CN110184216A - 一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基及发酵方法 - Google Patents

一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基及发酵方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基及发酵方法，其发酵培养基组成为：所述发酵培养基的组成及含量如下：糊精5～10g/L、葡萄糖5～15g/L、酵母提取物5～20g/L和玉米浆粉1～5g/L，消泡剂0.3～1g/L，余量为水。在发酵过程中，移种后初期发酵温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，且采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液；发酵周期72～96h，发酵结束后收集赤红球菌菌体细胞。本发明在发酵过程中采用变温和补料工艺，促进菌体生长，大幅度提高产量，工艺操作简单，便于大规模工业生产，降低生产成本。

Description

一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基及发酵方法
【技术领域】
本发明涉及生物发酵领域，具体涉及一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基及发酵方法。
【背景技术】
红球菌属广泛分布于土壤、岩石、地下水、海底沉积物及动物体内。赤红球菌作为红球菌中的一员，具有广泛的应用领域。申请号为03101920.X的中国专利公开了了赤红球菌产生生物乳化剂，明显促进烷烃及多环芳烃的降解，可用于含油废水的生物处理和石油污染的土壤的生物修复(生物整治)。申请号为201310487263.5的中国专利揭示赤红球菌作为降解苯酚的专性菌，可高效去除苯酚，对于解决污水中高浓度酚类污染物有实用意义。另外，申请号为201610895211.5的中国专利发明用于产天然红色素的一赤红球菌，可大规模工业化发酵生产，有巨大的发展潜力。申请号为201610276747.9的中国专利发明的赤红球菌微生物制剂具有修复农药污染土壤及防病促生效果显著，环境安全性好。赤红球菌提取物系赤红球菌菌株经生物发酵、细胞破碎和溶媒处理后的提取物，赤红球菌产量的提高有利于赤红球菌提取物的高效制备。因此迫切需要提供一种产量高的赤红球菌发酵培养基及其相应的规模化生产方法。
本发明从赤红球菌培养基组成和发酵工艺入手，提供一种变温和补糖发酵的方法，控制罐规模发酵参数，提高赤红球菌产量，从而降低成本，提升综合竞争能力。
【发明内容】
本发明要解决的技术问题之一，在于提供一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基，能够大大提高赤红球菌菌体细胞产量，而降低成本，提升综合竞争能力。
本发明是这样实现上述技术问题之一的：
一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基，所述发酵培养基的组成及含量如下：糊精5～10g/L、葡萄糖5～15g/L、酵母提取物5～20g/L和玉米浆粉1～5g/L，消泡剂0.3～1g/L，余量为水。
进一步地，所述消泡剂为豆油或聚醚消泡剂。
进一步地，所述聚醚消泡剂以及含量为GPE 0.5g/L。
本发明要解决的技术问题之二，在于提供一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵方法，该方法在发酵过程中采用变温和补糖的方式，促进菌体生长，大幅度提高赤红球菌菌体细胞产量，而降低成本，提升综合竞争能力。
本发明是这样实现上述技术问题之二的：
一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵方法，所述方法中的发酵培养基是基于权利要求1-3任一项所述的一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基中所述的发酵培养基；所述方法步骤如下：
将赤红球菌菌株经斜面活化和种子培养后，按0.1～0.5％接种量移种至种子罐种子培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.3～1.0(V/V)，搅拌速度200±20r/min，温度28℃±1℃下培养32～36h，按20-30％接种量移种至繁殖罐种子培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.3～1.0(V/V)，搅拌速度200±20r/min，温度28℃±1℃下培养16～20h，按5～20％移种量将生长良好的种子液移入发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度控制在28℃±1℃，24h后发酵温度控制在32℃±1℃；
采用流加法补糖：发酵过程中发酵液还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液；发酵周期72～96h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞。
本发明具有如下优点：
本发明从赤红球菌培养基组成和发酵工艺入手，提供一种变温和补糖发酵的方法，控制罐规模发酵参数，且缩短发酵周期，提高赤红球菌产量，从而降低成本；另外，本发明工艺操作简单方便，适于大规模工业生产，提升综合竞争能力。
【具体实施方式】
本发明涉及一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基，所述发酵培养基的组成及含量如下：糊精5～10g/L、葡萄糖5～15g/L、酵母提取物5～20g/L和玉米浆粉1～5g/L，消泡剂0.3～1g/L，余量为水。
所述消泡剂为豆油或聚醚消泡剂。
优选的，所述聚醚消泡剂以及含量为GPE 0.5g/L。
本发明还涉及一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵方法，所述方法中的发酵培养基是基于上述一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基中所述的发酵培养基；所述方法步骤如下：
将赤红球菌菌株经斜面活化和种子培养后，按0.1～0.5％接种量移种至种子罐种子培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.3～1.0(V/V)，搅拌速度200±20r/min，温度28℃±1℃下培养32～36h，按20-30％接种量移种至繁殖罐种子培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.3～1.0(V/V)，搅拌速度200±20r/min，温度28℃±1℃下培养16～20h，按5～20％移种量将生长良好的种子液移入发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度控制在28℃±1℃，24h后发酵温度控制在32℃±1℃；
采用流加法补糖：发酵过程中发酵液还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液；发酵周期72～96h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞。
以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
为验证本发明中采用变温和补料工艺提高赤红球菌产量的发酵生产有益影响。将赤红球菌经斜面活化和种子培养后，进行三级发酵赤红球菌，测定发酵液中赤红球菌产量。以下实施例选用的菌株为赤红球菌(Rhodococcus ruber)FIM-12，于2019年04月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.17525；所述赤红球菌(Rhodococcus ruber)FIM-12是从海南文昌八门湾红树林表层底泥分离筛选得到。
实施例一
采用变温和补料工艺提高赤红球菌产量的发酵工艺方法，是由赤红球菌(Rhodococcus ruber)FIM-12作为出发菌株，经过常规的纯种扩大培养，然后三级罐上发酵赤红球菌。常规的纯种扩大培养一般包括砂土孢子制备工序、母瓶斜面孢子制备工序、子瓶斜面孢子制备工序、种子制备工序。
砂土孢子制备工序的步骤为：取河沙加入10％稀盐酸，加热煮沸30分钟，倒去酸水，用自来水冲洗至中性，烘干过40目筛。另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。烘干碾碎，过100目筛。砂和土以3:1的比例混合均匀，装入10×100mm的小试管中，每管装1g左右，塞上棉塞，灭菌烘干。将他克莫司产生菌的斜面孢子在无菌条件下接入合格的砂土管中，标识菌株名称及保藏日期，置于放有干燥剂的容器中，盖紧密封，于4℃冰箱冷藏保存。
母瓶孢子斜面制备工序的步骤为：在无菌条件下从砂土管中挑取适量砂土接于母瓶斜面培养基上，标识后，放于温度28±1℃的恒温室培养8d，得母瓶孢子斜面，成熟后放于4℃冰箱冷藏备用。
子瓶孢子斜面制备工序的步骤为：在无菌条件下用接种铲从母瓶孢子菌种斜面上刮取一定量孢子，划线接至子瓶孢子斜面培养基上，同时做露碟和肉汤无试检查，接好的斜面标识后放于温度28±1℃恒温室培养8d，成熟后放于4℃冰箱冷藏备用。
子瓶孢子液制备工序的步骤为：选取生长合格的1个子瓶孢子斜面，在无菌条件下用接种铲将子瓶孢子斜面上的菌层刮下碾散后各加入20mL无菌水，搅拌均匀后过滤得到子瓶孢子液，标识后放于4℃冰箱保存。
种子制备工序的步骤为：在无菌条件下，将合格的子瓶孢子液按0.3％接种量以火焰法移种至50L种子罐(一级)种子培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.3～1.0(V/V)，搅拌速度200±20r/min，温度28℃±1℃下培养36h，将生长良好的种子液按25％接种量移种至100L繁殖罐(二级)种子培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.3～1.0(V/V)，搅拌速度200±20r/min，温度28℃±1℃下培养18h，种子液生长良好可移入发酵罐。
发酵制备工序中发酵工艺如下：按10％移种量将生长良好的二级种子移入500L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，每隔8小时检测发酵液还原糖含量，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精10g/L，葡萄糖15g/L，酵母提取物15g/L，玉米浆粉3g/L，GPE 0.5g/L。
实施例二
种子液的制备同实施例一。
按5％移种量将生长良好的二级种子液移入500L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，每隔8小时检测发酵液还原糖含量，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精5g/L，葡萄糖10g/L，酵母提取物20g/L，玉米浆粉1g/L，GPE 0.3g/L。
实施例三
种子液的制备同实施例一。
按15％移种量将生长良好的二级种子液移入500L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，每隔8小时检测发酵液还原糖含量，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精7g/L，葡萄糖10g/L，酵母提取物5g/L，玉米浆粉5g/L，GPE 1g/L。
实施例四
种子液的制备同实施例一。
按5％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，每隔8小时检测发酵液还原糖含量，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精10g/L，葡萄糖15g/L，酵母提取物15g/L，玉米浆粉3g/L，GPE 0.5g/L。
实施例五
种子液的制备同实施例一。
按10％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，每隔8小时检测发酵液还原糖含量，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精10g/L，葡萄糖15g/L，酵母提取物15g/L，玉米浆粉3g/L，GPE 0.5g/L。
实施例六
种子液的制备同实施例一。
按10％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，每隔8小时检测发酵液还原糖含量，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精10g/L，葡萄糖10g/L，酵母提取物15g/L，玉米浆粉3g/L，GPE 0.5g/L。
实施例七
子瓶孢子液的制备同实施例一。
按10％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精10g/L，葡萄糖5g/L，酵母提取物15g/L，玉米浆粉3g/L，GPE 0.5g/L。
实施例八
种子液的制备同实施例一。
按10％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精8g/L，葡萄糖15g/L，酵母提取物15g/L，玉米浆粉3g/L，GPE 0.5g/L。
实施例九
种子液的制备同实施例一。
按10％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精10g/L，葡萄糖15g/L，酵母提取物8g/L，玉米浆粉5g/L，GPE0.5g/L。
实施例十
种子液的制备同实施例一。
按10％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精10g/L，葡萄糖15g/L，酵母提取物10g/L，玉米浆粉3g/L，GPE 0.5g/L。
实施例十一
种子液的制备同实施例一。
按10％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精10g/L，葡萄糖15g/L，酵母提取物15g/L，玉米浆粉4g/L，GPE 0.5g/L。
实施例十二
种子液的制备同实施例一。
按10％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精10g/L，葡萄糖15g/L，酵母提取物15g/L，玉米浆粉3g/L，GPE 0.3g/L。
实施例十三
种子液的制备同实施例一。
按10％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度28℃±1℃，24h后发酵温度32℃±1℃，采用流加法补糖：发酵液中还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液。发酵周期72h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基组成如下：糊精10g/L，葡萄糖10g/L，酵母提取物15g/L，玉米浆粉3g/L，GPE0.8g/L。
表1不同发酵工艺在500L发酵罐中的赤红球菌产量
批号 赤红球菌菌体细胞产量(g/L)
实施例一 48.5
实施例二 45.1
实施例三 47.3
表2不同发酵工艺在1000L发酵罐中的赤红球菌产量
实施例十四(对照组)
种子液的制备同实施例一。
按5％移种量将生长良好的二级种子液移入500L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度200r/min，移种后发酵温度32℃±1℃，发酵周期120h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基(对照)组成如下：葡萄糖10g/L，酵母提取物10g/L，硅油0.5g/L。
实施例十五(对照组)
种子液的制备同实施例一。
按10％移种量将生长良好的二级种子液移入1000L发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度200r/min，移种后发酵温度32℃±1℃，发酵周期120h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞，检测发酵液中赤红球菌菌体细胞产量。
所述发酵培养基(对照)组成如下：葡萄糖10g/L，酵母提取物10g/L，硅油0.5g/L。
表3对照组不同规模发酵的赤红球菌产量
批号 赤红球菌菌体细胞产量(g/L)
实施例十四 32.3
实施例十五 32.9
如表1、表2与表3比较，以在不同优化培养基中采用变温和补料工艺，其发酵生产赤红球菌，其发酵产量不低于44.8g/L，明显高于对照不同规模实施例的产量，且缩短发酵周期，减低了赤红球菌生产成本。
另外，需要说明的是，在发明所涉及的各培养基的组分如下：营养琼脂斜面培养基的组分为：玉米浆粉1.0％，牛肉膏0.3％，NaCl 0.5％，琼脂2.0％，余量为蒸馏水，pH7.2，121℃高压蒸汽灭菌30min；种子培养基的组分为：葡萄糖1.0％、酵母提取物1.0％、余量为蒸馏水，pH7.2，121℃高压蒸汽灭菌30min；且在无特殊说明的情形下，本发明中的百分数均为质量百分数。
本发明的有益效果在于：在发酵过程中采用变温和补料工艺，促进菌体生长，缩短发酵周期，大幅度提高菌体产量，工艺操作简单方便，适于大规模工业生产，降低生产成本，增强产品的市场竞争力。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。

Claims (4)

1.一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基，其特征在于：所述发酵培养基的原料组成及含量如下：糊精5～10g/L、葡萄糖5～15g/L、酵母提取物5～20g/L和玉米浆粉1～5g/L，消泡剂0.3～1g/L，余量为水。
2.根据权利要求1所述的一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基，其特征在于：所述消泡剂为豆油或聚醚消泡剂。
3.根据权利要求2所述的一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基，其特征在于：所述聚醚消泡剂以及含量为GPE0.5g/L。
4.一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵方法，其特征在于：所述方法中的发酵培养基是基于权利要求1-3任一项所述的一种高产赤红球菌菌体细胞的发酵培养基中所述的发酵培养基；所述方法步骤如下：
将赤红球菌菌株经斜面活化和种子培养后，按0.1～0.5％接种量移种至种子罐种子培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.3～1.0(V/V)，搅拌速度200±20r/min，温度28℃±1℃下培养32～36h，按20-30％接种量移种至繁殖罐种子培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.3～1.0(V/V)，搅拌速度200±20r/min，温度28℃±1℃下培养16～20h，按5～20％移种量将生长良好的种子液移入发酵罐发酵培养基中，罐压0.04±0.01Mpa，通气量1:0.5～1.5(V/V)，搅拌速度控制在80～200r/min，移种后发酵初期温度控制在28℃±1℃，24h后发酵温度控制在32℃±1℃；
采用流加法补糖：发酵过程中发酵液还原糖的含量控制在0.3～1.5％，当还原糖浓度＜0.3％，补入已灭菌的葡萄糖溶液；发酵周期72～96h，发酵结束后获得赤红球菌菌体细胞。
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于淼等: "产红色素赤红球菌的筛选鉴定和产色素条件的优化", 《食品科技》 *

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