CN110317758A - 一种肉鸡双毒素解毒剂及其制备方法 - Google Patents

一种肉鸡双毒素解毒剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及霉菌毒素生物解毒剂领域，特别是指一种肉鸡双毒素（黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮）解毒剂及其制备方法。将枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌、产朊假丝酵母经液体培养基培养后，通过冷冻干燥技术制备三种冻干菌粉，三种冻干菌粉按比例混匀后，即得到肉鸡双毒素解毒剂，于4℃保存。本申请研制的霉菌毒素生物解毒剂，可以维护肉鸡胃肠道微生物区系的稳定，降解霉菌毒素，降低霉菌毒素在组织器官中的蓄积，缓解霉菌毒素对组织器官的损伤，提高肉鸡的生产性能和营养物质代谢率，降低腹泻率和死亡率，为消除霉菌毒素危害奠定了基础。

Description

一种肉鸡双毒素解毒剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物解毒剂领域，特别是指一种肉鸡双毒素解毒剂及其制备方法。
背景技术
近些年，霉菌毒素问题已经困扰了大多数畜牧产业，从污染饲料，危害动物健康，甚至到通过食品的方式危害人类健康，带来诸多不利影响，造成巨大经济损失。由于目前关于单一AFB1或ZEA的吸收、代谢和危害的研究较多，而同时把两种毒素的交互作用、叠加毒性及危害机理的研究较少，有必要做深入研究。霉菌毒素的脱毒方式分为物理法、化学法以及生物法，如今最符合要求的就是生物降解法，避免了物理法和化学法的诸多不足。而本试验所采用的枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌与产朊假丝酵母三种益生菌，作为饲料添加剂添加的微生物是国家允许的。在降解霉菌毒素方面，三个益生菌均有报道，并且都有不错的效果。试验通过得到最佳的复合益生菌配伍对两种霉菌毒素的降解，然后在外源微生物干预下，研究肉鸡胃肠道微生物区系的动态变化以及与霉菌毒素吸收和代谢的关系。根据肠道和肝脏组织细胞的超微结构的变化情况，研究两种霉菌毒素的叠加毒性及对组织器官的损伤程度，测定益生菌对霉菌毒素危害的缓解作用及肠粘膜屏障对黄曲霉毒素(AFB1)和玉米赤霉烯酮(ZEA)吸收及代谢的影响。通过霉菌毒素生物解毒剂对肉鸡生产性能、肠道微生物区系、霉菌毒素的沉积和代谢规律研究，为消除霉菌毒素的危害及维护动物健康奠定基础。
专利CN201710215197.4公开了一种小麦水溶物在预防或缓解黄曲霉毒素B1导致鸡中毒的用途，在鸡饲料中添加一定比例的以戊聚糖为有效成分的小麦水溶物能够有效干预或减轻由黄曲霉毒素B1所导致的鸡慢性或亚慢性肝损伤；专利CN201610224071.9公开了一种活性成分谷胱甘肽和黄连素的重量比为(1:20)～(20:1)。与普通解毒剂相比，本发明的禽畜饲料解毒剂制备方法简单，配伍合理，能够显著缓解禽畜中毒症状；现有技术中的生物解毒剂主要是化学成分，且主要是针对单一毒素的预防和治疗，然而实际情况往往是多种病毒同时存在的，因此亟待一种能同时治疗多种的病毒的生物解毒剂。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提出一种肉鸡双毒素解毒剂及其制备方法。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种肉鸡双毒素解毒剂，包括保藏号为CGMCC1.0504的枯草芽孢杆菌、保藏号为CGMCC1.2884的干酪乳杆菌和保藏号为CGMCC2.0615的产朊假丝酵母。
所述枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌和产朊假丝酵母的使用浓度依次为1×106-1×107CFU/mL(g)、1×105-1×107CFU/mL(g)、1×106-1×107CFU/mL(g)。
所述双毒素指黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮。
所述的肉鸡双毒素解毒剂的制备方法，步骤如下：将枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌、产朊假丝酵母经液体培养基培养后，通过冷冻干燥技术制备三种冻干菌粉，三种冻干菌粉按比例混匀后，即得到肉鸡双毒素解毒剂，于4℃保存。
所述三种冻干菌粉中，枯草芽孢杆菌的活菌数为3.0×1011CFU/g、干酪乳杆菌的活菌数为5.6×1011CFU/g、产朊假丝酵母的活菌数为6.5×1010CFU/g。
所述肉鸡双毒素解毒剂中枯草芽孢杆菌的含量为1×107CFU/mL(g)、干酪乳杆菌的含量为1×106CFU/mL(g)、产朊假丝酵母的含量为1×107CFU/mL(g)。
本发明具有以下有益效果：
1、本试验通过响应面优化得到三种最佳的复合益生菌组合，可以有效地降解AFB1、ZEA以及AFB1+ZEA，获得三种有效的霉菌毒素生物解毒剂；枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌以及产朊假丝酵母组合为1×107、1×105、1×106CFU/mL时，对ZEA降解率最高(生物解毒剂1)；组合为1×106、1×107、1×107CFU/mL时，对AFB1降解率最高(生物解毒剂2)；组合为1×107、1×106、1×107CFU/mL时，对AFB1+ZEA混合毒素降解率最好(生物解毒剂3)。将3种菌进行扩大培养，制成冻干菌粉，按照试验得到的最佳组合，混合制备3种生物解毒剂。发明人还研究两种霉菌毒素的叠加毒性以及在组织器官中的蓄积和代谢的规律，验证了益生菌对霉菌毒素危害的缓解作用。
2、利用16S rRNA高通量测序技术，通过血清、小肠以及胸肌组织中毒素残留量、肉鸡日增重与微生物区系菌群的相关性分析，验证益生菌缓解霉菌毒素对肉鸡肠道微生物区系的影响，发挥正向调控作用。研制的霉菌毒素生物解毒剂，可以维护肉鸡胃肠道微生物区系的稳定，降解霉菌毒素，降低霉菌毒素在组织器官中的蓄积，缓解霉菌毒素对组织器官的损伤，提高肉鸡的生产性能和营养物质代谢率，降低腹泻率和死亡率，为消除霉菌毒素危害奠定了基础。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为肉鸡肝脏组织结构的变化图。
图2为肉鸡空肠组织结构的变化图。
图3为A、D、G三组空肠菌群与毒素残留量的相关性分析(种水平)，注：“*”表示差异显著(P<0.05)，“**”表示差异极显著(P<0.01)。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种肉鸡双毒素解毒剂的制备方法，步骤如下：
菌种的培养：将实验室保存的枯草芽孢杆菌接种到LB培养基上，37℃、200r/min培养，24h后分别按2％的接种量接入新鲜培养基，再培养24h后测定活菌数。干酪乳杆菌接种到MRS培养基上，37℃静止状态下培养，24h后分别按2％的接种量接入新鲜培养基，再培养24h后测定活菌数。产朊假丝酵母接种到YPD培养基上，30℃、200r/min培养，24h后分别按2％的接种量接入新鲜培养基，再培养24h后测定活菌数，菌液冷冻干燥后保藏，冷冻菌粉中枯草芽孢杆菌的活菌数为3.0×1011CFU/g、干酪乳杆菌的活菌数为5.6×1011CFU/g、产朊假丝酵母的活菌数为6.5×1010CFU/g；
制备毒素标准品：将3mg ZEA标准品溶解到3mL的甲醇中，混匀分装到3个棕色瓶中，放于-20℃冰箱中保存。取上述稀释的ZEA标准品0.1mL溶于1.9mL的甲醇中，使得溶液浓度为50mg/L，放于-20℃冰箱中待用；试验体系为5mL，空白培养基为MRS培养基。对照组：1.95mL生理盐水+3mLMRS培养基+0.05mLZEA标准品(50mg/L)；试验组：不同体积的三种益生菌，加入0.05mL ZEA标准品(50mg/L)，加入3mL MRS培养基，再加生理盐水补足5mL。该设计共18个试验点，每个试验点做3个重复，每个重复设定ZEA含量为500μg/L。
饲养实验：
选择1日龄健康且体重无差异的罗斯308肉鸡400只，分为8个处理组，每个处理组5个重复，每个重复10只。试验分为前期(1-21d)和后期(22-42d)两个阶段进行饲养。后期分组情况跟前期一样，要求健康及体重无差异。试验设计与分组如下：
A组：为对照组，饲喂基础日粮(前期含AFB1 14.09μg/Kg、ZEA 57.29μg/Kg；后期含AFB1 14.45μg/Kg、ZEA 58.58μg/Kg)；
B组：基础日粮+500μg/kg ZEA(直接添加ZEA纯品，0.5g/T)；
C组：基础日粮+50μg/kg AFBl(用自然霉变玉米充当饲料配方中的玉米，再加少量的AFBl，使AFBl最终含量为0.05g/T)；
D组：基础日粮+50μg/kg AFBl+500μg/kg ZEA(用自然霉变玉米充当饲料配方中的玉米，再加少量AFBl和纯品ZEA，使AFBl最终含量为0.05g/T，ZEA最终含量为0.5g/T)；
E组：基础日粮+500μg/kg ZEA+生物解毒剂Ⅰ(枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌、产朊假丝酵母在降解ZEA的饲粮中终含量分别为：1×107、1×105、1×106CFU/g，枯草芽孢杆菌添加33.38g/T,干酪乳杆菌添加0.19g/T，产朊假丝酵母添加15.38g/T)；
饲养管理：试验地点在河南省许昌市河南农业大学试验基地进行，罗斯308肉鸡苗从周口大用鸡苗厂购得。多层笼养，24h光照，自由采食和饮水，自然通风，免疫程序为：7日龄新-支二联苗，21日龄新城疫活疫苗。每天7:30和18:30定时饲喂试验日粮，自由饮水。
实施例2
一种肉鸡双毒素解毒剂的制备方法，步骤如下：
菌种的培养：参照实施例1
制备毒素标准品：试验体系为5mL，空白培养基为MRS培养基。对照组：1.975mL生理盐水+3mL MRS培养基+0.025mL AFB1标准品(10mg/L)；试验组：不同体积的三种益生菌，加入0.025mL AFB1标准品(10mg/L)，加入3mL MRS培养基，再加生理盐水补足5mL。该设计共18个试验点，每个试验点做3个重复，每个重复设定AFB1含量为50μg/L。
饲养实验：
选择1日龄健康且体重无差异的罗斯308肉鸡400只，分为8个处理组，每个处理组5个重复，每个重复10只。试验分为前期(1-21d)和后期(22-42d)两个阶段进行饲养。后期分组情况跟前期一样，要求健康及体重无差异。试验设计与分组如下：F组：基础日粮+50μg/kgAFB1+生物解毒剂Ⅱ(枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌、产朊假丝酵母在降解AFB1的饲粮中终含量分别为：1×106、1×107、1×107CFU/g，枯草芽孢杆菌添加3.38g/T,干酪乳杆菌添加17.88g/T，产朊假丝酵母添加153.88g/T)，其他组与实施例1相同。
饲养管理：见实施例1。
实施例3
一种肉鸡双毒素解毒剂的制备方法，步骤如下：
菌种的培养：参照实施例1
制备毒素标准品：试验体系为5mL，空白培养基为MRS培养基。对照组：1.825mL生理盐水+3mL MRS培养基+0.125mL AFB1标准品(2mg/L)+0.05mL ZEA标准品(50mg/L)；试验组：不同体积的三种益生菌，加入0.125mLAFB1标准品(2mg/L)和0.05mL ZEA标准品(50mg/L)，加入3mL MRS培养基，再加生理盐水补足5mL。该设计共18个试验点，每个试验点做3个重复，每个重复设定AFB1 50μg/L、ZEA 500μg/L。
饲养实验：
选择1日龄健康且体重无差异的罗斯308肉鸡400只，分为8个处理组，每个处理组5个重复，每个重复10只。试验分为前期(1-21d)和后期(22-42d)两个阶段进行饲养。后期分组情况跟前期一样，要求健康及体重无差异。试验设计与分组如下：G组：基础日粮+50μg/kgAFBl+500μg/kg ZEA+生物解毒剂Ⅲ(枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌、产朊假丝酵母在降解AFB1+ZEA的饲粮中终含量分别为：1×107、1×106、1×107CFU/g，枯草芽孢杆菌添加33.38g/T,干酪乳杆菌添加1.88g/T，产朊假丝酵母添加153.88g/T)，其他组与实施例1相同。
饲养管理：见实施例1。
效果例
1.日粮中添加霉菌毒素生物解毒剂对肉鸡生长性能的影响
由表1可知，在肉鸡试验前期，添加复合益生菌的E、F、G组肉鸡的日采食量、日增重和饲料转化效率均显著地优于所对应的含有霉菌毒素的B、C和D组(P<0.05)。C和D组腹泻率最高(P<0.05)，其次为F、G组，表明益生菌有减缓腹泻的功效。B和C组死亡率最高，其次为D组。集中反映在C组的腹泻率和死亡率皆为最高，这主要是由于AFB1的强毒性所致，但添加益生菌后(F组)得到明显改善。由表1可知，在试验后期，添加有益生菌的E、F、G组肉鸡的日采食量显著地高于C和D组(P<0.05)；C和D组的日增重和饲料转化效率最低(P<0.05)，腹泻率和死亡率最高(P<0.05)。
表1日粮中添加霉菌毒素生物解毒剂对22-42d肉鸡生长性能的影响(g,n＝5)
2.肉鸡组织器官中AFB1和ZEA残留量的测定
表2结果表明，AFB1含量在各组织中的变化趋势为(P<0.05)：
血清中，C、D、F组>A、B、E、G组；
粪便中，D、G组>C、F组>A、B、E组；
肝脏中，C、D组>F、G组>A、B、E组；
胸肌中，C、D组>F、G组>A、B、E组；
小肠中，C、D组>F、G组>A、B、E组。
表2肉鸡各组织器官中AFB1含量(μg/kg，n＝3)
注：“--”表示未检出，下同。
由此可知，对照组A及未添加AFB1的B和E组中各个组织样品检测到AFB1的含量均显著低于其他大多数组(P<0.05)；而日粮中添加有AFB1的C和D组各组织中的AFB1含量显著地高于其他大多数组(P<0.05)。除添加益生菌的G组粪便中AFB1含量较高外，添加益生菌各组的组织中AFB1的含量均有所下降(P<0.05)，充分说明益生菌具有降解及吸附和排泄AFB1的功能。
ZEA残留如表3所示，试验各组的胸肌样品中均未检测到ZEA含量；B、D、G组血清中ZEA含量最高，其中D组>B组>G组(P<0.05)，其余各组的血清中也未检测到ZEA含量。ZEA含量在各组织中的变化趋势为(P<0.05)：
粪便中，B、D组>E、G组>C、F组>A组；
肝脏中，D组>B、G组>E组>A、C、F组；
小肠中，D组>B、E组>G组>C、F组>A组。
表3肉鸡各组织器官中ZEA含量(μg/kg，n＝3)
注：“--”表示未检出，下同。
由此可知，对照组A及未添加ZEA的C和F组粪便、肝脏和小肠中ZEA含量均显著低于其他大多数组(P<0.05)，而含有ZEA的B和D组粪便、肝脏和小肠中ZEA含量均显著高于其他大多数组(P<0.05)。添加益生菌各组不同组织中的ZEA含量都明显降低(P<0.05)，说明益生菌在降解ZEA方面是有效的。
3.由表4可知，A、D和G组肉鸡血清中AFB1含量在0-5d的排毒试验中皆差异不显著(P>0.05)，其变化趋势为D组>G组>A组；但在第7d三个组显著下降(P<0.05)，其中A和G组血清中未检出AFB1含量，说明益生菌在消除AFB1危害方面是有效的。D和G组肉鸡的粪便、肝脏和胸肌组织中的AFB1含量始终高于A组(P<0.05)，随着排毒时间的延长粪便和组织中AFB1含量逐步降低，大多数以第7d最低(P<0.05)，其变化趋势也为：D组>G组>A组；其中G组粪便中AFB1含量从第5d起明显地低于D组(P<0.05)，说明益生菌可有效地降解AFB1。
表4不同时间AFB1在肉鸡体内代谢的情况(μg/kg，n＝3)
由表5可知，各组胸肌中ZEA残留量未检出，A组血清中ZEA也几乎检不出。A、D和G组三组在肝脏、血清以及粪便中ZEA含量的其变化趋势为：D组>G组>A组(P<0.05)，皆以第7d最低(P<0.05)，其中A组粪便中ZEA含量在7d内无显著变化(P>0.05)。
表5不同时间ZEA在肉鸡体内代谢的情况(μg/kg，n＝3)
由表6可知，在消解试验阶段的1d、3d、5d以及7d内，每天每组通过粪便排出的AFB1的净排出量。D和G组的毒素净排出量始终显著高于A组(P<0.05)，第3d三个组的排出量最高(P<0.05)，其中G组排出量从第5d起明显地低于D组(P<0.05)，说明益生菌可有效地降解AFB1。
表6不同时间AFB1的净排出的总量(μg，n＝3)
由表7可知，在消解试验阶段的1d、3d、5d以及7d内，每天每组通过粪便排出的ZEA的净排出量。ZEA排出量的变化趋势为：D组>G组>A组(P<0.05)，皆以第7d最低(P<0.05)。
表7不同时间ZEA的净排出的总量(μg，n＝3)
4.日粮中添加霉菌毒素生物解毒剂对肉鸡肝脏和空肠组织结构的影响
肉鸡肝脏的组织切片见图1，对照组A的肝细胞形态正常，无坏死现象，整齐排列，胞核大而圆，胞质均匀。而含霉菌毒素D组呈现黄褐色，胞核不整齐、变形，细胞的胞浆出现空泡，结缔组织增生以及多灶性出血。添加霉菌毒素生物解毒剂的G组可以显著缓解胞浆的空泡以及出血现象，与对照组接近。
空肠的组织切片见图2，对照组A的肠绒毛形态正常，长度较长且排列较整齐，黏膜隐窝深度较浅，基底膜完好。而霉菌毒素D组肠绒毛断裂变形严重，长度变短间隙变大，隐窝变深，基底膜受损严重，有炎症坏死现象。G组也有受损现象，但是相对于D组较好，绒毛断裂减少。
空肠内容物的微生物区系分析：空肠菌群在种水平上主要由Lactobacillus-aviarius、Romboutsia、Helicobacter、Terrisporobacter、Clostridium_sensu_stricto_1等组成，A、D、G三个组的鸟乳杆菌(Lactobacillus-aviarius)分别占总细菌种类的29.45％、13.04％和57.99％，Romboutsia分别占5.21％、3.88％和0.99％，Helicobacter占3.43％、0.63％和3.72％，谲诈梭菌(Terrisporobacter)占0.33％、6.85％和1.00％，狭义梭菌(Clostridium_sensu_stricto_1)占0.46％、6.60％和1.25％。
由表8可知，D组的鸟乳杆菌(Lactobacillus-aviarius)的数量显著低于G组(P<0.05)，同时G组Lactobacillus-aviarius的丰度最高，高于对照组28％，显著高于D组34％(P<0.05)。而D组的谲诈梭菌(Terrisporobacter)和狭义梭菌(Clostridium_sensu_stricto_1)的数量均显著高于A、G组(P<0.05)。对照组A组的Romboutsia丰度最高(P<0.05)，A组>D组>G组(P<0.05)。
表8不同处理对基于种分类水平上的肠道菌群相对丰度的影响(％，n＝3)
空肠中微生物菌群丰度与毒素残留量和日增重的相关性分析：根据SPSS中“Pearson”相关性分析，在种水平上肉鸡空肠肠道中的前10种菌与日增重(ADG)、AFB1和ZEA在血清(AFB1(S)、ZEA(S))、小肠(AFB1(S l)、ZEA(S l))和胸肌AFB1(T)中的残留量的相关性，以相关性系数小于-0.5为负相关，以相关性系数大于0.5为正相关。
由图3可知，狭义梭菌(Clostridium_sensu_stricto_1)、图利杆菌(Turicibacter)和谲诈梭菌(Terrisporobacter)的丰度与毒素残留(除血清中AFB1)呈显著正相关关系，而乳酸杆菌(Lactobacillus)和bacterium_GC452011的丰度与毒素残留(除血清中AFB1)呈显著负相关关系。而日增重方面，与鸟乳杆菌(Lactobacillus-aviarius)呈显著正相关关系，与狭义梭菌(Clostridium_sensu_stricto_1)、谲诈梭菌(Terrisporobacter)的丰度呈显著负相关关系。说明肉鸡空肠中的乳酸杆菌等益生菌在降解霉菌毒素及减少毒素残留方面发挥着重要作用，而鸟乳杆菌与肉鸡日增重的提高有一定的关系。
结论分析
本试验选取降解霉菌毒素效果好的枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌和产朊假丝酵母，并对其进行响应面回归设计试验，得到降解AFB1、ZEA与AFB1+ZEA的三种最佳益生菌组合，分别为：(1)枯草芽孢杆菌：干酪乳杆菌：产朊假丝酵母组合为1×106、1×107、1×107CFU/mL(g)时，对AFB1降解率最高；(2)三者组合为1×107、1×105、1×106CFU/mL(g)时，对ZEA降解率最高；(3)三者组合为1×107、1×106、1×107CFU/mL(g)时，对AFB1+ZEA混合毒素降解率最好。
在肉鸡日粮中添加50μg/kg AFB1与500μg/kg ZEA时，将严重影响肉鸡的生长性能和营养物质代谢率，并提高肉鸡的腹泻率与死亡率；而由复合益生菌组成的霉菌毒素生物解毒剂添加后，可以显著地改善肉鸡的上述不良症状。另外，霉菌毒素生物解毒剂通过降解霉菌毒素，使其在组织和器官中的蓄积量明显减少。
由复合益生菌组成的霉菌毒素生物解毒剂可以显著减缓霉菌毒素所引起的肝脏和空肠组织细胞损伤，改善绒毛长度和隐窝深度，抑制炎症反应。霉菌毒素对肉鸡肠道菌群稳定性产生不良的影响，但霉菌毒素生物解毒剂通过增加肠道内鸟乳杆菌的丰度，减少狭义梭菌的丰度发挥正向调控作用，从而改善肉鸡的健康状况，为消除霉菌毒素危害奠定了基础。
同时对种水平上微生物菌群的丰度与两种毒素在血清、小肠和胸肌中的残留量、日增重进行相关性分析，揭示了霉菌毒素生物解毒剂缓解AFB1和ZEA毒性的分子机制。说明肉鸡空肠中的乳酸杆菌等益生菌在降解霉菌毒素及减少毒素残留方面发挥着重要作用，而鸟乳杆菌与肉鸡日增重的提高有一定的关系。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种肉鸡双毒素解毒剂，其特征在于：包括保藏号为CGMCC1.0504的枯草芽孢杆菌、保藏号为CGMCC1.2884的干酪乳杆菌和保藏号为CGMCC2.0615的产朊假丝酵母。
2.根据权利要求1所述的肉鸡双毒素解毒剂，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌和产朊假丝酵母的使用浓度依次为1×106-1×107 CFU/mL(g)、1×105-1×107 CFU/mL(g)、1×106-1×107 CFU/mL(g)。
3.根据权利要求2所述的肉鸡双毒素解毒剂，其特征在于：所述双毒素指黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮。
4.权利要求1-3任一项所述的肉鸡双毒素解毒剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：将枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌、产朊假丝酵母经液体培养基培养后，通过冷冻干燥技术制备三种冻干菌粉，三种冻干菌粉按比例混匀后，即得到肉鸡双毒素解毒剂，于4℃保存。
5.根据权利要求4所述的肉鸡双毒素解毒剂的制备方法，其特征在于：所述三种冻干菌粉中，枯草芽孢杆菌的活菌数为3.0×1011 CFU/g、干酪乳杆菌的活菌数为5.6×1011 CFU/g、产朊假丝酵母的活菌数为6.5×1010 CFU/g。
6.根据权利要求4所述的肉鸡双毒素解毒剂的制备方法，其特征在于：所述肉鸡双毒素解毒剂中枯草芽孢杆菌的含量为1×107 CFU/mL(g)、干酪乳杆菌的含量为1×106 CFU/mL(g)、产朊假丝酵母的含量为1×107 CFU/mL(g)。
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