CN110124087A - 基于流苏叶中黄酮类活性成分的创可贴的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于流苏叶黄酮类活性成分构建简易创可贴的方法。该方法使用提取的流苏叶黄酮类成分浸泡无菌纱布,吹干后制作成简易创可贴,用于小鼠伤口愈合实验。该方法提供了一种用于构建创可贴的新型抑菌材料,拓宽了传统可选用抑菌材料的范围,并为进一步开发流苏叶的商业价值提供新的思路。
Description
技术领域
本发明涉及医药卫生领域,具体涉及一种将从流苏叶中提取的黄酮类活性成分作为新的抑菌材料,构建简易创可贴。
背景技术
创可贴俗称杀菌弹性创可贴,是人们生活中最常用的一种外科用药,只适用于伤口表浅、整齐干净、出血不多而又不需要缝合的小创伤,如刀切伤、割伤、玻璃划伤等的应急治疗,发挥止血、消炎、抑菌、护创等作用。创可贴主要由胶布和吸水垫组成,其中吸水垫上会涂布一些药用成分,比如苯扎氯铵、乳酸依沙吖啶、呋喃西林、云南白药等,这些成分对创口愈合起到了一定的积极作用。
黄酮类化合物是一类广泛存在于自然界的天然有机化合物,以前主要是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物,现在则泛指两个具有酚羟基的苯环通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物。绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物,它在植物的生长发育过程及抗菌防病等方面起着重要的作用。此外,黄酮类化合物中有药用价值的化合物很多,具有丰富的生物活性,比如对心血管系统的作用、抗肝脏毒作用、抗炎作用、雌性激素样作用、抗菌及抗病毒作用、泻下作用、解痉作用,等等。
目前流苏主要具有观赏价值,也具备一定的药用价值,比如制作成“糯米茶”或者“糯米花茶”,但是对其进行开发利用仍存在很广阔的空间。
发明内容
发明目的:本发明提供了一种基于流苏叶中黄酮类活性成分的创可贴的制备方法,该制备方法既拓宽了传统可选用抑菌材料的范围,也为进一步开发流苏叶的商业价值提供了新的思路。
技术方案:本发明的基于流苏叶中黄酮类活性成分的创可贴的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)提取并纯化流苏叶中黄酮类化合物。
(2)将步骤(1)中得到的黄酮类化合物用二倍逐级稀释的方式得到浓度为1.709-437μg/mL黄酮类化合物溶液,进行药敏试验并研究其最低抑菌浓度。
(3)将步骤(1)中的黄酮样品配制成浓度为4-6mg/mL的黄酮类化合物溶液,优选浓度为5mg/mL。
(4)将纱布在步骤(3)中制备的黄酮类化合物溶液中浸泡10-40min,优选30min,吹干,得到所述的创可贴。
其中,步骤(1)中,采用超声辅助乙醇溶剂法提取流苏叶中黄酮类化合物,并利用高浓度的乙醇溶液对粗提物进行纯化。
提取参数为:乙醇体积浓度10-90%,优选62.6%;溶剂与流苏叶的液固比为10-60mL/g,优选24.6mL/g;超声提取温度为10-70℃,优选70℃;提取时间为20-120min,优选77.1min。
在纯化时,无水乙醇体积为2-4倍的提取液,优选3倍。
步骤(2)和(3)中,配制黄酮类化合物溶液的溶剂为无菌水。
步骤(4)中,所述纱布为无菌纱布。
有益效果:1、本发明基于流苏叶中黄酮类活性成分的创可贴的制备方法,首次使用黄酮类活性成分作为抑菌消炎材料,构建简易创可贴;2、打破了传统可选用抑菌消炎材料的局面;3、扩宽了流苏叶的商业开发价值;4、为创可贴的构建提供了新的材料。
附图说明
图1是流苏叶中黄酮类活性成分提取优化的单因素实验;
图2是本发明的实施例中小鼠伤口愈合实验对比图。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所使用的试剂、耗材,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
下述实施例中所用的提取设备为超声波清洗器(KH-500B型,昆山禾创超声仪器有限公司),离心净化所用离心机为台式高速离心机(TG16-WS型,上海卢湘仪离心机仪器有限公司),干燥设备为电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司),旋转蒸发浓缩所用设备为SY-5000型旋转蒸发器和SHZ-III型循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂),灭菌所用的立式高压蒸汽灭菌锅产于上海博迅实业有限公司医疗器械厂,无菌操作的超净工作台购于苏州净化设备有限公司。
文中所述二次水(电导率为18.2MΩ)即为超纯水。
无水乙醇产于天津科密欧化学试剂有限公司,注射用青霉素钠产于山东鲁抗医药股份有限公司,牛肉膏蛋白胨培养基产于北京奥博星生物技术有限责任公司,金黄色葡萄球菌菌号为CMCC(B)26003购于南京便诊生物科技有限公司,云南白药创可贴产于云南白药集团股份有限公司,邦迪苯扎氯铵贴产于上海强生股份有限公司。
实施例1
流苏叶中黄酮类活性成分的提取、纯化
1、提取参数的优化:首先利用单因素分析分别研究乙醇浓度(10-90%)、液固比(10-60mL/g)、超声温度(10-70℃)和超声时间(20-120min)对提取效率的影响,找出较好的提取参数中心点,结果见图1;然后利用Box-Benhnken(BBD)实验设计进一步优化提取参数(设计如表1),并将实验结果(表2)建立模型进行方差分析(见表3),拟合得出最优的提取参数(乙醇浓度62.6%,液固比24.6mL/g,超声温度70℃,时间77.1min)。
表1 BBD实验设计因素水平表
表2 BBD实验设计的结果图
表3模型方差分析结果
此模型P值小于0.0001,具有显著性;失拟项P值为0.0583大于0.005,具有不显著性,因而选择的模型是可靠的。
2、提取:称取1.0g的流苏叶粉末溶于24.6mL乙醇溶液(体积分数为62.6%)中,超声水浴温度设置为70℃,提取77.1min,提取完成后,4000r/min离心10min,收集上清液。取沉淀重复提取操作2次,合并上清液置于同一容器中,得到黄酮粗提液,备用。
3、纯化:在黄酮粗提液中加入3倍体积的无水乙醇,密封,4℃静置过夜,取上清液置于茄形瓶中,水浴温度设置60℃,真空旋转蒸发浓缩2h,得到黄酮精品,备用。
实施例2
药敏试验——黄酮类活性成分的抑菌试验
由于金黄色葡萄球菌常常引起化脓性感染,因此本次药敏实验中选用了金黄色葡萄球菌作为试验菌,以青霉素钠(浓度为11.899U/mL)作为阳性对照,空白无菌水作为阴性对照。具体操作如下:
(1)配制二倍逐级稀释的黄酮类化合物溶液(浓度为6.836-27.344μg/mL);
(2)取灭菌后的滤纸薄片(6mm,3层),分别浸泡于不同浓度的黄酮样品溶液中,过夜,同理,阳性对照和阴性对照;
(3)取0.5mL(近106CFU/mL)菌悬液均匀涂布于固体培养基平板上,用镊子分别取阳性对照、阴性对照和黄酮样品滤纸片覆盖在同一平板的菌悬液上面,三个滤纸片放置成等边三角形,轻轻按压除气泡,每一个黄酮样品浓度均做三次平行实验;
(4)将平板置于37℃恒温箱中培养24h后,测量并记录抑菌圈直径,结果如下表4所示;
表4流苏叶中黄酮类活性成分对金黄色葡萄球菌的抑菌情况数据
(5)此外,还通过二倍逐级稀释黄酮类化合物溶液(浓度为1.709-437μg/mL),研究了黄酮样品的最低抑菌浓度(MIC),37℃恒温箱中培养24h后,得到MIC为3.418μg/mL。
实施例3
基于流苏叶中黄酮类活性成分构建简易创可贴
在超净工作台内,取灭菌后的研钵研磨10mg黄酮精品,加入2mL无菌水,混匀后,浸泡10mm*10mm的无菌双层纱布,浸泡30min后,吹风机吹干,粘贴于无菌医用胶带上制成简易创可贴,备用。
实施例4
小鼠伤口愈合实验
取20只大小、体重等基本一致的小白鼠,尾部切一深浅、大小差不多的伤口,平均分为4笼,1号笼使用云南白药创可贴,2号笼使用邦迪苯扎氯铵贴,3号笼使用黄酮类自制创可贴,4号笼使用空白纱布制成的创可贴,正常饲养96h,每隔24h换取新的创可贴,观察并记录伤口愈合情况,结果如图2所示,24h之后,经过云南白药创可贴、邦迪苯扎氯铵贴、自制黄酮创可贴处理过的小鼠伤口分别开始愈合,而空白对照小鼠在72h之后才开始愈合;96h之后,经过云南白药创可贴和自制黄酮创可贴处理的小鼠创口基本完全愈合,表明两者抑菌消炎效果相当。这可能源于黄酮类化合物具有抗菌、消炎等生物活性。
Claims (7)
1.一种基于流苏叶中黄酮类活性成分的创可贴的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)提取并纯化流苏叶中黄酮类化合物;
(2)将步骤(1)中的黄酮类化合物配制成浓度为4-6mg/mL的黄酮类化合物溶液;
(3)将纱布在步骤(2)中制备的黄酮类化合物溶液中浸泡10-40min,吹干,得到所述的创可贴。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤(1)中,采用超声辅助乙醇溶剂法提取流苏叶中黄酮类化合物,并利用高浓度乙醇溶液对粗提物进行纯化。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:提取并纯化流苏叶中的黄酮类活性成分的提取参数为:乙醇体积浓度10-90%;乙醇与流苏叶的液固比为10-60mL/g;超声提取温度为10-70℃;提取时间为20-120min。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:纯化时,无水乙醇体积为2-4倍的黄酮类化合提取液。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,配制黄酮类化合物溶液的溶剂为无菌水。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于:配制黄酮类化合物溶液前,还包括用二倍逐级稀释的方式得到浓度为1.709-437μg/mL黄酮类化合物溶液进行药敏试验的步骤。
7.根据权利要求1所述的的制备方法,其特征在于:步骤(3)中,所述纱布为无菌纱布。
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