CN110194812A - 一种猪肺源粗品肝素钠精制方法 - Google Patents

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李泓燠
宋代丽
徐志文
朱玲
牛炎
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    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
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    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
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Abstract

本发明公开了一种猪肺源粗品肝素钠的精制方法，通过乙酸钠缓冲液溶解粗品肝素，离子交换柱层析,氯化钠‑乙酸钠溶液梯度洗脱，透析，干燥浓缩，化钠溶解，再冷冻干燥得到精品肝素。本发明方法对猪肺中提取出的肝素进行精制，减少了粗品肝素中杂质，提升肝素活性，解决猪肺中提取粗品肝素钠杂质多难以满足生产商采购需求的问题，具有推广应用价值。

Description

一种猪肺源粗品肝素钠精制方法
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种猪肺源粗品肝素钠精制方法。
背景技术
肝素钠是由肝素分子与钠盐结合而成的天然酸性黏多糖化合物，带强负电荷平均分子量为15000道尔顿。系麦克伦在1916年研究凝血问题时，从狗的肝脏中首次发现，此后引起了人们的兴趣和关注。肝素由哺乳动物体内结缔组织的肥大细胞产生，广泛存在于各种组织器官中，它不溶于有机溶剂，显酸性，带负电荷，对酶稳定。在自然界中，肝素广泛分布于哺乳动物的腺体、肌肉、肠粘膜和血液中，其中以肠粘膜和肺脏的含量最为丰富。肝素钠是用于防治血栓形成或栓塞性疾病；各种弥漫性血管内凝血；也用于血液透析、体外循环、导管术、微血管手术等操作中及某些血液标本或器械的抗凝处理。
肝素钠目前的主要来源是猪小肠，国际市场对肝素原料药的需求十分强劲，然而猪小肠价格连年上升，给肝素原料药生产业带来巨大冲击。越来越多人将目光放于肝素含量丰富的猪肺中，然而猪肺中含有大量蛋白质等杂质，利用猪肺提取出粗品肝素往往达不到肝素类药物生产商的收购需求，此时一种猪肺源肝素精制工艺的需求显得极为紧迫。
发明内容
针对现有猪肺提取肝素钠生产技术存在的问题，本发明提供一种猪肺源粗品肝素钠的精制技术，扩大肝素钠的生产来源，带来一定社会效益。
本发明精制肝素钠的目的具体通过以下技术方案实现：
一种从猪肺中提取肝素钠的方法，包括以下步骤：
1)将粗品肝素钠溶解于乙酸钠缓冲液得到肝素溶解液，置于离子交换柱中层析；
2)氯化钠－乙酸钠溶液梯度洗脱，合并洗脱峰处洗脱液；
3)将合并的洗脱液置于超滤膜进行超滤，浓缩，收集超滤液，进行干燥；
4)将干燥物溶解于氯化钠溶液中，冷冻干燥即得到精制肝素钠。
进一步的，步骤(1)中粗品肝素钠与乙酸钠缓冲溶液的质量比为1:10，所述的乙酸钠缓冲液浓度为0.05mol/L，PH值为5.6。
进一步的，步骤(1)中层析的离子交换柱选自DEAE－Sepharose fast flow，流动相为0.1mol/L的NaNO3，流速为0.6ml/min。
进一步的，步骤(2)中氯化钠浓度为1.65mol/L时，得到洗脱峰。
进一步的，步骤(3)中所述的超滤膜规格为6000-10000分子量。
进一步的，步骤(4)中干燥物与氯化钠溶液的质量比为1:20，氯化钠溶液的质量分数为2％。
本发明的有益效果为：
本发明采用猪肺中提取出的粗品肝素钠为原材料，对其进行除杂，纯化，提高其品质，使其满足肝素类药物生产厂家收购粗品肝素钠的需求。
实际生活中猪肺往往被当做废物处理，在造成浪费的同时如何处理这些“废物”也是一大难题，随着肝素原料药市场的扩大以及肝素钠生产原料小肠价格的飞升，越来越多人尝试利用猪肺进行肝素钠的提取，但猪肺中所含蛋白质等杂质多，生产出的粗品肝素往往含有大量杂质，杂质多活性低，达不到生产厂家的采购需求，生产出的肝素钠为“废品”。本发明技术采取离子交换层析法对肝素进行精制，极大程度提高肝素纯度，使用“废品”肝素钠生产出精制肝素钠。
具体实施方式
下面将结合本发明具体的实施例，对本发明技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提供猪肺提取肝素钠粗品的制作方法，具体包括以下步骤：
1)选取10g猪肺中提取出的肝素钠粗品，其效价经过羊血浆法检测为8.5U/mg，溶解于100ml乙酸钠缓冲液，其中乙酸钠缓冲液浓度为0.05mol/L，PH值为5.6。
2)将肝素溶解液放入DEAE－Sepharose fast flow离子交换层析柱中进行层析，使用流动相为0.1mol/L的NaNO3，流速为0.6ml/min。
3)层析完成后使用1-2mol/L氯化钠—乙酸钠溶液进行梯度洗脱，找到两个洗脱峰分别为1.45mol/L与1.65mol/L，对洗脱组分进行分析后得出1.65mol/L组分为肝素钠，1.45mol/L为杂质。合并1.65mol/L处洗脱液得到洗脱液22ml。
4)将洗脱液放入10000分子量的超滤膜中进行浓缩，得到2.4ml超滤液，弃去排放液。
5)将超滤液置入50℃真空恒温干燥箱中3小时，得到6.3g干燥物。
6)将干燥物加入120ml2mol/L的氯化钠溶液中搅拌至充分溶解。
冷冻干燥得到6.16g精品肝素钠，肝素钠精制完成通过羊血浆法检测出其效价为112U/mg。
实施例2
本实施例提供了具体的肝素钠提取过程，具体包括以下步骤：
1)选取10g猪肺中提取出的肝素钠粗品，其效价经过羊血浆法检测为9.0U/mg，溶解于100ml乙酸钠缓冲液，其中乙酸钠缓冲液浓度为0.05mol/L，PH值为5.6。
2)将肝素溶解液放入DEAE－Sepharose fast flow离子交换层析柱中进行层析，使用流动相为0.1mol/L的NaNO3，流速为0.6ml/min。
3)层析完成后使用1-2mol/L氯化钠—乙酸钠溶液进行梯度洗脱，找到两个洗脱峰分别为1.45mol/L与1.65mol/L，对洗脱组分进行分析后得出1.65mol/L组分为肝素钠，1.45mol/L为杂质。合并1.65mol/L处洗脱液得到洗脱液22ml。
4)将洗脱液放入10000分子量的超滤膜中进行浓缩，得到2.3ml超滤液，弃去排放液。
5)将超滤液置入50℃真空恒温干燥箱中3小时，得到6.1g干燥物。
6)将干燥物加入120ml2mol/L的氯化钠溶液中搅拌至充分溶解。
冷冻干燥得到6.06g精品肝素钠，肝素钠精制完成通过羊血浆法检测出其效价为113U/mg。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (7)

1.一种从猪肺中提取肝素钠的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将粗品肝素钠溶解于乙酸钠缓冲液得到肝素溶解液，置于离子交换柱中层析；
2)氯化钠－乙酸钠溶液梯度洗脱，合并洗脱峰处洗脱液；
3)将合并的洗脱液置于超滤膜进行超滤，浓缩，收集超滤液，进行干燥；
4)将干燥物溶解于氯化钠溶液中，冷冻干燥即得到精制肝素钠。
2.根据权利要求1所述的一种从猪肺中提取肝素钠的方法，其特征在于，步骤(1)中粗品肝素钠与乙酸钠缓冲溶液的质量比为1:10。
3.根据权利要求2所述的一种从猪肺中提取肝素钠的方法，其特征在于，所述的乙酸钠缓冲液浓度为0.05mol/L，PH值为5.6。
4.根据权利要求1所述的一种从猪肺中提取肝素钠的方法，其特征在于，步骤(1)中层析的离子交换柱选自DEAE－Sepharose fast flow，流动相为0.1mol/L的NaNO3，流速为0.6ml/min。
5.根据权利要求1所述的一种从猪肺中提取肝素钠的方法，其特征在于，步骤(2)中氯化钠浓度为1.65mol/L时，得到洗脱峰。
6.根据权利要求1所述的一种从猪肺中提取肝素钠的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的超滤膜规格为6000-10000分子量。
7.根据权利要求1所述的一种从猪肺中提取肝素钠的方法，其特征在于，步骤(4)中干燥物与氯化钠溶液的质量比为1:20，氯化钠溶液的质量分数为2％。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107033259A (zh) * 2016-12-22 2017-08-11 青岛九龙生物医药集团有限公司 一种降低依诺肝素钠中乙酸钠杂质含量的方法
CN107056966A (zh) * 2017-04-27 2017-08-18 甘肃省金羚集团药业有限公司 一种肝素钠的精制方法

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Non-Patent Citations (2)

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Title
于广利等主编: "《糖药物学》", 31 October 2012 *
张晓娟等: "猪肺肝素钠提取工艺优化、分离与初步鉴定", 《精细化工》 *

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