CN110229924B - 一种鉴定萝卜肉质根紫皮性状的特异分子标记 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种鉴定萝卜肉质根紫皮性状的分子标记及鉴定方法，该分子标记是基于RsMYB1.1基因的InDel位点差异开发的分子标记，用以鉴定萝卜肉质根紫皮颜色，所述分子标记:正向引物：5’‑AATAGATGATGTTTTAGGATTG TGCA‑3’；反向引物：5’‑ACTCACTACTCCCGACGTTT‑3’。在利用杂交、回交等育种方法对紫皮萝卜进行抗性、品质、产量、株形等方面遗传改良时，通过利用本发明标记对分离世代群体植株进行早期筛选，可减少后代植株的种植与鉴定规模，提高育种效率，也可以利用本标记对实验材料或品种纯度进行鉴定。

Description

一种鉴定萝卜肉质根紫皮性状的特异分子标记

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定萝卜肉质根紫皮性状的特异分子标记。

背景技术

萝卜（Raphanus sativus L.，2n=2x=18）又名莱菔、芦菔，是十字花科萝卜属重要的蔬菜作物，具有较高的营养价值和药用食疗价值。萝卜种质资源丰富，栽培历史悠久，经过长期自然和人工选择，形成了不同皮、肉色的类型和品种。萝卜肉质根表皮颜色主要包括紫色、红色、粉红、白色、绿色和黑色。

农产品的颜色是一种重要的外观品质，直接影响消费者的选择。因此，很多研究者通过图位克隆的方法对不同蔬菜作物进行了控制有关器官表皮颜色基因的挖掘。黄瓜皮色由两个基因控制，APRR2基因单碱基的插入导致白皮黄瓜突变体的出现[1]，而MYB36基因控制黄瓜的黄绿皮色[2]。番茄R3-MYB基因SIMYBATV 4-bp的插入导致其果实花青素的积累而产生紫皮果实[3]。羽衣甘蓝紫叶基因被定位于44.8kb的区间，候选基因为二氢黄酮还原酶编码基因DFR[4]。BnAPR2基因控制甘蓝型油菜的紫叶性状。近期，研究者在红皮萝卜品种‘Lianyan No.1’中克隆获得控制其红皮性状的主效基因RsMYB1[6]。紫皮性状是萝卜肉质根重要的外观品质和营养品质，然而目前对于控制这一重要性状基因的定位与克隆研究尚未见报道。

近年来，随着人们生活水平的提高，富含硫甙和花青素的萝卜深受消费者喜爱[7]。培育不同皮色的萝卜品种已经成为一个重要的育种目标，阐明萝卜肉质根皮色的形成机制能够大大加速其育种进程。前人研究表明，红/紫皮萝卜的形成主要由于根皮花青素的积累[7，8]。花青素生物合成途径在不同植物中相对保守[7，9-11]，然而其调控机制非常复杂，目前已发现MYB、bHLH、WD40、LBD、WRKY和NAC基因家族的部分成员参与花青素生物合成的调控[12-17]。萝卜花青素合成途径主要结构基因已被克隆[7，8，11，18]。然而，目前仅有两个参与萝卜肉质根花青素生物合成的转录因子被克隆[6，19，20]。

前人研究表明萝卜肉质根皮色受单个或多个遗传位点控制，且红皮与白皮相比为显性[21，22]。何启伟等（1997）指出红皮有3对独立遗传的基因控制，这3对基因还有相互作用，其中1对可能与控制绿皮的基因连锁[22]。而Yi等（2018）发现一个萝卜红皮性状受一个主效基因的控制[6]。这些研究结果表明萝卜皮色遗传复杂，不同材料可能存在不同的遗传机制。到目前为止，紫皮萝卜的遗传模式仍不明确，控制这一性状的主效基因也尚未被鉴定。

发明内容

本发明以紫皮白肉萝卜高代自交系CX16Q-25-2与白皮白肉萝卜高代自交系CX16Q-1-6-2为亲本构建F₂分离群体进行紫皮基因的定位，对定位区间的基因进行分析，获得了候选基因（命名为RsMYB1.1），根据父母本间该基因的InDel位点差异开发了分子标记。此外，在‘XYB36-2’萝卜基因组上鉴定到4个RsMYB1.1的同源基因，根据其在染色体上的位置分别命名为RsMYB1.2-1.4。本发明对研究萝卜紫皮性状的形成机制，加快萝卜皮色育种进程具有重要意义。

本发明提供的技术方案是：一种检测萝卜肉质根紫皮性状的分子标记，其是基于RsMYB1.1基因的InDel位点差异开发的分子标记。

所述RsMYB1.1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示.

具体地，所述分子标记如下：

正向引物：5’- AATAGATGATGTTTTAGGATTGTGCA -3’；

反向引物：5’- ACTCACTACTCCCGACGTTT -3’。

同时，本发明还提供一种分子鉴别萝卜肉质根紫皮性状的方法，该方法以待鉴别萝卜品种的基因组DNA为模板，利用所述的分子标记进行鉴定。

所述的方法，进一步地，通过PCR进行扩增, 对扩增产物进行鉴定, 若具有扩增目标条带，则潜在待鉴定品种为紫皮萝卜；扩增的目标条带为244 bp或244/281 bp杂合目标条带。

所述的方法，进一步地，所述待鉴别萝卜品种可以是来自种子资源库中的资源材料、 市场上的萝卜品种或分离世代的育种材料；这些材料的基因组DNA或由萝卜种子中提取, 或从苗期乃至生长中后期的萝卜植株的任一器官或组织中提取。

本发明还提供所述的分子标记在具有紫皮性状的萝卜分子辅助选择育种中的应用。

在利用杂交、回交等育种方法对紫皮萝卜进行抗性、品质、产量、株形等方面改良过程中，因萝卜芽期及苗期下胚轴颜色与成熟其肉质根皮色不完全一致[参考文献6]，没法利用芽期和苗期的下胚轴颜色作为标志性状来进行萝卜肉质根皮色的早期鉴定和筛选。成熟萝卜肉质根皮色的稳定表达要等到萝卜植株的生长后期，如果等到此时进行皮色性状的鉴定和筛选，不仅会因为材料的种植费时费力，而且周期很长。因此，通过本发明标记对分离世代植株进行早期筛选，可减少后代植株的种植与鉴定规模，提高育种效率。

同时，本发明还提供一种控制萝卜紫皮性状的一个主效候选基因,其是RsMYB1.1基因，核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

有关萝卜肉质根紫皮性状的形成机制的研究尚未见有报道，本发明一方面在理论上解析了萝卜肉质根紫皮性状的形成机理；另一方面，在利用杂交、回交等育种方法对紫皮萝卜进行抗性、品质、产量、株形等方面遗传改良时，通过利用本发明所述标记对分离世代群体植株进行早期筛选，可减少后代植株的种植与鉴定规模，提高育种效率。另外，也可以利用本标记对实验材料或品种纯度进行鉴定。

附图说明

图1 亲本及其F₂分离群体肉质根的皮色，其中（a）CX16Q-1-6-2；（b）CX16Q-25-2；（c）CX16Q-25-2与CX16Q-1-6-2杂交后自交产生的F₂分离群体部分单株肉质根。

图2 结合QTL-seq和传统连锁分析法定位萝卜紫皮性状位点（Rsps）。（a）紫皮和白皮池在无QTL的零假设（绿色，p<0.05;橙色，p<0.01）条件下的Δ(SNP-index)；（b）利用InDel标记构建遗传图谱确认Rsps的位置。

图3 萝卜Rsa10008423与拟南芥PAP1（AT1G56650）基因CDS（a）及编码蛋白序列比对（b）

图4 候选基因分析。（a）利用半定量RT-PCR研究RsMYB1.1在两亲本中的表达；（b）两亲本RsMYB1.1序列比对，箭头显示根据序列差异设计的分子标记，该标记用于后续F₂植株的检测；（c）利用标记对F₂植株进行基因型检测，M为Marker III。

图5 根据氨基酸序列构建的萝卜RsMYB1.1同源基因及拟南芥调控花青素合成的R2R3-MYB转录因子系统进化树（a）、及基因在‘XYB36-2’（b）和‘WK10039’（c）基因组染色体上的位置。GenBank序列编号如下：AtMYB11 (NP_191820)，AtMYB12 (NP_182268.1)，AtMYB75 (NP_176057.1)，AtMYB90 (NM_105310)，AtMYB111 (NP_199744)，AtMYB114 (NP_176812)，Bordeaux-MYB1 (AKM95888.1)。

图6 利用标记对F2:3家系植株进行基因型检测，M为Marker III。

具体实施方式

下面通过具体实施方式的详细描述来进一步阐明本发明，但并不是对本发明的限制，仅仅作示例说明。

实施例1 鉴定萝卜肉质根紫皮性状的特异分子标记的开发

1 萝卜肉质根紫皮性状的遗传分析

为明确萝卜肉质根紫皮性状的遗传规律，利用紫皮萝卜高代自交系‘CX16Q-25-2’和白皮萝卜高代自交系‘CX16Q-1-6-2’（‘CX16Q-25-2’是由韩国萝卜advanced inbredline‘YR-10G’自交10代获得，‘CX16Q-1-6-2’由来源于俄罗斯的樱桃萝卜advanced inbredline ‘RUS8-10G’自交10代获得，两份材料均保存在位于北京市海淀区中关村南大街12号中国农业科学院蔬菜花卉研究所的国家蔬菜种质资源中期库），杂交产生F₁，F₁自交获得F₂分离群体（图1）。F₁植株的肉质根均为紫色（表1），而557株F₂分离群体出现白色及不同程度的粉色、红色和紫色（图1）。这一结果表明萝卜紫皮性状是由多基因控制的数量性状。然而，有颜色的肉质根与白色肉质根的比例符合3:1，表明萝卜根皮颜色的有无是由单显性基因控制的，命名为Rsps。

表1 萝卜F₁和F₂群体的皮色分离

CX16Q-25-2和CX16Q-1-6-2 分别为紫皮和白皮萝卜高代自交系。

a, χ2 (0.05, 1) = 3.84

2 利用QTL-seq进行Rsps初定位

将两个亲本（紫皮亲本CX16Q-25-2和白皮亲本CX16Q-1-6-2）和两个极端池（紫皮池和白皮池）利用Illumina测序平台进行双末端（150 bp）测序，分别获得5.6 G、5.9 G、23.4 G和30.0 G的reads，覆盖度分别达11.2×、11.8×、46.8×和60×。QTL-seq分析在参考基因组‘XYB36-2’的2号染色体31.45-33.00 Mb区间的Δ(SNP-index)在95%水平上显著大于0（图2a）。这一结果表明，在萝卜2号染色体31.45-33.00 Mb区间存在控制萝卜紫皮性状的主效QTL，即Purple Skin (Rsps)。

利用InDel标记进行精细定位

为了确认QTL-seq结果准确性及缩小Rsps的定位区间，利用288株F₂群体进行传统QTL定位。在本发明人实验室前期开发标记中筛选出三对多态性InDel引物。此外，在QTL-seq初定位区间重新开发了674对两亲本间可能差异4 bp以上的InDel标记，挑选合成其中的52对用于在两亲本和两个极端池中进行多态性标记的筛选，获得5对可用标记（见表2）。上述8对多态性InDel标记用于F₂群体的QTL检测，将Rsps定位于标记R02-7和R02-24之间1.3 cM区间，与QTL-seq检测结果一致（图2b）。根据标记R02-7和R02-24在参考基因组‘XYB36-2’的位置，定位区间为2号染色体238.51 kb（31584238-31822749 bp）。

表2 本发明所用引物序列

4 萝卜紫皮性状候选基因预测

在参考基因组‘XYB36-2’ (http://brassicadb.org/brad/datasets/pub/Genomes/Raphanus_sativus/)[23]的238.51 kb定位区间内共包含18个基因（表3）。根据功能注释，预测Rsa1008423基因为MYB转录因子。序列比对结果显示，Rsa1008423与拟南芥AtPAP1（AT1G56650）CDS序列相似性达82.40%（图3a），编码蛋白序列相似性为77.51%（图3b）。拟南芥AtPAP1调控花青素生物合成结构基因的表达[24]。Rsa10008423为萝卜中AtPAP1的同源基因，将其命名为RsMYB1.1，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

表3定位区间基因功能注释

5 候选基因分析

亲本半定量RT-PCR显示RsMYB1.1仅在紫皮萝卜亲本CX16Q-25-2的根皮中表达，而在白皮亲本不表达（图4a）。克隆两亲本RsMYB1.1基因DNA全长（SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO.2所示）和紫皮亲本CDS序列，利用DNAMAN软件进行序列比对，发现该基因在两亲本中存在较大变异（图4b）。RsMYB1.1基因全长1610 bp（SEQ ID NO. 1所示），CDS长度为750 bp（SEQ IDNO. 3所示），编码249个氨基酸；包含3个外显子和2个内含子，其中第一内含子长度达769bp，占该基因总长度的47.8%，为第二内含子长度的8.5倍。两亲本间第一和第二外显子序列高度保守，但第三外显子上存在6个SNP的变异。该基因第二内含子在两亲本间有两个SNP变异，而第一外显子存在大量的SNP及InDel变异。此外，根据InDel变异开发了一个标记（图4b），并用该标记检测F₂群体的46个有色和22个白皮萝卜，发现基因型和表型的符合度达到100%（图4c）。以上结果表明，RsMYB1.1可能是控制CX16Q-25-2紫皮性状的一个主效候选基因。

基因在萝卜基因组发生扩张

以CX16Q-25-2萝卜RsMYB1.1蛋白序列，在‘XYB36-2’和‘WK10039’基因组蛋白数据库中BLAST，分别获得4和3个同源基因，在拟南芥TAIR数据库中BLAST这些基因获得的最佳匹配蛋白均为AtPAP1（AT1G56650）。与已报道的调控拟南芥和萝卜花青素R2R3-MYB共同构建系统进化树，发现‘XYB36-2’和‘WK10039’中RsMYB1.1的同源基因及萝卜中已报道的RsMYB1均与AtPAP1聚为一个亚群（图5a）。序列比对发现Rsa10034073和Rs388430、Rsa10008423和Rs094840、Rsa10042324和Rs278810的蛋白质序列相似性分别达到96.79%、99.60%和100%，表明这3对基因分别是不同萝卜种质中的同一基因。然而，在‘XYB36-2’萝卜基因组鉴定出Rsa10033919，但在‘WK10039’基因组中未鉴定到该基因。该基因与前人在‘心里美’（绿皮红肉）、‘Bordeaux’（红皮红肉）和白皮萝卜‘LianYan1’后代中鉴定MYB1聚为一类，说明该基因与RsMYB1为同一基因。根据这些基因在‘XYB36-2’染色体上的位置，将Rsa10008423 (Rs094840)、Rsa10042324 (Rs278810)、Rsa10033919和Rsa10034073(Rs388430)分别命名为RsMYB1.1、RsMYB1.2、RsMYB1.3和RsMYB1.4（图5b、c）。

实施例2 InDel分子标记在鉴定萝卜肉质根紫皮性状中的应用

为培育不同根形兼抗病的紫皮萝卜，将来自国家蔬菜种质资源中期库中的紫皮萝卜高代自交系‘CX16Q-25-2’和白皮萝卜高代自交系‘CX16Q-1-6-2’进行杂交获得F₁植株，F₁单株自交获得F₂分离群体，将F₂植株自交获得F_2:3家系。F_2:3家系中紫皮、抗病单株是育种的目标植株，而抗性鉴定费事费力，为减少抗病鉴定的规模，可首先利用本发明的分子标记进行群体单株的鉴定和筛选，淘汰白皮植株，再对剩余的紫皮单株进行抗性鉴定，这样便可少工作量、节省育种时间，提高育种效率。利用本发明中的分子标记对F_2:3家系进行基因型鉴定的部分结果如图6所示，白皮萝卜仅有281 bp的扩增条带，而紫皮萝卜在244 bp处均有扩增条带，分子标记的基因型鉴定结果与皮色表型完全一致，说明利用该分子标记对萝卜肉质根紫皮性状的鉴定的结果准确可靠。

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<110> 中国农业科学院蔬菜花卉研究所

<120> 一种鉴定萝卜肉质根紫皮性状的特异分子标记

<160> 3

<210> 1

<211> 1610

<212> DNA

<213> CX16Q-1-6-2 RsMYB1.1

<400> 1

ATGGAGGGTTCGCCAAAAGGTTTGAGAAAAGGTGCATGGACTGCTGAAGAAGATAGCCTCTTAAGGCAATGCATTGATAAGTATGGAGAAGGCAAATGGCACCAAGTTCCTCTACGAGCAGGTATGTTACATTGTTTTTTGGTAAATTGTTACATTATTTTACTGCGCACGAATATATATATATATATATATATATATATATATATAATTAATTACTGTGAATATTTTCTTCCTCTCTGTCTATTATTAGGGAAATTATTTAAAACCGCAGGGCATAAATTTTTGTTTAAATGAATAAATCCTTAATTAATGCATATGCTTCTAAGGTTGTTCATGATAAAAATACATATGTGTTCATATTCAATTATGTCGAACCTAGACAAAGATATGTATATTTACTATTGACTCAGTTTTTAATAGATGATGTTTTAGGATTGTGCATATATAGATTAAGAAAATATTTATTGTTTTTTTTAAAATAATTTCTACACAAAAACATCATCAACTATTTTTCTAACTATAGGTCAATCAGTAATAAAATAAAAAGTATATTATAATTAGTTAATAACATTAGTTTTTAATAAATTTTGTAAATAAAATTAAAAACATTATCTAATGTAAAACAAAAAAGTTTTCGTAAAACGTCGGGAGTAGTGAGTATTATTCTACTTACATTGACGAAGCCAAAATACGCATCTAGTTTTGGTTTGTCCTGCTGCAAGTAAATGAACTCAGTAAGAATCTATTTGCGTACACGTGTGTTGCGTGTAACAACAGATTGTTTGTATTGGTCTACGTAGATTCTTCGTGATAAAATTTTAGGAGACACGAGAGTATTCTTGGTTCGTTATATAGGCTGAATTAGTTATATCAATTATTGGTTTTGTAGGGCTAAATCGGTGCAGGAAGAGCTGTAGACTAAGATGGTTGAACTATTTGAAGCCGAGTATCAAGAGAGGAAAACTTAGCTCTGATGAAGTTGATCTTCTTCTTCGCCTTCATAAGCTTCTAGGAAACAGGTTTATATTCAACACATAAATCCAACTTTATTTCTTATGTAAATATCCAAGACTAAGTCCTATATATCCAACTCATCCAAATGCATGGTAAGGTGGTCTCTAATTGCTGGTAGATTACCCGGTCGGACCGCTAATGATGTCAAGAACTACTGGAACACCCATTTGAGTAAGAAACATGAACCAGGCTGTAATACCAAGATCAGAAAGAGAAACATTCCTTGCTCTTCAACCACACCCGCCCAAAAAAATGAAGTTTTCAAACCTCGACCTCGATCCTTCACGGTTAACAACGGCTGCAGCCATTTCAATGGCAAGCCAAAAGTTGACGTTATTCCTCTATACGTTGGAGTAAACAACACTAATAATGTTTGTGAAAATAGTATCGCATGTAAAAAAGATGCGGAGAAATATGAGCTCGTTAATAACTTGATGGATGGAGAGAACATGTGGTGGAAGAGTTTGCTAGAGGAGAGCCAAGAACCAGATGCGCTTGTTCCAGAAGCTACAGAAACAGAAAAGCTGGCAACCTCGGTGTTTGACGTTGAACAACTTTGGAATCTGTTGGATGGAGAGACTGTTGAACTTGATTAG

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<211> 1651

<212> DNA

<213> CX16Q-25-2 RsMYB1.1

<400> 2

ATGGAGGGTTCGCCAAAAGGTTTGAGAAAAGGTGCATGGACTGCTGAAGAAGATAGCCTCTTAAGGCAATGCATTGATAAGTATGGAGAAGGCAAATGGCACCAAGTTCCTCTACGAGCAGGTATGTTACATTTTTTTTGGTAAATTGTTACATTATTTTACTGCGCACGAATATATATATATATATATATATATATATATATATAATTAATTACTGTGAATATTTTCTTCCTCTCTGTCTATTATTATGGAAATTATTTAAAACCGCAGTGCATAAATTTTTGTTTAAATGAATAAATCCTTAATTAATGCATATGCTTCTAAGGTTGTTCATGATAAAAATATATATGTGCTCATATTCAATTATGTCGAACCTAGACAAAGATATGTATATAAACTATTGACTCAGATTTTAATAGATGATGTTTTAGGATTGTGCATATAGATTAAGAAAACATTTATTGTTTTTTTTTAATAATTTCTAAACAAAAACATCATCAACAATTTATCTAACTAAGCCCCTTTTTCAAAAAAACAAAAAACAATTTATCTAACTGTAGCTCAATCAATAGTAAAATAAAAGTATATTATAATTACTTAATAACATTAATTGTTATTAAATTCTGTATATAAAATTAAAAACATTGTCTAGTGTAAAACAAAAAAGTTTTCGTAAAACGTCGGGAGTAGTGAGTATTATTCTACTTACATTGACGAAGCGAAAATACGCATCTAGTTTTGGTTTGTCCTGCTGCAAGAAAATGAACTCAGTAAAAATCTATTTGCATACACGTGTGTTGCGTGTAAACAACAGATTGTTTCTATTGGTCTACGTAGATTCTTCGTGATAAAAATTTTGGAGACACGAGAGTATTCTTGGTTCGTTCATTATATAGGCTGAATTAGTTATATCAATTATTGGTTTTGTAGGGCTAAATCGGTGCAGGAAGAGCTGTAGACTAAGATGGTTGAACTATTTGAAGCCGAGTATCAAGAGAGGAAAACTTAGCTCTGATGAAGTTGATCTTCTTCTTCGCCTTCATAAGCTTCTAGGAAACAGGTTTATATTCAACACATAAATCCAACTTTATTTCTTATGTAAATATCCAAGAATAAGTCCTATATATCCAACTCATCCAAATGCATGGTTAGGTGGTCTCTAATTGCTGGTAGATTACCCGGTCGGACCGCTAATGATGTCAAGAACTACTGGAACACCCATTTGAGTAAGAAACATGAACCAGGCTGTAATACCAAGATCAGAAAGAGAAACATTCCTTGCTCTTCAACCACACCCGCCCAAAAAAATGAAGTTTTCAAACCTCGACCTCGATCCTTCACGGTTAACAACGGCTGCAGCCATTTCAATGGCCAGCCAAAAGTTGACGTTATTCCTCTAAACGTTGGAGTAAACAACACTAATAATGTTTGTGAAAATAGTATCACATGTAAAAAAGATGCGGAGAAATATGAGCTCGTTAATAACTTAATGGATGGAGAGAACATGTGGTGGAAGAGTTTGCTAGAGGAGAGCCAAGAACCAGATGCGCTTGTTCCAGAAGCTACAGAAACAGAAAAGCTAGCAACCTCGGTGTTTGACGTTGAACAACTTTGGAGTCTGTTGGATGGAGAGACTGTTGAACTTGATTAG

<210> 3

<211> 750

<212> DNA

<213> CX16Q-1-6-2 RsMYB1.1 _CDS

<400> 3

ATGGAGGGTTCGCCAAAAGGTTTGAGAAAAGGTGCATGGACTGCTGAAGAAGATAGCCTCTTAAGGCAATGCATTGATAAGTATGGAGAAGGCAAATGGCACCAAGTTCCTCTACGAGCAGGGCTAAATCGGTGCAGGAAGAGCTGTAGACTAAGATGGTTGAACTATTTGAAGCCGAGTATCAAGAGAGGAAAACTTAGCTCTGATGAAGTTGATCTTCTTCTTCGCCTTCATAAGCTTCTAGGAAACAGGTGGTCTCTAATTGCTGGTAGATTACCCGGTCGGACCGCTAATGATGTCAAGAACTACTGGAACACCCATTTGAGTAAGAAACATGAACCAGGCTGTAATACCAAGATCAGAAAGAGAAACATTCCTTGCTCTTCAACCACACCCGCCCAAAAAAATGAAGTTTTCAAACCTCGACCTCGATCCTTCACGGTTAACAACGGCTGCAGCCATTTCAATGGCAAGCCAAAAGTTGACGTTATTCCTCTATACGTTGGAGTAAACAACACTAATAATGTTTGTGAAAATAGTATCGCATGTAAAAAAGATGCGGAGAAATATGAGCTCGTTAATAACTTGATGGATGGAGAGAACATGTGGTGGAAGAGTTTGCTAGAGGAGAGCCAAGAACCAGATGCGCTTGTTCCAGAAGCTACAGAAACAGAAAAGCTGGCAACCTCGGTGTTTGACGTTGAACAACTTTGGAATCTGTTGGATGGAGAGACTGTTGAACTTGATTAG

Claims (5)

1.一种鉴定萝卜肉质根紫皮性状的引物对，其特征在于：所述引物对的核苷酸序列如下:

正向引物：5’- AATAGATGATGTTTTAGGATTGTGCA -3’；

反向引物：5’- ACTCACTACTCCCGACGTTT -3’。

2.一种分子鉴别萝卜肉质根紫皮性状的方法，其特征在于：

以待鉴别萝卜品种的基因组DNA为模板，利用如权利要求1所述的引物对进行鉴定，通过PCR进行扩增, 对扩增产物进行鉴定, 若具有扩增的244 bp或244/281 bp杂合目标条带，则待鉴别萝卜品种为紫皮萝卜。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述待鉴别萝卜是资源库的种质、或市场上萝卜品种、或遗传分离群体，其基因组DNA从种子或幼苗或生长中后期的萝卜植株的任一器官中提取获得。

4.如权利要求1所述的引物对在紫皮性状的萝卜分子辅助选择育种中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：通过所述引物对对分离世代植株进行紫皮性状的早期筛选，减少后代植株的种植与鉴定规模，提高育种效率，实现在保持紫皮色的情况下，聚合抗性、优质、高产更多优异性状的育种目标。

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