CN110368445A - 一种治疗银屑病的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种治疗银屑病的中药组合物及其制备方法和应用，所述中药组合物是由如下所述重量份的原料药制成：龙葵草87‑93份、凤尾草43‑47份、紫草43‑47份、白芷25‑29份、山药25‑29份。本发明还公开一种治疗银屑病的中药片剂。本发明组方严谨，审因论治，众味协同，既能清热解毒，凉血祛风，又能匡扶正气，适用于治疗进展期银屑病。所用各药主次有序，层次分明，符合中医方剂学的组方原则。龙葵银消片是我院临床特色中药制剂，来源于我院名老中医的多年临床经验总结，组方中仅含五味中药，组方简单，制备工艺稳定，产品质量可控，已在临床应用30年余，疗效确切，未见明显不良反应，具有显著的新药转化前景。

Description

一种治疗银屑病的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体地说，是一种治疗银屑病的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

银屑病是一种以鳞屑红斑为典型皮损的慢性复发炎症性皮肤病，中医根据本病外观形态命名，如“肤如疹疥，色白而痒，搔起白皮”称为白疕，或“状如苍松之皮，红白斑点相连”，又称松皮癣。银屑病根据临床特征不同可分为寻常型、关节病型、脓疱型及红皮病型，其中寻常型占99％以上，其他类型多由寻常型银屑病转化而来。银屑病世界范围内患病率为0.09％～11.43％，我国银屑病患病数量正在逐年增加，2008年患病率为0.47％。银屑病病因不明，无治愈方法，是一个严重的全球性难题。西医学说认为银屑病是遗传因素、免疫因素及外源和内源诱因包括感染、创伤、系统用药及神经精神因素等多种因素相互作用的多基因遗传病，通过免疫介导的共同通路最后引起角质形成细胞发生增殖。

目前，银屑病治疗方案主要基于病变严重性、患者用药依从性及经济承受能力及对药物的反应性来决定。中国银屑病治疗专家共识(2014版)、2018亚洲共识：轻中度斑块型银屑病局部治疗的评估和管理、欧洲银屑病治疗指南和NICE指南、2011年美国银屑病治疗指南、寻常型银屑病(白疕)中医药循证临床实践指南(2013版)、皮肤科分会银屑病中医治疗专家共识(2017年版)等，将银屑病的治疗总结如下：

银屑病的西医治疗。(1)外用药物治疗：常使用的主要有润肤剂、角质松解剂、糖皮质激素类制剂、维生素D3衍生物如卡泊三醇及局部用类视黄醇等。对于局限性银屑病皮损面积<5％体表面积，可单独采取外用药物治疗。而对于受累体表面积5％～10％的中度和超过10％的重度银屑病患者，常需外用药物联合系统药物及其他方法综合治疗。(2)物理治疗：常采用紫外线疗法，包括补骨脂素光化学疗法(PUVA)、紫外线(UVB)光疗、窄波紫外线(NB-UVB)光疗及308nm准分子激光光疗等。紫外线光疗发挥治疗作用的同时也有局限性，NB-UVB光疗要注意限制光照累积次数，缓解期较短，NB-UVB全身治疗累积剂量大时易形成皮肤干燥、瘙痒、光老化等不良反应。长期应用PUVA可致皮肤老化、色素沉着和皮肤癌；有增加白内障的危险性。308nm准分子激光常见不良反应为红斑、疼痛和水疱。(3)系统药物治疗：一线治疗药物有维A酸类如阿维A、甲氨蝶呤、环孢素及生物制剂如阿达木单抗、英夫利昔单抗、乌司奴单抗等。生物制剂是目前治疗银屑病的新趋势，国外临床应用十年余，但使用之前，必须采取谨慎的安全措施以预防药物不良反应，例如严重感染，且治疗费用昂贵，使用的长期稳定性和安全性尚需深入研究。(4)联合治疗：国内外银屑病治疗指南均表明，当单用药物、物理或紫外光治疗都无法有效控制病情时，则需要整体的、针对患者全身的联合治疗，可使用两种及两种以上方法治疗。西医对银屑病的治疗虽采取了多种治疗方法且取得了一定的成效，但同时也面临一些问题，如缓解期短、不良反应多、治疗费用高等。(5)其他治疗：健康教育、心理治疗。银屑病患者多为青中年患者，更易患抑郁症和焦虑症，有更强烈的自杀倾向，患者需要心理治疗、病人教育和精神疗法等心理社会干预方法。

银屑病的中医治疗。(1)中医理论：中医皮肤科学界在中医基本理论指导下，通过大量临床实践，对银屑病进行了深入研究，积累了丰富的临床治疗经验，中医药治疗银屑病疗效确切且副作用少，有着广阔的应用前景。著名中医皮肤病学朱仁康教授认为“血分有热”是银屑病的主要原因；著名现代中医皮肤科赵炳南教授认为血热是机体和体质的内在因素，是发病的主要根据。总结历代中医学家的观点来看，对于银屑病的病因病机有较统一的认识，即银屑病的发生与“血”的关系最大，血热、血燥和血瘀为内在发病基础，并与寒、湿、燥、毒等外因相互作用而发病。目前，中医治疗主张以“血”为切入点进行研究。银屑病的病因病机较为复杂，中医按照不同证型辨证施治，主要分为血热型，治法采用清热解毒，凉血活血；血燥型，治法采用清热养血，滋阴润燥；血瘀型，治法采用活血化瘀，行气通络；火毒型，治法采用清火解毒，凉血清斑。临床上以血热型最为常见，故中医药治疗以清热解毒凉血为主，文献中常用的中药有紫草、龙葵、牡丹皮、生地黄、白茅根、板蓝根、当归、白芷等。(2)中药作用机制：近年来，中药药理学研究发展迅速，中医药治疗银屑病的机制正不断被阐明。李伟凡等用凉血活血汤治疗140例进展期寻常型银屑病，发现治疗后患者血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-8水平显著下降。刘京生等发现凉血活血汤治疗进行期寻常型银屑病后，患者外周血树突状细胞(DC)CD83的表达均明显上调，CD86的表达及刺激混合淋巴细胞增殖的能力均有一定的抑制。吴媛等发现：进行期银屑病患者治疗前IL-2，sIL-2R，CD4⁺T，CD4⁺T/CD8⁺T含量升高(P<0.05)，CD8⁺T，m IL-2R表达下降(P<0.05)；黄芪注射液治疗后，IL-2，sIL-2R，CD4⁺T，CD4⁺T/CD8⁺T含量降低(P<0.05)，CD8⁺T，mIL-2R表达升高(P<0.05)。林燕等研究发现治疗前患者组INF-γ水平及INF-γ/IL-10比值明显升高，IL-10水平明显降低(P<0.001)。采用消银合剂治疗银屑病8周后血清INF-γ、IL-10水平，INF-γ/IL-10与健康对照组相比，无显著性差异。以上研究说明，祖国传统医学在银屑病治疗中发挥着重要作用。(3)临床应用：中医药作为我国特有的治疗手段，在长期的临床治疗实践过程中积累了丰富的经验，显示出独特的优势。中医药研发过程中，院内制剂由于在临床上广泛使用，一直是国家投入的重点。近年来，随着现代中药研究技术的提升，中医药治疗银屑病的实验研究不断深入，活血化瘀、免疫抑制、抗炎及免疫调节作用等成为研究重点，市场上出现了中成药复方青黛胶囊、雷公藤多苷片、昆明山海棠、火把花根片、消银片或颗粒、郁金银屑片及复方丹参片等可根据不同病情选用。但上市产品复方青黛胶囊已发现有肝功能损害、雷公藤多苷片有消化系统、血液系统及泌尿系统等不良反应出现，无论哪种治疗方法，长期使用均会出现一系列的副作用，所以目前临床上尚缺乏安全有效、针对性强、经济实用的银屑病治疗措施，研发安全有效的中药制剂需求巨大。

近年来，我国银屑病患病数量正在逐年增加。现代医学对银屑病的病因、发病机制和临床治疗不断探索，研制了一些内服药物和外用制剂并推广上市，取得了肯定的疗效。目前的治疗方法虽多，但都有一定的缺陷，疗效好的药物其安全性相对较差，而安全性高的药物其疗效不理想，因此在祖国医学宝库中寻找有效的治疗方法将非常有应用前景。龙葵银消片是上海市皮肤病医院根据银屑病进行期属血热风燥证的理论指导下，通过多年临床总结独创了既能清热解毒，凉血祛风，又能匡扶正气的院内制剂，组方疗效好，仅五味药物，价格低廉，具有良好的经济效益和广泛的社会效益。龙葵银消片(沪药制字Z05020300)作为医院制剂在临床应用三十余年，临床经验丰富，无贵重中药。多年临床经验表明该药可有效缓解进展期银屑病，在医院长期的临床使用中未见明显不良反应，患者的依从性好，对于控制银屑病的复发起到了很好的作用。课题组前期发表3篇论文，其中《龙葵银消片治疗寻常型银屑病的疗效观察》，文中公开龙葵银消片是由龙葵、凤尾草、紫草、白芷、山药等五味药材组成。论文《HPLC法测定龙葵银屑片中澳洲茄碱和澳洲茄边碱的含量》，具体公开龙葵银屑片为上海市皮肤病医院自制制剂，由龙葵草、凤尾草、白芷、紫草等药材组成。论文《龙葵银消片质量标准的研究》，具体公开龙葵银消片是由龙葵草、凤尾草、紫草、白芷、山药五味中药组成的片剂。上述三篇文献仅公开龙葵银消片部分组方，且没有公开各组分的具体配比，公众根据上述文献无法从中得知龙葵银消片的具体处方。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供一种治疗银屑病的中药组合物。

本发明的第二个目的在于，提供上述中药组合物的制药用途。

本发明的第三个目的在于，提供一种治疗银屑病的中药片剂。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种治疗银屑病的中药组合物，所述中药组合物是由如下所述重量份的原料药制成：龙葵草87-93份、凤尾草43-47份、紫草43-47份、白芷25-29份、山药25-29份。

在上述治疗银屑病的中药组合物中，作为一个优选方案，所述中药组合物是由如下所述重量份的原料药制成：龙葵草89-91份、凤尾草44-46份、紫草44-46份、白芷26-28份、山药26-28份。

在上述治疗银屑病的中药组合物中，作为一个优选方案，所述中药组合物是由如下所述重量份的原料药制成：龙葵草90份、凤尾草45份、紫草45份、白芷27份、山药27份。

所述的药物组合物还可进一步包含常规载体，例如：填充剂如淀粉、蔗糖，乳糖、微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇、十二烷基硫酸钠；吸附载体如高龄土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

在上述治疗银屑病的中药组合物中，作为一个优选方案，所述银屑病是指寻常型、关节病型、脓疱型或红皮病型银屑病。

在上述治疗银屑病的中药组合物中，作为一个优选方案，所述银屑病是指进行期、静止期或退行期银屑病。

在上述治疗银屑病的中药组合物中，作为一个优选方案，所述银屑病是指进行期寻常型银屑病。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述的中药组合物在制备治疗银屑病的口服药物中的应用。

在上述应用中，所述药物的剂型为可以是口服药物的常规剂型，例如可以是片剂、丸剂、散剂、粉剂、颗粒剂、糖浆剂、口服液等，优选所述药物剂型为片剂。

在上述应用中，作为一个优选方案，所述银屑病是指寻常型、关节病型、脓疱型或红皮病型银屑病。

在上述应用中，作为一个优选方案，所述银屑病是指进行期、静止期或退行期银屑病。

在上述应用中，作为一个优选方案，所述银屑病是指进行期寻常型银屑病。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

一种治疗银屑病的中药片剂，所述中药片剂是由如下所述方法制备：

1)原料药：按照如上任一所述的中药组合物取原料药；

2)制法：山药粉碎成细粉，其余四味加水煎煮二次，第一次加水10倍量，煎煮二小时，第二次加水8倍量，煎煮一小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩，静置，滤取上清液，浓缩至清膏；加入山药细粉、片剂辅料，制成颗粒，干燥，压制成片，即得。

在上述中药片剂中，作为一个优选方案，上清液在80℃的条件下浓缩至1.27g/ml，所述片剂辅料为淀粉，淀粉与清膏的重量比为0.05:1-0.24:1(20万片清膏用量范围40-50kg、玉米淀粉用量为2-12kg)。

在上述中药片剂中，作为一个优选方案，所述银屑病是指进行期寻常型银屑病。

本发明优点在于：

1、组方严谨，审因论治。中医辩证认为进展期银屑病，属“血热型”范畴，临床辨证多归于血热内蕴，郁久化毒，以致血热毒邪外壅肌肤而发病，治疗时大多采用清热解毒、凉血活血之药。本发明在上述辩证与辨病结合的基础上，根据祖国医学“辩证求因，审因论治”的原则组方而成，全方共五味中药，各药的性能及其在方中的地位有如下述：方用龙葵性味苦，微寒，归肺、肝、胃经，功效清热解毒散节，为君药；配以凤尾草、紫草两味苦、甘寒，功效清热凉血，利湿解毒，与君药有相须作用，为臣药。又以白芷，性味辛温，归胃、大肠、肺经，祛风解表，为正佐。以山药，性味甘平，归脾、肺、肾经，补脾胃,益肝肾,为反佐。综上所述，本方众味协同，既能清热解毒，凉血祛风，又能匡扶正气，适用于治疗进展期银屑病。所用各药主次有序，层次分明，符合中医方剂学的组方原则。

2、龙葵银消片是我院临床特色中药制剂，来源于我院名老中医的多年临床经验总结，仅含五味中药，组方简单，制备工艺稳定，产品质量可控，已在临床应用30年余，疗效确切，未见明显不良反应，具有显著的新药转化前景。

3、本发明通过药效试验，对提取与纯化工艺进行筛选。通过药效试验比较水提、醇提和水提醇沉工艺对本品疗效的影响，确定了最佳提取纯化工艺。

4、采用小鼠尾部鳞片模型、雌激素周期小鼠阴道上皮模型、咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型，比较龙葵银消片及不同配比的组方对银屑病小鼠颗粒层缺失、上皮细胞增生、小鼠表皮异常角化与增殖、角化不全等的作用，龙葵银消片具有明显促进小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成及抑制小鼠雌激素周期阴道上皮基地细胞有丝分裂的作用，龙葵银消片可通过改善患者的表皮角化不全、增生过快对银屑病具有治疗作用。龙葵银消片组对于小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成及抑制小鼠雌激素周期阴道上皮基地细胞有丝分裂的作用明显优于对照药物组，具有治疗效果显著的优势。

5、银屑的特点是治疗较难，容易反复发作，目前治疗存在着相当多的副作用。中医药治疗银屑病在临床的应用中效果显著，但是市场上得到广泛认可的中药口服药物并不多见。本发明龙葵银消片通过数十年临床经验的积累而成，有良好的工作基础，可望成为其中的佼佼者。

附图说明

附图1为实施例5中不同实验组的表皮厚度。注：与正常组比较，^*P<0.05，与模型组比较^#P<0.05，与甲氨蝶呤组比较^ΔP<0.05。

附图2为实施例5中不同实验组的血清TNF-α含量。注：与正常组比较，^*P<0.05，与模型组比较^#P<0.05，与甲氨蝶呤组比较^ΔP<0.05。

附图3为实施例5中不同实验组的血清IL-2含量。注：与正常组比较，^*P<0.05，与模型组比较^#P<0.05，与甲氨蝶呤组比较^ΔP<0.05。

附图4为实施例6中不同实验组的血清TNF-α含量。注：与正常组比较，^*P<0.05，与模型组比较^#P<0.05，与水提组比较^ΔP<0.05。

附图5为实施例6中不同实验组的血清IL-2含量。注：与模型组比较，^*P<0.05，与水提组比较^#P<0.05。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1治疗银屑病的中药组合物

治疗银屑病的中药组合物：其原料配比为：龙葵草90份、凤尾草45份、紫草45份、白芷27份、山药27份。

实施例2治疗银屑病的中药组合物

治疗银屑病的中药组合物：其原料配比为：龙葵草91份、凤尾草46份、紫草46份、白芷28份、山药28份。

实施例3治疗银屑病的中药组合物

治疗银屑病的中药组合物：其原料配比为：龙葵草89份、凤尾草44份、紫草44份、白芷26份、山药26份。

实施例4龙葵银消片

【处方】龙葵草900g、凤尾草450g、紫草450g、白芷270g、山药270g。

【制法】以上五味，山药粉碎成细粉(过100目筛)，其余四味加水煎煮二次，第一次加水10倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，静置24小时，滤取上清液，浓缩至相对密度为1.27(80℃)的清膏；加入山药细粉及适量淀粉(淀粉具体用量0.01kg-0.06kg)，制成颗粒，干燥，压制成1000片，即得。

【用法用量】口服，一次8～10片，一日3次。

【规格】每片重0.3g。

龙葵银消片(沪药制字Z05020300)作为医院制剂在临床应用三十余年，临床经验丰富，无贵重中药。多年临床经验表明该药可有效缓解进展期银屑病，在我院长期的临床使用中未见明显不良反应，患者的依从性好，对于控制银屑病的复发起到了很好的作用。课题组在前期已完成上海申康医学发展中心中医药验方临床评价，采用随机、双盲、平行对照临床研究，对龙葵银消片治疗银屑病的有效性和安全性进行评价。研究结果显示：本品对进展期银屑病疗效好，治疗八周后总有效率超过85％{总有效率＝(完全缓解例数+显著缓解例数+部分缓解例数)/总例数*100％}，安全性高，未见明显不良反应，且价格低廉，值得在临床推广。

对照药物1

【处方】龙葵草800g、凤尾草480g、紫草480g、白芷290g、山药290g。

以上五味，山药粉碎成细粉(过100目筛)，其余四味加水煎煮二次，第一次加水10倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，静置24小时，滤取上清液，浓缩至相对密度为1.27(80℃)的清膏；加入山药细粉及适量淀粉(淀粉具体用量0.01kg-0.06kg)，制成颗粒，干燥，压制成1000片，即得。

对照药物2

【处方】龙葵草1000g、凤尾草420g、紫草420g、白芷250g、山药250g。

以上五味，山药粉碎成细粉(过100目筛)，其余四味加水煎煮二次，第一次加水10倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，静置24小时，滤取上清液，浓缩至相对密度为1.27(80℃)的清膏；加入山药细粉及适量淀粉(淀粉具体用量0.01kg-0.06kg)，制成颗粒，干燥，压制成1000片，即得。

实施例5动物药效实验

采用小鼠尾部鳞片表皮模型、雌激素周期小鼠阴道上皮模型、咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型，观察龙葵银消片对银屑病小鼠颗粒层缺失、上皮细胞增生、小鼠表皮异常角化与增殖、角化不全等的作用。

1.对小鼠尾部鳞片颗粒层缺失的影响

1.1小鼠尾部鳞片表皮模型小鼠尾部鳞片表皮因正常角化无颗粒层形成，可直接模拟银屑病分化障碍、角化不全的特点。

1.2分组及给药

取昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重(23.3±1.3)g，随机分为5组，设置生理盐水空白对照组、甲氨蝶呤片对照组、龙葵银消片组、对照药物1组及对照药物2组，每组10只。龙葵银消片组予龙葵银消片水溶液182mg/kg,对照药物1组予对照药物1水溶液182mg/kg，对照药物2组予对照药物2水溶液182mg/kg，甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤水溶液2mg/kg，生理盐水组给予等容积生理盐水。采用灌胃方式给药，每日一次，灌胃给药量按小鼠体重每10g灌服0.1mL口服制剂，连续给药14天。

1.3取材处理及观察指标

于最后一次给药5h后，对小鼠注射麻醉剂，断颈处死，剥取距小鼠尾根约1.5cm处的尾部皮肤，制作组织病理切片，4％多聚甲醛固定，脱水，石蜡包埋，切片脱蜡、水化及染色，光镜下逐一观察组织学在光学显微镜下观察每个鳞片表皮有无颗粒层形成。计量数据均以x-±s表示，使用SPSS 23.0软件进行统计分析。两组间采用t检验进行处理，多组间比较采用方差分析，检验水准α＝0.05，P<0.05为差异有统计学意义统计学处理使用。

1.4结果

表1各组对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的影响

注：与空白组比较，^*P<0.05，与甲氨蝶呤组比较^#P<0.05

生理盐水组缺乏或仅有少量的颗粒层，龙葵银消片组、对照药物1组、对照药物2组和甲氨蝶呤片组颗粒层细胞均有不同程度的增加，各剂量组分别与生理盐水组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。龙葵银消片组与甲氨蝶呤组比较，有颗粒层鳞片数差异无统计学意义(P＞0.05)；而对照药物组1、对照药物组2与甲氨蝶呤组比较，有颗粒层鳞片数差异具有统计学意义(P＜0.05)。表明龙葵银消片和甲氨蝶呤均能显著促进鼠尾鳞片表皮颗粒层的形成，从而促进表皮的正常分化，且优于对照药物1组、对照药物2组。

2.对雌激素周期小鼠阴道上皮分裂指数的影响

2.1小鼠阴道上皮细胞有丝分裂模型

取昆明种雌性小鼠，体重(24±1.41)g，实验开始前3d，向雌鼠灌胃苯甲酸雌二醇，每次10mg/kg，每日1次，连续3d，使小鼠阴道上皮处于雌激素期，模拟银屑病表皮增生过快的特点。

2.2分组和给药

随机分为6组，每组10只，除正常对照组外，其余各组均于实验开始前3d下午向雌鼠灌胃苯甲酸雌二醇，每次10mg/kg，以使小鼠阴道上皮处于雌激素期，模拟银屑病表皮增生过快的特点。各组分别进行以下干预：正常对照组给予生理盐水每10g灌胃0.1mL，每日一次，连给3d；模型对照组用生理盐水每10g灌服0.1mL；甲氨蝶呤片对照组予以甲氨蝶呤水溶液2mg/kg、龙葵银消片组予以龙葵银消片水溶液182mg/kg、对照药物1组予以对照药物1水溶液182mg/kg、对照药物2组予以对照药物2水溶液182mg/kg。采用灌胃方式给药，每日一次，灌胃给药量按小鼠体重每10g灌服0.1mL口服制剂，连续给药14天。

2.3取材处理及观察指标

末次给药1h后，6个组小鼠腹腔均注射秋水仙碱2mg/kg，5h后处死小鼠，取阴道标本，用10％福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色，用光学显微镜观察有丝分裂情况，计数300个基底细胞中的有丝分裂数，计算有丝分裂指数(每100个基底细胞有丝分裂数)。计量数据均以x^-±s表示，使用SPSS 23.0软件进行统计分析。两组间采用t检验进行处理，多组间比较采用方差分析，检验水准α＝0.05，P<0.05为差异有统计学意义统计学处理使用。

2.4结果

表2各组对雌性周期小鼠阴道上皮细胞分裂指数的影响

注：与空白组比较，^*P<0.05，与甲氨蝶呤组比较^#P<0.05

光镜下观察发现，灌胃过苯甲酸雌二醇的模型组小鼠阴道上皮呈多层上皮，出现角化，与正常组相比，皮基底细胞有丝分裂明显，证明属于雌激素周期的阴道上皮。正常对照组与模型对照组比较，有丝分裂指数明显较低(P＜0.05)，造模成功。与模型对照组相比，龙葵银消片组、甲氨蝶呤组对小鼠阴道上皮基底细胞有丝分裂均具有显著的抑制作用，有丝分裂指数明显降低(P＜0.05)。龙葵银消片组与甲氨蝶呤组比较，有丝分裂指数降低无统计学差异(P>0.05)，对照药物1组和对照药物2组与甲氨蝶呤组比较，有丝分裂指数差异具有统计学意义(P＜0.05)。

上述两个实验结果显示，龙葵银消片具有明显促进小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成及抑制小鼠雌激素周期阴道上皮基地细胞有丝分裂的作用，说明龙葵银消片可通过改善患者的表皮角化不全、增生过快对银屑病具有治疗作用。龙葵银消片组对于小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成及抑制小鼠雌激素周期阴道上皮基地细胞有丝分裂的作用明显优于对照药物1组及对照药物2组，且在其他具有相同中药成分不同配比组方的对照药物中，龙葵银消片组显示出类似的治疗优势，表明本发明中龙葵银消片的配比是最优的，具有治疗效果显著的优点。

3.对咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型的影响

3.1分组及给药

取8周龄SPF级BALB/c小鼠60只，雌雄各半，体重(20±1.5)g，随机分为6组，每组10只，除正常组外，其余均采用5％咪喹莫特软膏(明欣利迪，四川明欣药业)均匀涂于SPF级BALB/c小鼠背部，按照50mg/cm²剂量均匀涂抹于脱毛部位，1次/d，连续给药7d。各组分别进行以下干预：模型组仅予以咪喹莫特造模，生理盐水空白对照组予以生理盐水10g灌胃0.1mL、甲氨蝶呤片对照组予以甲氨蝶呤片水溶液2mg/kg、龙葵银消片组予以龙葵银消片水溶液182mg/kg、对照药物1组予对照药物1水溶液182mg/kg、对照药物2组予对照药物2水溶液182mg/kg。采用灌胃方式给药，每日一次，灌胃给药量按小鼠体重每10g灌服0.1mL口服制剂，连续给药14天。

3.2取材处理及观察指标

各组小鼠分别于第8天拍照并取材。对小鼠背部皮肤进行观察评分，然后经脱颈法处死小鼠。剪取皮损处组织，一部分固定于10％福尔马林溶液中用于制备石蜡切片，进行HE染色。分别采用放射免疫法和ELISA法检测小鼠血清中银屑病相关的炎性细胞因子TNF-α和IL-2的表达情况。

3.3结果

光学显微镜下观察发现，小鼠皮肤可见表皮角化过度伴角化不全，棘层肥厚，表皮突向下延长，真皮乳头内可见毛细血管扩张伴炎症细胞浸润等银屑病特征性病理改变，表皮厚度与正常组相比具有显著差异(P＜0.05)，造模成功。正常组中TNF-α和IL-2水平则与模型组差异有统计学意义(P＜0.05)。与模型对照组相比，龙葵银消片组、甲氨蝶呤组对小鼠表皮厚度有显著改善(图1)，且血清中的TNF-α及IL-2的水平均具有抑制作用(图2和图3)，炎症因子水平降低，但未降至正常水平(P<0.05)。龙葵银消片组与甲氨蝶呤组比较，炎症因子水平降低无统计学差异(P>0.05)，对照药物1组和对照药物2组与甲氨蝶呤组比较，炎症因子水平降低差异具有统计学意义(P＜0.05)。

上述实验结果显示，龙葵银消片具有明显改善咪喹莫特银屑病小鼠表皮异常增殖及降低血清IL-2和TNF-α炎症因子水平的作用，且龙葵银消片组对于咪喹莫特银屑病小鼠的作用明显优于对照药物1组及对照药物2组，且在其他具有相同中药成分不同配比组方的对照药物中，龙葵银消片组显示出类似的治疗优势，表明本发明中龙葵银消片的配比是最优的，具有治疗效果显著的优点。

实施例6不同提取纯化工艺的药效实验

通过药效试验比较水提、醇提和水提醇沉工艺对本品疗效的影响，确定最优的提取纯化工艺。

在医院制剂工艺基础上，在中医理论的指导下，根据处方中药物君臣佐使及有效成分，采用药效学实验指导提取纯化工艺的优化，比较水提、醇提和水提醇沉三种不同方法的提取效果，所得提取物通过建立的咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型试验最终完成龙葵银消片的最优提取纯化工艺筛选。

水提：精密称取龙葵草900g、凤尾草450g、紫草450g、白芷270g、山药270g，平行3份，以上五味，山药粉碎成细粉(过100目筛)，其余四味加水煎煮二次，第一次加水10倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，静置24小时，滤取上清液，浓缩至相对密度为1.27(80℃)的清膏；加入山药细粉及适量淀粉(淀粉具体用量0.01kg-0.06kg)，制成颗粒，干燥，压制成1000片。

醇提：精密称取龙葵草900g、凤尾草450g、紫草450g、白芷270g、山药270g，平行3份，以上五味，山药粉碎成细粉(过100目筛)，其余四味加60％乙醇溶液提取二次，第一次加60％乙醇溶液10倍量，提取时间2小时，第二次加60％乙醇溶液8倍量，提取时间1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至适量，静置24小时，滤取上清液，浓缩至相对密度为1.27(80℃)的清膏；加入山药细粉及适量淀粉(淀粉具体用量0.01kg-0.06kg)，制成颗粒，干燥，压制成1000片。

水提醇沉：精密称取龙葵草900g、凤尾草450g、紫草450g、白芷270g、山药270g，平行3份，以上五味，山药粉碎成细粉(过100目筛)，其余四味加水煎煮二次，第一次加水10倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，静置24小时，滤取上清液，浓缩至相对密度为1.27(80℃)的清膏，冷却到室温后，搅匀，加乙醇至含醇量60％，冷藏12h，倾出上层液，过滤，滤液减压回收至相对密度1.08(60℃)；加入山药细粉及适量淀粉(淀粉具体用量0.01kg-0.06kg)，制成颗粒，干燥，压制成1000片。

药效实验：

取8周龄SPF级BALB/c小鼠50只，雌雄各半，体重(20±1.5)g，随机分为5组，每组10只，除正常组外，其余均采用5％咪喹莫特软膏(明欣利迪，四川明欣药业)均匀涂于小鼠背部，按照50mg/cm²剂量均匀涂抹于脱毛部位，1次/d，连续给药7d。取咪喹莫特诱导成功的银屑病模型豚鼠，分别进行以下干预：模型组仅予以咪喹莫特造模，设置生理盐水空白对照组予以生理盐水10g灌胃0.1mL、水提组、醇提组及水提醇沉组给予剂量182mg/kg。采用灌胃方式给药，每日一次，灌胃给药量按小鼠体重每10g灌服0.1mL口服制剂，连续给药14天。

取材处理及观察指标：

各组小鼠分别于第8天拍照并取材。对小鼠背部皮肤进行观察评分，然后经脱颈法处死小鼠。剪取皮损处组织，一部分固定于10％福尔马林溶液中用于制备石蜡切片，进行HE染色。分别采用放射免疫法和ELISA法检测小鼠血清中银屑病相关的炎性细胞因子TNF-α和IL-2的表达情况。

表3各组小鼠皮肤表层厚度

注：与正常组比较，^*P<0.05，与模型组比较^#P<0.05，与水提组比较^ΔP<0.05

光学显微镜下观察发现，小鼠皮肤可见表皮角化过度伴角化不全，棘层肥厚，表皮突向下延长，真皮乳头内可见毛细血管扩张伴炎症细胞浸润等银屑病特征性病理改变，表皮厚度与正常组相比具有显著差异(P＜0.05)，造模成功。根据图4和图5，与模型对照组相比，龙葵银消片水提组和水提醇沉组对可以显著改善银屑病小鼠皮肤厚度，且对血清中的TNF-α及IL-2的水平均具有抑制作用，但与正常组比较，未降至正常水平(P<0.05)，醇提组改善IL-2水平不明显。龙葵银消片水提组与醇提组、水提醇沉组比较，表皮厚度改善和炎症因子水平降低差异具有统计学意义(P＜0.05)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种治疗银屑病的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物是由如下所述重量份的原料药制成：龙葵草87-93份、凤尾草43-47份、紫草43-47份、白芷25-29份、山药25-29份。

2.根据权利要求1所述治疗治疗银屑病的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物是由如下所述重量份的原料药制成：龙葵草89-91份、凤尾草44-46份、紫草44-46份、白芷26-28份、山药26-28份。

3.根据权利要求2所述治疗治疗银屑病的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物是由如下所述重量份的原料药制成：龙葵草90份、凤尾草45份、紫草45份、白芷27份、山药27份。

4.权利要求1-3任一所述的中药组合物在制备治疗银屑病的口服药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为片剂。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述银屑病是指寻常型、关节病型、脓疱型或红皮病型银屑病。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述银屑病是指进行期、静止期或退行期银屑病。

8.一种治疗银屑病的中药片剂，其特征在于，由如下所述方法制备：

1)原料药：按照权利要求1-3任一所述的中药组合物取原料药；

2)制法：山药粉碎成细粉，其余四味加水煎煮二次，第一次加水10倍量，煎煮二小时，第二次加水8倍量，煎煮一小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩，静置，滤取上清液，浓缩至清膏；加入山药细粉、片剂辅料，制成颗粒，干燥，压制成片，即得。

9.根据权利要求8所述治疗银屑病的中药片剂，其特征在于，上清液在80℃的条件下浓缩至1.27g/ml，所述片剂辅料为淀粉，淀粉与清膏的重量比为0.05:1-0.24:1。

10.根据权利要求8所述治疗银屑病的中药片剂，其特征在于，所述银屑病是指进行期寻常型银屑病。