CN110172515A - Cntn3蛋白在神经胶质瘤预后判断中的应用 - Google Patents
Cntn3蛋白在神经胶质瘤预后判断中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110172515A CN110172515A CN201910482723.2A CN201910482723A CN110172515A CN 110172515 A CN110172515 A CN 110172515A CN 201910482723 A CN201910482723 A CN 201910482723A CN 110172515 A CN110172515 A CN 110172515A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cntn3
- albumen
- mrna
- glioma
- diagnosis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102100024325 Contactin-3 Human genes 0.000 title claims abstract description 73
- 101000909517 Homo sapiens Contactin-3 Proteins 0.000 title claims abstract description 72
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 title claims abstract description 55
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 6
- 238000004040 coloring Methods 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 abstract description 21
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 16
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 6
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 25
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000018361 Contactin Human genes 0.000 description 2
- 108060003955 Contactin Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150042248 Mgmt gene Proteins 0.000 description 2
- 230000007177 brain activity Effects 0.000 description 2
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N (+)-haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@]2(O)[C@H]1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710107712 Contactin-3 Proteins 0.000 description 1
- 241001269238 Data Species 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Natural products C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001947 dentate gyrus Anatomy 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000004980 dosimetry Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003037 histogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 1
- 208000018389 neoplasm of cerebral hemisphere Diseases 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 210000000449 purkinje cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/118—Prognosis of disease development
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了CNTN3蛋白的用途，CNTN3蛋白在制备用于神经胶质瘤诊断、预后判断药物或治疗药物中的应用；以及编码CNTN3蛋白的mRNA在制备用于神经胶质瘤诊断、预后判断或治疗药物中的应用。本发明通过检测组织样本中的CNTN3蛋白/mRNA，可有效的对胶质瘤患者预后进行判断。本发明可为神经胶质瘤患者的预后分析提供强有力的技术支持，有助于临床医生选择合理的后续治疗方案，提高神经胶质瘤患者的术后生活质量，提高患者生存率，本发明具有深远的临床意义，适合临床推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及临床医学技术领域，具体涉及一种CNTN3蛋白在神经胶质瘤预后判断中的应用。
背景技术
神经胶质瘤是神经系统最常见的肿瘤，约占大脑肿瘤的80％，平均每年新诊断病例数约为17000例，但因胶质瘤细胞增殖速度快，侵袭能力强，导致患者生存率极不乐观。大部分胶质瘤患者生存时间为12-15个月，仅3-5％的患者生存时间能达到5年以上。影响患者预后的因素很多，较为公认的有患者年龄、肿瘤大小、肿瘤分级、KPS评分、手术切除程度、术后放疗剂量以及替莫唑胺的应用等因素对患者预后有提示作用，但目前尚无定论。细胞内某些基因或蛋白水平的改变，可能是神经胶质瘤形成的使动因素或患者预后好坏的标志。但迄今为止，尚无可以应用于临床的可以准确预测神经胶质瘤患者预后的分子标志物。
发明内容
本发明提供了解决上述问题的CNTN3蛋白在神经胶质瘤预后判断中的应用，通过检测待检测者肿瘤组织中CNTN3蛋白或mRNA的表达情况，若其低表达，则提示预后不良，可作为神经胶质瘤患者预后不良的临床诊断依据之一，供临床医生参考。
本发明通过下述技术方案实现：
CNTN3蛋白的用途，CNTN3蛋白在制备用于神经胶质瘤诊断、预后判断药物或治疗药物中的应用。
基于上述CNTN3蛋白的用途，所述药物为CNTN3抗体、或者为包含CNTN3抗体的组合物。
基于上述CNTN3蛋白的用途，所述药物包括标记物；所述标记物包括放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。
编码CNTN3蛋白的mRNA在制备用于神经胶质瘤诊断、预后判断或治疗药物中的应用。
基于上述编码CNTN3蛋白的mRNA的用途，所述药物为基于编码CNTN3蛋白的mRNA的特异性引物或探针，或者为包含特异性引物或探针的组合物。
基于上述编码CNTN3蛋白的mRNA的用途，所述药物包括标记物；所述标记物包括放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。
一种蛋白标志药物，包含CNTN3蛋白。
一种检测剂，包含CNTN3抗体。
一种检测剂，其特征在于，包含基于编码CNTN3蛋白的mRNA的引物或探针。
一种试剂盒或芯片，包含所述的检测剂。
本发明具有如下的优点和有益效果：
Contactins家族的分子属于免疫球蛋白超家族中的成员，它们主要在神经系统表达。该家族包括CNTN1-6六个分子，其中CNTN3分子在大脑中表达水平最高。CNTN3也被称为PANG/BIG-1，该分子位于3号染色体上，是一种糖基磷脂酰肌醇锚定的膜蛋白，具有六个免疫球蛋白样的结构域和四个III型纤连蛋白重复序列。该分子存在于各种类型的神经元中，包括小脑的浦肯野细胞、齿状回的颗粒细胞以及大脑皮质浅层的神经元。已有研究表明，CNTN3可能在大脑神经网络的形成与维持中起重要作用，但目前尚无研究表明该分子在神经胶质瘤中发挥的作用。
本发明提供了CNTN3蛋白/mRNA在检测神经胶质瘤中用途，通过检测待检测者肿瘤组织中CNTN3蛋白/mRNA的表达情况，其表达水平的高低与患者预后相关，若其低表达，则提示预后不良，可作为神经胶质瘤患者预后不良的临床诊断依据之一，供临床医生参考。通过上述技术方案，本发明通过检测组织样本中的CNTN3蛋白/mRNA，可有效的对胶质瘤患者预后进行判断。本发明可为神经胶质瘤患者的预后分析提供强有力的技术支持，有助于临床医生选择合理的后续治疗方案，提高神经胶质瘤患者的术后生活质量，提高患者生存率，本发明具有深远的临床意义，适合临床推广应用。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明实施例的限定。在附图中：
图1(a)～(c)为CNTN3 mRNA在神经胶质瘤中的表达情况，其中，图1(a)：在GSE4290中，神经胶质瘤患者组织CNTN3 mRNA水平下调；图1(b)：在GSE7696中，神经胶质瘤患者组织CNTN3 mRNA水平下调；图1(c)：在TCGA中，神经胶质瘤患者组织CNTN3 mRNA水平下调；
图2(a)～(b)为生存曲线分析神经胶质瘤组织来源的CNTN3 mRNA表达高低与患者生存率的关系，其中，图2(a)：在GSE7696中，CNTN3 mRNA表达水平影响患者预后，低表达提示预后不良；图2(b)：在TCGA中，CNTN3表达水平影响患者预后，低表达提示预后不良；
图3(a)～(b)为CNTN3蛋白在神经胶质瘤中的表达情况，其中，图3(a):CNTN3蛋白在神经胶质瘤和正常脑组织中的表达情况；图3(b):比较CNTN3蛋白在神经胶质瘤和正常脑组织免疫组化评分；
图4为CNTN3蛋白表达水平影响患者预后，低表达提示预后不良。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
实施例1
本实施例给出CNTN3 mRNA表达在人神经胶质瘤预后评价中的应用研究，具体如下：
病人的样本：本发明涉及317例神经胶质瘤和32例正常脑组织的芯片和测序结果。其中表达谱芯片GSE4290包括81例神经胶质瘤和23例正常脑组织，表达谱芯片GSE7696包括80例神经胶质瘤和4例正常脑组织，来源于GEO数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)；另有156例神经胶质瘤和5例正常脑组织测序数据和详细临床信息数据来源于美国肿瘤基因组图谱(TCGA)(https://cancergenome.nih.gov/)。总生存时间为确诊神经胶质瘤到患者死亡或随访结束的时间。
分析方法：下载芯片和测序数据压缩包和探针文件，通过R 3.4.4软件的RMA算法对芯片数据进行标准化，采用Kaplan-Meier曲线和log-rank test进行生存分析，采用单因素和多因素Cox比例风险模型分析独立预后因素，P<0.05表明有统计学意义，所有统计分析均在SPSS 21.0软件中进行。
检测结果：
1、CNTN3 mRNA在神经胶质瘤患者的组织样本中表达降低
GSE4290数据集中CNTN3 mRNA在神经胶质瘤组织中的表达水平显著低于在正常脑组织中的表达水平(倍数为-12.22，P值为4.64E-26)，如图1(a)所示，该结果在GSE7696数据集中也得到证实(倍数为-13.6，P值为2.07E-06)如图1(b)所示。分析TCGA测序结果中CNTN3mRNA的表达情况，同样发现CNTN3 mRNA在神经胶质瘤组织汇总表达下调(倍数-5.855，P值1.32E-24)，如图1(c)所示。
2、CNTN3 mRNA低表达提示神经胶质瘤患者预后不良
为了获得CNTN3 mRNA表达水平与胶质瘤患者预后的关系，本申请将GSE7696数据集中的神经胶质瘤数据根据CNTN3 mRNA表达水平的中位数值分为高表达组和低表达组。CNTN3 mRNA低表达组和高表达组的中位总生存时间分别为14.140(95％CI:10.933-17.347)和17.070(95％CI:15.288-18.852)，logRank test结果显示低表达组较高表达组总生存时间更短，差异有统计学意义(P＝0.013)，Kaplan-Meier生存曲线见图2(a)。TCGA数据集中CNTN3 mRNA低表达组中位总生存时间为12.833(95％CI:10.897-14.770)，高表达组中位总生存时间为25.700(95％CI:17.176-40.950)，差异有统计学意义(P＝0.015)，如图2(b)所示。
通过采用单因素和多因素Cox回归分析来验证CNTN3 mRNA是否为神经胶质瘤患者独立的预后因子，结果见表1。单因素回归分析结果显示CNTN3 mRNA表达、年龄、治疗方法、mgmt甲基化状态与神经胶质瘤预后有关，多因素回归分析结果进一步发现CNTN3mRNA表达、治疗方法、mgmt甲基化状态是神经胶质瘤预后的独立影响因素。
表1单因素和多因素分析神经胶质瘤患者生存相关预后因素
实施例2
本实施例给出CNTN3蛋白表达在人神经胶质瘤预后评价中的应用研究，具体如下：
病人的样本：采用上海芯超生物科技有限公司的组织芯片(产品编号：HBraG080PG01)，包括13例正常脑组织和67例神经胶质瘤的组织样本。
检测方法：将组织芯片正面迎风置于65℃烘烤箱中烘烤40min，使标本贴附更好，浸入二甲苯洗缸I、II、III中，分别置于25℃恒温水浴箱中10min，转入100％、85％、75％乙醇中各3min梯度水化，然后转入PBS缓冲液I、II、III中，每次5min，置于3％过氧化氢洗缸中15min，封闭内源性过氧化酶。浸入加热后的枸橼酸钠缓冲液中，微波炉中低火20min。浸入PBS缓冲液I、II、III中，每次3min。用PAP Pen免疫组化石蜡笔沿组织芯片边缘画出其范围，将稀释后的一抗溶液或抗体工作液用200μL微量加样器铺满所画范围内的组织阵列表面并置于湿盒之中，37℃恒温培养箱中孵育2h或4℃冰箱中过夜。在纸巾上去除多余一抗，将组织芯片依次浸入PBS缓冲液I、II、III中，每次3min。加二步法免疫组化检测试剂盒中的试剂Ⅱ，确保铺满所画范围内的组织阵列表面并置于湿盒之中，37℃恒温培养箱中孵育15min。在纸巾上去除多余试剂，将组织芯片依次浸入PBS缓冲液I、II、III中，每次3min。加二步法免疫组化检测试剂盒中的试剂Ⅲ，确保铺满所画范围内的组织阵列表面并置于湿盒之中，37℃恒温培养箱中孵育30min。在纸巾上去除多余试剂，将组织芯片依次浸入PBS缓冲液I、II、III中，每次3min。取DAB试剂盒取适量试剂，按1m LDAB稀释液加50μLDAB浓缩液的比例混匀；用200μL微量加样器将稀释后的DAB溶液铺满所画范围内的组织阵列表面进行显色，同一芯片保持显色时间一致；在镜下观察显色效果直至同一芯片内部及不同芯片之间形成较显著的对比后在纸巾上去除多余DAB溶液并置于蒸馏水中；显色时间为60s，不同抗体间显色时间有所差异。将苏木素染液用1000μL微量加样器迅速铺满所画范围内的组织阵列表面，10s后用缓慢的流水立刻冲去；将染色后的芯片置于1％氨水中。将组织芯片依次浸入75％、85％、100％乙醇中各3min梯度脱水。浸入二甲苯洗缸中，10min，脱去PAP Pen免疫组化石蜡笔画出的笔迹，将组织芯片置于通风处晾干，用快干封片剂封片。
阳性或阴性的判断标准：计数20个高倍视野的免疫组化反应着色的细胞，染色强度积分为：无染色1分，弱染色2分，中等染色3分，强染色4分；染色面积积分为：着色范围≤10％为0分，>10％－25％为1分，>25％－50％为2分，>50％－75％为3分，>75％为4分。若两者积分乘积≥6分则为阳性，低于6分则为阴性。
检测结果
1、CNTN3蛋白在神经胶质瘤组织中表达降低
CNTN3蛋白在神经胶质瘤和正常脑组织中的表达情况见图3(a)。免疫组化评分结果显示CNTN3蛋白在肿瘤组织中的评分为4.26±2.16分，在正常脑组织中的评分为9.23±2.52分，CNTN3蛋白在神经胶质瘤患者肿瘤组织中的表达量显著低于正常脑组织，差异有统计学意义(P<0.0001)，如图3(b)所示。
2、CNTN3蛋白低表达提示神经胶质瘤患者预后不良
根据染色强度与面积的乘积的结果将神经胶质瘤分为CNTN3蛋白表达组和不表达组，两者的中位总生存时间分别为26.00±21.21和16.52±13.55，logRank test结果显示CNTN3不表达组较表达组总生存时间更短，差异有统计学意义(P＝0.042)，如图4所示。
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.CNTN3蛋白的用途，其特征在于，CNTN3蛋白在制备用于神经胶质瘤诊断、预后判断药物或治疗药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的CNTN3蛋白的用途，其特征在于，所述药物为CNTN3抗体、或者为包含CNTN3抗体的组合物。
3.根据权利要求1所述的CNTN3蛋白的用途，其特征在于，所述药物包括标记物；所述标记物包括放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。
4.编码CNTN3蛋白的mRNA在制备用于神经胶质瘤诊断、预后判断或治疗药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的编码CNTN3蛋白的mRNA的用途，其特征在于，所述药物为基于编码CNTN3蛋白的mRNA的特异性引物或探针，或者为包含特异性引物或探针的组合物。
6.根据权利要求4所述的编码CNTN3蛋白的mRNA的用途，其特征在于，所述药物包括标记物；所述标记物包括放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。
7.一种蛋白标志药物，其特征在于，包含CNTN3蛋白。
8.一种检测剂，其特征在于，包含CNTN3抗体。
9.一种检测剂，其特征在于，包含基于编码CNTN3蛋白的mRNA的引物或探针。
10.一种试剂盒或芯片，其特征在于，包含权利要求8或9所述的检测剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910482723.2A CN110172515A (zh) | 2019-06-04 | 2019-06-04 | Cntn3蛋白在神经胶质瘤预后判断中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910482723.2A CN110172515A (zh) | 2019-06-04 | 2019-06-04 | Cntn3蛋白在神经胶质瘤预后判断中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110172515A true CN110172515A (zh) | 2019-08-27 |
Family
ID=67697853
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910482723.2A Pending CN110172515A (zh) | 2019-06-04 | 2019-06-04 | Cntn3蛋白在神经胶质瘤预后判断中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110172515A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021213404A1 (zh) * | 2020-04-21 | 2021-10-28 | 北京市神经外科研究所 | cDNA、mRNA、蛋白及评价胶质瘤预后性的试剂盒和系统 |
| CN114350799A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-15 | 深圳市人民医院 | Htr2c在低级别胶质瘤的预后中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010054379A2 (en) * | 2008-11-10 | 2010-05-14 | The United States Of America, As Represensted By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Gene signature for predicting prognosis of patients with solid tumors |
| CN108169490A (zh) * | 2017-11-06 | 2018-06-15 | 中国人民解放军第二军医大学第二附属医院 | 一组用于评估胶质母细胞瘤预后的联合蛋白及其应用 |
-
2019
- 2019-06-04 CN CN201910482723.2A patent/CN110172515A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010054379A2 (en) * | 2008-11-10 | 2010-05-14 | The United States Of America, As Represensted By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Gene signature for predicting prognosis of patients with solid tumors |
| CN108169490A (zh) * | 2017-11-06 | 2018-06-15 | 中国人民解放军第二军医大学第二附属医院 | 一组用于评估胶质母细胞瘤预后的联合蛋白及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 吴科等: "Ki67蛋白表达与神经胶质瘤患者临床分期及预后的相关性分析", 《临床和实验医学杂志》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021213404A1 (zh) * | 2020-04-21 | 2021-10-28 | 北京市神经外科研究所 | cDNA、mRNA、蛋白及评价胶质瘤预后性的试剂盒和系统 |
| CN114350799A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-04-15 | 深圳市人民医院 | Htr2c在低级别胶质瘤的预后中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102209968B (zh) | 肺癌生物标记蛋白的捕获剂在制备试剂盒中的用途 | |
| CN106771248B (zh) | 高级别浆液性卵巢癌诊断和/或预后判断的标志物 | |
| CN110172515A (zh) | Cntn3蛋白在神经胶质瘤预后判断中的应用 | |
| CN110504032A (zh) | 基于苏木精-伊红染片的图像处理来预测肿瘤突变负荷的方法 | |
| CN102707058B (zh) | 一种用于诊断肺癌的Tipe3免疫组织化学检测试剂盒 | |
| Sun et al. | Integrated profiling identifies SLC5A6 and MFAP2 as novel diagnostic and prognostic biomarkers in gastric cancer patients | |
| CN107561280A (zh) | 一种预测乳腺癌复发的试剂盒 | |
| CN108169490B (zh) | 一组用于评估胶质母细胞瘤预后的联合蛋白及其应用 | |
| CN110129442A (zh) | 甲状腺癌的分子诊治标志物 | |
| CN108342478A (zh) | 循环肿瘤细胞代谢分型标志物及其应用 | |
| CN102146455A (zh) | 一种细胞dna损伤检测试剂盒及其检测方法 | |
| CN104762375A (zh) | Pou5f1b在肿瘤诊断、治疗、预后和预测复发中的应用 | |
| Alba et al. | HER2 status determination using RNA-ISH-a rapid and simple technique showing high correlation with FISH and IHC in 141 cases of breast cancer | |
| CN107422123B (zh) | 一种用于诊断口腔鳞状细胞癌的试剂盒 | |
| CN103048468A (zh) | 用于判断肿瘤靶向治疗药物的快速检测方法 | |
| CN109735619A (zh) | 与非小细胞肺癌预后相关的分子标志物及其应用 | |
| TW202325857A (zh) | 用於癌症檢測之循環生物標記的鑑別系統、用於癌症檢測之循環生物標記的開發方法、癌症檢測方法及試劑盒 | |
| CN106370852B (zh) | 胃腺癌标志物Drosha蛋白及其应用 | |
| CN102270307B (zh) | 肿瘤癌变细胞fish基因状态自动检测方法 | |
| Crompton et al. | Theory and practice of predictive assays in radiation therapy | |
| CN105652013B (zh) | 结直肠癌预后判断标记物、表达评估方法、试剂盒及应用 | |
| Kosuge et al. | Nuclear features of infiltrating urothelial carcinoma are distinguished from low-grade noninvasive papillary urothelial carcinoma by image analysis | |
| CN106872243A (zh) | 组织芯片的rna-蛋白质-dna原位多重染色方法 | |
| CN106383230B (zh) | 一种肺癌诊断试剂盒 | |
| CN106645722B (zh) | 一种肺癌筛查试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190827 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |