CN110278939A - 一种透明染色标本的制作方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种透明染色标本的制作方法及其应用，涉及生物技术领域。制作方法依次为：材料预处理、包括动物尸体的解剖；脱水固定、包括使用梯度浓度的乙醇溶液对中进行逐步脱水；软骨染色、用阿利新蓝染色液在对生物体进行软骨染色；肉的初次透明处理、将染色后的动物尸体标本使用KOH溶液进行浸泡处理；双氧水漂白、使用双氧水溶液进行浸泡漂白；梯度透明、使用配置的梯度透明液进行多次浸泡处理或使用水杨酸甲酯处理；装瓶保存、使用丙三醇里浸没处理并转移到容器里，再加麝香草酚颗粒即可。本发明的标本制备方法，在保证制备标本质量的基础上、缩短了传统标本的制作周期，从而提高了经济效益。

Description

一种透明染色标本的制作方法及其应用
技术领域
本发明属于技术领域，特别是涉及一种透明染色标本的制作方法以及一种透明染色标本的应用。
背景技术
1858年Beal研究人体的胚胎透明标本，1897年，Schulze利用茜素红、甘油、氢氧化钾(KOH)进行骨骼染色标本的制作，至今还有许多研究者进行优化改良，但目前相关文献并没有实质性解决透明骨骼标本中实际潜在的一些制作问题的出现，甚至未曾提及。
实际透明骨骼标本制作实验之中，经常会出现错染或染色不完全的现象，使目标物不能很好有效的彰显，以至于标本骨骼结构显现不完整，观察研究时不便捷。同时对于不同大小脊柱动物，制作方法应该要存在一定的区别，但目前在相关文献中并无提及，尤其是配方校正，细化制作处理，包括肉的吸液膨胀问题及气泡问题，同时现有的标本制备方法存在制备周期长、制备比操作麻烦的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种透明染色标本的制作方法，在保证制备标本质量的基础上、缩短了传统标本的制作周期，从而提高了经济效益。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明为一种透明染色标本的制作方法，包括：
步骤1、材料预处理：
包括动物尸体的解剖：
步骤2、脱水、固定：
包括使用梯度浓度的乙醇溶液对中进行逐步脱水；
步骤3、软骨染色：
将阿利新蓝染色液在30℃下对生物体进行软骨染色；
步骤4、肉的初次透明处理：
将染色后的动物尸体标本使用KOH溶液进行浸泡，直到骨骼可见为止；
步骤5、双氧水漂白：
使用3％-5％的双氧水溶液进行浸泡漂白，祛除生物标本本身颜色；
步骤6、梯度透明：
使用配置的梯度透明液进行多次浸泡处理或使用水杨酸甲酯处理；
步骤7、装瓶保存：
制作好的透明骨骼成品在新的丙三醇里浸没1个小时，然后才能放到最终的容器里，然后加上少许麝香草酚颗粒即可。
进一步地，所述步骤1材料预处理中的解剖包括：
对于体型小于4cm的动物尸体需要去皮不去内脏；
对于体型4-6cm的动物尸体需要去皮不去内脏但是需要将腹腔开口；
对于体型大于6cm的动物尸体需要去皮去内脏；
小于4cm的尸体不去皮不去内脏，因为材料本身较小，骨骼脆弱易断裂，去皮和去内脏必须手工去除，这样会增加失败率，即使去皮和去内脏对材料本身的美观性也没有明显的改变差异；因为它们的皮很薄，内脏很少，在KOH溶液透明时很容易被透明，也不影响溶液的渗透效果。
4-6cm的尸体去皮不去内脏浸泡乙醇是因为，此时生物体的皮较厚，内脏较多，在美观性和渗透性上有一定的影响；去皮是因为，相对于在浸泡酒精后和没有浸泡酒精的情况下，没有浸泡酒精皮更容易去除，且去除的干净。不去内脏是因为，浸泡酒精后，因为脱水，内脏更容易完整的去除。
大于6cm的去皮去内脏。去皮是因为没有浸泡酒精更好去除，去内脏是因为腹腔内水分太大，对于酒精脱水则需要更多的酒精和时间去脱水，所以直接去除内脏是有效的方法，不仅可以节约制作时间，而且可以节约试剂成本。
同时还包括鱼类的鳞片、龟类的壳角质层、蜥蜴目的鳞片以及鳄鱼的皮甲的去除；
其中，去除具体包括使用0.2-0.5％KOH碱溶液浸泡3-18h。
其中，对于小型海鱼选择只去鳞不去皮，
所述小型海鱼包括小丑鱼、三间火箭，因为小型海鱼本身不大且体型比较薄，所以渗透率足够染色及透明，保留皮质在一定程度上会有利于镊取过程中起到保护作用，防止镊取过程中使细小的骨骼变形断裂，同时能一定程度上减少因为换液带来离子浓度差的吸液涨破现象；
其中，红肉在透明度上会低于白肉，为了达到高透明的效果，预处理过程中还需将红肉中的红色给去除，具体包括采用硼砂2份，浓度为5％的氨水1份和20份的蒸馏水混合液进行浸泡。
进一步地，所述步骤2脱水、固定后还包括使用脂溶性溶剂进行浸泡脱脂；
其中，所述脂溶性溶剂包括工业乙醇，乙酸异戊酯，汽油、丙酮、石油醚；
其中，对于体型小于8cm的动物尸体选用乙酸异戊酯进行温度为30℃、时长4天的密封脱脂，盛放容器不可选用塑料制品；
其中，对于体型≥8cm的动物尸体汽油、丙酮或石油醚进行温度为30℃、时长4天的密封脱脂，盛放容器不可选用塑料制品；
其中，浸泡脱脂后还包括脂溶性溶剂的提取：
所述脂溶性溶剂的提取包括使用水溶液或者乙醇溶液进行梯度稀释提取；
使用乙醇溶液进行梯度稀释提取具体包括依次使用浓度为50％，75％，100％和100％的乙醇溶液进行浸泡提取。
进一步地，所述步骤2的脱水、固定还可使用4％PFA多聚甲醛溶液浸泡固定或者10％福尔马林溶液进行浸泡固定；
其中，所述4％PFA多聚甲醛溶液主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成,pH为7.4；
4％PFA多聚甲醛溶液适合于绝大多数组织和细胞的固定,是免疫组织化学和培养细胞固定中最常用的固定液之一,它能较好的保护组织和细胞的形态结构。
4％PFA多聚甲醛溶液浸泡脱水方法包括：
将预处理好的标本放入PFA溶液之中使标本完全浸没，根据标本的体型大小指定时间，一般的小标本泡制时间按2-4h浸泡，中小型的标本需要浸泡的时间一般为4-18h；
为了防止溶液会挥发出甲醛，使用时在通风环境的条件下，使用温度为25-35℃。
进一步地，所述步骤2中用梯度浓度的乙醇溶液对中进行逐步脱水具体包括：
使用75％的乙醇溶液浸泡处理2天，每天更换乙醇溶液一次；
使用95％的乙醇溶液或无水乙醇浸泡处理2天，每天更换乙醇溶液一次；
使用无水乙醇浸泡处理3天；
75％乙醇：杀菌消毒，过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止酒精进入细胞体内，从而难以将细菌杀死；浓度过低，虽然可以进入细胞体内，但不能将蛋白质变性凝固，同样无法将细菌杀死。针对新鲜尸体和冷冻尸体起到一个脱水作用，对干尸起到一个初步补水的作用，不用纯水给干尸进行补水是防止干尸过分吸收水分，导致变形或烂掉。
95％乙醇和无水乙醇的作用：脱去生物体内的水分以及固定形状。去除水分过后有利于脂溶性溶剂将体内的“脂”从体内脱除。
进一步地，所述阿利新蓝染色液包括无水乙醇770毫升、蒸馏水70毫升，阿利新蓝0.1克，冰醋酸160毫升；
阿利新蓝染色液配制方法：先用70毫升蒸馏水分成3份分别为25毫升、20毫升、25毫升，先取0.1克阿利新蓝送入到容器低端，然后加入25毫升蒸馏水，不断震荡，使阿利新蓝溶解，震荡1分钟后再加20毫升水进行震荡1分钟，最后再加25毫升进行最后的一次震荡；再与冰醋酸混合搅拌，最后混入酒精；
阿利新蓝染色液的配置，先加水的原因是阿利新蓝易溶于水，而不容易在无水乙醇中溶解，分批次加水和比一次直接配置是能更好的解决一定的实际配置过程中阿利新蓝粉末粘附在容器内壁上的问题；
对于如螃蟹、鳌虾、龙虾等节肢动物染色，需将节肢动物先在浓度为20％-30％的冰醋酸溶液中浸泡24h在进行阿利新蓝染色液的浸泡染色，冰醋酸溶液浸泡处理目的是便于下一步阿利新蓝染色液的染色更具有渗透力。
在阿利新蓝染液的染色过程中，PH的调控极为重要，要确保PH为2.5，才是最佳的染色状态，因为组织内的羧基电离，带有一个负电荷，与阿利新蓝中的阳离子形成盐键，使带有羧基的酸性黏液物质(硫酸黏性蛋白和唾液黏性蛋白)染色，此染色在PH为2.5条件下最佳。
在将生物材料浸泡过染色液之后，染液的PH会上升，导致第二次使用时无法染上色。基于反应原理，将通过调控PH值来使得染液可以重复使用。由于冰醋酸是弱酸，故而使用PH计进行配合调节PH，若在多次使用后，染液变淡，说明阿利新蓝含量减少了，故而可以再调节阿利新蓝的量，以达到废液重新利用，这样可以节约8-10％的试剂成本。
进一步地，所述步骤3软骨染色包括：
对于体型较大的动物尸体，如乳猪仔、或者乳体狐狸，选用胰蛋白酶溶液进行蛋白的分解，当溶液变蓝时，即更换一次胰蛋白酶溶液，除此之外也可使用含酶洗衣粉进行处理；
所述胰蛋白酶溶液包括30毫升饱和硼酸钠溶液，70ml蒸馏水，1g胰蛋白酶。
进一步地，所述步骤4肉的初次透明处理中；
对于体型为5㎝以下的鱼类，选用0.5-1％的KOH溶液进行浸泡；对于体型为5-10㎝之间的鱼类，选用1-1.5％的KOH溶液进行浸泡；对于体型为10㎝以上的鱼类，选用1.5-2％的KOH溶液进行浸泡；
对于体型为5㎝以下的乌龟和甲鱼，采用2％KOH溶液进行浸泡；对于体型介于5-8㎝之间的乌龟和甲鱼，采用3％KOH溶液进行浸泡；对于体型为8㎝以上的乌龟和甲鱼，采用4％-5％的KOH溶液进行浸泡，在肉较紧密的地方可以选择注射4％或者5％的KOH溶液，使其透明效果更明显；
对于小型哺乳动物幼体，如水貂幼崽大小的生物体材料应用2％的KOH溶液，貉子幼崽大小的生物体可用3.5％的KOH溶液，狐狸幼崽的尸体大小可适用于4％-5％的KOH溶液，但是需要对脖子进行注射5％的KOH溶液；
对于节肢动物一般均用2％-2.5％KOH溶液；
对于爬行类如蜥蜴，其体型为10cm以下的采用2％KOH溶液，体型为10cm以上的用3％KOH溶液；
其中，在使用KOH溶液进行初次透明处理前，还需使用蒸馏水将阿利新蓝中浸泡后的生物材料多次洗涤，使含有酸性的生物材料PH升高，同时在正式预透明之前需要用碱液进行一定的中和，防止酸碱中和影响预透明阶段的碱液PH。
进一步地，所述步骤4肉的初次透明处理之后还包括硬骨染色和浮色的去除：
所述硬骨染色采用将上述生物材料移入茜素红染液中进行染色，浸泡时间为24-36小时；
所述茜素红染液的配置包括取10毫升无水乙醇进行配置饱和的茜素红溶液，加入90毫升浓度为0.2-2％的KOH溶液。
如水貂幼崽的尸体在染色时应配置1％的KOH溶液10-90毫升，鱼可以选择浓度低于0.5％的KOH溶液，因为鱼极易被碱泡散架，所以尽量选择低浓度的碱液或者不加；
所述浮色的去除包括使用蒸馏水或35％的酒精溶液或NaCl溶液进行浸泡处理洗去浮色。
进一步地，使用35％的酒精溶液或NaCl溶液，目的是防止肉因为浓度的变化太快而吸涨破坏了自身结构而失败；不宜浸泡时间过长，24h以内即可，但是刚刚开始时需要频繁更换溶液，直到溶液中基本无浮色。
进一步地，所述步骤5双氧水漂白的漂白温度为24-28℃；漂白至生物材料肉质呈粉红色或无色，眼睛为黄褐色，为宜；
对于螃蟹、鳌虾、龙虾等节肢动物，则需要将其浸泡至各关节处无黑色杂质为宜，因为大多数螃蟹、龙虾、鳌虾关节处均存在黑色杂质，影响美观，并且双氧水不与碳酸钙反应，故长时间的浸泡也不会更多的增加其漂白效果。
进一步地，所述步骤5双氧水漂白过程经双氧水浸泡漂白后，使用蒸馏水水洗，5分钟换一次蒸馏水清洗液，每次需要搅拌加速双氧水的析出，换液三次后放置到有机相极性的试剂中进行初步处理，放置5个小时后，再放置到有机相非极性溶剂进行处理3个小时后，再放入二甲苯试剂中处理一次，最后放入纯的水杨酸甲酯中处理一次即可。
上述有机相极性试剂包括乙醇；上述有机相非极性溶剂包括二甲苯。
进一步地，所述步骤7梯度透明具体包括：
使用20％透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；更换50％的透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；再更换80％的透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；最后用丙三醇多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；
其中，20％透明液为2％KOH、丙三醇和蒸馏水三者的体积比为5:2:3的混合溶液；20％的透明液具有脱色、残留的颜色；
其中，50％透明液为丙三醇与蒸馏水的体积比为1:1的混合液；
其中，80％透明液为丙三醇与蒸馏水的体积比为8:2的混合液。
实际操作中，将浸泡后透明液滴加2％双氧水，搅拌后静止，若颜色还在，重复操作，直到无色，最后再稍微加热，使剩余的双氧水分解，从而达到去除透明液的颜色，同时使得原液中丙三醇不被消耗的目的，从而实现透明液废液的回收利用。
对于螃蟹、鳌虾、龙虾等节肢动物，则梯度透明具体包括使用20％透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；再更换75％的透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可，最后用丙三醇多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；
因为螃蟹、鳌虾、龙虾等节肢动物，它们没有过多的浮色及蛋白质，同时也不用担心浓度大幅度上升而使生物体变形，故而50％脱色透明步骤可以省略。
进一步地，所述步骤8装瓶保存中使用丙三醇浸泡生物材料，是为了使生物体更接近丙三醇，因为前一步骤虽然是在丙三醇里浸泡，但可能最终携带的是95％-97％的丙三醇，会略微影响最终效果。
透明染色标本在装饰品上的应用；具体包括在挂件、灯具上的应用。
将成品标本放入培养皿内，再用胶水将透明的小棍围绕在标本四周进行固定，同时也可以用透明小棍进行对标本姿势进行调整，此时倒入部分甘油或者其他透明试剂，并将培养皿的上盖钻一个小孔，在上盖四周涂上胶水，将上盖与下底粘合，确保溶液不会流出，此时标本被固定在小棍之间，用注射器将透明液通过小孔继续注射进去，直至满液为止，此时用胶水滴在小孔上待固定则可形成密封。
一种标本的批量化制作方法：
将处理过的尸体进行去皮去内脏，然后直接无水乙醇浸泡脱水，5个小时换一次换3次后，再放在蒸馏水中进行复水处理，然后在香蕉水中脱脂一天，同时保持温度在35℃。然后进行流水洗除残余香蕉水，然后在染色液中浸泡一天，然后改用4％双氧水浸泡，多次换液，36h后用20％透明液分别浸泡1天、1天、1天、2天。然后改换50％透明液，1天，2天。然后是100％丙三醇浸泡，最后加上麝香草酚，即可装瓶。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明的标本制备方法，在保证制备标本质量的基础上、缩短了传统标本的制作周期，从而提高了经济效益，同时通过本发明的制备过程得到的标本，具有气泡少乃至无明显气泡的优点；同时解决了现有标本制作过程中脱色困难、染色效果不佳的问题。
2、本发明通过调控阿利新蓝染色液的PH可达到废液二次利用或者多次利用的目的，达到节约成本、环保的目的。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
具体实施方式
实施例1
一种透明染色标本的制作方法，包括：
步骤1、材料预处理：
包括动物尸体的解剖：
步骤2、脱水、固定：
包括使用梯度浓度的乙醇溶液对中进行逐步脱水；
步骤3、软骨染色：
将阿利新蓝染色液在30℃下对生物体进行软骨染色；
步骤4、肉的初次透明处理：
将染色后的动物尸体标本使用KOH溶液进行浸泡，直到骨骼可见为止；
步骤5、双氧水漂白：
使用3％-5％的双氧水溶液进行浸泡漂白；
步骤6、梯度透明：
使用配置的梯度透明液进行多次浸泡处理；
步骤7、装瓶保存：
制作好的透明骨骼成品在新的丙三醇里浸没1个小时，然后才能放到最终的容器里，然后加上少许麝香草酚颗粒即可。
优选地，步骤1材料预处理中的解剖包括：
对于体型小于4cm的动物尸体需要去皮不去内脏；
对于体型4-6cm的动物尸体需要去皮不去内脏但是需要将腹腔开口；
对于体型大于6cm的动物尸体需要去皮去内脏；
小于4cm的尸体不去皮不去内脏，因为材料本身较小，骨骼脆弱易断裂，去皮和去内脏必须手工去除，这样会增加失败率，即使去皮和去内脏对材料本身的美观性也没有明显的改变差异；因为它们的皮很薄，内脏很少，在KOH溶液透明时很容易被透明，也不影响溶液的渗透效果。
4-6cm的尸体去皮不去内脏浸泡乙醇是因为，此时生物体的皮较厚，内脏较多，在美观性和渗透性上有一定的影响；去皮是因为，相对于在浸泡酒精后和没有浸泡酒精的情况下，没有浸泡酒精皮更容易去除，且去除的干净。不去内脏是因为，浸泡酒精后，因为脱水，内脏更容易完整的去除。
大于6cm的去皮去内脏。去皮是因为没有浸泡酒精更好去除，去内脏是因为腹腔内水分太大，对于酒精脱水则需要更多的酒精和时间去脱水，所以直接去除内脏是有效的方法，不仅可以节约制作时间，而且可以可以节约试剂成本。
同时还包括鱼类的鳞片、龟类的壳角质层、蜥蜴目的鳞片以及鳄鱼的皮甲的去除；
其中，去除具体包括使用0.2-0.5％KOH碱溶液浸泡3-18h。
其中，对于小型海鱼选择只去鳞不去皮，
小型海鱼包括小丑鱼、三间火箭，因为小型海鱼本身不大且体型比较薄，所以渗透率足够染色及透明，保留皮质在一定程度上会有利于镊取过程中起到保护作用，防止镊取过程中使细小的骨骼变形断裂，同时能一定程度上减少因为换液带来离子浓度差的吸液涨破现象；
其中，红肉在透明度上会低于白肉，为了达到高透明的效果，预处理过程中还需将红肉中的红色给去除，具体包括采用硼砂2份，浓度为5％的氨水1份和20份的蒸馏水混合液进行浸泡。
优选地，步骤2脱水、固定后还包括使用脂溶性溶剂进行浸泡脱脂；
其中，脂溶性溶剂包括工业乙醇，乙酸异戊酯，汽油、丙酮、石油醚；
其中，对于体型小于8cm的动物尸体选用乙酸异戊酯进行温度为30℃、时长4天的密封脱脂，盛放容器不可选用塑料制品；
其中，对于体型≥8cm的动物尸体汽油、丙酮或石油醚进行温度为30℃、时长4天的密封脱脂，盛放容器不可选用塑料制品；
其中，浸泡脱脂后还包括脂溶性溶剂的提取：
脂溶性溶剂的提取包括使用水溶液或者乙醇溶液进行梯度稀释提取；
使用乙醇溶液进行梯度稀释提取具体包括依次使用浓度为50％，75％，100％和100％的乙醇溶液进行浸泡提取。
优选地，步骤2的脱水、固定还可使用4％PFA多聚甲醛溶液浸泡固定或者10％福尔马林溶液进行浸泡固定；
其中，4％PFA多聚甲醛溶液主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成,pH为7.4；
4％PFA多聚甲醛溶液适合于绝大多数组织和细胞的固定,是免疫组织化学和培养细胞固定中最常用的固定液之一,它能较好的保护组织和细胞的形态结构。
4％PFA多聚甲醛溶液浸泡脱水方法包括：
将预处理好的标本放入PFA溶液之中使标本完全浸没，根据标本的体型大小指定时间，一般的小标本泡制时间按2-4h浸泡，中小型的标本需要浸泡的时间一般为4-18h；
为了防止溶液会挥发出甲醛，使用时在通风环境的条件下，使用温度为25-35℃。
优选地，步骤2中用梯度浓度的乙醇溶液对中进行逐步脱水具体包括：
使用75％的乙醇溶液浸泡处理2天，每天更换乙醇溶液一次；
使用95％的乙醇溶液或无水乙醇浸泡处理2天，每天更换乙醇溶液一次；
使用无水乙醇浸泡处理3天；
75％乙醇：杀菌消毒，过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止酒精进入细胞体内，从而难以将细菌杀死；浓度过低，虽然可以进入细胞体内，但不能将蛋白质变性凝固，同样无法将细菌杀死。针对新鲜尸体和冷冻尸体起到一个脱水作用，对干尸起到一个初步补水的作用，不用纯水给干尸进行补水是防止干尸过分吸收水分，导致变形或烂掉。
95％乙醇和无水乙醇的作用：脱去生物体内的水分以及固定形状。去除水分过后有利于脂溶性溶剂将体内的“脂”从体内脱除。
优选地，阿利新蓝染色液包括无水乙醇770毫升、蒸馏水70毫升，阿利新蓝0.1克，冰醋酸160毫升；
阿利新蓝染色液配制方法：先用70毫升蒸馏水分成3份分别为25毫升、20毫升、25毫升，先取0.1克阿利新蓝送入到容器低端，然后加入25毫升蒸馏水，不断震荡，使阿利新蓝溶解，震荡1分钟后再加20毫升水进行震荡1分钟，最后再加25毫升进行最后的一次震荡；再与冰醋酸混合搅拌，最后混入酒精；
阿利新蓝染色液的配置，先加水的原因是阿利新蓝易溶于水，而不容易在无水乙醇中溶解，分批次加水和比一次直接配置是能更好的解决一定的实际配置过程中阿利新蓝粉末粘附在容器内壁上的问题；
对于如螃蟹、鳌虾、龙虾等节肢动物染色，需将节肢动物先在浓度为20％-30％的冰醋酸溶液中浸泡24h在进行阿利新蓝染色液的浸泡染色，冰醋酸溶液浸泡处理目的是便于下一步阿利新蓝染色液的染色更具有渗透力。
在阿利新蓝染液的染色过程中，PH的调控极为重要，要确保PH为2.5，才是最佳的染色状态，因为组织内的羧基电离，带有一个负电荷，与阿利新蓝中的阳离子形成盐键，使带有羧基的酸性黏液物质(硫酸黏性蛋白和唾液黏性蛋白)染色，此染色在PH为2.5条件下最佳。
在将生物材料浸泡过染色液之后，染液的PH会上升，导致第二次使用时无法染上色。基于反应原理，将通过调控PH值来使得染液可以重复使用。由于冰醋酸是弱酸，故而使用PH计进行配合调节PH，若在多次使用后，染液变淡，说明阿利新蓝含量减少了，故而可以再调节阿利新蓝的量，以达到废液重新利用，这样可以节约8-10％的试剂成本。
优选地，步骤3软骨染色包括：
对于体型较大的动物尸体，如乳猪仔、或者乳体狐狸，选用胰蛋白酶溶液进行蛋白的分解，当溶液变蓝时，即更换一次胰蛋白酶溶液，除此之外也可使用含酶洗衣粉进行处理；
胰蛋白酶溶液包括30毫升饱和硼酸钠溶液，70ml蒸馏水，1g胰蛋白酶。
优选地，步骤4肉的初次透明处理中，KOH溶液的处理温度为23-28℃；
对于体型为5㎝以下的鱼类，选用0.5-1％的KOH溶液进行浸泡；对于体型为5-10㎝之间的鱼类，选用1-1.5％的KOH溶液进行浸泡；对于体型为10㎝以上的鱼类，选用1.5-2％的KOH溶液进行浸泡；
对于体型为5㎝以下的乌龟和甲鱼，采用2％KOH溶液进行浸泡；对于体型介于5-8㎝之间的乌龟和甲鱼，采用3％KOH溶液进行浸泡；对于体型为8㎝以上的乌龟和甲鱼，采用4％-5％的KOH溶液进行浸泡，在肉较紧密的地方可以选择注射4％或者5％的KOH溶液，使其透明效果更明显；
对于小型哺乳动物幼体，如水貂幼崽大小的生物体材料应用2％的KOH溶液，貉子幼崽大小的生物体可用3.5％的KOH溶液，狐狸幼崽的尸体大小可适用于4％-5％的KOH溶液，但是需要对脖子进行注射5％的KOH溶液；
对于节肢动物一般均用2％-2.5％KOH溶液；
对于爬行类如蜥蜴，其体型为10cm以下的采用2％KOH溶液，体型为10cm以上的用3％KOH溶液；
其中，在使用KOH溶液进行初次透明处理前，还需使用蒸馏水将阿利新蓝中浸泡后的生物材料多次洗涤，使含有酸性的生物材料PH升高，同时在正式预透明之前需要用碱液进行一定的中和，防止酸碱中和影响预透明阶段的碱液PH。
优选地，步骤5双氧水漂白的漂白温度为24-28℃；漂白至生物材料肉质呈粉红色或无色，眼睛为黄褐色，为宜；
对于螃蟹、鳌虾、龙虾等节肢动物，则需要将其浸泡至各关节处无黑色杂质为宜，因为大多数螃蟹、龙虾、鳌虾关节处均存在黑色杂质，影响美观，并且双氧水不与碳酸钙反应，故长时间的浸泡也不会更多的增加其漂白效果。
优选地，步骤6梯度透明具体包括：
使用20％透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；更换50％的透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；再更换80％的透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；最后用丙三醇多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；
其中，20％透明液为2％KOH、丙三醇和蒸馏水三者的体积比为5:2:3的混合溶液；
其中，50％透明液为丙三醇与蒸馏水的体积比为1:1的混合液；
其中，80％透明液为丙三醇与蒸馏水的体积比为8:2的混合液。
实际操作中，将浸泡后透明液滴加2％双氧水，搅拌后静止，若颜色还在，重复操作，直到无色，最后再稍微加热，使剩余的双氧水分解，从而达到去除透明液的颜色，同时使得原液中丙三醇不被消耗的目的，从而实现透明液废液的回收利用。
对于螃蟹、鳌虾、龙虾等节肢动物，则梯度透明具体包括使用20％透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；再更换75％的透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可，最后用丙三醇多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；
因为螃蟹、鳌虾、龙虾等节肢动物，它们没有过多的浮色及蛋白质，同时也不用担心浓度大幅度上升而使生物体变形，故而50％脱色透明步骤可以省略。
优选地，步骤8装瓶保存中使用丙三醇浸泡生物材料，是为了使生物体更接近丙三醇，因为前一步骤虽然是在丙三醇里浸泡，但可能最终携带的是95％-97％的丙三醇，会略微影响最终效果。
透明染色标本在装饰品上的应用；具体包括在挂件、灯具上的应用。
将成品标本放入培养皿内，再用胶水将透明的小棍围绕在标本四周进行固定，同时也可以用透明小棍进行对标本姿势进行调整，此时倒入部分甘油或者其他透明试剂，并将培养皿的上盖钻一个小孔，在上盖四周涂上胶水，将上盖与下底粘合，确保溶液不会流出，此时标本被固定在小棍之间，用注射器将透明液通过小孔继续注射进去，直至满液为止，此时用胶水滴在小孔上待固定则可形成密封。
实施例2
一种透明染色标本的制作方法，包括：
步骤1、材料预处理：
包括动物尸体的解剖：
步骤2、脱水、固定：
包括使用梯度浓度的乙醇溶液对中进行逐步脱水；
步骤3、软骨染色：
将阿利新蓝染色液在30℃下对生物体进行软骨染色；
步骤4、肉的初次透明处理：
将染色后的动物尸体标本使用KOH溶液进行浸泡，直到骨骼可见为止；
步骤5、硬骨染色：
将上述生物材料移入茜素红染液中进行染色，浸泡时间为24-36小时；
步骤6、浮色的去除：
使用蒸馏水或35％的酒精溶液或NaCl溶液进行浸泡处理洗去浮色；
步骤7、双氧水漂白：
使用3％-5％的双氧水溶液进行浸泡漂白；
步骤8、梯度透明：
使用水杨酸甲酯处理；
步骤9、装瓶保存：
制作好的透明骨骼成品在新的丙三醇里浸没1个小时，然后才能放到最终的容器里，然后加上少许麝香草酚颗粒即可。
优选地，步骤1材料预处理中的解剖包括：
对于体型小于4cm的动物尸体需要去皮不去内脏；
对于体型4-6cm的动物尸体需要去皮不去内脏但是需要将腹腔开口；
对于体型大于6cm的动物尸体需要去皮去内脏；
小于4cm的尸体不去皮不去内脏，因为材料本身较小，骨骼脆弱易断裂，去皮和去内脏必须手工去除，这样会增加失败率，即使去皮和去内脏对材料本身的美观性也没有明显的改变差异；因为它们的皮很薄，内脏很少，在KOH溶液透明时很容易被透明，也不影响溶液的渗透效果。
4-6cm的尸体去皮不去内脏浸泡乙醇是因为，此时生物体的皮较厚，内脏较多，在美观性和渗透性上有一定的影响；去皮是因为，相对于在浸泡酒精后和没有浸泡酒精的情况下，没有浸泡酒精皮更容易去除，且去除的干净。不去内脏是因为，浸泡酒精后，因为脱水，内脏更容易完整的去除。
大于6cm的去皮去内脏。去皮是因为没有浸泡酒精更好去除，去内脏是因为腹腔内水分太大，对于酒精脱水则需要更多的酒精和时间去脱水，所以直接去除内脏是有效的方法，不仅可以节约制作时间，而且可以可以节约试剂成本。
同时还包括鱼类的鳞片、龟类的壳角质层、蜥蜴目的鳞片以及鳄鱼的皮甲的去除；
其中，去除具体包括使用0.2-0.5％KOH碱溶液浸泡3-18h。
其中，对于小型海鱼选择只去鳞不去皮，
小型海鱼包括小丑鱼、三间火箭，因为小型海鱼本身不大且体型比较薄，所以渗透率足够染色及透明，保留皮质在一定程度上会有利于镊取过程中起到保护作用，防止镊取过程中使细小的骨骼变形断裂，同时能一定程度上减少因为换液带来离子浓度差的吸液涨破现象；
其中，红肉在透明度上会低于白肉，为了达到高透明的效果，预处理过程中还需将红肉中的红色给去除，具体包括采用硼砂2份，浓度为5％的氨水1份和20份的蒸馏水混合液进行浸泡。
优选地，步骤2脱水、固定后还包括使用脂溶性溶剂进行浸泡脱脂；
其中，脂溶性溶剂包括工业乙醇，乙酸异戊酯，汽油、丙酮、石油醚；
其中，对于体型小于8cm的动物尸体选用乙酸异戊酯进行温度为30℃、时长4天的密封脱脂，盛放容器不可选用塑料制品；
其中，对于体型≥8cm的动物尸体汽油、丙酮或石油醚进行温度为30℃、时长4天的密封脱脂，盛放容器不可选用塑料制品；
其中，浸泡脱脂后还包括脂溶性溶剂的提取：
脂溶性溶剂的提取包括使用水溶液或者乙醇溶液进行梯度稀释提取；
使用乙醇溶液进行梯度稀释提取具体包括依次使用浓度为50％，75％，100％和100％的乙醇溶液进行浸泡提取。
优选地，步骤2的脱水、固定还可使用4％PFA多聚甲醛溶液浸泡固定或者10％福尔马林溶液进行浸泡固定；
其中，4％PFA多聚甲醛溶液主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成,pH为7.4；
4％PFA多聚甲醛溶液适合于绝大多数组织和细胞的固定,是免疫组织化学和培养细胞固定中最常用的固定液之一,它能较好的保护组织和细胞的形态结构。
4％PFA多聚甲醛溶液浸泡脱水方法包括：
将预处理好的标本放入PFA溶液之中使标本完全浸没，根据标本的体型大小指定时间，一般的小标本泡制时间按2-4h浸泡，中小型的标本需要浸泡的时间一般为4-18h；
为了防止溶液会挥发出甲醛，使用时在通风环境的条件下，使用温度为25-35℃。
优选地，步骤2中用梯度浓度的乙醇溶液对中进行逐步脱水具体包括：
使用75％的乙醇溶液浸泡处理2天，每天更换乙醇溶液一次；
使用95％的乙醇溶液或无水乙醇浸泡处理2天，每天更换乙醇溶液一次；
使用无水乙醇浸泡处理3天；
75％乙醇：杀菌消毒，过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止酒精进入细胞体内，从而难以将细菌杀死；浓度过低，虽然可以进入细胞体内，但不能将蛋白质变性凝固，同样无法将细菌杀死。针对新鲜尸体和冷冻尸体起到一个脱水作用，对干尸起到一个初步补水的作用，不用纯水给干尸进行补水是防止干尸过分吸收水分，导致变形或烂掉。
95％乙醇和无水乙醇的作用：脱去生物体内的水分以及固定形状。去除水分过后有利于脂溶性溶剂将体内的“脂”从体内脱除。
优选地，阿利新蓝染色液包括无水乙醇770毫升、蒸馏水70毫升，阿利新蓝0.1克，冰醋酸160毫升；
阿利新蓝染色液配制方法：先用70毫升蒸馏水分成3份分别为25毫升、20毫升、25毫升，先取0.1克阿利新蓝送入到容器低端，然后加入25毫升蒸馏水，不断震荡，使阿利新蓝溶解，震荡1分钟后再加20毫升水进行震荡1分钟，最后再加25毫升进行最后的一次震荡；再与冰醋酸混合搅拌，最后混入酒精；
阿利新蓝染色液的配置，先加水的原因是阿利新蓝易溶于水，而不容易在无水乙醇中溶解，分批次加水和比一次直接配置是能更好的解决一定的实际配置过程中阿利新蓝粉末粘附在容器内壁上的问题；
对于如螃蟹、鳌虾、龙虾等节肢动物染色，需将节肢动物先在浓度为20％-30％的冰醋酸溶液中浸泡24h在进行阿利新蓝染色液的浸泡染色，冰醋酸溶液浸泡处理目的是便于下一步阿利新蓝染色液的染色更具有渗透力。
在阿利新蓝染液的染色过程中，PH的调控极为重要，要确保PH为2.5，才是最佳的染色状态，因为组织内的羧基电离，带有一个负电荷，与阿利新蓝中的阳离子形成盐键，使带有羧基的酸性黏液物质(硫酸黏性蛋白和唾液黏性蛋白)染色，此染色在PH为2.5条件下最佳。
在将生物材料浸泡过染色液之后，染液的PH会上升，导致第二次使用时无法染上色。基于反应原理，将通过调控PH值来使得染液可以重复使用。由于冰醋酸是弱酸，故而使用PH计进行配合调节PH，若在多次使用后，染液变淡，说明阿利新蓝含量减少了，故而可以再调节阿利新蓝的量，以达到废液重新利用，这样可以节约8-10％的试剂成本。
优选地，步骤3软骨染色包括：
对于体型较大的动物尸体，如乳猪仔、或者乳体狐狸，选用胰蛋白酶溶液进行蛋白的分解，当溶液变蓝时，即更换一次胰蛋白酶溶液，除此之外也可使用含酶洗衣粉进行处理；
胰蛋白酶溶液包括30毫升饱和硼酸钠溶液，70ml蒸馏水，1g胰蛋白酶。
优选地，步骤4肉的初次透明处理中，KOH溶液的处理温度为23-28℃；
对于体型为5㎝以下的鱼类，选用0.5-1％的KOH溶液进行浸泡；对于体型为5-10㎝之间的鱼类，选用1-1.5％的KOH溶液进行浸泡；对于体型为10㎝以上的鱼类，选用1.5-2％的KOH溶液进行浸泡；
对于体型为5㎝以下的乌龟和甲鱼，采用2％KOH溶液进行浸泡；对于体型介于5-8㎝之间的乌龟和甲鱼，采用3％KOH溶液进行浸泡；对于体型为8㎝以上的乌龟和甲鱼，采用4％-5％的KOH溶液进行浸泡，在肉较紧密的地方可以选择注射4％或者5％的KOH溶液，使其透明效果更明显；
对于小型哺乳动物幼体，如水貂幼崽大小的生物体材料应用2％的KOH溶液，貉子幼崽大小的生物体可用3.5％的KOH溶液，狐狸幼崽的尸体大小可适用于4％-5％的KOH溶液，但是需要对脖子进行注射5％的KOH溶液；
对于节肢动物一般均用2％-2.5％KOH溶液；
对于爬行类如蜥蜴，其体型为10cm以下的采用2％KOH溶液，体型为10cm以上的用3％KOH溶液；
其中，在使用KOH溶液进行初次透明处理前，还需使用蒸馏水将阿利新蓝中浸泡后的生物材料多次洗涤，使含有酸性的生物材料PH升高，同时在正式预透明之前需要用碱液进行一定的中和，防止酸碱中和影响预透明阶段的碱液PH。
优选地，硬骨染色采用将上述生物材料移入茜素红染液中进行染色，浸泡时间为24-36小时；
茜素红染液的配置包括取10毫升无水乙醇进行配置饱和的茜素红溶液，加入90毫升浓度为0.2-2％的KOH溶液。
如水貂幼崽的尸体在染色时应配置1％的KOH溶液，鱼可以选择浓度低于0.5％的KOH溶液，因为鱼极易被碱泡散架，所以尽量选择低浓度的碱液或者不加。
其中，浮色的去除使用35％的酒精溶液或NaCl溶液，目的是防止肉因为浓度的变化太快而吸涨破坏了自身结构而失败。不宜浸泡时间过长，24h以内即可，但是刚刚开始时需要频繁更换溶液，直到溶液中基本无浮色。
优选地，步骤5双氧水漂白的漂白温度为24-28℃；漂白至生物材料肉质呈粉红色或无色，眼睛为黄褐色，为宜；
对于螃蟹、鳌虾、龙虾等节肢动物，则需要将其浸泡至各关节处无黑色杂质为宜，因为大多数螃蟹、龙虾、鳌虾关节处均存在黑色杂质，影响美观，并且双氧水不与碳酸钙反应，故长时间的浸泡也不会更多的增加其漂白效果。
优选地，步骤6梯度透明中水杨酸甲酯处理具体包括：
将经步骤5双氧水漂白过程经双氧水浸泡漂白后，使用蒸馏水水洗，5分钟换一次蒸馏水清洗液，每次需要搅拌加速双氧水的析出，换液三次后放置到有机相极性的试剂中进行初步处理，放置5个小时后，再放置到有机相非极性溶剂进行处理3个小时后，再放入二甲苯试剂中处理一次，最后放入纯的水杨酸甲酯中处理一次即可；
有机相极性试剂包括乙醇；有机相非极性溶剂包括二甲苯。
实施例3
一种透明染色标本的制作方法，包括：
步骤1、材料预处理：
包括动物尸体的解剖：
步骤2、脱水、固定：
包括使用梯度浓度的乙醇溶液对中进行逐步脱水；
步骤3、肉的初次透明处理：
将染色后的动物尸体标本使用KOH溶液进行浸泡，直到骨骼可见为止；
步骤5、硬骨染色：
将上述生物材料移入茜素红染液中进行染色，浸泡时间为24-36小时
步骤5、双氧水漂白：
使用3％-5％的双氧水溶液进行浸泡漂白；
步骤6、梯度透明：
使用配置的梯度透明液进行多次浸泡处理；
步骤7、装瓶保存：
制作好的透明骨骼成品在新的丙三醇里浸没1个小时，然后才能放到最终的容器里，然后加上少许麝香草酚颗粒即可。
实施例3中步骤1-7的具体操作见实施例1-2。
标本实施例1：
将处理过的体型长度为20cm的蜥蜴尸体进行去皮去内脏，然后直接无水乙醇浸泡脱水，5个小时换一次换3次后，再放在蒸馏水中进行复水处理，然后在香蕉水中脱脂一天，同时保持温度在35℃。然后进行流水洗除残余香蕉水，然后在染色液中浸泡一天，然后改用4％双氧水浸泡，多次换液，36h后用20％透明液分别浸泡1天、1天、1天、2天。然后改换50％透明液，1天，2天。然后是100％丙三醇浸泡，最后加上麝香草酚，即可装瓶。
应用实施例1：
标本应用于香水瓶上1；
香水瓶包括瓶体和瓶盖，瓶体的底部设有容纳腔，容纳腔内填充有标本保存液并通过透明棒固定有生物标本。
标本应用于香水瓶上2；
香水瓶包括瓶体和瓶盖，瓶盖的顶部设有容纳腔，容纳腔内填充有标本保存液并通过透明棒固定有生物标本。
标本应用于香水瓶上3；
香水瓶包括瓶体和瓶盖，瓶体的内中心部位设有容纳腔，容纳腔内填充有标本保存液并通过透明棒固定有生物标本。
应用实施例2：
标本应用于灯具上；
以透明有机玻璃作为灯罩的材料，并将生物标本包埋进其中。
应用实施例3：
标本应用于挂饰上：
使用玻璃、透明塑料等透明制备柱状、心状、球状等结构的挂饰本体，将将生物标本包埋进其中即可制得标本挂饰。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (10)

1.一种透明染色标本的制作方法，其特征在于，包括：
步骤1、材料预处理：
包括动物尸体的解剖：
步骤2、脱水、固定：
包括使用梯度浓度的乙醇溶液对中进行逐步脱水；
步骤3、软骨染色：
将阿利新蓝染色液在30℃下对生物体进行软骨染色；
步骤4、肉的初次透明处理：
将染色后的动物尸体标本使用KOH溶液在23-28℃的条件下进行浸泡，直到骨骼可见为止；
步骤5、双氧水漂白：
使用3％-5％的双氧水溶液进行浸泡漂白；
步骤6、梯度透明：
使用配置的梯度透明液进行多次浸泡处理或使用水杨酸甲酯处理；
步骤7、装瓶保存：
制作好的透明骨骼成品在新的丙三醇里浸没1个小时，然后才能放到最终的容器里，然后加上少许麝香草酚颗粒即可。
2.根据权利要求1所述的一种透明染色标本的制作方法，其特征在于，所述步骤1材料预处理中的解剖包括：
对于体型小于4cm的动物尸体需要去皮不去内脏；
对于体型4-6cm的动物尸体需要去皮不去内脏但是需要将腹腔开口；
对于体型大于6cm的动物尸体需要去皮去内脏；
同时还包括鱼类的鳞片、龟类的壳角质层、蜥蜴目的鳞片以及鳄鱼的皮甲的去除；
其中，对于小型海鱼选择只去鳞不去皮，
所述小型海鱼包括小丑鱼、三间火箭。
3.根据权利要求1所述的一种透明染色标本的制作方法，其特征在于，所述步骤2脱水、固定后还包括使用脂溶性溶剂进行浸泡脱脂；
其中，所述脂溶性溶剂包括工业乙醇，乙酸异戊酯，汽油、丙酮、石油醚；
其中，浸泡脱脂后还包括脂溶性溶剂的提取：
所述脂溶性溶剂的提取包括使用水溶液或者乙醇溶液进行梯度稀释提取；
使用乙醇溶液进行梯度稀释提取具体包括依次使用浓度为50％，75％，100％和100％的乙醇溶液进行浸泡提取。
4.根据权利要求1所述的一种透明染色标本的制作方法，其特征在于，所述步骤2的脱水、固定还可使用4％PFA多聚甲醛溶液浸泡固定或者10％福尔马林溶液进行浸泡固定；
其中，所述4％PFA多聚甲醛溶液主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成,pH为7.4。
5.根据权利要求1所述的一种透明染色标本的制作方法，其特征在于，所述步骤2中用梯度浓度的乙醇溶液对中进行逐步脱水具体包括：
使用75％的乙醇溶液浸泡处理2天，每天更换乙醇溶液一次；
使用95％的乙醇溶液或无水乙醇浸泡处理2天，每天更换乙醇溶液一次；
使用无水乙醇浸泡处理3天。
6.根据权利要求1所述的一种透明染色标本的制作方法，其特征在于，所述步骤4肉的初次透明处理之后还包括硬骨染色和浮色的去除；
其中，所述硬骨染色采用将上述生物材料移入茜素红染液中进行染色，浸泡时间为24-36小时；
所述茜素红染液的配置包括取10毫升无水乙醇进行配置饱和的茜素红溶液，加入90毫升浓度为0.2-2％的KOH溶液；
其中，所述浮色的去除包括使用蒸馏水或35％的酒精溶液或NaCl溶液进行浸泡处理洗去浮色。
7.根据权利要求1所述的一种透明染色标本的制作方法，其特征在于，所述步骤5双氧水漂白的漂白温度为24-28℃；漂白至生物材料肉质呈粉红色或无色，眼睛为黄褐色，为宜。
8.根据权利要求1所述的一种透明染色标本的制作方法，其特征在于，所述步骤6梯度透明中水杨酸甲酯处理具体包括：
将经步骤5双氧水漂白过程经双氧水浸泡漂白后，使用蒸馏水水洗，5分钟换一次蒸馏水清洗液，每次需要搅拌加速双氧水的析出，换液三次后放置到有机相极性的试剂中进行初步处理，放置5个小时后，再放置到有机相非极性溶剂进行处理3个小时后，再放入二甲苯试剂中处理一次，最后放入纯的水杨酸甲酯中处理一次即可；
所述有机相极性试剂包括乙醇；所述有机相非极性溶剂包括二甲苯；
所述步骤6梯度透明中使用配置的梯度透明液进行多次浸泡处理包括：
使用20％透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；更换50％的透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；再更换80％的透明液多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；最后用丙三醇多次浸泡换液直到换的新溶液不再有颜色即可；
其中，20％透明液为2％KOH、丙三醇和蒸馏水三者的体积比为5:2:3的混合溶液；20％的透明液具有脱色、残留的颜色；
其中，50％透明液为丙三醇与蒸馏水的体积比为1:1的混合液；
其中，80％透明液为丙三醇与蒸馏水的体积比为8:2的混合液。
9.如权利要求1-8任意一所述制作方法制备的透明染色标本在装饰品上的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，具体包括在挂件、灯具上的应用。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20210129197A1 (en) * 2019-11-05 2021-05-06 Richard M. Hyslop Accelerated tissue dissolution
CN112825847A (zh) * 2019-11-25 2021-05-25 石功鹏阳 透明标本及其制备方法
CN112825846A (zh) * 2019-11-25 2021-05-25 石功鹏阳 标本展示盒及标本展示方法
CN112825845A (zh) * 2019-11-25 2021-05-25 石功鹏阳 标本展示方法

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5192211A (en) * 1991-07-29 1993-03-09 Yeh Tzuoo Lie Method of making animal specimen
CN102217564A (zh) * 2011-04-21 2011-10-19 中国水产科学研究院东海水产研究所 一种鲳鱼稚幼鱼性腺固定与获取方法
CN103525119A (zh) * 2013-10-24 2014-01-22 江苏省家禽科学研究所 一种软骨染色液、骨骼染色方法以及利用该方法制备胚胎骨骼标本的方法
CN104585160A (zh) * 2014-12-31 2015-05-06 上海师范大学 新型透明骨骼标本制作以及树脂保存方法
CN104596825A (zh) * 2014-12-26 2015-05-06 中国水产科学研究院南海水产研究所 一种鱼类骨骼的染色方法
CN104872110A (zh) * 2015-05-28 2015-09-02 暨南大学 水晶骨骼标本的制作方法
CN105104358A (zh) * 2015-09-30 2015-12-02 河南科技大学 一种新生兔透明骨骼标本的制作方法
CN105145544A (zh) * 2015-09-30 2015-12-16 河南科技大学 一种黄腹山雀透明骨骼标本的制作方法
CN105973663A (zh) * 2016-04-29 2016-09-28 广州市修德生物科技有限公司 一种炫彩骨骼标本的制备方法
CN107258764A (zh) * 2017-06-16 2017-10-20 大连海洋大学 软骨鱼类骨骼标本制作方法
CN107279130A (zh) * 2017-06-16 2017-10-24 大连海洋大学 鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法
CN107568198A (zh) * 2017-09-06 2018-01-12 张乘月 制备小型动物透明骨骼标本的方法及以该方法制备的标本

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5192211A (en) * 1991-07-29 1993-03-09 Yeh Tzuoo Lie Method of making animal specimen
CN102217564A (zh) * 2011-04-21 2011-10-19 中国水产科学研究院东海水产研究所 一种鲳鱼稚幼鱼性腺固定与获取方法
CN103525119A (zh) * 2013-10-24 2014-01-22 江苏省家禽科学研究所 一种软骨染色液、骨骼染色方法以及利用该方法制备胚胎骨骼标本的方法
CN104596825A (zh) * 2014-12-26 2015-05-06 中国水产科学研究院南海水产研究所 一种鱼类骨骼的染色方法
CN104585160A (zh) * 2014-12-31 2015-05-06 上海师范大学 新型透明骨骼标本制作以及树脂保存方法
CN104872110A (zh) * 2015-05-28 2015-09-02 暨南大学 水晶骨骼标本的制作方法
CN105104358A (zh) * 2015-09-30 2015-12-02 河南科技大学 一种新生兔透明骨骼标本的制作方法
CN105145544A (zh) * 2015-09-30 2015-12-16 河南科技大学 一种黄腹山雀透明骨骼标本的制作方法
CN105973663A (zh) * 2016-04-29 2016-09-28 广州市修德生物科技有限公司 一种炫彩骨骼标本的制备方法
CN107258764A (zh) * 2017-06-16 2017-10-20 大连海洋大学 软骨鱼类骨骼标本制作方法
CN107279130A (zh) * 2017-06-16 2017-10-24 大连海洋大学 鱼类骨骼双染色塑封标本制作方法
CN107568198A (zh) * 2017-09-06 2018-01-12 张乘月 制备小型动物透明骨骼标本的方法及以该方法制备的标本

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴坤成等: "多种骨骼标本脱脂溶剂的脱脂脱水效果比较", 《湘南学院学报（医学版）》 *
张树舜等: "《生物实验与实用技术》", 30 June 2005 *
戴正寿: "《解剖学标本制作技术》", 30 June 2008, 复旦大学出版社 *
李振海: "《教具的制作与使用》", 31 March 2000, 东北师范大学出版社 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20210129197A1 (en) * 2019-11-05 2021-05-06 Richard M. Hyslop Accelerated tissue dissolution
US11826803B2 (en) * 2019-11-05 2023-11-28 Fireless Cremation Company Accelerated tissue dissolution
CN112825847A (zh) * 2019-11-25 2021-05-25 石功鹏阳 透明标本及其制备方法
CN112825846A (zh) * 2019-11-25 2021-05-25 石功鹏阳 标本展示盒及标本展示方法
CN112825845A (zh) * 2019-11-25 2021-05-25 石功鹏阳 标本展示方法

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