CN110243647A - 一种无苯的脱蜡透明的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明“一种无苯的脱蜡透明的方法”，所述的特定碳氢化合物与表面活性剂、乙醇、庚烷混合组成新型的无苯脱蜡透明试剂进行脱蜡透明的方法，包括无苯脱蜡透明试剂及其制备、使用方法，上述试剂中包括如下体积分数的组份：特定碳氢化合物975‑999份，表面活性剂1‑5份，乙醇0‑10份，庚烷0‑10份，具有无色、无毒、不含重金属的特性，不易对人体造成危害，不仅能够达到良好的脱蜡透明效果，更有利于观察结果并确保其可靠性。
Description
技术领域：
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种新型不含苯的无色无毒的组织脱蜡透明试剂及制备、使用方法。
背景技术：
石蜡切片(Paraffin Section)是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法，石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。组织经石蜡包埋后制成蜡块，用切片机或手工制成薄的切片，需要将切片中的蜡脱去才能进行染色。石蜡切片需通过某种既能与乙醇相溶又能溶解石蜡的溶液，以使切片中的组织与石腊分离开来，此过程为脱蜡；在染色结束后，组织中的水分被溶剂取代，使得其折射指数接近组织蛋白的折射指数，便于显微镜观察，此过程为透明。
目前常规用二甲苯作为脱蜡透明剂，具有较好的脱蜡和透明作用，但是二甲苯具有如下不足：1、具强烈的刺激性气味，属于有毒类化学物质，美国政府工业卫生学家会议(ACGIH)将其归类为A4级；2、二甲苯对眼及上呼吸道有刺激作用，高浓度时对中枢系统有麻醉作用；3、皮肤接触二甲苯常发生皮肤干燥、皲裂、皮炎等；4、二甲苯容易使得组织收缩、硬化。
基于二甲苯上述不足，寻找二甲苯的替代物已经成为迫在眉睫解决的问题，目前已有部分二甲苯替代物用于组织的脱蜡和透明。发明专利“生物组织样本切片染色套液(申请号为2016103412591)”公开了苏木素助染液包括：表面活性剂和饱和柠檬酸溶液；苏木素染色液包括：苏木素、无水乙醇、纯化水、高碘酸、丙三醇、柠檬酸和硫酸铝钾；分化液包括：无水乙醇、纯化水和盐酸；蓝化液包括：纯化水和氢氧化钾水溶液；伊红染色液包括：水溶性伊红、纯化水、无水氯化钙和盐酸水溶液；切片脱蜡液包括D柠烯、甲基环己烷和表面活性，但采用组份过多且操作复杂，还可能会造成组织损坏。发明专利“无苯型环保组织或切片透明液(专利号为2011100237460)”公布了一种使用松节油和丙酮的透明液，但其无脱蜡作用，且丙酮属于易制毒化学品，具有强烈的刺激性气味和腐蚀性，对人体亦有害；发明专利“生物制片透明剂(专利号为911085718)”和“新型病理切片透明剂(申请号为2011100237460)”公布了以松节油作为透明剂，但前者专利权已失效，后者视为撤回，且二者均无脱蜡作用。发明专利“一种新型的病理组织透明脱蜡液及其制备方法(申请号201811340449)”公布了透明脱蜡液包括如下质量份数的组份：中长链饱和脂肪酸酯85-100份，丙二醇类醚0-25份，还包括植物精油0-1份，但透明不够彻底且价格较贵，还有异味。
发明内容：
为了解决上述技术的不足，本发明“一种无苯的脱蜡透明的方法”旨在提供一种不含苯类物质的无色无毒的组织脱蜡透明试剂及制备、使用方法，该方法不仅可以用于组织脱蜡，亦可同时用于组织透明，利用特定碳氢类化合物无色无味无毒的特性配制无苯脱蜡透明试剂，不仅能够达到良好的脱蜡和透明效果，更有利于观察结果并确保其可靠性。
本发明所采用的技术方案是：
一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于特定碳氢化合物与表面活性剂、乙醇、庚烷混合组成新型的无苯脱蜡透明试剂进行脱蜡透明的方法，包括无苯脱蜡透明试剂及制备、使用方法，上述试剂中包括如下体积分数的组份：特定碳氢化合物975-999份，表面活性剂1-5份，乙醇0-10份，庚烷0-10份，该试剂无色无毒同时兼有脱蜡和透明的作用。
一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于所述的特定碳氢化合物是指L和G型碳氢溶剂的一种或两种的混合物，具有无色、无味、无毒、不含重金属的特性。
其中优选的方案是，特定碳氢化合物采用G型碳氢溶剂。
一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于所述的表面活性剂是指曲拉通100、吐温20、吐温60和吐温80的一种或多种的混合物。
其中优选的方案是，表面活性剂采用曲拉通100和吐温20的混合物。
一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于所述的乙醇是指不低于分析纯级别的无水乙醇，所述的庚烷是指不低于分析纯级别的庚烷。
其中优选的方案是，乙醇和庚烷均采用GR级别。
一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于所述的制备方法，包括如下操作步骤：量取上述体积份的特定碳氢化合物、表面活性剂、乙醇和庚烷，依次混合，充分混匀，密闭保存，即为无苯脱蜡透明试剂。
其中优选的方案是，体积分数的组份：G型碳氢溶剂988-993份，表面活性剂2份，乙醇5份，庚烷0-5份。
一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于所述的使用方法，包括如下操作步骤：将石蜡组织完全浸没于上述无苯脱蜡透明试剂中脱蜡2-3次，每次2-10min，室温或加温至35-50℃，使组织内石腊溶解于该试剂中，即脱蜡过程；将石蜡组织完全浸没于上述无苯脱蜡透明试剂中或将该试剂滴至石蜡组织且覆盖完全，透明2-3次，每次2-10min，室温或加温至35-50℃，使组织透明，即透明过程。
一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于该方法用于动物、植物、细菌、真菌和培养细胞样本的脱蜡和透明处理。
一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于该方法用于组织石蜡切片染色、免疫组化染色的样本脱蜡和透明处理。
一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于该方法用于普通显微镜分析和电镜分析。
一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于该方法用于临床检测试剂和科研试剂。
本发明“一种无苯的脱蜡透明的方法”中的无苯脱蜡透明试剂的制备方法，包括如下步骤：量取特定碳氢化合物975-999份，表面活性剂1-5份，乙醇0-10份，庚烷0-10份，依次混合，充分混匀，50-300目过滤，密闭保存，即为无苯脱蜡透明试剂。
需要说明的是，在所述的即为无苯脱蜡透明试剂的制备过程中，各所述的试剂应分批依次加入。
本发明“一种无苯的脱蜡透明的方法”的使用方法，包括如下步骤(仅供参考)：
(1)脱蜡：将石蜡组织完全浸没于上述无苯脱蜡透明试剂中脱蜡2-3次，每次2-10min，室温或加温至35-50℃，使组织内石腊溶解于该试剂中，即脱蜡过程。
(2)将石蜡组织完全浸没于上述无苯组织脱蜡和透明试剂中或将该试剂滴至石蜡组织且覆盖完全，透明2-3次，每次2-10min，室温或加温至35-50℃，使组织透明，即透明过程。
进一步地，所述的一种无苯的脱蜡透明的方法以组织石蜡切片为例，优选步骤为：取石蜡切片置于配制好的无苯脱蜡透明试剂中脱蜡3次，中间加温至40℃，每次5min。
进一步地，所述的一种无苯的脱蜡透明的方法以组织石蜡切片为例，优选步骤为：取石蜡切片置于配制好的无苯脱蜡透明试剂中透明3次，中间加温至40℃，每次5min。
需要说明的是，采用所述的一种无苯的脱蜡透明的方法进行脱蜡和透明时，本领域技术人员可以根据脱蜡和透明情况及要求对脱蜡和透时间和温度进行适当调整，可用于类型有动物、植物、细菌、真菌和培养细胞样本等。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述组成的用量和配比可根据具体需要进行调整，从而制备出不同特点的无苯脱蜡透明试剂。
本发明“一种无苯的脱蜡透明的方法”与现有技术相比具有以下优点：
1、以特定碳氢化合物与表面活性剂、乙醇、庚烷混合组成新型的无苯脱蜡透明试剂进行脱蜡透明的方法，具有无色、无毒、不含重金属的特性，不易对人体造成危害，对人体和环境影响也极小。
2、配制好的无苯脱蜡透明试剂既能用于脱蜡又能用于透明，与二甲苯处脱蜡透明的结果基本一致，可替代二甲苯。
3、配制好的无苯脱蜡透明试剂无毒且挥发性低，无遗传、发育、生殖危害。
4、脱蜡完全，透明完全且层次分明，易于读片。
附图说明：
图1为本发明“一种无苯的脱蜡透明的方法”处理的组织石蜡切片HE染色肉眼示意图。其中图1A为实施例一以无苯脱蜡透明试剂进行脱蜡和透明的肉眼观察结果，图1B为实施例一以二甲苯进行脱蜡和透明的肉眼观察结果，图1C为实施例二以无苯脱蜡透明试剂进行脱蜡和透明的肉眼观察结果，图1D为实施例二以二甲苯进行脱蜡和透明的肉眼观察结果。
图2为本发明“一种无苯的脱蜡透明的方法”处理的组织石蜡切片HE染色显微镜示意图。其中图1A为实施例一以无苯脱蜡透明试剂进行脱蜡和透明的显微镜观察结果，图1B为实施例一以二甲苯进行脱蜡和透明的显微镜观察结果，图1C为实施例二以无苯脱蜡透明试剂进行脱蜡和透明的显微镜观察结果，图1D为实施例二以二甲苯进行脱蜡和透明的显微镜观察结果。
具体实施方式：
以下具体实施方式进一步阐明本发明“一种无苯的脱蜡透明的方法”的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、条件、步骤及应用所做的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例一
本发明“一种无苯的脱蜡透明的方法”，用于组织石蜡切片HE染色的脱蜡和透明，每1000ml无苯脱蜡透明试剂的组份为：G型碳氢溶剂993ml，表面活性剂2ml，乙醇5ml，庚烷0ml，共计1000ml。以下实施例均以相同处理时间、温度的二甲苯操作为对照。
用于组织石蜡切片的无苯脱蜡透明试剂的制备方法：量取G型碳氢溶剂993ml，表面活性剂2ml，乙醇5ml，依次混合，充分混匀，100目过滤，密闭保存，即为无苯脱蜡透明试剂。
取经上述步骤制得的用于组织石蜡切片的无苯脱蜡透明试剂，对石蜡切片进行脱蜡和透明操作：
1)取石蜡切片置于配制好的无苯脱蜡透明试剂中脱蜡3次，中间加温至40℃，每次5min。
2)取石蜡切片置于配制好的无苯脱蜡透明试剂中透明3次，中间加温至40℃，每次5min。
3)封片，肉眼(普通照相机)和光学显微镜下观察、拍照。结果见附图1。
实验结果显示，以组织石蜡切片HE染色时，在同等条件下，以实施例一的无苯脱蜡透明试剂进行与二甲苯对比，脱蜡和透明效果无明显差异，基本一致。
实施例二
本发明“一种无苯的脱蜡透明的方法”，用于组织石蜡切片HE染色的脱蜡和透明，每1000ml无苯脱蜡透明试剂的组份为：L型碳氢溶剂975ml，吐温20 5ml，无水乙醇10ml，庚烷10ml，共计1000ml。以下实施例均以相同处理时间、温度的二甲苯操作为对照。
用于组织石蜡切片的无苯脱蜡透明试剂的制备方法：量取L型碳氢溶剂975ml，吐温20 5ml，无水乙醇10ml，庚烷10ml，依次混合，充分混匀，200目过滤，密闭保存，即为无苯脱蜡透明试剂。
取经上述步骤制得的用于组织石蜡切片的无苯脱蜡透明试剂，对石蜡切片进行脱蜡和透明操作：
1)取石蜡切片置于配制好的无苯脱蜡透明试剂中脱蜡3次，室温操作，每次10min。
2)取石蜡切片置于配制好的无苯脱蜡透明试剂中透明3次，室温操作，每次10min。
3)封片，肉眼(普通照相机)和光学显微镜下观察、拍照。结果见附图2。
实验结果显示，以组织石蜡切片HE染色时，在同等条件下，以实施例二的无苯脱蜡透明试剂与二甲苯对比，脱蜡和透明效果无明显差异，基本一致。
对于本领域的技术人员来说，可以根据本发明的技术方案和构思，上述脱蜡和透明的时间与温度可根据具体需要进行调整，而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍应属于本发明创造的保护范围内。
Claims (10)
1.一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于，特定碳氢化合物与表面活性剂、乙醇、庚烷混合组成新型的无苯脱蜡透明试剂进行脱蜡透明的方法，包括无苯脱蜡透明试剂及制备、使用方法，上述试剂中包括如下体积分数的组份：特定碳氢化合物975-999份，表面活性剂1-5份，乙醇0-10份，庚烷0-10份，该试剂无色无毒同时兼有脱蜡和透明的作用。
2.根据权利要求1所述的一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于，所述的特定碳氢化合物是指L和G型碳氢溶剂的一种或两种的混合物，具有无色、无味、无毒、不含重金属的特性。
3.根据权利要求1所述的一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于，所述的表面活性剂是指曲拉通100、吐温20、吐温60和吐温80的一种或多种的混合物。
4.根据权利要求1所述的一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于，所述的乙醇是指不低于分析纯级别的无水乙醇，所述的庚烷是指不低于分析纯级别的庚烷。
5.根据权利要求1所述的一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下操作步骤：量取上述体积份的特定碳氢化合物、表面活性剂、乙醇和庚烷，依次混合，充分混匀，密闭保存，即为无苯脱蜡透明试剂。
6.根据权利要求1所述的一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于，所述的使用方法包括如下操作步骤：将石蜡组织完全浸没于上述无苯脱蜡透明试剂中脱蜡2-3次，每次2-10min，室温或加温至35-50℃，使组织内石腊溶解于该试剂中，即脱蜡过程；将石蜡组织完全浸没于上述无苯脱蜡透明试剂中或将该试剂滴至石蜡组织且覆盖完全，透明2-3次，每次2-10min，室温或加温至35-50℃，使组织透明，即透明过程。
7.根据权利要求1所述的一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于，该方法用于动物、植物、细菌、真菌和培养细胞样本的脱蜡和透明处理。
8.根据权利要求1所述的一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于，该方法用于组织石蜡切片染色、免疫组化染色的样本脱蜡和透明处理。
9.根据权利要求1所述的一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于，该方法用于普通显微镜分析和电镜分析。
10.根据权利要求1所述的一种无苯的脱蜡透明的方法，其特征在于，该方法用于临床检测试剂和科研试剂。
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