CN110331134A - 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用 - Google Patents

一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110331134A
CN110331134A CN201910654336.2A CN201910654336A CN110331134A CN 110331134 A CN110331134 A CN 110331134A CN 201910654336 A CN201910654336 A CN 201910654336A CN 110331134 A CN110331134 A CN 110331134A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
recognition region
antigen recognition
expression
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910654336.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110331134B (zh
Inventor
刘晗
李丹
王睿恒
许琼予
谢树峰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ruinjin Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine Co Ltd
Original Assignee
Ruinjin Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ruinjin Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine Co Ltd filed Critical Ruinjin Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine Co Ltd
Priority to CN201910654336.2A priority Critical patent/CN110331134B/zh
Publication of CN110331134A publication Critical patent/CN110331134A/zh
Priority to PCT/CN2020/097430 priority patent/WO2021012857A1/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110331134B publication Critical patent/CN110331134B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明涉及一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用。本发明在不具有HLA限制的通用细胞上携带针对肿瘤细胞抗原的抗原识别区域，治疗后该抗原被降解，肿瘤细胞发生一系列改变，直至死亡，进而起到治疗作用。本发明提供了一种治疗肿瘤的新策略，有望替代个体化CART，显著降低CART细胞制备成本的同时，达到治疗肿瘤的目的，又不会产生细胞因子风暴和神经毒性，降低CART治疗的门槛，造福更多的患者。

Description

一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法 和应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，涉及一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用。
背景技术
嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor T cells，CART)是通过基因修饰的手段，使能够特异性识别靶抗原的单克隆抗体的单链可变区(scFv)表达在T细胞表面，同时scFv通过跨膜区与人工设计的T细胞胞内的活化增殖信号阈相耦连。因此，单克隆抗体对靶抗原的特异性识别与T细胞的功能相结合，产生特异性的杀伤作用，且CART能够以非MHC限制性的方式杀伤靶细胞。B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的肿瘤细胞表面稳定表达CD19分子，这就为免疫治疗提供了靶点。近年来，应用靶向CD19的嵌合抗原受体重组T细胞治疗B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)获得了重大进展，在临床上取得了颠覆性治疗效果。然而，CART的制备耗时较长，花费巨大。需要采集病人自体T细胞，在体外进行扩增，但白血病病人一般需多次化疗，因此T细胞数量少，质量差，甚至一些长期化疗病人的T细胞无法实现体外扩增。这就为CART的广泛应用设置了阻碍。此外，CART推广应用过程中还面临一项巨大挑战，即细胞因子释放综合症(CRS)，也称细胞因子风暴。患者接受治疗后，在CAR分子的共刺激信号的作用下，T细胞大量扩增，并释放大量细胞因子，这些炎症介质引起炎性反应致组织损伤，甚至引起死亡。患者甚至会出现高热，低血压，心动过速，心功能不全，肝衰竭等危及生命的症状。神经毒性也是CART治疗过程中的另一大安全隐患。CART治疗后引发的神经系统症状，如：神经错乱，表达性失语，肌痉挛，癫痫发作等，被认为和细胞因子水平急剧增高有关。
CART治疗肿瘤的原理是利用嵌合抗原受体T细胞特异性识别肿瘤相关抗原靶点，经信号传递至胞内引起T细胞激活和增殖以有效杀伤肿瘤细胞。虽然T细胞在CART疗法中发挥关键作用，但也正是限制CART广泛应用和引发诸多不良反应的原因所在。
目前还未见针对白血病的表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供针对白血病的表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品。
第一方面，本发明提供了一种表达抗原识别区域的细胞，所述表达抗原识别区域的细胞是以淋巴细胞、髓系细胞或间充质干细胞为本体细胞，在所述本体细胞的表面表达能够特异性识别白血病细胞表面抗原的抗体，且不表达免疫细胞的共刺激信号。
作为一种优选的实施方案，所述白血病选自急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、多毛细胞性白血病、T细胞淋巴细胞白血病、大颗粒淋巴细胞性白血病和成人T细胞白血病。
作为另一优选的实施方案，所述白血病细胞表面抗原为CD抗原。
作为另一优选的实施方案，所述CD抗原选自CD19、CD20、CD33、CD52、CD45、CD22、CD25、CD7、CD2、CD3、CD79A、CD79B、CD133和CD13。
作为另一优选的实施方案，所述抗体选自scFV、Fab、VHH和单克隆抗体。
作为另一优选的实施方案，所述表达抗原识别区域的细胞其制备方法为：构建表达所述抗体的重组表达载体，然后将所述重组表达载体导入所述本体细胞。
作为另一优选的实施方案，表达所述抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
第二方面，本发明提供了所述的表达抗原识别区域的细胞在制备治疗白血病的药物中的应用。
第三方面，本发明提供了一种制剂，所述制剂含有所述的表达抗原识别区域的细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
第四方面，本发明提供了所述的表达抗原识别区域的细胞的制备方法，所述制备方法为：构建表达所述抗体的重组表达载体，然后将所述重组表达载体导入所述本体细胞。
本发明优点在于：
本发明提供了一种通用型细胞产品及利用该通用型细胞产品治疗白血病的新策略，即在不具有HLA限制的通用细胞上携带针对肿瘤细胞抗原的抗原识别区域，治疗后该抗原被降解，肿瘤细胞发生一系列改变，直至死亡，进而能起到治疗白血病的作用。
CART治疗原理在于识别肿瘤细胞和激活效应T细胞杀伤肿瘤。
间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一类来源于中胚层和神经外胚层且不表达造血系相关标志的具有多项分化潜能的成体多能干细胞，在肺及呼吸系统疾病、心血管疾病、神经系统疾病、自身免疫性疾病以及再生医学与组织工程等方面都有较为广泛的研究和应用。MSCs与肿瘤的关系也有较多的研究。目前研究表明，MSCs对肿瘤可能存在抑制或促进生长两种作用，MSCs对肿瘤生物学行为的促进或抑制作用可能是多种因素综合作用的结果。但目前关于MSCs作用于肿瘤的机制研究并不充分，具有较大的复杂性和不确定性。
本发明的治疗方法与CART治疗或MSCs治疗相比，有着本质上的不同。
实验证实，本发明的表达抗原识别区域的通用型细胞与肿瘤细胞在体内接触后，肿瘤细胞的靶抗原完全消失，进一步导致肿瘤细胞自发凋亡，显著抑制白血病模型小鼠肿瘤进展，治疗效果非常显著。
相比于CART治疗策略，本发明不仅能够减轻危重病人负担，缩短细胞制备周期，降低细胞制备及运输成本，造福更多白血病患者，而且本发明的抗原识别区域中无共刺激信号，效应细胞不会产生大量细胞因子，所以不会发生细胞因子风暴，也不具有神经毒性，因此在未来的临床使用中更安全可靠。
本方案可针对不同肿瘤抗原靶点，因此可以广泛应用于不同肿瘤的治疗。本发明可使用的通用型细胞种类繁多，包括淋巴细胞、髓系细胞和间充质干细胞，还可使用其他通用细胞类型。因此本发明为后续研究奠定了基础，为大范围临床使用带来了希望，具有科研及临床双重指导意义。
附图说明
附图1是CD19CAR-Jurkat，CD133CAR-Jurkat，scFv-Jurkat，scFv-K562，scFv-MSC细胞示意图。
附图2是靶细胞SEM，REH和效应细胞CD19CAR-Jurkat，CD133CAR-Jurkat，scFv-Jurkat，scFv-K562，scFv-MSC共培养不同时间后CD19的表达。
附图3是靶细胞REH，SEM和效应细胞scFv-K562共培养24h后，CD19-PI3K-AKT-cMyc信号通路变化。
附图4是CD19-PI3K-AKT-cMyc信号通路示意图。
附图5是靶细胞SEM，REH和效应细胞scFv-Jurkat，scFv-K562，scFv-MSC共培养不同时间后，靶细胞凋亡情况。
附图6是效应细胞scFv-MSC的体内治疗效果。
附图7是pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV病毒载体图谱。
具体实施方式
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1
1细胞制备
本发明根据CTL019序列，设计CD19CAR和CD19抗原识别区域，从可以分泌特异识别CD133的IgG1单抗AC133的杂交瘤细胞株HB-12346中获得编码该抗体可变区重链(VH)和轻链(VL)的cDNA序列，拼接合成能够结合CD133抗原识别区域，引入膜定位信号(CD8leader)，铰链区(CD8 hinge)，跨膜区(CD8 transmenber)，共刺激信号(CD28，4-1BB，CD3-zata)(序列见表1)。委托生工生物工程(上海)有限公司合成整个表达框，经PCR扩增，引入酶切位点EcoRI和BamHI，酶切后插入pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV病毒载体(图7，购于System Biosciences，货号为CD523A-1)EcoRI-BamHI位点之间，经测序正确后，使用promega公司质粒提取试剂盒提取质粒。慢病毒包装：使用pSPAX2，pMD2G病毒包装系统，Lenti-X细胞，用CaCl2转染试剂进行转染，收获病毒后，进行纯化。细胞株的遗传修饰：获得的病毒侵染Jurkat E6.1，K562及原代间充质干细胞MSC，获得稳转细胞株：CD19CAR-Jurkat，CD133CAR-Jurkat，scFv-Jurkat，scFv-K562，scFv-MSC。示意图如图1所示。
表1
2 Western Blot检测效应细胞和靶细胞共培养后CD19，CD133抗原表达情况
效应细胞：CD19CAR-Jurkat，CD133CAR-Jurkat，scFv-Jurkat，scFv-K562，scFv-MSC，各1×106，分别和靶细胞：REH或SEM(ALL细胞系)以1:1共培养于12孔板中，同时设置对照组，即Jurkat，K562，MSC分别和靶细胞以1:1的比例共培养。每种效应细胞和靶细胞37摄氏度分别孵育0h，2h，4h，6h，8h后，收集细胞于1.5ml EP管中，制备蛋白裂解液。scFv-MSC和靶细胞分别共培养0h，12h，24h，36h，48h，收集细胞于1.5ml EP管中，制备蛋白裂解液。Western Blot检测CD19，CD133表达情况和内参GAPDH表达(CD19抗体购于ABclonal公司，货号：A2577；CD133抗体购于SantaCruz公司，货号：30220；GAPDH抗体购于Sigma公司，货号：G8795)。结果如图2所示，效应细胞和靶细胞共培养后，靶细胞表面的CD19逐渐降低，直至完全消失，说明ALL细胞在CD19-scFv的作用下会出现CD19抗原逃逸的现象，且CD19抗原被彻底降解，此结果必然导致靶细胞出现分子层面的变化；此外CD133CAR-Jurkat细胞导致SEM细胞表面的CD133抗原消失，说明抗原在抗原识别区域的作用下，发生逃逸后降解是一个广泛存在的现象。可针对此类抗原，研发新的治疗方案，致力于突破CART使用过程中局限。
3 Western Blot检测scFv-K562和REH，SEM共培养后CD19下游信号通路变化
效应细胞scFv-K562和靶细胞REH，SEM，各1×106，以1:1共培养于12孔板中，同时设置对照组，即K562和靶细胞以1:1的比例共培养，24h后收集细胞于1.5ml EP管中，制备蛋白裂解液。检测CD19-PI3K-AKT-cMyc信号通路的蛋白表达情况(PI3K抗体购于CST公司，货号：4249；AKT和p-AKT抗体购于CST公司，货号：4685和4060；c-Myc抗体购于SantaCruz公司，货号：sc-40)。结果如图3所示，当CD19降解后，其下游PI3K，p-Akt，c-Myc表达都被下调。此前c-Myc被报道与ALL白血病细胞的增殖存活密切相关，在c-Myc被敲低后的ALL负瘤小鼠生存期显著提高，因此效应细胞和靶细胞共培养后，发生CD19降解的ALL细胞极可能会发生自发凋亡。
4 Annexin-V标记法检测scFv-Jurkat，scFv-K562和scFv-MSC细胞对REH，SEM细胞的诱导凋亡作用
将效应细胞scFv-Jurkat，scFv-K562，scFv-MSC分别用celltrace yellow(ThermoFisher，C34567)标记，靶细胞REH，SEM分别用CFSE(Sigma，21888)标记，以1:1共培养于24孔板中。24h，48h，72h和96h，取部分细胞，用50μl Annexin-V(BD，550475)体系标记凋亡细胞，15min后加入200μl Bounding Burrer,上机检测。结果如图5所示，随天数增加，靶细胞REH，SEM逐渐开始凋亡，说明CD19信号通路被抑制，导致下游c-Myc消失，因为c-Myc与ALL白血病细胞的存活，增殖密切相关，因此ALL白血病细胞自发走向凋亡。
5体内实验
1.5×106的SEM-GL细胞成瘤的NOD/SCID移植瘤小鼠，作为ALL白血病的研究模型，接种肿瘤细胞后第三天开始通过尾静脉注射的方式治疗，对照组1用PBS治疗，对照组2用1.5×106的MSC细胞治疗，实验组用1.5×106的scFv-MSC细胞治疗，每周治疗两次，共进行6次治疗。分别在第10，15，20，27天，进行活体成像，监测肿瘤细胞的分布及进展情况。结果如图6所示，scFv-MSC细胞治疗组肿瘤进展情况明显缓于对照组，且MSC细胞治疗组进展情况与对照组无差异，说明scFv-MSC在体内能起到明显的治疗效果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 上海交通大学医学院附属瑞金医院
<120> 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用
<130> /
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1581
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60
cccgaaattg tgatgaccca gtcacccgcc actcttagcc tttcacccgg tgagcgcgca 120
accctgtctt gcagagcctc ccaagacatc tcaaaatacc ttaattggta tcaacagaag 180
cccggacagg ctcctcgcct tctgatctac cacaccagcc ggctccattc tggaatccct 240
gccaggttca gcggtagcgg atctgggacc gactacaccc tcactatcag ctcactgcag 300
ccagaggact tcgctgtcta tttctgtcag caagggaaca ccctgcccta cacctttgga 360
cagggcacca agctggagat taaaggtgga ggtggcagcg gaggaggtgg gtccggcggt 420
ggaggaagcc aggtccaact ccaagaaagc ggaccgggtc ttgtgaagcc atcagaaact 480
ctttcactga cttgtactgt gagcggagtg tctctccccg attacggggt gtcttggatc 540
agacagccac cggggaaggg tctggaatgg attggagtga tttggggctc tgagactact 600
tactactctt catccctcaa gtcacgcgtc accatctcaa aggacaactc taagaatcag 660
gtgtcactga aactgtcatc tgtgaccgca gccgacaccg ccgtgtacta ttgcgctaag 720
cattactatt atggcgggag ctacgcaatg gattactggg gacagggtac tctggtcacc 780
gtctcctcaa ccactacccc agcaccgagg ccacccaccc cggctcctac catcgcctcc 840
cagcctctgt ccctgcgtcc ggaggcatgt agacccgcag ctggtggggc cgtgcatacc 900
cggggtcttg acttcgcctg cgatatctac atttgggccc ctctggctgg tacttgcggg 960
gtcctgctgc tttcactcgt gatcactctt tactgtagga gtaagaggag caggctcctg 1020
cacagtgact acatgaacat gactccccgc cgccccgggc ccacccgcaa gcattaccag 1080
ccctatgccc caccacgcga cttcgcagcc tatcgctcca agcgcggtcg gaagaagctg 1140
ctgtacatct ttaagcaacc cttcatgagg cctgtgcaga ctactcaaga ggaggacggc 1200
tgttcatgcc ggttcccaga ggaggaggaa ggcggctgcg aactgcgcgt gaaattcagc 1260
cgcagcgcag atgctccagc ctacaagcag gggcagaacc agctctacaa cgaactcaat 1320
cttggtcgga gagaggagta cgacgtgctg gacaagcgga gaggacggga cccagaaatg 1380
ggcgggaagc cgcgcagaaa gaatccccaa gagggcctgt acaacgagct ccaaaaggat 1440
aagatggcag aagcctatag cgagattggt atgaaagggg aacgcagaag aggcaaaggc 1500
cacgacggac tgtaccaggg actcagcacc gccaccaagg acacctatga cgctcttcac 1560
atgcaggccc tgccgcctcg g 1581
<210> 2
<211> 1587
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60
cccgatgttg tgatgactca gtctccactc tccctgcccg tcacccctgg agagccggcc 120
tccatctcct gcaggtctag tcagagtctt gcaaacagtt atgggaacac ctatttgtct 180
tggtacctgc agaagccagg gcagtctcca cagctcctga tctatgggat ttccaacaga 240
ttttctgggg tccctgacag gttcagtggc agtggatcag gcacagattt tacactgaaa 300
atcagcagag tggaggctga ggatgttggg gtttattact gcttacaagg tacacatcag 360
ccgtacacgt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaag gcagtactag cggtggtggc 420
tccgggggcg gttccggtgg gggcggcagc agccaggttc agctggtgca gtctggagct 480
gaggtgaaga agcctggggc ctcagtgaag gtctcctgca aggcttctgg ttacaccttt 540
accgactttg aaatgcactg ggtgcgacag gcccctggac aagggcttga gtggatggga 600
gatattgatc ctggaactgg tgatactgcc tacaatctga agttcaaggg cagagtcacc 660
atgaccacag acacatccac gagcacagcc tacatggagc tgaggagcct gaggtctgac 720
gacacggccg tgtattactg tgcgttgggg gcctttgttt actggggcca gggaaccctg 780
gtcaccgtct cctcaaccac taccccagca ccgaggccac ccaccccggc tcctaccatc 840
gcctcccagc ctctgtccct gcgtccggag gcatgtagac ccgcagctgg tggggccgtg 900
catacccggg gtcttgactt cgcctgcgat atctacattt gggcccctct ggctggtact 960
tgcggggtcc tgctgctttc actcgtgatc actctttact gtaggagtaa gaggagcagg 1020
ctcctgcaca gtgactacat gaacatgact ccccgccgcc ccgggcccac ccgcaagcat 1080
taccagccct atgccccacc acgcgacttc gcagcctatc gctccaagcg cggtcggaag 1140
aagctgctgt acatctttaa gcaacccttc atgaggcctg tgcagactac tcaagaggag 1200
gacggctgtt catgccggtt cccagaggag gaggaaggcg gctgcgaact gcgcgtgaaa 1260
ttcagccgca gcgcagatgc tccagcctac aagcaggggc agaaccagct ctacaacgaa 1320
ctcaatcttg gtcggagaga ggagtacgac gtgctggaca agcggagagg acgggaccca 1380
gaaatgggcg ggaagccgcg cagaaagaat ccccaagagg gcctgtacaa cgagctccaa 1440
aaggataaga tggcagaagc ctatagcgag attggtatga aaggggaacg cagaagaggc 1500
aaaggccacg acggactgta ccagggactc agcaccgcca ccaaggacac ctatgacgct 1560
cttcacatgc aggccctgcc gcctcgg 1587
<210> 3
<211> 996
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60
cccgaaattg tgatgaccca gtcacccgcc actcttagcc tttcacccgg tgagcgcgca 120
accctgtctt gcagagcctc ccaagacatc tcaaaatacc ttaattggta tcaacagaag 180
cccggacagg ctcctcgcct tctgatctac cacaccagcc ggctccattc tggaatccct 240
gccaggttca gcggtagcgg atctgggacc gactacaccc tcactatcag ctcactgcag 300
ccagaggact tcgctgtcta tttctgtcag caagggaaca ccctgcccta cacctttgga 360
cagggcacca agctggagat taaaggtgga ggtggcagcg gaggaggtgg gtccggcggt 420
ggaggaagcc aggtccaact ccaagaaagc ggaccgggtc ttgtgaagcc atcagaaact 480
ctttcactga cttgtactgt gagcggagtg tctctccccg attacggggt gtcttggatc 540
agacagccac cggggaaggg tctggaatgg attggagtga tttggggctc tgagactact 600
tactactctt catccctcaa gtcacgcgtc accatctcaa aggacaactc taagaatcag 660
gtgtcactga aactgtcatc tgtgaccgca gccgacaccg ccgtgtacta ttgcgctaag 720
cattactatt atggcgggag ctacgcaatg gattactggg gacagggtac tctggtcacc 780
gtctcctcaa ccactacccc agcaccgagg ccacccaccc cggctcctac catcgcctcc 840
cagcctctgt ccctgcgtcc ggaggcatgt agacccgcag ctggtggggc cgtgcatacc 900
cggggtcttg acttcgcctg cgatatctac atttgggccc ctctggctgg tacttgcggg 960
gtcctgctgc tttcactcgt gatcactctt tactgt 996

Claims (10)

1.一种表达抗原识别区域的细胞，其特征在于，所述表达抗原识别区域的细胞是以淋巴细胞、髓系细胞或间充质干细胞为本体细胞，在所述本体细胞的表面表达能够特异性识别白血病细胞表面抗原的抗体，且不表达免疫细胞的共刺激信号。
2.根据权利要求1所述的表达抗原识别区域的细胞，其特征在于，所述白血病选自急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、多毛细胞性白血病、T细胞淋巴细胞白血病、大颗粒淋巴细胞性白血病和成人T细胞白血病。
3.根据权利要求1所述的表达抗原识别区域的细胞，其特征在于，所述白血病细胞表面抗原为CD抗原。
4.根据权利要求3所述的表达抗原识别区域的细胞，其特征在于，所述CD抗原选自CD19、CD20、CD33、CD52、CD45、CD22、CD25、CD7、CD2、CD3、CD79A、CD79B、CD133和CD13。
5.根据权利要求1所述的表达抗原识别区域的细胞，其特征在于，所述抗体选自scFV、Fab、VHH和单克隆抗体。
6.根据权利要求1所述的表达抗原识别区域的细胞，其特征在于，所述表达抗原识别区域的细胞其制备方法为：构建表达所述抗体的重组表达载体，然后将所述重组表达载体导入所述本体细胞。
7.根据权利要求5所述的表达抗原识别区域的细胞，其特征在于，表达所述抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
8.权利要求1-7任一所述的表达抗原识别区域的细胞在制备治疗白血病的药物中的应用。
9.一种制剂，其特征在于，所述制剂含有权利要求1-7任一所述的表达抗原识别区域的细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
10.权利要求1-7任一所述的表达抗原识别区域的细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：构建表达所述抗体的重组表达载体，然后将所述重组表达载体导入所述本体细胞。
CN201910654336.2A 2019-07-19 2019-07-19 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用 Active CN110331134B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910654336.2A CN110331134B (zh) 2019-07-19 2019-07-19 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用
PCT/CN2020/097430 WO2021012857A1 (zh) 2019-07-19 2020-06-22 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910654336.2A CN110331134B (zh) 2019-07-19 2019-07-19 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110331134A true CN110331134A (zh) 2019-10-15
CN110331134B CN110331134B (zh) 2023-09-08

Family

ID=68146016

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910654336.2A Active CN110331134B (zh) 2019-07-19 2019-07-19 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN110331134B (zh)
WO (1) WO2021012857A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021012857A1 (zh) * 2019-07-19 2021-01-28 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1775808A (zh) * 2004-11-15 2006-05-24 中国医学科学院血液学研究所 用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗cd19的工程抗体及其用途
CN104561069A (zh) * 2013-10-23 2015-04-29 深圳先进技术研究院 含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环dna重组母质粒、含该表达盒的微环dna及应用
US20170073664A1 (en) * 2014-05-02 2017-03-16 Iontas Limited Preparation of libraries of protein variants expressed in eukaryotic cells and use for selecting binding molecules
CN106749677A (zh) * 2017-01-04 2017-05-31 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种靶向mll白血病的双特异性嵌合抗原受体基因及其应用
US20170355957A1 (en) * 2014-11-07 2017-12-14 Fondazione Matilde Tettamanti E Menotti De Marchi Onlus Improved method for the generation of genetically modified cells
CN108840930A (zh) * 2018-06-29 2018-11-20 生研医药科技（武汉）有限公司 抗cd19单克隆抗体及其制备方法与应用
CN110129369A (zh) * 2018-02-09 2019-08-16 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用
CN111566124A (zh) * 2017-10-25 2020-08-21 诺华股份有限公司 制备表达嵌合抗原受体的细胞的方法
WO2021222227A1 (en) * 2020-04-27 2021-11-04 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting cd127 and use thereof

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11154572B2 (en) * 2015-06-05 2021-10-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods of treatment with natural killer cells matched for killer immunoglobulin receptor type
CN109517070A (zh) * 2018-11-07 2019-03-26 南京卡提医学科技有限公司 嵌合抗原受体DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-TREM1及其用途
CN110331134B (zh) * 2019-07-19 2023-09-08 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1775808A (zh) * 2004-11-15 2006-05-24 中国医学科学院血液学研究所 用于靶向结合淋巴细胞白血病细胞的抗cd19的工程抗体及其用途
CN104561069A (zh) * 2013-10-23 2015-04-29 深圳先进技术研究院 含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环dna重组母质粒、含该表达盒的微环dna及应用
US20170073664A1 (en) * 2014-05-02 2017-03-16 Iontas Limited Preparation of libraries of protein variants expressed in eukaryotic cells and use for selecting binding molecules
US20170355957A1 (en) * 2014-11-07 2017-12-14 Fondazione Matilde Tettamanti E Menotti De Marchi Onlus Improved method for the generation of genetically modified cells
CN106749677A (zh) * 2017-01-04 2017-05-31 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种靶向mll白血病的双特异性嵌合抗原受体基因及其应用
CN111566124A (zh) * 2017-10-25 2020-08-21 诺华股份有限公司 制备表达嵌合抗原受体的细胞的方法
CN110129369A (zh) * 2018-02-09 2019-08-16 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 一种嵌合抗原受体基因工程载体、免疫细胞及其应用
CN108840930A (zh) * 2018-06-29 2018-11-20 生研医药科技（武汉）有限公司 抗cd19单克隆抗体及其制备方法与应用
WO2021222227A1 (en) * 2020-04-27 2021-11-04 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting cd127 and use thereof

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AN N等: "Construction of a new anti-CD19 chimeric antigen receptor and the anti-leukemia function study of the transduced T cells", 《ONCOTARGET》 *
CHEN S等: "Construction and expression of single chain variable fragments (ScFv) against human CD19 antigen", 《SHENG WU GONG CHENG XUE BAO》 *
刘鑫男等: "免疫微环境介导的肿瘤耐受机制及其靶向治疗", 《中国细胞生物学学报》 *
常晓等: "一种新的高亲和力的人源化抗CD19CAR-T细胞的构建及体外功能验证", 《中华血液学杂志》 *
廖婵等: "急性白血病细胞免疫治疗的研究进展", 《实用肿瘤杂志》 *
王扬等: "转染CD19-CAR的人原代T淋巴细胞的体外抗白血病作用研究", 《中国学位论文全文数据库》 *
章艳茹: "单克隆抗体治疗急性淋巴细胞白血病", 《国际输血及血液学杂志》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021012857A1 (zh) * 2019-07-19 2021-01-28 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021012857A1 (zh) 2021-01-28
CN110331134B (zh) 2023-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018202976B2 (en) Polyclonal gamma delta t cells for immunotherapy
Cheng et al. Modifying the tumour microenvironment and reverting tumour cells: New strategies for treating malignant tumours
IL258491B2 (en) Preparations and methods for inhibiting antigens of a particular lineage
SA517381708B1 (ar) تركيبات وطرق للعلاج المناعي
CN106554414A (zh) 抗cd19全人抗体以及靶向cd19的免疫效应细胞
CN109678965A (zh) 嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、cd22-cd19双靶向性的t细胞及其应用
CN109748973A (zh) 表达于t淋巴细胞表面的嵌合抗原受体组合及其应用
CN105936649B (zh) 嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、car133-nkt细胞及其制备方法和应用
CN109652378A (zh) 一种功能增强的通用型car-t细胞及其制备方法和用途
CN106574241A (zh) 癌症免疫疗法组合物和方法
BR112021004489A2 (pt) métodos de tratamento de toxicidade relacionada à imunoterapia usando um antagonista de gm-csf
JP2022509017A (ja) 抗ｐｔｋ７免疫細胞癌療法
Zeng et al. Resistance and recurrence of malignancies after CAR-T cell therapy
CN109021114A (zh) 联合两种单链抗体的双特异性嵌合抗原受体及表达载体
CN107602703A (zh) 靶向人EpCAM的基因工程化淋巴细胞及其制备方法和用途
US20210177897A1 (en) Arginase suppression for cancer treatment
CN110331134A (zh) 一种表达抗原识别区域的通用型细胞治疗产品及其制备方法和应用
CN109705225B (zh) 一种抗人caix抗原的嵌合抗原受体及其应用
WO2023159136A9 (en) Epitope engineering of cell-surface receptors
WO2008065053A1 (en) Multi-modal cancer therapy using viral hitch-hiking
CN109748964B (zh) CD317单链抗体317scFv、其编码序列及制备方法和应用
WO2018184074A1 (en) Method for treating a side effect of chimeric antigen receptor (car) t cell therapy
CN116063556B (zh) Ips来源的car-nk细胞及其治疗癌症的用途
Einsele et al. OPEN ACCESS EDITED BY
CN117925726A (zh) 基于多价多肽识别的car-nk细胞的构建方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant