CN110387341A - 一种葡萄球菌培养液及其培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种葡萄球菌培养液及其培养方法；所述培养液的组份和含量包括：猪心过滤液1000ml、蛋白胨10g、牛肉膏3g、酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g、糖30g、活性炭10g。所述培养方法包括：制备猪心过滤液；将制备的猪心过滤液中分两次加入蛋白胨、牛肉膏，在一定条件下加入酵母粉、氯化钠、亚碲酸钾、丙酮酸钠、氯化锂和糖，两次调整pH并分别静置过夜并过滤；而后加入活性炭，后过滤除去活性炭，而后加入乳清制成猪心培养基；将种子培养基接种到猪心培养基中培养。本发明的葡萄球菌培养液及其培养方法，通过制造的盐性环境，抑制杂菌的干扰，同时通过辅料的添加大大的提高葡萄球菌的产量。
Description
技术领域
本发明属于葡萄球菌培养的技术领域领域，特别涉及一种葡萄球菌培养液及其培养方法。
背景技术
球菌指的是一种呈球形或近似球形的细菌；根据排列方式不同，可分为单球菌、双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌和葡萄球菌等。其中的葡萄球菌是一群革兰氏阳性葡萄球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。多数为非致病菌，少数可导致疾病。葡萄球菌是最常见的化脓性葡萄球菌，是医院交叉感染的重要来源，菌体直径约0.8μm，小球形，但在液体培养基的幼期培养中，常常分散，细菌细胞单独存在；在医疗上具有重要的研究意义。
葡萄球菌在研究前需要进行培养，培养基是培养葡萄球菌的重要部分；现有的葡萄球菌在培养时，容易产生杂菌，杂菌的存在对后期葡萄球菌的研究有很大的干扰；另外现有的葡萄球菌的培养产量较低。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种葡萄球菌培养液及其培养方法。
一种葡萄球菌培养液，所述培养液的组份和含量包括：
猪心过滤液1000ml、蛋白胨10g、牛肉膏3g、酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g、糖30g、活性炭10g。
进一步地，所述培养液的组份和含量包括：乳清20ml。
进一步地，所述糖包括单糖和双糖，其中，所述单糖为10g，所述双糖为20g。
进一步地，所述猪心过滤液的制备方法为：
将1kg的猪心去血管、脂肪，洗净后沥干；
用1000ml的去离子水浸泡，并置于90°的恒温环境中，保温60min，趁热利用纱布过滤；
过滤后的残渣加入500ml的水，并置于90°恒温环境中，保温60min，趁热利用纱布过滤；
合并两次过滤得到的滤液即为猪心过滤液。
一种葡萄球菌培养液培养方法，所述培养方法包括：
步骤一：制备猪心过滤液；
步骤二：将制备的猪心过滤液中分两次加入蛋白胨、牛肉膏，每次的添加量为蛋白胨5g、牛肉膏1.5g，每次添加完成后搅拌30min；
步骤三：升温到55-65℃，在步骤二的过滤液中边搅拌边加入酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g；
步骤四：对步骤三中的过滤液继续升温到85-95℃，在步骤三中加入30g糖，搅拌30min，降温到室温后，调整pH到4.0静置过夜并过滤；
步骤五：调整步骤四中的过滤液pH到9.0，再次静置过夜并过滤；
步骤六：调整步骤五中的过滤液pH到7.5，加入10g活性炭，搅拌静置后过滤除去活性炭，而后加入乳清20ml制成猪心培养基；
步骤七：制备葡萄球菌菌种种子培养基，并将种子培养基按照体积比为1:500的比例接种到猪心培养基中，在一定的环境中培养。
进一步地，所述制备猪心过滤液包括：
将1kg的猪心去血管、脂肪，洗净后沥干；
用1000ml的去离子水浸泡，并置于90°的恒温环境中，保温60min，趁热利用纱布过滤；
过滤后的残渣加入500ml的水，并置于90°恒温环境中，保温60min,趁热利用纱布过滤；
合并两次过滤得到的滤液即为猪心过滤液。
进一步地，所述制备葡萄球菌菌种种子培养基包括：将葡萄球菌置于肉汤培养基中培养15-24h。
进一步地，在一定的环境中培养包括在37℃的恒温条件下培养28-36h。
进一步地，所述30g糖包括：10g单糖和20g双糖；其中，所述单糖包括葡萄糖和/或果糖，所述双糖包括蔗糖和/或麦芽糖。
本发明的葡萄球菌培养液及其培养方法，通过制造的盐性环境，抑制杂菌的干扰，同时通过辅料的添加大大的提高葡萄球菌的产量。本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所指出的结构来实现和获得。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1示出了根据本发明实施例的培养液培养方法的流程图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地说明，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种葡萄球菌培养液，所述培养液的组份和含量包括：
猪心过滤液1000ml、蛋白胨10g、牛肉膏3g、酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g、糖30g、活性炭10g。
具体的，为了提高葡萄球菌的产量，所述培养液的组份和含量还包括：乳清20ml。
具体的，所述糖包括单糖和双糖，其中，所述单糖为10g，所述双糖为20g，其中，所述单糖包括葡萄糖和/或果糖，所述双糖包括蔗糖和/或麦芽糖。
具体的，所述猪心过滤液的制备方法为：
将1kg的猪心去血管、脂肪，洗净后沥干；
用1000ml的去离子水浸泡，并置于90°的恒温环境中，保温60min，趁热利用纱布过滤；
过滤后的残渣加入500ml的水，并置于90°恒温环境中，保温60min,趁热利用纱布过滤；
合并两次过滤得到的滤液即为猪心过滤液。
本发明还提供一种葡萄球菌培养液培养方法，所述培养方法包括：
步骤一：制备猪心过滤液；
具体的，将1kg的猪心去血管、脂肪，洗净后沥干；
用1000ml的去离子水浸泡，并置于90°的恒温环境中，保温60min，趁热利用纱布过滤；
过滤后的残渣加入500ml的水，并置于90°恒温环境中，保温60min,趁热利用纱布过滤；
合并两次过滤得到的滤液即为猪心过滤液。
步骤二：将制备的猪心过滤液中分两次加入蛋白胨、牛肉膏，每次的添加量为蛋白胨5g、牛肉膏1.5g，每次添加完成后搅拌30min；
具体的，在室温条件下，将步骤一取得的猪心过滤液内放入蛋白胨5g、牛肉膏1.5g，而后搅拌30min，也可置于振荡器上，200r/min的条件下放置30min；而后再次放入蛋白胨5g、牛肉膏1.5g，搅拌30min；分两次加入蛋白胨和牛肉膏，有助于蛋白胨、牛肉膏的溶解，并使其与猪心过滤液混合的更加充分。
步骤三：升温到55-65℃，在步骤二的过滤液中边搅拌边加入酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g；
具体的，添加酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g可有效的营造一个盐性环境，葡萄球菌耐盐性强，可适应盐环境，通过此手段抑制杂菌的生成；另外添加的酵母粉可提供一定的养分；增添的亚碲酸钾、丙酮酸钠不但使盐性环境达到10％-15％；还可充当缓冲剂的作用，缓冲剂用于维持过滤液pH的稳定。
步骤四：对步骤三中的过滤液继续升温到85-95℃，在步骤三中加入30g糖，搅拌30min，降温到室温后，调整pH到4.0静置过夜并过滤；
具体的，将步骤三中的过滤液升温到85-95℃，而后加入所述30g糖，30g糖包括：10g单糖和20g双糖；其中，所述单糖包括葡萄糖和/或果糖，所述双糖包括蔗糖和/或麦芽糖；本实施列中加入的单糖按照葡萄糖和果糖按照1:1的比例加入，双糖按照蔗糖和麦芽糖1:1加入到过滤液中，此温度下可确保糖快速的溶解，并在营造高温环境，杀死杂菌。调整过滤液的pH到4.0静置过夜并过滤，可有效除去过滤液中的酸性蛋白。
步骤五：调整步骤四中的过滤液pH到9.0，再次静置过夜并过滤；
具体的，调整过滤液pH到9.0可实现除去过滤液中的碱性蛋白，便于为后续葡萄球菌的生存提供良好的环境。
步骤六：调整步骤五中的过滤液pH到7.5，加入10g活性炭，搅拌静置后过滤除去活性炭，而后加入乳清20ml制成猪心培养基；
具体的，调整步骤五中的过滤液pH到7.5，该酸碱值适宜葡萄球菌的生存；加入活性炭实现去除过滤液中的异味；活性炭本身通过过滤实现去除；而后在滤液中加入乳清，制成猪心培养液，其中的乳清溶解在过滤液中，为葡萄球菌的营养物质，添加的乳清可使培养的葡萄球菌产量增加。
步骤七：制备葡萄球菌菌种种子培养基，并将种子培养基按照体积比为1:500的比例接种到猪心培养基中，在一定的环境中培养。
具体的所述制备葡萄球菌菌种种子培养基包括：将葡萄球菌置于肉汤培养基中培养15-24h，也可直接将菌种种子直接接种到猪心培养基中进行培养；所述在一定的环境中培养包括在37℃的恒温条件下培养28-36h。
本发明通过实验验证上述培养液可有效的抑制杂菌的干扰，同时提高葡萄球菌的产量，分四组组实验进行，第一组、第二组实验的培养液的组份和含量为猪心过滤液1000ml、蛋白胨10g、牛肉膏3g、酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g、糖30g、活性炭10g、乳清20ml。
第三组实验的培养液的组份和含量为猪心过滤液1000ml、蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠15g、糖30g、活性炭10g、乳清20ml。
第四组实验的培养液的组份和含量为猪心过滤液1000ml、蛋白胨10g、牛肉膏3g、酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g、活性炭10g。
实验的操作步骤为：
制备猪心过滤液；具体的，将1kg的猪心去血管、脂肪，洗净后沥干；用1000ml的去离子水浸泡，并置于90°的恒温环境中，保温60min，趁热利用纱布过滤；过滤后的残渣加入500ml的水，并置于90°恒温环境中，保温60min,趁热利用纱布过滤；合并两次过滤得到的滤液即为猪心过滤液。
将制备的猪心过滤液中分两次加入蛋白胨、牛肉膏，每次的添加量为蛋白胨5g、牛肉膏1.5g，每次添加完成后搅拌30min；
而后取上述的发酵液等分成四份，分别标记为A、B、C、D；
将A、C、D升温到55-65℃，B处于常温中，并对A、B、D的滤液中边搅拌边加入酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g；C中只加入氯化钠15g。
将A、C、D过滤液继续升温到85-95℃，B处于常温中，在A、B、C中加入30g糖，搅拌30min，降温到室温后，调整A、B、C、D的pH到4.0静置过夜并过滤；
调整步骤四中A、B、C、D的过滤液pH到9.0，再次静置过夜并过滤；
调整步骤五中的A、B、C、D过滤液pH到7.5，加入10g活性炭，搅拌静置后过滤除去活性炭，在A、B、C中加入乳清20ml制成猪心培养基；
制备葡萄球菌菌种种子培养基，并将种子培养基按照体积比为1:500的比例接种到A、B、C、D的猪心培养基中，在37℃的恒温条件下培养28-36h。
而后取一定量的A、B、C、D培养物，稀释一定的倍数，示例性的，稀释10倍。
实验一，对四组取得的培养物进行革兰氏染色，而后进行镜检；染色显示A和D的菌呈现典型的葡萄球状，同时革兰氏染色阳性，菌体的大小均一，直径为0.6-0.9um，几乎不存在其他形状的菌落。而B组的菌菌体的大小较为均一，除了葡萄球状的菌之外还存在少量的其他形状的菌种，C中的菌体大小不均一，除了葡萄球状的菌之外还存在少量的其他形状的菌种，说明杂菌生长较多；不但证明了酵母粉、亚碲酸钾、丙酮酸钠、氯化锂的抑菌作用，同时还可说明不同的温度中加入物料，在一定的程度上抑制了杂菌的生成。
实验二，对四组的培养物A、B、C、D进行葡萄球菌计数。
选择一定量的培养物A、B、C、D，而后稀释到相同的倍数，本发明以稀释10倍为例；而后利用快速葡萄球菌检验测试片测试各个培养物中葡萄球菌的数量；由测试纸可以测出培养物A中的葡萄球菌的数量为750，B中的葡萄球菌的数量为670，C中的葡萄球菌的数量为645，D中葡萄球菌的数量为603，说明添加乳清和糖，可有效的提高葡萄菌落的产量，约可提高15-20％。
本发明在分两次加入蛋白胨、牛肉膏，确保培养液均一、分散；培养液中在不同的温度下加入酵母粉、亚碲酸钾、丙酮酸钠、氯化锂和糖，不但营造了盐性环境抑制杂菌的生长，缓释培养液中的pH，同时通过温度的变化能够进一步抑制杂菌的生长；通过配合加入的乳清和糖，能够有效的提高葡萄球菌的产量。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (9)
1.一种葡萄球菌培养液，其特征在于，所述培养液的组份和含量包括：
猪心过滤液1000ml、蛋白胨10g、牛肉膏3g、酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g、糖30g、活性炭10g。
2.根据权利要求1所述的葡萄球菌培养液，其特征在于，所述培养液的组份和含量还包括：乳清20ml。
3.根据权利要求1所述的葡萄球菌培养液，其特征在于，所述糖包括单糖和双糖，其中，所述单糖为10g，所述双糖为20g。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的葡萄球菌培养液，其特征在于，所述猪心过滤液的制备方法为：
将1kg的猪心去血管、脂肪，洗净后沥干；
用1000ml的去离子水浸泡，并置于90°的恒温环境中，保温60min，趁热利用纱布过滤；
过滤后的残渣加入500ml的水，并置于90°恒温环境中，保温60min,趁热利用纱布过滤；
合并两次过滤得到的滤液即为猪心过滤液。
5.一种葡萄球菌培养液培养方法，其特征在于，所述培养方法包括：
步骤一：制备猪心过滤液；
步骤二：将制备的猪心过滤液中分两次加入蛋白胨、牛肉膏，每次的添加量为蛋白胨5g、牛肉膏1.5g，每次添加完成后搅拌30min；
步骤三：升温到55-65℃，在步骤二的过滤液中边搅拌边加入酵母粉5g、氯化钠15g、亚碲酸钾0.02g、丙酮酸钠5g、氯化锂5g；
步骤四：对步骤三中的过滤液继续升温到85-95℃，在步骤三中加入30g糖，搅拌30min，降温到室温后，调整pH到4.0静置过夜并过滤；
步骤五：调整步骤四中的过滤液pH到9.0，再次静置过夜并过滤；
步骤六：调整步骤五中的过滤液pH到7.5，加入10g活性炭，搅拌静置后过滤除去活性炭，而后加入乳清20ml制成猪心培养基；
步骤七：制备葡萄球菌菌种种子培养基，并将种子培养基按照体积比为1:500的比例接种到猪心培养基中，在一定的环境中培养。
6.根据权利要求5所述的葡萄球菌培养液培养方法，其特征在于，所述制备猪心过滤液包括：
将1kg的猪心去血管、脂肪，洗净后沥干；
用1000ml的去离子水浸泡，并置于90°的恒温环境中，保温60min，趁热利用纱布过滤；
过滤后的残渣加入500ml的水，并置于90°恒温环境中，保温60min,趁热利用纱布过滤；
合并两次过滤得到的滤液即为猪心过滤液。
7.根据权利要求5所述的葡萄球菌培养液培养方法，其特征在于，所述制备葡萄球菌菌种种子培养基包括：将葡萄球菌置于肉汤培养基中培养15-24h。
8.根据权利要求5所述的葡萄球菌培养液培养方法，其特征在于，在一定的环境中培养包括在37℃的恒温条件下培养28-36h。
9.根据权利要求5-8任意一项所述的葡萄球菌培养液培养方法，其特征在于，所述30g糖包括：10g单糖和20g双糖；其中，所述单糖包括葡萄糖和/或果糖，所述双糖包括蔗糖和/或麦芽糖。
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