CN110151797B - 三联组氨酸核苷结合蛋白巯基亚硝基化修饰的应用 - Google Patents

三联组氨酸核苷结合蛋白巯基亚硝基化修饰的应用 Download PDF

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Abstract

三联组氨酸核苷结合蛋白巯基亚硝基化修饰的应用，包括降低三联组氨酸结合蛋白1巯基亚硝基化修饰水平的腺病毒在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用。所述腺病毒为使三联组氨酸结合蛋白1第84位半胱氨酸位点突变的腺病毒。还包括，检测三联组氨酸结合蛋白1巯基亚硝基化修饰水平的产品在制备筛选动脉粥样硬化治疗药物试剂盒中的应用。本发明利用向心肌细胞内转染腺病毒，下调HINT1蛋白Cys84位点的巯基亚硝基化修饰水平，可有效抑制动脉粥样硬化的发生。

Description

三联组氨酸核苷结合蛋白巯基亚硝基化修饰的应用
技术领域
本发明属于动脉粥样硬化的分子生物学诊断领域，具体涉及三联组氨酸核苷结合蛋白(HINT1)巯基亚硝基化修饰的应用。
背景技术
心血管疾病是严重危害人类健康的重大疾病，是世界范围内的主要死亡原因。动脉粥样硬化(AS)是发生于血管壁的慢性疾病，主要表现为内皮细胞功能损伤和内膜下脂质沉积，是冠心病和脑梗死的主要原因。因此，深入研究AS发病机制，发现新的干预靶点，是提高冠心病防治水平的关键。巨噬细胞，作为一类重要的免疫细胞，巨噬细胞可通过内吞脂质形成泡沫细胞，促进AS病变形成，还能通过介导炎症反应、巨噬细胞本身的极化、细胞凋亡及细胞迁移在AS病变中发挥重要的作用。蛋白质巯基亚硝基化修饰是一种新的蛋白质翻译后修饰，即NO基团与蛋白质半胱氨酸的自由巯基-SH相作用生成亚硝基-SNO(S-nitrosylation)，并指出NO通过蛋白质巯基亚硝基化修饰进行氧化还原信号转导的调控。蛋白质的巯基亚硝基化修饰在巨噬细胞的各项功能调控中发挥了重要的作用：它参与调控了炎症因子的分泌，巨噬细胞内一些重要的酶类的活性以及巨噬细胞本身的吞噬活性等等。
三联组氨酸结合蛋白1(HINT1)，是一类普遍存在于哺乳动物的组织中，在进化中高度保守的蛋白。HINT1是一种嘌呤核苷酸结合蛋白，以二聚体的形式存在，具有高度保守的HIT序列。X线晶体结构研究发现该蛋白具有三联组氨酸家族结构特征：His-X-His-X-His-X，其中X序列为疏水性的氨基酸残基。HINT1在小鼠多种组织中具有表达，包括肝脏，肾脏，脑，心脏，肺等组织中均有分布。除此之外，HINT1在小鼠的神经系统中广泛表达，主要集中在嗅觉系统，大脑皮质，海马及其部分的丘脑，中脑和延髓。HINT1蛋白在细胞中主要定位于细胞质和细胞核。有文献报道，作为一种重要的抑癌基因，HINT1参与调控细胞的增殖，凋亡，纤维化等重要进程。目前，已经有研究发现HINT1在糖尿病，肝脏纤维化，肝脏缺血/再灌注，神经精神疾病以及多种肿瘤中均发挥了重要的调节作用，但是其在心血管疾病中的作用及其机制目前尚未有任何相关的研究和报道。我们的前期研究结果发现：与对照组相比，氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激的巨噬细胞中，HINT1蛋白的巯基亚硝基化修饰水平明显增加。而将84位点的半胱氨酸(Cys84)突变成丙氨酸后，HINT1的巯基亚硝基化水平明显降低。同时，在84位点的半胱氨酸发生突变以后，巨噬细胞吞噬脂质从而形成泡沫细胞的能力明显降低。
以上的实验结果充分证明，巨噬细胞中的HINT1蛋白的巯基亚硝基化水平在泡沫细胞的形成中发挥了重要的调控作用。通过腺病毒转染的方式，将HINT1的84位点的半胱氨酸突变成丙氨酸后，可以有效的抑制泡沫细胞的形成。因此，我们认为HINT1可以作为临床上治疗动脉粥样硬化的一个新的重要靶标，在AS的防治中具有潜在的临床应用价值。
发明内容
解决的技术问题：本发明提供一种三联组氨酸核苷结合蛋白巯基亚硝基化修饰的应用，通过改变HINT1蛋白Cys84的巯基亚硝基化修饰水平，抑制动脉粥样硬化的发生。
技术方案：降低三联组氨酸结合蛋白1巯基亚硝基化修饰水平的腺病毒在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
上述腺病毒为使三联组氨酸结合蛋白1第84位半胱氨酸位点突变的腺病毒。
检测三联组氨酸结合蛋白1巯基亚硝基化修饰水平的产品在制备筛选动脉粥样硬化治疗药物试剂盒中的应用。
有益效果：利用向心肌细胞内转染腺病毒，下调HINT1蛋白Cys84位点的巯基亚硝基化修饰水平，可有效抑制动脉粥样硬化的发生。
附图说明
图1：利用Biotin-switch方法联合Western Blot，检测原代小鼠腹腔细胞经ox-LDL处理后，细胞内HINT1蛋白的巯基亚硝基化水平示意图。
图2：WT小鼠以及ApoE-/-小鼠喂以高脂饮食，12周后提取小鼠含有动脉粥样硬化斑块的主动脉血管组织，通过Biotin-switch方法检测了小鼠血管组织中的HINT1蛋白巯基亚硝基化修饰水平示意图。
图3：利用Biotin-switch方法联合Western Blot，检测正常人以及患有动脉粥样硬化病人主动脉血管组织中的HINT1蛋白的巯基亚硝基化水平示意图。
图4：构建对照组腺病毒，HINT1野生型腺病毒(HINT1-WT)、第38位半胱氨酸位点突变的腺病毒(HINT1-C38A)以及第84位半胱氨酸位点突变的腺病毒(HINT1-C84A)，感染小鼠腹腔巨噬细胞后，给以ox-LDL刺激，通过Biotin-switch法联合Western Blot，检测巨噬细胞内HINT1巯基亚硝基化水平示意图。
图5：利用对照组腺病毒，HINT1野生型腺病毒(HINT1-WT)以及第84位半胱氨酸位点突变的腺病毒(HINT1-C84A)，感染小鼠腹腔巨噬细胞后，给以ox-LDL刺激，通过油红O染色检测巨噬细胞内脂质积聚情况示意图。
图6：利用对照组腺病毒，HINT1野生型腺病毒(HINT1-WT)以及第84位半胱氨酸位点突变的腺病毒(HINT1-C84A)，感染小鼠腹腔巨噬细胞后，给以ox-LDL刺激，利用试剂盒检测检测巨噬细胞胆固醇含量示意图。
图7：腺病毒载体图谱。
具体实施方式
下面的实施例可使本专业技术人员可全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
1.Biotin-Switch法检测巯基亚硝基化修饰蛋白(Cayman Chemical公司S-nitrosylation Protein Detection Kit，货号10006518)
(1)细胞经过处理后，去除培养基，用预冷的wash buffer洗3遍，再加500μL washbuffer刮下，并转移至1.5mL离心管里。
(2)500×g，4℃离心，5min，弃上清。
(3)细胞置于冰上，配制blocking buffer，具体配制方法如下：
100μL DMF和900μL buffer A加入新的blocking reagent配成blocking buffer原液，混匀后，将这1mL液体加入9ml buffer A中，即为最终blocking buffer。
(4)每管加入500μL blocking buffer重悬上述离心所得细胞沉淀，4℃旋转30min。
(5)12000rpm，4℃离心，10min后，取上清，转移至15mL离心管中。
(6)加入4倍体积-20℃预冷的丙酮，轻轻翻转，颠倒混匀，-20℃静置1h以充分沉淀蛋白。
(7)将上述-20℃沉淀的蛋白取出，3000×g，4℃离心，10min，弃丙酮，加入500μL上述reducing&labeling buffer，枪轻吹散，室温静置1h。
(8)加入4倍体积-20℃预冷的丙酮，轻轻翻转，混匀颠倒，-20℃静置1h。
(9)3000×g，4℃离心，10min，弃丙酮。
(10)500μL wash buffer溶蛋白沉淀，测蛋白浓度。
(11)取800μg蛋白，加入biotin亲和素珠子，4℃旋转过夜。
(上述步骤均为避光操作)
(12)洗珠子4℃旋转5min，0.5rpm，4℃离心，5min，去上清，加入新鲜IP洗液4℃旋转5min，重复以上操作5遍，最后一遍吸干上清加入与珠子等体积的2×loading buffer，震荡离心，煮蛋白100℃，5min。
(13)western blot检测HINT1巯基亚硝基化修饰水平(Anti-HINT1抗体：Abcam公司，货号ab124912、Anti-GAPDH抗体：巴傲德公司，货号AP0063、Anti-β-actin抗体：嘉暄生物公司，货号JX2001)。
2.提取原代小鼠腹腔细胞
(1)颈椎脱臼法处死小鼠，固定小鼠于仰卧位，用75％酒精擦拭腹部皮肤；
(2)手术剪剪开腹部皮肤，暴露腹膜；
(3)眼科镊提起腹膜剪小口，避让血管；注入含100μg/mL肝素的PBS1-2mL,用眼科镊轻轻按摩小鼠腹部，避免液体溢出；
(4)用滴管吸取细胞悬液于离心管中，重复3-4次，避开肠以及腹膜上皮细胞；
(5)细胞悬液离心，4℃，1200rpm,6min；弃去上清，用PBS冲洗，离心；
(6)将细胞沉淀用含10％胎牛血清培养基重悬，种板；
(7)37℃5％二氧化碳，孵育2小时后换液，贴壁细胞为小鼠腹腔巨噬细胞。
3.腺病毒转染小鼠腹腔巨噬细胞
(1)提取小鼠原代腹腔巨噬细胞，细胞种板培养于含10％胎牛血清的DMEM培养液中。
(2)细胞培养过夜后，采用腺病毒法进行转染。
(3)转染前PBS液洗涤细胞2次以去除培养基中剩余的血清，给以HINT1野生型及位点突变的过表达腺病毒(MOI＝50)处理8h。
(4)将细胞置于标准培养条件下，8小时后更换新鲜正常培养基继续培养。
4.Western-Blot
(1)SDS-PAGE(聚丙烯酰氨凝胶)电泳：配制12％的分离胶和3％的浓缩胶。取15μL样品液和3μL6×加样缓冲液，混匀。煮沸5min使蛋白变性后上样，每孔上样量约为30μg。110V恒压电泳约90min，至溴酚蓝完全消失。SDS-PAGE的配制：
Figure BDA0002052447720000041
Figure BDA0002052447720000051
(2)转膜：电泳完毕后，切去浓缩胶，将胶浸于蛋白转移缓冲液(3.6g/L Tris，300mL/L甲醇，17.3g/L甘氨酸)中平衡10～20min。用湿转的方法将蛋白条带转移至PVDF膜上(SDS-凝胶位于负极，PVDF膜位于正极)，0.3 A恒流电泳80min。
(3)封闭：转膜结束后，取下PVDF膜，PBS浸泡5min后将膜浸于含5％脱脂奶粉的PBS(MPBS)中1h。
(4)一抗孵育：封闭结束后将膜置于杂交袋内，加入抗体，4℃摇动下过夜。
(5)二抗结合：PBS-T快速洗膜一遍后，PBS-T洗膜10min×3遍。加入辣根过氧化物酶标记的兔抗羊的抗体，室温下孵育1h。PBS-T快速洗膜一遍，再洗膜10min×3遍。
(6)ECL显色：临用前将ECL显色液A与B混和，均匀滴加至膜表面，避光曝片，观察结果。
5.细胞油红O染色
(1)去除细胞培养基，用PBS洗涤细胞3次，5min/次。
(2)将4wt.％多聚甲醛溶液固定细胞20分钟，弃去多聚甲醛，用PBS洗涤细胞3次，10min/次。
(3)60wt.％异丙醇溶液洗2分钟。
(4)油红O染液染色1小时。
(5)用60wt.％异丙醇溶液漂洗3次，每次1分钟，直至背景洗涤干净。
(6)在倒置显微镜下观察拍照。
6.腺病毒构建方法：
分别合成mHINT1C38A及mHINT1C84A基因模板，将其构建至腺病毒载体pDC316-mCMV-EGFP，通过酶切、测序鉴定再转染HEK293细胞中包装腺病毒，将所得腺病毒扩增、纯化并测定滴度。
mHINT1 WT基因序列如下：
atggctgacgagattgccaaggctcaagtggcccagcccggcggcgacacgatcttcggcaagatcatccgcaaagaaatccccgccaagatcatcttcgaggacgaccggtgtcttgcttttcatgacatttcccctcaagcaccaacacactttctggtgatacccaagaagcatatatcccagatttctgtagcagatgatgatgatgaaagtcttctaggacatttaatgattgttggcaagaaatgtgctgcagatctgggcctgaagcgcgggtaccggatggtggtgaatgaaggtgcagacgggggacagtctgtctatcacattcacctccatgtccttgggggtcggcagatgaactggcctcctggttaa
mHINT1C38A基因序列如下：
atggctgacgagattgccaaggctcaagtggcccagcccggcggcgacacgatcttcggcaagatcatccgcaaagaaatccccgccaagatcatcttcgaggacgaccggGCTcttgcttttcatgacatttcccctcaagcaccaacacactttctggtgatacccaagaagcatatatcccagatttctgtagcagatgatgatgatgaaagtcttctaggacatttaatgattgttggcaagaaaTGTgctgcagatctgggcctgaagcgcgggtaccggatggtggtgaatgaaggtgcagacgggggacagtctgtctatcacattcacctccatgtccttgggggtcggcagatgaactggcctcctggttaa
mHINT1C84A基因序列如下：
atggctgacgagattgccaaggctcaagtggcccagcccggcggcgacacgatcttcggcaagatcatccgcaaagaaatccccgccaagatcatcttcgaggacgaccggTGTcttgcttttcatgacatttcccctcaagcaccaacacactttctggtgatacccaagaagcatatatcccagatttctgtagcagatgatgatgatgaaagtcttctaggacatttaatgattgttggcaagaaaGCTgctgcagatctgggcctgaagcgcgggtaccggatggtggtgaatgaaggtgcagacgggggacagtctgtctatcacattcacctccatgtccttgggggtcggcagatgaactggcctcctggttaa
实验结果：
1.为了探究HINT1蛋白巯基亚硝基化修饰水平在动脉粥样硬化中的作用，我们提取野生型小鼠原代腹腔巨噬细胞，给以氧化低密度脂蛋白ox-LDL(100μg/mL)处理24小时,通过Biotin-switch方法联合Western Blot，检测巨噬细胞中HINT1蛋白的巯基亚硝基化水平。结果显示：与对照组相比,ox-LDL处理可明显增加HINT1蛋白巯基亚硝基化修饰水平(图1)。接着，我们给予WT小鼠以及ApoE-/-小鼠喂以高脂饮食，12周后提取小鼠含有动脉粥样硬化斑块的主动脉血管组织，通过Biotin-switch方法检测了小鼠血管组织中的HINT1蛋白巯基亚硝基化修饰水平。实验结果显示：与对照组相比，ApoE-/-小鼠主动脉血管组织中HINT1蛋白巯基亚硝基化修饰水平明显增加(图2)。同时，我们收取了临床上正常人以及患有动脉粥样硬化的病人的血管组织，通过Biotin-switch法检测了血管组织中的HINT1蛋白巯基亚硝基化修饰水平。发现与正常人相比，动脉粥样硬化病人血管组织中HINT1蛋白巯基亚硝基化修饰水平明显增加(图3)。以上实验结果提示我们：HINT1蛋白的巯基亚硝基化修饰在动脉粥样硬化过程中发挥了重要作用。
2.经过对HINT1的氨基酸序列进行研究发现，在HINT1蛋白质的氨基酸序列中只存在第38位点以及第84位点的两个半胱氨酸位点。为了明确HINT1蛋白在动脉粥样硬化过程中发生巯基亚硝基化的修饰位点，我们构建了对照组空载腺病毒，HINT1野生型腺病毒(HINT1-WT)、第38位半胱氨酸位点突变的腺病毒(HINT1-C38A)以及第84位半胱氨酸位点突变的腺病毒(HINT1-C84A)，感染小鼠腹腔巨噬细胞后，给以ox-LDL刺激，通过Biotin-switch法检测了巨噬细胞内HINT1巯基亚硝基化水平。我们发现，在将HINT1蛋白中84位点的半胱氨酸突变成丙氨酸后，HINT1蛋白巯基亚硝基化水平明显降低，而将38位点的半胱氨酸突变成丙氨酸后HINT1巯基亚硝基化水平并无明显改变。以上结果说明，在泡沫细胞形成中，HINT1的Cys84位点发生了巯基亚硝基化修饰(图4)。
接下来，为了明确Cys84位点的巯基亚硝基化修饰在动脉粥样硬化中的作用，我们分别利用对照空载病毒，HINT1的野生型过表达病毒以及HINT1的Cys84A位点突变病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞后，给予氧化低密度脂蛋白ox-LDL(100μg/mL)刺激，检测巨噬细胞内脂质积聚的情况。油红O染色的结果显示：与对照组相比：Cys84位点突变后可明显减少巨噬细胞内脂质的沉积(图5)。同时，我们还通过试剂盒检测发现：Cys84位点突变后，巨噬细胞内胆固醇的含量明显降低(图6)。以上结果说明：HINT1蛋白Cys84位点的巯基亚硝基化水平降低后，可明显降低由ox-LDL所导致的脂质内吞和泡沫细胞形成。
序列表
<110> 南京医科大学
<120> 三联组氨酸核苷结合蛋白巯基亚硝基化修饰的应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggctgacg agattgccaa ggctcaagtg gcccagcccg gcggcgacac gatcttcggc 60
aagatcatcc gcaaagaaat ccccgccaag atcatcttcg aggacgaccg gtgtcttgct 120
tttcatgaca tttcccctca agcaccaaca cactttctgg tgatacccaa gaagcatata 180
tcccagattt ctgtagcaga tgatgatgat gaaagtcttc taggacattt aatgattgtt 240
ggcaagaaat gtgctgcaga tctgggcctg aagcgcgggt accggatggt ggtgaatgaa 300
ggtgcagacg ggggacagtc tgtctatcac attcacctcc atgtccttgg gggtcggcag 360
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Claims (2)

1.降低三联组氨酸结合蛋白1巯基亚硝基化修饰水平的腺病毒在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用，所述腺病毒为使三联组氨酸结合蛋白1第84位半胱氨酸位点突变的腺病毒。
2.检测三联组氨酸结合蛋白1巯基亚硝基化修饰水平的产品在制备筛选动脉粥样硬化治疗药物试剂盒中的应用。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105561297A (zh) * 2016-01-15 2016-05-11 中国人民解放军第二军医大学 巨噬细胞β-抑制蛋白-1在制备预防或治疗动脉粥样硬化药物中的应用
CN108196059A (zh) * 2017-12-01 2018-06-22 南京医科大学 三联组氨酸核苷结合蛋白的应用
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Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105561297A (zh) * 2016-01-15 2016-05-11 中国人民解放军第二军医大学 巨噬细胞β-抑制蛋白-1在制备预防或治疗动脉粥样硬化药物中的应用
CN108196059A (zh) * 2017-12-01 2018-06-22 南京医科大学 三联组氨酸核苷结合蛋白的应用
CN108254576A (zh) * 2018-01-25 2018-07-06 南京医科大学 一种腺嘌呤核苷酸转运体1的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
eNOS S-nitrosylation mediated OxLDL-induced endothelial dysfunction via increasing the interaction of eNOS with β‑catenin;Wan Wang et al.;《BBA - Molecular Basis of Disease》;20180220;1793-1801 *
The influence of angiotensin-(1-7) Mas receptor agonist (AVE 0991) on mitochondrial proteome in kidneys of apoE knockout mice;Maciej Suski et al.;《Biochimica et Biophysica Acta》;20130827;2463-2469 *
三联组氨酸核苷酸结合蛋白1与人类疾病;党永辉 等;《中国医学科学院学报》;20140831;454-460 *

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