CN110090306A - 双醛连接臂的配体-药物偶联物、其制备方法及其应用 - Google Patents

双醛连接臂的配体-药物偶联物、其制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本公开涉及双醛连接臂的配体‑药物偶联物、其制备方法及其应用。具体而言，本公开提供了一种含有连接单元L的配体‑药物偶联物，及其制备方法，和所述偶联物及含有其的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。

Description

双醛连接臂的配体-药物偶联物、其制备方法及其应用
技术领域
本公开涉及一类全新结构双醛连接臂的配体-药物偶联物。具体地说，本公开涉及一种含有连接单元L的抗体-药物偶联物，及其制备方法，和包含所述偶联物的药物组合物以及所述偶联物或药物组合物的用途。
背景技术
化疗是目前治疗癌症最有效的手段之一，和手术、放疗一起并称癌症的三大治疗手段，但是其肿瘤细胞和正常细胞之间的选择性很差，并且由于其较大的毒副作用限制了大部分细胞毒素类抗肿瘤化疗药物在临床上的广泛应用。抗肿瘤单克隆抗体对于肿瘤细胞表面抗原的特异性较强，抗体药物已成为抗肿瘤治疗的前线药物，但单独使用抗体作为抗肿瘤药物时，疗效往往不尽人意。
抗体药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的化学接头化合物与具有生物活性的细胞毒素相连，充分利用了抗体对正常细胞和肿瘤细胞表面抗原结合的特异性和细胞毒素的高效性，同时又避免了前者疗效偏低和后者毒副作用过大等缺陷。这也就意味着，与以往传统的化疗药物相比，抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低将对正常细胞的影响(Mullard A,(2013)Nature Reviews DrugDiscovery,12:329–332；DiJoseph JF,Armellino DC,(2004)Blood,103:1807-1814)。
2000年第一个抗体药物偶联物(吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumabozogamicin)，惠氏制药有限公司)被美国FDA批准上市，用于治疗急性髓细胞白血病(Drugsof the Future(2000)25(7):686；US4970198；US 5079233；US 5585089；US 5606040；US5693762；US 5739116；US 5767285；US 5773001)。
2011年8月，(brentuximab vedotin，西雅图基因遗传公司)通过美国FDA快速审评通道，用于治疗霍奇金淋巴瘤以及复发性间变性大细胞淋巴瘤(Nat.Biotechnol(2003)21(7):778-784；WO2004010957；WO2005001038；US7090843A；US7659241；WO2008025020)。是一种新型靶向ADC药物，能使药物直接作用于淋巴瘤细胞上的靶点CD30后发生内吞作用从而诱导肿瘤细胞的凋亡。
2013年2月，(ado-trastuzumab emtansine，T-DM1)获得美国FDA批准，用于治疗HER2阳性同时对曲妥珠单抗(Tratuzumab，商品名：和紫杉醇有抗药性的晚期或转移性乳腺癌患者(WO2005037992；US8088387)。和都是针对血液肿瘤进行靶向治疗，和固体肿瘤相比组织结构相对简单。是美国FDA批准的治疗固体肿瘤的第一个ADC药物。
目前ADC药物所用的连接臂有两种类型，一种是可裂解型，另一种是不可裂解型。在抗体通过这些连接臂与药物或细胞毒性药物偶联形成ADC时，一般都要先对抗体进行适当的修饰。例如，抗体与细胞毒性药物形成T-DM1时，要先对相应的抗体进行修饰，即抗体中的自由氨基(如赖氨酸残基)要与功能片段SMCC偶联之后，得到的中间体才能与细胞毒性药物偶联形成终产品(WO2005037992)。
此外，也有对抗体中铰链区的二硫键用适当的还原剂进行还原，得到含有半胱氨酸残基的抗体；此修饰的抗体再与相应的细胞毒性药物偶联形成ADC产品。采用的就是这样的方法(WO2004010957)，但该方法因为还原断开了二硫键，因此可能会对抗体本身的稳定性产生一定影响。
还有利用在抗体上特异性的定点的引入一些官能团或小片段，然后再与细胞毒性药物偶联形成ADC的。如在抗体的特异位点引进半胱氨酸，经此修饰的抗体再与细胞毒性药物生成终产品(Clin Cancer Res 16：4769-4778；Nat Biotechnol 26：925-932)。但定点修饰的抗体生产过程复杂成本较高。
本公开提供了一种连接单元(连接臂片段)能够直接与未经修饰的抗体、蛋白质或多肽等在温和的条件下反应生成相应的产品，特别是本公开提供了一种具有连接单元L的抗体-药物偶联物，与现有技术相比，利用本公开的连接单元制备配体-药物偶联物，操作上更简单，后处理更容易，效率更高且成本更低。
发明内容
为了改进配体，特别是抗体和药物的偶联效果，本公开提供了一种配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其特征在于所述的配体-药物偶联物具有以下结构的连接单元L：
环A为杂芳基；
R1选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
n为0、1、2或3。
本公开的一些实施方案，其中所述的连接单元L，其为具有以下结构的连接单元L0：
W选自共价键、亚烷基或杂亚烷基，其中所述的杂亚烷基含有一个或多个选自N、O或S的杂原子，且所述亚烷基基或杂亚烷基任选被选自卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代，任选所述两个独立出现的取代基与其穿插原子一起形成环；
J选自共价键、-CO-、-NH-、-S(O)m-、-CONR0-、-OCO-、-NR0S(O)m-、-OCONR0-或-NR0C(S)NR0-；
R0选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
m为0、1或2；
环A、R1和n如L中所定义。
本公开的另一些实施方案，其中所述的连接单元L，其为具有以下结构的L1或L2：
G1为N或CR1；
G2选自NR1、O或S；
R1、W和J如L0中所定义。
本公开的另一些实施方案，其中所述的连接单元L，其为具有以下结构的L3或L4：
其中：
s为1至6的整数；
G1如L1或L2中所定义。
本公开的配体-药物偶联物的连接单元L包括，但不限于：
本公开另一方面的一些实施方案，提供了一种配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其为具有以下结构的通式(Pc-L0-Dr)所示：
其中：
Pc为配体；
Dr为药物；
y为1～10，优选为1～4；
环A、R1、W、J和n如L0中所定义。
本公开另一方面的一些实施方案，提供了一种配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其为通式(Pc-L1-Dr)或通式(Pc-L2-Dr)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
Pc为配体；
Dr为药物；
y为1～10，优选为1～4；
G1、G2、W和J如L1和L2中所定义。
本公开另一方面的一些实施方案，提供了一种配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其为通式(Pc-L3-Dr)或通式(Pc-L4-Dr)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
Pc为配体；
Dr为药物；
y为1～10，优选为1～4；
G1、W和J如L3或L4中所定义。
本公开的另一方面，提供了一种通式(IM)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
环A为杂芳基；
R1选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
Rw选自Pc、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
W选自共价键、亚烷基或杂亚烷基，其中所述的杂亚烷基含有一个或多个选自N、O或S的杂原子，且所述亚烷基基或杂亚烷基任选被选自卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代，任选所述两个独立出现的取代基与其穿插原子一起形成环；
J选自共价键、-CO-、-NH-、-S(O)m-、-CONR0-、-OCO-、-NR0S(O)m-、-OCONR0-或-NR0C(S)NR0-；
R0选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
M选自氢原子、Dr、聚乙二醇、肽、糖、荧光探针、DNA或RNA，优选为Dr；
Dr为药物；
Pc为配体；
m为0、1或2；且
n为0、1、2或3。
本公开的另一方面，提供了一种通式(IA)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
环A为杂芳基；
R1选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
W选自共价键、亚烷基或杂亚烷基，其中所述的杂亚烷基含有一个或多个选自N、O或S的杂原子，且所述亚烷基基或杂亚烷基任选被选自卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代，任选所述两个独立出现的取代基与其穿插原子一起形成环；
J选自共价键、-CO-、-NH-、-S(O)m-、-CONR0-、-OCO-、-NR0S(O)m-、-OCONR0-或-NR0C(S)NR0-；
R0选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
M选自氢原子、Dr、聚乙二醇、肽、糖、荧光探针、DNA或RNA，优选为Dr；
Dr为药物；
m为0、1或2；且
n为0、1、2或3。
本公开一些实施方案，提供了一种通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
Dr为药物；
环A、R1、W、J和n如通式(IA)中所定义。
本公开的一些实施方案，提供了一种通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
G1为N或CR1；
G2选自NR1、O或S；
Dr为药物；
W、J和R1如通式(I)中所定义。
本公开的一些实施方案，提供了一种通式(III)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
s为1至6的整数；
Dr为药物；
G1如通式(II)中所定义。
本公开的另一些实施方案，提供了一种如以上所述的配体-药物偶联物或如以上所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中环A为5或6元杂芳基，所述杂芳基含有1至3个选自N、O或S的杂原子，优选为噻吩基、噻唑基、吡唑基、咪唑基、吡啶基或嘧啶基。
本公开的另一些实施方案，提供了一种如以上所述的配体-药物偶联物或如以上所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中W为共价键或亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、氧代基和酰胺基中的一个或多个取代基所取代，优选为-(CH2)s-，s为1至6的整数。
本公开的另一些实施方案，提供了一种如以上所述的配体-药物偶联物或如以上所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中J选自共价键、-CO-或-NH-，优选为-CO-。
本公开的另一些实施方案，提供了一种如以上所述的配体-药物偶联物或如以上所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的Dr选自毒性药物、化疗药物、抗生素和放射性同位素。
本公开的另一些实施方案，提供了一种如以上所述的配体-药物偶联物或如以上所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的Dr为毒性药物，其中所述的毒性药物选自美登素类、卡利奇霉素、紫杉烷类、长春新碱、秋水仙碱、尾海兔素、澳瑞他汀、喜树碱、吡咯并苯并二氮杂类化合物(PBDs,pyrrobenzodiazepines)或其衍生物。
本公开的另一些实施方案，提供了一种如以上所述的配体-药物偶联物或如以上所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的Dr为DE和DF：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中：
R2、R6或R10相同或不同，且各自独立地为氢原子或烷基；
R3或R7相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基和芳基，其中所述的环烷基、杂环基和芳基任选被一个或多个烷基取代；
R4选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基和芳基，其中所述的环烷基、杂环基和芳基任选被一个或多个烷基取代；
R5选自氢原子或烷基；
或者R4和R5一起形成环烷基，其中所述的环烷基任选被选自卤素、烷基或环烷基中的一个或多个取代基取代；
R8和R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、烷氧基、羟基、环烷基或环烷氧基；
R11选自-C(R8)2-C(R8)2-芳基、-C(R8)2-C(R8)2-环烷基或-C(R8)2-C(R8)2-杂环基；
R12选自芳基或杂环基；
Z选自O、S、NH和NR16；
当Z选自S、NH或NR16时，R13选自氢原子、烷基、杂环基、芳基、-(R17O)t-R18或-(R17O)t-CH(R18)2，当Z为O时，R13选自氢原子、烷基、杂环基、芳基、-(R17O)t-R18、-(R17O)t-CH(R18)2和羧基保护基，其中所述的羧基保护基优选为2,4-二甲氧苄基或对甲氧苄基；
Ra至Rd相同或不同，且独立地选自氢原子、卤素、烯基、烷基和环烷基；
或者Ra至Rd之中的任意两个形成环烷基，余下的两个基团任选选自氢原子、烷基和环烷基；
R14和R15相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基和环烷基；
R16为烷基；
R17为亚烷基；
R18为氢原子或烷基；
t为1至10的整数。
本公开的另一些实施方案，提供了一种如以上所述的配体-药物偶联物或如以上所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的Dr为DH和DG：
其中R2至R4、R6至R15和Ra至Rd如DE和DF中所定义。
本公开所述的配体-药物偶联物或化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的Dr包括，但不限于：
本公开所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物包括，但不限于：
在本公开的一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述Pc为抗体或其抗原结合片段，所述抗体选自嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体。
在本公开的一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段可与B7-H3、c-Met、HER2(ErbB2)、HER3(ErbB3)、HER4(ErbB4)、CD20、CD22、CD30、CD33、CD44、CD56、CD105、Lewis Y、VEGFR和GPNMB中一个或多个抗原结合。
在本公开的一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段选自Enoblituzumab(B7H3)、Emibetuzumab(c-Met)、Trastuzumab(HER2)、Inotuzumab(CD22)、Pinatuzumab(CD22)、Brentuximab(CD30)、Gemtuzumab(CD33)、Bivatuzumab(CD44)、Lorvotuzumab(CD56)、cBR96(Lewis Y)、Glematumamab(GPNMB)和Pertuzumab。
在本公开的一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体为能够结合B7-H3的抗体或其抗原结合片段，
所述B7-H3抗体或其抗原结合片段是选自(a)至(c)中任一种所示的CDR区：
(a)抗体重链可变区HCDR区序列：如SEQ ID NO：10、11和12氨基酸序列所示；和抗体轻链可变区LCDR区序列：如SEQ ID NO：13、14和15氨基酸序列所示；
(b)抗体重链可变区HCDR区序列：如SEQ ID NO：16、17和18氨基酸序列所示；和抗体轻链可变区LCDR区序列：如SEQ ID NO：19、20和21氨基酸序列所示；
(c)
抗体重链可变区HCDR区序列：如SEQ ID NO：30、31和32氨基酸序列所示；和抗体轻链可变区LCDR区序列：如SEQ ID NO：33、34和35氨基酸序列所示。
在本公开的一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段含有SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37所示的重链可变区或其变体；所述变体是在SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37所示的重链可变区序列上具有1-10个氨基酸的突变。
在本公开的一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段含有SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39所示的轻链可变区或其变体；所述变体是在SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39所示的轻链可变区序列上具有1-10个氨基酸的突变。
在本公开的一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段为全长抗体，其中所述的全长抗体选自：
h1702抗体，其是由SEQ ID NO:22所示的重链序列和SEQ ID NO:23所示的轻链序列组成的全长抗体，
h1703抗体，其是由SEQ ID NO:24所示的重链序列和SEQ ID NO:25所示的轻链序列组成的全长抗体，
h1702-DS抗体，其是由SEQ ID NO:22所示的重链序列和SEQ ID NO:26所示的轻链序列组成的全长抗体，和
h1704-3抗体，其是由SEQ ID NO:40所示的重链序列和SEQ ID NO:41所示的轻链序列组成的全长抗体。
在本公开的一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、单链抗体(scFv)、二聚化的V区(双抗体)、二硫键稳定化的V区(dsFv)和包含CDR的肽的抗原结合片段。
本公开的一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段为能够结合至c-Met的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：
所述c-Met抗体或其抗原结合片段包含选自以下轻链序列和重链序列的组合：
Ab-10：SEQ ID NO:42所示的重链序列和SEQ ID NO:43所示的轻链序列；
Ab-9：SEQ ID NO:44所示的重链序列和SEQ ID NO:45所示的轻链序列；或
Ab-11：SEQ ID NO:46所示的重链序列和SEQ ID NO:47所示的轻链序列。
本公开的配体-药物偶联物化合物包括，但不限于：
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
注：y1+y2表示与抗体偶联的药物分子数。
本公开的另一方面，提供了一种制备通式(IM)或其药学上可接受的盐或溶剂合物的方法，其包括如下步骤：
Rw-NH2与通式(IA)化合物反应，得到通式(IM)化合物；
其中：
Rw、环A、R1、W、J、M和n如通式(IM)中所定义。
本公开的另一方面，提供了一种制备如通式(Pc-L0-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的方法，其包括如下步骤：
Pc-NH2与通式(I)化合物反应，得到通式(Pc-L0-Dr)化合物；
其中：
Pc、Dr、y、环A、R1、W、J和n如通式(Pc-L0-Dr)中所定义。
本公开进一步涉及一种药物组合物，其包含如本公开所述的配体-药物偶联物或化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂合物，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本公开进一步涉及本公开所述的配体-药物偶联物或化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂合物，或药物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途。
本公开进一步涉及本公开所述的配体-药物偶联物或化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂合物，或药物组合物在制备治疗或预防B7-H3介导的疾病或病症的药物中的用途，其中所述的疾病或病症优选为癌症；更优选为表达B7-H3的癌症；最优选为乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、膀胱癌、食管癌、宫颈癌、胆囊癌、胶质母细胞瘤和黑色素瘤。
本公开进一步涉及本公开所述的配体-药物偶联物或化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂合物，或药物组合物在制备治疗或预防c-Met介导的疾病或病症的药物中的用途，其中所述的疾病或病症优选为癌症；更优选为表达c-Met的癌症；最优选为胃癌、胰腺癌、肺癌、肠癌、肾癌、黑素瘤、非小细胞肺癌；最优选为胃癌、胰腺癌、非小细胞肺癌和肾癌。
术语
除非另有限定，本文所用的所有技术和科学术语均与本公开所属领域普通技术人员的通常理解一致。虽然也可采用与本文所述相似或等同的任何方法和材料实施或测试本公开，但本文描述了优选的方法和材料。描述和要求保护本公开时，依据以下定义使用下列术语。
当本公开中使用商品名时，申请人旨在包括该商品名产品的制剂、该商品名产品的非专利药和活性药物部分。
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“配体”是能识别和结合目标细胞相关的抗原或受体的大分子化合物。配体的作用是将药物呈递给与配体结合的目标细胞群，这些配体包括但不限于蛋白类激素、凝集素、生长因子、抗体或其他能与细胞结合的分子。在本公开实施方式中，配体表示为Pc，配体可通过配体上的杂原子与连接单元形成连接键，优选为抗体或其抗原结合片段，所述抗体选自嵌合抗体、人源化抗体、全人源抗体或鼠源抗体。
术语“药物”是指细胞毒性药物，药物表示为Dr，能在肿瘤细胞内具有较强破坏其正常生长的化学分子。细胞毒性药物原则上在足够高的浓度下都可以杀死肿瘤细胞，但是由于缺乏特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时，也会导致正常细胞的凋亡，导致严重的副作用。该术语包括毒素，如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu的放射性同位素)，毒性药物，化疗药物，抗生素和核溶酶，优选为毒性药物。
术语“连接单元”是指指一端与配体共价连接而另一端与药物相连的化学结构片段或键，表示为L、L0和L1至L4，本公开中的L、L0和L1至L4的双醛端与配体相连，另一端可以与药物(Dr)直接相连，也可以连接其他接头后再与药物相连。
接头，包括延伸物、间隔物和氨基酸单元，可以通过本领域已知方法合成，诸如US2005-0238649A1中所记载的。接头可以是便于在细胞中释放药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接头、光不稳定接头、二甲基接头、或含二硫化物接头(Chari等,Cancer Research 52:127-131(1992)；美国专利No.5,208,020)。
术语“配体-药物偶联物”，指配体通过稳定的连接单元与具有生物活性的药物相连。在本公开中“配体-药物偶联物”优选为抗体-药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)，指把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的连接单元与具有生物活性的毒性药物相连。
本公开所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。
本公开所述的“抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链、和ε链。同一类Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类，如IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。轻链通过恒定区的不同分为κ链或λ链。五类Ig中每类Ig都可以有κ链或λ链。
抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(Fv区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。本公开所述的抗体或抗原结合片段的LCVR区和HCVR区的CDR氨基酸残基在数量和位置符合已知的Kabat编号规则(LCDR1-3，HCDR2-3)，或者符合kabat和chothia的编号规则(HCDR1)。
本公开的抗体包括鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体，优选人源化抗体和全人源抗体。
术语“鼠源抗体”在本公开中为根据本领域知识和技能制备的对人B7H3或c-Met的单克隆抗体。制备时用B7H3或c-Met抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。在本公开一个优选的实施方案中，所述的鼠源B7H3抗体或其抗原结合片段，可进一步包含鼠源κ、λ链或其变体的轻链恒定区，或进一步包含鼠源IgG1、IgG2、IgG3或其变体的重链恒定区。
术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入表达载体中，最后在真核系统或原核系统中表达嵌合抗体分子。在本公开一个优选的实施方案中，所述的B7H3嵌合抗体的抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。所述的B7H3嵌合抗体的抗体重链进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG1、IgG2或IgG4重链恒定区，或者使用氨基酸突变(如YTE突变或回复突变)的IgG1、IgG2或IgG4变体。
术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指将鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体框架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量鼠蛋白成分，从而诱导的异源性反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991 Sequences ofProteins of Immunological Interest，第5版中找到。为避免免疫原性下降的同时，引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区框架序列进行最少反向突变或回复突变，以保持活性。本公开的人源化抗体也包括进一步由噬菌体展示对CDR进行亲和力成熟后的人源化抗体。进一步描述参与人源化可使用小鼠抗体的方法的文献包括，例如Queen等，Proc.，Natl.Acad.Sci.USA，88，2869，1991和Winter及其同事的方法[Jones等，Nature，321，522(1986)，Riechmann，等，Nature，332，323-327(1988)，Verhoeyen，等，Science，239，1534(1988)]。
术语“全人源抗体”、“全人抗体”或“完全人源抗体”，也称“全人源单克隆抗体”，其抗体的可变区和恒定区都是人源的，去除免疫原性和毒副作用。单克隆抗体的发展经历了四个阶段，分别为：鼠源性单克隆抗体、嵌合性单克隆抗体、人源化单克隆抗体和全人源单克隆抗体。本公开为全人源单克隆抗体。全人抗体制备的相关技术主要有：人杂交瘤技术、EBV转化B淋巴细胞技术、噬菌体显示技术(phage display)、转基因小鼠抗体制备技术(transgenic mouse)和单个B细胞抗体制备技术等。本公开中的“完全人抗体”采用噬菌体显示技术获得。
本公开中所述的“抗原结合片段”是指抗体的保持特异性结合抗原(例如，B7H3)的能力的一个或多个片段。已显示可利用全长抗体的片段来进行抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合片段”中包含的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段，(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VH和VL结构域组成的Fv片段；(v)单结构域或dAb片段(Ward等人,(1989)Nature341：544-546)，其由VH结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)或(vii)可任选地通过合成的接头连接的两个或更多个分离的CDR的组合。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但可使用重组方法，通过合成的接头连接它们，从而使得其能够产生为其中VL和VH区配对形成单价分子的单个蛋白质链(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人(1988)Science242:423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci USA85:5879-5883)。此类单链抗体也意欲包括在术语抗体的“抗原结合片段”中。使用本领域技术人员已知的常规技术获得此类抗体片段，并且以与对于完整抗体的方式相同的方式就功用性筛选片段。可通过重组DNA技术或通过酶促或化学断裂完整免疫球蛋白来产生抗原结合部分。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚类(subclass))，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。
本公开的抗原结合片段包括Fab、F(ab')2、Fab'、单链抗体(scFv)、二聚化的V区(双抗体)、二硫键稳定化的V区(dsFv)和包含CDR的肽等。
Fab是通过用蛋白酶木瓜蛋白酶(切割H链的224位的氨基酸残基)处理IgG抗体分子所获得的片段中的具有约50,000的分子量并具有抗原结合活性的抗体片段，其中H链N端侧的约一半和整个L链通过二硫键结合在一起。
本公开的Fab可以通过用木瓜蛋白酶处理本公开的特异性识别人B7H3并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的单克隆抗体来生产。此外，可以通过将编码所述抗体的Fab的DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表达载体中并将载体导入到原核生物或真核生物中以表达Fab来生产所述Fab。
F(ab')2是通过用酶胃蛋白酶消化IgG铰链区中两个二硫键的下方部分而获得的分子量为约100,000并具有抗原结合活性并包含在铰链位置相连的两个Fab区的抗体片段。
本公开的F(ab')2可以通过用胃蛋白酶处理本公开的特异性识别人B7H3并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的单克隆抗体来生产。此外，可以通过用硫醚键或二硫键连接下面描述的Fab'来生产所述F(ab')2。
Fab'是通过切割上述F(ab')2的铰链区的二硫键而获得的分子量为约50,000并具有抗原结合活性的抗体片段。本公开的Fab'可以通过用还原剂例如二硫苏糖醇处理本公开的特异性识别B7H3并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的F(ab')2来生产。
此外，可以通过将编码抗体的Fab'片段的DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表达载体中并将载体导入到原核生物或真核生物中以表达Fab'来生产所述Fab'。
术语“单链抗体”、“单链Fv”或“scFv”意指包含通过接头连接的抗体重链可变结构域(或区域；VH)和抗体轻链可变结构域(或区域；VL)的分子。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成，例如使用1-4个重复的变体(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448)。可用于本公开的其他接头由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8:725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.Immuno l.31:94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56:3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293:41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。
本公开的scFv可以通过以下步骤来生产：获得本公开的特异性识别人B7H3并与胞外区的氨基酸序列或其三维结构结合的单克隆抗体的VH和VL的编码cDNA，构建编码scFv的DNA，将所述DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表达载体中，然后将所述表达载体导入到原核生物或真核生物中以表达scFv。
术语“互补决定区”和“CDR”是指抗体的可变结构域内主要促成抗原结合的6个高变区之一。通常，每个重链可变区中存在三个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)和每个轻链可变区中存在三个CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。可以使用各种公知方案中的任何一种来确定CDR的氨基酸序列边界，包括“Kabat”编号规则(参见Kabat等(1 991)，“Sequences of Proteinsof Immunological Interest”，第5版，Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda，MD)、“Chothia”编号规则(Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273：927-948)和ImMunoGenTics(IMGT)编号规则(Lefranc M.P.，Immunologist,7,132-136(1999)；Lefranc,M.P.等，Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003))等。例如，对于经典格式，遵循Kabat规则，所述重链可变域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；轻链可变域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。遵循Chothia规则，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且VL中的氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。通过组合Kabat和Chothia两者的CDR定义，CDR由人VH中的氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中的氨基酸残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)构成。遵循IMGT规则，VH中的CDR氨基酸残基编号大致为26-35(CDR1)、51-57(CDR2)和93-102(CDR3)，VL中的CDR氨基酸残基编号大致为27-32(CDR1)、50-52(CDR2)和89-97(CDR3)。遵循IMGT规则，抗体的CDR区可以使用程序IMGT/DomainGapAlign确定。本文中使用的术语“抗体框架”，是指可变结构域VL或VH的一部分，其用作该可变结构域的抗原结合环(CDR)的支架。从本质上讲，其是不具有CDR的可变结构域。
术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上免疫球蛋白或抗体特异性结合的部位(例如，B7H3分子上的特定部位)。表位通常以独特的空间构象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个连续或非连续的氨基酸。参见，例如，Epitope Mapping Protocols inMethods in Molecular B iology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。
术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体对预先确定的抗原上的表位的结合。通常，抗体以大约小于10-7M，例如大约小于10-8M、10-9M或10-10M或更小的亲和力(KD)结合。
术语“KD”或“Kd”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数。通常，本公开的抗体以小于大约10-7M，例如小于大约10-8M、10-9M或10-10M或更小的解离平衡常数(KD)结合B7H3，例如，如使用表面等离子体共振(SPR)技术在BIACORE仪中测定的。
术语“与B7H3抗体竞争结合人B7H3的单克隆抗体”是指与本公开的单克隆抗体竞争识别人B7H3的胞外区上的相同表位(也称为抗原决定簇)或相同表位的一部分并与所述表位结合的抗体。与本公开的B7H3抗体结合相同表位的抗体是指识别并结合于本公开的B7H3抗体识别的人B7H3的氨基酸序列的抗体。
本文中使用的术语“核酸分子”是指DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，但优选是双链DNA。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸是“有效连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，那么启动子或增强子有效地连接至所述编码序列。
术语“载体”是指能够运输已与其连接的另一个核酸的核酸分子。在一个实施方案中，载体是“质粒”，其是指可将另外的DNA区段连接至其中的环状双链DNA环。在另一个实施方案中，载体是病毒载体，其中可将另外的DNA区段连接至病毒基因组中。本文中公开的载体能够在已引入它们的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌的复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)或可在引入宿主细胞后整合入宿主细胞的基因组，从而随宿主基因组一起复制(例如，非附加型哺乳动物载体)。
现有技术中熟知生产和纯化抗体和抗原结合片段的方法，如冷泉港的抗体实验技术指南，5-8章和15章。例如，鼠可以用人B7H3或其片段免疫，所得到的抗体能被复性、纯化，并且可以用常规的方法进行氨基酸测序。抗原结合片段同样可以用常规方法制备。发明所述的抗体或抗原结合片段用基因工程方法在非人源的CDR区加上一个或多个人源FR区。人FR种系序列可以通过比对IMGT人类抗体可变区种系基因数据库和MOE软件，从ImMunoGeneTics(IMGT)的网站http://imgt.cines.fr得到，或者从免疫球蛋白杂志，2001ISBN012441351上获得。
术语“宿主细胞”是指已向其中引入了表达载体的细胞。宿主细胞可包括细菌、微生物、植物或动物细胞。易于转化的细菌包括肠杆菌科(enterobacteriaceae)的成员，例如大肠杆菌(Escherichia coli)或沙门氏菌(Salmonella)的菌株；芽孢杆菌科(Bacillaceae)例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)；链球菌(Streptococcus)和流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)。适当的微生物包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤酵母(Pichia pastoris)。适当的动物宿主细胞系包括CHO(中国仓鼠卵巢细胞系)和NS0细胞。
本公开工程化的抗体或抗原结合片段可用常规方法制备和纯化。比如，编码重链和轻链的cDNA序列，可以克隆并重组至GS表达载体。重组的免疫球蛋白表达载体可以稳定地转染CHO细胞。作为一种更推荐的现有技术，哺乳动物类表达系统会导致抗体的糖基化，特别是在Fc区的高度保守N端位点。通过表达与人B7H3特异性结合的抗体得到稳定的克隆。阳性的克隆在生物反应器的无血清培养基中扩大培养以生产抗体。分泌了抗体的培养液可以用常规技术纯化。比如，用含调整过的缓冲液的A或G Sepharose FF柱进行纯化。洗去非特异性结合的组分。再用PH梯度法洗脱结合的抗体，用SDS-PAGE检测抗体片段，收集。抗体可用常规方法进行过滤浓缩。可溶的混合物和多聚体，也可以用常规方法去除，比如分子筛、离子交换。得到的产物需立即冷冻，如-70℃，或者冻干。
术语“肽”是指介于氨基酸和蛋白质之间的化合物片段，由2个或2个以上氨基酸分子通过肽键相互连接而成，是蛋白质的结构与功能片段，如激素、酶类等本质上都是肽。
术语“糖”是指由C、H、O三种元素组成的生物大分子，可分为单糖、二糖和多糖等。
术语“荧光探针”是指在紫外-可见-近红外区有特征荧光，并且其荧光性质(激发和发射波长、强度、寿命和偏振等)可随所处环境的性质，如极性、折射率、粘度等改变而灵敏地改变的一类荧光性分子，其与核酸(DNA或RNA)、蛋白质或其他大分子结构非共价相互作用而使一种或几种荧光性质发生改变，可用于研究大分子物质的性质和行为。
术语“毒性药物”是指抑制或防止细胞的功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。包括毒素和其他能用于肿瘤治疗的化合物。
术语“毒素”是指能够对细胞的生长或增殖产生有害效果的任何物质，可以是来自细菌、真菌、植物或动物的小分子毒素及其衍生物，包括美登木素生物碱及其衍生物(CN101573384)如DM1、DM3、DM4，auristatin F(AF)及其衍生物，如MMAF、MMAE、3024(WO2016/127790A1，化合物7)，白喉毒素、外毒素、蓖麻毒蛋白(ricin)A链、相思豆毒蛋白(abrin)A链、modeccin、α-帚曲霉素(sarcin)、油桐(Aleutites fordii)毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia)抑制物、麻疯树毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制物、白树毒蛋白(gelonin)、丝林霉素(mitogellin)局限曲霉素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(trichothecenes)。
术语“化疗药物”是可用于治疗肿瘤的化学化合物。该定义还包括起调节、降低、阻断或抑制可促进癌生长的激素效果作用的抗激素剂，且常常是系统或全身治疗的形式。它们自身可以是激素。。化疗药物实例包括烷化剂，如噻替哌(thiotepa)；环磷酰胺(cyclosphamide)(CYTOXANTM)；烷基磺酸脂如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶(aziridine)如苯并多巴(benaodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替哌(meturedopa)和尿烷亚胺(uredopa)；氮丙啶和methylamelamine包括六甲蜜胺(altretamine)，三亚胺嗪(triethylenemelamine)，三亚乙基磷酰胺，三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；氮芥(nitrogen mustards)如苯丁酸氮芥，萘氮芥，胆磷酰胺(cholophosphamide)，雌氮芥(estramustine)，异环磷酰胺(ifosfamide)，氮芥(mechlorethamine)，盐酸氧氮芥；左旋苯丙氨酸氮芥(melphalan)，新氮芥(novembichin)，胆甾醇苯乙酸氮芥，松龙苯芥(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥；亚硝基脲(nitrosureas)如亚硝基脲氮芥(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)，雷莫司汀(ranimustine)；抗生素如阿克拉霉素，放线菌素，authramycin，重氮丝氨酸，博来霉素，放线菌素C(cactinomycin)，加利车霉素(calicheamicin)，carabicin,洋红霉素(chromomycin)，嗜癌素(carzinophilin)，色霉素，放线菌素D，柔红菌素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸，阿霉素(doxorubicin)，表阿霉素(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊达比星(idarubicin)，发波霉素(marcellomycin)，丝裂霉素，霉酚酸，诺加霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，potfiromycin,嘌呤霉素，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素；链脲霉素(streptozocin)，杀结核菌素，乌苯美司(ubenimex)，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢药如氨甲蝶吟，5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物如二甲叶酸(denopterin)，氨甲蝶呤，蝶罗呤，三甲曲沙(trimetrexate)；喋吟类似物氟达拉滨(f1udarabine)，6-巯基蝶呤，硫咪蝶呤，硫鸟蝶呤；嘧啶类似物如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷，双脱氧尿苷，去氟氧尿苷(doxitluridine),依诺他滨(enocitabine)，氟尿苷，5-FU；雄激素类如二甲睾酮(calusterone),丙酸甲雄烷酮(dromostanolong propionate)，环硫雄醇(epitiostanol)，美雄氨(mepitiostane)，睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂如frolinic acid；醋葡内脂；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(biasntrene)；依达曲沙(edatraxate)；defofamine；秋水仙胺；地吖醌(diaziquone)；elfomithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；硝呋旦(nitracrine)；喷司他丁(pintostatin)；phenamet；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼树酸(podophyllinicacid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；雷佐生(razoxane)；西索菲兰(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2'，2"-三氯二乙胺(trichlorrotriethylamine)；乌拉坦(urethan)；长春碱酰胺；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇；哌溴烷坑(pipobroman)；gacytosine；阿拉伯糖苷("Ara-C")；环磷酰胺；三胺硫磷(thiotepa)；紫杉烷，如紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,NJ)和docetaxel(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；氨甲蝶呤；铂类似物如顺铂和卡铂；长春花碱；铂；依托泊甙(etoposide)(VP-16)；异环磷航胶；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞宾(vinorelbine)；新霉酰胺(navelbine)；novantrone；替尼泊甙(teniposide)；柔红霉素；氨基蝶呤；xeloda；伊拜磷酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维甲酸esperamicins；capecitabine；以及上述任何物质的可药用盐，酸或衍生物。此定义还包括能调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素制剂，如抗雌激素制剂包括他莫昔芬(tamoxifen)，雷洛昔芬(raloxifene)，芳香酶抑制剂4(5)-咪唑，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene),keoxifene，LY117018,onapristone，和托瑞米芬(Fareston)；和抗雄激素制剂如氟他氨(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)，bicalutamide，亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；和上述任何物质的可药用盐，酸或衍生物。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至10个碳原子的烷基，最优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基。
术语“亚烷基”指饱和的直链或支链脂肪族烃基，其具有2个从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子，更优选含有1至6个碳原子的亚烷基。亚烷基的非限制性实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、1,1-亚乙基(-CH(CH3)-)、1,2-亚乙基(-CH2CH2)-、1,1-亚丙基(-CH(CH2CH3)-)、1,2-亚丙基(-CH2CH(CH3)-)、1,3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)和1,5-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)等。亚烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。
术语“杂亚烷基”指含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的亚烷基，其中亚烷基如上所定义。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基或环烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“烯基”指分子中含有碳碳双键的烷基化合物，其中烷基的定义如上所述。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基中的一个或多个取代基所取代。
术语“炔基”指分子中含有碳碳三键的烷基化合物，其中烷基的定义如上所述。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基中的一个或多个取代基所取代。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至10个碳原子，最优选包含3至8个(例如3、4、5、6、7或8个)碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：
术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：
术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：
所述环烷基环包括上述环烷基(例如单环、稠环、螺环和桥环环烷基)稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等；优选苯基并环戊基、四氢萘基。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基独立地任选选自卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烷硫基、烷基氨基、烯基、炔基、巯基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选环烷基环包含3至10个环原子，其中1～3(例如1、2或3)个是杂原子；最优选包含5至6个环原子，其中1～2或1～3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：
术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：
所述杂环基环包括上述杂环基(例如单环、稠环、螺环和桥环杂环基)稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
等。
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基，优选苯基。所述芳基环包括上述芳基稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，更优选为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环包括上述杂芳基稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“烷氨基”指-N-(烷基)和-N-(非取代的环烷基)，其中烷基或环烷基的定义如上所述。烷氨基的非限制性实例包括：甲氨基、乙氨基、丙氨基、丁氨基、环丙氨基、环丁氨基、环戊氨基、环己氨基。烷氨基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH2。
术语“硝基”指-NO2。
术语“酰胺基”指-C(O)N(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。
术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
术语“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
术语“药学上可接受的盐”或“可药用盐”是指本公开配体-细胞毒性药物偶联物的盐，或本公开中所述的化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性，本公开抗体-抗体药物偶联化合物至少含有一个氨基，因此可以与酸形成盐，可药用盐的非限制性实例包括：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、柠檬酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、草酸盐、硝酸盐、梨酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、水杨酸盐、柠檬酸氢盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。
术语“溶剂合物”指本公开的配体-药物偶联化合物与一种或多种溶剂分子形成可药用的溶剂合物，溶剂分子的非限制性实例包括水、乙醇、乙腈、异丙醇、DMSO、乙酸乙酯。
术语“载药量”是指式(I)分子中每个配体上加载的细胞毒性药物平均数量，也可以表示为药物量和抗体量的比值，药物载量的范围可以是每个配体(Pc)连接1-8个细胞毒性药物(D)，在本公开的实施方式中，载药量表示为y，可用常规方法如UV/可见光光谱法，质谱，ELISA试验和HPLC特征鉴定偶联反应后每个ADC分子的药物品均数量。
在本公开中，y、y1和y2可能受连接位点数量的限制。本公开的一个实施方式中，细胞毒性药物通过连接单元偶联在配体的N端氨基和/或赖氨酸残基的ε-氨基上，一般地，偶联反应中能与抗体偶联的药物分子数将小于理论上的最大值。
可以用以下非限制性方法控制配体细胞毒性药物偶联物的载量，包括：
(1)控制连接试剂和单抗的摩尔比，
(2)控制反应时间和温度，
(3)选择不同的反应试剂。
常规的药物组合物的制备见中国药典。
术语“载体”用于本公开的药物，是指能改变药物进入人体的方式和在体内的分布、控制药物的释放速度并将药物输送到靶向器官的体系。药物载体释放和靶向系统能够减少药物降解及损失，降低副作用，提高生物利用度。如可作为载体的高分子表面活性剂由于其独特的两亲性结构，可以进行自组装，形成各种形式的聚集体，优选的实例如胶束、微乳液、凝胶、液晶、囊泡等。这些聚集体具有包载药物分子的能力，同时又对膜有良好的渗透性，可以作为优良的药物载体。
术语“赋形剂”是在药物制剂中除主药以外的附加物，也可称为辅料。如片剂中的黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂；半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分；液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂等均可称为赋形剂。
术语“稀释剂”又称填充剂，其主要用途是增加片剂的重量和体积。稀释剂的加入不仅保证一定的体积大小，而且减少主要成分的剂量偏差，改善药物的压缩成型性等。当片剂的药物含有油性组分时，需加入吸收剂吸收油性物，使保持“干燥”状态，以利于制成片剂。如淀粉、乳糖、钙的无机盐、微晶纤维素等。
药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可在使用的可接受的溶媒和溶剂中有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本公开化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液，例如1,3-丁二醇中制备的溶液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用包括合成甘油单或二酯在内的任何调和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制备注射剂。
术语“羧基保护基”指当同时含有羧酸基团和其他基团的化学分子参与反应的情况下，为使反应只发生在特定的基团处，而避免羧酸基遭受影响，将羧酸基加以保护，当反应完成后脱除的基团，在本公开的实施方式中，羧酸基保护基表示为R13，羧酸基保护基的非限制性实例包括：2,4-二甲氧苄基、对甲氧苄基、叔丁氧基、-乙酰基、-正丙酰基、-异丙酰基，本公开优选的巯基保护基为2,4-二甲氧苄基。
合成方法
为了完成本公开的合成目的，本公开采用如下的合成技术方案：
方案一：
本公开通式(IM)所示的化合物或其可药用盐或溶剂合物的制备方法，该方法包括：
Rw-NH2与通式(IA)化合物反应，得到通式(IM)化合物；
其中：Rw、环A、R1、W、J、M和n如通式(IM)所定义。
方案二：
本公开通式(Pc-L0-Dr)所示的配体-药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物的制备方法，该方法包括：
Pc-NH2与通式(I)化合物反应，得到通式(Pc-L0-Dr)所示的配体-药物偶联物；
其中：
Pc、Dr、y、环A、R1、W、J和n如通式(Pc-L0-Dr)中所定义。
方案三：
本公开通式(Pc-L1-Dr)或通式(Pc-L2-Dr)所示的配体-药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物的制备方法，该方法包括：
Pc-NH2与通式(II)化合物反应，得到通式(Pc-L1-Dr)或通式(Pc-L2-Dr)所示的配体-药物偶联物；
其中：
Pc、Dr、y、R1、W和J如通式(Pc-L1-Dr)或通式(Pc-L2-Dr)中所定义。
方案四：
本公开通式(Pc-L3-Dr)或通式(Pc-L4-Dr)所示的配体-药物偶联物或其可药用盐或溶剂合物的制备方法，该方法包括：
Pc-NH2与通式(III)化合物反应，得到通式(Pc-L3-Dr)或通式(Pc-L4-Dr)所示的配体-药物偶联物；
其中：Pc、Dr、y、R1、W和J如通式(Pc-L3-Dr)或通式(Pc-L4-Dr)中所定义。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述本公开，但这些实施例并非限制本公开的范围。
本公开实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD),内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商:Thermo,型号：Finnigan LCQadvantage MAX)。
HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
手性HPLC分析测定使用LC-10A vp(Shimadzu)或者SFC-analytical(BergerInstruments Inc.)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200-300目硅胶为载体。
手性制备柱层析使用Prep Star SD-1(Varian Instruments Inc.)或SFC-multigram(Berger Instruments Inc.)。
激酶平均抑制率及IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
本公开的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中pH＝6.5的PBS缓冲液的配制：取KH2PO4 8.5g，K2HPO4.3H2O 8.56g，NaCl5.85g，EDTA 1.5g置于瓶中，定容至2L，超声波使其全部溶解，摇匀即得。
实施例中pH＝4.5的乙酸/乙酸钠缓冲液的配制：取9g无水乙酸钠置于瓶中，加入纯化水，定容至2L，摇匀后，加入醋酸钠4.9mL，摇匀即得。
实施例中磷酸盐缓冲液(pH＝7.0)的配制：0.2M的Na2HPO4 61mL中加入0.2M的NaH2PO4 39mL摇匀得0.2M pH＝7的缓冲液。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：A：二氯甲烷和异丙醇体系，B：二氯甲烷和甲醇体系，C：石油醚和乙酸乙酯体系，D：丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷和异丙醇体系，B：二氯甲烷和甲醇体系，C：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
本公开部分化合物是通过Q-TOF LC/MS来表征的。Q-TOF LC/MS使用安捷伦6530精确质量数四级杆-飞行时间质谱仪和安捷伦1290-Infinity超高效液相色谱仪(安捷伦Poroshell 300SB-C8 5μm,2.1×75mm色谱柱)。
本公开的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例1.B7H3抗原及检测用蛋白的制备
1.B7H3抗原设计
以SEQ ID NO:1所示人B7H3作为本公开B7H3的模板，设计本公开涉及的抗原及检测用蛋白的氨基酸序列。以下B7H3抗原未特殊说明的均指人B7H3。
1)人B7H3全长蛋白：B7H3(SEQ ID NO：1)：
注释：
双横线部分为信号肽(Signal peptide:1-28)；
划横线部分为B7H3胞外区(Extracellular domain：29-466)，其中29-139为Ig-样V-型1结构域，145-238为Ig-样C2-型1结构域；243-357为Ig-样V-型2结构域，363-456为Ig-样C2-型2结构域；
点划线部分为跨膜区部分(Transmembrane domain:467-487)；
斜体部分为胞内区(Cytoplasmic domain:488-534)。
2)鼠B7H3全长氨基酸序列(SEQ ID NO：2)
注释：
双横线部分为信号肽(Signal peptide:1-28)；
划横线部分为B7H3胞外区(Extracellular domain：29-248)，其中29-139为Ig-样V-型结构域，145-238为Ig-样C2-型结构域；
点划线部分为跨膜区部分(Transmembrane domain:249-269)；
斜体部分为胞内区(Cytoplasmic domain:270-316)。
3)筛选及检测用人B7H3抗原(SEQ ID NO：3)
为商业化产品(R&D cat#1949-B3-050/CF，简称2Ig-B7H3)，序列如下：
注释：划横线部分为B7H3胞外区；斜体部分为His-tag标记。
4)检测用人B7H3抗原(SEQ ID NO：4)
为商业化产品(SinoBiological cat#11188-H08H，简称4Ig-B7H3)，序列如下：
注释：划横线部分为B7H3胞外区；斜体部分为His-tag标记。
5)筛选及检测用鼠B7H3抗原(SEQ ID NO：5)
为商业化产品(R&D cat#1397-B3-050/CF)，序列如下：
注释：划横线部分为B7H3胞外区；斜体部分为His-tag标记。
实施例2.完全人源抗体的制备
2.1阳性序列的筛选
利用人PBMC、脾脏、淋巴结组织分离B细胞，并提取RNA，构建天然单链噬菌体抗体库(库容3.2×1010)。将构建的天然单链噬菌体文库经过包装形成噬菌体颗粒后，采用液相法进行淘筛，噬菌体与生物素化的B7H3液相结合，再采用链霉亲和素磁珠分离。为了获得可分别与人B7H3(R&D cat#1949-B3-050/CF)和鼠B7H3(R&D cat#1397-B3-050/CF)交叉结合的阳性序列，分别采用生物素化的人B7H3和生物素化的鼠B7H3进行交替淘筛，首轮采用2μg/ml生物素化的人B7H3进行淘筛，第二轮采用2μg/ml生物素化的鼠B7H3进行淘筛，第三轮采用0.5μg/ml生物素化的人B7H3进行淘筛，经三轮淘筛后，挑取500个单克隆包装成噬菌体，用于噬菌体ELISA测试。分别测试单克隆噬菌体与人B7H3(R&D cat#1949-B3-050/CF)和鼠B7H3(R&D cat#1397-B3-050/CF)的结合活性：ELISA板上分别包被1μg/ml人B7H3或鼠B7H3以及1％BSA，加入1:1封闭缓冲液稀释的噬菌体上清，最后用anti-M13HRP检测；将ELISA测试到的OD450值大于0.5，以及结合人和鼠B7H3的ELISA OD450值除以结合1％BSA的ELISA OD450值的两个比值均大于2.0的克隆进行测序，得到9个特异性序列。
2.2完整单克隆抗体的构建
噬菌体库筛选得到的9个特异性序列构建完整抗体后通过ELISA结合实验确定其中2个抗体结合力强，分别是h1702和h1703。对其完整单克隆抗体构建的过程如下：
根据测序得到的单链抗体序列，设计引物PCR搭建各单链抗体序列的VH/VK/VL基因片段。获得h1702和h1703的重轻链可变区。
>h1702重链可变区序列
SEQ ID NO：6
>h1702轻链可变区序列
SEQ ID NO：7
>h1703重链可变区序列
SEQ ID NO：8
>h1703轻链可变区序列
SEQ ID NO：9
注：顺序为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，序列中斜体为FR序列，下划线为CDR序列。
其中各抗体轻重链中CDR序列如表1所示。
表1各重链及轻链CDR区序列
*表1中所示CDR是按照IMGT规则定义的CDR。
抗体可变区再与恒定区基因(CH1-FC/CL)片段进行同源重组，构建完整抗体VH-CH1-FC/VK-CL/VL-CL。
构建的完整全长抗体h1702、h1703序列如下：
h1702：
h1702重链(IgG1)氨基酸序列：(SEQ ID NO：22)
QVQLVQSGGGVVQPGTSLRLSCAASGFIFSSSAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSARLYASFDYWGQGALVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
h1702轻链氨基酸序列：Lamada(SEQ ID NO：23)
QTVVTQEPSFSVSPGGTVTLTCGLSSGSVSTSHYPSWYQQTPGQAPRMLIYNTNTRSSGVPDRFSGSILGNKAALTITGAQADDESDYYCAIHVDRDIWVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
h1703：
h1703重链(IgG1)氨基酸序列：(SEQ ID NO：24)
QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRYTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGVGPVHALDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
h1703轻链氨基酸序列：Kappa(SEQ ID NO：25)
DIRLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTYLNWYQQKPGKAPILLINAVSGLQSGVPSRFSGSGSGTHFTLTITSLQPEDFATYYCQQSYSTPMWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC为进一步提高抗体的稳定性，对h1702的轻链序列进行氨基酸突变，具体突变为轻链(SEQ ID NO：23)N端第一个氨基酸残基Q替代为D，缺失突变C端第一个氨基酸残基S，以获得更加稳定和均一的单克隆抗体h1702-DS。
突变修饰后的h1702-DS的重链序列为SEQ ID NO：22，轻链氨基酸序列如下：(SEQID NO：26)。
DTVVTQEPSFSVSPGGTVTLTCGLSSGSVSTSHYPSWYQQTPGQAPRMLIYNTNTRSSGVPDRFSGSILGNKAALTITGAQADDESDYYCAIHVDRDIWVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTEC
2.3全人抗体的表达与纯化
分别表达抗体轻重链的质粒以1.5:1的比例转染HEK293E细胞，6天后收集表达上清，高速离心去除杂质，用Protein A柱进行纯化。用PBS冲洗柱子，至A280读数降至基线。用pH3.0-pH3.5的酸性洗脱液洗脱目的蛋白，用1M Tris-HCl,pH8.0-9.0中和。洗脱样品适当浓缩后，利用PBS平衡好的凝胶层析Superdex200(GE)进一步纯化，以去除聚体，收集单体峰，分装备用。
实施例3、人源化抗体的制备
3.1抗原的制备
编码带huFc标签的人B7-H3(h-B7H3-Fc)序列由Integrated DNA Technology(IDT)公司合成(以上B7-H3重组蛋白均由本公开设计模版序列)，分别克隆到pTT5载体上(Biovector)。重组的B7-H3蛋白在293T细胞表达后，通过所属领域的常规技术进行纯化。纯化的蛋白可用于小鼠免疫获得抗体。
h-B7H3-Fc的序列:
LEVQVPEDPVVALVGTDATLCCSFSPEPGFSLAQLNLIWQLTDTKQLVHSFAEGQDQGSAYANRTALFPDLLAQGNASLRLQRVRVADEGSFTCFVSIRDFGSAAVSLQVAAPYSKPSMTLEPNKDLRPGDTVTITCSSYQGYPEAEVFWQDGQGVPLTGNVTTSQMANEQGLFDVHSILRVVLGANGTYSCLVRNPVLQQDAHSSVTITPQRSPTGAVEVQVPEDPVVALVGTDATLRCSFSPEPGFSLAQLNLIWQLTDTKQLVHSFTEGRDQGSAYANRTALFPDLLAQGNASLRLQRVRVADEGSFTCFVSIRDFGSAAVSLQVAAPYSKPSMTLEPNKDLRPGDTVTITCSSYRGYPEAEVFWQDGQGVPLTGNVTTSQMANEQGLFDVHSVLRVVLGANGTYSCLVRNPVLQQDAHGSVTITGQPMTGSGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO:27
3.2鼠源抗体的制备
抗人B7H3单克隆抗体通过免疫小鼠产生。实验用Swiss Webster白小鼠，雌性，6周龄(Charles River公司)。饲养环境：SPF级。小鼠购进后，实验室环境饲养1周，12/12小时光/暗周期调节，温度20-25℃；湿度40-60％。免疫抗原为带Fc标签的人B7H3重组蛋白(huB7H3-Fc)。用Titermax(sigma Lot Num：T2684)为佐剂。抗原与佐剂(titermax)比例为1:1，抗原乳化后进行接种，时间为第0、21、35、49、63天。第0天腹膜内(IP)注射15μg+爪垫(footpad)25/只的乳化后抗原。21,35,49,63天腹膜内(IP)注射15μg+爪垫(footpad)15/只的乳化后抗原,在进行脾细胞融合前3天加强免疫，腹膜内(IP)注射15μg+爪垫(footpad)15/只的生理盐水配制的抗原溶液。于第42,56,70天进行血检，用ELISA及FACS方法检测小鼠血清，确定小鼠血清中的抗体滴度。在第5次免疫以后，选择血清中抗体滴度高并且滴度趋于平台的小鼠进行脾细胞融合，采用优化的电融合步骤将脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0细胞(CRL-8287TM)进行融合得到杂交瘤细胞。
融合后的杂交瘤细胞培养7-14天后，取培养基上清，使用B7-H3重组蛋白，ELISA实验对杂交瘤上清进行抗体筛选，得到的阳性抗体株进一步使用稳转表达B7-H3的CHO-S细胞，对比空白CHO-S细胞以排除非特异性结合抗体杂交瘤株，用流式分选方法进行筛选，从而选定两株结合重组蛋白且也结合细胞表达抗原的杂交瘤。收集对数生长期杂交瘤细胞，用Trizol(Invitrogen,15596-018)提取RNA并反转录(PrimeScriptTMReverseTranscriptase，Takara#2680A)。将反转录得到的cDNA采用mouse Ig-Primer Set(Novagen,TB326Rev.B 0503)进行PCR扩增后测序，最终得到鼠源抗体m1704的序列。
鼠单抗m1704的重链和轻链可变区序列如下：
m1704重链
EVQLVESGGGLVKSGGSLKLSCAASGFTFSRYGMSWVRQTPEKRLEWVAAISSNGGSIYYPDTVKGRLTISRDNAKNTLYLQMISLRSEDTALYFCTRHYLLFEMDYWGRGTSVTVSS
SEQ ID NO：28
m1704轻链
DIVMTQSQEFMSTTVGDRVYITCKASQNVNTAVAWYQQKPGQSPKLLIFSASNRYTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAAYFCQQYSSSLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO：29
其含有下列CDR序列：
名称 序列 编号
m1704-HCDR1 RYGMS SEQ ID NO：30
m1704-HCDR2 ISSGGGSIYYPDTVKG SEQ ID NO：31
m1704-HCDR3 TRHYLLFEMDY SEQ ID NO：32
m1704-LCDR1 KASQNVNTAVA SEQ ID NO：33
m1704-LCDR2 SASNRYT SEQ ID NO：34
m1704-LCDR3 QQYSSSLT SEQ ID NO：35
*本表中CDR是按照Kabat规则定义的CDR
将鼠抗的重链和轻链可变区分别克隆进入含人IgG1重链恒定区和κ轻链恒定区的pTT载体质粒(Biovector)，然后瞬转转染入HEK293细胞，得到了抗B7-H3的嵌合抗体，按常规技术方法纯化后备用。
3.3小鼠抗体的人源化
鼠源抗人B7-H3单克隆抗体人源化如本领域许多文献公示的方法进行。简言之，使用人恒定结构域替代亲本(鼠源抗体)恒定结构域，根据鼠源抗体和人抗体的同源性选择人种抗体序列，本公开将抗体m1704进行人源化。
在所获得的鼠源抗体VH/VL CDR典型结构的基础上，将重、轻链可变区序列与人源抗体种系数据库比较，获得同源性高的人种系模板。其中人类种系轻链框架区来自人κ轻链基因人种系轻链模板IGkV1-33，人类种系重链框架区来自人重链模版IGHV3-23
将鼠源抗体m1704的CDR区移植到选择好的相应人源化模板上，替换人源化可变区，再与IgG恒定区(优选重链为IgG1，轻链为κ)重组。然后，以鼠源抗体的三维结构为基础，对包埋残基、与CDR区有直接相互作用的残基，以及对VL和VH的构象有重要影响的残基进行回复突变，并对CDR区化学不稳定氨基酸残基优化，设计并检测了由如下人源化轻重链可变区序列组合而成的抗体。
h1704VH1(SEQ ID NO:36)：
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKGLEWVSAISSGGGSIYYPDTVKGRLTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRHYLLFEMDYWGQGTTVTVSS
h1704VH2(SEQ ID NO:37)：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKGLEWVAAISSGGGSIYYPDTVKGRLTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCTRHYLLFEMDYWGQGTTVTVSS
h1704VL1(SEQ ID NO:38)：
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASNRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDIATYFCQQYSSSLT FGQGTKLEIK
h1704VL2(SEQ ID NO:39)：
DIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIFSASNRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAAYFCQQYSSSLTFGGGTKLEIK
h1704VL1 h1704VL2
h1704VH1 h1704-1 h1704-3
h1704VH2 h1704-2 h1704-4
经表达测试和回复突变数量对比，选择出最终的人源化h1704-3抗体分子(使用VH1重链可变区和VL2轻链可变区)，其重链和轻链序列如SEQ ID NO:40和41所示。
h1704-3抗体重链序列：
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKGLEWVSAISSGGGSIYYPDTVKGRLTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRHYLLFEMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：40
h1704-3抗体轻链序列：
DIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIFSASNRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAAYFCQQYSSSLTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：41
实施例4c-Met人源化抗体：Ab-9、Ab-10和Ab-11
本申请中的c-Met人源化抗体Ab-9、Ab-10和Ab-11制备方法已在WO2016165580专 利文件公开。
WO2016165580的优先权文本为201510185602.3和201510300885.1，申请日为申请 日为2016年4月7日，申请号为PCT/CN2016/078699，WO2016165580专利文件及其优选权文本 中记载的Ab-9、Ab-10和Ab-11的抗原及抗体的制备、纯化、检测方法均可引入本公开。
Ab-10抗体重链序列：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLSNYGVHWVRQAPGKGLEWLAVIWSGGSTNYAAAFVSRLTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARNHDNPYNYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:42)
Ab-10抗体轻链序列：
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRADKSVSTSTYNYLHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLASGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRDLPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:43)
Ab-9人源化抗体：
重链：
QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLPNYGVHWVRQPPGKALEWLAVIWSGGSTNYAAAFVSRLRISKDTSKSQVVFTMNNMDPVDTATYYCARNHDNPYNYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:44)
轻链：
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRANKSVSTSTYNYLHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQHSRDLPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:45)
Ab-11人源化抗体：
重链：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTLPNYGVHWVRQAPGKGLEWLAVIWSGGSTNYAAAFVSRLTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARNHDNPYNYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:46)
轻链：
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRANKSVSTSTYNYLHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLASGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRDLPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:47)
根据以上各人源化抗体轻链和重链的基因序列合成DNA片段，插入到pcDNA3.1表达载体(Life Technologies Cat.No.V790-20)中。将表达载体和转染试剂PEI(Polysciences,Inc.Cat.No.23966)以1:2的比例转染HEK293细胞(Life TechnologiesCat.No.11625019)，并置于CO2孵育箱中孵育4-5天。表达的抗体通过离心回收后，进行抗体纯化，得到本公开的人源化抗体蛋白。
实施例5
(S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻吩-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-(2-氟苯基)丙酸
第一步
(E)-3-(4,5-二(1,3-二氧杂环戊烷-2-基)噻吩-2-基)丙烯酸乙酯5b
将氢化钠(39mg，含量60％，0.97mmol)加入5mL四氢呋喃中，氩气置换三次，冰水浴降温至0-5℃，滴加膦酰基乙酸乙酯(0.2mL，0.97mmol)，冰浴下搅拌30分钟，加入4,5-二(1,3-二氧杂环戊烷-2-基)噻吩-2-甲醛5a(200mg，0.78mmol，采用公知的方法“Journal ofthe American Chemical Society,2008,130,17568-17574”制备而得)的2mL四氢呋喃溶液，继续搅拌30分钟。加入10mL乙醚稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以展开剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物5b(244mg，产率：95.8％)。
MS m/z(ESI):327.4[M+1]
第二步
3-(4,5-二(1,3-二氧杂环戊烷-2-基)噻吩-2-基)丙酸乙酯5c
将5b(244mg，0.75mmol)溶于10mL的乙醇中，加入钯碳(48mg，含量10％)，氢气置换三次，室温搅拌反应5小时。反应液用硅藻土过滤，滤饼用乙醇淋洗，滤液浓缩，得到标题产物5c(239mg，产率：97.3％)。
MS m/z(ESI):329.4[M+1]
第三步
3-(4,5-二(1,3-二氧杂环戊烷-2-基)噻吩-2-基)丙酸5d
将5c(239mg，0.73mmol)溶于5mL四氢呋喃中，加入一水合氢氧化锂(61mg，1.46mmol)的1mL水溶液，室温搅拌反应6小时。加入10mL水，用乙酸乙酯(3mL×2)萃取，弃有机相，取水相，滴加1M盐酸至pH为4-5，用乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物5d(205mg，产率93.8％)。
MS m/z(ESI):301.4[M+1]
第四步
3-(4,5-二甲酰基噻吩-2-基)丙酸5e
将5d(8mg，0.03mmol)溶于0.8mL四氢呋喃和水(V:V＝1:1)混合溶剂中，加入盐酸(20μL，3M)，室温搅拌40分钟后补加盐酸(0.1mL，3M)，继续搅拌反应30分钟。加入5mL水，用乙酸乙酯(2mL×2)萃取，合并有机相，用水(5mL)和饱和氯化钠溶液(5mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品标题产物5e(6mg)，产品不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):213.3[M+1]
第五步
2,4-二甲氧基苄基(S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻吩-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-(2-氟苯基)丙酸酯5g
将粗品5e(5mg，23.56μmol)溶于3mL乙腈中，氩气置换三次，冰水浴降温至0-5℃，依次加入2,4-二甲氧基苄基(S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-二甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰胺)丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-(2-氟苯基)丙酸酯5f(17mg，18.85μmol，采用专利申请“WO2017144015”公开的方法制备而得)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(10mg，25.90μmol)和N,N-二异丙基乙胺(8μL，47.12μmol)，氩气置换三次，搅拌反应20分钟。加入10mL水，用乙酸乙酯(5mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物5g(9mg，产率：34.9％)。MS m/z(ESI):1124.6[M+18]
第六步
(S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻吩-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-(2-氟苯基)丙酸5
将5g(9mg，8.13μmol)溶于2mL三氟乙酸和二氯甲烷(V:V＝1:40)混合溶剂中，氩气置换三次，冰浴下搅拌反应5分钟。加入5mL二氯甲烷，依次用水(10mL×2)，饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物5(7.7mg，产率：98.9％)。
MS m/z(ESI):956.2[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.37(s,1H),10.30(s,1H),7.41(d,1H),7.30(d,1H),7.18-7.25(m,1H),6.91-7.15(m,4H),4.60-4.69(m,3H),4.42(dd,1H),4.08(d,1H),3.89(d,1H),3.78(s,1H),3.27-3.37(m,7H),3.13-3.20(m,2H),2.97-3.05(m,5H),2.71-2.77(m,1H),2.56-2.64(m,2H),2.32-2.36(m,1H),2.21-2.24(m,2H),2.00-2.04(m,1H),1.88(dd,2H),1.61-1.67(m,1H),1.49-1.54(m,2H),1.29-1.35(m,7H),1.11(d,4H),0.80-1.01(m,15H),0.70-0.76(m,1H).
实施例6
(S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻唑-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-(2-氟苯基)丙酸
第一步
4,5-双((苄氧基)甲基)-2-甲基噻唑6b
取20mL的N,N-二甲基甲酰胺，冰水浴冷却至0-5℃，加入氢化钠(1.5g，含量60％，37.7mmol)，氩气置换三次，逐滴滴加预制的(2-甲基噻唑-4,5-二基)二甲醇6a(2.0g，12.6mmol，采用公知的方法“Journal of the American Chemical Society,1950,72,5221-5224”制备而得)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液，加毕，在0-5℃下搅拌30分钟。逐滴滴加溴化苄(3.7mL，31.4mmol)，加毕，撤去冰水浴，室温条件下搅拌反应3小时。反应液冷却至0-5℃，缓慢加入水(20mL)淬灭。反应液用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL×3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以展开剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物6b(3.2g，产率：75％)。
MS m/z(ESI):340.1[M+1]
第二步
4,5-双((苄氧基)甲基)噻唑-2-甲醛6c
将6b(1.0g，2.95mmol)溶解于1,4-二氧六环(10mL)中，加入二氧化硒(1.3g，11.8mmol)，加毕，氩气置换三次，加热至110℃搅拌反应16小时。冷却至室温，硅藻土过滤，将滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以展开剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物6c(460mg，产率：44％)。
MS m/z(ESI):354.4[M+1]
第三步
(E)-3-(4,5-双(苄氧基)甲基)噻唑-2-基)丙烯酸乙酯6d
将膦酰基乙酸三乙酯(440mg,1.96mmol)溶解于四氢呋喃(8mL)中，冰水浴冷却至0-5℃，加入氢化钠(100mg，含量60％，2.50mmol)，加毕，氩气置换三次，在0-5℃下搅拌30分钟。逐滴滴加预制的6c(460mg，1.30mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液，加毕，撤去冰水浴，室温条件下搅拌反应1小时。反应液冷却至0-5℃，缓慢加入水(5mL)淬灭。反应液用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以展开剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物6d(501mg，产率：91％)。
MS m/z(ESI):424.5[M+1]
第四步
3-(4,5-双((苄氧基)甲基)噻唑-2-基)丙酸乙酯6e
将6d(1.19g，2.81mmol)溶解于15mL甲醇中，加入钯碳(600mg，含量10％)，氢气置换三次，常温下搅拌3小时。反应液经硅藻土过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，将滤液减压浓缩，得到标题产物6e(1.06g，产率：89％)。
MS m/z(ESI):426.1[M+1]
第五步
3-(4,5-双(羟甲基)噻唑-2-基)丙酸乙酯6f
将6e(500mg，1.17mmol)溶解于三氟乙酸(10mL)中，氩气置换三次，加热至80℃搅拌反应16小时。冷却至室温，反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以展开剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物6f(256mg，产率：89％)。
MS m/z(ESI):246.4[M+1]
第六步
3-(4,5-二甲酰基噻唑-2-基)丙酸乙酯6g
将乙二酰氯(525mg，4.14mmol)溶解于二氯甲烷(2.5mL)中，氩气置换三次，冷却至-75℃，缓慢滴加预制的二甲基亚砜(0.58mL,8.17mmol)的二氯甲烷(1.0mL)溶液，滴加时控制反应液温度不高于-60℃，加毕，-75℃搅拌反应30分钟。缓慢滴加预制的6f(100mg，408umol)的二氯甲烷溶液(1.0mL)，滴加时控制反应液温度不高于-60℃，加毕，-75℃搅拌反应2小时。缓慢滴加三乙胺(1.7mL，12.2mmol)，加毕，-75℃搅拌反应1小时，然后升温至0℃，继续搅拌1小时。缓慢加入水(5mL)淬灭，反应液用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以展开剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物6g(50mg，产率：51％)。
MS m/z(ESI):242.4[M+1]
第七步
3-(4,5-二(1,3-二氧杂环戊烷-2-基)噻唑-2-基)丙酸乙酯6h
将6g(30mg，124umol)溶解于甲苯(2mL)中，依次加入乙二醇(77mg，1.24mmol)，对甲苯磺酸(4mg，23.2umol)和硫酸镁(30mg，250umol)，加毕，氩气置换三次，加热至110℃搅拌反应16小时。反应液冷却至室温，过滤，加入5mL水，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(5mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物6h(26mg，产率：64％)。
MS m/z(ESI):330.0[M+1]
第八步
3-(4,5-二(1,3-二氧杂环戊烷-2-基)噻唑-2-基)丙酸6i
将6h(21mg，0.06mmol)溶于1mL四氢呋喃中，加入一水合氢氧化锂(5mg，0.13mmol)的0.2mL水溶液，室温搅拌反应1.5小时。加入2mL水，用乙酸乙酯(2mL×2)反萃。取水相，滴加0.5M盐酸至pH为4-5，用乙酸乙酯(3mL×4)萃取，饱和氯化钠溶液(6mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物6i(13mg，产率67.7％)。
MS m/z(ESI):302.4[M+1]
第九步
3-(4,5-二甲酰基噻唑-2-基)丙酸6j
将6i(11mg，0.04mmol)溶于0.6mL四氢呋喃中，加入盐酸(0.4mL，2M)，室温搅拌1.5小时后补加盐酸(0.1mL，2M)，继续搅拌反应2小时。用乙酸乙酯(1mL×8)萃取，用饱和氯化钠溶液(4mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到粗品标题产物6j(8.8mg)，产品不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):214.3[M+1]
第十步
2,4-二甲氧基苄基(S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻唑-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-(2-氟苯基)丙酸酯6k
将6j(8mg，36.58μmol)溶于3mL乙腈中，氩气置换三次，冰水浴降温至0-5℃，依次加入5f(20mg，21.91μmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(14mg，36.58μmol)和N,N-二异丙基乙胺(13μL，73.17μmol)，氩气置换三次，搅拌反应20分钟。加入6mL水，用乙酸乙酯(4mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物6k(15mg，产率：61.8％)。
MS m/z(ESI):1125.3[M+18]
第十一步
(S)-2-((2R,3R)-3-((1S,3S,5S)-2-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻唑-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-
氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-(2-氟苯基)丙酸6
将6k(6mg，6.27μmol)溶于0.2mL二氯甲烷中，加入0.4mL三氟乙酸和二氯甲烷(V:V＝1:65)混合溶剂，氩气置换三次，冰浴下搅拌反应40分钟。加入0.2mL二氯甲烷，依次用水(0.5mL×4)，饱和氯化钠溶液(0.5mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物6(6mg，产率：100％)。
MS m/z(ESI):957.9[M+1]
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.55(s,1H),10.19(s,1H),7.30-7.37(m,1H),7.12-7.23(m,1H),6.95-7.08(m,2H),6.86(d,1H),6.68(d,1H),4.54-4.73(m,3H),4.32-4.40(m,1H),4.06-4.14(m,1H),3.88(d,1H),3.79(s,1H),3.44(t,2H)3.25-3.36(m,6H),3.09-3.17(m,2H),2.94-3.06(m,8H),2.21-2.27(m,2H),1.97-2.05(m,2H),1.80(dd,1H),1.34-1.70(m,7H),1.08-1.16(m,3H),0.97(d,4H),0.80-0.92(m,15H),0.70-0.76(m,1H).
实施例7
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻吩-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯丙酸7
第一步
2,4-二甲氧基苄基(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻吩-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯丙酸酯7b
将5e(9mg，42.88μmol)溶于3mL乙腈中，氩气置换三次，冰水浴降温至0-5℃，依次加入2,4-二甲氧基苄基(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-二甲基-2-((S)-3-甲基-2-(甲氨基)丁酰胺)丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯丙酸酯7a(25mg，28.34μmol，采用专利申请“WO2005081711”公开的方法制备而得)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(16mg，42.89μmol)和N,N-二异丙基乙胺(20μL，116.22μmol)，氩气置换三次，搅拌反应40分钟。加入10mL水，用乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物7b(17mg，产率：56.7％)。
MS m/z(ESI):1094.3[M+18]。
第二步
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻吩-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯丙酸7
将7b(17mg，16.07μmol)溶于1mL三氟乙酸和二氯甲烷(V:V＝1:65)混合溶剂中，氩气置换三次，冰浴下搅拌反应10分钟。加入0.2mL二氯甲烷，依次用水(0.5mL×4)，饱和氯化钠溶液(0.5mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物7(10.5mg，产率：70.5％)。
MS m/z(ESI):927.2[M+1]，
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.37(s,1H),10.30(s,1H),7.41(d,1H),7.11-7.26(m,6H),6.85(d,1H),4.61-4.81(m,5H),4.02-4.11(m,2H),3.86-3.93(m,1H),3.84(d,1H),3.78(s,2H),3.70-3.73(m,1H),3.27-3.36(m,7H),3.08-3.14(m,2H),2.98-3.03(m,5H),2.72-2.78(m,2H),2.52-2.59(m,1H),2.36-2.46(m,2H),2.22-2.29(m,2H),1.96-2.03(m,2H),1.69-1.78(m,2H),1.17-1.22(m,2H),1.14(d,2H),0.95-1.00(m,4H),0.76-0.90(m,15H)。
实施例8
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻唑-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯丙酸8
第一步
2,4-二甲氧基苄基(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻唑-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯丙酸酯8a
将6j(8.4mg,39.4umol)溶于乙腈(2mL)中，氩气置换三次，冰水浴降温至0-5℃，依次加入7a(25mg，28.3umol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(15mg，39.4umol)和N,N-二异丙基乙胺(10mg，77.5umol)，加毕，氩气置换三次，常温搅拌1小时。加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠水溶液(5mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，用薄层层析以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物8a(7.1mg，产率：23％)。
MS m/z(ESI):1077.8[M+1]。
第二步
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(4,5-二甲酰基噻唑-2-基)-N-甲基丙酰胺)-3-甲基丁酰胺)-N,3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯丙酸8
将8a(7.1mg，6.6umol)溶于1mL三氟乙酸和二氯甲烷(V:V＝1:65)混合溶剂中，氩气置换三次，冰浴下搅拌反应20分钟。加入5mL二氯甲烷，依次用水(3mL×4)，饱和氯化钠溶液(2mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到标题产物8(7.0mg，产率：100％)。
MS m/z(ESI):928.0[M+1]，
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.55(s,1H),10.19(s,1H),7.27-7.10(m,5H),4.92-4.53(m,4H),4.25-3.93(m,3H),3.85-3.74(m,3H),3.51-3.22(m,11H),3.05(s,2H),3.01(s,2H),2.24(t,2H),2.06-1.95(m,4H),1.67-1.60(m,2H),1.39-1.32(m,6H),1.14(d,2H),1.03-0.95(m,5H),0.94-0.86(m,9H),0.85-0.76(m,7H)。
实施例9
ADC-1
将化合物5(0.20mg，0.21μmol)溶于0.1mL DMSO中，将其加至h1702-DS(10mg/mL，0.5mL，0.035μmol)的pH＝6.5PBS溶液中，于25℃下振荡反应18小时后，停止反应。将反应液通过30KDa超滤离心管进行换液纯化(洗脱相：pH＝5.5，10mM琥珀酸溶液)，在无菌条件下通过0.22μm滤器过滤后得标题产物ADC-1的琥珀酸缓冲液(7.97mg/mL，0.6mL)，于4℃冷冻储存。
Q-TOF LC/MS:特征峰：146582.77(MAb+0D)、147519.47(MAb+1D)、148458.64(MAb+2D)、149559.70(MAb+3D)、150346.89(MAb+4D)。
平均值：y1+y2＝1.42。
实施例10
ADC-2
将化合物6(0.41mg，0.428μmol)溶于0.1mL DMSO中，将其加至h1702-DS(10mg/mL，1mL，0.072μmol)pH＝6.5PBS溶液中，于25℃下振荡反应18小时后，停止反应。将反应液通过30KDa超滤离心管进行换液纯化(洗脱相：pH＝5.5，10mM琥珀酸溶液)，在无菌条件下通过0.22μm滤器过滤后得标题产物ADC-2的琥珀酸缓冲液(8.4mg/mL,1.2mL)，于4℃冷冻储存。
Q-TOF LC/MS:特征峰：146575.48(MAb+0D)、147506.37(MAb+1D)、148437.25(MAb+2D)、149375.37(MAb+3D)、150496.15(MAb+4D)、151412.11(MAb+5D)。
平均值：y1+y2＝2.99。
实施例11
ADC-3
将化合物7(0.40mg，0.432μmol)溶于0.1mL DMSO中，将其加至h1702-DS(10mg/mL，1mL，0.072μmol)pH＝6.5PBS溶液中，于25℃下振荡反应18小时后，停止反应。将反应液通过30KDa超滤离心管进行换液纯化(洗脱相：pH＝5.5，10mM琥珀酸溶液)，在无菌条件下通过0.22μm滤器过滤后得标题产物ADC-3的琥珀酸缓冲液(6.93mg/mL，1.6mL)，于4℃冷冻储存。
Q-TOF LC/MS:特征峰：146577.35(MAb+0D)、147481.58(MAb+1D)、148391.83(MAb+2D)、149308.08(MAb+3D)、150219.25(MAb+4D)、151120.54(MAb+5D)。
平均值：y1+y2＝1.92。
实施例12
ADC-4
将化合物8(0.27mg，0.291μmol)溶于0.1mL DMSO中，将其加至h1702-DS(10mg/mL，1mL，0.072μmol)pH＝6.5PBS溶液中，于25℃下振荡反应18小时后，停止反应。将反应液通过30KDa超滤离心管进行换液纯化(洗脱相：pH＝5.5，10mM琥珀酸溶液)，在无菌条件下通过0.22μm滤器过滤后得标题产物ADC-4的琥珀酸缓冲液(6.86mg/mL，1.5mL)，于4℃冷冻储存。
Q-TOF LC/MS:特征峰：146578.53(MAb+0D)、147485.86(MAb+1D)、148392.67(MAb+2D)、149311.26MAb+3D)。
平均值：y1+y2＝0.88。
实施例13
ADC-5
将化合物5(0.25mg，0.257μmol)溶于0.1mL DMSO中，将其加至Ab-10(9.46mg/mL，1.0mL，0.064μmol，采用专利申请“WO2016165580”公开的方法制备而得)的pH＝6.5PBS溶液中，于25℃下振荡反应18小时后，停止反应。将反应液通过30KDa超滤离心管进行换液纯化(洗脱相：pH＝5.5，10mM琥珀酸溶液)，在无菌条件下通过0.22μm滤器过滤后得标题产物ADC-5的琥珀酸缓冲液(8.27mg/mL，1.1mL)，于4℃冷冻储存。
Q-TOF LC/MS:脱糖后特征峰：145240(MAb+0D)、146178(MAb+1D)、147117(MAb+2D)、148055(MAb+3D)、148989(MAb+4D)、149929(MAb+5D)。
平均值：y1+y2＝2.01。
实施例14
ADC-6
将化合物6(0.37mg，0.386μmol)溶于0.1mL DMSO中，将其加至Ab-10(9.46mg/mL，1.0mL，0.064μmol)pH＝6.5PBS溶液中，于25℃下振荡反应18小时后，停止反应。将反应液通过30KDa超滤离心管进行换液纯化(洗脱相：pH＝5.5，10mM琥珀酸溶液)，在无菌条件下通过0.22μm滤器过滤后得标题产物ADC-6的琥珀酸缓冲液(8.46mg/mL，1.1mL)，于4℃冷冻储存。
Q-TOF LC/MS:脱糖后特征峰：145239(MAb+0D)、146177(MAb+1D)、147117(MAb+2D)、148058(MAb+3D)。
平均值：y1+y2＝1.20。
实施例15
ADC-7
将化合物7(0.36mg，0.386μmol)溶于0.1mL DMSO中，将其加至Ab-10(9.46mg/mL，1.0mL，0.064μmol)pH＝6.5PBS溶液中，于25℃下振荡反应18小时后，停止反应。将反应液通过30KDa超滤离心管进行换液纯化(洗脱相：pH＝5.5，10mM琥珀酸溶液)，在无菌条件下通过0.22μm滤器过滤后得标题产物ADC-7的琥珀酸缓冲液(8.96mg/mL，1.1mL)，于4℃冷冻储存。
Q-TOF LC/MS:脱糖后特征峰：145261(MAb+0D)、146147(MAb+1D)、147056(MAb+2D)、147964(MAb+3D)、148872(MAb+4D)、149781(MAb+5D)、150708(MAb+6D)。
平均值：y1+y2＝2.93。
实施例16
ADC-8
将化合物8(0.36mg，0.386μmol)溶于0.1mL DMSO中，将其加至Ab-10(9.46mg/mL，1.0mL，0.064μmol)pH＝6.5PBS溶液中，于25℃下振荡反应18小时后，停止反应。将反应液通过30KDa超滤离心管进行换液纯化(洗脱相：pH＝5.5，10mM琥珀酸溶液)，在无菌条件下通过0.22μm滤器过滤后得标题产物ADC-8的琥珀酸缓冲液(8.48mg/mL，1.1mL)，于4℃冷冻储存。
Q-TOF LC/MS:脱糖后特征峰：145238(MAb+0D)、146146(MAb+1D)、147056(MAb+2D)、147965(MAb+3D)。
平均值：y1+y2＝0.95。
生物学评价
测试例1：B7H3-ADC：细胞增殖实验
本实验通过检测细胞内ATP含量，根据IC50大小评价B7H3-ADC对U87MG细胞增殖的抑制效果。
U87MG细胞(中科院细胞库，Catalog#TCHu138)培养在含10％FBS的EMEM培养基中，一周传代2～3次，传代比例1:2或1:5。传代时，吸掉培养基，用5ml 0.25％的胰酶冲洗细胞层，然后吸掉胰酶，将细胞放在培养箱中消化3～5分钟，加入新鲜培养基重悬细胞。在96孔细胞培养板中加入180μL的细胞悬液，密度为0.56×104细胞/ml，培养基为10％FBS的DMEM，96孔板外围只加入200μl 10％FBS的DMEM培养基。将培养板在培养箱培养24小时(37℃，5％CO2)。
将待测样品用PBS稀释成5μM，并以3倍依次稀释成10个浓度，设置成空白和对照的孔。取20μl配制成梯度浓度的待测样品溶液加入到细胞培养板中。将培养板在培养箱孵育6天(37℃，5％CO2)。在96孔细胞培养板中，每孔加入90μl CellTiter-Glo试剂，室温避光放置5-10min，在Victor3中读取化学发光信号值，数据使用GraphPad软件处理。测得的IC50值见表2。
表2.不同ADC在U87MG细胞上的增殖实验结果
样品 IC<sub>50</sub>(nM) 最大抑制(％)
Human IgG No -2
ADC-1 2.01 90
ADC-2 1.89 90
ADC-3 0.68 93
ADC-4 3.42 83
结论：本公开的ADC-1、ADC-2、ADC-3和ADC-4在U87MG细胞上具有很好的杀伤作用。
测试例2：cMET-ADC：细胞增殖实验
本实验通过检测细胞内ATP含量，根据IC50大小评价cMET-ADC对MKN45细胞增殖的抑制效果。
MKN45细胞(南京科佰生物科技有限公司，Catalog#CBP60488)培养在含10％FBS的RPMI1640培养基中，一周传代2～3次，传代比例1:3或1:5。传代时，吸掉培养基，用5ml0.25％的胰酶冲洗细胞层，然后吸掉胰酶，将细胞放在培养箱中消化3～5分钟，加入新鲜培养基重悬细胞。在96孔细胞培养板中加入100μL的细胞悬液，密度为5×104细胞/ml，培养基为10％FBS的RPMI1640，96孔板外围只加入100μl 10％FBS的RPMI1640培养基。将培养板在培养箱培养24小时(37℃，5％CO2)。
将待测样品用PBS稀释成666.67nM，并以3倍依次稀释成10个浓度，设置成空白和对照的孔。取出细胞培养板，吸掉细胞培养基后，加入90μl含2％FBS的RPMI1640培养基。取10μl配制成梯度浓度的待测样品溶液加入到细胞培养板中。将培养板在培养箱孵育3天(37℃，5％CO2)。在96孔细胞培养板中，每孔加入50μl CellTiter-Glo试剂，室温避光放置5-10min，在Victor3中读取化学发光信号值，数据使用GraphPad软件处理。测得的IC50值见表3。
表3.不同ADC在MKN45细胞上的增殖实验结果
样品 IC<sub>50</sub>(nM) 最大抑制(％)
Human IgG No 14
ADC-5 0.26 62
ADC-6 0.32 58
ADC-7 0.37 64
ADC-8 0.33 58
结论：本公开的ADC-5、ADC-6、ADC-7和ADC-8在MKN45细胞上具有很好的杀伤作用。
序列表
<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司
上海恒瑞医药有限公司
<120> 双醛连接臂的配体-药物偶联物、其制备方法及其应用
<160> 47
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 534
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<223> 人B7H3全长蛋白
<400> 1
Met Leu Arg Arg Arg Gly Ser Pro Gly Met Gly Val His Val Gly Ala
1 5 10 15
Ala Leu Gly Ala Leu Trp Phe Cys Leu Thr Gly Ala Leu Glu Val Gln
20 25 30
Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr Asp Ala Thr Leu
35 40 45
Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu Ala Gln Leu Asn
50 55 60
Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val His Ser Phe Ala
65 70 75 80
Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg Thr Ala Leu Phe
85 90 95
Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg Leu Gln Arg Val
100 105 110
Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val Ser Ile Arg Asp
115 120 125
Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala Pro Tyr Ser Lys
130 135 140
Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg Pro Gly Asp Thr
145 150 155 160
Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Gln Gly Tyr Pro Glu Ala Glu Val
165 170 175
Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly Asn Val Thr Thr
180 185 190
Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val His Ser Ile Leu
195 200 205
Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn
210 215 220
Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Ser Ser Val Thr Ile Thr Pro Gln
225 230 235 240
Arg Ser Pro Thr Gly Ala Val Glu Val Gln Val Pro Glu Asp Pro Val
245 250 255
Val Ala Leu Val Gly Thr Asp Ala Thr Leu Arg Cys Ser Phe Ser Pro
260 265 270
Glu Pro Gly Phe Ser Leu Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr
275 280 285
Asp Thr Lys Gln Leu Val His Ser Phe Thr Glu Gly Arg Asp Gln Gly
290 295 300
Ser Ala Tyr Ala Asn Arg Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Ala Gln
305 310 315 320
Gly Asn Ala Ser Leu Arg Leu Gln Arg Val Arg Val Ala Asp Glu Gly
325 330 335
Ser Phe Thr Cys Phe Val Ser Ile Arg Asp Phe Gly Ser Ala Ala Val
340 345 350
Ser Leu Gln Val Ala Ala Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu
355 360 365
Pro Asn Lys Asp Leu Arg Pro Gly Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Ser
370 375 380
Ser Tyr Arg Gly Tyr Pro Glu Ala Glu Val Phe Trp Gln Asp Gly Gln
385 390 395 400
Gly Val Pro Leu Thr Gly Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu
405 410 415
Gln Gly Leu Phe Asp Val His Ser Val Leu Arg Val Val Leu Gly Ala
420 425 430
Asn Gly Thr Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp
435 440 445
Ala His Gly Ser Val Thr Ile Thr Gly Gln Pro Met Thr Phe Pro Pro
450 455 460
Glu Ala Leu Trp Val Thr Val Gly Leu Ser Val Cys Leu Ile Ala Leu
465 470 475 480
Leu Val Ala Leu Ala Phe Val Cys Trp Arg Lys Ile Lys Gln Ser Cys
485 490 495
Glu Glu Glu Asn Ala Gly Ala Glu Asp Gln Asp Gly Glu Gly Glu Gly
500 505 510
Ser Lys Thr Ala Leu Gln Pro Leu Lys His Ser Asp Ser Lys Glu Asp
515 520 525
Asp Gly Gln Glu Ile Ala
530
<210> 2
<211> 316
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<223> 鼠B7H3全长氨基酸序列
<400> 2
Met Leu Arg Gly Trp Gly Gly Pro Ser Val Gly Val Cys Val Arg Thr
1 5 10 15
Ala Leu Gly Val Leu Cys Leu Cys Leu Thr Gly Ala Val Glu Val Gln
20 25 30
Val Ser Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Asp Thr Asp Ala Thr Leu
35 40 45
Arg Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu Ala Gln Leu Asn
50 55 60
Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val His Ser Phe Thr
65 70 75 80
Glu Gly Arg Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ser Asn Arg Thr Ala Leu Phe
85 90 95
Pro Asp Leu Leu Val Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg Leu Gln Arg Val
100 105 110
Arg Val Thr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Phe Val Ser Ile Gln Asp
115 120 125
Phe Asp Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala Pro Tyr Ser Lys
130 135 140
Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg Pro Gly Asn Met
145 150 155 160
Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Gln Gly Tyr Pro Glu Ala Glu Val
165 170 175
Phe Trp Lys Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly Asn Val Thr Thr
180 185 190
Ser Gln Met Ala Asn Glu Arg Gly Leu Phe Asp Val His Ser Val Leu
195 200 205
Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn
210 215 220
Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Gly Ser Val Thr Ile Thr Gly Gln
225 230 235 240
Pro Leu Thr Phe Pro Pro Glu Ala Leu Trp Val Thr Val Gly Leu Ser
245 250 255
Val Cys Leu Val Val Leu Leu Val Ala Leu Ala Phe Val Cys Trp Arg
260 265 270
Lys Ile Lys Gln Ser Cys Glu Glu Glu Asn Ala Gly Ala Glu Asp Gln
275 280 285
Asp Gly Asp Gly Glu Gly Ser Lys Thr Ala Leu Arg Pro Leu Lys Pro
290 295 300
Ser Glu Asn Lys Glu Asp Asp Gly Gln Glu Ile Ala
305 310 315
<210> 3
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<223> 筛选及检测用人B7H3抗原
<400> 3
Leu Glu Val Gln Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ala Thr Leu Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val
35 40 45
His Ser Phe Ala Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg
50 55 60
Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Leu Gln Arg Val Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val
85 90 95
Ser Ile Arg Asp Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala
100 105 110
Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg
115 120 125
Pro Gly Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Gln Gly Tyr Pro
130 135 140
Glu Ala Glu Val Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly
145 150 155 160
Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val
165 170 175
His Ser Ile Leu Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Ser Ser Val Thr
195 200 205
Ile Thr Pro Gln Arg Ser Pro Thr Gly His His His His His His
210 215 220
<210> 4
<211> 439
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<223> 检测用人B7H3抗原
<400> 4
Leu Glu Val Gln Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ala Thr Leu Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val
35 40 45
His Ser Phe Ala Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg
50 55 60
Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Leu Gln Arg Val Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val
85 90 95
Ser Ile Arg Asp Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala
100 105 110
Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg
115 120 125
Pro Gly Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Gln Gly Tyr Pro
130 135 140
Glu Ala Glu Val Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly
145 150 155 160
Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val
165 170 175
His Ser Ile Leu Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Ser Ser Val Thr
195 200 205
Ile Thr Pro Gln Arg Ser Pro Thr Gly Ala Val Glu Val Gln Val Pro
210 215 220
Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr Asp Ala Thr Leu Arg Cys
225 230 235 240
Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu Ala Gln Leu Asn Leu Ile
245 250 255
Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val His Ser Phe Thr Glu Gly
260 265 270
Arg Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg Thr Ala Leu Phe Pro Asp
275 280 285
Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg Leu Gln Arg Val Arg Val
290 295 300
Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val Ser Ile Arg Asp Phe Gly
305 310 315 320
Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala Pro Tyr Ser Lys Pro Ser
325 330 335
Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg Pro Gly Asp Thr Val Thr
340 345 350
Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Arg Gly Tyr Pro Glu Ala Glu Val Phe Trp
355 360 365
Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly Asn Val Thr Thr Ser Gln
370 375 380
Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val His Ser Val Leu Arg Val
385 390 395 400
Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn Pro Val
405 410 415
Leu Gln Gln Asp Ala His Gly Ser Val Thr Ile Thr Gly Gln Pro Met
420 425 430
Thr His His His His His His
435
<210> 5
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<223> 筛选及检测用鼠B7H3抗原
<400> 5
Val Glu Val Gln Val Ser Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Asp Thr
1 5 10 15
Asp Ala Thr Leu Arg Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val
35 40 45
His Ser Phe Thr Glu Gly Arg Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ser Asn Arg
50 55 60
Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Val Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Leu Gln Arg Val Arg Val Thr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Phe Val
85 90 95
Ser Ile Gln Asp Phe Asp Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala
100 105 110
Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg
115 120 125
Pro Gly Asn Met Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Gln Gly Tyr Pro
130 135 140
Glu Ala Glu Val Phe Trp Lys Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly
145 150 155 160
Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu Arg Gly Leu Phe Asp Val
165 170 175
His Ser Val Leu Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Gly Ser Val Thr
195 200 205
Ile Thr Gly Gln Pro Leu Thr Phe His His His His His His
210 215 220
<210> 6
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1702重链可变区序列
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ala Arg Leu Tyr Ala Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 7
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1702轻链可变区序列
<400> 7
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Ser Ser Gly Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
His Tyr Pro Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Met
35 40 45
Leu Ile Tyr Asn Thr Asn Thr Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Ile His Val Asp Arg
85 90 95
Asp Ile Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 8
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1703重链可变区序列
<400> 8
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Tyr Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Val Gly Pro Val His Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 9
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1703轻链可变区序列
<400> 9
Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Ile Leu Leu Ile
35 40 45
Asn Ala Val Ser Gly Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Met
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1702 HCDR1
<400> 10
Gly Phe Ile Phe Ser Ser Ser Ala
1 5
<210> 11
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1702 HCDR2
<400> 11
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1702 HCDR3
<400> 12
Ala Arg Ser Ala Arg Leu Tyr Ala Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1702 LCDR1
<400> 13
Ser Gly Ser Val Ser Thr Ser His Tyr
1 5
<210> 14
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1702 LCDR2
<400> 14
Asn Thr Asn
1
<210> 15
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1702 LCDR3
<400> 15
Ala Ile His Val Asp Arg Asp Ile Trp Val
1 5 10
<210> 16
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1703 HCDR1
<400> 16
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 17
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
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<400> 17
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1703 HCDR3
<400> 18
Ala Lys Gly Val Gly Pro Val His Ala Leu Asp Val
1 5 10
<210> 19
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1703 LCDR1
<400> 19
Gln Ser Ile Ser Thr Tyr
1 5
<210> 20
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1703 LCDR2
<400> 20
Ala Val Ser
1
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1703 LCDR3
<400> 21
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Met Trp Thr
1 5 10
<210> 22
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> h1702重链（IgG1）氨基酸序列
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ala Arg Leu Tyr Ala Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ala Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 23
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> h1702轻链氨基酸序列
<400> 23
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Ser Ser Gly Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
His Tyr Pro Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Met
35 40 45
Leu Ile Tyr Asn Thr Asn Thr Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Ile His Val Asp Arg
85 90 95
Asp Ile Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 24
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> h1703重链（IgG1）氨基酸序列
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Tyr Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Val Gly Pro Val His Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 25
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> h1703轻链氨基酸序列
<400> 25
Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Ile Leu Leu Ile
35 40 45
Asn Ala Val Ser Gly Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Met
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 26
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> h1702-DS的重链序列
<400> 26
Asp Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Ser Ser Gly Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
His Tyr Pro Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Met
35 40 45
Leu Ile Tyr Asn Thr Asn Thr Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ala Ile His Val Asp Arg
85 90 95
Asp Ile Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys
210 215
<210> 27
<211> 666
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<223> h-B7H3-Fc的序列
<400> 27
Leu Glu Val Gln Val Pro Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr
1 5 10 15
Asp Ala Thr Leu Cys Cys Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu
20 25 30
Ala Gln Leu Asn Leu Ile Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val
35 40 45
His Ser Phe Ala Glu Gly Gln Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg
50 55 60
Thr Ala Leu Phe Pro Asp Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg
65 70 75 80
Leu Gln Arg Val Arg Val Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val
85 90 95
Ser Ile Arg Asp Phe Gly Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala
100 105 110
Pro Tyr Ser Lys Pro Ser Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg
115 120 125
Pro Gly Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Gln Gly Tyr Pro
130 135 140
Glu Ala Glu Val Phe Trp Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly
145 150 155 160
Asn Val Thr Thr Ser Gln Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val
165 170 175
His Ser Ile Leu Arg Val Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Arg Asn Pro Val Leu Gln Gln Asp Ala His Ser Ser Val Thr
195 200 205
Ile Thr Pro Gln Arg Ser Pro Thr Gly Ala Val Glu Val Gln Val Pro
210 215 220
Glu Asp Pro Val Val Ala Leu Val Gly Thr Asp Ala Thr Leu Arg Cys
225 230 235 240
Ser Phe Ser Pro Glu Pro Gly Phe Ser Leu Ala Gln Leu Asn Leu Ile
245 250 255
Trp Gln Leu Thr Asp Thr Lys Gln Leu Val His Ser Phe Thr Glu Gly
260 265 270
Arg Asp Gln Gly Ser Ala Tyr Ala Asn Arg Thr Ala Leu Phe Pro Asp
275 280 285
Leu Leu Ala Gln Gly Asn Ala Ser Leu Arg Leu Gln Arg Val Arg Val
290 295 300
Ala Asp Glu Gly Ser Phe Thr Cys Phe Val Ser Ile Arg Asp Phe Gly
305 310 315 320
Ser Ala Ala Val Ser Leu Gln Val Ala Ala Pro Tyr Ser Lys Pro Ser
325 330 335
Met Thr Leu Glu Pro Asn Lys Asp Leu Arg Pro Gly Asp Thr Val Thr
340 345 350
Ile Thr Cys Ser Ser Tyr Arg Gly Tyr Pro Glu Ala Glu Val Phe Trp
355 360 365
Gln Asp Gly Gln Gly Val Pro Leu Thr Gly Asn Val Thr Thr Ser Gln
370 375 380
Met Ala Asn Glu Gln Gly Leu Phe Asp Val His Ser Val Leu Arg Val
385 390 395 400
Val Leu Gly Ala Asn Gly Thr Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn Pro Val
405 410 415
Leu Gln Gln Asp Ala His Gly Ser Val Thr Ile Thr Gly Gln Pro Met
420 425 430
Thr Gly Ser Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
435 440 445
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
450 455 460
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
465 470 475 480
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
485 490 495
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
500 505 510
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
515 520 525
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
530 535 540
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
545 550 555 560
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
565 570 575
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
580 585 590
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
595 600 605
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
610 615 620
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
625 630 635 640
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
645 650 655
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
660 665
<210> 28
<211> 118
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> DOMAIN
<223> m1704 重链可变区
<400> 28
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Ser Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ile Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg His Tyr Leu Leu Phe Glu Met Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 29
<211> 106
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> DOMAIN
<223> m1704 轻链可变区
<400> 29
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Glu Phe Met Ser Thr Thr Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Tyr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Ala Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Ser Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 30
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> DOMAIN
<223> 1704-HCDR1
<400> 30
Arg Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 31
<211> 16
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> DOMAIN
<223> 1704-HCDR2
<400> 31
Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 32
Thr Arg His Tyr Leu Leu Phe Glu Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 33
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 33
Lys Ala Ser Gln Asn Val Asn Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 34
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> DOMAIN
<223> 1704-LCDR2
<400> 34
Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr
1 5
<210> 35
<211> 8
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> DOMAIN
<223> 1704-LCDR3
<400> 35
Gln Gln Tyr Ser Ser Ser Leu Thr
1 5
<210> 36
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1704VH1
<400> 36
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg His Tyr Leu Leu Phe Glu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 37
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1704VH2
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg His Tyr Leu Leu Phe Glu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 38
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1704VL1
<400> 38
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Ser Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 39
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> h1704VL2
<400> 39
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Ala Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Ser Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 40
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> h1704-3抗体重链序列
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg His Tyr Leu Leu Phe Glu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 41
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> h1704-3抗体轻链序列
<400> 41
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Ala Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Ser Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 42
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> Ab-10(HR2042)抗体重链序列
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Val Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Ala Ala Phe Val
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asn His Asp Asn Pro Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val
210 215 220
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 43
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> Ab-10(HR2042)抗体轻链序列
<400> 43
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Asp Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Thr Tyr Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 44
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> Ab-9人源化抗体重链序列
<400> 44
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Pro Asn Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Val Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Ala Ala Phe Val
50 55 60
Ser Arg Leu Arg Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Phe
65 70 75 80
Thr Met Asn Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asn His Asp Asn Pro Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val
210 215 220
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 45
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> Ab-9人源化抗体轻链序列
<400> 45
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asn Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Thr Tyr Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 46
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> Ab-11人源化抗体重链序列
<400> 46
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Pro Asn Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Val Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Ala Ala Phe Val
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asn His Asp Asn Pro Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val
210 215 220
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 47
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> CHAIN
<223> Ab-11人源化抗体轻链序列
<400> 47
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Asn Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Thr Tyr Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215

Claims (37)

1.一种配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其特征在于所述的配体-药物偶联物具有以下结构的连接单元L：
环A为杂芳基；
R1选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
n为0、1、2或3。
2.根据权利要1所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的连接单元L，其为具有以下结构的连接单元L0：
W选自共价键、亚烷基或杂亚烷基，其中所述的杂亚烷基含有一个或多个选自N、O或S的杂原子，且所述亚烷基基或杂亚烷基任选被选自卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或更多个取代基所取代，任选所述两个独立出现的取代基与其穿插原子一起形成环；
J选自共价键、-CO-、-NH-、-S(O)m-、-CONR0-、-OCO-、-NR0S(O)m-、-OCONR0-或-NR0C(S)NR0-；
R0选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
m为0、1或2；
环A、R1和n如权利要求1中所定义。
3.根据权利要求1或2所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的连接单元L，其为具有以下结构的L1或L2：
G1为N或CR1；
G2选自NR1、O或S；
R1、W和J如权利要求2中所定义。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的连接单元L，其为具有以下结构的L3或L4：
其中：
s为1至6的整数；
G1如权利要求3中所定义。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的连接单元L，其选自具有以下结构的L1-1、L1-2、L2-1或L2-2：
6.根据权利要2所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其为具有以下结构的通式(Pc-L0-Dr)所示：
其中：
Pc为配体；
Dr为药物；
y为1～10，优选为1～4；
环A、R1、W、J和n如权利要求2中所定义。
7.根据权利要求3所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其为通式(Pc-L1-Dr)或通式(Pc-L2-Dr)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
Pc为配体；
Dr为药物；
y为1～10，优选为1～4；
G1、G2、W和J如权利要求3中所定义。
8.根据权利要求4所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其为通式(Pc-L3-Dr)或通式(Pc-L4-Dr)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
Pc为配体；
Dr为药物；
y为1～10，优选为1～4；
G1、W和J如权利要求4中所定义。
9.一种通式(IM)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
环A为杂芳基；
R1选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
Rw选自Pc、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
W选自共价键、亚烷基或杂亚烷基，其中所述的杂亚烷基含有一个或多个选自N、O或S的杂原子，且所述亚烷基基或杂亚烷基任选被选自卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或更多个取代基所取代，任选所述两个独立出现的取代基与其穿插原子一起形成环；
J选自共价键、-CO-、-NH-、-S(O)m-、-CONR0-、-OCO-、-NR0S(O)m-、-OCONR0-或-NR0C(S)NR0-；
R0选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
M选自氢原子、Dr、聚乙二醇、肽、糖、荧光探针、DNA或RNA，优选为Dr；
Dr为药物；
Pc为配体；
m为0、1或2；且
n为0、1、2或3。
10.一种通式(IA)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
环A为杂芳基；
R1选自氢原子、卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
W选自共价键、亚烷基或杂亚烷基，其中所述的杂亚烷基含有一个或多个选自N、O或S的杂原子，且所述亚烷基基或杂亚烷基任选被选自卤素、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、巯基、氨基、氰基、硝基、酰胺基、羧酸酯基、磷酸酯基、硫酸酯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或更多个取代基所取代，任选所述两个独立出现的取代基与其穿插原子一起形成环；
J选自共价键、-CO-、-NH-、-S(O)m-、-CONR0-、-OCO-、-NR0S(O)m-、-OCONR0-或-NR0C(S)NR0-；
R0选自氢原子、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
M选自氢原子、Dr、聚乙二醇、肽、糖、荧光探针、DNA或RNA，优选为Dr；
Dr为药物；
m为0、1或2；且
n为0、1、2或3。
11.根据权利要求10所述的通式(IA)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其为通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
Dr为药物；
环A、R1、W、J和n如权利要求10中所定义。
12.根据权利要求10或11中所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其为通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
G1为N或CR1；
G2选自NR1、O或S；
Dr为药物；
W、J和R1如权利要求10中所定义。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的通式(IA)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其为通式(III)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中：
s为1至6的整数；
Dr为药物；
G1如权利要求12中所定义。
14.根据权利要求1、2或6中任一项所述的配体-药物偶联物，或根据权利要求9、10或11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中环A为5或6元杂芳基，所述杂芳基含有1至3个选自N、O或S的杂原子，优选为噻吩基、噻唑基、吡唑基、咪唑基、吡啶基或嘧啶基。
15.根据权利要求2、3、6或7中任一项所述的配体-药物偶联物，或根据权利要求9至12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中W为共价键或亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、氧代基和酰胺基中的一个或更多个取代基所取代，优选为-(CH2)s-，s为1至6的整数。
16.根据权利要求2、3、6或7中任一项所述的配体-药物偶联物，或根据权利要求9至12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中J选自共价键、-CO-或-NH-，优选为-CO-。
17.根据权利要求6、7或8中任一项所述的配体-药物偶联物，或根据权利要求9至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的Dr选自毒性药物、化疗药物、抗生素和放射性同位素。
18.根据权利要求6、7或8中任一项所述的配体-药物偶联物，或根据权利要求9至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的Dr为毒性药物，所述毒性药物选自美登素类、卡利奇霉素、紫杉烷类、长春新碱、秋水仙碱、尾海兔素、澳瑞他汀、喜树碱、吡咯并苯并二氮杂类化合物或其衍生物。
19.根据权利要求6、7或8中任一项所述的配体-药物偶联物，或根据权利要求9至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的Dr选自DE和DF：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，其中：
R2、R6或R10相同或不同，且各自独立地为氢原子或烷基；
R3或R7相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基和芳基，其中所述的环烷基、杂环基和芳基任选被一个或多个烷基取代；
R4选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基和芳基，其中所述的环烷基、杂环基和芳基任选被一个或更多个烷基取代；
R5选自氢原子或烷基；
或者R4和R5一起形成环烷基，其中所述的环烷基任选被选自卤素、烷基或环烷基中的一个或更多个取代基取代；
R8和R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、烷氧基、羟基、环烷基或环烷氧基；
R11选自-C(R8)2-C(R8)2-芳基、-C(R8)2-C(R8)2-环烷基或-C(R8)2-C(R8)2-杂环基；
R12选自芳基或杂环基；
Z选自O、S、NH和NR16；
当Z选自S、NH或NR16时，R13选自氢原子、烷基、杂环基、芳基、-(R17O)t-R18或-(R17O)t-CH(R18)2；当Z为O时，R13选自氢原子、烷基、杂环基、芳基、-(R17O)t-R18、-(R17O)t-CH(R18)2和羧基保护基，其中所述的羧基保护基优选为2,4-二甲氧苄基或对甲氧苄基；
Ra至Rd相同或不同，且独立地选自氢原子、卤素、烯基、烷基和环烷基；
或者Ra至Rd之中的任意两个形成环烷基，余下的两个基团任选选自氢原子、烷基和环烷基；
R14和R15相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基和环烷基；
R16为烷基；
R17为亚烷基；
R18为氢原子或烷基；
t为1至10的整数。
20.根据权利要求19所述的Dr，其选自：
21.根据权利要求10至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其选自：
22.根据权利要求6、7或8中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述Pc为抗体或其抗原结合片段，所述抗体选自嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体。
23.根据权利要求22所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段可与B7-H3、c-Met、HER2(ErbB2)、HER3(ErbB3)、HER4(ErbB4)、CD20、CD22、CD30、CD33、CD44、CD56、CD105、Lewis Y、VEGFR和GPNMB中一个或更多个抗原结合。
24.根据权利要求23所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段选自Enoblituzumab(B7H3)、Emibetuzumab(c-Met)、Trastuzumab(HER2)、Inotuzumab(CD22)、Pinatuzumab(CD22)、Brentuximab(CD30)、Gemtuzumab(CD33)、Bivatuzumab(CD44)、Lorvotuzumab(CD56)、cBR96(Lewis Y)、Glematumamab(GPNMB)和Pertuzumab。
25.根据权利要求22所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段为能够结合B7-H3的抗体或其抗原结合片段，所述B7-H3抗体或其抗原结合片段选自(a)至(c)中任一种所示的CDR区：
(a)抗体重链可变区HCDR区序列：如SEQ ID NO：10、11和12氨基酸序列所示；和抗体轻链可变区LCDR区序列：如SEQ ID NO：13、14和15氨基酸序列所示；
(b)抗体重链可变区HCDR区序列：如SEQ ID NO：16、17和18氨基酸序列所示；和抗体轻链可变区LCDR区序列：如SEQ ID NO：19、20和21氨基酸序列所示；
(c)抗体重链可变区HCDR区序列：如SEQ ID NO：30、31和32氨基酸序列所示；和抗体轻链可变区LCDR区序列：如SEQ ID NO：33、34和35氨基酸序列所示。
26.根据权利要求25所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段含有SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37所示的重链可变区或其变体；所述变体是在SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37所示的重链可变区序列上具有1-10个氨基酸的突变。
27.根据权利要求25所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段含有SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39所示的轻链可变区或其变体；所述变体是在SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39所示的轻链可变区序列上具有1-10个氨基酸的突变。
28.根据权利要求25至27中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段为全长抗体，其中所述的全长抗体选自：
h1702抗体，其是由SEQ ID NO:22所示的重链序列和SEQ ID NO:23所示的轻链序列组成的全长抗体，
h1703抗体，其是由SEQ ID NO:24所示的重链序列和SEQ ID NO:25所示的轻链序列组成的全长抗体，
h1702-DS抗体，其是由SEQ ID NO:22所示的重链序列和SEQ ID NO:26所示的轻链序列组成的全长抗体，和
h1704-3抗体，其是由SEQ ID NO:40所示的重链序列和SEQ ID NO:41所示的轻链序列组成的全长抗体。
29.根据权利要求22至28中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、单链抗体(scFv)、二聚化的V区(双抗体)、二硫键稳定化的V区(dsFv)和包含CDR的肽的抗原结合片段。
30.根据权利要求22所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段为能够结合c-Met的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述能够结合c-Met的抗体或其抗原结合片段包含选自以下轻链序列和重链序列的组合：
Ab-10：SEQ ID NO:42所示的重链序列和SEQ ID NO:43所示的轻链序列；
Ab-9：SEQ ID NO:44所示的重链序列和SEQ ID NO:45所示的轻链序列；或
Ab-11：SEQ ID NO:46所示的重链序列和SEQ ID NO:47所示的轻链序列。
31.根据权利要求1至8中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其选自：
y1或y2相同或不同，且各自独立地为1～10，优选为1～4。
32.一种制备如权利要求9所述的通式(IM)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的方法，其包括如下步骤：
Rw-NH2与通式(IA)化合物反应，得到通式(IM)化合物；
其中：
Rw、环A、R1、W、J、M和n如权利要求9中所定义。
33.一种制备如权利要求6所述的通式(Pc-L0-Dr)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的方法，其包括如下步骤：
Pc-NH2与通式(I)化合物反应，得到通式(Pc-L0-Dr)化合物；
其中：
Pc、Dr、y、环A、R1、W、J和n如权利要求6中所定义。
34.一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1至8或22至31中任一项所述的配体-药物偶联物，或根据权利要求9至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
35.根据权利要求1至8或22至31中任一项所述的配体-药物偶联物，或根据权利要求9至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，或根据权利要求34所述的药物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途。
36.根据权利要求1至8或22至31中任一项所述的配体-药物偶联物，或根据权利要求9至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，或根据权利要求34所述的药物组合物在制备治疗或预防B7-H3介导的疾病或病症的药物中的用途，其中所述的疾病或病症优选为癌症；更优选为表达B7-H3的癌症；最优选为乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、膀胱癌、食管癌、宫颈癌、胆囊癌、胶质母细胞瘤和黑色素瘤。
37.根据权利要求1至8或22至31中任一项所述的配体-药物偶联物，或根据权利要求9至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，或根据权利要求34所述的药物组合物在制备治疗或预防c-Met介导的疾病或病症的药物中的用途，其中所述的疾病或病症优选为癌症；更优选为表达c-Met的癌症；最优选为胃癌、胰腺癌、肺癌、肠癌、肾癌、黑素瘤、非小细胞肺癌；最优选为胃癌、胰腺癌、非小细胞肺癌和肾癌。
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