CN110133139A - 一种检测野木瓜中抗坏血酸含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本方案公开了生物技术领域的一种检测野木瓜中抗坏血酸含量的方法，包括以下步骤：1)取野木瓜产品粉碎成粉末，加5ml水，超声提取30分钟，过滤得到待测样品；2)抗坏血酸标准品准确称量后用水配置成1mg/mL抗坏血酸对照品溶液；3)用高效液相色谱法测定，其中，固定相为Accucore aQ的色谱柱，流动相为磷酸盐缓冲液；流速为0.8mL/min；检测波长：259nm；柱温30℃；进样量为1μL；4)以对照品溶液的峰面积为纵坐标，以对照品溶液浓度为横坐标，绘制抗坏血酸的标准曲线，根据标准曲线计算待检样品中抗坏血酸的含量。本方案以解决现有技术抗坏血酸含量测定所需试剂较多且操作繁琐的问题。

Description

一种检测野木瓜中抗坏血酸含量的方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种检测野木瓜中抗坏血酸含量的方法。
背景技术
野木瓜是一种热带水果，属木通科，是热带常绿小乔木)，又名铁脚梨、木瓜突等，享有“百益之果”美称，为中国的特有植物，是一种名实相符的天然、纯绿色、有机食用果品，是现代人最适宜的休闲、食疗果品。分布在中国大陆的贵州、重庆等地，其中以贵州遵义野木瓜最为驰名，遵义正安也被称为“野木瓜之乡”。
野木瓜以“味酸”者为佳，木瓜有机酸组成复杂、种类丰富，如小分子脂肪酸莽草酸、柠檬酸等，具有抗炎、抗菌、镇痛的作用。原儿茶酸、抗坏血酸、咖啡酸、肉桂酸等酚酸类成分具有显著的抗炎、抗氧化、抗病毒、利胆等多种生物活性，熊果酸、齐墩果酸等三萜酸类成分具有抗炎抑菌、降低转氨酶、防止肝硬化、镇静、降血糖等多种功效。
维生素分为水溶性和脂溶性两类，水溶性有VC与B族等，脂溶性有E等，其测定方法各有不同。维生素C又名抗坏血酸，是水溶性维生素，在医药及保健方面的用途十分广泛，维生素C有较强的还原作用，参与体内氧化还原反应，是维持人体正常生理代谢不可缺少的一类有机化合物，人体本身不能合成，必须依靠膳食供给，他广泛存在于新鲜的水果、蔬菜中。维生素C含量测定方法一般有荧光分光光度计法、过氧化物酶法、2,6-二氯靛酚法等。这些方法所需的器材或使用的试剂较多且操作繁琐。
发明内容
本发明意在提供一种检测野木瓜中抗坏血酸含量的方法，以解决现有技术抗坏血酸含量测定所需试剂较多且操作繁琐的问题。
本方案中的一种检测野木瓜中抗坏血酸含量的方法，包括以下步骤：
1)取野木瓜产品粉碎成粉末，加5ml水，超声提取30分钟，过滤得到待测样品；
2)抗坏血酸标准品准确称量后用水配置成1mg/mL抗坏血酸对照品溶液；
3)采用高效液相色谱法测定，其中，固定相为Accucore aQ的色谱柱，流动相为磷酸盐缓冲液；流速为0.8mL/min；检测波长：259nm；柱温30℃；进样量为1μL；
4)以对照品溶液的峰面积为纵坐标，以对照品溶液浓度为横坐标，绘制抗坏血酸的标准曲线，根据标准曲线计算待检样品中抗坏血酸的含量。
本发明的方法，采用的同样是高效液相色谱分析，其中色谱柱为Thermo FisherAccucore aQ(150x3mm，2.6μm)色谱柱，本方案操作简便，所需器材相对荧光分光光度计法较少，所需试剂与过氧化物酶法、2,6-二氯靛酚法相比较少。
进一步，所述磷酸盐为磷酸二氢钾，磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.04mol/L，pH值为2.2。
进一步，所述磷酸二氢钾缓冲液制备时，先称取磷酸二氢钾5.44g，加入1L水中溶解，摇匀，加磷酸调pH至2.2，抽滤，超声溶解获得。
进一步，所述野木瓜产品为野木瓜片或者野木瓜粉。
附图说明
图1为抗坏血酸对照品溶液色谱图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：
1材料与方法
1.1材料与试剂
抗坏血酸标准品购自阿拉丁公司，磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸购自广州光华科技股份有限公司；所使用的水为超纯水，自制。
1.2仪器与设备
Waters H-Class超高效液相色谱仪(配备Waters PDA检测器、empower色谱管理系统)；METTLER TOLEDO万分之一天平；METTLER TOLEDO pH计；eppendorf移液枪；ELGAChorus超纯水处理系统；宁波新芝超声波清洗仪。
1.3方法
1.3.1色谱条件
Thermo Fisher Accucore aQ(150x3mm，2.6μm)色谱柱，流动相为100％0.04mol/LpH2.2的磷酸二氢钾缓冲液；流速为0.8mL/min；检测波长：259nm；柱温30℃；进样量为1μL。
1.3.2流动相的配制
称取磷酸二氢钾约5.44g，加入1L水中溶解，摇匀，加磷酸调pH至2.2左右，抽滤，超声，既得。
1.3.3抗坏血酸对照品溶液的制备
抗坏血酸标准品准确称量后用水配置成1mg/mL抗坏血酸对照品溶液，备用。
1.3.4样品前处理
称取野木瓜片或野木瓜粉200mg，加5ml水，超声提取30分钟，过滤，即得。
2结果与分析
2.1抗坏血酸标准曲线的建立
分别吸取上述1mg/mL抗坏血酸对照品溶液适量，并将其稀释为10、25、50、100、200μg/mL的系列抗坏血酸对照品溶液。分别吸取10、25、50、100、200μg/mL的抗坏血酸对照品溶液1μL，按上述色谱条件进样。以抗坏血酸对照品溶液质量浓度X对峰面积Y进行线性回归，得到标准曲线，其标准曲线方程为Y＝103x1.76X-103x1.98，相关系数R2＝0.9999，结果表明，抗坏血酸在10～200μg/mL线性范围内线性关系良好。抗坏血酸对照品溶液色谱图如图1所示。
2.2野木瓜片、野木瓜粉中抗坏血酸含量测定结果
按上述样品前处理方法对样品进行处理，并采用上述色谱条件对处理后的样品进样分析，测定野木瓜片、野木瓜粉中抗坏血酸含量，每个样品平行测定2次，结果见下表。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种检测野木瓜中抗坏血酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)取野木瓜产品粉碎成粉末，加5ml水，超声提取30分钟，过滤得到待测样品；
2)抗坏血酸标准品准确称量后用水配置成1mg/mL抗坏血酸对照品溶液；
3)采用高效液相色谱法测定，其中，固定相为Accucore aQ的色谱柱，流动相为磷酸盐缓冲液；流速为0.8mL/min；检测波长：259nm；柱温30℃；进样量为1μL；
4)以对照品溶液的峰面积为纵坐标，以对照品溶液浓度为横坐标，绘制抗坏血酸的标准曲线，根据标准曲线计算待检样品中抗坏血酸的含量。
2.根据权利要求1所述的一种检测野木瓜中抗坏血酸含量的方法，其特征在于：所述磷酸盐为磷酸二氢钾，磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.04mol/L，pH值为2.2。
3.根据权利要求2所述的一种检测野木瓜中抗坏血酸含量的方法，其特征在于：所述磷酸二氢钾缓冲液制备时，先称取磷酸二氢钾5.44g，加入1L水中溶解，摇匀，加磷酸调pH至2.2，抽滤，超声溶解获得。
4.根据权利要求3所述的一种检测野木瓜中抗坏血酸含量的方法，其特征在于：所述野木瓜产品为野木瓜片或者野木瓜粉。
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