaat 4200
gtgtgggatt ttgcaggtcg tgaggaattc tatagtactc atccccattt tatgacgcag 4260
cgagcattgt accttgctgt ctatgacctc agcaagggac aggctgaagt tgatgccatg 4320
aagccttggc tcttcaatat aaaggctcgc gcttcttctt cccctgtgat tctcgttggc 4380
acacatttgg atgtttctga tgagaagcaa cgcaaagcct gcatgagtaa aatcaccaag 4440
gaactcctga ataagcgagg gttccctgcc atacgagatt accactttgt gaatgccacc 4500
gaggaatctg atgctttggc aaaacttcgg aaaaccatca taaacgagag ccttaatttc 4560
aagatccgag atcagcttgt tgttggacag ctgattccag actgctatgt agaacttgaa 4620
aaaatcattt tatcggagcg taaaaatgtg ccaattgaat ttcccgtaat tgaccggaaa 4680
cgattattac aactagtgag agaaaatcag ctgcagttag atgaaaatga gcttcctcac 4740
gcagttcact ttctaaatga atcaggagtc cttcttcatt ttcaagaccc agcactgcag 4800
ttaagtgact tgtactttgt ggaacccaag tggctttgta aaatcatggc acagattttg 4860
acagtgaaag tggaaggttg tccaaaacac cctaagggaa ttatttcgcg tagagatgtg 4920
gaaaaatttc tttcaaagaa aaggaaattt ccaaagaact acatgtcaca gtattttaag 4980
ctcctagaaa aattccagat tgctttgcca ataggagaag aatatttgct ggttccaagc 5040
agtttgtctg accacaggcc tgtgatagag cttccccatt gtgagaactc tgaaattatc 5100
atccgactat atgaaatgcc ttattttcca atgggatttt ggtcaagatt aatcaatcga 5160
ttacttgaga tttcacctta catgctttca gggagagaac gagcacttcg cccaaacaga 5220
atgtattggc gacaaggcat ttacttaaat tggtctcctg aagcttattg tctggtagga 5280
tctgaagtct tagacaatca tccagagagt ttcttaaaaa ttacagttcc ttcttgtaga 5340
aaaggctgta ttcttttggg ccaagttgtg gaccacattg attctctcat ggaagaatgg 5400
tttcctgggt tgctggagat tgatatttgt ggtgaaggag aaactctgtt gaagaaatgg 5460
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attgcaaaga ttgctgacta cggcattgct cagtactgct gtagaatggg gataaaaaca 6120
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gaggaagttg ctgatagtag aatattgtgc ttagccttgg tgcatcttcc tgttgaaaag 6660
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gggaaaaaga gacataccct agaaaagatg actgattctg tcacttgttt gtattgcaat 6780
tccttttcca agcaaagcaa acaaaaaaat tttcttttgg ttggaaccgc tgatggcaag 6840
ttagcaattt ttgaagataa gactgttaag cttaaaggag ctgctccttt gaagatacta 6900
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agaaatgtaa tgtggggagg atgtggcaca aagattttct ccttttctaa tgatttcacc 7020
attcagaaac tcattgagac aagaacaagc caactgtttt cttatgcagc tttcagtgat 7080
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ggccatattt tactcctgga tctttcaact cgtcgactta tacgtgtaat ttacaacttt 7380
tgtaattcgg tcagagtcat gatgacagca cagctaggaa gccttaaaaa tgtcatgctg 7440
gtattgggct acaaccggaa aaatactgaa ggtacacaaa agcagaaaga gatacaatct 7500
tgcttgaccg tttgggacat caatcttcca catgaagtgc aaaatttaga aaaacacatt 7560
gaagtgagaa aagaattagc tgaaaaaatg agacgaacat ctgttgagta a 7611
<210> 9
<211> 2536
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人G2019全长LRRK2 flag标记蛋白的翻译蛋白序列
<400> 9
Met Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Met Ala Ser Gly Ser Cys Gln
1 5 10 15
Gly Cys Glu Glu Asp Glu Glu Thr Leu Lys Lys Leu Ile Val Arg Leu
20 25 30
Asn Asn Val Gln Glu Gly Lys Gln Ile Glu Thr Leu Val Gln Ile Leu
35 40 45
Glu Asp Leu Leu Val Phe Thr Tyr Ser Glu His Ala Ser Lys Leu Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Asn Ile His Val Pro Leu Leu Ile Val Leu Asp Ser Tyr
65 70 75 80
Met Arg Val Ala Ser Val Gln Gln Val Gly Trp Ser Leu Leu Cys Lys
85 90 95
Leu Ile Glu Val Cys Pro Gly Thr Met Gln Ser Leu Met Gly Pro Gln
100 105 110
Asp Val Gly Asn Asp Trp Glu Val Leu Gly Val His Gln Leu Ile Leu
115 120 125
Lys Met Leu Thr Val His Asn Ala Ser Val Asn Leu Ser Val Ile Gly
130 135 140
Leu Lys Thr Leu Asp Leu Leu Leu Thr Ser Gly Lys Ile Thr Leu Leu
145 150 155 160
Ile Leu Asp Glu Glu Ser Asp Ile Phe Met Leu Ile Phe Asp Ala Met
165 170 175
His Ser Phe Pro Ala Asn Asp Glu Val Gln Lys Leu Gly Cys Lys Ala
180 185 190
Leu His Val Leu Phe Glu Arg Val Ser Glu Glu Gln Leu Thr Glu Phe
195 200 205
Val Glu Asn Lys Asp Tyr Met Ile Leu Leu Ser Ala Leu Thr Asn Phe
210 215 220
Lys Asp Glu Glu Glu Ile Val Leu His Val Leu His Cys Leu His Ser
225 230 235 240
Leu Ala Ile Pro Cys Asn Asn Val Glu Val Leu Met Ser Gly Asn Val
245 250 255
Arg Cys Tyr Asn Ile Val Val Glu Ala Met Lys Ala Phe Pro Met Ser
260 265 270
Glu Arg Ile Gln Glu Val Ser Cys Cys Leu Leu His Arg Leu Thr Leu
275 280 285
Gly Asn Phe Phe Asn Ile Leu Val Leu Asn Glu Val His Glu Phe Val
290 295 300
Val Lys Ala Val Gln Gln Tyr Pro Glu Asn Ala Ala Leu Gln Ile Ser
305 310 315 320
Ala Leu Ser Cys Leu Ala Leu Leu Thr Glu Thr Ile Phe Leu Asn Gln
325 330 335
Asp Leu Glu Glu Lys Asn Glu Asn Gln Glu Asn Asp Asp Glu Gly Glu
340 345 350
Glu Asp Lys Leu Phe Trp Leu Glu Ala Cys Tyr Lys Ala Leu Thr Trp
355 360 365
His Arg Lys Asn Lys His Val Gln Glu Ala Ala Cys Trp Ala Leu Asn
370 375 380
Asn Leu Leu Met Tyr Gln Asn Ser Leu His Glu Lys Ile Gly Asp Glu
385 390 395 400
Asp Gly His Phe Pro Ala His Arg Glu Val Met Leu Ser Met Leu Met
405 410 415
His Ser Ser Ser Lys Glu Val Phe Gln Ala Ser Ala Asn Ala Leu Ser
420 425 430
Thr Leu Leu Glu Gln Asn Val Asn Phe Arg Lys Ile Leu Leu Ser Lys
435 440 445
Gly Ile His Leu Asn Val Leu Glu Leu Met Gln Lys His Ile His Ser
450 455 460
Pro Glu Val Ala Glu Ser Gly Cys Lys Met Leu Asn His Leu Phe Glu
465 470 475 480
Gly Ser Asn Thr Ser Leu Asp Ile Met Ala Ala Val Val Pro Lys Ile
485 490 495
Leu Thr Val Met Lys Arg His Glu Thr Ser Leu Pro Val Gln Leu Glu
500 505 510
Ala Leu Arg Ala Ile Leu His Phe Ile Val Pro Gly Met Pro Glu Glu
515 520 525
Ser Arg Glu Asp Thr Glu Phe His His Lys Leu Asn Met Val Lys Lys
530 535 540
Gln Cys Phe Lys Asn Asp Ile His Lys Leu Val Leu Ala Ala Leu Asn
545 550 555 560
Arg Phe Ile Gly Asn Pro Gly Ile Gln Lys Cys Gly Leu Lys Val Ile
565 570 575
Ser Ser Ile Val His Phe Pro Asp Ala Leu Glu Met Leu Ser Leu Glu
580 585 590
Gly Ala Met Asp Ser Val Leu His Thr Leu Gln Met Tyr Pro Asp Asp
595 600 605
Gln Glu Ile Gln Cys Leu Gly Leu Ser Leu Ile Gly Tyr Leu Ile Thr
610 615 620
Lys Lys Asn Val Phe Ile Gly Thr Gly His Leu Leu Ala Lys Ile Leu
625 630 635 640
Val Ser Ser Leu Tyr Arg Phe Lys Asp Val Ala Glu Ile Gln Thr Lys
645 650 655
Gly Phe Gln Thr Ile Leu Ala Ile Leu Lys Leu Ser Ala Ser Phe Ser
660 665 670
Lys Leu Leu Val His His Ser Phe Asp Leu Val Ile Phe His Gln Met
675 680 685
Ser Ser Asn Ile Met Glu Gln Lys Asp Gln Gln Phe Leu Asn Leu Cys
690 695 700
Cys Lys Cys Phe Ala Lys Val Ala Met Asp Asp Tyr Leu Lys Asn Val
705 710 715 720
Met Leu Glu Arg Ala Cys Asp Gln Asn Asn Ser Ile Met Val Glu Cys
725 730 735
Leu Leu Leu Leu Gly Ala Asp Ala Asn Gln Ala Lys Glu Gly Ser Ser
740 745 750
Leu Ile Cys Gln Val Cys Glu Lys Glu Ser Ser Pro Lys Leu Val Glu
755 760 765
Leu Leu Leu Asn Ser Gly Ser Arg Glu Gln Asp Val Arg Lys Ala Leu
770 775 780
Thr Ile Ser Ile Gly Lys Gly Asp Ser Gln Ile Ile Ser Leu Leu Leu
785 790 795 800
Arg Arg Leu Ala Leu Asp Val Ala Asn Asn Ser Ile Cys Leu Gly Gly
805 810 815
Phe Cys Ile Gly Lys Val Glu Pro Ser Trp Leu Gly Pro Leu Phe Pro
820 825 830
Asp Lys Thr Ser Asn Leu Arg Lys Gln Thr Asn Ile Ala Ser Thr Leu
835 840 845
Ala Arg Met Val Ile Arg Tyr Gln Met Lys Ser Ala Val Glu Glu Gly
850 855 860
Thr Ala Ser Gly Ser Asp Gly Asn Phe Ser Glu Asp Val Leu Ser Lys
865 870 875 880
Phe Asp Glu Trp Thr Phe Ile Pro Asp Ser Ser Met Asp Ser Val Phe
885 890 895
Ala Gln Ser Asp Asp Leu Asp Ser Glu Gly Ser Glu Gly Ser Phe Leu
900 905 910
Val Lys Lys Lys Ser Asn Ser Ile Ser Val Gly Glu Phe Tyr Arg Asp
915 920 925
Ala Val Leu Gln Arg Cys Ser Pro Asn Leu Gln Arg His Ser Asn Ser
930 935 940
Leu Gly Pro Ile Phe Asp His Glu Asp Leu Leu Lys Arg Lys Arg Lys
945 950 955 960
Ile Leu Ser Ser Asp Asp Ser Leu Arg Ser Ser Lys Leu Gln Ser His
965 970 975
Met Arg His Ser Asp Ser Ile Ser Ser Leu Ala Ser Glu Arg Glu Tyr
980 985 990
Ile Thr Ser Leu Asp Leu Ser Ala Asn Glu Leu Arg Asp Ile Asp Ala
995 1000 1005
Leu Ser Gln Lys Cys Cys Ile Ser Val His Leu Glu His Leu Glu
1010 1015 1020
Lys Leu Glu Leu His Gln Asn Ala Leu Thr Ser Phe Pro Gln Gln
1025 1030 1035
Leu Cys Glu Thr Leu Lys Ser Leu Thr His Leu Asp Leu His Ser
1040 1045 1050
Asn Lys Phe Thr Ser Phe Pro Ser Tyr Leu Leu Lys Met Ser Cys
1055 1060 1065
Ile Ala Asn Leu Asp Val Ser Arg Asn Asp Ile Gly Pro Ser Val
1070 1075 1080
Val Leu Asp Pro Thr Val Lys Cys Pro Thr Leu Lys Gln Phe Asn
1085 1090 1095
Leu Ser Tyr Asn Gln Leu Ser Phe Val Pro Glu Asn Leu Thr Asp
1100 1105 1110
Val Val Glu Lys Leu Glu Gln Leu Ile Leu Glu Gly Asn Lys Ile
1115 1120 1125
Ser Gly Ile Cys Ser Pro Leu Arg Leu Lys Glu Leu Lys Ile Leu
1130 1135 1140
Asn Leu Ser Lys Asn His Ile Ser Ser Leu Ser Glu Asn Phe Leu
1145 1150 1155
Glu Ala Cys Pro Lys Val Glu Ser Phe Ser Ala Arg Met Asn Phe
1160 1165 1170
Leu Ala Ala Met Pro Phe Leu Pro Pro Ser Met Thr Ile Leu Lys
1175 1180 1185
Leu Ser Gln Asn Lys Phe Ser Cys Ile Pro Glu Ala Ile Leu Asn
1190 1195 1200
Leu Pro His Leu Arg Ser Leu Asp Met Ser Ser Asn Asp Ile Gln
1205 1210 1215
Tyr Leu Pro Gly Pro Ala His Trp Lys Ser Leu Asn Leu Arg Glu
1220 1225 1230
Leu Leu Phe Ser His Asn Gln Ile Ser Ile Leu Asp Leu Ser Glu
1235 1240 1245
Lys Ala Tyr Leu Trp Ser Arg Val Glu Lys Leu His Leu Ser His
1250 1255 1260
Asn Lys Leu Lys Glu Ile Pro Pro Glu Ile Gly Cys Leu Glu Asn
1265 1270 1275
Leu Thr Ser Leu Asp Val Ser Tyr Asn Leu Glu Leu Arg Ser Phe
1280 1285 1290
Pro Asn Glu Met Gly Lys Leu Ser Lys Ile Trp Asp Leu Pro Leu
1295 1300 1305
Asp Glu Leu His Leu Asn Phe Asp Phe Lys His Ile Gly Cys Lys
1310 1315 1320
Ala Lys Asp Ile Ile Arg Phe Leu Gln Gln Arg Leu Lys Lys Ala
1325 1330 1335
Val Pro Tyr Asn Arg Met Lys Leu Met Ile Val Gly Asn Thr Gly
1340 1345 1350
Ser Gly Lys Thr Thr Leu Leu Gln Gln Leu Met Lys Thr Lys Lys
1355 1360 1365
Ser Asp Leu Gly Met Gln Ser Ala Thr Val Gly Ile Asp Val Lys
1370 1375 1380
Asp Trp Pro Ile Gln Ile Arg Asp Lys Arg Lys Arg Asp Leu Val
1385 1390 1395
Leu Asn Val Trp Asp Phe Ala Gly Arg Glu Glu Phe Tyr Ser Thr
1400 1405 1410
His Pro His Phe Met Thr Gln Arg Ala Leu Tyr Leu Ala Val Tyr
1415 1420 1425
Asp Leu Ser Lys Gly Gln Ala Glu Val Asp Ala Met Lys Pro Trp
1430 1435 1440
Leu Phe Asn Ile Lys Ala Arg Ala Ser Ser Ser Pro Val Ile Leu
1445 1450 1455
Val Gly Thr His Leu Asp Val Ser Asp Glu Lys Gln Arg Lys Ala
1460 1465 1470
Cys Met Ser Lys Ile Thr Lys Glu Leu Leu Asn Lys Arg Gly Phe
1475 1480 1485
Pro Ala Ile Arg Asp Tyr His Phe Val Asn Ala Thr Glu Glu Ser
1490 1495 1500
Asp Ala Leu Ala Lys Leu Arg Lys Thr Ile Ile Asn Glu Ser Leu
1505 1510 1515
Asn Phe Lys Ile Arg Asp Gln Leu Val Val Gly Gln Leu Ile Pro
1520 1525 1530
Asp Cys Tyr Val Glu Leu Glu Lys Ile Ile Leu Ser Glu Arg Lys
1535 1540 1545
Asn Val Pro Ile Glu Phe Pro Val Ile Asp Arg Lys Arg Leu Leu
1550 1555 1560
Gln Leu Val Arg Glu Asn Gln Leu Gln Leu Asp Glu Asn Glu Leu
1565 1570 1575
Pro His Ala Val His Phe Leu Asn Glu Ser Gly Val Leu Leu His
1580 1585 1590
Phe Gln Asp Pro Ala Leu Gln Leu Ser Asp Leu Tyr Phe Val Glu
1595 1600 1605
Pro Lys Trp Leu Cys Lys Ile Met Ala Gln Ile Leu Thr Val Lys
1610 1615 1620
Val Glu Gly Cys Pro Lys His Pro Lys Gly Ile Ile Ser Arg Arg
1625 1630 1635
Asp Val Glu Lys Phe Leu Ser Lys Lys Arg Lys Phe Pro Lys Asn
1640 1645 1650
Tyr Met Ser Gln Tyr Phe Lys Leu Leu Glu Lys Phe Gln Ile Ala
1655 1660 1665
Leu Pro Ile Gly Glu Glu Tyr Leu Leu Val Pro Ser Ser Leu Ser
1670 1675 1680
Asp His Arg Pro Val Ile Glu Leu Pro His Cys Glu Asn Ser Glu
1685 1690 1695
Ile Ile Ile Arg Leu Tyr Glu Met Pro Tyr Phe Pro Met Gly Phe
1700 1705 1710
Trp Ser Arg Leu Ile Asn Arg Leu Leu Glu Ile Ser Pro Tyr Met
1715 1720 1725
Leu Ser Gly Arg Glu Arg Ala Leu Arg Pro Asn Arg Met Tyr Trp
1730 1735 1740
Arg Gln Gly Ile Tyr Leu Asn Trp Ser Pro Glu Ala Tyr Cys Leu
1745 1750 1755
Val Gly Ser Glu Val Leu Asp Asn His Pro Glu Ser Phe Leu Lys
1760 1765 1770
Ile Thr Val Pro Ser Cys Arg Lys Gly Cys Ile Leu Leu Gly Gln
1775 1780 1785
Val Val Asp His Ile Asp Ser Leu Met Glu Glu Trp Phe Pro Gly
1790 1795 1800
Leu Leu Glu Ile Asp Ile Cys Gly Glu Gly Glu Thr Leu Leu Lys
1805 1810 1815
Lys Trp Ala Leu Tyr Ser Phe Asn Asp Gly Glu Glu His Gln Lys
1820 1825 1830
Ile Leu Leu Asp Asp Leu Met Lys Lys Ala Glu Glu Gly Asp Leu
1835 1840 1845
Leu Val Asn Pro Asp Gln Pro Arg Leu Thr Ile Pro Ile Ser Gln
1850 1855 1860
Ile Ala Pro Asp Leu Ile Leu Ala Asp Leu Pro Arg Asn Ile Met
1865 1870 1875
Leu Asn Asn Asp Glu Leu Glu Phe Glu Gln Ala Pro Glu Phe Leu
1880 1885 1890
Leu Gly Asp Gly Ser Phe Gly Ser Val Tyr Arg Ala Ala Tyr Glu
1895 1900 1905
Gly Glu Glu Val Ala Val Lys Ile Phe Asn Lys His Thr Ser Leu
1910 1915 1920
Arg Leu Leu Arg Gln Glu Leu Val Val Leu Cys His Leu His His
1925 1930 1935
Pro Ser Leu Ile Ser Leu Leu Ala Ala Gly Ile Arg Pro Arg Met
1940 1945 1950
Leu Val Met Glu Leu Ala Ser Lys Gly Ser Leu Asp Arg Leu Leu
1955 1960 1965
Gln Gln Asp Lys Ala Ser Leu Thr Arg Thr Leu Gln His Arg Ile
1970 1975 1980
Ala Leu His Val Ala Asp Gly Leu Arg Tyr Leu His Ser Ala Met
1985 1990 1995
Ile Ile Tyr Arg Asp Leu Lys Pro His Asn Val Leu Leu Phe Thr
2000 2005 2010
Leu Tyr Pro Asn Ala Ala Ile Ile Ala Lys Ile Ala Asp Tyr Gly
2015 2020 2025
Ile Ala Gln Tyr Cys Cys Arg Met Gly Ile Lys Thr Ser Glu Gly
2030 2035 2040
Thr Pro Gly Phe Arg Ala Pro Glu Val Ala Arg Gly Asn Val Ile
2045 2050 2055
Tyr Asn Gln Gln Ala Asp Val Tyr Ser Phe Gly Leu Leu Leu Tyr
2060 2065 2070
Asp Ile Leu Thr Thr Gly Gly Arg Ile Val Glu Gly Leu Lys Phe
2075 2080 2085
Pro Asn Glu Phe Asp Glu Leu Glu Ile Gln Gly Lys Leu Pro Asp
2090 2095 2100
Pro Val Lys Glu Tyr Gly Cys Ala Pro Trp Pro Met Val Glu Lys
2105 2110 2115
Leu Ile Lys Gln Cys Leu Lys Glu Asn Pro Gln Glu Arg Pro Thr
2120 2125 2130
Ser Ala Gln Val Phe Asp Ile Leu Asn Ser Ala Glu Leu Val Cys
2135 2140 2145
Leu Thr Arg Arg Ile Leu Leu Pro Lys Asn Val Ile Val Glu Cys
2150 2155 2160
Met Val Ala Thr His His Asn Ser Arg Asn Ala Ser Ile Trp Leu
2165 2170 2175
Gly Cys Gly His Thr Asp Arg Gly Gln Leu Ser Phe Leu Asp Leu
2180 2185 2190
Asn Thr Glu Gly Tyr Thr Ser Glu Glu Val Ala Asp Ser Arg Ile
2195 2200 2205
Leu Cys Leu Ala Leu Val His Leu Pro Val Glu Lys Glu Ser Trp
2210 2215 2220
Ile Val Ser Gly Thr Gln Ser Gly Thr Leu Leu Val Ile Asn Thr
2225 2230 2235
Glu Asp Gly Lys Lys Arg His Thr Leu Glu Lys Met Thr Asp Ser
2240 2245 2250
Val Thr Cys Leu Tyr Cys Asn Ser Phe Ser Lys Gln Ser Lys Gln
2255 2260 2265
Lys Asn Phe Leu Leu Val Gly Thr Ala Asp Gly Lys Leu Ala Ile
2270 2275 2280
Phe Glu Asp Lys Thr Val Lys Leu Lys Gly Ala Ala Pro Leu Lys
2285 2290 2295
Ile Leu Asn Ile Gly Asn Val Ser Thr Pro Leu Met Cys Leu Ser
2300 2305 2310
Glu Ser Thr Asn Ser Thr Glu Arg Asn Val Met Trp Gly Gly Cys
2315 2320 2325
Gly Thr Lys Ile Phe Ser Phe Ser Asn Asp Phe Thr Ile Gln Lys
2330 2335 2340
Leu Ile Glu Thr Arg Thr Ser Gln Leu Phe Ser Tyr Ala Ala Phe
2345 2350 2355
Ser Asp Ser Asn Ile Ile Thr Val Val Val Asp Thr Ala Leu Tyr
2360 2365 2370
Ile Ala Lys Gln Asn Ser Pro Val Val Glu Val Trp Asp Lys Lys
2375 2380 2385
Thr Glu Lys Leu Cys Gly Leu Ile Asp Cys Val His Phe Leu Arg
2390 2395 2400
Glu Val Met Val Lys Glu Asn Lys Glu Ser Lys His Lys Met Ser
2405 2410 2415
Tyr Ser Gly Arg Val Lys Thr Leu Cys Leu Gln Lys Asn Thr Ala
2420 2425 2430
Leu Trp Ile Gly Thr Gly Gly Gly His Ile Leu Leu Leu Asp Leu
2435 2440 2445
Ser Thr Arg Arg Leu Ile Arg Val Ile Tyr Asn Phe Cys Asn Ser
2450 2455 2460
Val Arg Val Met Met Thr Ala Gln Leu Gly Ser Leu Lys Asn Val
2465 2470 2475
Met Leu Val Leu Gly Tyr Asn Arg Lys Asn Thr Glu Gly Thr Gln
2480 2485 2490
Lys Gln Lys Glu Ile Gln Ser Cys Leu Thr Val Trp Asp Ile Asn
2495 2500 2505
Leu Pro His Glu Val Gln Asn Leu Glu Lys His Ile Glu Val Arg
2510 2515 2520
Lys Glu Leu Ala Glu Lys Met Arg Arg Thr Ser Val Glu
2525 2530 2535
<210> 10
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 'LRRKtide'肽
<400> 10
Arg Leu Gly Arg Asp Lys Tyr Lys Thr Leu Arg Gln Ile Arg Gln
1 5 10 15

Claims (24)

1.式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中
X1为CR6，其中R6为H或C1-3烷基，该烷基任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：羟基、卤素和C1-3烷氧基；
R1选自CN、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基和C3环烷基；
R2选自H、卤素、CN、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
R3选自:
a)N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
氧代，
卤素，
羟基,
C1-6烷基，该烷基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和环丙基，和
C1-6烷氧基，该烷氧基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，
其中当N-连接的4-6元杂环基环包含可取代的氮原子时，该取代基基团还包括任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基的4-6元杂环基环：卤素、羟基和C1-3烷氧基，条件是该4-6元杂环基环连接至所述可取代的氮原子；
b)NHR7；和
c)OR7
R4和R5独立地选自H、羟基和卤素；
R7独立地选自:
C4-6环烷基，该环烷基任选取代有1、2或3个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团，和
包含氮或氧的4-6元杂环基，其任选取代有一个或多个独立选自以下的取代基：卤素、羟基、C1-3烷氧基和C1-3烷基，该烷基任选取代有1、2或3个卤素或羟基基团；且
R8和R9独立地选自H、卤素、甲基、乙基、甲氧基和羟基。
2.根据权利要求1的化合物或药学上可接受的盐，其中R1选自C1-3烷基和C1-3烷氧基。
3.根据上述权利要求任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R2选自H、卤素和C1-3烷基。
4.根据上述权利要求任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R4和R5独立地选自H和氟。
5.根据上述权利要求任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R4和R5都为H。
6.根据上述权利要求任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R3为N-连接的4-6元杂环基环，其任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：
卤素，
羟基,
C1-3烷基，该烷基任选取代有1或2个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基，和
C1-3烷氧基，该烷氧基任选取代有一个或两个独立选自以下的取代基：卤素、羟基和C1-3烷氧基。
7.根据上述权利要求任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R6为H或未取代的C1-3烷基。
8.根据上述权利要求任一项的化合物或药学上可接受的盐，其中R8和R9都为H。
9.根据权利要求1的化合物，其为
或其药学上可接受的盐。
10.根据权利要求1的化合物，其为((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
或其药学上可接受的盐。
11.根据权利要求1的化合物，其为((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
12.药物组合物，其包含根据上述权利要求任一项的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
13.根据上述权利要求任一项的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。
14.根据上述权利要求任一项的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)。
15.根据上述权利要求任一项的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗帕金森病。
16.根据权利要求1的化合物，((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
或其药学上可接受的盐，其用于治疗帕金森病。
17.治疗神经退行性疾病的方法，其包括向需要的受试者给药治疗有效量的根据上述权利要求任一项的式(I)的化合物或药学上可接受的盐。
18.根据权利要求17的方法，其中所述神经退行性疾病为帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)。
19.根据权利要求17或18的方法，其中所述神经退行性疾病为帕金森病。
20.根据权利要求17、18或19的方法，其中所述受试者为人。
21.根据权利要求17、18、19或20的方法，其中所述受试者为表达LRRK2激酶中的G2019S突变的人。
22.根据权利要求17、18、19、20或21的方法，其中所述式(I)的化合物为((R)-4-(2-甲基-6-(5-甲基-6-(1-((S)-四氢呋喃-3-基)哌啶-4-基)-1H-吲唑-1-基)嘧啶-4-基)吗啉-2-基)甲醇
或其药学上可接受的盐。
23.根据上述权利要求任一项的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化(ALS)的药物中的用途。
24.根据上述权利要求任一项的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。
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