CN110198950A

CN110198950A - 新的麦角甾烯醇糖苷衍生物

Info

Publication number: CN110198950A
Application number: CN201780084248.2A
Authority: CN
Inventors: 金学元; 李泰勋; 朴勋圭; 吴炫静
Original assignee: ST Pharm Co Ltd
Current assignee: ST Pharm Co Ltd
Priority date: 2017-01-23
Filing date: 2017-03-24
Publication date: 2019-09-03
Anticipated expiration: 2037-03-24
Also published as: EP3572418A4; CN110198950B; EP3572418A1; KR101900594B1; US11059852B2; KR20180086777A; WO2018135699A1; JP2020506177A; US20190337976A1; JP6851489B2

Abstract

本发明提供了新的麦角甾烯醇糖苷衍生物。根据本发明的麦角甾烯醇及其糖苷衍生物在预防和治疗皮炎中抑制随着皮肤炎症刺激而提高的趋化因子的产生并且抑制控制多种炎症介质之表达的转录因子的活性，并因此可有利地用作用于预防和治疗皮炎的药剂或者用作用于减轻特应性的化妆品材料。

Description

新的麦角甾烯醇糖苷衍生物

技术领域

本公开内容涉及麦角甾烯醇糖苷衍生物和包含它的用于预防和治疗皮炎的组合物。

背景技术

特应性追溯起源为希腊语“a-topos”，其具有例如“不寻常的”、“奇怪的”、“异常反应”等含义。从字面上看，特应性由于多种原因的复杂纠缠而发生并且重复其缓解和复发。

作为特应性疾病，有变应性哮喘、变应性结膜炎、变应性鼻炎、特应性皮炎等，其中这样的疾病可单独发生或同时组合发生。

尚未发现目前已知的特应性疾病的确切原因。然而，专家普遍认为遗传和免疫因素参与了这样的发生，而其他环境和精神因素等有助于加重疾病。

特应性皮炎是婴幼儿中最常见的皮肤病之一，并且有45％的比例在出生之后的前六个月开始，60％的比例在出生之后的前12个月之前开始，且至少85％的比例在五岁之前开始。一般来说，特应性皮炎被认为是儿童期的短暂性疾病，患有这种疾病的患者中的50％在第二个生日之前看到其症状消失。然而，其25％继续遭受此类症状直至青春期，而其剩余的25％看到此类症状持续到成年期。

特应性皮炎的主要症状是发痒。此外，一系列恶性循环以这样的方式重复：抓挠发痒点可引起湿疹性病变，从而再次发展为更严重的瘙痒。

作为目前用于治疗皮肤免疫疾病的制剂，有类固醇、抗组胺剂、免疫调节剂等，其中已知类固醇药物具有最优异的抗炎和免疫抑制作用。然而，在长期使用的情况下，报道了这样的类固醇引起副作用，例如应用此类类固醇的皮肤区域上的毛发生长；皮肤萎缩；皮肤色素减少；皮肤变薄；等。

例如，作为用于特应性皮炎的最广泛使用的治疗剂，现在有已知为类固醇的地塞米松。然而，地塞米松仅在短期治疗中有效，但是在一年或更长的长期治疗中其稳定性和效力尚未被确定，因此引起例如报道的副作用病例(例如皮肤变薄、萎缩、瘢痕、变色等)的问题。

因此，需要研究具有用于有效地预防或治疗特应性皮炎猛增的优异效力同时使化学药物的副作用最小化的新药。

在这方面，已知皮质类固醇抑制IgE(其是介导炎症的细胞因子)，并因此缓解特应性(Peter J.Barnes，Corticosteroids，IgE，and atopy.，J Clin Invest.2001Feb 1；107(3)：265-266)。然而，由于类固醇物质的副作用，皮质类固醇有些不适合用作标准治疗剂。另外，吡美莫司(pimecrolimus)和他克莫司(tacrolimus)作为用于治疗特应性的免疫调节剂最近引起了很多关注(Cury Martins J et al，Topical tacrolimus for atopicdermatitis.，Cochrane Database Syst Rev.2015Jul 1)。然而，吡美莫司和他克莫司具有降低免疫力并因此变得易于感染其他疾病的问题。

在这些背景下，本发明人发现了本公开内容的新的麦角甾烯醇糖苷衍生物，其是新化合物，并且已经确定此类衍生物可以有价值地用于预防、治疗和减轻皮炎，例如特应性皮炎等。

发明详述

技术问题

本公开内容旨在提供新的麦角甾烯醇糖苷衍生物。

本公开内容旨在提供用于预防或治疗皮炎的包含麦角甾烯醇或其糖苷衍生物的药物组合物。

本公开内容旨在提供用于减轻或缓解皮炎的包含麦角甾烯醇或其糖苷衍生物的化妆品组合物。

本公开内容旨在提供用于制备麦角甾烯醇或其糖苷衍生物的方法。

本公开内容旨在提供用于预防或治疗皮炎的方法，其包括将包含麦角甾烯醇或其糖苷衍生物的组合物施用于有需要的对象的步骤。

本公开内容旨在提供麦角甾烯醇或其糖苷衍生物在制备用于预防或治疗皮炎的药物组合物中的用途。

技术方案

作为努力发现能够治疗或减轻皮炎(特别是特应性皮炎)的化合物的结果，本发明人确定了麦角甾烯醇及其糖苷衍生物具有减轻和治疗皮炎和特应性皮炎的症状的显著效力，并且还首次开发了用麦角甾醇作为起始物料制备麦角甾烯醇及其糖苷衍生物的方法，从而完成了本发明。

为了实现本公开内容的目的，本公开内容的一个方面提供了新的麦角甾烯醇糖苷衍生物或其可药用盐。根据本公开内容的新的麦角甾烯醇糖苷衍生物可以是下式1所示化合物：

[式1]

其中R是单糖或氨基糖。

在本公开内容中，单糖具有至少两个羟基和与其相邻的羰基，并且是可由通式Cn(H₂O)n表示的碳水化合物的单体。单糖可以是己糖或戊糖。例如，己糖可以是式所示葡萄糖、半乳糖、木糖和甘露糖。另外，戊糖可如式所示。

在本公开内容中，氨基糖是其中单糖中的部分羟基(OH)(例如一个羟基)被氨基替代的化合物。特别地，氨基糖可以是葡糖胺或半乳糖胺。例如，氨基糖的氨基可以是乙酰化氨基。特别地，该基团可以是式所示N-乙酰葡糖胺。

与一般的类固醇化合物不同，本开内容的麦角甾烯醇在碳-8与碳-14之间具有双键，因此具有独特的空间构象。特别地，麦角甾烯醇及其糖苷衍生物可具有图1所示三维立体结构。

本公开内容包括上式1所示化合物的所有可药用盐形式。

例如，这样的可药用盐可以是由钙、钾、钠、镁等制备的无机离子盐；由盐酸、硝酸、磷酸、溴酸、碘酸、高氯酸、酒石酸、硫酸等制备的无机酸盐；由乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、马来酸、琥珀酸、草酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、苦杏仁酸、丙酸、柠檬酸、乳酸、乙醇酸、葡糖酸、半乳糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、葡糖醛酸、天冬氨酸、抗坏血酸、碳酸、香草酸、氢碘酸、苦杏仁酸、黏酸、硝酸、扑酸、泛酸、琥珀酸、酒石酸等制备的有机酸盐；由甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、樟脑磺酸、萘磺酸等制备的磺酸盐；由甘氨酸、精氨酸、赖氨酸等制备的氨基酸盐；由三甲胺、三乙胺、氨、吡啶、甲基吡啶等制备的胺盐；等，但是本公开内容中意指的盐的类型不限于那些列出的盐。

例如，可药用盐可以是作为无机酸的盐酸和作为有机酸的甲磺酸。

另一些方面提供了用于预防或治疗皮炎的药物组合物，其包含麦角甾烯醇、其糖苷衍生物或其可药用盐。

本公开内容的皮炎可包括特应性皮炎、接触性皮炎或脂溢性皮炎，并且特别地可以是特应性皮炎。

在本公开内容的一个具体示例性实施方案中，确定了当用麦角甾烯醇及其糖苷衍生物处理HaCaT细胞时，CCL17和CCL22基因和蛋白质表达的水平以浓度依赖性的方式降低(图2和3)。因此，可看出麦角甾烯醇及其糖苷衍生物控制角质形成细胞细胞系的炎症介导表达，因此表现出缓解皮炎的活性。

在本公开内容中，药物组合物可以是选自软膏剂、凝胶剂、乳膏剂、贴剂和气雾剂的剂型。此外，药物组合物可以是经口制剂或可注射制剂。经口制剂可以是散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、液体混悬剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂、混悬剂、内用液体剂、油性药剂或糖浆制剂，并且可注射制剂可以是无菌注射剂形式的剂型。

本公开内容的药物组合物可配制成添加有可药用载体的制剂，其中这样的制剂的含量可参考Remington’s Pharmaceutical Science(最新版)，Mack Publishing Company，Easton PA来理解。可药用载体意指药物发明领域的技术人员常规使用用于制备药物组合物的载体。例如，有乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸类、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油等。另外，可药用载体包括稀释剂或赋形剂，例如填充剂、膨胀剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等。例如，经口固体制剂可包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，其可包含至少一种赋形剂，例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等，并且可包含润滑剂等，例如硬脂酸镁和滑石。经口液体制剂可包括混悬剂、内用液体剂、油性药剂、糖浆制剂等，并且还可包含稀释剂、润湿剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等，例如水、液体石蜡等。肠胃外制剂包括无菌水溶液剂、非水溶剂、混悬剂、油性药剂、冻干制剂。非水溶剂和混悬剂包括丙二醇；聚乙二醇；植物油，例如橄榄油；可注射酯，例如油酸乙酯等。然而，本公开内容不限于上文列出的可药用载体等，并且这样的载体仅作为举例说明提供。载体可包括非天然存在的载体。

药物组合物的剂量根据患者的状况和体重、疾病的程度、药物形式、施用途径和时期而变化，但可根据情况需要来合适地选择。例如，麦角甾烯醇或其糖苷衍生物可以以每天0.01mg/kg至10mg/kg并且优选每天2.5mg/kg至5mg/kg的量施用或应用到皮肤上等。这样的施用或应用可一天一次进行，或分为一天数次。另外，药物组合物可包含基于组合物总重量的0.0001至80wt％的量的麦角甾烯醇或其糖苷衍生物。药物组合物可通过多种途径(例如，通过经口、静脉内、肌内或皮下注射)施用于哺乳动物(例如人)。

另外，除了麦角甾烯醇或其糖苷衍生物之外，本公开内容的药物组合物还可包含至少一种能够减轻、缓解、治疗或预防皮炎的活性成分。

此外，本公开内容的药物组合物可单独使用或与手术、内分泌治疗、药物治疗以及使用生物反应调节剂的方法组合使用，以减轻、缓解、治疗或预防皮炎。

另一方面提供了用于减轻或缓解皮炎的化妆品组合物，其包含麦角甾烯醇或其糖苷衍生物。所述皮炎与上述的相同。

在本公开内容中，化妆品组合物可以是选自皮肤乳液、收敛乳液、营养乳液、营养霜、按摩膏、精华、眼霜、眼部精华、清洁霜、清洁泡沫、清洁水、面膜、粉、身体乳液、身体霜、身体油、身体精华、隔离霜、粉底、染发剂、洗发剂、调理剂和身体清洁剂的剂型。

本公开内容的化妆品组合物可根据用于制备化妆品的常规方法，通过使用麦角甾烯醇或其糖苷衍生物制备成多种形式，并且可包含常规地用于化妆品组合物领域的常规辅料，例如稳定剂、增溶剂、维生素、色素和芳香剂。

另外，如果化妆品组合物被制成包含麦角甾烯醇或其糖苷衍生物的化妆品产品、洗发剂、头发洗剂、发霜、发胶等形式，则这样的组合物可通过使用常规的清洁液体、收敛液体和保湿液体进行稀释来使用。

本公开内容的化妆品组合物可包含基于组合物总重量的0.001至20wt％的量的麦角甾烯醇或其糖苷衍生物。

本公开内容旨在提供用于预防或治疗皮炎的方法，其包括将治疗有效量的麦角甾烯醇或其糖苷衍生物施用于有需要的对象的步骤。

本文中使用的术语“治疗有效量”是指有效预防或治疗皮炎的麦角甾烯醇或其糖苷衍生物的量。

根据本公开内容用于预防或治疗皮炎的方法，特别是用于预防或治疗特应性皮炎的方法不仅包括在疾病的症状表现之前处理疾病本身，而且还包括通过施用(应用到皮肤上)麦角甾烯醇或其糖苷衍生物来抑制或避免这样的症状。在控制疾病中，某种活性成分的预防或治疗剂量可根据疾病或病症的性质和严重程度以及施用活性成分的途径而变化。这样的麦角甾烯醇或其糖苷衍生物可优选以每天0.01mg/kg至10mg/kg并且更优选每天2.5mg/kg至5mg/kg的量施用或应用到皮肤等上，并且所述施用或应用可以一天一次进行或分为一天数次。然而，其剂量和频率可根据个体患者的年龄、体重和反应而变化，并且本领域普通技术人员可自然地考虑这样的因素容易地选择合适的剂量和用法。

另外，根据本公开内容用于预防或治疗皮炎的方法还可包括与麦角甾烯醇或其糖苷衍生物一起施用治疗有效量的有助于治疗该疾病的另外的活性剂，并且所述另外的活性剂可与麦角甾烯醇或其糖苷衍生物一起表现出协同作用或相加作用。

本公开内容旨在提供麦角甾烯醇或其糖苷衍生物在制备用于预防或治疗皮炎(特别是特应性皮炎)的药物组合物中的用途。用于制备药物的麦角甾烯醇或其糖苷衍生物可与可接受的辅料、稀释剂、载体等组合，并且可与其他活性剂一起制备成复合制剂，从而具有活性组分的协同作用。

如果彼此不矛盾，则本公开内容的用途、组合物和治疗方法中提到的事项等同地适用。

另外，另一方面提供了用于制备麦角甾烯醇及其糖苷衍生物的高效方法。

首先，可提供用通常存在于自然界中的麦角甾醇作为起始物料制备麦角甾烯醇。特别地，该方法包括在醇溶剂和氯化有机溶剂的存在下利用Pd/C催化剂使麦角甾醇反应以获得麦角甾烯醇的步骤。

氯化有机溶剂可选自二氯甲烷、氯仿和1，2-二氯乙烷，并且醇溶剂可以是甲醇、乙醇或丙醇。

在该步骤中，可向其中填充氢，然后在室温下长时间搅拌，然后用硅藻土(Celite)过滤，并随后在减压下浓缩。浓缩的固体可用甲醇进行重结晶并过滤以获得麦角甾烯醇。

麦角甾烯醇的糖苷衍生物可通过包括以下的步骤来制备：在氯化有机溶剂的存在下，将上述获得的麦角甾烯醇与具有受保护的OH基团的糖混合，并在酸催化剂的存在下搅拌所得到的混合物。

具有受保护的OH基团的糖的OH基团可用四苯甲酰基进行保护。其中发生葡糖基化反应的OH基团可采取其中这样的基团是吡喃糖基化的并且与三氯乙酰亚胺酯结合的形式。氯化有机溶剂可选自二氯甲烷、氯仿和1，2-二氯乙烷。

酸催化剂可选自TMSOTf、BF₃OEt₂、Cu(OTf)₂、Sc(OTf)₃、SiO₂-H₂SO₄和纤维素-HClO₄。在该步骤中，搅拌可在室温下进行，然后可将有机碱(例如TEA)添加到反应溶液中，中和、过滤并随后在减压下浓缩。

从该步骤中，可获得具有具受保护的OH基团的糖的麦角甾烯醇糖苷衍生物，并且本公开内容的麦角甾烯醇糖苷衍生物可最终通过去保护获得。特别地，可通过在氯化有机溶剂和醇溶剂的存在下将NaOMe或K₂CO₃添加至具有受保护的OH基团的麦角甾烯醇糖苷衍生物并在室温下搅拌所得到的混合物而获得麦角甾烯醇糖苷衍生物。

有益效果

根据本公开内容的麦角甾烯醇及其糖苷衍生物在预防和治疗皮炎中抑制随着皮肤炎症刺激而提高的趋化因子的产生并且抑制控制多种炎症介质之表达的转录因子的活性，并因此可有利地用作用于预防和治疗皮炎的药剂或者用作用于减轻特应性的化妆品材料。

附图简述

图1是示出了根据本公开内容的麦角甾烯醇及其糖苷衍生物的空间构象的图。

图2是确定结果的图，其中麦角甾烯醇及其糖苷衍生物抑制根据TNF-α和IFN-γ的诱导的角质形成细胞细胞系(即HaCaT细胞)中的CCL17和CCL22基因表达。

图3是确定结果的图，其中麦角甾烯醇衍生物抑制根据TNF-α和IFN-γ的诱导的角质形成细胞细胞系(即HaCaT细胞)中的CCL17和CCL22蛋白质表达。

具体实施方式

下文中，将通过以下实施例更详细地描述本公开内容。然而，提供以下实施例仅用于举例说明本公开内容的目的，并且因此本公开内容的范围不限于此。

制备实施例1.制备麦角甾烯醇

将麦角甾醇(3g)溶解在二氯甲烷(30mL)和甲醇(70mL)中，然后向其中添加钯碳(0.3g)。向其中填充氢并在室温下搅拌20小时。然后，将所得到的混合物通过硅藻土过滤，并立即在减压下浓缩。将浓缩的固体用甲醇重结晶并过滤以获得白色固体产物，收率为99％(3g)。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：3.62(brs，1H)，2.39-2.35(m，1H)，2.20-2.17(m，2H)，1.95-1.91(m，1H)，1.83-1.80(m，2H)，1.17-1.54(m，7H)，1.45-1.30(m，7H)，1.27-1.25(m，5H)，1.10-1.06(m，5H)，1.01-0.97(m，1H)，0.97-0.91(m，3H)0.85(d，6H，J＝7.9Hz)，0.78(d，6H，J＝6.6Hz)，0.69(s，3H)

¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)δ(ppm)：142.7，126.3，71.3，56.7，49.3，44.3，42.7，39.1，38.3，37.3，36.8，36.5，34.8，33.5，31.6，31.5，30.4，29.6，28.9，27.0，25.8，20.5，20.0，19.3，18，2，17.6，15.4，12.8

制备实施例2.制备麦角甾烯醇-葡萄糖

2-1.制备2，3，4，6-四苯甲酰基葡萄糖-麦角甾烯醇

将麦角甾烯醇(0.1g)和2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-a-D-吡喃葡糖基三氯乙酰亚胺酯(0.37g)溶解在二氯甲烷(2.5mL)中，然后将4A分子筛加入到其中并在室温下搅拌。向其中添加TMSOTf(4.5μL)并在室温下搅拌2.5小时。将TEA(1mL)添加到反应溶液中，中和，并随后过滤，使得所得到的滤液在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化所得到的浓缩物以获得产物，收率为90％。

2-2.制备麦角甾烯醇-葡萄糖

将制备实施例2-1中获得的2，3，4，6-四苯甲酰基葡萄糖-麦角甾烯醇(0.46g)溶解在二氯甲烷(5mL)和甲醇(5mL)中，然后向其中添加0.5M NaOMe(5.6mL)并在室温下搅拌1.5小时。将Dowex Mac-3加入到其中，中和，并随后过滤，使得所得到的滤液在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化所得到的浓缩物以获得产物，收率为71％。

¹H NMR(300MHz，吡啶-d⁵)δ(ppm)：5.11(d，1H，J＝7.7Hz)，4.65-4.68(m，1H)，4.44-4.50(m，1H)，4.28-4.39(m，2H)，4.03-4.12(m，3H)，2.36(d，1H，J＝14.5Hz)，2.25-2.28(m，2H)，2.06(m，1H)，1.83-1.96(m，4H)，1.32-1.61(m，11H)，1.06-1.21(m，8H)，0.99-1.01(m，4H)，0.88-0.90(m，6H)，0.81-0.85(m，6H)，0.63(s，3H)

¹³C NMR(75MHz，吡啶-d⁵)δ(ppm)：142.61，126.85，102.10，78.69，78.62，76.94，75.41，71.84，62.99，57.01，49.56，44.06，42.97，39.37，37.57，37.15，36.75，35.08，34.87，33.81，31.77，30.72，30.09，29.91，29.26，27.37，26.13，20.68，20.23，19.50，18.51，17.77，15.63，12.83

制备实施例3.制备麦角甾烯醇-半乳糖

3-1.制备2，3，4，6-四苯甲酰基半乳糖-麦角甾烯醇

将麦角甾烯醇(0.136g)和2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-a-D-吡喃半乳糖基三氯乙酰亚胺酯(0.5g)溶解在二氯甲烷(10mL)中，然后将4A分子筛加入到其中并在室温下搅拌。向其中添加纤维素-HClO₄(0.17mmol/g，60mg)并在室温下搅拌一天。过滤反应溶液，然后将所得到的滤液在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化所得到的浓缩物以获得产物，收率为79％。

3-2.制备麦角甾烯醇-半乳糖

将制备实施例3-1中获得的2，3，4，6-四苯甲酰基半乳糖-麦角甾烯醇(0.39g)溶解在二氯甲烷(4mL)和甲醇(4mL)中，然后向其中添加0.5M NaOMe(4.8mL)并在室温下搅拌2小时。将Dowex Mac-3加入到其中，中和，并随后过滤，使得所得到的滤液在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化所得到的浓缩物以获得产物，收率为80％。

¹H NMR(300MHz，吡啶-d⁵)δ(ppm)：5.02(d，1H，J＝7.5Hz)，4.63(s，1H)，4.48-4.54(m，3H)，4.20-4.28(m，2H)，4.04(m，1H)，2.37(d，1H，J＝14.5Hz)，2.25(m，2H)，2.09(m，1H)，1.83-1.93(m，4H)，1.34-1.61(m，11H)，1.06-1.19(m，8H)，0.99-1.01(m，4H)，0.88-0.90(m，6H)，0.82-0.85(m，6H)，0.62(s，3H)

¹³C NMR(75MHz，吡啶-d⁵)δ(ppm)：142.60，126.86，102.69，77.11，76.80，75.48，72.76，70.45，62.70，57.01，49.56，44.08，42.97，39.37，37.57，37.14，36.77，35.08，34.89，33.81，31.76，30.72，30.11，29.92，29.27，27.36，26.12，20.67，20.22，19.49，18.50，17.76，15.63，12.81

制备实施例4.制备麦角甾烯醇-木糖

4-1.制备2，3，4-三苯甲酰基木糖-麦角甾烯醇

将麦角甾烯醇(0.5g)和2，3，4-三-O-苯甲酰基-a-D-吡喃木糖基三氯乙酰亚胺酯(1.5g)溶解在二氯甲烷(30mL)中，然后将4A分子筛加入到其中并在室温下搅拌。向其中添加纤维素-HClO₄(0.17mmol/g，0.22g)并在室温下搅拌一天。过滤反应溶液，然后将所得到的滤液在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化所得到的浓缩物以获得产物，收率为82％。

4-2.制备麦角甾烯醇-木糖

将制备实施例4-1中获得的2，3，4-三苯甲酰基木糖-麦角甾烯醇(0.86g)溶解在二氯甲烷(10mL)和甲醇(10mL)中，然后向其中添加0.5M NaOMe(12mL)并在室温下搅拌2小时。将Dowex Mac-3加入到其中，中和，并随后过滤，使得所得到的滤液在减压下浓缩。通过柱色谱法纯化所得到的浓缩物以获得产物，收率为70％。

¹H NMR(300MHz，吡啶-d⁵)δ(ppm)：4.95(d，1H，J＝7.5Hz)，4.42-4.48(m，1H)，4.22-4.35(2H，m)，4.05(t，1H，J＝8.0Hz)，3.96(m，1H)，3.83(t，1H，J＝10.3Hz)，2.37(d，1H，J＝12.6Hz)，2.25-2.28(m，2H)，2.11(m，1H)，1.84-1.97(m，4H)，1.36-1.65(m，11H)，1.04-1.32(m，9H)，1.00(d，3H，J＝6.4Hz)，0.88-0.90(m，6H)，0.81-0.85(m，6H)，0.64(s，3H)

¹³C NMR(75MHz，吡啶-d⁵)δ(ppm)：142.65，126.84，103.04，78.59，77.31，75.16，71.28，67.23，57.03，49.57，44.23，42.99，39.38，37.58，37.17，36.85，35.09，34.94，33.81，31.76，30.73，30.22，29.92，29.27，27.38，26.13，20.68，20.25，19.51，18.51，17.77，15.63，12.84

实施例1.确定麦角甾烯醇及其糖苷衍生物对于抑制CCL17和CCL22表达提高的作用

当用麦角甾烯醇及其糖苷衍生物处理HaCaT细胞时，确定了存在降低由已知为炎症诱导分子的TNF-α和/或IFN-γ诱导的CCL17和CCL22表达的作用。

将1×10⁶个HaCaT细胞移入到6孔微板中，在包含10％(v/v)FBS的DMEM中培养12小时，用PBS洗涤，并随后在2mL具有2.5、5、10和20μg/mL的每种浓度的麦角甾烯醇的无血清培养基中处理1小时。然后，将细胞用炎症诱导分子(即，TNF-α、IFN-γ、或TNF-α和IFN-γ)处理，并随后培养18小时。

为了在RNA水平确定CCL17和CCL22表达的变化，用Trizol试剂盒(Invitrogen，Gaithersburg，MD)根据制造商的指南分离RNA。用分离的RNA作为模板进行逆转录以获得cDNA。

将逆转录缓冲液(5mM MgCl₂、1mM dNTP、2.5U/μL逆转录酶和2.5μM寡(dT)15asa引物(omniscript RTkit，Qiagen))、0.5U RNase抑制剂、2.5μM寡(dT)和2.5U逆转录酶添加到2μg cDNA中，并在37℃下进行反应，从而获得cDNA。

为了量化所获得的cDNA，用下表1的引物进行PCR，然后用1％琼脂糖凝胶鉴定所扩增的DNA。

【表1】

引物	引物序列
		正向CCL-17(SEQ ID No.1)	5′-ctt ctc tgc agc aca tcc-3′
反向CCL-17(SEQ ID No.2)	5′-aag acc tct caa ggc tttg-3′
		正向CCL-22(SEQ ID NO.3)	5′-agg aca gag cat ggc tcgect aca ga-3′
反向CCL-22(SEQ ID No.4)	5′-taa tgg cag gga ggt agg gct cct ga-3′
		正向β-肌动蛋白(SEQ ID NO.5)	5′-gcg gga aat cgt gcg tga cat t-3′
反向β-肌动蛋白(SEQ ID No.6)	5′-gat gga gtt gaa ggt agt ttc gtg-3′

另外，为了在蛋白质水平研究麦角甾烯醇的作用，将HaCaT细胞用浓度为2.5、5、10和20μg/mL的麦角甾烯醇处理1小时，然后用与炎症诱导相关的分子(即，TNF-α、IFN-γ、或TNF-α和IFN-γ)处理，并随后培养18小时。对于CCL17和CCL22，用ELISA试剂盒(R&DSystems，Minneapolis，MN，USA)确定培养基中存在的蛋白质的量。将2μg/mL捕获的抗体(抗CCL17抗体和抗CCL22抗体)分别以50μL的量加入到96孔板中，进行2小时包被，并随后用包含1％BSA的PBS封闭1小时。然后，将所收集的样品分别以100μL的量加入到每个孔中，并进行2小时反应。用PBS-T洗涤细胞三次，然后将50μL检测抗体(抗CCL17抗体和抗CCL22抗体)以100ng/孔加入到每个孔中，并进行2小时反应。用PBS-T洗涤细胞三次，然后将HRP-缀合的抗体以1：200稀释，然后分别以50μL的量加入到其中，并随后进行30分钟反应。用PBS-T充分洗涤细胞，然后向其中添加底物溶液(TMB)，从而在450nm处测量其吸光度。

上述实验结果示于图2和图3中。如图2中所示，确定了当用麦角甾烯醇及其糖苷衍生物处理HaCaT细胞时，CCL17和CCL22基因和蛋白质表达的水平以浓度依赖性的方式降低。

从上述结果可看出，麦角甾烯醇及其糖苷衍生物控制角质形成细胞细胞系的炎症介导表达，因此表现出缓解皮炎的活性。

从以上描述中，本公开内容所属领域的技术人员将理解，本公开内容可以以其他具体形式实施而不改变其技术范围或本质特征。在这方面，应理解，上述实施例在所有方面都是举例说明性的，并且因此本公开内容不限于此。应理解，本公开内容的范围包括来源于所附专利权利要求书之含义和范围的所有修改或改变的形式以及来源于其等同概念的那些，而不是上面的详细描述。

<110> University-Industry Cooperation Group of Kyung Hee University

<120> 新的麦角甾烯醇糖苷衍生物

<130> OPA17067-PCT

<150> KR 10-2017-0010639

<151> 2017-01-23

<160> 6

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 正向CCL-17

<400> 1

cttctctgca gcacatcc 18

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 反向CCL-17

<400> 2

cttctctgca gcacatcc 18

<210> 3

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 正向CCL-22

<400> 3

aggacagagc atggctcgcc tacaga 26

<210> 4

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 反向CCL-22

<400> 4

aggacagagc atggctcgcc tacaga 26

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 正向b-肌动蛋白

<400> 5

gcgggaaatc gtgcgtgaca tt 22

<210> 6

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 反向b-肌动蛋白

<400> 6

gatggagttg aaggtagttt cgtg 24

Claims

1.下式1所示化合物或其可药用盐：

[式1]

其中R是单糖或氨基糖。

2.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐，其中R选自

3.用于预防或治疗皮炎的药物组合物，其包含下式1所示化合物或其可药用盐作为活性成分：

[式1]

其中R选自氢、乙酰基、

4.根据权利要求3所述的用于预防或治疗皮炎的药物组合物，其中所述皮炎是选自特应性皮炎、接触性皮炎或脂溢性皮炎中的任一种。

5.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述组合物是选自软膏剂、凝胶剂、乳膏剂、贴剂和气雾剂的剂型。

6.用于减轻或缓解皮炎的化妆品组合物，其包含下式1所示化合物或其可药用盐：

[式1]

其中R选自氢、乙酰基、

7.用于制备下式1所示化合物的方法，其包括在醇溶剂和氯化有机溶剂的存在下利用Pd/C催化剂使麦角甾醇反应以获得麦角甾烯醇的步骤：

[式1]

其中R选自氢、乙酰基、

8.根据权利要求7所述的制备方法，其中所述氯化有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿和1，2-二氯乙烷。

9.用于制备具有下式1的化合物的方法，其包括以下步骤：

在醇溶剂和氯化有机溶剂的存在下利用Pd/C催化剂使麦角甾醇反应以获得麦角甾烯醇；以及

在氯化有机溶剂的存在下将上述获得的麦角甾烯醇与具有受保护的OH基团的糖混合，并在酸催化剂的存在下搅拌所得到的混合物：

[式1]

其中R选自

10.根据权利要求9所述的制备方法，其中所述酸催化剂选自TMSOTf、BF₃OEt₂、Cu(OTf)₂、Sc(OTf)₃、SiO₂-H₂SO₄和纤维素-HClO₄。

11.用于预防或治疗皮炎的方法，其包括将包含下式1所示化合物或其可药用盐的组合物施用于有需要的对象的步骤：

[式1]

其中R选自氢、乙酰基、

12.下式1所示化合物或其可药用盐在制备用于预防或治疗皮炎的药物组合物中的用途：

[式1]

其中R选自氢、乙酰基、