CN110178799B - 一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法 - Google Patents
一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110178799B CN110178799B CN201910544737.2A CN201910544737A CN110178799B CN 110178799 B CN110178799 B CN 110178799B CN 201910544737 A CN201910544737 A CN 201910544737A CN 110178799 B CN110178799 B CN 110178799B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- haliotis discus
- discus hannai
- triploid
- parent
- fertilization
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000143510 Haliotis discus hannai Species 0.000 title claims abstract description 73
- 208000026487 Triploidy Diseases 0.000 title claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims abstract description 48
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims abstract description 25
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 20
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 12
- 241000237891 Haliotidae Species 0.000 claims abstract description 11
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 210000004508 polar body Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 230000032696 parturition Effects 0.000 claims abstract description 3
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 claims description 37
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims description 31
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims description 31
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000013535 sea water Substances 0.000 claims description 26
- BVIAOQMSVZHOJM-UHFFFAOYSA-N N(6),N(6)-dimethyladenine Chemical compound CN(C)C1=NC=NC2=C1N=CN2 BVIAOQMSVZHOJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 11
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 230000004899 motility Effects 0.000 claims description 2
- 230000005070 ripening Effects 0.000 claims 2
- KEQXNNJHMWSZHK-UHFFFAOYSA-L 1,3,2,4$l^{2}-dioxathiaplumbetane 2,2-dioxide Chemical group [Pb+2].[O-]S([O-])(=O)=O KEQXNNJHMWSZHK-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 claims 1
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-dimethylaminopyridine Substances CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 13
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 13
- 230000012447 hatching Effects 0.000 abstract description 7
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 abstract description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 3
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 abstract description 2
- 231100001075 aneuploidy Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000008144 egg development Effects 0.000 abstract description 2
- 241001489139 Haliotis discus Species 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 5
- 230000019100 sperm motility Effects 0.000 description 5
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 2
- 230000026109 gonad development Effects 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 2
- 241000237504 Crassostrea virginica Species 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 241000237536 Mytilus edulis Species 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000237503 Pectinidae Species 0.000 description 1
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N UNPD149280 Natural products N1C(=O)C23OC(=O)C=CC(O)CCCC(C)CC=CC3C(O)C(=C)C(C)C2C1CC1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 1
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N cytochalasin B Natural products C[C@H]1CCC[C@@H](O)C=CC(=O)O[C@@]23[C@H](C=CC1)[C@H](O)C(=C)[C@@H](C)[C@@H]2[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N cytochalasin B Chemical compound C([C@H]1[C@@H]2[C@@H](C([C@@H](O)[C@@H]3/C=C/C[C@H](C)CCC[C@@H](O)/C=C/C(=O)O[C@@]23C(=O)N1)=C)C)C1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 235000020638 mussel Nutrition 0.000 description 1
- 238000011197 physicochemical method Methods 0.000 description 1
- 208000006155 precocious puberty Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000020637 scallop Nutrition 0.000 description 1
- 235000014102 seafood Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
- A01K67/0333—Genetically modified invertebrates, e.g. transgenic, polyploid
- A01K67/0334—Genetically modified Molluscs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法，涉及贝类的培育方法。种鲍的选择及促熟；人工催产；配子的选择和处理；同步受精；药物诱导；药物去除；孵化。以确保皱纹盘鲍种鲍性腺成熟度、同步受精为前提，进一步优化诱导条件从而高效稳定的获得皱纹盘鲍三倍体。确保同步受精：严格避免配子在排放过程中提前接触，镜检确认不存在意外受精，保证同步受精和受精卵发育的一致性。优化诱导条件：以时时镜检观察确定对照组受精卵PB1比例70％～80％作为处理时间节点，确保第一极体有效释放，避免出现四倍体和非整倍体。稳定高效的诱导率：三倍体诱导率为100％或接近于100％。
Description
技术领域
本发明涉及贝类的培育方法，尤其是涉及一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法。
背景技术
鲍是名贵的海珍品，被誉为“海产八珍“之首。而我国作为世界第一养鲍大国，2017年全国鲍鱼总产量为14.85万吨，年产值超两百亿元。目前，我国鲍的主要养殖种类为皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)，养殖范围自我国北方黄渤海地区延伸至福建沿岸，其中福建省养殖产量高达至12.34万吨(2017年)，占全国鲍总产量的83.1％。然而，在福建海区，秋季为皱纹盘鲍的繁殖盛期，此时海区养殖皱纹盘鲍的性腺发育饱满，易排放精卵，性腺排放后养殖鲍体质虚弱，在环境胁迫下易导致死亡。另一方面，近十年来在鲍苗培育期间广泛采用配合饲料作为主要饲料，鲍苗生长到壳长3.0～3.5cm时性腺发育明显，出现性早熟现象，在水泥池高密度培育条件下容易因集中性腺排放而致大量死亡，同时出现滞长，这是我国鲍鱼主养区出现的新问题，亟需解决。
采用理化方法或生物学杂交可获得贝类三倍体，由于比二倍体多增加了一套染色体组，通常情况下三倍体不育或者育性差，在繁殖季节仅需消耗少量能量用于性腺发育，可以避免养殖贝类因性腺排放而导致体质虚弱致死或滞长问题。自1981年，Stanley首次使用细胞松弛素B(CB)诱导获得三倍体美洲牡蛎(Crassostrea virginica)以来，国内外学者已经对包括牡蛎、扇贝、贻贝、珍珠贝和鲍在内的20多种贝类相继开展了多倍体育种工作。有关皱纹盘鲍三倍体的研究工作最早始于1986年，据《大连水产学院学报》(1990年第1期)报道，以0.3mg/L的CB处理皱纹盘鲍受精卵，三倍体率最高仅为51.3％。《水产学报》(1993年第3期)报道使用1.0mg/L的CB诱导皱纹盘鲍三倍体，诱导率最高可达81.0％。中国专利CN1733908A中，使用150μmol/L 6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)最高可获得54.0％的三倍体皱纹盘鲍。《水产科技情报》(2013年第4期)以0.70mg/L的CB处理受精卵，稚鲍三倍体率则为66.0％。目前皱纹盘鲍三倍体制种技术存在以下不足：
1、性腺成熟度、同步受精和受精阶段同步性无法充分保证；
2、包括起始诱导时间、诱导浓度和作用持续时间在内的诱导条件未能进一步精确和优化。
因此出现倍化率不高，操作稳定性差等问题，未能形成成熟稳定的皱纹盘鲍三倍体制种技术。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有杂交技术所存在的诱导率低和稳定性差等问题，提供一种高效稳定的皱纹盘鲍三倍体的诱导方法。
本发明包括以下步骤：
1)种鲍的选择及促熟；
在步骤1)中，所述种鲍的选择及促熟的具体方法可为：取壳长为70～130mm，个体活力良好且无外部损伤的皱纹盘鲍作为种鲍，按雌雄分别放置于亲鲍培育池中促熟；所述种鲍可为2～3龄皱纹盘鲍；所述亲鲍培育池内性别特征必须单一。
2)人工催产；
在步骤2)中，所述人工催产的具体方法可为：采用阴干结合紫外线照射海水的方法对性腺发育成熟的个体进行催产，直至雌雄种鲍产卵和排精为止；所述阴干的方法是阴干60～120min后，将雌雄个体严格区分置于标记清楚的不同容器中，注入照射强度为500～1200mWh/L紫外线处理海水，每隔60min更换一次直至配子排放，期间注意防止意外受精。
3)配子的选择和处理；
在步骤3)中，所述配子的选择和处理的具体方法可为：使用150μm的筛绢滤除步骤2)配子中的杂质，镜检确定卵子质量和精子活力；所述镜检是指镜检质量高的卵液中卵子应卵膜完整、形状规则且不存在意外受精，活力好的精子应活动性和分散度良好。
4)同步受精；
在步骤4)中，所述同步受精的具体方法可为：将步骤3)中确定的活力好和质量高的精子和卵子混合，分为处理组和对照组，所述精子与卵子的质量比可为(10～7)︰1。所述受精的温度可为18～23℃，盐度为30～35。
5)药物诱导；
在步骤5)中，所述药物诱导的具体方法可为：观察对照组受精卵发育情况，第一极体出现比例为50％～80％时，迅速将处理组内受精卵加入至浓度为1.50～1.75mg/L的CB诱导液中处理15～20min或30～40mg/L的6-DMAP诱导液中处理10～15min；所述第一极体的观察应时时取样置于显微镜下观测；所述CB诱导液可为CB溶于DMSO所配制的1mg/mL的储存液稀释获得，所述6-DMAP诱导液可为6-DMAP溶于DMSO所配制的50mg/mL的储存液稀释获得。
6)药物去除；
在步骤6)中，所述药物去除的具体方法可为：药物处理后将受精卵置于1％的二甲基亚砜(DMSO)中清洗2次，每次15min。
7)孵化。
在步骤7)中，所述孵化可按照常规孵化及后期培育方法进行，使用流式细胞仪确定面盘幼虫三倍体率。
与已有的生产方法相比，本发明以确保皱纹盘鲍种鲍性腺成熟度、同步受精为前提，进一步优化诱导条件从而高效稳定的获得皱纹盘鲍三倍体。本发明具有以下突出的优点：
1、确保同步受精：严格避免配子在排放过程中提前接触，镜检确认不存在意外受精，保证同步受精和受精卵发育的一致性。
2、优化诱导条件：以时时镜检观察确定对照组受精卵PB1比例70％～80％作为处理时间节点，确保第一极体有效释放，避免出现四倍体和非整倍体。
3、稳定高效的诱导率：以往皱纹盘鲍三倍体诱导率在50％～80％间变化，而本发明的三倍体诱导率为100％或接近于100％，不同药物诱导皱纹盘鲍三倍体试验结果见表1。
表1
具体实施方式
以下实施例将对本发明作进一步的说明。
实施例1
1)取个体活力良好、无外部损伤的皱纹盘鲍做为种鲍，皱纹盘鲍平均壳长76.09±9.57mm，壳宽50.66±4.19mm，湿重55.50±13.88g，将种鲍按照雌雄分别放置在不同的亲鲍培育池中进行饲育，每个亲鲍培育池内亲鲍的性别特征必须单一。
2)待种鲍性腺发育成熟后，阴干60min，随后分别将雌雄个体置于标记清楚的不同容器中，注入照射强度为1000mWh/L紫外线处理海水，海水水温22℃，每隔60min更换一次紫外线处理海水，直至配子排放，操作过程严格防止精卵接触。
3)使用150μm的筛绢分别滤除精卵中的杂质，镜检确定卵子质量和精子活力，确保卵子中无受精卵，将镜检确定的卵子和精子分别置于50L和10L塑料箱中备用。
4)将备用精卵混合，镜检精子与卵子的个数比例为(10～7)︰1，之后将受精卵一分为三，分别标记为DD，DDD-CB和DDD-6-DMAP。
5)时时镜检观察对照组受精卵发育情况，当PB1比例为60％时，将实验组DDD-CB和DDD-6-DMAP中受精卵分别置于浓度为1.50mg/L的CB中处理15min和30mg/L的6-DMAP处理15min。
6)计时结束后，将受精卵置于1％DMSO中清洗2次，每次15min。
7)按照常规的孵化及后期培育方法即可获得皱纹盘鲍三倍体种苗。取面盘幼虫(24h)，采用流式细胞仪测定倍性，DDD-CB和DDD-6-DMAP的三倍体诱导率分别为89.62±4.64％和100.00±0.00％。
8)受精及面盘幼虫孵化过程中海水温度为20.7～21.5℃。
实施例2
1)取个体活力良好、无外部损伤的皱纹盘鲍做为种鲍，皱纹盘鲍平均壳长72.94±3.31mm，壳宽48.73±3.50mm，湿重50.93±9.10g，将种鲍按照雌雄分别放置在不同的亲鲍培育池中进行饲育，每个亲鲍培育池内亲鲍的性别特征必须单一。
2)待种鲍性腺发育成熟后，阴干60min，随后分别将雌雄个体置于标记清楚的不同容器中，注入照射强度为900mWh/L紫外线处理海水，海水水温22℃，每隔60min更换一次紫外线处理海水，直至配子排放，操作过程严格防止精卵接触。
3)使用150μm的筛绢分别滤除精卵中的杂质，镜检确定卵子质量和精子活力，确保卵子中不存在受精卵，将镜检确定的卵子和精子分别置于50L和10L塑料箱中备用。
4)将备用精卵混合，镜检精子与卵子的个数比例为(10～7)︰1，之后将受精卵一分为三，分别标记为DD，DDD-CB和DDD-6-DMAP。
5)时时镜检观察对照组受精卵发育情况，当PB1比例为75％时，快速将实验组DDD-CB和DDD-6-DMAP中受精卵分别置于浓度为1.50mg/L的CB中处理15min和30mg/L的6-DMAP处理15min。
6)计时结束后，将受精卵置于1％DMSO中清洗2次，每次15min。
7)按照常规的孵化及后期培育方法即可获得皱纹盘鲍三倍体种苗。取面盘幼虫(24h)，采用流式细胞仪测定倍性，DDD-CB和DDD-6-DMAP的三倍体诱导率分别为93.36±3.96％和100.00±0.00％。
8)受精及面盘幼虫孵化过程中海水温度为20.1～21.6℃。
实施例3
1)取个体活力良好、无外部损伤的皱纹盘鲍做为种鲍，皱纹盘鲍平均壳长76.61±5.06mm，壳宽51.95±2.88mm，湿重54.43±7.57g，将种鲍按照雌雄分别放置在不同的亲鲍培育池中进行饲育，每个亲鲍培育池内亲鲍的性别特征必须单一。
2)待种鲍性腺发育成熟后，阴干60min，随后分别将雌雄个体置于标记清楚的不同容器中，注入照射强度为1000mWh/L紫外线处理海水，海水水温21℃，每隔60min更换一次紫外线处理海水，直至配子排放，操作过程严格防止精卵接触。
3)使用150μm的筛绢分别滤除精卵中的杂质，镜检确定卵子质量和精子活力，确保卵子中不存在受精卵，将镜检确定的卵子和精子分别置于50L和10L塑料箱中备用。
4)将备用精卵混合，镜检精子与卵子的个数比例为(10～7)︰1，之后将受精卵一分为三，分别标记为DD，DDD-CB和DDD-6-DMAP。
5)时时镜检观察对照组受精卵发育情况，当PB1比例为80％时，快速将实验组DDD-CB和DDD-6-DMAP中受精卵分别置于浓度为1.50mg/L的CB中处理15min和30mg/L的6-DMAP处理15min。
6)计时结束后，将受精卵置于1％DMSO中清洗2次，每次15min。
7)按照常规的孵化及后期培育方法即可获得皱纹盘鲍三倍体种苗。取面盘幼虫(24h)，采用流式细胞仪测定倍性，DDD-CB和DDD-6-DMAP的三倍体诱导率分别为93.40±1.46％和100.00±0.00％。
8)受精及面盘幼虫孵化过程中海水温度为21.5～22.5℃。
实施例4
1)取个体活力良好、无外部损伤的皱纹盘鲍做为种鲍，皱纹盘鲍平均壳长75.21±2.57mm，壳宽48.90±2.87mm，湿重53.49±4.72g，将种鲍按照雌雄分别放置在不同的亲鲍培育池中进行饲育，每个亲鲍培育池内亲鲍的性别特征必须单一。
2)待种鲍性腺发育成熟后，阴干60min，随后分别将雌雄个体置于标记清楚的不同容器中，注入照射强度为1000mWh/L紫外线处理海水，海水水温21℃，每隔60min更换一次紫外线处理海水，直至配子排放，操作过程严格防止精卵接触。
3)使用150μm的筛绢分别滤除精卵中的杂质，镜检确定卵子质量和精子活力，确保卵子中不存在受精卵，将镜检确定的卵子和精子分别置于50L和10L塑料箱中备用。
4)将备用精卵混合，镜检精子与卵子的个数比例为(10～7)︰1，之后将受精卵一分为三，分别标记为DD，DDD-CB和DDD-6-DMAP。
5)时时镜检观察对照组受精卵发育情况，当PB1比例为65％时，快速将实验组DDD-CB和DDD-6-DMAP中受精卵分别置于浓度为1.50mg/L的CB中处理15min和30mg/L的6-DMAP处理15min。
6)计时结束后，将受精卵置于1％DMSO中清洗2次，每次15min。
7)按照常规的孵化及后期培育方法即可获得皱纹盘鲍三倍体种苗。取面盘幼虫(24h)，采用流式细胞仪测定倍性，DDD-CB和DDD-6-DMAP的三倍体诱导率分别为100.00±0.00％和84.46±0.55％。
8)受精及面盘幼虫孵化过程中海水温度为21.0～21.5℃。
实施例5
1)取个体活力良好、无外部损伤的皱纹盘鲍做为种鲍，皱纹盘鲍平均壳长73.54±3.53mm，壳宽50.14±3.17mm，湿重46.54±6.55g，将种鲍按照雌雄分别放置在不同的亲鲍培育池中进行饲育，每个亲鲍培育池内亲鲍的性别特征必须单一。
2)待种鲍性腺发育成熟后，阴干60min，随后分别将雌雄个体置于标记清楚的不同容器中，注入照射强度为1000mWh/L紫外线处理海水，海水水温22℃，每隔60min更换一次紫外线处理海水，直至配子排放，操作过程严格防止精卵接触。
3)使用150μm的筛绢分别滤除精卵中的杂质，镜检确定卵子质量和精子活力，确保卵子中不存在受精卵，将镜检确定的卵子和精子分别置于50L和10L塑料箱中备用。
4)将备用精卵混合，镜检精子与卵子的个数比例为(10～7)︰1，之后将受精卵一分为三，分别标记为DD，DDD-CB和DDD-6-DMAP。
5)时时镜检观察对照组受精卵发育情况，当PB1比例为50％时，快速将实验组DDD-CB和DDD-6-DMAP中受精卵分别置于浓度为1.75mg/L的CB中处理20min和40mg/L的6-DMAP处理10min。
6)计时结束后，将受精卵置于1％DMSO中清洗2次，每次15min。
7)按照常规的孵化及后期培育方法即可获得皱纹盘鲍三倍体种苗。取面盘幼虫(24h)，采用流式细胞仪测定倍性，DDD-CB和DDD-6-DMAP的三倍体诱导率分别为100.00±0.00％和100.00±0.00％。
8)受精及面盘幼虫孵化过程中海水温度为21.1～23.0℃。
Claims (5)
1.一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法，其特征在于包括以下步骤：
1)种鲍的选择及促熟：取个体活力良好且无外部损伤的皱纹盘鲍作为种鲍，按雌雄分别放置于亲鲍培育池中促熟；
2)人工催产：采用阴干结合紫外线照射海水的方法对性腺发育成熟的个体进行催产，直至雌雄种鲍产卵和排精为止；所述阴干的方法是阴干60～120min后，将雌雄个体严格区分置于标记清楚的不同容器中，注入照射强度为500～1200mWh/L紫外线处理海水，每隔60min更换一次直至配子排放，期间注意防止意外受精；
3)配子的选择和处理：使用150μm的筛绢滤除步骤2)配子中的杂质，镜检确定卵子质量和精子活力；所述镜检是指镜检质量高的卵液中卵子应卵膜完整、形状规则且不存在意外受精，活力好的精子应活动性和分散度良好；
4)同步受精；将步骤3)中确定的活力好和质量高的精子和卵子充分均匀混合，分为处理组和对照组；所述精子与卵子的质量比为(10～7)︰1；所述受精的温度为18～23℃，盐度为30～35；
5)药物诱导：观察对照组受精卵，第一极体出现比例为50％～80％时，将处理组内受精卵加入至浓度为1.50～1.75mg/L的CB诱导液中处理15～20min或30～40mg/L的6-DMAP诱导液中处理10～15min；
6)药物去除及孵化后，即获得皱纹盘鲍三倍体。
2.如权利要求1所述一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法，其特征在于在步骤1)中，所述皱纹盘鲍种鲍为2～3龄，壳长为70～130mm；所述亲鲍培育池内性别特征必须单一，雌性鲍鱼性腺为墨绿色，雄性鲍鱼性腺为奶白色。
3.如权利要求1所述一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法，其特征在于在步骤5)中，所述第一极体的观察应时时取样置于显微镜下观测；所述CB诱导液为CB溶于DMSO所配制的1mg/mL的储存液稀释获得，所述6-DMAP诱导液为6-DMAP溶于DMSO所配制的50mg/mL的储存液稀释获得。
4.如权利要求1所述一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法，其特征在于在步骤6)中，所述药物去除的具体方法为：药物处理后将受精卵置于1％的二甲基亚砜中清洗2次，每次15min。
5.如权利要求1所述一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法，其特征在于在步骤6)中，所述孵化按照常规孵化及后期培育方法进行，使用流式细胞仪确定面盘幼虫三倍体率。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910544737.2A CN110178799B (zh) | 2019-06-21 | 2019-06-21 | 一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910544737.2A CN110178799B (zh) | 2019-06-21 | 2019-06-21 | 一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110178799A CN110178799A (zh) | 2019-08-30 |
| CN110178799B true CN110178799B (zh) | 2020-09-25 |
Family
ID=67722870
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910544737.2A Active CN110178799B (zh) | 2019-06-21 | 2019-06-21 | 一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110178799B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114600807A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-06-10 | 厦门大学 | 一种皱纹盘鲍四倍体的诱导方法 |
| CN114946773A (zh) * | 2022-06-08 | 2022-08-30 | 中国海洋大学 | 一种制备异源三倍体扇贝的方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1733908A (zh) * | 2005-07-05 | 2006-02-15 | 大连水产学院 | 药物诱导皱纹盘鲍三倍体的方法 |
| CL2009001814A1 (es) * | 2009-09-04 | 2009-12-04 | Univ Catolica Del Norte | Metodo para criopreservacion de espermatozoides de abalon, que comprende las etapas de proporcionar una solucion crioprotectora que comprende propilenglicol, sacarosa y yema de huevo, la cual se mezcla equivolumetricamente con los espermatozoides de abalon antes de ser almacenados en nitrogenos liquido. |
| CN101773080A (zh) * | 2010-01-05 | 2010-07-14 | 集美大学 | 诱导贝类多倍体的生物方法 |
| CN102132678A (zh) * | 2011-03-04 | 2011-07-27 | 郭炳坚 | 一种皱纹盘鲍三倍体苗种的培育方法 |
-
2019
- 2019-06-21 CN CN201910544737.2A patent/CN110178799B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110178799A (zh) | 2019-08-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100405898C (zh) | 背瘤丽蚌人工生产方法 | |
| CN110178799B (zh) | 一种皱纹盘鲍三倍体的诱导方法 | |
| CN103621442A (zh) | 一种海蜇室内全人工繁育方法 | |
| CN101120665A (zh) | 一种淡水育珠蚌的育苗方法 | |
| CN113951194B (zh) | 一种福建牡蛎和熊本牡蛎种间杂交生产三倍体牡蛎的方法 | |
| CN103828746B (zh) | 一种菲律宾蛤仔的繁育方法 | |
| CN113749059A (zh) | 一种快速生长三倍体长牡蛎“海大1号”的培育方法 | |
| CN112136738B (zh) | 一种高抱卵量红螯螯虾亲本筛选及繁育方法 | |
| CN101278659A (zh) | 一种获得刺参杂种优势的制种方法 | |
| CN113331097A (zh) | 一种珠母贝人工育苗方法 | |
| CN110278921B (zh) | 一种化学诱导鲍异源三倍体的方法 | |
| WO2012079425A1 (zh) | 一种通过革胡子鲶控制对虾病害的生物防控方法 | |
| CN103109765B (zh) | 绿鲍与皱纹盘鲍种间杂交制种方法 | |
| Li et al. | Freshwater pearl culture | |
| CN115669615A (zh) | 一种制备异源三倍体扇贝的方法 | |
| CN104273073A (zh) | 海紫杂交金黄色闭壳肌扇贝的培育方法 | |
| CN113678764B (zh) | 一种生产四倍体牡蛎和种间杂交三倍体牡蛎的方法 | |
| CN112715437B (zh) | 一种耐高温珍珠贝苗孵化培育方法 | |
| AU2021103410A4 (en) | Method for chemically inducing allotriploid abalone | |
| CN109874707B (zh) | 一种高效创制异源八倍体银鲫的方法 | |
| CN113331087A (zh) | 一种裸腹叶须鱼的人工繁殖方法 | |
| CN112136736A (zh) | 一种抗逆长牡蛎新品种的选育方法 | |
| CN108235971B (zh) | 一种提高家蚕孤雌生殖早期世代孵化率的方法 | |
| CN101987196A (zh) | 体内诱导刺参产卵的催产剂 | |
| CN104855321A (zh) | 一种适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |