CN110314247A - 蜗牛精华提取物活性敷料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种蜗牛精华提取物活性敷料及其制备方法，所述蜗牛精华提取物经粗提后使用特定分子量范围的透析袋进行纯化，制备方法简单，且蜗牛精华提取物性质稳定。药理实验结果显示所述蜗牛精华提取物活性敷料具有优异的促伤口愈合的效果，且相应效果优于已知的蜗牛黏液中具有促伤口愈合效果的尿囊素的相应效果。蜗牛精华提取物为纯天然物质，安全、无副作用，制备成便于外伤施用的敷料形式，更加适合于各型外伤的治疗。

Description

蜗牛精华提取物活性敷料及其制备方法
技术领域
本发明属于药物领域，具体涉及蜗牛精华提取物活性敷料及其制备方法。
背景技术
蜗牛，又称瓜牛，为陆生贝壳类软体动物。蜗牛营养丰富、味道鲜美，具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇等优点，具有很高的食用价值。我国可食用的蜗牛就包括了海南坚蜗牛、江西巴蜗牛。白玉蜗牛、高大环口蜗牛等。蜗牛还具有很高的药用价值，如古希腊曾利用蜗牛食疗法治疗百日咳、胃溃疡等。中医认为蜗牛性寒、味咸，有清热解毒、消肿、利尿、平喘、软坚等多重功效。蜗牛提取物含天然的胶原蛋白、弹力蛋白、尿囊素、葡萄糖醛酸、维生素等，能修复肌肤，增加肌肤的营养，所含尿囊素还可以补充细胞再生因子，加速皮肤再生，进而恢复肌肤的柔软、光滑、细腻，能淡化疤痕、暗疮和斑点，因此被开发为蜗牛精华液等多款美容化妆产品。
虽然目前蜗牛产品的应用开发多数集中在食品和化妆品领域，但随着针对蜗牛研发的深入，蜗牛的多种药用价值也逐渐被发现：席守民等报道了蜗牛多肽混合物可抗过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤，其作用机制可能与增加细胞PCNA与BDNF的表达有关；湛孝东等报道称蜗牛多糖在体外具有显著的抗乙型肝炎病毒作用,且毒性较小,具有良好应用前景；湛孝东等还报道了蜗牛多糖能提高小鼠的非特异性和特异性细胞免疫功能；吕刚飞报道称蜗牛多糖对人肝癌细胞SMMC-7721具有一定的抑制作用。
目前已经报道的蜗牛所含尿囊素虽然可以加速皮肤再生、淡化疤痕、暗疮和斑点等，但由于蜗牛中所含尿囊素包含于蜗牛黏液中，而蜗牛黏液不仅收集不便，还不利于保存，以上问题极大制约了蜗牛相关产品的开发和利用。
本申请发明人对蜗牛不同提取物的促皮肤创伤愈合活性进行了深入研究，并发现了一种相对于尿囊素具有更高促皮肤创伤愈合的蜗牛精华提取物，该蜗牛精华提取物不仅制备方法简单、性质稳定，促皮肤创伤愈合效果更为明显，为了便于应用，发明人将其开发成敷料，从而可广泛应用于外伤的治疗。
发明内容
本发明的目的是提供蜗牛精华提取物活性敷料及其制备方法。
一方面，本发明提供了一种蜗牛精华提取物活性敷料，所述蜗牛精华提取物按照以下方法制备：
（1）制备蜗牛精华粗提物：蜗牛清洗干净，任选的去壳，加入1-3倍量的纯净水，匀浆，匀浆液以4000r/min离心10min去不溶性杂质后加入甲醇，调整甲醇浓度至2%-5%,浸泡12-36小时；匀浆液以3000-5000r/min离心5-15min，弃上清，得沉淀，于所述沉淀加入5-10倍纯净水搅拌均匀后煮沸，并维持0.5-2h，随后将匀浆液抽滤，得滤液，滤液减压浓缩至原体积的1/5-1/2,得浓缩液，浓缩液3000-5000r/min离心3-20min，弃沉淀，得上清液，于上清液中加入无水乙醇，调整醇浓度为60%-85%，静置过夜，抽滤所得沉淀即为蜗牛精华粗提物；
（2）纯化：蜗牛精华粗提物加纯净水至溶解，使用截留分子量为3000～25000的透析袋透析12-36h，透过液减压浓缩后干燥，即得本发明蜗牛精华提取物。
优选的，所述蜗牛精华提取物按照以下方法制备：
（1）制备蜗牛精华粗提物：蜗牛清洗干净，任选的去壳，加入2倍量的纯净水，匀浆，匀浆液以4000r/min离心10min去不溶性杂质后加入甲醇，调整甲醇浓度至4%,浸泡24小时；匀浆液以4000r/min离心10min，弃上清，得沉淀，于所述沉淀中加入8倍纯净水搅拌均匀后煮沸，并维持1h，随后抽滤，得滤液，滤液减压浓缩至原体积的1/4,得浓缩液，浓缩液4000r/min离心15min，弃沉淀，得上清液，于上清液中加入无水乙醇，调整醇浓度为80%，静置过夜，抽滤所得沉淀即为蜗牛精华粗提物；
（2）纯化：蜗牛精华粗提物加纯净水至溶解，使用截留分子量为3000～15000的透析袋透析24h，透过液减压浓缩后干燥，即得本发明蜗牛精华提取物。
更优选的，所述步骤（2）中使用截留分子量为3000～8000的透析袋透析24h。
优选的，所述蜗牛精华提取物活性敷料包含了背衬层和药物层，所述药物层包含蜗牛精华提取物；
优选的，所述药物层中蜗牛精华提取物的含量为1%-10%;
更优选的，所述药物层中蜗牛精华提取物的含量为2%-8%;
最优选的，所述药物层中蜗牛精华提取物的含量为5%。
优选的，所述药物层中还任选的包含抗菌剂、局部麻醉剂、止痒剂等；
优选的，所述抗菌剂选自：外用抗生素；所述局部麻醉剂选自：利多卡因或其药学上可接受的盐、普鲁卡因或其药学上可接受的盐；所述止痒剂选自薄荷醇。
优选的，所述外用抗生素选自：莫匹罗星；所述局部麻醉剂选自利多卡因或其药学上可接受的盐。
另一方面，本发明提供了一种蜗牛精华提取物活性敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）制备蜗牛精华粗提物：蜗牛清洗干净，任选的去壳，加入1-3倍量的纯净水，匀浆，匀浆液以4000r/min离心10min去不溶性杂质后加入甲醇，调整甲醇浓度至2%-5%,浸泡12-36小时；匀浆液以3000-5000r/min离心5-15min，弃上清，得沉淀，于所述沉淀加入5-10倍纯净水搅拌均匀后煮沸，并维持0.5-2h，随后将匀浆液抽滤，得滤液，滤液减压浓缩至原体积的1/5-1/2,得浓缩液，浓缩液3000-5000r/min离心3-20min，弃沉淀，得上清液，于上清液中加入无水乙醇，调整醇浓度为60%-85%，静置过夜，抽滤所得沉淀即为蜗牛精华粗提物；
（2）纯化：蜗牛精华粗提物加纯净水至溶解，使用截留分子量为3000～25000的透析袋透析12-36h，透过液减压浓缩后干燥，即得蜗牛精华提取物；
（3）制备敷料：按量称取蜗牛精华提取物、药物层基质及任选的抗菌剂、局部麻醉剂、止痒剂，制备成敷料药物层，将药物层设置于背衬层上，灭菌后包装，即得本发明蜗牛精华提取物活性敷料。
优选的，所述步骤（2）中使用截留分子量为3000～15000的透析袋透析24h。
更优选的，所述步骤（2）中使用截留分子量为3000～8000的透析袋透析24h。
再一个方面，本发明提供了蜗牛精华提取物在制备蜗牛精华提取物活性敷料中的用途，所述蜗牛精华提取物按照以下方法制备：
（1）制备蜗牛精华粗提物：蜗牛清洗干净，任选的去壳，加入1-3倍量的纯净水，匀浆，匀浆液以4000r/min离心10min去不溶性杂质后加入甲醇，调整甲醇浓度至2%-5%,浸泡12-36小时；匀浆液以3000-5000r/min离心5-15min，弃上清，得沉淀，于所述沉淀加入5-10倍纯净水搅拌均匀后煮沸，并维持0.5-2h，随后将匀浆液抽滤，得滤液，滤液减压浓缩至原体积的1/5-1/2,得浓缩液，浓缩液3000-5000r/min离心3-20min，弃沉淀，得上清液，于上清液中加入无水乙醇，调整醇浓度为60%-85%，静置过夜，抽滤所得沉淀即为蜗牛精华粗提物；
（2）纯化：蜗牛精华粗提物加纯净水至溶解，使用截留分子量为3000～25000的透析袋透析12-36h，透过液减压浓缩后干燥，即得蜗牛精华提取物。
优选的，所述步骤（2）中使用截留分子量为3000～15000的透析袋透析24h。
更优选的，所述步骤（2）中使用截留分子量为3000～8000的透析袋透析24h。
本发明的有益效果
本发明蜗牛精华提取物活性敷料中活性物质提取方法简单、性质稳定，相对于蜗牛黏液中尿囊素具有更优的促皮肤创伤愈合的效果，其中尤其以使用截留分子量为3000～8000的透析袋所获得的蜗牛精华提取物促皮肤创伤愈合效果最为优异。蜗牛精华提取物为纯天然物质，安全、无副作用，制备成便于外伤施用的敷料形式，更加适合于各型外伤的治疗。
具体实施方式
在下文中更详细地描述了本发明以有助于对本发明的理解。
实施例1：蜗牛精华提取物活性敷料，按照以下方法制备：
（1）制备蜗牛精华粗提物：蜗牛清洗干净，任选的去壳，加入3倍量的纯净水，匀浆，匀浆液以4000r/min离心10min去不溶性杂质后加入甲醇，调整甲醇浓度4%,浸泡24小时；匀浆液以4000r/min离心10min，弃上清，得沉淀，于所述沉淀加入8倍纯净水搅拌均匀后煮沸，并维持1h，随后将匀浆液抽滤，得滤液，滤液减压浓缩至原体积的1/4,得浓缩液，浓缩液4000r/min离心15min，弃沉淀，得上清液，于上清液中加入无水乙醇，调整醇浓度为80%，静置过夜，抽滤所得沉淀即为蜗牛精华粗提物；
（2）纯化：蜗牛精华粗提物加纯净水至溶解，使用截留分子量为3000～8000的透析袋透析24h，透过液减压浓缩后干燥，即得蜗牛精华提取物；
（3）制备敷料：按量称取蜗牛精华提取物、卡波姆、壳聚糖，将卡波姆充分溶胀后加入壳聚糖，调整溶液pH至4，加入蜗牛精华提取物，使得蜗牛精华提取物占最终药物层总重量的5%，添加纯净水，搅拌均匀后使用氢氧化钠溶液调整pH至7，静置成型后切割，即得药物层，将药物层设置于背衬层上，灭菌后包装，即得本发明蜗牛精华提取物活性敷料。
实施例2：蜗牛精华提取物活性敷料，按照实施例1方法制备，区别在于步骤（2）中使用截留分子量为3000～25000的透析袋透析24h。
实施例3：蜗牛精华提取物活性敷料，按照实施例1方法制备，区别在于步骤（2）中使用截留分子量为3000～15000的透析袋透析24h。
对比例1：蜗牛提取物敷料，按照实施例1方法制备，区别在于不包括步骤（2）。
对比例2：尿囊素敷料，按照实施例1方法制备，区别在于不包括步骤（1）-（2），步骤（3）中使用等量尿囊素替代蜗牛精华提取物。
效果例1：蜗牛精华提取物敷料促皮肤创伤愈合效果
1.1试验药物：
实施例1-3、对比例1-2敷料、空白敷料：按照实施例1方法制备，区别在于不包括步骤（1）-（2），且步骤（3）中不添加蜗牛精华提取物。
1.2试验方法：
6周龄雄性Wister大鼠20只，体重240-260g，单笼喂养，适应性饲养1d后麻醉，大鼠背部两侧对称区域各3cm×3cm备皮，使用75%乙醇消毒备皮区域，于备皮区域中间位置剥除约1cm×1cm的皮肤，手术过程中避免伤及筋膜层。手术后大鼠随机分为6组，即模型组、实施例1-3组、对比例1-2组，每组3只，各组大鼠均使用切割成2.5cm×2.5cm的相应敷料覆盖背部两侧伤口，并使用纱布固定，其中模型组使用空白敷料。每3天更换一次敷料，自第5天开始，每天观察一次伤口愈合情况，记录各组大鼠伤口愈合时间及试验至给药第15天各组大鼠的伤口愈合数量，其中所述伤口愈合是指伤口区域闭合且上皮覆盖、无出血，具体实验结果见表1。
1.3实验结果
表1蜗牛精华提取物敷料促皮肤创伤愈合效果
组别 样本量 给药第15天伤口愈合数量 愈合时间（h）
模型组 6 0 -
实施例1组 6 6 292.0±18.1*
实施例2组 6 4 330.0±12.0
实施例3组 6 4 312.0±19.6
对比例1组 6 2 348.0±17.0
对比例2组 6 3 344.0±27.7
“*”表示与对比例2愈合时间相比，P<0.05；“-”表示未记录到愈合时间。
表1实验结果显示模型组3只大鼠6处伤口在给药第15天均未观察到伤口愈合情况，而给药尿囊素的对比例2组截止给药第15天观察到3处伤口愈合，伤口愈合速度明显优于模型组，证明了尿囊素具有促进伤口愈合的效果。实施例1-3及对比例1组的实验结果显示，虽然截止给药第15天伤口愈合数量少于给药尿囊素的对比例2组，但给药蜗牛精华粗提物的对比例1组也显示了一定的促进伤口愈合的效果，且伤口愈合平均时间与对比例2组大致相当，而给药本发明蜗牛精华提取物的实施例1-3组大鼠截止给药第15天的伤口愈合数量和伤口愈合时间均优于给药尿囊素的对比例2组，显示了本发明的蜗牛精华提取物具有明显优于尿囊素的促伤口愈合效果，其中尤其以使用截留分子量为3000～8000的透析袋透析24h纯化的实施例1蜗牛精华提取物敷料效果最为优异，伤口愈合时间相对于对比例2组减少了15.1%，且具有统计学差异。
以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。

Claims (10)

1.一种蜗牛精华提取物活性敷料，其特征在于，所述蜗牛精华提取物按照以下方法制备：
（1）制备蜗牛精华粗提物：蜗牛清洗干净，任选的去壳，加入1-3倍量的纯净水，匀浆，匀浆液以4000r/min离心10min去不溶性杂质后加入甲醇，调整甲醇浓度至2%-5%,浸泡12-36小时；匀浆液以3000-5000r/min离心5-15min，弃上清，得沉淀，于所述沉淀加入5-10倍纯净水搅拌均匀后煮沸，并维持0.5-2h，随后将匀浆液抽滤，得滤液，滤液减压浓缩至原体积的1/5-1/2,得浓缩液，浓缩液3000-5000r/min离心3-20min，弃沉淀，得上清液，于上清液中加入无水乙醇，调整醇浓度为60%-85%，静置过夜，抽滤所得沉淀即为蜗牛精华粗提物；
（2）纯化：蜗牛精华粗提物加纯净水至溶解，使用截留分子量为3000～25000的透析袋透析12-36h，透过液减压浓缩后干燥，即得蜗牛精华提取物。
2.根据权利要求1所述的蜗牛精华提取物活性敷料，其特征在于，所述蜗牛精华提取物按照以下方法制备：
（1）制备蜗牛精华粗提物：蜗牛清洗干净，任选的去壳，加入2倍量的纯净水，匀浆，匀浆液以4000r/min离心10min去不溶性杂质后加入甲醇，调整甲醇浓度至4%,浸泡24小时；匀浆液以4000r/min离心10min，弃上清，得沉淀，于所述沉淀中加入8倍纯净水搅拌均匀后煮沸，并维持1h，随后抽滤，得滤液，滤液减压浓缩至原体积的1/4,得浓缩液，浓缩液4000r/min离心15min，弃沉淀，得上清液，于上清液中加入无水乙醇，调整醇浓度为80%，静置过夜，抽滤所得沉淀即为蜗牛精华粗提物；
（2）纯化：蜗牛精华粗提物加纯净水至溶解，使用截留分子量为3000～15000的透析袋透析24h，透过液减压浓缩后干燥，即得蜗牛精华提取物。
3.根据权利要求1-2任一所述的蜗牛精华提取物活性敷料，其特征在于，所述步骤（2）中使用截留分子量为3000～8000的透析袋透析24h。
4.根据权利要求1-3任一项所述的蜗牛精华提取物活性敷料，其特征在于，所述蜗牛精华提取物活性敷料包含背衬层和药物层，所述药物层包含蜗牛精华提取物。
5.根据权利要求1-4任一项所述的颅蜗牛精华提取物活性敷料，其特征在于，所述药物层中还任选的包含抗菌剂、局部麻醉剂、止痒剂。
6.根据权利要求5所述的蜗牛精华提取物活性敷料，其特征在于，所述抗菌剂选自：外用抗生素；所述局部麻醉剂选自：利多卡因或其药学上可接受的盐、普鲁卡因或其药学上可接受的盐；所述止痒剂选自薄荷醇。
7.权利要求1-6任一项所述的蜗牛精华提取物活性敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）制备蜗牛精华粗提物：蜗牛清洗干净，任选的去壳，加入1-3倍量的纯净水，匀浆，匀浆液以4000r/min离心10min去不溶性杂质后加入甲醇，调整甲醇浓度至2%-5%,浸泡12-36小时；匀浆液以3000-5000r/min离心5-15min，弃上清，得沉淀，于所述沉淀加入5-10倍纯净水搅拌均匀后煮沸，并维持0.5-2h，随后将匀浆液抽滤，得滤液，滤液减压浓缩至原体积的1/5-1/2,得浓缩液，浓缩液3000-5000r/min离心3-20min，弃沉淀，得上清液，于上清液中加入无水乙醇，调整醇浓度为60%-85%，静置过夜，抽滤所得沉淀即为蜗牛精华粗提物；
（2）纯化：蜗牛精华粗提物加纯净水至溶解，使用截留分子量为3000～25000的透析袋透析12-36h，透过液减压浓缩后干燥，即得蜗牛精华提取物；
（3）制备敷料：按量称取蜗牛精华提取物、药物层基质及任选的抗菌剂、局部麻醉剂、止痒剂，制备成敷料药物层，将药物层设置于背衬层上，灭菌后包装，即得蜗牛精华提取物活性敷料。
8.蜗牛精华提取物在制备蜗牛精华提取物活性敷料中的用途，所述蜗牛精华提取物按照以下方法制备：
（1）制备蜗牛精华粗提物：蜗牛清洗干净，任选的去壳，加入1-3倍量的纯净水，匀浆，匀浆液以4000r/min离心10min去不溶性杂质后加入甲醇，调整甲醇浓度至2%-5%,浸泡12-36小时；匀浆液以3000-5000r/min离心5-15min，弃上清，得沉淀，于所述沉淀加入5-10倍纯净水搅拌均匀后煮沸，并维持0.5-2h，随后将匀浆液抽滤，得滤液，滤液减压浓缩至原体积的1/5-1/2,得浓缩液，浓缩液3000-5000r/min离心3-20min，弃沉淀，得上清液，于上清液中加入无水乙醇，调整醇浓度为60%-85%，静置过夜，抽滤所得沉淀即为蜗牛精华粗提物；
（2）纯化：蜗牛精华粗提物加纯净水至溶解，使用截留分子量为3000～25000的透析袋透析12-36h，透过液减压浓缩后干燥，即得蜗牛精华提取物。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述步骤（2）中使用截留分子量为3000～15000的透析袋透析24h。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述步骤（2）中使用截留分子量为3000～8000的透析袋透析24h。
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