CN110234359A

CN110234359A - 包含染料的固体口服组合物

Info

Publication number: CN110234359A
Application number: CN201780084985.2A
Authority: CN
Inventors: 卢吉·摩洛
Original assignee: Cosmo Technologies Ltd
Current assignee: Cosmo Technologies Ltd
Priority date: 2016-11-28
Filing date: 2017-11-28
Publication date: 2019-09-13
Also published as: BR112019010691A2; MX2019006216A; RU2019118459A; EP3544638A1; US20200061212A1; US20180147301A1; JP2019535794A; IL266859A; KR20190090835A; WO2018096161A1; AU2017364274A1; RU2019118459A3; CA3043451A1

Abstract

本发明涉及用于改进结肠中的病理检测的方法和标记结肠中的粘膜病变的方法。

Description

包含染料的固体口服组合物

背景

内窥镜检查是用于诊断胃肠道的炎性、溃疡性和肿瘤病理的极其重要的诊断技术。

实际上，内窥镜检查允许从腔内部观察覆盖胃肠腔的粘膜的保持和发展的状态，以及其表面喷洒，变形和/或肿瘤形成(neoformation)和/或溃疡的存在。

越来越强大和精密的内窥镜探头已经大幅改进了这项技术。所使用的材料的进展也已经改进了照明技术和分辨能力方面的性能。

近来，已经有常规诊断-治疗方面涉及图像放大和活体染料(vital dye)的改进，用于局部显现能够增强常规技术的分辨率诊断能力的对比色。在诊断性内窥镜检查程序中使用染料被描述为“色素内窥镜检查(chromoendoscopy)”，特别可用于识别显示退行性特征的可疑区域。

染色的使用通常在内窥镜分析的第二部分、在收回内窥镜探头步骤期间以及在准确清洁待被检查的粘膜道之后采用。目前，通过使用直接插到内窥镜探头工作通道中的导管或毛细管喷洒特定体积的包含染料的溶液，将染料涂布到粘膜。

染料在细胞表面上的扩散或被活细胞吸收的程度明显地区分具有正常存活力的细胞与处于高级复制阶段(advanced replication stage)的那些细胞诸如肿瘤细胞。

通常使用的染料主要但不仅仅是以下：亚甲基蓝、刚果红、胭脂红靛蓝、和/或甲苯胺蓝。

亚甲基蓝和甲苯胺蓝通过全部肠粘膜均匀吸收，但是该吸收在炎性环境中，特别是当炎症(phlogosis)，即炎症(inflammation)恶化时减少。由于这种特性，这两种染料还可用于确定炎性过程是否缓解，并且还可用于区分假息肉和真息肉。实际上，发炎或恶性/恶变前结肠上皮显示出减少的细胞质和在数量上减少的杯状细胞或不存在杯状细胞。与当结肠粘膜不受病理过程影响时更均匀的染色模式相比，这些改变造成亚甲基蓝的摄取减少，以及局灶性浅蓝色或粉色(未染色的)或不均匀染色的(斑点的)粘膜的内窥镜检查表现。与这个概念不同，胭脂红靛蓝不被细胞吸收，而是作为对比剂(contrast agent)起作用，增加粘膜结构的可视性并增强正常和异常结肠模式的细节。因此，胭脂红靛蓝在长期炎性形式中得到应用，并且可以用于突出可能包含难以用不使用造影色的常规白光内窥镜检查来检测的肿瘤形式的平坦病变。

在染色程序中，将观察到，由于涉及涂布染料的挑战，染料的使用出现数个难以解决的实际问题。首先且最重要的，进行内窥镜检查的机构的药房应当能够制备具有通常从0.1％至1％的范围的染料浓度的溶液；然后染料应当被均匀地分配(使用专用的喷洒导管)以均匀地覆盖评估的受试粘膜表面。

此外，在数分钟后，过量的喷洒的染料将通过洗涤和抽吸操作来移除。在结肠镜检查(colonoscopy)期间，在每次重复染色喷洒过程后，去除过量染料需要另外的时间。因此，该过程对护士和医师两者都是费时的，并且使内窥镜检查程序的时间表的效率难以最大化。该程序足够罕见，从而有依赖操作者的倾向，需要专门的学习曲线来获得恰当的专业水平，以能够评估获得的特定染色模式及其意义。

对同时存在这些精确条件的要求导致了执行色素内窥镜检查程序的困难。这些困难使得该程序仅在少数专门从事胃肠病学的医院和疗养院的内窥镜检查单位进行。

此外，还造成了其他问题。在粘膜壁上常规局部喷洒溶液可能无法显示潜伏的但仍然太小而无法检测的形式，并且可能无法显示消化系统的退行性过程。

而且，局部喷溶液可能造成染料的执行时间(performance time)短。特别地，喷洒染料和观察之间的时间通常仅为数秒或数分钟，已知该时间段对于允许染料的一致吸收太短而无法提供良好的对比显色以及实现良好的染色效力。这些问题可能使内窥镜医师难以进行干预以获得良好的检测和评估，如例如在活组织检查中。

此外，进行该程序的每个内窥镜医师的经验有一定的主观性，在执行内窥镜检查和相关诊断评估中产生另外的问题。作为一个实际困难，由操作者的经验和方便性造成的这样的主观性可能不期望地导致结果的巨大可变性。并且内窥镜医师的经验起重要作用：当根据目前的染色内窥镜检查喷洒染料时，与经验更少的内窥镜医师相比，经验更丰富的内窥镜医师可能发现可疑区域，进一步加剧了测试结果的主观性。

测试结果的显著可变性还可以由所使用的设备造成，以及由特定患者对诊断评估实践的可接受性导致。

因此，产生了提供进一步改进在诊断性内窥镜检查中染料的使用的简易性及安全性的需要。为了改进在评估处理区域上的效果，希望改进施用的手段(means)以提供均匀且完全的染料分布。

并且如从上文将明显的，希望获得将增加内窥镜检查评估的客观性的改进，以允许改进的诊断评估。

特别地，在结肠内窥镜检查(结肠镜检查)的情况中，仍然存在对提供改进的粘膜染色和改善诊断性内窥镜检查评估的效力的需要。

发明概述

已经令人惊讶地发现，在内窥镜检查之前根据定义的时间表口服施用的包含至少一种染料和至少一种生理上可接受的赋形剂的片剂形式的特定固体组合物可以提供改进的粘膜染色，并且可以确保染料和结肠粘膜之间的适当的相互作用，获得病变的标记，因此区分病变和周围的健康粘膜。

在一些实施方案中，提供了本文公开的任何方法，其中固体组合物被施用至人类作为对经历结肠镜检查的人类的腺瘤和上皮癌(carcinoma)的检测和可视化的帮助(aid)。在本文描述的任何实施方案中，术语“肠清洁溶液”是指人类服用的任何水性制剂或溶液，包括普通自来水、或瓶装水、或包含本文描述的其他化合物的水性溶液，包括容积性泻药(osmotic laxative)、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、聚乙二醇、氯化钠、碳酸氢钠、氯化钾、匹可硫酸钾(potassium picosulfate)、匹可硫酸钠和调味剂中的一种或更多种。

在一些实施方案中，提供了本文公开的任何方法，其中固体组合物被施用至人类，以在经历结肠镜检查筛查的患者(包括处于结肠直肠癌(CRC)的高风险的患者，包括在先前结肠镜检查中具有先前的息肉病史的那些患者、具有结肠直肠癌的患者和具有家族史的患者)中将结肠腺瘤可视化。

在一方面，本发明提供了一种用于改进结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用4升肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物，其中肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物根据包括以下步骤的时间表被施用至人类：

a)在摄入2升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

b)在摄入第3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

c)在摄入第4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量的固体组合物；

其中每个单位剂量的固体组合物包含25mg的亚甲基蓝，由此腺瘤检测率为至少约40％。

在一个实施方案中，提供了一种用于改进人类结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用8片固体组合物和一定体积的肠清洁溶液，其中固体组合物在摄入肠清洁溶液期间根据以下时间表以三个剂量被口服施用：(a)第一剂量，包括在服用至少一升肠清洁溶液后，向人类施用3片固体组合物；(b)第二剂量，包括在施用第一剂量的固体组合物后约1小时，向人类施用3片固体组合物；以及(c)第三剂量，包括在施用第二剂量的固体组合物后约1小时，向人类施用2片固体组合物。在一些实施方案中，与施用8片固体组合物相结合，总计至少1升的肠清洁溶液由人类服用。在一些实施方案中，与施用8片固体组合物相结合，至少2升的肠清洁溶液由人类服用。在一些实施方案中，与施用8片固体组合物相结合，至少3升的肠清洁溶液由人类服用。在一些实施方案中，与施用8片固体组合物相结合，总计4升的肠清洁溶液由人类服用。在一些实施方案中，在对人类进行内窥镜检查程序之前至少8小时，与8片固体组合物相结合，全部体积的肠清洁溶液由人类服用。在一些实施方案中，在进行内窥镜检查程序的前一天，与施用8片固体组合物相结合，人类服用肠清洁溶液的总体积的一半或更少，并且在进行内窥镜检查程序的当天，服用肠准备溶液的剩余部分。在一些实施方案中，在内窥镜检查程序之前至少两小时，服用全部体积的肠准备溶液。在一些实施方案中，肠清洁溶液由人类根据以下时间表服用：(a)在内窥镜检查程序的前一天，与施用8片固体组合物相结合，人类服用至少16盎司的体积的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水；以及(b)在内窥镜检查程序当天，人类服用至少16盎司的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水。

在一个实施方案中，提供了一种用于改进内窥镜检查程序期间人类结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用8片固体组合物和一定体积的肠清洁溶液，其中固体组合物在肠清洁溶液的摄入期间根据以下时间表口服施用：(a)在内窥镜检查程序的前一天，人类服用至少16盎司的体积的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水；以及(b)在内窥镜检查程序当天，人类服用至少16盎司的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水。在一些实施方案中，所有8片固体组合物在内窥镜检查程序的前一天被施用至人类。在一些实施方案中，8片固体组合物的一部分在内窥镜检查程序的前一天被施用至人类，并且固体组合物的剩余片剂在内窥镜检查程序的当天被施用至人类。在一些实施方案中，在内窥镜检查程序之前至少两小时，全部体积的肠准备溶液被服用。在一些实施方案中，8片固体组合物在内窥镜检查程序之前至少8小时被施用至人类。

在一些实施方案中，提供了任何公开的方法，其中人类被施用8片固体组合物，并服用一定体积的肠清洁溶液，其中肠清洁溶液根据以下时间表被服用：(a)在内窥镜检查程序的前一天，人类服用至少16盎司的体积的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水；以及(b)在内窥镜检查程序当天，人类服用至少16盎司的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水。在一些实施方案中，在内窥镜检查程序之前至少8小时，人类已经被施用了所有8片固体组合物，并且服用了全部体积的肠清洁溶液。在一些实施方案中，在内窥镜检查程序的前一天，人类被施用所有8片固体组合物，并且在内窥镜检查程序之前至少2小时、或直至内窥镜检查程序之前2小时，人类服用全部体积的肠清洁溶液。在一些实施方案中，在内窥镜检查程序之前至少8小时，人类被施用所有8片固体组合物，并且在内窥镜检查程序之前至少2小时、或直至内窥镜检查程序之前2小时，人类服用全部体积的肠清洁溶液。

在一些实施方案中，提供了任何公开的方法，其中人类被施用8片固体组合物，并服用一定体积的肠清洁溶液，其中总体积为4升的肠清洁溶液以每10分钟240mL(8盎司)的速率被服用，直到4升被服用或直到直肠流出物澄清。在一些实施方案中，提供了任何公开的方法，其中肠清洁溶液通过鼻胃管以从约1.2升每小时至约1.8升每小时的速率递送到人类。在一些实施方案中，提供了任何公开的方法，其中人类以25mL/kg/小时的速率饮用一定体积的肠清洁溶液，直到4升被服用或直到水样便澄清且不含固体物质。在一些实施方案中，在内窥镜检查程序之前至少8小时，人类已经被施用了所有8片固体组合物，并且服用了全部体积的肠清洁溶液。在一些实施方案中，在内窥镜检查程序的前一天，人类已经在被施用至少一升的肠清洁溶液之后，被施用所有8片固体组合物，并且在内窥镜检查程序之前至少2小时、或直至内窥镜检查程序之前2小时，完成了全部体积的肠清洁溶液的摄入。在一些实施方案中，在内窥镜检查程序之前至少8小时，人类已经在被施用至少一升的肠清洁溶液之后，被施用所有8片固体组合物，并且在内窥镜检查程序之前至少2小时、或直至内窥镜检查程序之前2小时，完成了全部体积的肠清洁溶液的摄入。

在一些实施方案中，肠清洁溶液包含容积性泻药、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、聚乙二醇、氯化钠、碳酸氢钠、氯化钾、匹可硫酸钾、匹可硫酸钠和调味剂中的一种或更多种。在一些实施方案中，肠清洁溶液包含聚乙二醇，诸如聚乙二醇3350、碳酸氢钠、氯化钠和氯化钾。在一些实施方案中，肠清洁溶液不包含磷酸盐。在一些实施方案中，肠清洁溶液在被人类服用后，在人类中不产生任何临床上显著的电解质变化。在一些实施方案中，肠清洁溶液可以包含在被人类服用后在人类中不产生任何临床上显著的电解质变化的量的磷酸盐。在一些实施方案中，肠清洁溶液呈用于稀释的口服溶液的形式。在一些实施方案中，肠清洁溶液通过将粉末用水或包含水的组合物诸如电解质溶液溶解来制备。在一些实施方案中，肠准备溶液包含从约100mL至约1000mL的水性高渗溶液，所述水性高渗溶液包含有效量的硫酸钠、有效量的硫酸镁、和有效量的硫酸钾，其中该组合物在被人类服用后在人类中不产生任何临床上的电解质变化。在一些实施方案中，肠准备溶液主要由从约100mL至约1000mL的水性高渗溶液组成，所述水性高渗溶液包含有效量的硫酸钠、有效量的硫酸镁、和有效量的硫酸钾，其中该组合物在被人类服用后在人类中不产生任何临床上的电解质变化。

在一些实施方案中，提供了本文公开的任何方法，其中肠清洁溶液可以以1个或更多个剂量、或2个或更多个剂量、或3个或更多个剂量、或4个或更多个剂量、或5个或更多个剂量、或6个或更多个剂量、或7个或更多个剂量、或8个或更多个剂量、9个或更多个剂量、或10个或更多个剂量、或11个或更多个剂量、或12个或更多个剂量、或13个或更多个剂量、或14个或更多个剂量、或15个或更多个剂量、或16个或更多个剂量、或17个或更多个剂量、或18个或更多个剂量、或19个或更多个剂量、或20个或更多个剂量被施用至人类。

在一些实施方案中，提供了本文公开的任何方法，其中在施用第一剂量的固体组合物之前，人类服用至少1升、或至少2升、或至少3升、或至少4升的肠清洁溶液。在一些实施方案中，提供了本文公开的任何方法，其中在施用第一剂量的固体组合物之前，人类服用至少1升的肠清洁溶液。在一些实施方案中，提供了本文公开的任何方法，其中在施用第一剂量的固体组合物之前，人类服用至少1升、或至少2升、或至少3升、或至少4升的肠清洁溶液，其中在内窥镜检查程序之前至少8小时，人类被施用8片固体组合物，并且其中在内窥镜检查程序之前至少8小时，人类服用全部体积的肠清洁溶液。在一些实施方案中，提供了本文公开的任何方法，其中在施用第一剂量的固体组合物之前，人类服用至少1升、或至少2升、或至少3升、或至少4升的肠清洁溶液，其中在内窥镜检查程序之前至少8小时，人类被施用8片固体组合物，并且其中在内窥镜检查程序之前至少2小时，人类服用全部体积的肠清洁溶液。

在一些实施方案中，提供了任何公开的方法，其中根据下表中的时间表，人类被施用8片固体组合物，并服用总体积为4升的肠清洁溶液。

在一些实施方案中，提供了本文公开的任何方法，其中人类在摄入肠清洁制剂期间以单次口服施用被口服施用了总计8片固体组合物。在一些实施方案中，在摄入至少1升肠清洁制剂后施用8片。在一些实施方案中，在内窥镜检查程序之前至少8小时施用8片。在一些实施方案中，在内窥镜检查程序的前一晚施用8片。

在一些实施方案中，提供了本文公开的任何方法，其中在摄入肠清洁制剂期间，根据分次剂量方案，人类被口服施用了总计8片固体组合物。在一些实施方案中，分次剂量方案包括两次口服施用。在一些实施方案中，分次剂量方案包括三次口服施用。在一些实施方案中，分次剂量方案包括四次口服施用。在一些实施方案中，分次剂量方案包括五次口服施用。在一些实施方案中，分次剂量方案包括六次口服施用。在一些实施方案中，分次剂量方案包括七次口服施用。在一些实施方案中，分次剂量方案包括八次口服施用。在一些实施方案中，每次口服施用包括一片至七片。在一些实施方案中，每次口服施用包括一片、或两片、或三片、或四片、或五片、或六片、或七片。在一些实施方案中，第一剂量的固体组合物在至少一升的肠清洁制剂之后施用。在一些实施方案中，第一剂量的固体组合物在至少两升的肠清洁制剂之后施用。在一些实施方案中，第一剂量的固体组合物在至少三升的肠清洁制剂之后施用。在一些实施方案中，第一剂量的固体组合物在全部体积的肠制剂已经被服用之后施用。在一些实施方案中，分次剂量方案包括一次口服施用固体组合物和随后口服施用之间约30分钟的时间段(timeframe)。在一些实施方案中，分次剂量方案包括一次口服施用固体组合物和随后的口服施用之间约60分钟的时间段。在一些实施方案中，分次剂量方案包括一次口服施用固体组合物和随后的口服施用之间约90分钟的时间段。在一些实施方案中，分次剂量方案包括口服施用固体组合物和随后的口服施用之间约120分钟的时间段。在一个实施方案中，提供了一种用于改进人类结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用8片固体组合物和一定体积的肠清洁溶液，其中固体组合物在肠清洁溶液的摄入期间根据以下时间表以三个剂量口服施用：(a)第一剂量，包括在服用至少1升肠清洁溶液后，向人类施用3片固体组合物；(b)第二剂量，包括在施用第一剂量的固体组合物后约1小时，向人类施用3片固体组合物；以及(c)第三剂量，包括在施用第二剂量的固体组合物后约1小时，向人类施用2片固体组合物。

在一个实施方案中，腺瘤检测率为至少约40％，或至少约45％，或至少约50％，或至少约55％。在另一个实施方案中，腺瘤检测率为约56.29％。为了显著预防结肠直肠癌(CRC)，这种改进的腺瘤检测率(ADR)是有意义的。CRC是全世界癌症的最重要的死亡原因之一(尤其是美国的第三大原因)，因此，为了预防CRC的发生，与改进的ADR相关的益处是清楚的。

在本发明的一些实施方案中，所述方法的特征在于具有非息肉样病变的受试者的比例的检测率，而不是腺瘤检测率。在这样的实施方案中，具有非息肉样病变的受试者的比例的检测率为至少约30％、或至少约35％、或至少约40％。在另一个实施方案中，具有非息肉样病变的受试者的比例的检测率为约43.92％。

在本发明的一些实施方案中，该方法的特征在于具有微小腺瘤的受试者的比例的检测率，而不是腺瘤检测率。在这样的实施方案中，具有微小腺瘤的受试者的比例的检测率为至少约25％，或至少约30％，或至少约35％。在另一个实施方案中，具有微小腺瘤的受试者的比例的检测率为约37.11％。

在另一方面中，本发明提供了一种用于改进结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用4升肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物，其中肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物根据包括以下的时间表被施用至人类：

a)在摄入2升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

b)在摄入第3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

c)在摄入第4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量的固体组合物；

其中每个单位剂量的固体组合物包含25mg的亚甲基蓝，由此假阳性率为不多于约35％。

d)在摄入2升肠清洁溶液后，优选地在约两小时内，施用3单位剂量的固体组合物；

e)在摄入第3升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用固体组合物后1小时，施用3单位剂量的固体组合物；

f)在摄入第4升肠清洁溶液后，优选地在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用2单位剂量的固体组合物。

在一个实施方案中，提供了一种用于改进人类的结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用8片固体组合物和一定体积的肠清洁溶液，其中固体组合物在肠清洁溶液的摄入期间根据以下时间表以三个剂量口服施用：(a)服用至少1升肠清洁溶液，(b)第一剂量，包括在服用第1升肠清洁溶液后1小时，向人类施用3片固体组合物和第2升肠清洁溶液；(c)第二剂量，包括在施用第一剂量的固体组合物后约1小时，向人类施用3片固体组合物和第3升肠清洁溶液；以及(c)第三剂量，包括在施用第二剂量的固体组合物后约1小时，向人类施用2片固体组合物和第4升肠清洁溶液。

在一个实施方案中，提供了一种用于改进结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用4升肠清洁溶液和8剂量单位的固体组合物，其中肠清洁溶液和8剂量单位的固体组合物根据包括以下的时间表施用至人类：

a)在摄入至少1升肠清洁溶液后，施用3剂量单位的固体组合物；

b)在第一次口服施用固体组合物后1小时，施用3剂量单位的固体组合物；

c)在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用2剂量单位的固体组合物；

其中每次口服施用组合物都伴随有肠清洁制剂或水，其中每个单位剂量的固体组合物包含25mg的亚甲基蓝。

在一个实施方案中，假阳性率为不多于约30％，或不多于约25％。在另一个实施方案中，假阳性率为约22.74％。

在另一方面中，本发明提供了一种用于改进结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物，其中肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物根据包括以下的时间表被施用至人类：

a)在摄入2升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

b)在摄入第3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

c)在摄入第4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量的固体组合物；

其中每个单位剂量的固体组合物包含25mg的亚甲基蓝，由此假阳性率为不多于约35％，并且腺瘤检测率为至少约40％。

在另一方面中，本发明还提供了一种标记结肠中的粘膜病变的方法，所述方法通过以下进行:向经历结肠镜检查的受试者口服施用至少一个如本文描述的包含亚甲基蓝的片剂，并且以至少一种单一剂量、多于一个剂量或以本文描述的剂量方案施用。在一些实施方案中，所述方法还包括向人类口服施用肠清洁溶液。粘膜病变的这种标记是由于结肠粘膜的异常细胞相对于正常细胞对染料的差别摄取所致。在一个实施方案中，标记通过具有高于周围粘膜的强度的染色突出病变。在另一个实施方案中，标记通过具有低于周围粘膜的强度的染色突出病变。在一些实施方案中，染色是蓝色。在另外的实施方案中，标记允许病变被染色，而周围粘膜保持未染色的。在另一个实施方案中，标记允许病变仅在边缘上被染色。

由于本文描述的片剂的特殊配方，这样的差异染色允许清楚地感知病变在结肠粘膜中定位的区域，导致更容易可视化该区域。本发明的方法标记粘膜病变的能力令人惊讶，因为通常的理解是，不可能获得相对于周围健康粘膜的粘膜病变的标记。

尽管在某些实施方案中所使用的染料是亚甲基蓝，但是从视觉的角度来看，所看见的颜色可能不同。因此，染色可以是蓝色染色，但它不必然是蓝色。颜色根据细胞的类型在病变或健康粘膜的不同部位显现，标记细胞；在病变的情况中：边缘、顶部、整体病变、肉柄(peduncle)。

本发明适用于检测病理学病变，诸如癌前期、癌形式、间期癌(interval cancer)、腺瘤、上皮癌、锯齿状病变、发育异常、息肉、假息肉、前息肉、增生性病变等等。另参见WO2014/060199。

附图简述

本专利或申请文件包含至少一幅以彩色执行的附图。具有彩色附图的本专利或专利申请公布的副本将依请求及支付必要费用后由专利局提供。由于彩色附图是通过EFS-Web电子提交的，因此仅提交了一组附图。

图1示出了根据实施例5的染料在感知深粘膜组织结构方面的对比增强效力，良好地界定腺体的焦点并暗化结肠粘膜的前息肉改变。

图2示出了，根据实施例5，半连续蓝线准确地界定了内窥镜医师必须取出的结肠平坦病变的边缘，允许病变干预以及摘取的更好的分辨。组织界定由于如本文公开的口服施用的染料而被绝对地增强。用常规喷洒技术无法获得相同的表现，因为喷洒与观察之间可用的时间极短(数秒或几分钟)。

图3示出了在实施例7的临床研究期间收集的结肠病变的图片。明显的是，染料已经被正常粘膜细胞摄取。染料精确地突出了结肠表面的特征，以蓝色染色显示了线条和隐窝。病变没有颜色标记。结肠粘膜的正常特征示出了病变所定位的区域中的中断。

图4示出了在实施例7的临床研究期间收集的结肠病变的图片。明显的是，病理和正常粘膜细胞两者都摄取了染料。应当注意的是，粘膜病变已经被标记，因为它的染色比周围健康粘膜更强。尽管病变和健康粘膜两者中都存在颜色，但病变的在何处是清楚的(以蓝色边缘标记)。

图5示出了在实施例7的临床研究期间收集的结肠病变的图片。明显的是，染料已经被结肠病变的病理细胞摄取。病变以蓝色颜色标记，并从周围保持未染色的健康粘膜突出。染料精确地突出了病变的不规则边缘。

图6示出了在实施例7的临床研究期间收集的结肠病变的图片。明显的是，染料已经被结肠病变的病理细胞摄取，而周围粘膜保持未染色的。这标志了病变，并允许立即感知病变。在组织病理学评估后，该病变被确定为无柄锯齿状腺瘤(SSA)，这是一种更难检测的结肠中的病变并且也是一种结肠直肠癌(CRC)的前兆。

图7示出了在实施例7的临床研究期间收集的结肠病变的图片。明显的是，染料已经被结肠病变的病理细胞和周围粘膜的正常细胞两者摄取。染料精确地突出了结肠表面的特征，以蓝色染色显示了线条和隐窝。相对的，病变被以比周围组织更强的蓝色颜色标记。被病变吸收的染料显示了发育异常和无组织的结构，从而相对于周围组织标记了病变。

图8示出了在实施例7的临床研究期间收集的结肠病变的图片。明显的是，染料仅在病变的边缘中被吸收。病变的主体以及周围健康粘膜是未染色的。颜色沿边缘集中，标记了病变在何处。

发明详述

在一方面中，本发明提供了一种用于改进结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物，其中肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物根据包括以下的时间表被施用至人类：

a)在摄入2升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

b)在摄入第3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

c)在摄入第4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量的固体组合物；

在另一方面中，提供了一种用于改进结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物，其中肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物根据包括以下的时间表被施用至人类：

a)在摄入至少1升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

b)在第一次口服施用固体组合物后1小时，施用3单位剂量的固体组合物；

c)在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用2单位剂量的固体组合物；

其中每次口服施用组合物都伴随有肠清洁制剂或水，其中每个单位剂量的固体组合物包含25mg的亚甲基蓝，由此腺瘤检测率为至少约40％。

在一个实施方案中，腺瘤检测率为至少约40％，或至少约45％，或至少约50％，或至少约55％。在另一个实施方案中，腺瘤检测率为约56.29％。为了显著预防结肠直肠癌(CRC)，这种改进的腺瘤检测率(ADR)是重要的。CRC是全世界癌症的最重要的死亡原因之一(尤其是美国的第三大原因)，因此，为了预防CRC的发生，与改进的ADR相关的益处是清楚的。

a)在摄入2升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

b)在摄入第3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

c)在摄入第4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量的固体组合物；

在另一个实施方案中，提供了一种用于改进结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物，其中肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物根据包括以下的时间表被施用至人类：

其中每次口服施用组合物都伴随有肠清洁制剂或水，其中每个单位剂量的固体组合物包含25mg的亚甲基蓝，由此假阳性率为不多于约35％。

a)在摄入2升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

b)在摄入第3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的固体组合物；

c)在摄入第4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量的固体组合物；

其中每次口服施用组合物都伴随有肠清洁制剂或水，其中每个单位剂量的固体组合物包含25mg的亚甲基蓝，由此假阳性率为不多于约35％，并且腺瘤检测率为至少约40％。

可用于本发明的固体组合物包含至少一种染料以及至少一种生理上可接受的赋形剂，所述赋形剂包含：

a)包含至少一种亲脂性化合物以及任选地至少一种两亲性化合物的基质，所述亲脂性化合物优选地为具有低于90℃的熔点的亲脂性化合物，在该基质中至少部分地掺入了至少一种染料，

b)包含至少一种亲水性化合物的基质，其中分散了亲脂性基质以及任选地两亲性基质；

c)任选地其他生理上可接受的赋形剂；

d)任选的抗胃酸包衣

用于在内窥镜检查诊断中使用，其特征在于两个或更多个单位剂量的固体组合物根据分次时间表被口服施用至人类，其中在内窥镜检查诊断之前的48小时内，总量为100mg至400mg的所述至少一种染料被施用至人类。例如，在内窥镜检查诊断之前的24小时内，所述至少一种染料被施用至人类。

可选择地，基质由至少一种亲脂性化合物，优选的具有低于90℃的熔点的亲脂性化合物，以及任选地至少一种两亲性化合物组成，在该基质中至少部分地掺入了至少一种染料，并且该基质由至少一种亲水性化合物组成，其中分散了亲脂性基质以及任选地两亲性基质。

所述两个或更多个单位剂量，例如四个、六个或八个单位剂量在内窥镜检查之前的48小时内，诸如在内窥镜检查之前的24小时内被施用。

根据本公开内容可用的染料可以例如选自刚果红、胭脂红靛蓝、亚甲基蓝、甲苯胺蓝或其混合物。在一些实施方案中，染料是亚甲基蓝。

根据本文的公开内容，亚甲基蓝可以呈无水或水合形式，诸如三水合物形式。

然而，根据本公开内容，也可使用其他生物相容性染料物质，只要它们具有不表现出对其口服全身性施用的障碍的毒性谱。

根据本公开内容的“分次时间表”是指，将在内窥镜检查之前待口服施用的染料的总量分为两个或更多个单位剂量，以获得预先定义的施用时间表。剂量分次可以减少由于不需要的异常肠活动而将损失染色的可能性。并且剂量分次可以促进蓝色染色基质的分散。

如本文所公开的内窥镜检查诊断涉及胃肠道，诸如结肠(结肠内窥镜检查或结肠镜检查)。根据解剖学分类，将结肠分为四(4)个感兴趣的区域(ROI)、即(1)升结肠(AC)、(2)横结肠(TC)、(3)降结肠(DC)、和(4)直肠乙状结肠(RES)。

如本文公开的，所述至少一种染料的总剂量为例如从50mg至500mg，诸如从100mg至400mg，诸如从100mg至250mg，并且此外诸如200mg。

如本文公开的，单位剂量的组合物包含，例如以重量计从20mg至200mg的至少一种染料。例如，所述单位剂量包含以重量计约25mg或约50mg，诸如25mg或50mg的所述至少一种染料。

根据本文公开的实施方案，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类施用八个单位剂量的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料。

根据本文公开的另一个实施方案，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类施用六个单位剂量的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料。

根据本文公开的又另一个实施方案，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类施用四个单位剂量的本发明的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料。

根据本文公开的另外的实施方案，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类施用四个单位剂量的组合物，每个单位剂量包含以重量计约50mg，诸如50mg的所述至少一种染料。

根据本文公开的又另外的实施方案，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类施用本文公开的两个单位剂量的组合物，每个包含以重量计约200mg，诸如200mg的所述至少一种染料。

在本文公开的一些实施方案中，包含固体组合物的片剂将被口服施用至人类，其中该人类将片剂完整吞服，而不压碎、破碎或咀嚼片剂。

在一些实施方案中，包含固体组合物的片剂的施用禁施用于对亚甲基蓝或任何其他噻嗪染料具有超敏性的人类、或对亚甲基蓝或任何其他噻嗪染料具有严重超敏性的人类、或具有葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺陷的人类、包括处于发展溶血性贫血症的风险的人类。在这种情况中，实验室测试可能显示海恩茨小体(Heinz body)、升高的间接胆红素和降低的触珠蛋白，但库姆斯测试(Coombs test)为阴性。贫血症可能需要红细胞输注。

已经报道了一些被施用亚甲基蓝的人类中对亚甲基蓝类产品的过敏反应。应当对用包含固体组合物的片剂处理的人类进行过敏反应监测。如果发生过敏反应或其他严重超敏反应(例如血管性水肿、荨麻疹、支气管痉挛)，则可以停止使用包含固体组合物的片剂。包含固体组合物的片剂在过去已经经历过对亚甲基蓝类产品的过敏反应或其他严重超敏反应的人类中可能是禁忌的。

在一些实施方案中，包含固体组合物的片剂不应当在妊娠、母乳喂养或哺乳的人类中使用。

在一些实施方案中，包含固体组合物的片剂应当谨慎用于具有严重肾功能不全和/或肝功能损害的个体。

在一些实施方案中，将包含固体组合物的片剂向人类施用可能引起人类症状，诸如偏头痛、眩晕、平衡紊乱、嗜睡、意识错乱和视力障碍。可以建议被施用包含固体组合物的片剂的人类在这些不良反应解决之前，避免驾驶或从事危险职业或活动，诸如操作重型或潜在危险的机器。

亚甲基蓝在体外抑制一系列CYP同工酶，包括1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6和3A4/5。亚甲基蓝在人类肝细胞培养物中诱导CYP同工酶1A2和2B6，而在高达40μM的标称浓度不诱导3A4。这些相互作用在被这些酶中的一种代谢的窄治疗指数药物(例如地高辛、华法林、苯妥英、阿芬太尼、环孢素、二氢麦角胺、麦角胺、芬太尼、匹莫齐特(pimozide)、奎尼丁、西罗莫司(sirolimus)和他克莫司(tacrolimus))中可能更明显。然而，尚不清楚这些体外相互作用的临床相关性。

基于体外研究，发现亚甲基蓝是膜转运蛋白P-gp和OAT3的可能的底物，并且作为这些转运蛋白的抑制剂的药物具有降低亚甲基蓝的排泄效率的能力。当亚甲基蓝与剂诸如环孢素A、利托那韦(ritonavir)、沙奎那韦(saquinavir)、胺碘酮、艾乐替尼(Alectinib)、丙磺舒和新生霉素共同施用时，应当谨慎。

基于体外研究，发现亚甲基蓝可能充当P-gp的弱抑制剂，因此，由于亚甲基蓝具有增加共同施用的这种转运蛋白的底物(地高辛、拓扑替康(topotecan)、西罗莫司、依维莫司(everolimus)、尼洛替尼(nilotinib)和拉帕替尼(lapatinib))的血浆浓度的能力，建议进行适当监测。

本文公开的固体组合物的溶解可以是pH依赖的，并且当在向人类施用胃酸减少剂(gastric acid reducing agent)(例如PPI、H2阻断剂和抗酸剂)后施用时，亚甲基蓝的释放性质和摄取可能在人类中改变。

在一些实施方案中，包含固体组合物的片剂的总剂量可以在摄入肠清洁制剂期间口服摄取，并且应当在结肠镜检查之前的晚上完成，以确保片剂有足够的时间来到达结肠并在结肠镜检查之前局部释放亚甲基蓝。

如本文公开的，为了利于内窥镜医师通过内窥镜观察粘膜，所述人类在内窥镜检查诊断之前可以通过施用肠清洁溶液以大量移除粪便和黏液残渣来经受肠清洁准备。这种清洁操作通常在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，诸如在内窥镜检查诊断之前的24小时的时间段中进行，或者如发现的对于在傍晚进行结肠镜检查实用的，清洁操作也在同一天进行。

结肠清洁制剂可以通过在前一天期间连续饮用清洁溶液的体积部分来施用，或者以所谓的“分段(split)”形式通过将清洁溶液体积的施用分为两部分来施用，一部分将在结肠镜检查前一天施用，并且一部分将在随后将进行结肠镜检查的当天的早晨施用。

肠清洁溶液用于在内窥镜检查诊断前清洁及清洗肠道和粘膜。肠清洁溶液是，例如盐水和/或聚乙二醇(PEG)水性溶液，诸如聚乙二醇水溶液。作为另一个实例，所述水性溶液除了水之外包含以重量计从50％至95％的聚乙二醇，有时在该溶液中还包括盐和调味剂，诸如钠盐、钾盐、抗坏血酸、及其混合物。例如可以使用硫酸钠、无水硫酸钠、氯化钠、抗坏血酸钠、碳酸氢钠、抗坏血酸的钠盐、硫酸钾、氯化钾及其混合物。作为另外的实例，肠清洁溶液是以诸如或或或Macro-或或或Selg的名称销售的商购可得的产品的水性溶液。

然而，如本文公开的，也可以使用其他肠清洁溶液或制剂，只要它们具有不表现出对其全身性口服施用的障碍的毒性谱。例如，仅包含盐或其他小化学泻药而不包含PEG的肠清洁溶液，以商标Phospho-或或在市场上可得。还可以使用不同的肠准备程序。

如本文公开的，清洁溶液可以以4升的总量施用，其可以分为一个或更多个单位剂量，例如分为每个单位剂量约一升的四个单位剂量。

如本文公开的，固体组合物因此可以在内窥镜检查诊断之前与每个单位剂量的所述肠清洁溶液的摄取一起施用和/或在每个单位剂量的所述肠清洁溶液的摄取之后施用。之后，如果必要，仍还可以另外施用水。

如本文公开的，根据分次时间表向人类口服施用四个单位剂量的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料，在所述分次时间表中，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类如下地施用总量约100mg，诸如100mg的所述至少一种染料：

-在摄入第1升肠清洁溶液后，施用1单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第2升肠清洁溶液后，施用1单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第3升肠清洁溶液后，施用1单位剂量固体口服组合物；以及

-在摄入第4升(且最后1升)肠清洁溶液后，施用1单位剂量固体口服组合物。

如本文公开的，根据分次时间表向人类口服施用八个单位剂量的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料，在所述分次时间表中，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类如下地施用总量约200mg，诸如200mg的所述至少一种染料：

-在摄入第1升肠清洁溶液后，施用2单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第2升肠清洁溶液后，施用2单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第3升肠清洁溶液后，施用2单位剂量固体口服组合物；以及

-在摄入第4升(且最后1升)肠清洁溶液后，施用2单位剂量固体口服组合物。

例如，根据分次时间表向人类口服施用八个单位剂量的如本文公开的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料，在所述分次时间表中，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类如下地施用总量约200mg，诸如200mg的所述至少一种染料：

-在摄入第1升肠清洁溶液后，施用0单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量固体口服组合物；以及

-在摄入第4升(且最后1升)肠清洁溶液后，施用3单位剂量固体口服组合物。

作为另外的实例，根据分次时间表向人类口服施用八个单位剂量的本文公开的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料，在所述分次时间表中，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类如下地施用总量约200mg，诸如200mg的所述至少一种染料：

-在摄入第2升肠清洁溶液后，施用4单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第3升肠清洁溶液后，施用4单位剂量固体口服组合物；以及

-在摄入第4升肠清洁溶液后，施用0单位剂量固体口服组合物；

作为又另外的实例，根据分次时间表向人类口服施用八个单位剂量的如本文公开的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料，在所述分次时间表中，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类如下地施用总量约200mg，诸如200mg的所述至少一种染料：

-在摄入第2升肠清洁溶液后，施用3单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量固体口服组合物。

如本文另外公开的，根据分次时间表向人类口服施用四个单位剂量的如本文公开的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料，在所述分次时间表中，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类如下地施用总量约100mg，诸如100mg的所述至少一种染料：

如本文另外公开的，根据分次时间表向人类口服施用两个单位剂量的如本文公开的组合物，每个单位剂量包含以重量计约200mg，诸如200mg的所述至少一种染料，在所述分次时间表中，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类如下地施用总量约400mg，诸如400mg的所述至少一种染料：

-在摄入第4升(且最后1升)肠清洁溶液后，施用0单位剂量固体口服组合物。

-在摄入第2升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用固体组合物后1小时，施用1单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第3升肠清洁溶液后，优选地在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用1单位剂量固体口服组合物；以及

-在摄入第4升(且最后1升)肠清洁溶液后，优选地在第三次口服施用固体组合物后1小时，施用1单位剂量固体口服组合物。

-在摄入第2升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用固体组合物后1小时，施用2单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第3升肠清洁溶液后，优选地在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用2单位剂量固体口服组合物；以及

-在摄入第4升(且最后1升)肠清洁溶液后，优选地在第三次口服施用固体组合物后1小时，施用2单位剂量固体口服组合物。

-在摄入第2升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用肠清洁溶液后1小时，施用2单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第3升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用固体组合物后1小时，施用3单位剂量固体口服组合物；以及

-在摄入第4升(且最后1升)肠清洁溶液后，优选地在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用3单位剂量固体口服组合物。

-在摄入第2升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用肠清洁溶液后1小时，施用4单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第3升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用固体组合物后1小时，施用4单位剂量固体口服组合物；以及

-在摄入第4升肠清洁溶液后，优选地在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用0单位剂量固体口服组合物。

-在摄入第2升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用肠清洁溶液后1小时，施用3单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第4升肠清洁溶液后，优选地在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用2单位剂量固体口服组合物。

-在摄入第2升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用肠清洁溶液后1小时，施用1单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第3升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用固体组合物后1小时，施用1单位剂量固体口服组合物；以及

-在摄入第4升(且最后1升)肠清洁溶液后，优选地在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用2单位剂量固体口服组合物。

-在摄入第4升(和最后1升)肠清洁溶液后，优选地在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用0单位剂量固体口服组合物。

如本文更另外公开的，根据分次时间表向人类口服施用六个单位剂量的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料，在所述分次时间表中，在内窥镜检查诊断之前的48小时的时间段中，向所述人类如下地施用总量约150mg，诸如150mg的所述至少一种染料：

-在摄入第1升肠清洁溶液前，在开始肠准备时，施用2单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第1升肠清洁溶液后，优选地在第一次口服施用固体组合物后1小时，施用2单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第2升肠清洁溶液后，优选地在第二次口服施用肠清洁溶液后1小时，施用2单位剂量固体口服组合物；

-在摄入第3升肠清洁溶液后，优选地在第二次口服施用固体组合物后1小时，施用0单位剂量固体口服组合物；以及

-在摄入第4升(且最后1升)肠清洁溶液后，优选地在第三次施用肠清洁溶液后1小时，施用0单位剂量固体口服组合物。

-在摄入第3升肠清洁溶液后，施用0单位剂量固体口服组合物；以及

作为又另一个另外的实例，上文所示的施用时间表也可以应用“分段(split)”肠清洁程序来进行。在这种情况中，将片剂施用在两天的肠清洁准备期间分段，维持在此描述的相关时间表。根据本文公开的另外的实例，分段准备的实例在此详述于下：

-根据分次时间表向人类口服施用八个单位剂量的本文公开的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料，在所述分次时间表中，在内窥镜检查诊断之前的24小时的时间段中，在分段准备程序中向所述人类施用总量约200mg，诸如200mg的所述至少一种染料，其中：

-在结肠镜检查的前一天，在摄入第1升肠清洁溶液后，施用3单位剂量固体口服组合物；

-在结肠镜检查的前一天，在摄入第2升肠清洁溶液后，施用3单位剂量固体口服组合物；

-在结肠镜检查当天，在摄入第3升肠清洁溶液后，施用2单位剂量固体口服组合物；以及

-在结肠镜检查当天，在摄入第4升肠清洁溶液后，施用0单位剂量固体口服组合物。

可选择地，作为另外的实例，根据分次时间表向人类口服施用八个单位剂量的本文公开的组合物，每个单位剂量包含以重量计约25mg，诸如25mg的所述至少一种染料，在所述分次时间表中，在内窥镜检查诊断之前的24小时的时间段中，在分段准备程序中向所述人类施用总量约200mg，诸如200mg的所述至少一种染料，其中：

-在结肠镜检查的前一天，在摄入第1升肠清洁溶液后，施用0单位剂量固体口服组合物；

-在结肠镜检查的前一天，在摄入第2升肠清洁溶液期间，施用6单位剂量固体口服组合物；

在另外的方面中，本发明还提供了一种标记结肠中的粘膜病变的方法，所述方法通过以下进行：以至少一个单一剂量、多于一个剂量或以本文描述的剂量方案向经历结肠镜检查的受试者口服施用一个或更多个如本文描述的包含亚甲基蓝的片剂。在一些实施方案中，所述方法还包括向人类口服施用肠清洁溶液。粘膜病变的这种标记是由于结肠粘膜的异常细胞相对于正常细胞对染料的差别摄取所致。在一个实施方案中，标记通过具有高于周围粘膜的强度的染色突出病变。在另一个实施方案中，标记通过具有低于周围粘膜的强度的染色突出病变。在一些实施方案中，染色是蓝色。在另外的实施方案中，标记允许病变被染色，而周围粘膜保持未被染色。在另一个实施方案中，标记允许病变仅在边缘上被染色。

由于本文描述的片剂的特殊配方，这样的差异染色允许清楚地感知病变在结肠粘膜中定位的区域，导致更容易可视化该区域。

通过增加染料和粘膜之间的接触时间，确保了由本发明的方法提供的这种差异染色。由于该制剂，染料在结肠中局部地起作用，并具有足够的时间以被粘膜的细胞吸收，这使本发明区别于现有技术，诸如在内窥镜检查期间喷洒染料(在本领域中称为“色素内窥镜检查”)，该技术没有为染料被细胞吸收提供足够的时间。这种接触时间不足可能导致内窥镜医师错过一些结肠病变，因为根据这种现有技术的技术，可能的是，染料被异常细胞吸收的程度与被正常细胞吸收的程度相同。由于时间不足以允许染料和粘膜之间的适当的相互作用，可能出现该结果。本发明的方法标记粘膜病变的能力令人惊讶，因为通常的理解是，不可能获得相对于周围健康粘膜的粘膜病变的标记。

不受任何理论或假设约束，认为本发明的标记方面可能是由于亚甲基蓝是活体染料的事实，并且因此它依赖于不同的细胞类型具有不同的吸收时间。它是活体的，具有被细胞主动吸收的可能性，其中病理细胞的吸收/解吸收(de-absorption)时间可能不同，例如在肿瘤前细胞和肿瘤细胞之间不同。

本文公开的固体组合物可以是控制释放组合物。表述本文公开的组合物的“控制释放”被用于指能够以选择性位置-时间的方式，即在感兴趣的区域逐渐释放染料的组合物。因此，这种表述包括“长期的(prolonged)、持续的、延长的(extended)、延迟的或调节的”释放定义。

适用于配制本文公开的控制释放组合物的技术可以选自结肠特异性释放技术，利用基质结构和储库结构作为系统，使用本领域已知的溶解控制机制和技术，诸如扩散、溶胀、和大分子弛豫(macromolecular relaxation)。

本文公开的口服组合物可以根据国际专利申请WO2011/107945、WO00/76481和WO00/76478以及美国专利第8,545,811号中描述的以商标在商业上已知的多基质技术来配制，所述国际专利申请和美国专利通过引用将其与多基质技术相关的公开内容特别并入本文。

如本文公开的合适的亲脂性化合物可以选自具有低于90℃，诸如从40℃至90℃，以及另外诸如从60℃至70℃的熔点的饱和的、不饱和的及氢化的长链醇，饱和的及不饱和的及氢化的脂肪酸、其盐、酯和酰胺，脂肪酸的单甘油酯、二甘油酯和三甘油酯、其聚乙氧基化衍生物，蜡、神经酰胺、胆固醇、胆固醇衍生物及其混合物。

如本文公开的合适的两亲性化合物可以选自I型和II型极性脂质(卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、及其混合物)、神经酰胺、乙二醇烷基醚(诸如例如，二乙二醇单甲基醚)、烷基硫酸盐(alkyl sulfate)和磺基琥珀酸盐、及其混合物。

如本文公开的合适的亲水性化合物可以选自形成水凝胶的化合物(即与水性溶剂接触后形成水凝胶的化合物)，诸如选自以下中的那些：丙烯酸的聚合物和共聚物、甲基丙烯酸的共聚物、烷基乙烯基聚合物、烷基纤维素、羟基烷基纤维素、羧基烷基纤维素、改性和/或多取代纤维素、多糖、糊精、果胶、淀粉、复合淀粉和淀粉衍生物、藻酸、合成橡胶、天然橡胶、多元醇及其混合物。

水凝胶是当由干燥状态变成水合状态时经历所谓的“分子弛豫”，即随存在于赋形剂自身的聚合链中的极性末端基团被大量水分子配位，在质量和重量上明显增加的化合物。

如本文公开的合适的抗胃酸包衣可以选自丙烯酸的聚合物、甲基丙烯酸的聚合物、丙烯酸的共聚物、甲基丙烯酸的共聚物、纤维素衍生物(诸如例如邻苯二甲酸乙酸纤维素)、基于羟基丁酸酯的聚合物、虫胶(shellac)及其混合物。本发明的这种抗胃酸包衣也可与增塑剂、遮光剂、染料、及其混合物组合。

如本文公开的控制释放组合物的施用实际上允许从意图经受内窥镜检查评估的胃肠区段开始，诸如在肠区域中以及甚至另外诸如在结肠区域中精确地释放包含在组合物中的染料。

如本文公开的组合物被配制为选自片剂、胶囊、颗粒剂、微粒剂、和丸剂的形式，诸如以包衣片剂的形式，另外诸如以抗胃酸片剂的形式。

本文公开的胶囊形式可以继而含有颗粒剂、微粒剂和/或丸剂。

例如，本文所述的组合物可以被配制为抗胃酸片剂的形式或包含抗胃酸颗粒剂、抗胃酸微粒剂和/或抗胃酸丸剂的胶囊的形式。

此外，本文公开的组合物可以被配制为双层形式，诸如双层片剂。

如本文公开的，在结肠镜检查的情况中，可以提供两个或更多个单位剂量的本文公开的组合物，用于口服施用两个或更多个单位剂量的本文描述的组合物，诸如控制释放片剂，以防止染料被分散至不意图经受结肠镜检查的消化道的区域，诸如例如胃、十二指肠和空肠。

对于控制释放组合物的制备，可以将一种或更多种染料连同能够赋予制剂逐渐的或大量的或受控的或长期的溶解性质的物质一起配制。此外，将制剂用仅在达到特定的pH、通常为从pH 5至pH 7后才能够溶解的物质包衣，该pH为意图经受肠内窥镜检查评估的区段所特有的。

在到达以抗胃酸包衣开始溶解的特定pH值为特征的感兴趣的肠区段后，可以控制染料的溶解的速度，以确保溶解在肠传输所需要的时间内发生，诸如到达结肠的时间，通常地进行从4至24小时。

如本文公开的，一种或更多种染料先与能够形成亲脂性基质的材料，诸如在具有表面活性剂性质的一种或更多种两亲性物质的存在下混合或粒化，并且最后将处于任何聚集程度的这种粉末的基质插入由呈无水状态或具有一些残留水分值的也被称为水凝胶的亲水类型的聚合物或共聚物形成的主要结构中。

可选择地，仍根据这个技术的典型应用，一种或更多种染料应当先与能够形成亲脂性基质的材料混合或粒化，并且在粒化后，在例如具有表面活性剂性质的一种或更多种两亲性物质的存在下，将处于任何聚集程度的这种基质结构插入由呈无水状态或具有一些残留水分值的亲水类型的聚合物或共聚物形成的主要结构中。随后，最终混合物经受压缩。

最后可以将能够防止组合物在强酸环境中溶解的抗胃酸包衣膜涂布于组合物的表面。

吞咽后，这种多基质包衣组合物可以被保护而不与胃酸和肠酸接触，直到到达具有合适的pH诸如大于5或7的pH的环境，在此处抗胃酸包衣被溶解，并且溶解程序开始，该溶解程序将导致插入制剂的染料在消化腔内传输的过程的同时被逐渐地分布。

本文公开的内窥镜检查诊断的目的在于诊断胃肠道、诸如结肠以及另外诸如结肠的右部的炎性、溃疡性、肿瘤前、发育异常和/或肿瘤病理和/或改变。

例如，本文公开的内窥镜检查诊断评估的目的可以在于诊断胃肠道、诸如结肠以及另外诸如结肠的右部的癌形式、癌前期形式、间期癌、腺瘤、上皮癌、锯齿状病变、发育异常、息肉、假息肉、前息肉增生性病变以及不同的炎性病理和/或病变。

结肠的右部的内窥镜检查诊断的目的还可以在于诊断右结肠腺瘤、右结肠息肉、锯齿状腺瘤、以及右锯齿状病变或间期癌。

间期癌涉及在两次连续的结肠内窥镜检查(结肠镜检查)之间的时间内能够变成癌(肿瘤)的病变。这样的时间通常相当于2-5年的时间段。

本文公开的口服组合物的目的可以在于增加以及改进在白光结肠镜检查期间最易错过的那些小尺寸病变和平坦病变的诊断。如本文使用的，术语“小尺寸”为等于或小于10mm，诸如等于或小于5mm的尺寸。例如，直径小于5mm的尺寸的右结肠的息肉、腺瘤和锯齿状病变被认为是“小尺寸”。

尺寸被确定为通过使用标准异物钳(foreign body forcep)来估计或测量的病变的直径。

事实上，这些右结肠病变在这个领域被认为难以看见以及检测，因为结肠粘膜组织的解剖学构造以及具有不洁粘膜表面的可能性，这将使病变的检测在标准白光结肠镜检查实践中非常困难。

并且，选择更小的结肠病变更加困难，因为存在与结肠皱襞混淆的可能性，以及具有隐藏这样的更小的病变的不洁粘膜表面的可能性，因此使那些更小的病变难以检测。

如本文公开的，内窥镜检查诊断的目的还可以在于诊断先前罹患至少另一种炎性病理例如炎性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎、或克罗恩病的人类中的以上提到的病理和/或病变。

在那种情况中，所述人类被称为“风险更大的患者”。在这种类型的患者中，事实上，肠粘膜和结肠粘膜的随后病理和/或病变的风险比正常人高得多，因为粘膜受慢性炎症性过程影响，从长期来看所述慢性炎症性过程可以与不受控制的细胞增殖及肿瘤发展相关。特别地，结肠水平的风险显著增加，其中例如在罹患长期溃疡性结肠炎和克罗恩病的患者中，结肠癌和/或结肠发育异常和/或上皮内瘤形成(intraepithelial neoplasias)更可能发生。

本文公开的口服组合物的第一个益处是，在待通过内窥镜检查诊断评估来研究的区域，诸如结肠区域(升结肠、降结肠、直肠乙状结肠和横结肠)以及甚至另外诸如结肠的右部中提供改进的染色质量和染色效力。

这种改进的染色质量与许多不同的因素相关。首先，根据多基质递送系统和染料施用的具体时间表，染料被相当均匀地递送遍及肠的全部长度，这确保染色物质的长期持续和解剖学上一致的可用性。第二且最重要的，本文的公开内容首次允许在染料与结肠粘膜接触和内窥镜检查程序之间的一定的间隔时间。这个间隔时间是重要的，允许粘膜中适当的染料吸收，由于蓝色物质掺入到细胞中而使粘膜变为一致地染色。认为选择性染料吸收是活体染料如亚甲基蓝的关键作用机制。

实际上，当在内窥镜检查程序期间喷洒染料时，这种吸收以及随之发生的增强的对比被最低程度地获得。当在染料递送与内窥镜检查程序之间存在一定的间隔时，吸收被最大化。

导致改进的染色的第三因素严格地与结肠解剖学相关。实际上，与其它结肠区段相比，右结肠具有更大的腔和更大的粘膜表面。

根据这些事实以及因为重力问题(在内窥镜检查程序期间，患者以仰卧位躺下)，当在内窥镜检查程序时喷洒染料时，染料趋于以不均匀的模式(patchy modep)分布，例如分布在粘膜的最下部(因为重力)。

与这种情况不同，在用MMX机制靶向口服递送染料的情况中，在程序之前至少5小时，显著剂量的染料的可用性以及充足的水性材料(肠准备溶液)的存在，与右结肠的蠕动运动一起，使染料的扩散以及染料与右结肠的不同粘膜区段的接触达到最佳。

当结肠粘膜被亚甲基蓝一致且持续地染色后，产生的诊断益处是根据具体涉及染料的不同作用来检测粘膜异常的提高的能力。首先且最重要的，具有炎性或肿瘤变化的粘膜区域趋于减少染料的摄取，因此造成(在内窥镜检查程序期间)易于与显示均匀染色模式的正常粘膜区别开的未染色的区域。

本文公开的口服组合物的另一个益处是，在待通过内窥镜检查诊断来研究的区域，诸如在其全部解剖学区段(升结肠、降结肠、直肠乙状结肠和横结肠)中的结肠区域中，提供病理和/或非病理病变的改进的检测。例如，结肠的右部可以是更准确地染色的区域。

由于在细胞间空间和细胞内空间中染料的不同摄取，本文公开的口服组合物允许染料在感知具有隐窝和腺管的深粘膜组织结构方面的对比增强的效力，因此改进了内窥镜医师必须识别并取出的病变和/或病变边缘的准确界定。确保了粘膜组织结构和病变的组织的改进的界定，允许病变的早期检测。

由本文公开的口服组合物和施用时间表提供的更好的病变界定促进了病变检测的增加的特异性和灵敏度，因此减少了假阴性以及假阳性的发生，并允许更正确地识别及检测病理或恶性区域。换言之，本文公开的特定口服固体组合物和本文定义的固体组合物的施用时间表提供了在粘膜组织结构上的改进的染料对比。

特别地，本文公开的口服固体组合物和施用时间表能够非常早期地检测腺瘤、结肠发育异常和结肠癌，特别是由先前的溃疡性结肠炎或克罗恩病造成的那些。

本文公开的口服固体组合物和施用时间表的另外的益处是提供染料的最大化的局部生物利用度及其最优化的生物效果。

事实上，应当注意，根据本文的公开内容，允许染料局部地释放，并在经受内窥镜检查诊断的位置准确地均匀散布。例如，如本文公开的，染料在结肠，还包括结肠的右部中释放。

由于本文公开的特定口服固体组合物和定义的施用时间表，口服施用的染料被局部地释放并且还在肠道中完全地吸收，诸如在结肠中以及另外诸如在结肠的右部中被完全地吸收。以本文公开的这样的方式，避免了在内窥镜检查诊断中在不感兴趣的解剖学管道诸如胃或小肠中的任何不期望的早期释放或早期吸收。

染料在肠粘膜上的局部吸收允许染料渗透到细胞中，其中染料被保留，导致改进的染色效果、增加的对比以及更好的检测和相关诊断。

当使用亚甲基蓝作为用于内窥镜检查诊断的染料时，染料的改进的吸收尤其重要。这是因为亚甲基蓝是“活体染料”，能够被细胞以与被细胞外空间不同的方式摄取。

而且，根据本文公开的施用时间表口服施用本文定义的组合物，可以导致检测更大数目的呈更小尺寸类别的病变，因此改进内窥镜检查诊断。

将本文公开的固体组合物如本文公开地口服施用，可以有利地进一步广泛地染色结肠粘膜，减少由于参与内窥镜检查诊断的内窥镜医师或操作者造成的结肠镜检查主观性，并且因此改进诊断评估自身的效力。

本文公开的口服组合物还可以通过避免涉及喷洒染料以及然后将其从待检查的粘膜洗掉的死时间(dead time)来减少内窥镜检查诊断所需要的时间。

以下的实施例还阐明了本文公开的口服组合物和施用时间表，而不带来任何相关限制。

实施例

实施例1：用于内窥镜检查(结肠)的控制释放的包衣片剂

所使用的过程提供将染料与卵磷脂表面活性剂、硬脂酸、甘露糖醇和所需量的一半的硬脂酸镁混合。在压紧混合物后，随后粒化，然后添加纤维素、羧甲基淀粉钠、胶体二氧化硅和其余的硬脂酸镁，并且在进一步混合后，然后进行最终压缩以获得250mg的片剂。然后将该片剂用A型和B型甲基丙烯酸共聚物的混合物包衣，以延长体外抗溶解性直至pH≥7，pH≥7是回盲肠和结肠环境的特征。

实施例2：用于内窥镜检查(结肠)的控制释放的包衣片剂

制备过程提供将染料与卵磷脂、硬脂酸和磷酸氢二钠混合，将其压紧为薄片(wafer)然后干燥粒化，与核心的其余组分混合并最终压缩成235mg/片剂的重量。包衣使用甲基丙烯酸衍生物作为基料以及醇溶剂以利于应用阶段(application phase)。

使如此获得的片剂经受体外溶解测试，显示了对酸环境的良好的抗性以及在具有7.2的pH的中性环境中的染料的逐渐的转移。

实施例3：用于内窥镜检查(结肠)的控制释放的包衣片剂

通过将染料、作为两亲性组分的卵磷脂、作为亲脂性基质的组分的硬脂酸、甘露糖醇和部分硬脂酸镁提前混合及粒化来获得组合物。在初步筛选所获得的颗粒之后，添加其余组分以及特别是能够产生亲水性基质结构的纤维素。将通过压缩粉末和颗粒的混合物所获得并且重约720mg的最终药物形式经历用A型和B型的甲基丙烯酸衍生物的共聚物的混合物包衣，所述混合物由增塑剂即柠檬酸三乙酯、由染料颜料即二氧化钛、以及由防粘剂诸如滑石支撑，使用乙醇作为溶剂。

如此获得的片剂在体外在pH<2的缓冲液中抗溶解，并且在pH>7的缓冲液中允许染料物质的逐渐释放，如以下详述：

-在pH 1的溶解介质中2小时后的溶解％：0％(规格≤10％)

-在pH 7.2的溶解介质中4小时后的溶解％：27％

-在pH 7.2的溶解介质中8小时后的溶解％：84％(规格>80％)

已经将这个实施例3的相同片剂用于I期PK试验，其中比较了200mg和400mg单一剂量，并且其中记录了以下的主要PK参数的平均值：

对于200mg剂量

-平均t_lag≥3小时

-平均t_max(小时)16.10±4.01

-与注射的剂量相比的生物利用度(F_abs％)：139.19±52.0

-平均C_max(ng/ml)1662.2±501.93

-尿液排泄(剂量的平均％)＝39.67±19.19

-平均t_1/2(小时)20.19±4.68

而对于400mg剂量，所记录的主要参数为：

-平均t_lag≥3小时

-平均t_max(小时)17.67±3.60

-平均C_max(ng/ml)1635.67±729.57

-尿液排泄(剂量的平均％)＝22.99±14.92

-平均t_1/2(小时)17.25±7.43

实施例4：用于内窥镜检查(结肠)的控制释放的包衣片剂

该过程提供了将层1的组分混合并将其压缩，然后将粉末和从先前压紧层2的一些组分获得的颗粒的混合物压缩，所述层2的一些组分准确地说是染料、卵磷脂、硬脂酸、微晶纤维素和甘露糖醇连同一半的硬脂酸镁以及其余助剂(co-formulant)。

重约250mg的片剂具有两个不同染色的分开的层，被配制用于在胃区段和随后的肠区段两者中差异地释放染料。

实施例5：用于内窥镜检查(结肠)的控制释放的包衣片剂

该组合物通过依次混合染料、作为两亲性组分的卵磷脂、作为亲脂性基质的组分的硬脂酸；然后添加其余组分以及特别是能够产生亲水性基质结构的纤维素，直到制剂完成来获得。将通过压缩粉末和颗粒的混合物获得并且单位重约320mg的最终药物形式经受用A型和B型甲基丙烯酸衍生物的共聚物的混合物包衣，所述混合物由增塑剂柠檬酸三乙酯、由染料颜料二氧化钛、以及由防粘剂诸如滑石支撑，使用乙醇或水或其混合物作为溶剂。

如此获得的片剂显示在体外在pH 1持续2小时基本上不溶解(<10％)，并且在具有pH 7.2的模拟肠介质中逐渐溶解，具有如下释放：

-1小时后约10％(规格限值为≤30％)

-4小时后约44％，以及

-在第8小时多于90％(规格限值为≥80％)。

该片剂还被用于在人类志愿者中确定作为单独包含25mg的染料的分开的剂量施用的2剂量的亚甲基蓝的PK特征，所述人类志愿者通过施用4升的包含PEG的肠准备溶液(商业上称为Esse 1000)来经受标准肠清洁程序。

相同的片剂已经被用于I期PK试验，其中比较了100mg和200mg单一剂量，并且其中记录了以下主要PK参数的平均值：

对于100mg剂量

-平均t_lag≥3小时

-平均t_max(小时)12.0(单独的值9-16)

-平均C_max(ng/ml)573.60±175.83

-在0-60小时中的尿液累计排泄(剂量的平均％)＝28.02±11.71

-平均t_1/2(小时)13.87±5.09

而对于200mg剂量，记录的主要参数是

-平均t_lag≥3小时

-平均t_max(小时)16.0(单独的值10-24)

-平均C_max(ng/ml)1149.12±261.95

-在0-60小时中的尿液累计排泄(剂量的平均％)＝38.67±15.8

-平均t_1/2(小时)15.08±5.85

为了根据粘膜染色结果来最佳化施用片剂的方式，已经用以上描述的片剂进行了临床试验，使用原创的且包括在0和20之间的数字的评分系统(TSC)作为区别参数，所述数字被计算为在示为右结肠或升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠-直肠的结肠道的4个区段中测量的范围为0至5的每个单独的染色评分的和(其中0为完全未染色，1为“微量”，即在结肠粘膜中弱的染料痕迹，2为“可检测”，即相应于至少25％的区域的染色，3为“可接受”，即相应于至少50％的区域的染色，4为“良好”，即相应于至少75％的区域的染色，且5为“过度染色”，即相应于过度染色而使内窥镜医师在100％的区域中无法以应有的准确度观察粘膜表面)；使用这个评分系统来选择最可靠的染料施用时间表，目的是使片剂施用及结肠镜检查程序期间的病变检测可能性最佳化。

因此，使用如所描述的配制的片剂，已经改变了小组的患者的施用时间表并确定了对应的染色评分。因为结肠粘膜染色的重要性在于，良好染色的外观应当扩展至所有的结肠区段，而不仅集中于单一结肠区域，所以考虑了另外的参数：染色评分≥2的NSA或染色区域数目(Number of Stained Area)。应用这两个参数(TSC和NSA)，已经确定了片剂施用时间表，以获得对内窥镜医师增强检测结肠粘膜中的所有病变的最佳条件。

在下表中报告了两种测试剂量的不同的施用时间表以及对应的测量的染色评分：

A)对于150mg剂量，

-用施用时间表A，包括在饮用肠制剂之前2片(tbs.)，在第一升(L)之后2片，在第二升之后2片；并且平均染色评分为6.8±4.0，并且平均染色的结肠区段(NSA)为1.3。

-用施用时间表B，包括在饮用肠制剂之前6片(tbs.)；平均染色评分为2.3±2.4，并且平均染色的结肠区段(NSA)为0.4。

-用施用时间表C，包括在肠制剂结束时6片(tbs.)；平均染色评分为8.1±3.6，并且平均染色的结肠区段(NSA)为1.5。

B)对于200mg剂量，

-用施用时间表D，包括在饮用肠制剂之前4片(tbs.)，在第一升之后2片，在第二升之后2片；并且平均染色评分为7.0±5.0，并且平均染色的结肠区段(NSA)为1.3。

-用施用时间表E，包括在肠准备溶液结束时8片(tbs.)；平均染色评分为9.8±4.4，并且平均染色的结肠区段(NSA)为2.3。

-用施用时间表F，包括在饮用肠制剂之前2片(tbs.)，在第一升之后2片，在第二升之后2片，以及在肠准备结束时2片；平均染色评分为9.3±4.1，并且平均染色的结肠区段(NSA)为2.2。

-用施用时间表G，包括在饮用肠制剂之前2片(tbs.)，在第一升之后2片，在第二升之后2片，以及在肠准备结束时2片；平均染色评分(TSC)为10.5±7.8，并且平均染色的结肠区段(NSA)为1.5。

-用施用时间表H，包括在第三升之后4片，以及在肠准备结束时4片；平均染色评分(TSC)为10.0±3.2，并且平均染色的结肠区段(NSA)为2.1。

-用施用时间表I，包括在第二升之后4片，以及在第三升肠制剂之后4片；平均染色评分(TSC)为11.4±3.8，并且平均染色的结肠区段(NSA)为2.8。

-用施用时间表J，包括在第二升之后2片，在第三升之后3片，以及在肠准备结束时3片；平均染色评分(TSC)为11.6±3.5，并且平均染色的结肠区段(NSA)为2.6。

使用在实施例5中所描述的相同片剂，以200mg的总剂量的亚甲基蓝以及在第二升之后2片，在第三升之后3片，及在肠准备结束时3片的施用时间表，进行了两次II期临床试验：A)96名完成了癌症筛选及监测的患者，以及B)另外的52名属于高风险群体的患者，即患有长期溃疡性结肠炎的患者。

A)癌症筛选及监测试验的目的为在经历全结肠镜检查的患者中在用亚甲基蓝片剂获得结肠粘膜染色之后评估息肉和腺瘤检测率。因此，主要终点是在结肠粘膜染色后评估息肉检测率和腺瘤检测率，

精确而言，其它的次要终点已经设定为：

-将在结肠粘膜染色后检测到的息肉和腺瘤分类，

-评估锯齿状病变检测率。

-评估亚甲基蓝片剂的粘膜染色效力

-还根据被认可的波士顿肠道准备量表(Boston Bowel Preparation Scale)(BBPS)评估肠清洁质量。

-收集关于亚甲基蓝片剂在施用200mg的单一剂量后的安全性和耐受度的数据。

受试者在结肠镜检查当天的前一天的下午开始片剂摄入，并且必须每15分钟饮用至少250ml的制剂，以便可以在4小时后完成肠制剂摄入。

测量的试验变量：

-具有息肉的患者的频率。

-具有腺瘤的患者的频率。

-对于每个患者在右结肠中的腺瘤数目。

-对于每个患者检测到的锯齿状病变的数目。

-每个区域的粘膜染色评分；总染色评分。

-肠清洁准备质量的波士顿肠道准备评分。

-到达盲肠的时间。

-从盲肠排出至出口的时间。

-不良事件。

-生命体征(血压、心率、外周血中的饱和度)、体重。

所获得的结果总结如下。

1)在每名患者的每个结肠区域中的粘膜异常(息肉、腺瘤和锯齿状病变)(A)及总数(B)

所有内窥镜检查发现由组织病理学专家分类。检测到的病变主要是低级别管状腺瘤、增生性锯齿状病变、低级别锯齿状腺瘤、低级别管状-绒毛腺瘤；以及具有原位上皮癌的高级别腺瘤，包括管状-绒毛、绒毛和管状病变。亚甲基蓝片剂的粘膜染色效力平均为“可接受”，在所有4处检查的结肠区域中有50％的粘膜被染色。根据总BBPS评分，肠清洁质量平均为“良好”。

结论：

全结肠中的息肉检测率和腺瘤检测率/患者平均为1.8±2.9个检测到的息肉和0.9±1.7个检测到的腺瘤。息肉检测率范围为每名受试者从0至20个息肉，并且在直肠和右结肠中更高，在直肠中具有10个息肉的最大值，且在右结肠中具有9个病变的最大值。腺瘤检测率范围为每名受试者从0至14个腺瘤，并且在直肠中更高，具有5个腺瘤的最大值。在右结肠中，最大检测率为8个检测到的腺瘤。锯齿状病变范围为从0至10个，在直肠中具有最高的患病率，具有9个病变的最大值。

如在下表中总结的，检测到息肉的频率为64％，腺瘤的频率为47％，以及锯齿状病变的频率为27.1％(9％的受试者在右结肠中，被认为与腺瘤处于相同的严重性水平)。

在腺管开口(pit pattern)评分和组织学分类之间存在良好的一致性。

最常受息肉影响的区域是乙状结肠和直肠(分别为21.9％和19.8％)，并且最常受锯齿状病变影响的是直肠(12.5％)。考虑到右结肠、横结肠和降结肠3个区域，横结肠具有最低的检测率，随后为右结肠和降结肠。

还通过按尺寸细分上皮内瘤形成来进行分析。按病变尺寸的检测率归纳于下表中。报告了<5mm的检测到的息肉、腺瘤和锯齿状病变的数目；平均值(±SD)和中位数(范围)。

较小的病变(≤5mm)在频率上是主要的，并且这是惊人的，因为常规的白光结肠镜检查最难以检测到这样较小的病变。≤5mm的息肉具有15处检测到的异常的最大数目。检测到的≤5mm的腺瘤的最大数目为9个，以及≤5mm的锯齿状病变的最大数目为10个。

在以下总结表中还呈现了检测到具有息肉、具有腺瘤、以及具有锯齿状病变的受试者按尺寸的比例。报告了检测到具有息肉、腺瘤和锯齿状病变的受试者按结肠区域的比例；受试者的数目(％)。

结论：

研究并证明了亚甲基蓝25mg的改进的释放片剂在检测所有的结肠区域中的粘膜病变，特别是<5mm的病变中的效力。与文献中的数据相比，已经发现高比例的患者受息肉和腺瘤的存在的影响，特别地在乙状结肠-直肠区域中以及在右结肠中。

B)在诊断患有溃疡性结肠炎≥8年且结肠炎活性指数<8的患者中研究亚甲基蓝25mg的改进的释放片剂的效力。选择这个群体，因为患有长期溃疡性结肠炎的患者对于发展结肠炎相关的结肠直肠癌具有显著更高的风险。

上皮内瘤形成检测率为16％(属于PP群体的50名受试者中有8名)，在8名受试者中检测到总共10个上皮内瘤形成。上皮内瘤形成最常在直肠-乙状结肠区段(RES)中被发现，随后为相同频率的降结肠(DC)和横结肠(TC)，以及最后为升结肠(AC)。上皮内瘤形成的数目/受试者为0.2±0.5。

如以下总结的，假阳性结果为8％(50名受试者中有4名)，而假阴性结果为6％(50名中有3名)。该方法具有大于50％(精确地57.1％)的灵敏度以及大于90％(精确地90.7％)的特异性。

研究结果与用色素内窥镜检查技术获得的文献数据的较高范围一致，所述色素内窥镜检查技术在肠准备期间染料喷洒，而不是如本文公开的口服施用染料。与随机活组织检查相比，染料喷洒技术能显著缩短检查时间：在所引用的喷洒色素内窥镜试验中，使用导管喷洒0.1％亚甲基蓝的溶液，在同一群体中以15.48％的比率检测到上皮内瘤形成。

上皮内瘤形成的检测率和真阳性和假阳性及真阴性和假阴性结果分析群体(N＝52)。

亚甲基蓝片剂的粘膜染色效力被证实平均为“可接受”，在所有4处检查的结肠区域中有50％的粘膜被染色，染色最佳的结肠区段结果为在其中更难发现发育异常病变的升结肠。大部分受试者在所有4个区域中具有NSA。根据总BBPS评分，肠清洁质量平均为“良好”。

以下报告两张结肠内窥镜检查的图像以更好地阐明本发明。图1示出了根据本发明的染料在感知深粘膜组织结构方面的对比增强效力，其中腺体的焦点被良好地界定且结肠粘膜的前息肉改变被暗化。

图2示出了半连续蓝线准确地界定了内窥镜医师必须取出的结肠平坦病变的边缘，允许病变干预以及摘取的更好的分辨。组织界定由于如本文公开的口服施用的染料而被绝对地增强。用常规喷洒技术无法获得相同的表现，因为喷洒与观察之间可用的时间极短(数秒或几分钟)。

实施例6：用于III期临床研究的亚甲基蓝(MB)片剂和安慰剂片剂

A.在III期临床研究中使用的亚甲基蓝片剂

*甘露糖醇应当补偿亚甲蓝(亚甲基蓝)含水量和纯度。

该组合物通过依次混合染料、作为两亲性组分的卵磷脂、作为亲脂性基质的组分的硬脂酸；然后添加其余组分以及特别是能够产生亲水性基质结构，直到制剂完成的纤维素而获得。将通过压缩粉末和颗粒的混合物所获得并且单位重约320mg的最终药物形式经受用A型和B型甲基丙烯酸衍生物的共聚物的混合物包衣，所述混合物由增塑剂柠檬酸三乙酯、由染料颜料二氧化钛、以及由防粘剂诸如滑石支撑，使用乙醇或水或其混合物作为溶剂。最终的膜包衣的片剂具有约350mg的理论重量，包含相当于25mg的量的干物质的活性成分亚甲基蓝。

B.在III期临床研究中使用的安慰剂片剂

片剂以与亚甲基蓝片剂相似的方式制备。

实施例7：III期临床试验

实施例6的亚甲基蓝(MB)片剂(在这个实施例中也简称为“MB片剂”)在接受筛选或监测结肠镜检查的受试者中的多中心、双盲、随机、安慰剂对照的III期临床研究中进行了研究。研究的目的是评估与实施例6的安慰剂片剂(在这个实施例中也简称为“安慰剂片剂”)相比，在用实施例6的MB片剂获得粘膜染色后，进行全结肠镜检查的患者中的腺瘤或癌检测率。检测率被定义为具有至少一个组织学上证实的腺瘤或癌的患者的比例。

该研究作为安慰剂对照的试验进行：事实上，对一组患者施用了根据实施例6的安慰剂片剂，并且所述患者以与施用了实施例6的MB片剂的患者相同的条件进行结肠镜检查。以这种方式，由于安慰剂片剂中缺乏染料，因此获得了在具有未染色的结肠的患者(施用了安慰剂片剂的患者)中与具有用亚甲基蓝染色的结肠的患者(施用了MB片剂的患者)中的腺瘤或癌检测率之间的直接比较。换言之，在该研究中比较了护理标准(白光内窥镜检查)和通过口服施用MB片剂的色素内窥镜检查。在结肠镜检查的获得及记录中，使用了最新的且技术上较先进的高清晰度(HD)内窥镜。因此，该研究允许直接比较MB片剂对腺瘤或癌检测率的影响与目前的金标准结肠镜检查，即高清晰度(HD)白光结肠镜检查。因为这个原因，在本实施例的上下文中，术语“安慰剂”、“白光高清晰度内窥镜检查”(WLHD)和“白光内窥镜检查”可以可互换地使用，并且明确表示目前结肠内窥镜检查的护理标准。由于进行结肠镜检查的内窥镜医师能够看见结肠是蓝色染色的还是未染色的，不可避免地无法获得临床研究的双盲，所以引入了另外的效力不足的(underpowered)掩蔽组。掩蔽组的患者接受减少了剂量的实施例6的MB片剂(100mg相比于200mg的标准剂量)。这些患者结肠被染成蓝色，但在计算研究参数时没有被考虑在内。以这种方式，当进行结肠镜检查时，内窥镜医师不知道患者是属于全剂量组(其患者是统计计算的一部分)还是属于“掩蔽”组(其患者接受更低剂量的组合物并且不是统计分析的一部分)。

目的

该研究的目的是评估在进行使用和不使用粘膜对比增强的全结肠镜检查的患者中的组织学上证实的腺瘤或上皮癌检测率，所述粘膜对比增强通过施用实施例6的MB片剂直至200mg的总剂量的亚甲基蓝获得。用安慰剂片剂获得的粘膜对比的缺乏相当于目前的护理标准的标准白光结肠镜检查内窥镜检查程序。

研究受试者

招募了年龄在50岁和75岁之间的受试者进行全结肠镜检查，用于筛选或监测结肠直肠癌。

饮食、肠清洁准备和剂量方案

饮食：在结肠镜检查的准备中，患者在结肠镜检查之前采用低渣饮食(lowresidue diet)持续三天。在低渣饮食的第三天，在开始摄入肠制剂和研究药物之前，患者必须禁食持续至少3小时。

肠清洁准备：在结肠镜检查当天之前的傍晚(下午6点之后)开始，所有受试者接受4升基于PEG的肠清洁制剂的全剂量方案。受试者每15分钟饮用至少250mL的溶液，以便使清洁制剂和研究药物的摄入在4小时内完成。

剂量方案：将受试者以2:2:1随机分为三组。

第1组(亚甲基蓝全剂量-200mg)接受了8片实施例6的MB片剂(具有200mg的总剂量的亚甲基蓝)：在前2升肠制剂后，接受3片MB片剂(75mg的亚甲基蓝)；在总计3升肠制剂后，接受3片MB片剂(75mg的亚甲基蓝)；以及最后，在服用完总计4升肠制剂后，接受2片MB片剂(50mg的亚甲基蓝)。

第2组(安慰剂)在片剂的数目和摄入时间表方面接受了与第一组相同的口服剂量的实施例6的安慰剂片剂：在前2升肠制剂后，接受3片安慰剂片剂；在总计3升肠制剂后，接受3片安慰剂片剂；以及最后，在服用完总计4升肠制剂后，接受2片安慰剂片剂。

第3组(亚甲基蓝低剂量-100mg)仅处于掩蔽的目的被包括，以减少由于在安慰剂和亚甲基蓝(MB)片剂200mg组之间缺乏研究者和受试者设盲(blinding)而导致的采集偏倚(acquisition bias)。这个效力不足的掩蔽组用实施例6的MB片剂处理，直至总剂量100mg的亚甲基蓝(4片MB片剂，即相对于第1组的一半剂量的亚甲基蓝)。为了保持片剂的数目相对于第1组和第2组(其受试者总计接受了8片片剂)不变，除亚甲基蓝片剂外，还施用了4片安慰剂片剂：在前2升肠制剂后，施用1片MB片剂(25mg的亚甲基蓝)和两片安慰剂片剂；在总计3升肠制剂后，施用另外2片MB片剂(50mg的亚甲基蓝)和1片安慰剂片剂；以及最后，在服用完总计4升肠制剂溶液后，施用1片MB片剂(25mg的亚甲基蓝)和1片安慰剂片剂。

参与研究的所有患者，无论他们属于第1组、第2组或第3组，都接受了详细说明应服用的肠清洁制剂的体积和应遵守的时间的时间表：

受试者必须每15分钟饮用约250mL的肠清洁制剂，相当于每小时1升肠清洁制剂。口服施用片剂和随后的片剂之间的时间段必须为1小时。

研究终点

主要终点：本研究的主要终点是，在具有至少一种组织学上证实的腺瘤或癌的受试者的比例(即腺瘤检测率)方面，评估用根据实施例6的亚甲基蓝25mg片剂进行的色素内窥镜检查相比于根据实施例6的安慰剂片剂(白光内窥镜检查)的检测效力。腺瘤被定义为组织学上证实的维也纳等级(Vienna Grade)3至4.2，或组织学上证实的传统锯齿状腺瘤(TSA)，或组织学上证实的无柄锯齿状腺瘤(SSA)。组织学上证实的癌被定义为维也纳等级4.3至5b。

次要终点：

·处理组和安慰剂对照臂之间的假阳性率；该比率被定义为，在任何切除了病变的受试者以及已经经历了至少一次切除的受试者中，不具有组织学上确认的腺瘤或癌的患者的比例。

研究时间表

筛选访问01：在筛选访问期间，患者经历血液取样以检查肾功能和肝功能。有生育能力的女性经历了血清妊娠检查。

随机访问01A：在访问期间，研究者核实了患者的血液结果是否满足合格标准，并且如果满足，他分配研究药物并随机分配患者。研究者在结肠镜检查前几天指导患者进行推荐的饮食以及按照指导进行肠清洁准备。

在为结肠镜检查进行准备时，患者在结肠镜检查之前采用低渣饮食持续三天。

结肠镜检查前一天：在根据给定指导摄入肠清洁制剂期间，患者在家中自行施用研究产品，研究产品由实施例6的亚甲基蓝片剂(第1组：处理组)、或匹配的实施例6的安慰剂片剂(第2组：白光内窥镜检查组)、或两者(第3组：减少的剂量组)组成。

结肠镜检查当天02：患者返回诊所进行结肠镜检查。结肠镜检查使用高清晰度(HD)结肠镜进行。不允许窄带成像(NBI)和所有其他电子色素内窥镜检查和对比增强技术，以及放大内窥镜检查(zoom endoscopy)或放大(magnification)。内窥镜医师进行了全结肠镜检查，并记录及移除了所有检测到的腺瘤和/或上皮癌。内窥镜医师记录了发现的息肉、腺瘤和上皮癌的形态和尺寸，并对发现的息肉、腺瘤和癌进行了分类，并且根据巴黎和工藤分类(Paris and Kudo’s classification)并遵循内窥镜检查章程记录了腺管开口。

移除的标准是不放大而具有以下三个要素的任一个的任何异常区域：(1)明显的隆起或凹陷，(2)粘膜结节状不规则，(3)浅表血管网的路线中断。将所有腺瘤和上皮癌用标准息肉切除技术移除。每当腺瘤或上皮癌因其尺寸或形态而不能被移除时，则进行数次活组织检查用于组织病理学评估。每次内窥镜检查都记录在数字媒体上。在内窥镜检查结束后，采集血液样品用于评估患者的肝功能和肾功能，并允许受试者离开诊所。

随访03：在距离结肠镜检查3-7天内安排随访。为了确认及评估恢复情况，进行了另外的血液检查。

组织病理学评估

将收集并固定于福尔马林中的组织活组织检查样品运送到当地的组织病理学实验室，在那里制备载玻片，用于运送给主要组织病理学家(central histopathologist)。将在当地组织病理学实验室进行的组织学诊断提供给患者和医师，以正确管理患者。从每个石蜡块中取出另外的切片，染色、封装，并从当地实验室运送到中心实验室用于试验分析。主要组织病理学家根据改编修订的维也纳分类和锯齿状分类将所有移除的腺瘤和癌分级：特别地，主要组织病理学家将所有传统锯齿状腺瘤或无柄锯齿状腺瘤分级。中心实验室组织病理学家提供了被认为是研究终点的显微镜评估。

纳入修改的维也纳标准的3-5级以及组织学上证实的传统锯齿状腺瘤(TSA)和组织学上证实的锯齿状病变分类的无柄锯齿状腺瘤(SSA)作为腺瘤或上皮癌的组织学证据。

胃肠瘤形成的维也纳标准

锯齿状病变分类

类别	说明
		SSA	无柄锯齿状腺瘤
TSA	传统锯齿状腺瘤
		HP	增生性息肉
FP	成纤维细胞性息肉
		MP	混合息肉

内窥镜检查程序中央读取

在内窥镜检查期间，实时地体内测量并以电子方式记录粘膜表面腺管开口和病变的性质。由主要审查者对记录的视频进行第二次读取。主要审查者关于需要切除、不需要切除、以及切除是从染色的还是未染色的区域进行的方面对切除的病变提供意见。

数据分析

主要分析是对具有在结肠镜检查期间发现的至少一个组织学上证实的腺瘤或上皮癌的患者的比例的逻辑回归。将处理、中心、年龄、性别、结肠镜检查的原因(筛选、距离前次结肠镜检查2年内的监测、及距离前次结肠镜检查多于2年后的监测)以及切除的次数(分类为“≤3”、“4-6”和“>6”)包括到回归模型中作为固定影响。

其他次要终点通过说明性统计来总结。假阳性率被评估为将不具有组织学上确认的腺瘤或癌但将具有至少一次切除的受试者的比例。

分析集

在试验结束时，总计登记了1346名受试者；其中，97名受试者因筛选失败而被排除。将其余的细分为以下分析集：

完整分析集(FAS)：接受了至少一个剂量的研究药物产品并经历了结肠镜检查(无论是否为完成状态)的所有随机化的受试者。这个分析集用于主要效力分析。FAS群体包括1205名受试者，细分如下：亚甲基蓝全剂量组中的485名受试者、安慰剂组中的479名受试者、以及亚甲基蓝低剂量组中的241名受试者。

符合方案集(PP)：满足研究方案要求且不具有可能影响研究结果的重大偏倚的所有随机化的受试者。这个分析集用于灵敏度分析。PP群体包括1137名受试者，细分如下：亚甲基蓝全剂量组中的455名受试者、安慰剂组中的457名受试者、以及亚甲基蓝低剂量组中的225名受试者。

研究结果

在研究结束时，获得了下表中报告的结果。

表1.具有至少一个组织学上证实的腺瘤或上皮癌的受试者的比例(完整分析集)。

表2.具有至少一个组织学上证实的腺瘤或上皮癌的受试者的比例(符合方案)。

表3.具有至少一个组织学上证实的腺瘤或上皮癌的受试者的比例(即：腺瘤检测率)，按切除的次数细分(完整分析集)。

表4.假阳性率(全分析集)。

表5.假阳性率(符合方案)。

表6.具有至少一个组织学上证实的腺瘤或上皮癌的受试者的比例(完整分析集)-逻辑回归模型。

讨论

该研究允许将实施例6的MB片剂对腺瘤或上皮癌检测率的影响与目前的金标准结肠镜检查、即白光结肠镜检查进行直接比较。将实施例6的安慰剂片剂用于设盲目的，并给予对照组的患者；这个组的受试者具有未染色的结肠(由于安慰剂片剂中缺乏染料)，代表用目前的护理标准，即白光结肠镜检查进行结肠的内窥镜镜检查的受试者。为了保持受试者和内窥镜医师两者的设盲，添加了一个“掩蔽”组：向这个组的受试者施用低剂量(100mg而不是200mg)的亚甲基蓝。

临床研究的高质量通过以下数项措施来确保：

-每个内窥镜医师必须满足专门设置的许可考试的内窥镜检查章程的要求；

-每次结肠镜检查用新的高清晰度系统记录，并由中心读取者以远程和设盲模式进行审查(总共5次)以防止偏倚；

-每个病变都由当地的组织学实验室进行分析，并由中心组织学读取者进行设盲重新分析(总共2次)以避免偏倚，并根据公认的指定病变分类的组织学章程来确认诊断。

200mg的剂量的亚甲基蓝(以实施例6的25mg片剂的形式施用，每名受试者总计8片)示出了腺瘤检测率(具有至少一个证实的腺瘤或上皮癌的受试者的比例)相对于安慰剂片剂，即护理标准(白光HD内窥镜检查-WLHD)的统计上显著的改进。事实上，在FAS群体中，亚甲基蓝全剂量的腺瘤检测率为56.29％，对安慰剂(WLHD)的47.81％；换言之，，实施例6的MB片剂的使用允许获得腺瘤检测率(ADR)相对于护理标准17.7％的增加，如表7中示出的。

表7.亚甲基蓝全剂量(200mg)与安慰剂(对应于护理标准，即WLHD)之间的腺瘤检测率(定义为具有至少一个证实的腺瘤或上皮癌的受试者的比例)比较-(全分析集)。

当在PP群体中计算时，这些结果甚至更好：事实上，PP群体代表完成研究而不具有重大偏差(诸如例如，缺乏对研究片剂的依从性、未完全执行全结肠镜检查、缺乏充分的肠清洁等)的受试者的子集。因此，PP代表了示出了当严格遵从研究方案程序时，200mg的全剂量的亚甲基蓝的真实效果的子集。换言之，这个子集显示出研究药物的真实效力。在这个子集中，亚甲基蓝全剂量的腺瘤检测率为58.24％对安慰剂(WLHD)的47.92％：换言之，实施例6的MB片剂的使用允许获得腺瘤检测率(ADR)相对于护理标准21.5％的增加，如表8中示出的。

表8.亚甲基蓝全剂量(200mg)与安慰剂(对应于护理标准，即WLHD)之间的腺瘤检测率(定义为具有至少一个证实的腺瘤或上皮癌的受试者的比例)比较-(符合方案)。

真正重要的是，亚甲基蓝全剂量对安慰剂的这种ADR增加并不伴随假阳性率(FPR)的增加。相反，在FAS和在PP子集两者中，亚甲基蓝全剂量的FPR显著低于安慰剂(即WLHD)的FPR：亚甲基蓝全剂量的23.31％对安慰剂的29.75％(FAS)(Δ＝6.44％)，以及亚甲基蓝全剂量组的22.74％对安慰剂的30.25％(PP)(Δ＝6.44％)。这意味着与安慰剂(即WLHD)相比，亚甲基蓝全剂量造成FPR减少21.6％(FAS)和24.8％(PP)。FPR证明，亚甲基蓝全剂量组相对于安慰剂的更高的腺瘤检测率并不以更高数目的切除的病变(切除的病变的数目越高，发现腺瘤或上皮癌的概率就越高)为条件，而是由于亚甲基蓝“标记”结肠病变并使其更容易被内窥镜医师识别的能力所致。换言之，由于本发明的制剂，内窥镜医师能够识别(并因此移除)与目前的护理标准(WLHD)相比更多的腺瘤病变或上皮癌病变。亚甲基蓝全剂量与安慰剂的FPR之间的比较在表9(FAS)和表10(PP)中报告。

表9.亚甲基蓝全剂量(200mg)与安慰剂(对应于护理标准，即WLHD)的假阳性率之间的比较-(FAS)。

表10.亚甲基蓝全剂量(200mg)与安慰剂(对应于护理标准，即WLHD)的假阳性率之间的比较-(PP)。

亚甲基蓝的效果在具有低数目的移除病变的患者中更明显。事实上，熟知的是，对于具有高数目的病变的患者，发现癌前病变(腺瘤)或上皮癌病变的概率高于在具有较低数目的病变的患者中发现癌前病变(腺瘤)或上皮癌病变的概率。切除的数目越低，在患者中可以检测到癌前病变的难度就越高。这在本研究中也很明显，其中在FAS中及在PP中，与安慰剂相比，亚甲基蓝对ADR的影响在切除的数目≤3的受试者的子集中更明显，如从表11和表12中明显的。

表11.具有0-1或≤3切除的患者的ADR之间的比较(FAS)。

表12.具有0-1或≤3切除的患者的ADR之间的比较(PP)。

逻辑回归模型分析了关键参数中的每一个对试验结果的整体统计显著性的影响。用这个模型计算的点估计和限值是试验结果的关键指标。逻辑回归模型确认了，与安慰剂(WLHD)相比，用亚甲基蓝全剂量获得的更高的腺瘤检测率是由于该处理的功效，而不是外部因素，诸如进行研究的临床中心。

在另一项分析中(见表13)，计算了仅具有组织学上证实的腺瘤的受试者(因此不包括具有上皮癌的受试者)的腺瘤检测率：数据显示，与安慰剂(FAS群体)的45.93％相比，亚甲基蓝全剂量对具有组织学上证实的腺瘤的受试者的子集的腺瘤检测率为55.26％。这意味着与安慰剂相比，亚甲基蓝全剂量造成了仅具有腺瘤的受试者的腺瘤检测率仅20.3％的百分比增加(表13)。考虑到腺瘤被认为是结肠直肠癌的前体，明显的是，亚甲基蓝200mg增加了内窥镜医师看见并移除这些前体的能力，并因此防止它们在晚期癌症中的转化。

表13.具有组织学上证实的腺瘤(不包括上皮癌)的受试者的比例-FAS。

表14.具有非息肉样病变的受试者的比例-FAS。

表15.具有微小腺瘤的受试者的比例-FAS。

值得注意的是，亚甲基蓝低剂量组(100mg的总剂量)虽然无法示出与安慰剂有任何统计上的显著差异，并且仅为了掩蔽的目的而加入临床试验，但仍示出了介于亚甲基蓝全剂量(200mg)与安慰剂之间的腺瘤检测率和假阳性率。这示出了亚甲基蓝的剂量与ADR和FPR之间的剂量响应相关性。

根据本文公开的实施方案的包含亚甲基蓝的片剂的安全性在6项临床试验中，在结肠镜检查前接受任何剂量的片剂连同口服肠清洁制剂的1087名成年人中评估。这些受试者的中位数年龄为60岁(范围为21岁至80岁)，并且58％为男性。总计798名受试者接受了意图用于商业化的全剂量和制剂(200mg＝8×25mg片剂)。在0.5％的接受200mg剂量的受试者中，由于发生不良事件而停止给药(dosing)。导致停止给药的最常见事件是呕吐(0.4％)。该产品的主要安全性数据库来源于随机化的安慰剂-对照试验(研究CB-17-01/06)，其中488名受试者接受了包含具有200mg的总剂量的亚甲基蓝的固体组合物的片剂。在结肠镜检查前，241名受试者接受了100mg的总剂量的亚甲基蓝，并且479名受试者接受了安慰剂连同口服肠清洁制剂。

表16中示出了在研究CB-17-01/06中的任何严重程度的最常见处理紧急不良反应，所述不良反应在200mg剂量组的至少1％的受试者中发生，并且具有高于在安慰剂组中的发生率。

表16.在研究CB-17-01/06中，在接受200mg亚甲基蓝的≥1％的受试者中发生处理紧急不良反应，具有大于安慰剂的发生率

比安慰剂更频繁报告的不常见的不良反应(<1％)包括：肾脏及泌尿紊乱(多尿、排尿困难)；神经系统紊乱(偏头痛)；胃肠紊乱(腹部不适、腹泻、呕血)；呼吸、胸及纵隔紊乱(咳嗽)；血液及淋巴系统紊乱(贫血)；一般紊乱和施用部位状况(疼痛、发冷)；以及眼睛紊乱(蓝色巩膜变色)。

在本文公开的一些实施方案中，是呈片剂形式的延迟释放及延长释放的固体组合物，每种组合物包含25mg的亚甲基蓝作为干物质。片剂被用在酸性pH(在胃中)稳定但在pH7或高于pH 7(通常在回肠末端中实现)崩解的肠溶衣包衣。当膜包衣溶解后，延长释放制剂提供亚甲基蓝染料的缓慢释放，造成其在被施用片剂的人类的结肠粘膜的表面上的均匀并长期的分散。亚甲基蓝以高特异性染色肠的特化柱状上皮(specialized columnarepithelium)，并且已经用于筛选结肠瘤形成、诊断绒毛萎缩、以及筛选发育不良的区域和上皮癌。异常染色是发育异常和/或早期癌症的极好标志。亚甲基蓝是一种被肠的上皮细胞吸收的活体染料。在胃肠上皮中，发育不良的上皮区域和癌症具有相对于周围健康粘膜的不同的染料摄入。在用亚甲基蓝染色后，这些异常表现为染色改变的区域，或表现为相对于周围粘膜的异质的染色模式。由于本文公开的一些固体组合物的制剂，在结肠中实现了亚甲基蓝的最大的局部生物利用度，并因此使对比增强效果最佳。

在一些实施方案中，包含亚甲基蓝的延迟及延长的片剂被用在pH 7或高于pH 7崩解的聚合物膜肠溶包衣，这允许亚甲基蓝在结肠中释放。片芯包含亚甲基蓝与提供活性成分遍及结肠的全部长度的延长释放的赋形剂。每片片剂还可以包含硬脂酸、卵磷脂、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、甘露糖醇、胶体二氧化硅、硬脂酸镁、甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯共聚物(1:1)、甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯共聚物(1:2)、柠檬酸三乙酯、滑石及氧化钛。

在健康受试者中以200mg的总剂量口服施用实施例6的片剂(8片延长释放片剂，每片包含25mg)后，峰值血浆浓度(Cmax)为1.15±0.26μg/mL，峰值浓度的中位数时间(tmax)为16.00小时(10.00小时-24.00小时)，并且曲线下面积(AUC0-∞)为28.56±9.76μg/mL×h。

在200mg的剂量的实施例6的片剂的临床研究中，受试者在给药后(post-dose)至60hr(最后评估)中在尿液中排泄可量化的量的未改变的亚甲基蓝。在给药后60小时未改变的亚甲基蓝的累计排泄(Xu0-t)为77.34±31.61mg，对应于施用的剂量的38.67±15.80％。在同一研究中，在200mg的剂量的平均半衰期(t1/2)被确定为自施用起约15小时。

在一项多中心、多国、随机化、双盲、安慰剂对照的试验中评估了实施例6的片剂用于在经历具有高清晰度白光(HDWL)的结肠镜检查的患者中检测腺瘤或癌的效力。将安排进行结肠镜检查的50岁和75岁的年龄之间的患者随机分配到200mg的总剂量的亚甲基蓝、100mg的总剂量的亚甲基蓝或安慰剂。患者在结肠镜检查的前一晚在家摄入肠清洁制剂期间，自行施用实施例6的片剂和/或安慰剂。将总计1249名患者随机分配到研究中。总体上，中位数年龄为62岁(范围：50岁-75岁)，约60％的受试者是男性，并且多于90％是白种人/高加索人。大部分患者经历结肠镜检查，或者为了筛选(47.9％)，或者为了距离前次结肠镜检查多于2年后的监测(45.9％)。主要终点是具有至少一个检测到的组织学上证实的腺瘤或上皮癌的患者的比例。组织学上证实的腺瘤被定义为维也纳等级3、4.1或4.2、或传统锯齿状腺瘤(TSA)、或无柄锯齿状腺瘤(SSA)。组织学上证实的上皮癌被定义为维也纳等级4.3、4.4、5.a或5b。对于腺瘤或上皮癌的检测，使用实施例6的片剂的200mg的总剂量的亚甲基蓝的HDWL优于使用安慰剂的HDWL(优势比[95％CI]为1.41[1.09，1.81]；Fisher精确检验p值＝0.0099)。

此外，使用实施例6的片剂的HDWL结肠镜检查的假阳性率(定义为具有至少一个切除的病变，而在任何切除的病变内不具有组织学上确认的腺瘤或上皮癌的患者的比例)与使用使用安慰剂的HDWL相比为非劣(non-inferior)的。用实施例6的片剂检测难以检测的病变，诸如非息肉样(平坦)病变和小型(<5mm)病变，也高于用安慰剂检测难以检测的病变。主要终点和选择的次要终点的结果在表17中总结。

表17.

FPR＝假阳性率；HDWL＝高清晰度白光结肠镜检查；

1.亚甲基蓝MMX 200mg对安慰剂的Fisher精确检验

2.非劣性检验。拒绝零假设H0：FPR亚甲基蓝200mg-FPR安慰剂≥15％

*p<0.05，**p<0.0001

包含本文公开的任何组合物的片剂，包括实施例6的片剂(延长释放片剂25mg)，可以以灰白色至浅蓝色、圆形、双凸膜包衣的片剂提供。包含本文公开的任何组合物的片剂，包括实施例6的片剂，可以包装在硬纸板盒中的包含8片的泡罩卡中。包含本文公开的任何组合物的片剂，包括实施例6的片剂，可以储存在20℃至25℃(68℉至77℉)；且允许至15℃至30℃(59℉至86℉)的偏移(参见USP控制的室温)。

如果出现以下超敏反应的任何迹象或症状，则可以指导施用本文公开的组合物(包括实施例6的片剂的人类)停止施用片剂及立即就医：喘鸣(wheezing)、呼吸困难、吞咽困难、皮肤反应诸如荨麻疹、皮疹或皮肤发红、瘙痒或刺痛感、晕眩或头晕、脉搏微弱或脉搏快速、血压下降、癫痫发作或意识丧失。可以指导被施用本文公开的组合物(包括实施例6的片剂)的女人告知她们的医师她们是否妊娠或哺乳。

可以指导被施用本文公开的组合物(包括实施例6的片剂)的人类在用组合物处理期间避免驾驶及使用机器，因为可能出现偏头痛、眩晕、晕厥前期、平衡紊乱、嗜睡、意识错乱和视力障碍。可以指导被施用本文公开的组合物(包括实施例6的片剂)的人类采取针对暴露于光的保护措施，因为施用包含亚甲基蓝的组合物后可能出现光毒性。可以指导被施用本文公开的组合物(包括实施例6的片剂)的人类让他们的医师知道他们是否具有肾脏或肝脏疾病。可以指导被施用本文公开的组合物(包括实施例6的片剂)的人类在结肠镜检查的前一晚按指导服用所有8片片剂，并且还按其医师的指导完成全部肠准备。可以指导被施用本文公开的组合物(包括实施例6的片剂)的人类应当与肠准备溶液、水或其它清澈液体完整吞服，而不咀嚼、压碎或破碎。

Claims

1.一种用于改进结肠中的病理检测的方法，所述方法包括向人类口服施用肠清洁溶液和8单位剂量的固体组合物，其中所述肠清洁溶液和所述8单位剂量的所述固体组合物根据包括以下的时间表被施用至所述人类：

a)在摄入2升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的所述固体组合物；

b)在摄入第3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的所述固体组合物；

c)在摄入第4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量的所述固体组合物；

其中每个单位剂量的所述固体组合物包含25mg的亚甲基蓝，并且其中所述方法的特征在于以下中的一项或更多项：

i)腺瘤检测率为至少约40％，

ii)假阳性率为不多于约35％，

iii)具有非息肉样病变的受试者的比例的检测率为至少约30％，以及

iv)具有微小腺瘤的受试者的比例的检测率为至少约25％。

2.如权利要求1所述的方法，其中方法的特征在于腺瘤检测率为至少约40％、或至少约45％、或至少约50％、或至少约55％。

3.如权利要求2所述的方法，其中腺瘤检测率为约56.29％。

4.如权利要求1、权利要求2或权利要求3所述的方法，其中方法的特征在于假阳性率为不多于约35％、或不多于约30％、或不多于约25％。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述假阳性率为约22.74％。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述方法的特征在于具有非息肉样病变的受试者的比例的检测率为至少约30％、或至少约35％、或至少约40％。

7.如权利要求6所述的方法，其中具有非息肉样病变的受试者的比例的所述检测率为约43.92％。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述方法的特征在于具有微小腺瘤的受试者的比例的检测率为至少约25％、或至少约30％、或至少约35％。

9.如权利要求8所述的方法，其中具有微小腺瘤的受试者的比例的所述检测率为约37.11％。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中每个剂量单位的所述固体组合物包含：

(a)25mg的亚甲基蓝；

(b)至少一种亲脂性化合物；

(c)至少一种亲水性化合物；

(d)任选地至少一种两亲性化合物；

(e)任选地其他生理上可接受的赋形剂；和

(f)任选地抗胃酸包衣。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述至少一种亲脂性化合物具有低于90℃的熔点。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述方法增强以下诊断中的所述结肠粘膜病变检测：癌病理、癌前病理、间期癌、腺瘤、上皮癌、锯齿状病变、发育异常、息肉、假息肉、前息肉、增生性病变和炎性病理。

13.一种改进标记人类的结肠中的粘膜病变的方法，所述方法包括向人类口服施用一个或更多个剂量单位的固体组合物，其中每个剂量单位包含：

(a)25mg的亚甲基蓝；

(b)至少一种亲脂性化合物；

(c)至少一种亲水性化合物；

(d)任选地至少一种两亲性化合物；

(e)任选地其他生理上可接受的赋形剂；和

(f)任选地抗胃酸包衣。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述至少一种亲脂性化合物具有低于90℃的熔点。

15.如权利要求13或权利要求14所述的方法，其中所述方法还包括向所述人类口服施用肠清洁溶液。

16.如权利要求13、权利要求14或权利要求15所述的方法，其中多于一个剂量的所述固体组合物被施用至所述人类。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述剂量根据关于所述肠清洁溶液的所述施用的时间表来施用。

18.如权利要求17所述的方法，其中8单位剂量的所述固体组合物根据包括以下的所述时间表被口服施用至所述人类：

b)在摄入3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的所述固体组合物；以及

c)在摄入4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量的所述固体组合物。

19.如权利要求13-18中任一项所述的方法，其中所述方法增强以下诊断中的所述结肠粘膜病变标记：癌病理、癌前病理、间期癌、腺瘤、上皮癌、锯齿状病变、发育异常、息肉、假息肉、前息肉、增生性病变和炎性病理。

20.一种固体组合物，包含至少一种染料以及至少一种生理上可接受的赋形剂，所述固体组合物包含：

(a)25mg的亚甲基蓝；

(b)至少一种亲脂性化合物；

(c)至少一种亲水性化合物；

(d)任选地至少一种两亲性化合物；

(e)任选地其他生理上可接受的赋形剂；和

(f)任选地抗胃酸包衣

用于在改进结肠中的病理检测中使用，其特征在于，8单位剂量的所述固体组合物根据包括以下的时间表被口服施用至人类：

b)在摄入第3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的所述固体组合物；和

c)在摄入第4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量的所述固体组合物，

其中所述改进的结肠中的病理检测的特征在于以下中的一项或更多项：

i)腺瘤检测率为至少约40％，

ii)假阳性率为不多于约35％，

iv)具有微小腺瘤的受试者的比例的检测率为至少约25％。

21.如权利要求20所述的固体组合物，其中所述至少一种亲脂性化合物具有低于90℃的熔点。

22.如权利要求20或权利要求21所述的固体组合物，其中方法的特征在于腺瘤检测率为至少约40％、或至少约45％、或至少约50％、或至少约55％。

23.如权利要求22所述的固体组合物，其中所述腺瘤检测率为约56.29％。

24.如权利要求20-23中任一项所述的固体组合物，其中方法的特征在于假阳性率为不多于约35％、或不多于约30％、或不多于约25％。

25.如权利要求24所述的固体组合物，其中所述假阳性率为约22.74％。

26.如权利要求20或权利要求21所述的固体组合物，其中所述方法的特征在于具有非息肉样病变的受试者的比例的检测率为至少约30％、或至少约35％、或至少约40％。

27.如权利要求26所述的固体组合物，其中具有非息肉样病变的受试者的比例的所述检测率为约43.92％。

28.如权利要求20或权利要求21所述的固体组合物，其中所述方法的特征在于具有微小腺瘤的受试者的比例的检测率为至少约25％、或至少约30％、或至少约35％。

29.如权利要求28所述的固体组合物，其中具有微小腺瘤的受试者的比例的所述检测率为约37.11％。

30.如权利要求20-29中任一项所述的固体组合物，其中所述方法增强以下诊断中的所述结肠粘膜病变检测：癌病理、癌前病理、间期癌、腺瘤、上皮癌、锯齿状病变、发育异常、息肉、假息肉、前息肉、增生性病变和炎性病理。

31.一种固体组合物，包含至少一种染料以及至少一种生理上可接受的赋形剂，所述固体组合物包含：

(a)25mg的亚甲基蓝；

(b)至少一种亲脂性化合物；

(c)至少一种亲水性化合物；

(d)任选地至少一种两亲性化合物；

(e)任选地其他生理上可接受的赋形剂；和

(f)任选的抗胃酸包衣

用于在改进人类结肠中的粘膜病变的标记中使用。

32.如权利要求31所述的固体组合物，其中所述至少一种亲脂性化合物具有低于90℃的熔点。

33.如权利要求31或权利要求32所述的固体组合物，其中多于一个剂量的所述固体组合物被施用至所述人类。

34.如权利要求33所述的固体组合物，其中所述剂量根据关于所述肠清洁溶液的施用的时间表来施用。

35.如权利要求34所述的固体组合物，其中8单位剂量的所述固体组合物根据包括以下的所述时间表被口服施用至所述人类：

b)在摄入第3升肠清洁溶液后，施用3单位剂量的所述固体组合物；以及

c)在摄入第4升肠清洁溶液后，施用2单位剂量的所述固体组合物。

36.如权利要求31-35中任一项所述的固体组合物，其中所述方法增强在以下诊断中的所述结肠粘膜病变标记：癌病理、癌前病理、间期癌、腺瘤、上皮癌、锯齿状病变、发育异常、息肉、假息肉、前息肉、增生性病变和炎性病理。

37.一种用于改进人类结肠中的病理检测的方法，包括向所述人类口服施用8片固体组合物和一定体积的肠清洁溶液，其中所述固体组合物在根据包括以下骤的时间表摄入所述肠清洁溶液期间以三个剂量口服施用：

(a)第一剂量，包括在服用至少一升肠清洁溶液后，向所述人类施用3片所述固体组合物；

(b)第二剂量，包括在施用所述第一剂量的所述固体组合物后约1小时，向所述人类施用3片所述固体组合物；以及

(c)第三剂量，包括在施用所述第二剂量的所述固体组合物后约1小时，向所述人类施用2片所述固体组合物。

38.根据权利要求37所述的方法，其中与所述施用8片所述固体组合物相结合，总计至少3升的肠清洁溶液被所述人类服用。

39.根据权利要求37或权利要求38所述的方法，其中在对所述人类进行的内窥镜检查程序之前至少8小时，全部体积的肠清洁溶液与8片所述固体组合物相结合被所述人类服用。

40.如权利要求37或权利要求38所述的方法，其中在进行内窥镜检查程序的前一天，所述人类与8片所述固体组合物相结合地服用总体积的一半或更少的肠清洁溶液，并且在进行所述内窥镜检查程序的当天，所述人类服用肠准备溶液的剩余部分。

41.根据权利要求1至权利要求19和权利要求37至权利要求40中任一项所述的方法，其中全部体积的肠准备溶液在所述内窥镜检查程序之前至少两小时被服用。

42.根据权利要求1至19和权利要求37至41中任一项所述的方法，其中，所述肠清洁溶液由所述人类根据包括以下的时间表服用：(a)在所述内窥镜检查程序的前一天，所述人类服用至少16盎司的体积的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水；以及(b)在所述内窥镜检查程序当天，所述人类服用至少16盎司的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水。

43.一种用于在内窥镜检查程序期间改进人类结肠中的病理检测的方法，包括向人类口服施用8片固体组合物和一定体积的肠清洁溶液，其中所述固体组合物在所述肠清洁溶液的摄入期间根据包括以下的时间表口服施用：(a)在所述内窥镜检查程序的前一天，所述人类服用至少16盎司的体积的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水；以及(b)在所述内窥镜检查程序当天，所述人类服用至少16盎司的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水。

44.根据权利要求43所述的方法，其中所述8片所述固体组合物在所述内窥镜检查程序的前一天被施用至所述人类。

45.根据权利要求43所述的方法，其中所述8片所述固体组合物的一部分在所述内窥镜检查程序的前一天被施用至所述人类，并且所述固体组合物的剩余片剂在所述内窥镜检查程序的当天被施用至所述人类。

46.根据权利要求43至权利要求45中任一项所述的方法，其中在进行所述内窥镜检查程序之前至少两小时，全部体积的肠准备溶液由所述人类服用。

47.根据权利要求43至权利要求46中任一项所述的方法，其中所述8片所述固体组合物在所述内窥镜检查程序之前至少8小时向所述人类施用。

48.根据权利要求43至权利要求47中任一项所述的方法，其中所述人类被施用8片固体组合物，并服用一定体积的肠清洁溶液，其中所述肠清洁溶液根据包括以下的时间表来服用：(a)在所述内窥镜检查程序的前一天，所述人类服用至少16盎司的体积的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水；以及(b)在所述内窥镜检查程序当天，所述人类服用至少16盎司的肠准备溶液，随后在接下来的一小时中服用至少32盎司的水。

49.根据权利要求43所述的方法，其中所述8片所述固体组合物被施用至所述人类，并且全部体积的肠清洁溶液在所述内窥镜检查程序之前至少8小时由所述人类服用。

50.根据权利要求43所述的方法，其中所述8片所述固体组合物被施用至所述人类，并且全部体积的肠清洁溶液在所述内窥镜检查程序之前至少2小时由所述人类服用。

51.根据权利要求43所述的方法，其中所述8片所述固体组合物在所述内窥镜检查程序之前至少8小时被施用至所述人类，并且全部体积的所述肠清洁溶液在所述内窥镜检查程序之前至少2小时由所述人类服用。

52.根据权利要求37至权利要求51中任一项所述的方法，其中所述人类以每10分钟240mL(8盎司)的速率服用总体积为4升的肠清洁溶液，直到所述4升的所述肠清洁溶液被服用，或者直到所述人类的直肠流出物清澈。

53.根据权利要求1至19和权利要求37至41中任一项所述的方法，其中所述肠清洁溶液通过鼻胃管以从约1.2升每小时至约1.8升每小时的速率递送到所述人类。

54.根据权利要求1至19和权利要求37至41中任一项所述的方法，其中所述人类以25mL/kg/小时的速率服用一定体积的肠清洁溶液，直到服用4升或直到水样便澄清且不含固体物质。

55.根据权利要求1至19、权利要求37和权利要求43中任一项所述的方法，其中所述固体组合物是调节释放组合物、延长释放组合物、延迟释放组合物或延长并延迟释放组合物。

56.如权利要求37和权利要求43中任一项所述的方法，其中腺瘤检测率为至少约40％、或至少约45％、或至少约50％、或至少约55％。

57.如权利要求37和权利要求43中任一项所述的方法，其中腺瘤检测率为约56.29％。

58.如权利要求37和权利要求43中任一项所述的方法，其中假阳性率为不多于约35％、或不多于约30％、或不多于约25％。

59.如权利要求37和权利要求43中任一项所述的方法，其中假阳性率为约22.74％。