CN110235960B - 富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备方法，包括以下步骤：（1）将橄榄油与棕榈油酸油脂、ARA油脂和DHA藻油充分混合获得初混油脂；（2）将混合油脂与大豆卵磷脂、伯克霍尔德氏菌复合酶液混合均匀，在35‑45℃下反应2‑4小时，获得磷脂粗产物。（3）将磷脂粗产物在乙醇中溶解，混合后除去不溶物获得提取液A；向提取液A中滴加硫酸锌水溶液，反应结束后除去水相获得提取液B。（4）将提取液B超声孵育20‑30分钟，萃取，获得富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物。所述橄榄油衍生物增加了橄榄油的食用价值，提高了其抗氧化性能，解决了在不添加外源抗氧化剂前提下富含多不饱和脂肪酸复配油脂保存期限太短的问题，具有广阔的市场应用前景。

Description

富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备及应用
技术领域
本发明属于油脂化工领域，涉及一种橄榄油衍生物的制备及应用，尤其涉及一种多用途且富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备及应用。
背景技术
橄榄油是由新鲜的油橄榄果实直接冷榨而成的，不经加热和化学处理，保留了天然营养成分。橄榄油富含丰富的单不饱和脂肪酸——油酸，还有维生素A、维生素B、维生素D、维生素E、维生素K及抗氧化物等；被认为是迄今所发现的油脂中最适合人体营养的油脂。橄榄油的突出特点是含有大量的单不饱和脂肪酸。众所周知，单不饱和脂肪酸可以调整人体血浆中高、低密度脂蛋白胆固醇的比例，能增加人体内的高密度脂蛋白HDL(好胆固醇)的水平和降低低密度脂蛋白LDL(坏胆固醇)水平，从而能防止人体内胆同醇过量。然而，橄榄油油脂成分主要包括棕榈酸C16:0(7.5wt％-20wt％)，棕榈油酸C16:1(0.3wt％-3.5wt％)，硬脂酸C18:0(0.5wt％-5.0wt％)，油酸C18:1(55.0wt％-83.0wt％)，亚油酸C18:2(3.5wt％-21.0wt％)，亚麻酸C18:3(0.1wt％-1.0wt％)，由此可知，橄榄油中缺乏长链多不饱和脂肪酸组分，营养成分不尽均衡。
多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)具有重要的生理功能，目前人们重点关注的PUFA主要有两大类：ω-3型和ω-6型PUFAs。其中，二十二碳六烯酸(DHA)和花生四烯酸(ARA)分别是它们的代表，是人体自身不能直接从头合成又不可缺少的重要营养素。ω-6和ω-3PUFAs在哺乳动物细胞内不能相互转换，且是动植物细胞膜的重要组成成分，具有不同的生理功能。细胞膜多不饱和脂肪酸组成比例很大程度上由膳食决定，因此平衡膳食中ω-6/ω-3PUFAs具有非常重要的意义。
发明专利201310634890.7通过向橄榄油中添加甘油三酯型的DHA增加橄榄油中长链多不饱和脂肪酸的含量；然而，DHA的添加量低于5％，远远不能满足下游食品加工行业的需求。这是由于，长链多不饱和脂肪酸极易被氧化，大量添加长链多不饱和脂肪酸使其混合产品十分不易保存，必须额外添加抗氧化剂如TBHQ、抗坏血酸棕榈酸酯等，不但工艺繁琐，而且额外增加了成本，同时使用剂量有严格限制，在多不饱和脂肪酸含量较高时抗氧化效果欠佳。
发明专利申请201711252630.8通过将大豆、油菜籽分别与红花籽、亚麻籽、核桃籽混合粉碎，利用超临界的方法制备了ω-6/ω-3PUFAs比值为2-4的甘油三酯型调和油。发明专利申请200910010346.9公开了“一种脂肪酸比例均衡的营养调和油”，其中油脂按质量百分比，紫苏油和亚麻油占5-30％，两者之间以任意比混合，余量为葵花籽油、芝麻油和核桃油，根据确定的紫苏油和亚麻油中ω-6、ω-3多不饱和脂肪酸(PUFA)的含量，对葵花籽油、芝麻油和核桃油进行调配，使所述营养调和油的最终ω-6和ω-3多不饱和脂肪酸达到4-6:1的质量比。这些专利均尝试对ω-6/ω-3PUFAs比值进行控制，但最终结果均未达到1:1的最佳比例。
磷脂酰胆碱是一种具有乳化、渗透、湿润和抗氧化等独特功能的天然乳化剂。由于磷脂酰胆碱既亲脂又亲水，可以将体内的水分和油脂充分混合，避免水分大量流失而引起的皮肤粗糙老化；可将多余的脂肪化为较小的乳滴排出体外，帮助产妇或肥胖者尽快恢复体形；可将血液中的胆固醇和脂肪酸化为极细的颗粒，从血管中排出，升高了高密度脂蛋白，使血管恢复弹性，血流畅通，被誉为“血管清道夫”。因此，磷脂酰胆碱在医药、保健品、食品、日化、饲料、皮革等领域中都有广泛的用途。目前，通常使用蛋黄或大豆磷脂制备磷脂酰胆碱，不但制备工艺相对复杂、产率和纯度较低，而且产物中脂肪酸组成相对单一，通常缺乏不饱和脂肪酸。
发明内容
针对现有技术橄榄油利用方面存在的诸多问题，本发明提供了一种富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备方法。本发明制备的橄榄油衍生物不但增加了橄榄油的食用价值，而且提高了其抗氧化性能，从而解决了在不添加外源抗氧化剂的前提下富含多不饱和脂肪酸复配油脂的保存期限太短的问题，为产品的市场化提供了技术支持，具有巨大的经济前景。
本发明的技术方案：
富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备方法，主要包括以下步骤：
(1)将橄榄油与棕榈油酸油脂、ARA油脂和DHA藻油充分混合获得初混油脂，四种油脂混合的比例为(按重量计)：橄榄油50-70份，棕榈油酸油脂25-35份，ARA油脂20-30份，DHA藻油20-30份。橄榄油、ARA油脂和DHA藻油均为购买的商业化产品。棕榈油酸油脂从魏氏藻(Vischeria)中提取制备。
(2)将混合油脂与大豆卵磷脂、伯克霍尔德氏菌复合酶液按重量比3-5:1:8-10的比例混合均匀，氮气保护、在35-45℃条件下反应2-4小时，获得富含功能性脂肪酸的磷脂粗产物。所述伯克霍尔德氏菌复合酶液中脂肪酶与磷脂酶的活力比为1:7-10。
(3)将步骤(2)获得的磷脂粗产物在无水乙醇中溶解，混合均匀后过滤除去不溶物获得提取液A；向提取液A中在氮气保护下以每分钟60-120滴的速率滴加浓度为50-70％的硫酸锌水溶液，控制pH为6.0-7.5，反应时间为40-60分钟。反应结束后除去水相获得提取液B。
(4)将提取液B超声孵育20-30分钟，随后进行萃取。萃取温度为40-60℃，萃取压力为0.8-1.5Mpa，萃取时间60-90分钟，并使用无水乙醇作为溶剂萃取2-4次。
(5)萃取获得的产物即为富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物。其中富含均衡不饱和脂肪酸的磷脂酰胆碱含量可达90％以上，其总脂肪酸中ω-6/ω-3/ω-7脂肪酸的比值约为1:1:1。
其中，棕榈油酸油脂从魏氏藻(Vischeria)中提取制备的具体方法为：魏氏藻培养基包括葡萄糖5-30g/L，酵母提取物5-10g/L，玉米浆5-10g/L，磷酸二氢钾0.5-5g/L，硫酸镁0.5-3g/L，柠檬酸钠0.5-3g/L。培养温度为20-28℃，通入1％的CO2搅拌培养，培养周期为10天。然后按湿藻重量的1-5％加入蜗牛酶，40-50℃反应4-6小时，将获得的酶解液使用三相离心机进行分离后，上层油相即为棕榈油酸油脂。所述离心力为10000-11000g，所使用分离环的孔径为0.5-1mm。
其中，伯克霍尔德氏菌复合酶液由伯克霍尔德氏菌发酵获得。发酵培养基成分为：质量体积比为2.0-5.0％的葡萄糖、质量体积比为2.0-5.0％的酵母提取物、质量体积比为0.4-0.8％的KH2PO4、质量体积比为0.3-0.5％的MgSO4，维生素B12 20-50mg/L和生物素30-50mg/L。具体培养条件为：培养温度为20-28℃，通气比2-2.5VVM，培养时间48-72小时，离心收集，获得的上清液利用低温真空浓缩装置在30-50℃下浓缩至原体积的10-15％，即获得伯克霍尔德氏菌复合酶液。所述低温真空浓缩的温度为30-50℃，真空度为10-100Pa。
其中，在步骤(2)和步骤(3)所述的氮气是高纯氮气。
富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物，其总脂肪酸的组成比例为：豆蔻酸(C14:0)2-4％，棕榈酸(C16:0)13-18％，棕榈油酸(C16:1，n-7)8-15％，硬脂酸(C18:0)4-6％，油酸(C18:1)25-40％，亚油酸(C18:2)3-10％，亚麻酸(C18:3)0.5-1％，花生四烯酸(ARA，C20:4，ω-6)10-15％，二十碳五烯酸(EPA，C20:5，ω-3)1-2％，二十二碳五烯酸(DPA，C22:5，ω-6)1-5％，二十二碳六烯酸(DHA，C22:6，ω-3)9-18％。总脂肪酸中ω-6/ω-3/ω-7的比值约为1:1:1。
富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的应用，可应用于食品加工与护肤品产品制备。
所述护肤品制备的具体操作为：将所述橄榄油衍生物、甘油、水按1:1:0.5的重量比混合均匀后，调节pH为6.8-7.1，即得可外敷的护肤品产品。
本发明的有益效果：
(1)本发明首先向橄榄油中添加棕榈油酸、ARA、DHA等高营养价值脂肪酸，然后利用生物酶将甘油三酯型脂肪酸转化为磷脂酰胆碱形式的脂肪酸形成新型的橄榄油衍生物；从而解决在不添加抗氧化剂的前提下含不饱和脂肪酸油脂保存期太短的问题。
(2)本发明所制备的橄榄油衍生物不但提高了橄榄油中功能性不饱和脂肪酸的含量，而且实现了其中ω-3、ω-6、ω-7三种不饱和脂肪酸的比值接近1:1:1，符合人体对于这些脂肪酸的需求，营养均衡，从而满足了人体对功能性不饱和脂肪酸的日常需求，对于提高将来人口身体素质具有重要的促进作用。
(3)本发明所制备的橄榄油衍生物具备了磷脂酰胆碱的特性，改善了生物吸收效率，不但可以用于食品加工，还可以通过皮肤吸收，从而可以应用于化妆品的制备，这将产生巨大的经济效益。
附图说明
图1为本发明所述制备方法的流程示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明。
实施例1：富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备
1)将四种油脂按重量比例混合：橄榄油50份，棕榈油酸油脂25份，ARA油脂20份，DHA藻油20份混合均匀获得初混油脂。
2)将混合油脂与大豆卵磷脂、伯克霍尔德氏菌复合酶液按重量比3:1:8的比例混合均匀，在35℃条件下反应4小时，获得富含功能性脂肪酸的磷脂粗产物。使用纯度为99.999％的高纯氮气作为保护气体。
3)将磷脂粗产物在无水乙醇中溶解，混合均匀后过滤除去不溶物获得提取液A，向提取液A中以每分钟60滴的速率滴加浓度为70％的硫酸锌水溶液，控制pH为6.0，反应时间为40分钟。反应结束后除去水相获得提取液B。使用纯度为99.999％的高纯氮气作为保护气体。
4)将提取液B超声孵育20分钟，随后进行萃取。萃取温度为60℃，萃取压力为1.5Mpa，萃取时间60分钟，并使用无水乙醇作为溶剂萃取2次。所得产物即为富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物；其中富含均衡不饱和脂肪酸的磷脂酰胆碱含量达91.8％。
其中，棕榈油酸油脂从魏氏藻(Vischeria)中提取制备。培养基包括葡萄糖5g/L，酵母提取物10g/L，玉米浆10g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁3g/L，柠檬酸钠3g/L。培养温度为20℃，通入1％的CO2搅拌培养，培养周期为10天。然后按湿藻重量的1％加入蜗牛酶，40℃反应6小时，将获得的酶解液使用三相离心机进行分离，离心力应控制在10000g，所使用分离环的孔径为0.5mm。分离获得上层油相即为棕榈油酸油脂。
其中，伯克霍尔德氏菌复合酶液的制备。发酵培养基成分为：质量体积比为2.0％的葡萄糖、质量体积比为5.0％的酵母提取物、质量体积比为0.4％的KH2PO4、质量体积比为0.3％的MgSO4，维生素B12 50mg/L和生物素30mg/L；具体培养条件为：培养温度为20℃，通气比2VVM，培养时间72小时，离心收集，获得的上清液利用低温真空浓缩装置在30℃，真空度为100帕斯卡，浓缩至原体积的15％，即获得伯克霍尔德氏菌复合酶液。此复合酶液中脂肪酶与磷脂酶的活力比为1:7。
表1.实施例1制备的衍生物中总脂肪酸的组成比例
脂肪酸 含量(％)
豆蔻酸(C14:0) 2.91
棕榈酸(C16:0) 16.20
棕榈油酸(C16:1，ω-7) 10.83
硬脂酸(C18:0) 3.64
油酸(C18:1) 35.54
亚油酸(C18:2) 3.88
亚麻酸(C18:3) 0.69
花生四烯酸(ARA，C20:4，ω-6) 10.02
二十碳五烯酸(EPA，C20:5，ω-3) 1.58
二十二碳五烯酸(DPA，C22:5，ω-6) 1.92
二十二碳六烯酸(DHA，C22:6，ω-3) 9.49
由表1可知，总脂肪酸中ω-6/ω-3/ω-7的比值为1.08:1:0.98。
实施例2：富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备
1)将四种油脂按重量比例混合：橄榄油70份，棕榈油酸油脂35份，ARA油脂30份，DHA藻油30份混合均匀获得初混油脂。
2)将混合油脂与大豆卵磷脂、伯克霍尔德氏菌复合酶液按重量比5:1:10的比例混合均匀，在45℃条件下反应2小时，获得富含功能性脂肪酸的磷脂粗产物。使用纯度为99.999％的高纯氮气作为保护气体。
3)将磷脂粗产物在无水乙醇中溶解，混合均匀后过滤除去不溶物获得提取液A，向提取液A中以每分钟120滴的速率滴加50％的硫酸锌水溶液，控制pH为7.5，反应时间为60分钟。反应结束后除去水相获得提取液B。使用纯度为99.999％的高纯氮气作为保护气体。
4)将提取液B超声孵育30分钟，随后进行萃取。萃取温度为40℃，萃取压力为0.8Mpa，萃取时间90分钟，并使用无水乙醇作为溶剂萃取4次。所得产物即为富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物；其中富含均衡不饱和脂肪酸的磷脂酰胆碱含量达95.6％。
其中，棕榈油酸油脂经魏氏藻(Vischeria)中提取制备：培养基包括葡萄糖30g/L，酵母提取物5g/L，玉米浆5g/L，磷酸二氢钾5g/L，硫酸镁0.5g/L，柠檬酸钠0.5g/L。培养温度为28℃，通入1％的CO2搅拌培养，培养周期为10天。按湿藻重量的5％加入蜗牛酶，50℃反应4小时，将获得的酶解液使用三相离心机进行分离，离心力应控制在11000g，所使用分离环的孔径为1mm。分离获得上层油相即为棕榈油酸油脂。
伯克霍尔德氏菌复合酶液的制备。发酵培养基成分为：质量体积比为5.0％的葡萄糖、质量体积比为2.0％的酵母提取物、质量体积比为0.8％的KH2PO4、质量体积比为0.5％的MgSO4，维生素B12 20mg/L和生物素50mg/L；具体培养条件为：培养温度为28℃，通气比2.5VVM，培养时间48小时，离心收集，获得的上清液利用低温真空浓缩装置在50℃，真空度为10帕斯卡，浓缩至原体积的10％，即获得伯克霍尔德氏菌复合酶液。此复合酶液中脂肪酶与磷脂酶的活力比为1:10。
表2.实施例2制备的衍生物中总脂肪酸的组成比例
脂肪酸 含量(％)
豆蔻酸(C14:0) 2.88
棕榈酸(C16:0) 16.31
棕榈油酸(C16:1，ω-7) 10.58
硬脂酸(C18:0) 3.73
油酸(C18:1) 34.74
亚油酸(C18:2) 3.84
亚麻酸(C18:3) 0.72
花生四烯酸(ARA，C20:4，ω-6) 10.38
二十碳五烯酸(EPA，C20:5，ω-3) 1.55
二十二碳五烯酸(DPA，C22:5，ω-6) 2.00
二十二碳六烯酸(DHA，C22:6，ω-3) 9.92
由表2可知，总脂肪酸中ω-6/ω-3/ω-7的比值为1.08:1:0.93。
实施例3：富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备
1)将四种油脂按重量比例混合：橄榄油60份，棕榈油酸油脂30份，ARA油脂25份，DHA藻油25份混合均匀获得初混油脂。
2)将混合油脂与大豆卵磷脂、伯克霍尔德氏菌复合酶液按重量比4:1:9的比例混合均匀，在40℃条件下反应3小时，获得富含功能性脂肪酸的磷脂粗产物。使用纯度为99.999％的高纯氮气作为保护气体。
3)将磷脂粗产物在无水乙醇中溶解，混合均匀后过滤除去不溶物获得提取液A，向提取液A中以每分钟90滴的速率滴加60％的硫酸锌水溶液，控制pH为7.0，反应时间为50分钟。反应结束后除去水相获得提取液B。使用纯度为99.999％的高纯氮气作为保护气体。
4)将提取液B超声孵育25分钟，随后进行萃取。萃取温度为50℃，萃取压力为1.0Mpa，萃取时间80分钟，并使用无水乙醇作为溶剂萃取3次。所得产物即为富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物；其中富含均衡不饱和脂肪酸的磷脂酰胆碱含量达92.5％。
其中，棕榈油酸油脂经魏氏藻(Vischeria)中提取制备：培养基包括葡萄糖20g/L，酵母提取物8g/L，玉米浆8g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁2g/L，柠檬酸钠2g/L。培养温度为25℃，通入1％的CO2搅拌培养，培养周期为10天。按湿藻重量的3％加入蜗牛酶，45℃反应5小时，将获得的酶解液使用三相离心机进行分离，离心力应控制在10000g，所使用分离环的孔径为0.7mm。分离获得上层油相即为棕榈油酸油脂。
伯克霍尔德氏菌复合酶液的制备。发酵培养基成分为：质量体积比为4.0％的葡萄糖、质量体积比为3.0％的酵母提取物、质量体积比为0.6％的KH2PO4、质量体积比为0.4％的MgSO4，维生素B12 40mg/L和生物素40mg/L；具体培养条件为：培养温度为25℃，通气比2.2VVM，培养时间60小时，离心收集，获得的上清液利用低温真空浓缩装置在40℃，真空度为50帕斯卡，浓缩至原体积的13％，即获得伯克霍尔德氏菌复合酶液。此复合酶液中脂肪酶与磷脂酶的活力比为1:8。
表3.实施例3制备的衍生物中总脂肪酸的组成比例
脂肪酸 含量(％)
豆蔻酸(C14:0) 2.89
棕榈酸(C16:0) 16.28
棕榈油酸(C16:1，ω-7) 10.68
硬脂酸(C18:0) 3.70
油酸(C18:1) 35.11
亚油酸(C18:2) 3.86
亚麻酸(C18:3) 0.71
花生四烯酸(ARA，C20:4，ω-6) 10.25
二十碳五烯酸(EPA，C20:5，ω-3) 1.56
二十二碳五烯酸(DPA，C22:5，ω-6) 1.97
二十二碳六烯酸(DHA，C22:6，ω-3) 9.76
由表3可知，总脂肪酸中ω-6/ω-3/ω-7的比值为1.08:1:0.94。
实施例4：富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备
1)将四种油脂按重量比例混合：橄榄油55份，棕榈油酸油脂25份，ARA油脂30份，DHA藻油30份混合均匀获得初混油脂。
2)将混合油脂与大豆卵磷脂、伯克霍尔德氏菌复合酶液按重量比3:1:10的比例混合均匀，在40℃条件下反应4小时，获得富含功能性脂肪酸的磷脂粗产物。使用纯度为99.999％的高纯氮气作为保护气体。
3)将磷脂粗产物在无水乙醇中溶解，混合均匀后过滤除去不溶物获得提取液A，向提取液A中以每分钟120滴的速率滴加70％的硫酸锌水溶液，控制pH为6.5，反应时间为45分钟。反应结束后除去水相获得提取液B。使用纯度为99.999％的高纯氮气作为保护气体。
4)将提取液B超声孵育27分钟，随后进行萃取。萃取温度为55℃，萃取压力为1.4Mpa，萃取时间80分钟，并使用无水乙醇作为溶剂萃取4次。所得产物即为富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物；其中富含均衡不饱和脂肪酸的磷脂酰胆碱含量达93.8％。
其中，棕榈油酸油脂经魏氏藻(Vischeria)中提取制备：培养基包括葡萄糖10g/L，酵母提取物6g/L，玉米浆6g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁1g/L，柠檬酸钠1g/L。培养温度为23℃，通入1％的CO2搅拌培养，培养周期为10天。按湿藻重量的4％加入蜗牛酶，48℃反应6小时，将获得的酶解液使用三相离心机进行分离，离心力应控制在11000g，所使用分离环的孔径为1mm。分离获得上层油相即为棕榈油酸油脂。
伯克霍尔德氏菌复合酶液的制备。发酵培养基成分为：质量体积比为3.0％的葡萄糖、质量体积比为2.5％的酵母提取物、质量体积比为0.7％的KH2PO4、质量体积比为0.3％的MgSO4，维生素B12 30mg/L和生物素50mg/L；具体培养条件为：培养温度为23℃，通气比2.4VVM，培养时间70小时，离心收集，获得的上清液利用低温真空浓缩装置在45℃，真空度为20帕斯卡，浓缩至原体积的11％，即获得伯克霍尔德氏菌复合酶液。此复合酶液中脂肪酶与磷脂酶的活力比为1:7。
表4.实施例4制备的衍生物中总脂肪酸的组成比例
Figure GDA0003466037340000081
Figure GDA0003466037340000091
由表4可知，总脂肪酸中ω-6/ω-3/ω-7的比值为1.08:1:0.69。
实施例5：橄榄油衍生物的抗氧化活性检测
测试样品：①压榨橄榄油(未加抗氧化剂，对照组)；②压榨橄榄油(加抗氧化剂TBHQ，0.2g/Kg)；③压榨橄榄油(加抗氧化剂抗坏血酸棕榈酸酯，0.2g/Kg)④-⑦依次为实施例1-4制备的本发明橄榄油衍生物(未加其他抗氧化剂)
分别检测各个样品0天、20天、40天、60天、80天、100天和200天的过氧化值，过氧化值检测方法为GB 5009.227-2016。
表5.实施例1-4制备的橄榄油衍生物的抗氧化活性检测
Figure GDA0003466037340000092
由表5可知，压榨橄榄油(未加抗氧化剂，对照组)的过氧化值在200天时高达0.954；添加TBHQ的橄榄油的过氧化值在200天时降至0.084；添加抗坏血酸棕榈酸酯的橄榄油的过氧化值在200天时降至0.204。而本发明实施例1-4制备的复配橄榄油的过氧化值在200天时为0.164-0.174。
这说明，将复配橄榄油进行磷脂酰胆碱改性后，显著提高了橄榄油衍生物的抗氧化能力；且其过氧化值与添加TBHQ、抗坏血酸棕榈酸酯等抗氧化剂的橄榄油相当，显著低于未加抗氧化剂的对照组。说明本发明所述的方法有效实现了富含多不饱和脂肪酸复配油脂在不添加外源性抗氧化剂前提下的长期保存。
实施例6：橄榄油衍生物在化妆品(护肤品)方面的应用
制备方法：(1)配方I将实施例1制备的橄榄油衍生物、甘油、水按1:1:0.5比例混合均匀后，使用pH调节剂调节制剂pH＝6.8；(2)配方II将实施例1制备的橄榄油衍生物、甘油、水按1:1:0.5比例混合均匀后，使用pH调节剂调节制剂pH＝7.1。
试验人群：20-50岁的女性和男性(每个配方分为3组，每组20人)。
试验方法：使用上述实施例中制备的橄榄油衍生物，每日1次，试用一疗程3个月。试用期间均不使用其它任何同类产品。
疗效评价：(1)提高皮肤光洁度：有效、一般、无效；(2)皮肤含水量、保湿度。
试验结果一：皮肤光洁度
表6.使用配方I一疗程后的结果
试用者/人 有效/人 一般/人 无效/人 有效率/％
组1(20-30岁男女) 20 17 3 0 85
组2(31-40岁男女) 20 18 2 0 90
组3(41-50岁男女) 20 20 0 0 100
总体 60 55 5 0 92
表7.使用配方II一疗程后的结果
试用者/人 有效/人 一般/人 无效/人 有效率/％
组1(20-30岁男女) 20 18 2 0 90
组2(31-40岁男女) 20 19 1 0 95
组3(41-50岁男女) 20 20 0 0 100
总体 60 57 3 0 95
试验结果二：皮肤含水量和保湿度(皮肤保湿性)
化妆品补水效果的评价标准是表皮细胞的含水量。而影响皮肤含水量的因素包括排汗、化妆品特性等理化因素。我们任选10名上述测试中测试者，要求他们当天清晨洁肤后再不进行洁肤和补水等护肤工作，也不参加排汗运动，然后测试他们当天10:00、13:00、16:00这三个时间的皮肤含水量，统计其平均值，来分析使用一个疗程后皮肤的保湿性。
根据皮肤含水量的评价标准，含水量在40％-50％范围内的皮肤是营养良好皮肤。
表8.皮肤含水量评价标准
Figure GDA0003466037340000102
采用皮肤湿度测试美容仪为测试仪器对受试者皮肤含水率进行测试。测试结果详见表9。
表9.使用配方I或II一疗程前、后的皮肤含水量
Figure GDA0003466037340000101
Figure GDA0003466037340000111
由表9可知，与使用前相比，所有受试者的皮肤均得到改善，含水量均为40-50％，即均达到了营养良好皮肤的状态。其中，对干性皮肤和，使用后皮肤含水量增加，表现出明显的补水保湿效果；对油性皮肤，使用后皮肤含水量降低，起到了调节皮肤湿度的作用；对混合性皮肤，使用后含水量也略有增加。
皮肤刺激性实验：本发明的橄榄油衍生物对大鼠皮肤的刺激性试验。试验分为皮肤完好组和皮肤破损组，每组包含大鼠16只(每种配方各测试8只)。
表10.皮肤刺激性试验结果
组别 动物数(只) 皮肤刺激性分值 刺激性评价
皮肤完好组 16 0 无刺激性
皮肤破损组 16 0 无刺激性
皮肤过敏性实验：
表11.本发明制备的橄榄油衍生物对大鼠皮肤过敏反应评价
Figure GDA0003466037340000112
综上可知，采用本发明制备的橄榄油衍生物，按照配方进一步得到的化妆品，不但具有良好的改善皮肤状态的效果，而且无刺激性，无致敏性，安全可靠。同时，由于制备简单，也在很大程度上降低了生产成本，为将来的产业化生产奠定了基础。
实施例7：橄榄油衍生物在食品方面的应用
采用实施例1制备的橄榄油衍生物制备糖果。糖果包含下述重量份的组分：橄榄油衍生物，21.6份；维生素A，0.6份；维生素B，0.6份；维生素E，0.6份；木糖醇，68.6份；新癸酸甘油酯，4份；白蜂蜡，3.5份；三氯蔗糖0.5份。将木糖醇加水溶解并加热至50℃，其它组份依次加入到木糖出水溶液中溶解并搅拌10分钟使其混合均匀，加热至100℃熬煮5分钟，形成溶胶。将热熔胶倒入预制的造型模具中，冷却，10℃，30％湿度下成型，10℃，20％湿度下干燥。最终获得富含橄榄油衍生物的糖果。
此糖果富含多种功能性磷脂型不饱和脂肪酸，易于吸收且有较高的营养价值，同时避免了单独食用不饱和脂肪酸带有的不良风味。
实施例8：此橄榄油衍生物在食品方面的应用
采用实施例1制备的橄榄油衍生物制备小麦面包。根据典型的行业加工技术，使用“发酵和面团”方法，按照下述的逐步过程来制备小麦面包。
表12.制备小麦面包的成分列表
Figure GDA0003466037340000121
根据以下步骤制备小麦面包：
(1)制备发酵面团：将发酵面团成分在25℃条件下充分混合10分钟，然后在35℃、85％的相对湿度(RH)下发酵3小时。
(2)制备生面团：混合生面团成分并搅拌均匀，随后加入前述制备的发酵面团并再次混合均匀。静置混合物10分钟，将此生面团分成500-600g的圆块，在43℃、90％RH下发面1小时，最后将生面团块在220℃的烘箱中烘焙20分钟。
结果得到的小麦面包保留当前市场上的典型小麦面包产品的味道和口感，但是富含多种功能性磷脂型不饱和脂肪酸。
综上所述，本发明所制备的橄榄油衍生物，首先解决在不添加抗氧化剂的前提下含不饱和脂肪酸油脂保存期太短的问题，这对于产品的市场化具有非常重要的意义。其次，满足了人体对功能性不饱和脂肪酸的日常需求，对于提高将来人口身体素质具有重要的促进作用。最后，本发明所制备的橄榄油衍生物可以应用于化妆品和相关食品的制备，在市上对于“绿色环保”的需求日益增大的大环境下，这必将带来巨大的经济效益。

Claims (7)

1.富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）按重量份数计，将50-70份橄榄油、25-35份棕榈油酸油脂、20-30份花生四烯酸油脂和20-30份DHA藻油混合，得到初混油脂；所述的棕榈油酸油脂从魏氏藻中提取制备，魏氏藻培养基具体包括：葡萄糖5-30g/L，酵母提取物5-10g/L，玉米浆5-10g/L，磷酸二氢钾0.5-5g/L，硫酸镁0.5-3g/L，柠檬酸钠0.5-3g/L；具体培养条件为：培养温度为20-28℃，通入1%的CO2搅拌培养，培养周期为10天；然后按湿藻重量的1-5%加入蜗牛酶，在40-50℃反应4-6小时，将获得的酶解液进行油水分离后，上层油相即为棕榈油酸油脂；
（2）将初混油脂与大豆卵磷脂、伯克霍尔德氏菌复合酶液按3-5:1:8-10的重量比混合均匀，在35-45℃条件下反应2-4小时，得到富含功能性脂肪酸的磷脂粗产物；
（3）将步骤（2）得到的磷脂粗产物在无水乙醇中溶解，混合均匀、过滤，得到提取液A，向提取液A中滴加浓度为50-70%的硫酸锌水溶液，控制pH为6.0-7.5，反应40-60分钟；反应结束后，除去水相，得到提取液B；
（4）将提取液B孵育20-30分钟，随后进行萃取；萃取温度为40-60℃，萃取时间60-90分钟，萃取溶剂为无水乙醇；萃取2-4次，得到的产物即为富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物。
2.根据权利要求1所述的富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备方法，其特征在于：步骤（3）滴加硫酸锌水溶液的速率为每分钟60-120滴；所述步骤（2）和步骤（3）中均使用纯度为99.999%以上的高纯氮气作为保护气体。
3.根据权利要求2所述的富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述的伯克霍尔德氏菌复合酶液由伯克霍尔德氏菌发酵获得；发酵培养基成分为：质量体积比为2.0-5.0％的葡萄糖、质量体积比为2.0-5.0％的酵母提取物、质量体积比为0.4-0.8％的KH2PO4、质量体积比为0.3-0.5％的MgSO4，维生素B12 20-50 mg/L和生物素30-50 mg/L；具体培养条件为：培养温度为20-28℃，通气比2-2.5VVM，培养时间48-72小时，离心收集上清液，浓缩至原体积的10-15%，即得到伯克霍尔德氏菌复合酶液。
4.根据权利要求3所述的富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的制备方法，其特征在于：所述浓缩具体操作为：利用低温真空浓缩装置浓缩伯克霍尔德氏菌发酵上清液，浓缩温度控制在30-50℃，真空度控制在10-100帕斯卡。
5.如权利要求1-4中任意一项所述方法制备的富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物，其特征在于：所述衍生物中富含均衡不饱和脂肪酸的磷脂酰胆碱含量达90%以上，总脂肪酸中ω-6/ω-3/ω-7的比值约为1:1:1。
6.如权利要求5所述的富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的应用，其特征在于：将其应用于食品加工或制备护肤品。
7.根据权利要求6所述的富含均衡不饱和脂肪酸的橄榄油衍生物的应用，其特征在于：将其应用在制备护肤品，具体操作为：将橄榄油衍生物、甘油、水按1:1:0.5的重量比混合均匀，调节pH为6.8-7.1，即得可外敷的护肤品产品。
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