CN110150505A - 一种去除中华绒螯蟹土腥味的乳酸菌复合剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种去除中华绒螯蟹土腥味的乳酸菌复合剂，包括如下组分：两歧双歧杆菌、胚芽乳酸菌、婴儿双歧杆菌和缓冲剂，其中，两歧双歧杆菌、胚芽乳酸菌、婴儿双歧杆菌的总活菌浓度为大于等于110亿/克。在水产养殖过程中，通过投喂以上乳酸菌复合剂，能有效提高中华绒螯蟹体内柠檬烯等风味物质的含量，有效降低中华绒螯蟹体内带有土腥味的三甲胺、土臭素（geosmin，GSM）和二甲基异莰醇（2‑methylisoborneol，2‑MIB）等物质的含量，显著提高中华绒螯蟹品质。
Description
技术领域
本发明属于生物化学领域，涉及一种乳酸菌复合剂，具体为一种去除中华绒螯蟹土腥味的乳酸菌制剂及其应用。
背景技术
中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)又称中华绒螯蟹，是重要的养殖经济蟹类。目前中华绒螯蟹养殖模式在不断的改善和发展，养殖产量也在逐年上升。2014年中华绒螯蟹肝胰腺养殖产量高达79.65万吨，总产值达500亿元左右，中华绒螯蟹养殖已成为提高就业水平和改善人民生活质量的一个有效的手段。
中华绒螯蟹的品质是决定其经济价值和产业发展的关键性因素。由于养殖环境等因素的影响，某些地域养殖的中华绒螯蟹中三甲胺、土臭素和二甲基异莰醇等物质的存在造成中华绒螯蟹肌肉组织中存在土腥味，极大降低中华绒螯蟹的经济价值。另外，优质的中华绒螯蟹肌肉等组织中富含柠檬烯等风味物质的含量。如何去除中华绒螯蟹肌肉等组织中的土腥味、增加风味物质含量、提升中华绒螯蟹品质成为促进中华绒螯蟹养殖产业持续健康发展的的关键因素之一。目前该领域国内外尚无系统的研究报道。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种乳酸菌复合剂及其制备方法，该乳酸菌复合剂能够提高中华绒螯蟹体内柠檬烯等风味物质的含量，有效降低中华绒螯蟹体内带有土腥味的三甲胺、土臭素和二甲基异莰醇等物质的含量，显著提高中华绒螯蟹品质。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案为：
一种去除中华绒螯蟹土腥味的乳酸菌复合剂，包括如下组分：两歧双歧杆菌、胚芽乳酸菌、婴儿双歧杆菌和缓冲剂，其中，两歧双歧杆菌、胚芽乳酸菌、婴儿双歧杆菌的总活菌浓度为大于等于110亿/克。
优选的，所述乳酸菌复合剂还包括葡萄糖。
作为一种优选方案，所述乳酸菌复合剂由如下质量百分比的组分组成：两歧双歧杆菌18～22％，胚芽乳酸菌16～30％，婴儿双歧杆菌16～30％，缓冲剂0.8～5.5％，葡萄糖30～45％。
更佳地，所述乳酸菌复合剂由如下质量百分比的组分组成：两歧双歧杆菌20％，胚芽乳酸菌20％，婴儿双歧杆菌20％，缓冲剂5％，葡萄糖35％。
更优选地，两歧双歧杆菌的活菌浓度为80～110亿/克。
更优选地，胚芽乳酸菌的活菌浓度为70～110亿/克。
更优选地，婴儿双歧杆菌的活菌浓度为50～110亿/克。
作为一种优选实施方案，所述两歧双歧杆菌的活菌浓度为110亿/克，胚芽乳酸菌的活菌浓度为110亿/克，婴儿双歧杆菌的活菌浓度为110亿/克。
优选的，所述缓冲剂包括如下组分：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸镁和氯化钠。
优选地，所述缓冲剂中各组分占所述乳酸菌复合剂的质量百分比为：磷酸二氢钾0.1～1％、磷酸氢二钾0.1～1％、硫酸镁0.1～1％、氯化钠0.5～2.5％。
本发明的另一目的是提供上述乳酸菌复合剂的制备方法，包括如下步骤：
步骤1)制备两歧双歧杆菌：将两歧双歧杆菌菌菌株接种到培养基中，活化后进行发酵，获取两歧双歧杆菌菌粉；
步骤2)制备胚芽乳酸菌：将胚芽乳酸菌菌株接种到培养基中，活化后进行发酵，获取胚芽乳酸菌菌粉；
步骤3)制备婴儿双歧杆菌：将婴儿双歧杆菌原种接种到培养基中，发酵，获取婴儿双歧杆菌菌粉；
步骤4)配制缓冲剂；
步骤1)将所述两歧双歧杆菌菌粉、胚芽乳酸菌菌粉、婴儿双歧杆菌菌粉与所述缓冲剂以及葡萄糖混合均匀即得。
需要注意的是，上述培养基为液体培养基，可根据《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著)指导制备而得。
优选地，上述发酵为二级发酵。
优选地，步骤1)中的活化时间为18h。
优选地，步骤1)中发酵是按照5％接种量进行发酵。
更优选地，步骤1)发酵培养基配方为(质量分数)：可溶性淀粉37％、豆粉30％、鱼粉20％、糖蜜10％，氯化钠3％。
更优选地，步骤1)中的发酵是在28℃发酵36h。
优选地，步骤1)中发酵后，用柠檬酸将液体发酵物的pH值调至4～4.5。
优选地，步骤2)中的活化时间为24h。
优选地，步骤2)中发酵是按照5％接种量进行发酵。
更优选地，步骤2)发酵培养基配方为(质量分数)：可溶性淀粉45％、黄原胶10％、糖蜜30％、豆粉12％、氯化钠3％。
更优选地，步骤2)中的发酵是在28℃下发酵48h。
优选地，步骤2)还包括发酵后，用柠檬酸将液体发酵物的pH值调至5～5.5。
优选地，步骤1)中获取所述两歧双歧杆菌菌粉的操作为：冷冻干燥。
优选地，步骤2)中获取所述胚芽乳酸菌菌粉的具体操作为：冷冻干燥。
优选地，步骤3)中发酵是按照5％接种量进行发酵。
更优选地，步骤3)发酵培养基配方为(质量分数)：麸皮38％、秸秆20％、豆饼粉29％、尿酸1％、氯化钠2％、草酸10％。
更优选地，步骤3)在37℃下发酵56h。
优选地，步骤3)中获取所述婴儿双歧杆菌菌粉的具体操作为：将液体发酵物于-40℃冷冻干燥。
本发明还提供上述去除中华绒螯蟹土腥味的乳酸菌复合剂在中华绒螯蟹养殖中的应用。
本发明的有益效果是：
在水产养殖中：提高中华绒螯蟹体内柠檬烯等风味物质的含量，有效降低中华绒螯蟹体内带有土腥味的三甲胺、土臭素和二甲基异莰醇等物质的含量，显著提高中华绒螯蟹品质。
此外，本发明提供的水体乳酸菌复合剂配方组分较少，生产流程简单，生产工序少，成本低廉，环境友好，符合“提质增效、减量增收、绿色发展、富裕渔民”的渔业生产转方式调结构的工作方针，也是中华绒螯蟹绿色减排提质增效养殖的核心技术，是推动水产养殖绿色发展的重要方向，应用前景十分广阔，具有很大的推广意义。
具体实施方式
下面结合实施方式对本发明作进一步详细、完整地说明。
所需仪器及试剂：
(1)仪器：
超净工作台，高压蒸汽灭菌锅，恒温摇床，发酵罐，冷冻干燥仪，生化培养箱，干燥箱，粉碎机。
(2)试剂：
液体培养基，根据《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著)指导制备而得。
两歧双歧杆菌、胚芽乳酸菌、婴儿双歧杆菌，由江苏宏螯农业发展有限公司自行分离鉴定。
葡萄糖，化学纯，购自上海国药集团化学试剂有限公司。
磷酸二氢钾，化学纯，购自上海国药集团化学试剂有限公司。
磷酸氢二钾，化学纯，购自上海国药集团化学试剂有限公司。
硫酸镁，化学纯，购自上海国药集团化学试剂有限公司。
氯化钠，化学纯，购自上海国药集团化学试剂有限公司。
实施例1～4
分别按照表1中各组分的质量百分比及活菌浓度采用以下方法制备本发明提供的乳酸菌复合剂：
表1
各实施例所用乳酸菌复合制剂制备步骤如下：
(1)制备两歧双歧杆菌菌粉：无菌条件下，将两歧双歧杆菌菌株接种到液体培养基中，置于37℃恒温摇床中活化18h，随后将活化后的两歧双歧杆菌菌株放入发酵罐中，在28℃下按照5％接种量进行二级发酵36h，以柠檬酸调节pH至4，冷冻干燥，即得两歧双歧杆菌菌粉。发酵培养基配方为(质量分数)：可溶性淀粉37％、豆粉30％、鱼粉20％、糖蜜10％，氯化钠3％。
(2)制备胚芽乳酸菌菌粉：无菌条件下，将胚芽乳酸菌菌株接种到液体培养基中，置于37℃恒温摇床中活化24h，随后将活化后的胚芽乳酸菌菌株放入发酵罐中，在28℃下按照5％接种量进行二级发酵48h，以柠檬酸调节pH至5，冷冻干燥，即得胚芽乳酸菌菌粉。发酵培养基配方为(质量分数)可溶性淀粉45％、黄原胶10％、糖蜜30％、豆粉12％、氯化钠3％。
(3)制备婴儿双歧杆菌菌粉：无菌条件下，将婴儿双歧杆菌菌株接种到液体培养基中，置于37℃恒温摇床中活化24h，随后将活化后的婴儿双歧杆菌菌株放入发酵罐中，在37℃下按照5％接种量进行发酵56h，以柠檬酸调节pH至4，冷冻干燥，即得婴儿双歧杆菌菌粉。发酵培养基配方为(质量分数)：麸皮38％、秸秆20％、豆饼粉29％、尿酸1％、氯化钠2％、草酸10％。
(4)制备缓冲剂：按照表1所列配比混合均匀磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸镁和氯化钠粉末，即得缓冲剂。
(5)将上述两歧双歧杆菌菌粉、胚芽乳酸菌菌粉、婴儿双歧杆菌菌粉、缓冲剂和葡萄糖按照表1的百分含量混合均匀后得到本发明所述的乳酸菌复合剂，常温保存即可。
去除土腥味效果实验：
对中华绒螯蟹分组分别投喂实施例1所制备得到的乳酸复合制剂之后，对中华绒螯蟹体内三甲胺、土臭素和二甲基异莰醇，结果见表2(乳酸复合制剂去除中华绒螯蟹土腥味的效果(n＝5))。试验结果表明本乳酸菌复合剂对中华绒螯蟹主要土腥味物质具有显著的去除作用。
注：Ⅰ组(CK)为未使用本发明的乳酸菌复合剂。Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别为实施例1制得的乳酸菌复合剂在不同池塘使用的结果。
同时本发明上述实施例仅为说明本发明技术方案之用，仅为本发明技术方案的列举，并不用于限制本发明的技术方案及其保护范围。采用等同技术手段、等同设备等对本发明权利要求书及说明书所公开的技术方案的改进应当认为是没有超出本发明权利要求书及说明书所公开的范围。
Claims (10)
1.一种去除中华绒螯蟹土腥味的乳酸菌复合剂，其特征在于，包括如下组分：两歧双歧杆菌、胚芽乳酸菌、婴儿双歧杆菌和缓冲剂，其中，两歧双歧杆菌、胚芽乳酸菌、婴儿双歧杆菌的总活菌浓度为大于等于110亿/克。
2.根据权利要求1所述的乳酸菌复合剂，其特征在于，所述乳酸菌复合剂还包括葡萄糖。
3.根据权利要求1或2所述的乳酸菌复合剂，其特征在于，所述乳酸菌复合剂由如下质量百分比的组分组成：两歧双歧杆菌18~22%，胚芽乳酸菌16~30%，婴儿双歧杆菌16~30%，缓冲剂0.8~5.5%，葡萄糖30~45%。
4.根据权利要求3所述的乳酸菌复合剂，其特征在于，所述乳酸菌复合剂由如下质量百分比的组分组成：两歧双歧杆菌20%，胚芽乳酸菌20%，婴儿双歧杆菌20%，缓冲剂5%，葡萄糖35%。
5.根据权利要求1所述的乳酸菌复合剂，其特征在于，两歧双歧杆菌的活菌浓度为80~110亿/克；胚芽乳酸菌的活菌浓度为70~110亿/克；婴儿双歧杆菌的活菌浓度为50~110亿/克。
6.根据权利要求5任一所述的乳酸菌复合剂，其特征在于，所述两歧双歧杆菌的活菌浓度为110亿/克，胚芽乳酸菌的活菌浓度为110亿/克，婴儿双歧杆菌的活菌浓度为110亿/克。
7.根据权利要求1所述的乳酸菌复合剂，其特征在于，所述缓冲剂包括如下组分：磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸镁和氯化钠。
8.根据权利要求7所述的乳酸菌复合剂，其特征在于，所述缓冲剂中各组分占所述乳酸菌复合剂的质量百分比为：磷酸二氢钾0.1~1%、磷酸氢二钾0.1~1%、硫酸镁0.1~1%、氯化钠0.5~2.5%。
9.权利要求1-8任一所述的提高中华绒螯蟹肝胰腺活性的乳酸菌复合剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1）制备两歧双歧杆菌：将两歧双歧杆菌菌菌株接种到培养基中，活化后进行发酵，获取两歧双歧杆菌菌粉；
步骤2）制备胚芽乳酸菌：将胚芽乳酸菌菌株接种到培养基中，活化后进行发酵，获取胚芽乳酸菌菌粉；
步骤3）制备婴儿双歧杆菌：将婴儿双歧杆菌原种接种到培养基中，发酵，获取婴儿双歧杆菌菌粉；
步骤4）配制缓冲剂；
步骤1）将所述两歧双歧杆菌菌粉、胚芽乳酸菌菌粉、婴儿双歧杆菌菌粉与所述缓冲剂以及葡萄糖混合均匀即得。
10.权利要求1-8任一所述的乳酸菌复合剂在中华绒螯蟹养殖中的应用。
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