CN110305034A - 包含樟脑酸衍生物的组合物及其在化妆品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种包含樟脑酸衍生物的组合物及其在化妆品中的应用，属于化妆品技术领域，樟脑酸衍生物的制备方法为：将樟脑酸转化为樟脑酸酐，然后与氨基酸发生N‑酰化反应，合成得到樟脑酸衍生物；本发明还公开包含上述樟脑酸衍生物的组合物在化妆品中的应用。本发明樟脑酸衍生物的制备方法将氨基酸引入到樟脑酸分子骨架中，可有效改变樟脑酸的水溶性和细胞透过性，合成新型樟脑酸基生物活性化合物，得到的樟脑酸衍生物对UV损伤造成的ESF‑1细胞衰老具有良好的保护作用，能够改善UV照射所引起的表皮增厚及皱褶产生等表皮病变。

Description

包含樟脑酸衍生物的组合物及其在化妆品中的应用
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及包含樟脑酸衍生物的组合物及其在化妆品中的应用。
背景技术
樟脑是一种双环单萜类非木质林产品，是我国的天然优势资源，也可由松节油的主要成分α-蒎烯经多步反应合成得到。樟脑本身具有兴奋、强心、消炎、镇痛、抗菌、驱虫和杀虫等多种生物活性，在医药、日化和轻工等行业得到广泛应用。将樟脑氧化可得到樟脑酸(1,2,2-三甲基环戊烷二羧酸)，其分子结构中含有2个羧基、1个刚性的五元碳环和2个手性碳原子。根据羧基处在五元碳环的不同位置，可分为顺式和反式樟脑酸。根据2个手性碳原子可以得出樟脑酸有4个异构体，分别为(cis,1R,3S)-樟脑酸、(cis,1S,3R)樟脑酸、(trans,1S,3S)樟脑酸和(trans,1R,3R)樟脑酸。在这4个异构体中，(cis,1R,3S)-樟脑酸和(cis,1S,3R)樟脑酸，(trans,1S,3S)樟脑酸和(trans,1R,3R)樟脑酸分别是对映关系。其中，最常见的樟脑酸是(cis,1S,3R)樟脑酸即D-(+)-樟脑酸，其次是外消旋体DL-(±)-樟脑酸。D-(+)-樟脑酸主要是由硝酸氧化D-樟脑而得，而外消旋体DL-(±)-樟脑酸是通过氧化DL-樟脑而得。顺式体樟脑酸分子内存在氢键，而反式体分子间存在氢键。由于樟脑酸分子中功能基团单一，其应用受到一定的限制。根据樟脑酸分子结构中的羧基及光学活性性质，对樟脑酸分子结构进行改性，制备成具有一定功能的樟脑酸衍生物，将其应用于医药、农药、材料等领域的研究受到了广大学者的重视。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生产率高，可有效改变樟脑酸的水溶性和细胞透过性，使得到的樟脑酸衍生物具有新的活性，对UV损伤造成的ESF-1细胞衰老具有良好的保护作用，可抑制UV所致皮肤损伤和深皱纹的产生以及皮肤角质层增厚的脑酸衍生物的制备方法。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种樟脑酸衍生物的制备方法，将樟脑酸转化为樟脑酸酐，然后与氨基酸发生N-酰化反应，合成得到樟脑酸衍生物，具体路线为：
本发明制备方法使得樟脑酸和氨基酸之间形成多重氧键，能通过协同作用克服分子间弱相互作用的不足，将氨基酸引入到樟脑酸分子骨架中，合成新型樟脑酸基生物活性化合物。
优选的，氨基酸选自甘氨酸、酪氨酸或赖氨酸。甘氨酸、酪氨酸和赖氨酸属于极性氨基酸，不仅可有效改变樟脑酸的水溶性和细胞透过性，而且能够使得到的樟脑酸衍生物对UV损伤造成的ESF-1细胞衰老具有良好的保护作用，防止皮肤老化、晒黑及皮肤癌。
优选的，上述制备方法的具体步骤为：
S1：将樟脑酸和乙酸酐加热回流反应，反应结束后冷却，抽滤，重结晶，真空干燥得樟脑酸酐；
S2：将樟脑酸酐、氨基酸和无水乙醇加热回流反应，反应完毕后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，得到樟脑酸衍生物。
该制备方法的生产率高，使得到的樟脑酸衍生物具有新的活性，对UV损伤造成的ESF-1细胞衰老具有良好的保护作用，可抑制UV所致皮肤损伤和深皱纹的产生以及皮肤角质层增厚，同时使樟脑酸上亲疏水性将发生变化，提高其在冷水中的溶解性，解决了其微溶于冷水的缺陷，这对将来樟脑酸衍生物的应用是极为有利的。
为了提高樟脑酸衍生物的产量和活性，上述制备方法的具体步骤更为优选为：
S1：按重量体积比为1-2:1(g/mL)将樟脑酸和乙酸酐加热回流反应2-5h，反应结束后冷却至0℃，抽滤，然后在乙醇中重结晶，真空干燥得樟脑酸酐；
S2：将摩尔比为1:0.8-1.3得樟脑酸酐和氨基酸中加入无水乙醇，樟脑酸酐和无水乙醇的重量体积比为3-5:100(g/mL)，在70-80℃、搅拌下加热回流反应3-5h，反应完毕后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，硅胶柱层析用洗脱剂为体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液，得到樟脑酸衍生物。
本发明还公开一种对UV损伤造成的ESF-1细胞衰老具有保护作用，改善UV照射所引起的表皮增厚及皱褶产生等表皮病变的樟脑酸衍生物，其根据上述制备方法制得。
优选的，樟脑酸衍生物的结构式如式I，
式中，R＝H，
光老化主要是由于皮肤在急性或长期反复由紫外线(UV)照射引起，主要变化包括皱纹深乱粗深、色素沉着、癌前病变等。本发明樟脑酸衍生物对UV损伤造成的人胚皮肤成纤维细胞(ESF-1)衰老具有良好的保护作用，能够防止皮肤老化、晒黑及皮肤癌等由紫外线产生的影响，其主要通过如下方式实现：首先，上述樟脑酸衍生物能够显著拮抗损伤引起的细胞超氧化物歧化酶(SOD酶)活性的改变，减少脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的产生，从而降低ESF-1细胞损伤的程度或者保护ESF-1细胞免受氧化损伤，并可使氧化变性的大分子功能还原恢复，从而达到抗皮肤光老化作用；其次，上述樟脑酸衍生物还能抑制细胞Ⅰ型基质金属蛋白酶(MMP-1)的分泌，同时提高Ⅰ型基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)的分泌，能够减少Ⅰ型胶原蛋白(COL1)的降解，从而保护皮肤，延缓衰老；再次，上述樟脑酸衍生物还可抑制UV所致皮肤损伤和深皱纹的产生，抑制UV所致皮肤角质层增厚，进一步提高其抗光老化作用，改善UV照射所引起的表皮增厚及皱褶产生等表皮病变。
本发明还公开一种对UV损伤造成的ESF-1细胞衰老具有保护作用，改善UV照射所引起的表皮增厚及皱褶产生等表皮病变的包含樟脑酸衍生物的组合物，含有上述樟脑酸衍生物。
优选的，组合物用于皮肤光老化的保护。
本发明还公开一种用于皮肤光老化的保护的包含樟脑酸衍生物的组合物在化妆品中的应用。
本发明还公开一种防晒化妆品，包括上述包含樟脑酸衍生物的组合物以及化妆品可接受的辅料。
优选的，包含樟脑酸衍生物的组合物在所述防晒化妆品中的重量百分比为0.5-5％。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明制备方法使得樟脑酸和氨基酸之间形成多重氧键，能通过协同作用克服分子间弱相互作用的不足，将氨基酸引入到樟脑酸分子骨架中，合成新型樟脑酸基生物活性化合物，可有效改变樟脑酸的水溶性和细胞透过性，使得到的樟脑酸衍生物能够显著拮抗损伤引起的细胞SOD酶活性的改变，减少MDA的产生，抑制细胞MMP-1的分泌，提高TIMP-1的分泌，减少COL1的降解，对UV损伤造成的ESF-1细胞衰老具有良好的保护作用；上述樟脑酸衍生物还可还可抑制UV所致皮肤损伤和深皱纹的产生，抑制UV所致皮肤角质层增厚，改善UV照射所引起的表皮增厚及皱褶产生等表皮病变。
本发明采用了上述技术方案提供包含樟脑酸衍生物的组合物及其在化妆品中的应用，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
附图说明
图1为本发明试验例1中SOD活性测定用BCA标准曲线；
图2为本发明试验例1中SOD活性的测定结果；
图3为本发明试验例1中MDA含量的测定用BCA标准曲线；
图4为本发明试验例1中MDA含量的测定用MDA标准曲线；
图5为本发明试验例1中MDA含量的测定结果；
图6为本发明试验例1中COL1、MMP-1及TIMP-1含量的测定结果；
图7为本发明试验例2中小鼠皮肤宏观评价结果；
图8为本发明试验例2中小鼠皮肤角质层厚度的测定结果。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
除非另外说明，本发明中所公开的试验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。
实施例1：
樟脑酸衍生物的制备方法为：
S1：按重量体积比为1:1(g/mL)将樟脑酸和乙酸酐加热回流反应2h，反应结束后冷却至0℃，抽滤，然后在乙醇中重结晶，真空干燥得樟脑酸酐，产率为85.3％；
S2：将摩尔比为1:0.8得樟脑酸酐和甘氨酸中加入无水乙醇，樟脑酸酐和无水乙醇的重量体积比为3:100(g/mL)，在70℃、搅拌下加热回流反应3h，反应完毕后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，硅胶柱层析用洗脱剂为体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液，得到樟脑酸衍生物，樟脑酸衍生物的产率为76.8％，结构式为：
IR(KBr)，ν/cm-1：3370，3315(νO-H)，3289(νN-H)，2970，2885(νC-H)，1712，1703，1640(νC＝O)，1386(δC-H)，1108(νC-N)cm-1；1HNMR(600MHz，DMSO-d6)，δ:12.01(s，1H)，11.61(s，1H)，9.21(s，1H)，3.47-3.02(m，2H)，2.74-2.70(t，1H)，2.45-2.40(m，1H)，2.03-1.99(m，1H)，1.80-1.67(m，1H)，1.43-1.38(m，1H)，1.25(s，3H)，1.15(d，J＝23.6Hz，3H)，0.77(d，J＝23.6Hz，3H)；13CNMR(150MHz，DMSO-d6)，δ:177.09，177.03，172.26，55.57，55.15，48.61，38.27，32.41，22.67，22.33，21.65，20.87；ESI-MS，m/Z:257.3[M+H]+。
实施例2：
樟脑酸衍生物的制备方法为：
S1：按重量体积比为2:1(g/mL)将樟脑酸和乙酸酐加热回流反应5h，反应结束后冷却至0℃，抽滤，然后在乙醇中重结晶，真空干燥得樟脑酸酐，产率为84.2％；
S2：将摩尔比为1:1.3得樟脑酸酐和甘氨酸中加入无水乙醇，樟脑酸酐和无水乙醇的重量体积比为5:100(g/mL)，在80℃、搅拌下加热回流反应5h，反应完毕后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，硅胶柱层析用洗脱剂为体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液，得到樟脑酸衍生物，产率为75.1％。
实施例3：
樟脑酸衍生物的制备方法为：
S1：将16g樟脑酸和10mL乙酸酐加热回流反应3h，反应结束后冷却至0℃，抽滤，然后在乙醇中重结晶，真空干燥得樟脑酸酐，产率为87.8％；
S2：将5mmol樟脑酸酐和5mmol甘氨酸中加入25mL无水乙醇，在75℃、搅拌下加热回流反应3.5h，反应完毕后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，硅胶柱层析用洗脱剂为体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液，得到樟脑酸衍生物，产率为85.5％。
实施例4：
樟脑酸衍生物的制备方法为：
S1：将16g樟脑酸和10mL乙酸酐加热回流反应3h，反应结束后冷却至0℃，抽滤，然后在乙醇中重结晶，真空干燥得樟脑酸酐，产率为87.8％；
S2：将5mmol樟脑酸酐和5mmol酪氨酸中加入25mL无水乙醇，在75℃、搅拌下加热回流反应3.5h，反应完毕后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，硅胶柱层析用洗脱剂为体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液，得到樟脑酸衍生物，樟脑酸衍生物的产率为83.5％，结构式为
IR(KBr)，ν/cm-1：3382，3302(νO-H)，3245(νN-H)，2985，2887(νC-H)，1718，1687，1647(νC＝O)，1585，1516(νAr-C≡C)，1367(δC-H)，1115(νC-N)，905，830，716，608(δAr-H)cm-1；1HNMR(600MHz，DMSO-d6)，δ:12.01(s，1H)，11.61(s，1H)，10.21(s，1H)，9.52(s，1H)，7.74(d，J＝6.1Hz，2H)，6.89(d，J＝6.0Hz，2H)，3.58(s，1H)，3.17(dd，J＝12.1,6.5Hz，2H)，2.75-2.72(t，1H)，2.42-2.38(m，1H)，2.05-2.01(m，1H)，1.78-1.65(m，1H)，1.47-1.39(m，1H)，1.25(s，3H)，1.15(d，J＝23.6Hz，3H)，0.78(d，J＝23.6Hz，3H)；13CNMR(150MHz，DMSO-d6)，δ:177.09，172.05，166.23，161.35，130.24，129.03，124.50，116.55，115.01，55.57，55.15，48.61，42.25，38.27，32.41，22.67，22.33，21.65，20.87；ESI-MS，m/Z:363.4[M+H]+。
实施例5：
樟脑酸衍生物的制备方法为：
S1：将16g樟脑酸和10mL乙酸酐加热回流反应3h，反应结束后冷却至0℃，抽滤，然后在乙醇中重结晶，真空干燥得樟脑酸酐，产率为87.8％；
S2：将5mmol樟脑酸酐和5mmol赖氨酸中加入25mL无水乙醇，在75℃、搅拌下加热回流反应3.5h，反应完毕后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，硅胶柱层析用洗脱剂为体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液，得到樟脑酸衍生物，樟脑酸衍生物的产率为82.8％，结构式为
IR(KBr)，ν/cm-1：3381，3302(νO-H)，3271(νN-H)，2975，2880(νC-H)，1708，1686，1641(νC＝O)，1375(δC-H)，1103(νC-N)cm-1；1HNMR(600MHz，DMSO-d6)，δ:12.10(s，1H)，11.75(s，1H)，8.21(s，1H)，7.80(d，J＝7.8Hz，2H)，3.62(s，1H)，3.18(dd，J＝11.5.0,6.5Hz，2H)，3.01(dd，J＝12.1,7.5Hz，2H)，2.87(dd，J＝12.1,6.2Hz，2H)，3.75(dd，J＝11.9,6.3Hz，2H)，2.52(t，1H)，2.37(m，1H)，2.02(m，1H)，1.76(m，1H)，1.34(m，1H)，1.25(s，3H)，1.15(d，J＝23.6Hz，3H)，0.78(d，J＝23.6Hz，3H)；13CNMR(150MHz，DMSO-d6)，δ:177.06，176.23，172.26，55.60，53.15，48.61，42.28，41.85，41.23，41.58，38.35，32.28，22.70，20.33，21.64，21.05；ESI-MS，m/Z:328.4[M+H]+。
实施例6：
包含樟脑酸衍生物的组合物，含有实施例3、实施例4和实施例5制得的樟脑酸衍生物，其重量比为1:0.3-0.7:1.2-1.5。实施例3、实施例4和实施例5制得的樟脑酸衍生物能够增益作用，对UV损伤造成的ESF-1细胞衰老能够发挥优异的保护作用。
实施例7：
包含樟脑酸衍生物的组合物，包含樟脑酸衍生物的组合物，含有实施例3、实施例3和实施例5制得的樟脑酸衍生物，其重量比为1:0.5:1.4。
试验例1：
樟脑酸衍生物对UV损伤造成的ESF-1衰老的保护作用
1.ESF-1细胞株的体外培养
取对数生长期的细胞以0.25％胰酶消化，调整其密度为1×106/mL接种于96孔板。
2.实验分组
接种于板孔内的细胞随机分为空白组、模型组、试验组。空白对照组、模型组细胞给予DMEM培养液，试验组分别给予终浓度为2×10-4g/L的含实施例3-5樟脑酸衍生物溶液和实施例7包含樟脑酸衍生物的组合物的DMEM培养液，培养24h后，弃去每孔培养液，PBS洗三遍，然后每孔加入100μL PBS，细胞与紫外灯(UVA+UVB)距离15cm，照射2min，然后弃去PBS，每孔加入新鲜的培养液继续培养24h。空白组用铝箔盖住。
3.SOD活性和MDA含量的测定
收集各组细胞，用4℃PBS清洗2遍，于冰上裂解30min，4℃、1600rpm离心10min，取上清液作为待测样品，用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定待测样品的蛋白浓度，之后严格按照试剂盒说明书操作，测定SOD活性及MDA含量。
BCA标准曲线如图1所示，得出标准曲线方程为：y＝0.09444+0.89968x，R2＝0.99783。根据实验各组样品的A562nm值，通过此标准曲线计算其BCA浓度(CBCA)。然后，计算各组SOD酶的活力。结果如图2，与空白组对比，模型组细胞SOD酶活力明显降低；与模型组比较，试验组各组能不同程度的提高UV损伤ESF-1细胞的SOD酶活力，且实施例7组效果最佳。这说明樟脑酸衍生物能够显著拮抗损伤引起的细胞超氧化物歧化酶(SOD酶)活性的改变，且实施例3、实施例4和实施例5制得的樟脑酸衍生物能够增益作用，对UV损伤造成的ESF-1细胞衰老能够发挥优异的保护作用。
BCA标准曲线如图3所示，得出标准曲线方程为：y＝0.09846+0.92124x，R2＝0.99753。根据实验各组样品的A562nm值，通过此标准曲线计算其BCA浓度(CBCA)。然后，计算各组SOD酶的活力。MDA标准曲线如图4所示。得出标准曲线方程为：y＝0.04301+0.01898x，R2＝0.99985。根据实验各组样品的A532nm值，通过此标准曲线计算其MDA的浓度(CBCA)。结果如图5，与空白组对比，模型组细胞MDA的含量明显升高；与模型组比较，试验组各组能不同程度的降低UV损伤ESF-1细胞的MDA的含量，且实施例7组效果最佳。这说明樟脑酸衍生物能够显著拮抗损伤引起的减少脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的产生，且实施例3、实施例4和实施例5制得的樟脑酸衍生物能够增益作用，对UV损伤造成的ESF-1细胞衰老能够发挥优异的保护作用。
4.ELISA法检测细胞上清液中COL1、MMP-1及TIMP-1的含量
收集各组细胞，用4℃PBS清洗2遍，于冰上裂解30min，4℃、1600rpm离心10min，取上清液作为待测样品，在4℃可保存一周，-20℃保存则1个月内有效，-80℃能保存6个月，避免反复冻融。严格按照试剂盒说明书操作，检测I型胶原蛋白的含量。然后分别绘制COL1、MMP-1及TIMP-1标准曲线，根据实验各组样品的A450nm值，通过相应的标准曲线计算各组样品中COL1、及TIMP-1的含量。结果如图6所示，与空白组对比，模型组COL1的含量明显降低；与模型组比较，试验组各组能不同程度的提高UV损伤ESF-1细胞的COL1的含量，且实施例7组效果最佳。与空白组对比，模型组TIMP-1的含量明显升高；与模型组比较，试验组各组能不同程度的降低UV损伤ESF-1细胞的TIMP-1的含量，且实施例7组效果最佳。与空白组对比，模型组TIMP-1的含量明显降低；与模型组比较，试验组各组能不同程度的提高UV损伤ESF-1细胞的TIMP-1的含量，且实施例7组效果最佳。这说明樟脑酸衍生物能抑制细胞Ⅰ型基质金属蛋白酶(MMP-1)的分泌，同时提高Ⅰ型基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)的分泌，能够减少Ⅰ型胶原蛋白(COL1)的降解，从而保护皮肤，延缓衰老；且实施例3、实施例4和实施例5制得的樟脑酸衍生物能够增益作用，对UV损伤造成的ESF-1细胞衰老能够发挥优异的保护作用。
试验例2：
樟脑酸衍生物抗UV致小鼠皮肤光老化损伤的作用
1.实验分组
将小鼠随机分成空白组、模型组、试验组、对照组，每组12只。
2.模拟紫外线照射小鼠致光老化
参考光老化动物模型方法建立动物模型。照射前，剃掉背部约3×3cm的皮发。模型组不涂药，试验组分别涂0.1mL实施例3-5樟脑酸衍生物溶液和实施例7包含樟脑酸衍生物的组合物(用60％乙醇将樟脑酸衍生物或包含樟脑酸衍生物的组合物配成浓度为0.2g/mL的溶液)，对照组涂60％乙醇，空白组外用生理盐水处理30min，除空白组外，各组小鼠颈背部皮下注射5％D-半乳糖10ml/(kg·d)，同时模拟紫外线光老化皮肤损伤照射。固定小鼠，头部区遮光，40W UVB灯管2根(312nm)及40WUVA灯管2根(365nm)模拟日光组合配置照射。以1MED为起始照射剂量，连续照射3天，间隔1天进行下一周期的紫外照射，进行下一个周期紫外照射时递增1个MED，3天为1个周期，照射8个周期，累计照射剂量为7.56J/cm2；第5～8个周期时，1天分早、晚2次等剂量照射，照射期间密切观察小鼠皮肤状况。
3.宏观评价
每日观察小鼠的进食、精神状况，观察小鼠背部皮肤状况，若出现红斑、水泡、糜烂等现象，及时停止照射；当模型组小鼠背部皮肤出现局部增厚、松弛、见粗和深皱纹、色泽晦暗等光老化表征，则表明模型构建成功。各组小鼠每周期间隔日观测皮肤粗糙程度、厚度、表面纹理、色泽等情况。以未见皱纹或松弛，见正常皮肤纹理(0分)、可见细磨痕(1分)、出现少量浅皱纹(2分)、较多浅皱纹(3分)、皮肤粗糙，少量深皱纹(4分)、较多深皱纹(5分)、皱纹严重伴皮肤损伤(6分)计算宏观视觉评分，0分代表正常皮肤外观，6分代表严重受损皮肤。结果如图7所示，可知，模型组小鼠皮肤得分为5-6分，提示模型构造成功；对照组小鼠与模型组小鼠皮肤外观相似，表明所用溶剂-60％乙醇未对结果产生干扰；试验组小鼠皮肤表面明显比对照组光滑，表明实施例3-5樟脑酸衍生物溶液和实施例7包含樟脑酸衍生物的组合物可抑制UV所致皮肤损伤和深皱纹的产生，且实施例7包含樟脑酸衍生物的组合物的效果最佳。
4.皮肤角质层厚度的变化
紫外照射可导致皮肤屏障功能减弱，进而加快皮肤老化，表现为皮肤干燥和表皮增厚。表皮增厚是皮肤的一种适应性反应，可以减弱紫外线穿透，同时也被视为皮肤受损的一种表现。将小鼠背部皮肤组织取下包埋后切片，脱蜡至水：二甲苯2次，各10min；100％乙醇→95％乙醇→85％乙醇→75％乙醇→蒸馏水，时间各为2min；苏木素染色4min，自来水40s；盐酸乙醇(70％乙醇99mL+浓盐酸1mL)分化数秒；自来水反蓝15min，镜下观察是否染色(细胞核)；90％乙醇脱水；伊红染色1min；95％乙醇和100％乙醇逐级进行脱水；二甲苯适度透明后用中性树胶进行封固，显微镜下进行观察和拍照。然后各组随机选择5张HE染色处理的皮肤病理图(400×)进行角质层厚度测量，实验结果见图8，可知，对照组小鼠与模型组小鼠皮肤角质层厚度相近，表明所用溶剂-60％乙醇不影响UV对角质层增厚作用；对比空白组和模型组小鼠皮肤角质层厚度，发现模型组小鼠皮肤角质层厚度是空白组小鼠皮肤角质层厚度的3倍(P＜0.05)，说明该造模条件能引起小鼠皮肤角质层增厚。对比对照组与试验组，发现试验组的皮肤角质层厚度均比对照组小，且实施例7包含樟脑酸衍生物的组合物的试验组的皮肤角质层厚度最小，说明实施例3-5樟脑酸衍生物溶液和实施例7包含樟脑酸衍生物的组合物对UV所致皮肤角质层增厚有抑制作用，且实施例7包含樟脑酸衍生物的组合物的效果最佳。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims (10)

1.一种樟脑酸衍生物的制备方法，其特征在于：将樟脑酸转化为樟脑酸酐，然后与氨基酸发生N-酰化反应，合成得到樟脑酸衍生物。
2.根据权利要求1所述的包含樟脑酸衍生物的制备方法，其特征在于：所述氨基酸选自甘氨酸、酪氨酸或赖氨酸。
3.根据权利要求1或2所述的一种樟脑酸衍生物的制备方法，其特征在于：所述制备方法的具体步骤为：
S1：将樟脑酸和乙酸酐加热回流反应，反应结束后冷却，抽滤，重结晶，真空干燥得樟脑酸酐；
S2：将樟脑酸酐、氨基酸和无水乙醇加热回流反应，反应完毕后，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，得到樟脑酸衍生物。
4.一种樟脑酸衍生物，其特征在于：权利要求1或2或3所述的制备方法制得。
5.根据权利要求4所述的一种樟脑酸衍生物，其特征在于：所述樟脑酸衍生物的结构式如式I，
式中，R＝H，
6.包含樟脑酸衍生物的组合物，其特征在于：含有根据权利要求4或5所述的樟脑酸衍生物。
7.根据权利要求1所述的包含樟脑酸衍生物的组合物，其特征在于：所述组合物用于皮肤光老化的保护。
8.权利要求1-7任一项所述的包含樟脑酸衍生物的组合物在化妆品中的应用。
9.一种防晒化妆品，其特征在于：包括权利要求1-7任一项所述的包含樟脑酸衍生物的组合物以及化妆品可接受的辅料。
10.根据权利要求9所述的一种防晒化妆品，其特征在于：所述包含樟脑酸衍生物的组合物在所述防晒化妆品中的重量百分比为0.5-5％。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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