CN110161250A - 一种均相人心肌肌钙蛋白i快速检测试剂盒、系统、检测方法与应用 - Google Patents

一种均相人心肌肌钙蛋白i快速检测试剂盒、系统、检测方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种人心肌肌钙蛋白I cTnI检测试剂盒的制备方法，包括制备包含受体以及与之结合的第一结合单元的组分，受体能与单线态氧反应生成可检测信号，第一结合单元能结合cTnI的第一表位；制备包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元的组分，第二结合单元能结合cTnI的第二表位，第二表位与第一表位是cTnI的不同结合特性的表位或不同位置的相同结合特性的表位；制备包含供体以及与之结合的第一标记物的特异结合物的组分，供体能够在激发状态产生单线态氧。该方法制备的试剂盒能够高效地检测人心肌肌钙蛋白I。

Description

一种均相人心肌肌钙蛋白I快速检测试剂盒、系统、检测方法 与应用
技术领域
本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种均相免疫检测试剂盒及其制备方法、使用方法、检测系统及其在人心肌肌钙蛋白I检测中的用途。
背景技术
目前，生物大分子人心肌肌钙蛋白I(cTnI)检测常用ELISA法、胶体金法等。免疫分析方法是利用抗原与抗体特异性结合而建立的高选择性生物化学方法。免疫分析根据标记与否分为标记免疫分析法和非标记免疫分析法。由于标记物的引入，不可避免地带来了结合的抗原-抗体与过量的抗原或抗体的分离问题，因而标记免疫分析法根据分离与否又分为均相免疫分析法和非均相免疫分析法。非均相免疫分析法需要包埋、洗脱、分离等多步操作，分析过程繁琐，分析时间长，不能满足快速检测和诊断的要求。均相法则有效避免了洗脱、分离等繁琐步骤，极大提高了分析效率和性价比，得到日益广泛的应用，具有取代传统非均相免疫分析的潜力。
非均相免疫分析是指抗体-抗原反应后、检测信号前，需要分离去除未参加反应的、游离状态的标记抗体或其他组分；此时，检测结合状态的结合标记物的信号强度，可通过数学函数可获得待测抗原或抗体的含量。分离结合标记物和游离标记物常用的方法是固相吸附分离技术。针对cTnI定量分析而言，将捕获抗体与固相载体连接，待检抗原分别与标记抗体和捕获抗体结合，于固相材料表面形成双抗体夹心复合物(结合标记物位于固相表面)，而过量的、未参与抗原抗体反应的游离标记抗体分布于液相中。去除液相溶液、并反复洗涤固相(微粒)，可有效去除游离状态标记抗体。固相吸附分离方法有两个重要环节：包被和洗涤。此种非均相反应模式因包被和洗涤环节的存在，给标记免疫分析造成很大缺陷，例如：操作步骤麻烦，检测范围较窄，检测的精密度较差，容易出现批间、批内差异。
尽管目前已经公开报道了一些非均相检测cTnI的方法，但是他们的共同特点是检测时间较长，消耗检测人员大量时间，且检测灵敏度也相对较低。
出于这种考虑，本发明的发明人进行了研究，期望提供一种快速均相检测cTnI的方法、试剂盒及其应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供了一种制备快速检测cTnI的均相免疫试剂盒的方法，由该方法获得的试剂盒能够快速检测待测样本中的cTnI，检测时间可缩短至10min以内，但同时检测灵敏度却能达到5pg/mL，还克服了“钩状效应”的缺陷。
本发明第一方面提供了一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括：
制备第一组分，所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号，所述第一结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第一表位；
制备第二组分，所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元，所述第二结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第二表位，所述第二表位与所述第一表位是人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位；
制备第三组分，所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物，所述供体能够在激发状态产生单线态氧。
在本发明的一些实施方案中，所述第一结合单元和所述第二结合单元分别独立选自与人心肌肌钙蛋白I具有结合特异性的多克隆抗体、单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体、修饰的抗体，优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体。
在本发明的一些实施方案中，所述第一结合单元和/或所述第二结合单元独立包含至少两种能够与人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位具有结合特异性的不同的单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体或修饰的抗体。
在本发明的一些实施方案中，所述第一标记物为生物素，所述第一标记物的所述特异结合物为链霉亲和素。
在本发明的一些实施方案中，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。
在本发明的一些实施方案中，所述供体为光活化的或化学活化的敏化剂，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述供体为填充有感光化合物的高分子微粒，在光激发下能够产生单线态氧。
在本发明的一些实施方案中，制备第一组合物，所述第一组合物包括所述第一组分和第一缓冲液；
制备第二组合物，所述第二组合物包括所述第二组分和第二缓冲液；
制备第三组合物，所述第三组合物包括所述第三组分和第三缓冲液。
在本发明的一些实施方案中，所述第一结合单元与所述受体间接结合；优选地，所述第一结合单元与所述受体通过异硫氰酸荧光素-异硫氰酸荧光素抗体系统间接结合。
在本发明的一些实施方案中，所述第一组合物、所述第二组合物与所述第三组合物中的任一个、任两个或三个还包含表面活性剂，优选非离子表面活性剂，更优选直链非离子表面活性剂，最优选聚乙二醇型直链非离子表面活性剂。
在本发明的一些实施方案中，所述第三组合物中的表面活性剂的重量体积浓度为0.001％-0.1％，优选0.01％-0.04％，更优选0.02％。
本发明第二方面提供了一种用于均相检测人心肌肌钙蛋白I的试剂盒，所述试剂盒是根据本发明第一方面所述的人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒的制备方法制备得到的。
在本发明的一些实施方案中，所述第一组合物中的所述第一组分的浓度选自20～300μg/mL，优选30～200μg/mL，更优选40～100μg/mL。
在本发明的一些实施方案中，所述第二组合物中的所述第二组分的浓度选自：0.2～10μg/mL，优选0.5～8μg/mL，更优选1～6μg/mL。
本发明第三方面提供了一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测的方法，所述方法是用于非诊断目的的，包括使用本发明第二方面所述的试剂盒进行化学发光检测。
在本发明的一些实施方案中，其包括如下步骤：
步骤S1，同时或完全或依次组合：
a.疑似含有人心肌肌钙蛋白I的待检测样本；
b.第一组合物，所述第一组合物包括第一组分和第一缓冲液；所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号，所述第一结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第一表位；
c.第二组合物，所述第二组合物包括第二组分和第二缓冲液；所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元，所述第二结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第二表位，所述第二表位与所述第一表位是人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位；
d.第三组合物，所述第三组合物包括第三组分和第三缓冲液；所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物，所述供体能够在激发状态产生单线态氧；
步骤S2，将V1体积待检测样本与V2体积所述第一组合物和V3体积所述第二组合物混合后进行第一反应，得到第一混合物；控制所述反应的温度为K1以及反应的时长为T1；
步骤S3，将所述第一混合物与所述第三组合物混合后进行第二反应，得到第二混合物；控制所述反应的温度为K2以及反应的时长为T2；
步骤S4，利用能量或者活性化合物激发所述第二混合物中的所述供体产生单线态氧，所述受体能够与接收到的单线态氧反应生成可检测的化学发光信号，通过检测化学发光信号的存在和/或强度，从而确定待检测样本中是否含有人心肌肌钙蛋白I和/或人心肌肌钙蛋白I的含量；
其中，T1≤15min，T2≤5min，且T1+T2≤15min。
在本发明的一些实施方案中，步骤S2中，首先将待检测样本与所述第一组合物混合后得到第三混合物，然后再将所述第三混合物与所述第二组合物混合后得到所述第一混合物。
在本发明的一些实施方案中，所述K1和/或K2的温度分别独立地选自35-45℃，优选选自37-42℃。
在本发明的一些实施方案中，所述T1≤12min；优选地，所述T1≤10min；进一步优选地，所述T1≤8min；更优选地，所述T1≤6min。
在本发明的一些实施方案中，所述T2≤3min；优选地，所述T2≤2min。
在本发明的一些实施方案中，所述T1+T2≤13min；优选地，所述T1+T2≤12.5min；进一步优选地，所述T1+T2≤10min；更优选地，所述T1+T2≤8min。
在本发明的一些实施方案中，所述T1为8min，所述T2为2min。
在本发明的一些实施方案中，5≤V1≤100μL，优选20≤V1≤120μL，更优选40≤V1≤100μL。
在本发明的一些实施方案中，5≤V2≤50μL，优选8≤V2≤40μL，更优选10≤V2≤25μL。
在本发明的一些实施方案中，5≤V3≤50，优选8≤V3≤40μL，更优选10≤V3≤25μL。
在本发明的一些实施方案中，所述方法的检测灵敏度小于等于5pg/mL。
在本发明的一些实施方案中，在步骤S4中，使用600-700nm波长的激发光照射所述第二混合物物，激发所述供体产生单线态氧，所述受体与接触到的单线态氧反应生成520-620nm的发射光，通过检测发射光信号的存在和/或强度，从而判断待检测样本中是否存在人心肌肌钙蛋白I和/或确定人心肌肌钙蛋白I的含量。
本发明第四方面提供了一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测装置，其利用本发明第二方面所述的试剂盒或者发明第三方面所述的检测的方法检测人心肌肌钙蛋白I。
在本发明的一些实施方案中，其包括如下部分：加样模块、试剂模块、温育模块、检测模块以及电路控制模块；所述温育模块、所述试剂模块、所述加样模块、所述温育模块以及所述检测模块均与所述电路控制模块电连接。
在本发明的一些实施方案中，所述试剂模块包括用于加入第一组合物的第一组件以及用于加入第二组合物的第二组件。
本发明第五方面提供了本发明第二方面所述的试剂盒或者本发明第三方面所述的检测的方法或者本发明第四方面所述的装置在POCT检测技术中的应用。
本发明第六方面提供了一种本发明第二方面所述的人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒或本发明第三方面所述的方法在检测待检测样本中人心肌肌钙蛋白I的存在与否和/或含量中的应用。
本发明第七方面提供了一种本发明第一方面所述的方法在制备用于检测怀疑患有心肌损伤的受治疗者或待体检者的待检测样本中的人心肌肌钙蛋白I，由此确定待检测样本中人心肌肌钙蛋白I的水平，并将由此确定的水平与受治疗者的心肌损伤的存在、风险、潜在性或倾向性相关联的试剂盒中的应用。
本发明中试剂盒具备的技术效果：线性好。灵敏度好。准确度高。检测限低。检测耗时短。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图做简单地介绍，显而易见，下面简述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明一种试剂盒检测原理示意图。
图2为本发明另一种试剂盒检测原理示意图。
具体实施方式
为使本发明更容易理解，下面将详细说明本发明。但在详细描述本发明前，应当理解本发明不限于描述的具体实施方式。还应当理解，本文中使用的术语仅为了描述具体实施方式，而并不表示限制性的。
在提供了数值范围的情况下，应当理解所述范围的上限和下限和所述规定范围中的任何其他规定或居间数值之间的每个居间数值均涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立包括在较小的范围中，并且也涵盖在本发明内，服从规定范围中任何明确排除的限度。在规定的范围包含一个或两个限度的情况下，排除那些包括的限度之任一或两者的范围也包含在本发明中。
除非另有定义，本文中使用的所有术语与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以在本发明的实施或测试中使用，但是现在描述了优选的方法和材料。
I.术语
本发明所述用语“均相”所对应的英文定义为“homogeneous”，其是指无须对特异性结合配对成员之间相互结合形成的复合物和剩余的游离特异性结合配对成员中的一员或另一员进行分离即可进行检测，例如，其可指无须对结合的抗原抗体复合物和剩余的游离抗原或抗体进行分离即可进行检测。
本发明所述用语“待测样本”是指可能含有被分析物的一种混合物，被分析物包括但不限于蛋白质、激素、抗体或抗原。可以被用在本发明公开的方法或产品中的典型待测样本包括体液，如血液、血液衍生物、血清、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、滑液和肺气肿积液等。待测样本可以是在使用前根据需要利用稀释液或缓冲溶液对可能含有被分析物的样本进行稀释后的溶液。例如，为了避免HOOK效应，可以在上机检测前使用样本稀释液将被分析物进行稀释后再在检测仪器上进行检测，此时可能含有被分析物的稀释后的溶液均统称为待测样本。
本发明所述用语“抗体”和“免疫球蛋白”以最广含义使用，包括任何同种型的抗体或免疫球蛋白，保留对抗原的特异性结合的抗体片段，包括但不限于Fab、Fv、scFv、和Fd片段、嵌合抗体、人源化抗体、骆驼化抗体、单链抗体、双特异性抗体、和包含抗体的抗原结合部分和非抗体蛋白的融合蛋白。在任何需要的情况下，抗体可以进一步与其它部分，诸如标记物和标记物的特异结合物，例如生物素或链霉亲和素等缀合。
本发明所述用语“单克隆抗体”是指由单克隆的B淋巴细胞分泌的免疫球蛋白，其可以通过本领域技术人员所公知的方法来制备得到，或者经原核或真核细胞表达的前述免疫球蛋白或经人工改造但保留或增强原抗原结合特性。
本发明所述用语“多克隆抗体”是指由一个以上的B淋巴细胞克隆产生的免疫球蛋白集合，其可以通过本领域技术人员所公知的方法来制备得到。
本发明所述用语“结合”指不同分子之间通过识别而在空间上持续性毗邻，包括但不限于形成更大的分子、分子复合物、分子络合物等，特异性识别可包括静电、疏水、离子和/或氢键等相互作用，包括但不限于如盐桥和水桥等相互作用引起的两个分子间的直接联合，例如，抗原和抗体结合形成复合物，还可指通过化学基团的特异性反应将不同的分子键合起来形成更大的分子或复合物，例如通过活性基团将生物素与抗体共价交联。
本发明所述用语“结合单元”指与“受试物”能够发生特异性结合的分子或复合物，在一些情况下，结合单元的整体或其一部分与待检测的分子发生结合后，另一部分仍保持原生物或化学活性。
本发明所述用语“组分”指能够单独进行提纯、反应、测试、表征、混合、配制等操作的最小化学单元或单元复合体，在一些情况下，组分指分子、聚合物、化学标记的大分子。
本发明所述用语“特异性结合”，是指不同分子之间的相互辨别和选择性结合反应，从立体结构角度上说就是相应的反应物之间构象的对应性，从化学反应角度上说是具有特定反应性的不同基团之间的结合的反应。
本发明所述用语“标记物”和“标记物的特异结合物”是指这样一对分子，它们能够相互特异性结合，例如，酶-底物、抗原-抗体、配基-受体。一个具体的特异性结合配对成员对的例子是生物素-链霉亲和素系统，其中“生物素”广泛存在于动植物组织中，其分子上有两个环状结构，分别为咪唑酮环和噻吩环，其中咪唑酮环是与链霉亲和素结合的主要部位。活化的生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联，包括蛋白质、核酸、多糖和脂类等；而“链霉亲和素”是由链霉菌分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。“链霉亲和素”分子由4条相同的肽链组成，其中每条肽链都能结合一个生物素。因此每个抗原或抗体可同时偶联多个生物素分子，从而产生“触手效应”提高分析灵敏度。
本发明所述用语“供体”是指通过能量或者活性化合物的激活后能够产生与受体反应的诸如单线态氧的活性中间体的敏化剂。供体可以是光活化的(如染料和芳香化合物)或者化学活化的(如酶、金属盐等)。
在本发明一些具体实施例中，所述供体是光敏剂，所述光敏剂可以是本领域已知的光敏剂，优选相对光稳定且不与单线态氧有效反应的化合物，其非限定性的例子包括例如美国专利US5709994(该专利文献在此全文引为参考)公开的亚甲基蓝、玫瑰红、卟啉、酞菁和叶绿素等化合物，以及这些化合物的具有1-50个原子取代基的衍生物，所述取代基用于使得这些化合物更具有亲脂性或更具有亲水性、和/或作为连接至特异性结合配对成员的连接基团。本领域技术人员已知的其他光敏剂的例子也可以在本发明中使用，例如美国专利US6406913中记载的内容，该专利文献并入本文以供参考。
在本发明另一些具体实施例中，所述供体是化学活化的其他敏化剂，其非限定性的例子是某些化合物，它们催化过氧化氢转化为单线态氧和水。其他一些供体的例子包括：1,4-二羧基乙基-1,4-萘内过氧化物、9,10-二苯基蒽-9,10-内过氧化物等，加热这些化合物或者这些化合物直接吸收光会释放单线态氧。
本发明所述用语“受体”是指能够与单线态氧反应可以产生可检测信号的物质。供体被能量或者活性化合物诱导激活并释放高能态的单线态氧，该高能态的单线态氧被近距离的受体俘获，从而传递能量以激活所述受体。
在本发明的一些具体实施例中，所述受体是这样的物质：其经历与单线态氧的化学反应以形成不稳定的亚稳态中间体，所述亚稳态中间体可以分解，同时或随后发光。这些物质的典型例子包括但不限于：烯醇醚、烯胺、9-烷叉黄原胶、9-烷叉-N-烷基吖啶满、芳乙烯醚、双环氧乙烯、二甲基噻吩、芳香性咪唑或光泽精。
在本发明的另一些具体实施例中，所述受体是能够与单线态氧反应以形成可以分解成酮类或羧酸衍生物的氢过氧化物或二氧环丁烷的烯烃类；可以通过光的作用分解的稳定二氧环丁烷；可以与单线态氧反应以形成二酮类的乙炔类；可以形成偶氮化合物或偶氮羰基化合物的腙类或酰肼类，诸如鲁米诺；和可以形成内过氧化物类的芳族化合物。可以根据本公开和要求保护的发明利用的受体的具体的、非限制性实例记载于美国专利号US5340716(该专利文献在此全文引为参考)。
在本发明另一些具体实施例中，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其是非粒子化的且可溶于含水介质中，这种受体的制备方法可参见专利PCT/US2010/025433(该专利文献在此全文引为参考)。
在本发明中所述“供体”可以是通过功能基团被包被在基体上形成填充有感光化合物的高分子微粒，在光激发下能够产生单线态氧；和/或，所述“受体”可以是通过功能基团被包被在基体上形成填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。
在本发明中，所述供体可以是通过功能基团被包被在基体上形成填充有感光化合物的高分子微粒，在光激发下能够产生单线态氧，此时供体也可以称为感光微球或感光微粒，包含这种感光微球或感光微粒的溶液可以称为感光液或通用液；和/或，所述受体可以是通过功能基团被包被在基体上形成填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒，此时可以称为发光微球或发光微粒。在本申请中，系统基于包被在基体表面的发光物质经光激发和能量传递诱导发光信号，能量传递依赖于抗原-抗体结合导致感光微球和发光微球相互靠近而实现。因此无需分离过程。纳米微球的直径更小，其悬浮性能更强，同时采用了三级放大发光系统，因而具有更高的分析灵敏度；整个检测过程无需清洗，即无需分离结合标记和结合标记物，因此反应时间更短；示踪物质(感光剂和发光剂)标记在基体上，而不是标记在生物分子上，对生物分子的活性没有影响，同时，因基体存在较大的比表面积，故其表面上能够包被更多的示踪物质及生物分子，致其在试剂的有效浓度和灵敏度及检测背景等方面的表现会更优。
本发明所述“基体”是本领域技术人员所公知的微球或微粒，其可以是任何尺寸的，其可以是有机的或是无机的，其可以是可膨胀或不可膨胀的，其可以是多孔的或非多孔的，其具有任何密度，但优选具有和水接近的密度，优选能漂浮于水中，且由透明、部分透明或不透明的材料构成。所述基体可以有或没有电荷，当带有电荷时，优选是负电荷。所述基体可以是固体(如聚合物、金属、玻璃、有机和无机物诸如矿物、盐和硅藻)、小油滴(如碳氢化合物、碳氟化合物、硅质流体)、囊泡(如合成的诸如磷脂、或天然的诸如细胞、及细胞器官)。基体可以是乳胶颗粒或是含有有机或无机聚合物的其他颗粒、脂双层如脂质体、磷脂囊泡、小油滴、硅颗粒、金属溶胶、细胞和微晶染料。基体通常具有多功能性，或者能够通过特异或非特异的共价或非共价相互作用而结合到供体或受体上。有许多官能团是可用的或者将其合并进来。典型的官能团包括羧酸、乙醛、氨基、氰基、乙烯基、羟基、巯基等。适用于本发明的基体的一个非限制性的例子是羧基改性的乳胶颗粒。这种基体的详细情况可参见美国专利US5709994与US5780646(这两篇专利文献在此全文引为参考)。
本发明所述用语“表位”是指但不限于能够特异性结合免疫球蛋白或者T细胞受体的任何蛋白决定簇。在本发明的一些具体实施例中，表位是抗原表面能够被抗体特异性结合的区域。表位决定簇通常可以包括分子的化学活性表面基团，例如但不限于：氨基酸、糖侧链、磷酰基和/或磺酰基。在本发明的其他一些具体实施例中，表位可以具体特定三位结构特征以及特定电荷特征。在有些情况下，表位可以表示分子表面上具有特异结合特性的空间结构，例如但不限于：完全或局部互补的核酸序列。
II.技术方案
针对现有技术的不足，本发明第一方面提供了一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括：
制备第一组分，所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号，所述第一结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第一表位；
制备第二组分，所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元，所述第二结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第二表位，所述第二表位与所述第一表位是人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位；
制备第三组分，所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物，所述供体能够在激发状态产生单线态氧。
该方法制备的试剂盒可以良好地定量检测样本中的心肌肌钙蛋白I。
在此，需要特别说明的是，本发明所述的所有方法均为非疾病诊断目的的方法。
在本发明的一些实施方案中，所述第一结合单元和所述第二结合单元分别独立选自与人心肌肌钙蛋白I具有结合特异性的多克隆抗体、单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体、修饰的抗体，优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体。
在本发明的一些实施方案中，所述第一结合单元和/或所述第二结合单元独立包含至少两种能够与人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位具有结合特异性的不同的单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体或修饰的抗体。
在本发明的一些实施方案中，所述第一标记物为生物素，所述第一标记物的所述特异结合物为链霉亲和素。
第一标记物及其特异结合物可以为液相特异性结合的不发生反应，不影响系统的光谱特性的成对分子，比如地高辛分子及其抗体，还可以是互补的两端DNA单链或互补的两段肽核酸。
在本发明的一些实施方案中，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。
在本发明的一些实施方案中，所述供体为光活化的或化学活化的敏化剂，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述供体为填充有感光化合物的高分子微粒，在光激发下能够产生单线态氧。
在本发明的一些实施方案中，制备第一组合物，所述第一组合物包括所述第一组分和第一缓冲液；
制备第二组合物，所述第二组合物包括所述第二组分和第二缓冲液；
制备第三组合物，所述第三组合物包括所述第三组分和第三缓冲液。
上述各种缓冲液需要在检测过程中是反应惰性的，可选地，能够维持一定pH范围的缓冲液，比如磷酸盐缓冲液，pH7.4，0.1M Tris-HCl溶液。缓冲液中还可添加蛋白质稳定剂。可加入牛血清白蛋白。
在本发明的一些实施方案中，所述第一结合单元与所述受体间接结合；优选地，所述第一结合单元与所述受体通过异硫氰酸荧光素-异硫氰酸荧光素抗体系统间接结合。
间接结合可以是任何可以增加，所述第一结合单元与所述受体间结合中介柔性的成分，比如，可以是将所述第一结合单元与所述受体通过脂肪链结合，通过单链或双联DNA结合等。
在本发明的一些实施方案中，制备所述第一组合物的步骤如下：
取所述受体并用碳酸盐缓冲液稀释，加入所述第一结合单元，充分混匀结合。
取所述第二结合单元在碳酸氢钠缓冲液中用透析袋透析，然后加入所述标记物，充分混匀结合。
在本发明的一些实施方案中，所述第一组合物、所述第二组合物与所述第三组合物中的任一个、任两个或三个还包含表面活性剂，优选非离子表面活性剂，更优选直链非离子表面活性剂，最优选聚乙二醇型直链非离子表面活性剂。
所述表面活性剂包括但不限于α-异十三烷基-ω-羟基-聚(氧-1,2-亚乙基)，脂肪醇聚氧乙烯醚(HO(CH2CH2O)n(CH2)mH)，聚氧乙烯，聚氧乙烯聚氧丙烯醚(RO(C3H6O)m(C2H4O)nH)。
在本发明的一些实施方案中，所述第三组合物中的表面活性剂的重量体积浓度为0.001％-0.1％，优选0.01％-0.04％，更优选0.02％。
本发明第二方面提供了一种用于均相检测人心肌肌钙蛋白I的试剂盒，所述试剂盒是根据本发明第一方面所述的人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒的制备方法制备得到的。
在本发明的一些实施方案中，所述第一组合物中的所述第一组分的浓度选自20～300μg/mL，优选30～200μg/mL，更优选40～100μg/mL。在本发明的一些优选的实施方式中，所述第一组合物中a的浓度可以包括但不限于选自50μg/mL、60μg/mL、70μg/mL、80μg/mL、90μg/mL、100μg/mL、120μg/mL、140μg/mL、150μg/mL、160μg/mL、180μg/mL或200μg/mL；
在本发明的一些实施方案中，所述第二组合物中的所述第二组分的浓度选自：0.2～10μg/mL，优选0.5～8μg/mL，更优选1～6μg/mL。所述第二组合物中组分b的浓度可以包括但不限于选自1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL、5μg/mL、6μg/mL或7μg/mL；
所述第三组合物中组分c的浓度可以选自60μg/mL、70μg/mL、80μg/mL、90μg/mL、100μg/mL、120μg/mL、160μg/mL、180μg/mL或200μg/mL。
本发明第三方面提供了一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测的方法，所述方法是用于非诊断目的的，包括使用本发明第二方面所述的试剂盒进行化学发光检测。
所述试剂盒还可包括包装盒体。包装盒体内可设有保温隔层、储冷剂包、试剂盒使用说明书等附件。
试剂盒的任一组分或组合物可容纳于独立的容器中。容器表面可具有标识标记。标识标记可选自但不限于可写字标签、条形码、二维码、磁性标签、无线信号接收器、无线信号发射器。
在本发明的一些实施方案中，其包括如下步骤：
步骤S1，同时或完全或依次组合：
a.疑似含有人心肌肌钙蛋白I的待检测样本；
b.第一组合物，所述第一组合物包括第一组分和第一缓冲液；所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号，所述第一结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第一表位；
c.第二组合物，所述第二组合物包括第二组分和第二缓冲液；所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元，所述第二结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第二表位，所述第二表位与所述第一表位是人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位；
d.第三组合物，所述第三组合物包括第三组分和第三缓冲液；所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物，所述供体能够在激发状态产生单线态氧；
步骤S2，将V1体积待检测样本与V2体积所述第一组合物和V3体积所述第二组合物混合后进行第一反应，得到第一混合物；控制所述反应的温度为K1以及反应的时长为T1；
步骤S3，将所述第一混合物与所述第三组合物混合后进行第二反应，得到第二混合物；控制所述反应的温度为K2以及反应的时长为T2；
步骤S4，利用能量或者活性化合物激发所述第二混合物中的所述供体产生单线态氧，所述受体能够与接收到的单线态氧反应生成可检测的化学发光信号，通过检测化学发光信号的存在和/或强度，从而确定待检测样本中是否含有人心肌肌钙蛋白I和/或人心肌肌钙蛋白I的含量；
其中，T1≤15min，T2≤5min，且T1+T2≤15min。
由于是均相反应，试剂添加并不限于上述顺序，上述顺序仅为一些优选的顺序，只要体系中通过不同添加顺序与途径同时存在第一组合物、第二组合物、第三组合物和待检测样品，均可以通过激光来激发单线态氧，进行检测。
在本发明的一些实施方案中，步骤S2中，首先将待检测样本与所述第一组合物混合后得到第三混合物，然后再将所述第三混合物与所述第二组合物混合后得到所述第一混合物。
在本发明的一些实施方案中，所述K1和/或K2的温度分别独立地选自35-45℃，优选选自37-42℃。
在本发明的一些实施方案中，所述T1≤12min；优选地，所述T1≤10min；进一步优选地，所述T1≤8min；更优选地，所述T1≤6min。
在本发明的一些实施方案中，所述T2≤3min；优选地，所述T2≤2min。
在本发明的一些实施方案中，所述T1+T2≤13min；优选地，所述T1+T2≤12.5min；进一步优选地，所述T1+T2≤10min；更优选地，所述T1+T2≤8min。
在本发明的一些实施方案中，所述T1为8min，所述T2为2min。
在本发明的一些实施方案中，5≤V1≤100μL，优选20≤V1≤120μL，更优选40≤V1≤100μL。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述V1可以包括但不限于选自40μL、45μL、50μL、55μL、60μL、65μL、70μL、75μL、80μL、85μL、90μL或100μL。
在本发明的一些实施方案中，5≤V2≤50μL，优选8≤V2≤40μL，更优选10≤V2≤25μL。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述V2可以包括但不限于选自10μL、12μL、14μL、16μL、18μL、20μL、22μL或25μL。
在本发明的一些实施方案中，5≤V3≤50，优选8≤V3≤40μL，更优选10≤V3≤25μL。
在本发明的一些实施方案中，所述方法的检测灵敏度小于等于5pg/mL。
在本发明的一些实施方案中，在步骤S4中，使用600-700nm波长的激发光照射所述第二混合物物，激发所述供体产生单线态氧，所述受体与接触到的单线态氧反应生成520-620nm的发射光，通过检测发射光信号的存在和/或强度，从而判断待检测样本中是否存在人心肌肌钙蛋白I和/或确定人心肌肌钙蛋白I的含量。
本发明第四方面提供了一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测装置，其利用本发明第二方面所述的试剂盒或者发明第三方面所述的检测的方法检测人心肌肌钙蛋白I。
在本发明的一些实施方案中，其包括如下部分：加样模块、试剂模块、温育模块、检测模块以及电路控制模块；所述温育模块、所述试剂模块、所述加样模块、所述温育模块以及所述检测模块均与所述电路控制模块电连接。
在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒具有试验所需的若干试剂位；
在本发明的一些实施方案中，所述光激化学发光时检测仪器包括具有进行液体转移的移液机构，以及对所述试剂盒内反应体系发光信息收集的检测机构。
在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒为一次性封膜试剂盒。
在本发明的一些实施方案中，所述一次性封膜试剂盒包括盒体和设于盒体上的封膜；所述盒体至少包括样本位、稀释位、试剂位、密光检测位；所述试剂位设有若干个。
在本发明的一些实施方案中，光激化学发光时检测仪器还包括承载所述试剂盒的试剂盒平台。
在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒平台具有绕中心轴转动的试剂盒平台，沿所述试剂盒平台周向设有若干试剂盒，所述试剂盒底部设有试剂盒托架，相邻的所述试剂盒托架间，且靠近试剂盒平台的外缘位置设有移液头放置位，移液头设于其内；所述试剂盒平台由试剂盒平台运动模块控制所述试剂盒平台转动。
在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒平台上还设有温控模块。
在本发明的一些实施方案中，所述移液机构包括移液组件，所述移液组件在滑轨运动模块的控制下水平向直线运动，在丝杆运动模块的控制下垂直向直线运动；所述移液组件包括活塞机构和与所述活塞机构下端弹性连接的柱塞头，所述柱塞头可与所述移液头连接。
在本发明的一些实施方案中，所述活塞机构包括活塞、设于活塞外部的导向件和驱动活塞运动的电机，通过活塞运动实现所述移液头对液体的吸排和转移。
在本发明的一些实施方案中，所述检测机构包括检测器和控制检测器运动的检测器控制模块；所述检测器具有光传感器。
在本发明的一些实施方案中，所述光传感器的前端加设镜头。
在本发明的一些实施方案中，所述试剂模块包括用于加入第一组合物的第一组件以及用于加入第二组合物的第二组件。
本发明第五方面提供了本发明第二方面所述的试剂盒或者本发明第三方面所述的检测的方法或者本发明第四方面所述的装置在POCT检测技术中的应用。
即时检验(point-of-care testing)技术，简称POCT检测技术。
本发明第六方面提供了一种本发明第二方面所述的人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒或本发明第三方面所述的方法在检测待检测样本中人心肌肌钙蛋白I的存在与否和/或含量中的应用。
本发明第七方面提供了一种本发明第一方面所述的方法在制备用于检测怀疑患有心肌损伤的受治疗者或待体检者的待检测样本中的人心肌肌钙蛋白I，由此确定待检测样本中人心肌肌钙蛋白I的水平，并将由此确定的水平与受治疗者的心肌损伤的存在、风险、潜在性或倾向性相关联的试剂盒中的应用。
发明第八方面提供了一种本发明第四方面所述的受试物均相快速检测装置的控制方法，其特征在于，所述控制方法包括：
控制所述加样模块取V1体积的待检测样品、V2体积的第一组合物以及V3体积的第二组合物进行第一反应，得到第一混合物；
控制所述温育模块对所述第一混合物进行温育，使所述反应的温度为K1以及反应的时长为T1；
控制所述试剂模块取V4体积的所述第三组合物与所述第一混合物后进行第二反应，得到第二混合物；
控制所述温育模块对所述第二混合物进行温育，使所述反应的温度为K2以及反应的时长为T2；
控制所述检测模块使能量或者活性化合物激发所述第四混合物中的所述供体产生单线态氧。
在本发明的一些实施方案中，5≤V1≤100μL，优选20≤V1≤120μL，更优选40≤V1≤100μL。
在本发明的一些实施方案中，5≤V2≤50μL，优选8≤V2≤40μL，更优选10≤V2≤25μL。
在本发明的一些实施方案中，5≤V3≤50，优选8≤V3≤40μL，更优选10≤V3≤25μL。
在本发明的一些实施方案中，100≤V4≤250，优选120≤V4≤200μL，更优选150≤V4≤180μL。
III.实施例
为使本发明更加容易理解，下面将结合实施例来进一步详细说明本发明，这些实施例仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围。本发明中所使用的原料或组分若无特殊说明均可以通过商业途径或常规方法制得。
材料与设备
cTnI纯品。
四株抗cTnI单克隆抗体，代号Ab1、Ab2、Ab3、Ab4，其中Ab1、Ab2购自菲鹏生物公司，Ab3、Ab4购自华葵金配公司。
光激化学发光检测仪：LiCA HT均相发光免疫分析仪，博阳生物科技(上海)有限公司生产，型号为10200230。
(1)抗体包被发光微粒(被缓冲液稀释后称R1)的制备方法
发光微球(受体)：微粒表面含有醛基(-CHO)，通过醛基与抗体分子连接。内含有发光化合物(二甲基噻吩的衍生物)及镧系元素(Eu)化合物的螯合物。
发光微球可购自铂金埃尔默有限公司，货号6762001。
生物原料：抗cTnI抗体。
制备过程：取2mg发光微球溶液并用0.05M pH 9.6碳酸盐缓冲液(CB)稀释成5mg/ml，取抗体0.02mg转移至微粒管中，充分混匀4℃包被过夜；再加入用CB缓冲液稀释成10mg/ml的BSA溶液20μl，室温旋转2h；充分洗涤微粒，再用pH 7.4，0.1M Tris-HCl溶液将微粒稀释至100μg/ml，即作为工作储备液(R1)
(2)生物素标记抗体(被缓冲液稀释后称R2)的制备方法
活化生物素：NHS生物素。
生物原料：抗cTnI抗体。
制备过程：取抗体0.5mg转移至14KD透析袋内，用标记缓冲液(0.1M NaHCO3)透析，2h/次，换液1次；加入5mg/ml的活化生物素溶液10μl，迅速混匀，补充标记缓冲液至500μl，2-8℃混匀过夜，标记比例为1:30(抗体:生物素-摩尔比)；将标记完成的Bio-Ab试剂转移至14KD透析袋，用透析缓冲液(0.1M Tris-HCl)透析，2h/次，换液1次；用pH 7.4，0.1M Tris-HCl溶液稀释至5μg/ml。
(3)包被有链霉亲和素的感光微粒(被缓冲液稀释后称R3)的制备方法
感光微球(供体)内含有感光化合物酞箐染料(鲁米诺类化学发光物质)，同时感光微球内含有活泼醛基，并预先包被有链霉亲和素。
感光微球可购自铂金埃尔默有限公司，货号6760002S。
具体步骤为：
a、感光微球(供体)混悬液处理：吸取一定量的感光微球于高速冷冻离心机中离心，弃去上清，加入一定量MES缓冲液，超声细胞破碎仪上超声至微粒重新悬浮，加入MES缓冲液调节感光微球浓度至100mg/ml。
b、链霉亲和素溶液配制：称量一定量链霉亲和素，加MES缓冲液溶解至8mg/ml。
c、混合：将处理好的感光微球(供体)混悬液、8mg/ml的链霉亲和素溶液以及MES缓冲液，以2:5:1的体积比进行混合，迅速混匀，得到反应液。
d、反应：MES缓冲液配制25mg/ml的NaBH3CN溶液，按照与反应液1:25的体积比加入，迅速混匀，37℃旋转反应48小时。
e、封闭：MES缓冲液配制75mg/ml的Gly溶液以及25mg/ml的NaBH3CN溶液，按照与反应液2:1:10的体积比加入上述溶液中，混匀，37℃旋转反应2小时。再加入200mg/ml的BSA溶液(MES缓冲液)，其与反应液体积比为5:8，迅速混匀，37℃旋转反应16小时。
f、清洗：向反应好的溶液中加入MES缓冲液，高速冷冻离心机离心，弃上清，加入新鲜MES缓冲液超声法重新悬浮，再次离心，如此清洗3次，最后所得沉淀为包被有链霉亲和素的感光微粒。
(4)FITC标记抗体的制备方法
抗体的准备：取适量抗cTnI抗体，置入三角烧瓶中，加入碳酸盐缓冲液，使最后蛋白浓度为20mg/mL，缓冲液容量为总量的1/10，混匀，将三角烧瓶置冰槽中，电磁搅拌5～10min。
FITC的准备：根据抗cTnI抗体总量，按每毫克抗cTnI抗体加0.01mg荧光素，用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末。
结合：边搅拌边将称取的FITC渐渐加入抗cTnI抗体溶液中。加毕后，继续搅拌12～18h。结合期间应保持蛋白溶液于4摄氏度冰箱或冰库中。
透析：结合完毕后，将抗cTnI抗体的溶液离心(2500rpm)20min，除去其中少量的沉淀物，装入透吸袋中后再置于烧杯中，用pH8.0缓冲盐水透析(0～4摄氏度)过液。
稀释：用pH 7.4，0.1M Tris-HCl溶液稀释至5μg/ml。
上述试剂可根据实际需要确定浓度或在使用时用pH 7.4，0.1M Tris-HCl溶液稀释至所需浓度。
本发明实施例的人心肌钙蛋白I(cTnI)测定试剂盒(光激化学发光法)技术方案的核心检测原理如附图1所示，本发明采用双抗体夹心分析模式，检测反应体系包括第一组分、第二组分、第三组分和待检测样本。
第一组分为具有人心肌钙蛋白I(cTnI)结合特异性的第一抗体包被的发光微球/微粒(代号FG-Ab)，该组分或包含该组分的组合物/混合物称作试剂1(R1)。
第二组分为具有cTnI结合特异性的第二抗体标记的生物素(代号Bio-Ab，Biotin-Ab)，该组分或包含该组分的组合物/混合物称作试剂2(R2)。
第三组分为包被有链霉亲和素的感光微球/微粒(代号SA-GG)，该组分或包含该组分的组合物/混合物称作试剂3(R3)。
待检测样本为cTnI，cTnI溶液，(可能)含有cTnI的复合物，(可能)含有cTnI的血清、组织液或组织匀浆，包括但不限于已知浓度的cTnI，已知cTnI浓度的系列校准品，cTnI的低值、高值质控品。
还包括化学发光检测仪，以及相关的常规试剂与耗材。
检测时，上述组分均呈液相状态，将待检测样本、R1和R2混合温浴，待测样本中的cTnI分别与FG-Ab和Bio-Ab结合形成双抗体夹心复合物，随后向反应体系添加R3，SA-GG的链霉亲和素部分与双抗体夹心复合物中生物素(Bio)结合，发光微粒和感光微粒相互靠近，能量或者活性化合物与感光微粒接触后，感光微粒释放出单线态氧，该单线态氧扩散并结合到发光微粒后诱导发光微粒产生光信号。单线态氧扩散超过200nm左右的距离将淬灭，因此游离的发光微粒几乎不能获得能量，无光信号的产生。因此，光信号强度与反应体系中双抗体夹心复合物含量呈正比例函数关系，当cTnI的摩尔含量不超过FG-Ab和Bio-Ab的最小值时，光信号强度与待测样本中cTnI含量呈正比例函数关系，通过已知含量cTnI校准品所形成的数学函数，便可计算未知标本中cTnI浓度水平。
也就是说，将临床标本或校准品与R1溶液和R2溶液混合，待检cTnI分别与发光微球表面的特异性抗体和生物素标记的特异性抗体结合，形成双抗体夹心复合物；此时两种抗体过量，存在未结合状态的抗体分子。加入链霉亲和素包被的感光微球，链霉亲和素与生物素分子结合(包括复合物或游离生物素抗体)，但只有结合复合物(FG-Ab-cTnI-Bio-Ab)中的生物素，才能将发光和感光微粒结合在一起，此时在能量或者活性化合物的作用下，比如激光照射情况下，存在活性氧分子转移，致使发光微粒产生光信号。游离的包被抗体发光微粒(FG)远离感光微粒(GG)，不能产生光信号。因此，光信号强度与标本中cTnI含量呈正比例函数关系。采用已知cTnI浓度校准品和相应的光信号强度建立数学函数关系，未知样本cTnI浓度通过次函数获得。
与现有技术相比，本技术发明所提供的快速血清cTnI定量检测试剂盒的显著效果是：此产品隶属均相免疫分析，全程没有分离洗涤过程，不仅节省检测时间，而且回避洗涤所致误差，具备较高的精密度和准确度。
实施例1-基础试剂盒
试剂盒的核心组分为：
本实施例的cTnI定量测定检测试剂盒(光激化学发光法)由包含第一抗cTnI单克隆抗体包被的发光微粒(FG-Ab)的组合物(试剂1、R1)、包含生物素标记的第二抗cTnI单克隆抗体(Bio-Ab)的组合物(试剂2、R2)组成；还包括待检测样本。此外，包括包含包被有链霉亲和素的感光微球(SA-GG)的组合物(试剂3，R3)，包括光激化学发光分析仪等。
本实施例的试剂盒的使用方法，包括：
检测过程由自动光激化学发光分析系统全自动完成并输出检测结果。基于检测原理的具体步骤为：
a.在反应孔中加入待检样本；
b.在反应孔中依次加入R1和R2；
c.温育；
d.在反应孔中加入R3；
e.温育；
f.激光照射反应孔并计算每孔发光光子量；
可选地，g.计算样品浓度。
当检测体系中存在待测cTnI时，cTnI同时与包被第一抗cTnI单克隆抗体的发光微球以及结合生物素的第二抗cTnI单克隆抗体特异性结合，并于发光微球表面形成双抗体夹心复合物；此时，如加入链霉亲和素的感光微粒，生物素与链霉亲和素结合而使得两种微球相互靠近，在激发光源的激发下，感光微球释放单线态氧，在溶液中碰到发光微球后产生化学发光，从而更进一步激发同一个微球上的荧光基团产生级联放大反应产生荧光。此时，待测cTnI越多，荧光强度越强，根据发光的强弱定量检测血清中cTnI的含量。
实施例2
试剂盒材料的制备：
原理参见实施例1部分，具体材料及其相应试剂的制备方法按照材料与设备部分制备。
第一抗cTnI单克隆抗体包被的发光微球(受体)，代号：FG-Ab1。
第三抗cTnI单克隆抗体包被的发光微球，代号：FG-Ab3。
生物素标记的第二抗cTnI单克隆抗体，代号：Biotin-Ab2。
生物素标记的第四抗cTnI单克隆抗体，代号：Biotin-Ab4。
包被有链霉亲和素的感光微粒(供体)，代号：SA-GG。
由异硫氰酸荧光素标记的第一抗cTnI单克隆抗体，代号：FITC-Ab1。
抗FITC抗体包被的发光微球，代号：FG-抗FITC。
样本：33例低中高值样本，用pH 7.4，0.1M Tris-HCl溶液稀释将cTnI纯品稀释成不同的浓度。
针对每一个浓度的样本，分别平行进行四种模式的测试。
本实施例的试剂盒的使用方法，包括：
在不同的反应孔中平行添加试剂，平行检测，使用680nm波长的激发光照射反应孔，检测612nm波长的发射光。具体待检测物浓度和信号值参见表1。
针对第一类反应模式(M1)，具体检测步骤为：
a.在不同反应孔中分别加入40μl样品；
b.在每个反应孔中依次加入25μl R1和25μl R2；
c.37℃温育15分钟；
d.在每个反应孔中加入R3 175μl；
e.37℃温育10分钟；
f.激光分别独立照射微孔并计算每孔发光光子量。
其中，R1为40μg/mL FG-Ab1；
R2为1μg/mL Biotin-Ab2；
R3为50μg/mL SA-GG。
针对第二类反应模式(M2)，具体检测步骤与第一类反应模式的差别在于：
R1为25μg/mL FG-Ab1与25μg/mL FG-Ab2的等体积混合物。
针对第三类反应模式(M3)，具体检测步骤与第一类反应模式的差别在于：
R2为0.5μg/mL Biotin-Ab2与0.5μg/mL Biotin-Ab4的等体积混合物。
针对第四类反应模式(M4)，检测原理可参照图2理解，具体检测步骤为：
a.在不同反应孔中分别加入40μl样品；
b.在每个反应孔中依次加入25μl R1’和25μl R2；
c.37℃温育15分钟；
d.在每个反应孔中加入R3 175μl；
e.37℃温育10分钟；
f.激光分别独立照射微孔并计算每孔发光光子量。
其中，R1’为40μg/mL FITC-Ab1与FG-抗FITC组成的复合物；
R2为1μg/mL Biotin-Ab2；
R3为50μg/mL SA-GG。
表1四类反应模式下检测效果统计表
通过表1的数据可知，针对M1模式，试剂盒能够良好地区分不同浓度的样本。在此基础上，当发光微球使用等量的两种抗cTnI抗体的混合物时，M2模式针对特定浓度的样本的信号值明显更高，类似地，当生物素化抗体使用两种抗cTnI抗体的混合物时，M3模式针对特定浓度的样本的信号值明显更高。
针对M4模式，当抗体标记的微球与待检测样品中cTnI识别调整为抗体标记的微球与待检测样品中cTn通过FITC与抗FITC抗体为中介物识别后，在M1模式的基础上，M4模式针对中等以及较高浓度的样本的信号值明显更高，针对较低浓度的样本信号值略微更低。
由此可以看出，M1模式可以良好地检测疑似含有cTnI的样本，且M2、M3、M4模式的效果更好。
M2与M3模式中，两种单克隆抗体的混合使用比同等含量的单一单克隆抗体的信号强度更大。
这可能是由于在M2或M3模式中，样本中一些cTnI分子同时结合不同结合特性的单克隆抗体，使得信号增强。还可能有些cTnI部分降解，其中一种抗体的表位不能正常捕获，而另一种抗体表位保持结合特异性，这样混合抗体的使用使得信号增强。
可以预期，在M1模式的基础上，将单克隆抗体改为多克隆抗体后仍能够良好地进行待检测样本中cTnI的检测。
M4模式相对于M1模式的好处在于：
1.FITC-Ab1与FG-抗FITC形成的复合物中，Ab1的免疫识别结构域与cTnI结合的空间位阻更小，而且FITC交联比发光微球交联对Ab1活性的影响更小，因此与待检测样本中cTnI结合能力较强，更容易形成免疫复合体，从而将感光微球与发光微球中间连接起来，在有效的检测免疫复合体中，两种微球之间的柔性更好，二者靠近的机会更大，这样，单线态氧平均可以经历更小的距离发挥作用，失活而没有机会激发荧光的比例就会更小，增强荧光强度，进而增加检测灵敏性。
2.如果R1’中FITC-Ab1与FG-抗FITC是先后分步加入反应体系的，检测中可以先形成生物素标记的第二抗cTnI抗体-cTnI-FITC标记的第一抗cTnI抗体复合物，温育后再加入包被有链霉亲和素的感光微球和抗FITC抗体结合的发光微球，这样能够保证与待检测物cTnI形成免疫双夹心的过程与单线态氧产生与激发光的步骤相分离，减小环境对感光微球和发光微球的影响。
3.低浓度cTnI条件下，检测信号没有增加，说明在检测波长下，检测信号是发光微球发出的，因此并不是FITC发出的非特异性的荧光信号的干扰。
实施例3
本实施例的材料和方法的基本思路与实施例2的模式M1相同，二者的差别在于R3试剂中填入表面活性剂。
具体检测步骤为：
a.在不同反应孔中分别加入40μl样品；
b.在每个反应孔中依次加入25μl R1和25μl R2；
c.37℃温育15分钟；
d.在每个反应孔中加入R3 175μl；
e.37℃温育10分钟；
f.激光分别独立照射微孔并计算每孔发光光子量。
其中，R1为40μg/mL FG-Ab1；
R2为1μg/mL Biotin-Ab2；
R3为50μg/mL SA-GG。
R3中添加不同浓度的表面活性剂化学名称为α-异十三烷基-ω-羟基-聚(氧-1,2-亚乙基)。
1号抗原中cTnI浓度为0.04μg/mL，稀释液为pH 7.4，0.1M Tris-HCl溶液，待测样本从1号到8号按照倍比梯度稀释。
实验结果参见表2。
表2缓冲液中表面活性剂对试剂盒测试效果的影响
将cTnI浓度高中低的三个样本数据归一化处理，数据参见表3。
表3缓冲液中表面活性剂对试剂盒测试效果的影响归一化结果
通过表2和表3的数据可以看出，在其他条件相同的情况下能够显著增强检测信号值。
总体趋势是随着浓度升高信号值升高，但信号升高对浓度升高的斜率有减缓趋势，有个别测试出现了0.02％比0.04％的信号值更高的情况。
由此判断中的醚氧原子与单线态氧相互作用而使其稳定，比如，醚氧原子的电子轨道与单线态氧的电子轨道发生相互作用，延缓了单线态氧的淬灭，可以延长寿命，因此能够使信号值增强。另外，当浓度过高时，与结合的单线态氧被释放参与激发受体微球发光的比例就会减少，一部分在释放之前会失活，因此信号增强放缓。适当浓度的对单线态氧具有稳定作用，可以增强检测信号强度。
总体上，cTnI浓度越低，相同浓度对信号上升得更明显。这也使得能够增加低浓度cTnI的检测信号，进而提高试剂盒的检测限。
实施例4
本实施例的材料与方法的基本思路与实施例2的模式1相同，二者的差别在孵育不同温度的比较，具体如下：
具体检测步骤为：
a.在不同反应孔中分别加入40μl样品；
b.在每个反应孔中依次加入25μl R1和25μl R2；
c.37℃或42℃温育15分钟；
d.在每个反应孔中加入R3 175μl；
e.37℃或42℃温育10分钟；
f.激光分别独立照射微孔并计算每孔发光光子量。
其中，R1为200μg/mL FG-Ab1；
R2为8μg/mL Biotin-Ab2；
R3为160μg/mL SA-GG。
待测样本为一系列pH 7.4，0.1M Tris-HCl溶液稀释的cTnI。
具体反应物与发光值情况参见表4。
表4不同温度下检测信号的比较
从表4的数据可以看出其他条件相同的情况下，42℃比37℃下的信号值明显更高。可以控制反应温度来提高检测灵敏度。
实施例5
本实施例的材料与方法的基本思路与实施例2的模式1相同，二者的差别在于反应物浓度不同，具体检测步骤为：
a.在不同反应孔中分别加入40μl样品；
b.在每个反应孔中依次加入25μl R1和25μl R2；
c.37℃温育8分钟；
d.在每个反应孔中加入R3 175μl；
e.37℃温育2分钟；
f.激光分别独立照射微孔并计算每孔发光光子量。
其中，R1为分别50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的FG-Ab1；
R2为分别3μg/mL、5μg/mL、7μg/mL的Biotin-Ab2；
R3为分别40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL的SA-GG。
待测样本为梯度稀释的cTnI，第一稀释度代号为Ag-1，浓度为0.06μg/mL，稀释液为pH 7.4，0.1M Tris-HCl溶液，待测样本从Ag-1号到Ag-8号按照倍比梯度稀释(下一个浓度是上一个浓度的一半)。
具体反应物与发光值情况参见表5。
计算每个反应孔数据对应的信噪比值，具体结果参见表6。
表5不同反应物浓度下检测效果统计表
表6不同反应物浓度下检测效果信噪比统计表
通过表5和表6的数据可以看出：
1、发光微球浓度上升信号，信号梯度下降。
2、感光微球与生物素化抗体同步上升后信噪比下降。
该实验中cTnI项目反应体系为GG 40μg/mL、Biotin-Ab 3μg/mL、FG 50μg/mL时，信噪比最佳。信噪比高说明灵敏度更好。
实施例6
本实施例的材料与方法的基本思路与实施例2的模式1相同，二者的差别在步骤c的孵育时间不同，具体如下：
具体检测步骤为：
a.在不同反应孔中分别加入40μl样品；
b.在每个反应孔中依次加入25μl R1和25μl R2；
c.37℃温育为一系列不同的时间分钟；
d.在每个反应孔中加入R3 175μl；
e.37℃温育10分钟；
f.激光分别独立照射微孔并计算每孔发光光子量。
其中，R1为50μg/mL FG-Ab1；
R2为3μg/mL Biotin-Ab2；
R3为40μg/mL SA-GG。
待测样本为一系列pH 7.4，0.1M Tris-HCl溶液稀释的cTnI，每个稀释度下步骤c经历一系列温育时间，具体浓度、时间和发光值参见表7。
表7第一步温育时间系列结果
由表7的数据可以看出，步骤c的反应时间从15min降低到4min时，仍然能够检测到化学发光信号值，4min仍能满足特定检测需求，但这会加快检测速度，对着急的现场检测时具有较大益处。
实施例7
本实施例的材料与方法的基本思路与实施例2的模式1相同，二者的差别在步骤e的孵育时间不同，具体如下：
具体检测步骤为：
a.在不同反应孔中分别加入40μl样品；
b.在每个反应孔中依次加入25μl R1和25μl R2；
c.37℃温育15分钟；
d.在每个反应孔中加入R3 175μl；
e.37℃温育一系列不同的时间；
f.激光分别独立照射微孔并计算每孔发光光子量。
其中，R1为50μg/mL FG-Ab1；
R2为3μg/mL Biotin-Ab2；
R3为40μg/mL SA-GG。
待测样本为一系列pH 7.4，0.1M Tris-HCl溶液稀释的cTnI，每个稀释度下步骤e经历一系列温育时间，具体浓度、时间和发光值参见表8。
表8第二步温育时间系列结果
由表8的数据可以看出，步骤e的时间从12min降低到2min，信号值没有十分显著的下降。步骤e相对于步骤c减少时间对信号值的影响更小。这有利于快速检测。
实施例8
用作本实施例的受体以及与之结合的第一结合单元(第一组分)的制备方法是按照专利PCT/US2010/025433中记载的实施例来制备的，第一结合单元包被的受体的结构为抗cTnI单克隆抗体-BSA-(二甲基噻吩)-(BHHCT)，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶。试剂1(R1)中第一组分的浓度为100μg/mL。
本实施例中的其他材料及其用量、方法的核心思路与实施例2的四个模式分别相同，差别仅在于样本。
本实施例的目的在于测试受体为非粒子形式的试剂盒的可重复性，具体检测步骤为：在实施例2的基础上，每个模式下，均使用0.001μg/mL、0.1μg/mL、10.0μg/mL的cTnI蛋白pH 7.4，0.1M Tris-HCl稀释液作为检测样本，每个模式每个浓度重复8次。具体测试方法和结果参见表9。
表9试剂盒可重复性实验结果
表9(续表)试剂盒可重复性实验结果
根据表9的结果可以看出，不同浓度的样本，四种模式检测的信号值差别不明显，系统误差小，使得本发明的试剂盒适合定量检测。
实施例9-数学计算
针对实施例1-8中任何一种测试条件(测试条件包括但不限于测试模式、仪器、试剂的制备、试剂的浓度、操作流程与参数)，分别独立地通过LICA HT全自动分析仪器配套的计算机辅助系统，依据检测样品中cTnI浓度和发光值，通过编程，自动构建该条件下cTnI浓度和发光值之间的函数f，系统能够保存每种条件下的函数f，用于根据检测的样品相应的发光值自动计算相同测试条件下其他待检测样品中所含cTnI的浓度。
优选的方案是，试剂盒中包括一系列已知cTnI浓度的cTnI稀释液，作为校准品。每次检测新的样品时，在若干个平行检测的反应孔中加入校准品，应用系统自动计算本次检测条件下校准品的cTnI浓度和发光值之间的函数f，根据函数f自动计算出每个反应孔中待测样品中cTnI浓度。
校准品溶液可以为浓度0ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL系列的cTnI溶液。
使用校准品的好处在于，不必须控制每次检测条件的精确性，比如，温度可以有差别，试剂浓度也可以有差别，但校准品与待检测样品时在平行的条件下测定与计算的，这增加了本发明试剂盒的应用范围和准确性。这也可以说明，本发明实施例只是较优的技术方案，在相同的构思下，一些条件的调整或变化仍能够良好地实现本发明的目的，因此，合理预期的变化后的技术方案仍然包含在本发明的构思之中，也包含在本发明请求保护的范围实质当中。
应当注意的是，以上所述的实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明的任何限制。通过参照典型实施例对本发明进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。可以按规定在本发明权利要求的范围内对本发明作出修改，以及在不背离本发明的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本发明涉及特定的方法、材料和实施例，但是并不意味着本发明限于其中公开的特定例，相反，本发明可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。

Claims (32)

1.一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括：
制备第一组分，所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号，所述第一结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第一表位；
制备第二组分，所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元，所述第二结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第二表位，所述第二表位与所述第一表位是人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位；
制备第三组分，所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物，所述供体能够在激发状态产生单线态氧。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
所述第一结合单元和所述第二结合单元分别独立选自与人心肌肌钙蛋白I具有结合特异性的多克隆抗体、单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体、修饰的抗体，优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
所述第一结合单元和/或所述第二结合单元独立包含至少两种能够与人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位具有结合特异性的不同的单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体或修饰的抗体。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
所述第一标记物为生物素，所述第一标记物的所述特异结合物为链霉亲和素。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述供体为光活化的或化学活化的敏化剂，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述供体为填充有感光化合物的高分子微粒，在光激发下能够产生单线态氧。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：
制备第一组合物，所述第一组合物包括所述第一组分和第一缓冲液；
制备第二组合物，所述第二组合物包括所述第二组分和第二缓冲液；
制备第三组合物，所述第三组合物包括所述第三组分和第三缓冲液。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述第一结合单元与所述受体间接结合；优选地，所述第一结合单元与所述受体通过异硫氰酸荧光素-异硫氰酸荧光素抗体系统间接结合。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述第一组合物、所述第二组合物与所述第三组合物中的任一个、任两个或三个还包含表面活性剂，优选非离子表面活性剂，更优选直链非离子表面活性剂，最优选聚乙二醇型直链非离子表面活性剂。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述第三组合物中的表面活性剂的重量体积浓度为0.001％-0.1％，优选0.01％-0.04％，更优选0.02％。
11.一种用于均相检测人心肌肌钙蛋白I的试剂盒，所述试剂盒是根据权利要1-10中任一项所述的人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒的制备方法制备得到的。
12.根据权利要求11所述的剂盒，其特征在于，所述第一组合物中的所述第一组分的浓度选自20～300μg/mL，优选30～200μg/mL，更优选40～100μg/mL。
13.根据权利要求11或12所述的试剂盒，其特征在于，所述第二组合物中的所述第二组分的浓度选自：0.2～10μg/mL，优选0.5～8μg/mL，更优选1～6μg/mL。
14.一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测的方法，其使用如权利要求11-13中任一项所述的试剂盒进行化学发光检测。
15.如权利要求14所述的方法，其包括如下步骤：
步骤S1，同时或完全或依次组合：
a.疑似含有人心肌肌钙蛋白I的待检测样本；
b.第一组合物，所述第一组合物包括第一组分和第一缓冲液；所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号，所述第一结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第一表位；
c.第二组合物，所述第二组合物包括第二组分和第二缓冲液；所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元，所述第二结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第二表位，所述第二表位与所述第一表位是人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位；
d.第三组合物，所述第三组合物包括第三组分和第三缓冲液；所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物，所述供体能够在激发状态产生单线态氧；
步骤S2，将V1体积待检测样本与V2体积所述第一组合物和V3体积所述第二组合物混合后进行第一反应，得到第一混合物；控制所述反应的温度为K1以及反应的时长为T1；
步骤S3，将所述第一混合物与所述第三组合物混合后进行第二反应，得到第二混合物；控制所述反应的温度为K2以及反应的时长为T2；
步骤S4，利用能量或者活性化合物激发所述第二混合物中的所述供体产生单线态氧，所述受体能够与接收到的单线态氧反应生成可检测的化学发光信号，通过检测化学发光信号的存在和/或强度，从而确定待检测样本中是否含有人心肌肌钙蛋白I和/或人心肌肌钙蛋白I的含量；
其中，T1≤15min，T2≤5min，且T1+T2≤15min。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于：步骤S2中，首先将待检测样本与所述第一组合物混合后得到第三混合物，然后再将所述第三混合物与所述第二组合物混合后得到所述第一混合物。
17.如权利要求15或16所述的人心肌肌钙蛋白I均相快速检测方法，其特征在于：
所述K1和/或K2的温度分别独立地选自35-45℃，优选选自37-42℃。
18.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，所述T1≤12min；优选地，所述T1≤10min；进一步优选地，所述T1≤8min；更优选地，所述T1≤6min。
19.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，所述T2≤3min；优选地，所述T2≤2min。
20.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，所述T1+T2≤13min；优选地，所述T1+T2≤12.5min；进一步优选地，所述T1+T2≤10min；更优选地，所述T1+T2≤8min。
21.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，所述T1为8min，所述T2为2min。
22.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，5≤V1≤100μL，优选20≤V1≤120μL，更优选40≤V1≤100μL。
23.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，5≤V2≤50μL，优选8≤V2≤40μL，更优选10≤V2≤25μL。
24.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，5≤V3≤50，优选8≤V3≤40μL，更优选10≤V3≤25μL。
25.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法的检测灵敏度小于等于5pg/mL。
26.如权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于：
在步骤S4中，使用600-700nm波长的激发光照射所述第二混合物物，激发所述供体产生单线态氧，所述受体与接触到的单线态氧反应生成520-620nm的发射光，通过检测发射光信号的存在和/或强度，从而判断待检测样本中是否存在人心肌肌钙蛋白I和/或确定人心肌肌钙蛋白I的含量。
27.一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测装置，其利用如权利要求11-13中任一项所述的试剂盒或者如权利要求14-26所述的检测的方法检测人心肌肌钙蛋白I。
28.根据权利要求27所述的装置，其包括如下部分：加样模块、试剂模块、温育模块、检测模块以及电路控制模块；所述温育模块、所述试剂模块、所述加样模块、所述温育模块以及所述检测模块均与所述电路控制模块电连接。
29.根据权利要求28所述的装置，其特征在于，所述试剂模块包括用于加入第一组合物的第一组件以及用于加入第二组合物的第二组件。
30.权利要求11-13中任一项所述的试剂盒或者如权利要求14-26中任一项所述的检测的方法或者权利要求27-29中任一项所述的装置在POCT检测技术中的应用。
31.一种如权利要求11-13中任一项所述的人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒或如权利要求14-26中任一项所述的方法在检测待检测样本中人心肌肌钙蛋白I的存在与否和/或含量中的应用。
32.一种如权利要求1-10中任一项所述的方法在制备用于检测怀疑患有心肌损伤的受治疗者或待体检者的待检测样本中的人心肌肌钙蛋白I，由此确定待检测样本中人心肌肌钙蛋白I的水平，并将由此确定的水平与受治疗者的心肌损伤的存在、风险、潜在性或倾向性相关联的试剂盒中的应用。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113125419A (zh) * 2019-12-31 2021-07-16 博阳生物科技（上海）有限公司 一种供体试剂及其应用
CN113125748A (zh) * 2021-03-30 2021-07-16 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒
CN113125695A (zh) * 2021-03-30 2021-07-16 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用于检测游离脂肪酸的试剂盒
CN113125749A (zh) * 2021-03-30 2021-07-16 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030040024A1 (en) * 1996-06-25 2003-02-27 Katrukha Alex G. Method and kit for the diagnosis of troponin I
CN1470875A (zh) * 2003-06-19 2004-01-28 苏恩本 三抗法快速定量测定心肌肌钙蛋白ⅰ
CN102348980A (zh) * 2009-03-12 2012-02-08 西门子医疗保健诊断公司 应用非粒子化学发光试剂的免疫分析
CN103592445A (zh) * 2013-10-16 2014-02-19 北京利德曼生化股份有限公司 检测降钙素原的试剂盒
CN104634980A (zh) * 2015-02-10 2015-05-20 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 心肌肌钙蛋白i超敏检测试剂盒及超敏检测方法
CN105158483A (zh) * 2015-09-16 2015-12-16 北京九强生物技术股份有限公司 一种人肌钙蛋白i的超敏定量测定试剂盒及其检测方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030040024A1 (en) * 1996-06-25 2003-02-27 Katrukha Alex G. Method and kit for the diagnosis of troponin I
CN1470875A (zh) * 2003-06-19 2004-01-28 苏恩本 三抗法快速定量测定心肌肌钙蛋白ⅰ
CN102348980A (zh) * 2009-03-12 2012-02-08 西门子医疗保健诊断公司 应用非粒子化学发光试剂的免疫分析
CN103592445A (zh) * 2013-10-16 2014-02-19 北京利德曼生化股份有限公司 检测降钙素原的试剂盒
CN104634980A (zh) * 2015-02-10 2015-05-20 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 心肌肌钙蛋白i超敏检测试剂盒及超敏检测方法
CN105158483A (zh) * 2015-09-16 2015-12-16 北京九强生物技术股份有限公司 一种人肌钙蛋白i的超敏定量测定试剂盒及其检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
董明: "血清肌钙蛋白-I均相化学发光免疫检测方法的建立", 《中国医药指南》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113125419A (zh) * 2019-12-31 2021-07-16 博阳生物科技（上海）有限公司 一种供体试剂及其应用
CN113125748A (zh) * 2021-03-30 2021-07-16 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒
CN113125695A (zh) * 2021-03-30 2021-07-16 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用于检测游离脂肪酸的试剂盒
CN113125749A (zh) * 2021-03-30 2021-07-16 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒
CN113125695B (zh) * 2021-03-30 2024-07-16 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用于检测游离脂肪酸的试剂盒
CN113125748B (zh) * 2021-03-30 2024-07-16 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒
CN113125749B (zh) * 2021-03-30 2024-07-16 潍坊三维生物工程集团有限公司 一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒

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