CN110339190A - 银杏萜内酯在制备预防或治疗多发性硬化药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了银杏萜内酯作为唯一活性成分在制备预防和或治疗多发性硬化药物中的应用，属于医药领域。本发明还公开了银杏萜内酯作为唯一活性成分在制备免疫调节剂药物中的应用。本发明公开了银杏萜内酯具有一定减轻EAE小鼠病情的作用，并且显示出一定量效关系。

Description

银杏萜内酯在制备预防或治疗多发性硬化药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及银杏萜内酯在制备预防或治疗多发性硬化药物中的用途。

背景技术

多发性硬化(multiple sclerosis，MS)是以中枢神经系统白质炎性脱髓鞘病变为主要特点的自身免疫病。本病最常累及的部位为脑室周围白质、视神经、脊髓、脑干和小脑，主要临床特点为中枢神经系统白质散在分布的多病灶与病程中呈现的缓解复发，症状和体征的空间多发性和病程的时间多发性。好发于青壮年，病程长，反复发作，迁延不愈，是世界公认的疑难病之一。

多发性硬化是一种终身疾病，发病机制尚不十分清楚，CD4+T淋巴细胞介导的对自身髓鞘抗原产生的免疫应答为其可能的发病机制。该病尚无肯定有效的治疗措施，近期也没有关于终止治疗的病例。日前临床主要治疗方案有：急性期采用免疫抑制剂，选用激素；缓解期采用免疫调节剂、神经保护剂、干细胞移植疗法。免疫调节剂选用Β干扰素、芬戈莫德、福马酸二甲酯、特立氟胺、克拉屈滨、拉喹莫德、那他株单抗、阿仑球单抗、达克珠单抗等。

临床上，如果病人不能耐受一种治疗，或治疗失败，需采用另一种治疗。因此临床上亟需开发更多针对多发性硬化的药物。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了银杏萜内酯在制备预防和/或治疗多发性硬化的药物中的应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案：

一方面，本发明提供银杏萜内酯作为唯一活性成分在制备预防和/或治疗多发性硬化的药物中的应用。

进一步地，所述银杏萜内酯选自银杏内酯A或银杏内酯B或银杏内酯C或银杏内酯M或银杏内酯J或银杏内酯K或银杏内酯L或银杏内酯N或银杏内酯P或银杏内酯Q或白果内酯中的一种或多种。

进一步地，所述银杏萜内酯包含白果内酯和银杏内酯B。

更进一步地，所述银杏萜内酯还包括选自银杏内酯A或银杏内酯C或银杏内酯M或银杏内酯J或银杏内酯K或银杏内酯L或银杏内酯N或银杏内酯P或银杏内酯Q中的一种或多种。

所述药物由银杏萜内酯作为唯一活性成分与药用辅料或辅助性成分按常规方法制成的药物组合物。

进一步地，所述药物组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、注射剂、针剂、粉针剂。

进一步地，所述药物组合物为口服制剂。

另一方面，本发明公开了银杏萜内酯作为唯一活性成分在制备免疫调节剂药物中的应用。

本发明公开了银杏萜内酯具有一定减轻EAE小鼠病情的作用，并且显示出一定量效关系。EAE小鼠外周血炎性介质检测表明，这一作用可能是通过抑制致炎细胞因子TNF-a、IFN-r、IL-17F，提高发病高峰期EAE鼠抑炎因子IL-10、IL-12的水平而发挥作用。

将银杏萜内酯作为唯一活性成分与药用辅料或辅助性成分按常规方法制成的药物组合物，临床上可用于预防或缓解多发性硬化的病情。

附图说明

图1为：试验例1各组小鼠体重变化曲线，Dn代表造模第n天，n为自然数；

图2为：试验例1各组小鼠平均评分变化曲线，Dn代表造模第n天，n为自然数。

具体实施方式

小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoinnuneencephalomyelitis，EAE)是由神经抗原，如髓鞘碱性蛋白和髓鞘蛋白脂质蛋白，免疫接种诱导的由T细胞介导的中枢神经系统自身免疫疾病，与MS在临床、病理、免疫等方面有相同特征，是公认的MS经典动物模型。本发明通过研究银杏内酯对EAE动物模型的干预试验来证明本发明的有益效果。

本发明所述的预防指预防疾病发生和/或预防疾病复发。

试验例1

1试验动物与试剂

C57BL小鼠50只，6-8周龄，雌性，购买于北京市通利华实验动物公司。动物饲养于中国中医科学院西苑医院SPF动物房，普通饲料喂养。

MOG35-55(MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)，上海吉尔生化公司合成，纯度98.4％。

百日咳毒素，来自百日咳博德特氏杆菌(Bordetella pertussis)，P7208-50μg，CAS号：70323-44-30。

结核分枝杆菌DES.H 37RA，100mg,DIFCO。

完全弗氏佐剂，F5881-10ml，SIGMA。

银杏内酯，来自成都百裕制药股份有限公司，银杏内酯注射液，国药准字Z20110035。

激素选用地塞米松。

2试验方法

2.1 EAE模型的建立

(1)实验动物：选用C57BL小鼠50，6-8周龄，雌性。

(2)试剂准备：用MOG35-55按1ml比例溶于0.01M的PBS液中，完全弗氏佐剂加结核杆菌5mg/ml。将MOG35-55水溶液与同体积的佐剂混合(1：1)，充分乳化。取50g PT，用0.01MPBS液溶解，浓度为2g/ml。

(3)造模：每只动物每次腹腔注射PT溶液0.1ml。第0天经小鼠背部皮下分3-4点注射0.2ml抗原配剂，注射点分布于小鼠四肢肩上。每只小鼠注射0.2ml的乳化剂，MOG35-55注射量为200g/只。第0、2天腹腔注射200ng/只百日咳毒素。

(4)动物评价

动物整体评价：自造模当天起，每天对小鼠进行称重，评分一次。

EAE模型评分标准：每天检查EAE的临床症状，并以0-5进行临床评分：0，无症状；0.5部分尾巴无力；1.0尾巴碳环；2丧失协调运动及后肢轻度瘫痪；2.5单侧后肢瘫痪；3.0双侧后肢瘫痪；3.5后肢瘫痪伴随前肢无力；4.0前肢瘫痪；5.0濒死(Stromnes IM，GovermanJM.Active induction of experimental allergic eocephalomyelitis.NatProtoc.2006；1(4)：1810-9.)。

评分人员要求：具备同类试验评分经验，且不知分组情况和给药情况。

采血：于造模前1天、造模2周(发病高峰期)后、造模4后周(发病后进入平稳期)用腆伏给尾部欲剪断部位消毒，采血后使用云南白药止血并包扎。

2.1分组及给药

将50只小鼠随机分成5组，每组10只。

空白对照组：不给予任何药物，与造模动物同时灌胃，给予等量的纯净水。

EAE组：造模第3天给予等量纯净水。

激素组：造模第3天给予7.8mg/kg×天

银杏内酯I组：造模第3天按5mg/kg×天

银杏内酯II组：造模第3天按10mg/kg×天

银杏内酯两组均加入纤维素，蔗糖等辅料以助溶解，以上药物均用纯净水溶解。

3试验结果

3.1小鼠体重、评分变化

如图1所示，与激素组(地塞米松)相比，银杏内酯对EAE小鼠体重的影响不大，p>0.05。各组小鼠平均体重在造模时相近，仅空白组平均体重略高，但是差异<l g，差别无统计学意义。

如图2所示，与EAE组(模型组)相比，银杏内酯对EAE鼠临床评分变化有影响，并呈剂量相关性。试验小鼠在造模D11开始发病，银杏内酯II组平均评分曲线与EAE组比较，显示出了可以抑制EAE病情的趋势，银杏内酯I组与EAE组比较在发病高峰期也显示出对于EAE治疗优势；银杏内酯I组与银杏内酯II组比较，银杏内酯II组显示出了治疗优势，说明银杏内酯对于EAE抑制程度与剂量有关。

3.2小鼠外周血中炎症因子的变化

因试剂盒孔板数的限制，未能对空白组小鼠外周血清进行检测，用药组仅选用一组临床学评分较低的进行检测。银杏內酯II组在临床学评分上明显优于银杏内酯I组，所以检测样本选择银杏内酯II组小鼠的外周血。

如表1、表2检测结果所示，银杏内酯可抑制EAE鼠外周血促炎因子TNF-a、IFN-γ水平，与地塞米松相似。

如表3、表4检测结果所示，银杏内酯能显著提高发病高峰期EAE鼠抑炎因子IL-10、IL-12的水平。

如表5检测结果所示，银杏内酯可抑制EAE鼠外周血促炎因子IL-17F水平。

表1 TNF-a在外周血中变化(pg/mL)

注：*P<0.05。

如表1所示，激素(地塞米松)、银杏内酯在发病高峰期和稳定期可以明显抑制外周血中TNF-a水平，差别具有统计学意义(p<0.05)。

表2 IFN-r在外周血中变化(pg/mL)

注：*P<0.05，**P<0.01。

如表2所示，激素、银杏内酯在发病高峰期可以明显抑制外周血中IFN-γ水平，差别具有统计学意义(p<0.05,P<0.01)。

表3 IL-10在外周血中变化(pg/mL)

注：*P<0.05，**P<0.01。

表4 IL-12p70在外周血中变化(pg/mL)

如表3、表4所示，银杏内酯能提高发病高峰期IL-10、IL-12p70的水平，与模型组相比，差别具有统计学意义(p<0.05)。

表5 IL-17F在外周血中变化(pg/mL)

注：*P<0.05。

如表5所示，银杏内酯组小鼠IL-17F水平明显低于同期EAE小鼠，差别具有统计学意义(p<0.05)。

如表1、表5所述，银杏内酯在发病高峰期对TNF-a和IL-17F水平抑制效果不明显，但是在稳定期阶段明显抑制TNF-a和IL-17F水平,低于同期EAE小鼠水平，差别具有统计学意义(p<0.05)。

3.3结论

综上所述，银杏内酯具有一定减轻EAE小鼠病情的作用，并且显示出一定量效关系。对EAE小鼠外周血炎性介质的检测表明，这一作用可能是通过抑制致炎细胞因子TNF-a、IFN-r、IL-17F，提高发病高峰期EAE鼠抑炎因子IL-10、IL-12的水平而发挥作用的。

实施例1

活性成分：白果内酯1000g(1份)银杏内酯B 1000g(1份)

制备方法：上述原料，加入单硬脂酸甘油脂1份，聚乙二醇1份、卡拉胶1份、阿拉伯胶1份、羟丙基甲基纤维素1份等混匀，加入带水溶装置的滴丸机中，均匀加热并适时搅拌，熔融后滴入与之不相混的冷凝液中，冷凝后，取出滴丸，擦去粘附在表面的冷凝液，低温干燥即得。

实施例2

活性成分：白果内酯1000g(1份)银杏内酯B 500g(1份)

银杏内酯A 250g(1份)银杏内酯C 250g(1份)

制备方法：上述原料，加入单硬脂酸甘油脂1份，聚乙二醇1份、卡拉胶1份、阿拉伯胶1份、羟丙基甲基纤维素1份等混匀，加入带水溶装置的滴丸机中，均匀加热并适时搅拌，熔融后滴入与之不相混的冷凝液中，冷凝后，取出滴丸，擦去粘附在表面的冷凝液，低温干燥即得。

实施例3银杏萜内酯制剂对多发性硬化的病例观察

临床资料：临床确诊急性起病2例，亚急性起病4例，慢性起病4例。

临床观察了上述10例多发性硬化病例，其中5例服用本发明实施例1所述的滴丸剂，5例服用本发明实施例2所述的滴丸剂。

初步观察结果显示，9例病情得到缓解，6例未复发。

Claims (8)

1.银杏萜内酯作为唯一活性成分在制备预防和/或治疗多发性硬化的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述银杏萜内酯选自银杏内酯A或银杏内酯B或银杏内酯C或银杏内酯M或银杏内酯J或银杏内酯K或银杏内酯L或银杏内酯N或银杏内酯P或银杏内酯Q或白果内酯中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述银杏萜内酯包含白果内酯和银杏内酯B。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述银杏萜内酯还包括选自银杏内酯A或银杏内酯C或银杏内酯M或银杏内酯J或银杏内酯K或银杏内酯L或银杏内酯N或银杏内酯P或银杏内酯Q中的一种或多种。

5.根据权利要求1～4任意一项所述的应用，其特征在于，所述药物由银杏萜内酯作为唯一活性成分与药用辅料或辅助性成分按常规方法制成的药物组合物。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述药物组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、注射剂、针剂、粉针剂。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述药物组合物为口服制剂。

8.根据权利要求1～4任意一项所述的应用，银杏萜内酯作为唯一活性成分在制备免疫调节剂药物中的应用。