CN110089407A - 一种金线莲种质资源的套袋种植保存方法 - Google Patents

一种金线莲种质资源的套袋种植保存方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于植物保存技术领域，具体涉及一种金线莲种质资源的套袋种植保存方法，依次包括以下步骤：种苗定植、施营养液、套袋密封、温室悬挂放置、保存管理；所述营养液中添加杀菌剂。采用本发明方法可充分利用温室二层苗床闲置空间，采用隔离套袋种植与浇灌研制的专用营养液配方结合方法，达到有效保存金线莲种质资源的目的，保存的种质资源不受病虫害危害，且种质种植保存过程不需要再另外浇水、追肥，管理简单，具有操作简便、保存成本低，存活率高等优点，即保护了金线莲这一珍贵的药用资源，也为今后更进一步保护和利用该物种提供了良好的物质基础。

Description

一种金线莲种质资源的套袋种植保存方法
【技术领域】
本发明属于植物保存技术领域，具体涉及一种金线莲种质资源的套袋种植保存方法。
【背景技术】
福建金线莲(Anoictochilus roxburghii(Wall.)Lindl.)、台湾开唇兰(A.formosanus)，又称金线莲、金线兰、金不换、鸟人参等，是名贵珍稀中草药，为兰科开唇兰属多年生草本植物，我国主要分布在福建、中国台湾、浙江、江西、广东和广西等地。金线莲以全草入药，具有清凉退火、凉血固肺、祛伤解毒、滋补强壮等功效，在民间具有广泛药用价值，由于其治疗面广，疗效独特，被民间视为“神药”；近年来，金线莲又被应用于治疗高血压、糖尿病、肝炎及肿瘤等疾病，其药用、食用、观赏等多方面的优良品质日益受到人们的青睐，具有广阔的开发利用前景。随着金线莲产业的发展，人为过度采挖，野生金线莲资源日益枯竭，因此金线莲种质资源的保存刻不容缓。
金线莲同其它兰花资源一样，主要是采用田间种植保存和组织培养保存，但金线莲种植保存过程中易受气候条件限制，尤其高温高湿环境条件下，茎腐病等病害危害严重，使活体保存工作难于开展，而织培养保存需对种质材料进行频繁继代，工作量大，成本也高且可能会发生变异等问题。因此，研究探索一套符合金线莲特点的种质资源保存方法，是从业人员所迫切希望地。
为了更好地保护金线莲这一珍贵的药用资源，保护生物的多样性，解决金线莲种质资源保存在的问题，申请号为CN201510921672.0、名称为“一种金线莲种质资源的低温保存方法”的中国专利中，提出了以野生金线莲为外植体，进行低温诱导分化；分化后经低温、暗处理一段时间，再将芽球转入金线莲继代培养基中；在常温、光照条件下，培养一段后，再将芽球转入低温、暗处理，最后将小植株转入金线莲培养基中常温、光照下培养；即对金线莲组培苗进行低温、常温、黑暗、光照和不同培养基等条件的交替处理，利用外部条件驱动，低温诱使细胞分裂分化减慢，延缓了细胞再分化的时间，从而达到保存种质资源的目的。其虽然建立了金线莲种质资源的保存技术，仅限于种质资源离体保存，但这种方式保存需要实验室仪器设备条件，并存在着操作过程相对较为繁复的缺陷。
由鉴于此，研究或优化，以期得到一种操作过程相对便捷、保存存活率高的金线莲种质资源活体保存方法，是从业人员所迫切希望地。
【发明内容】
本发明所要解决的技术问题在于提供一种金线莲种质资源的套袋种植保存方法，不仅操作简便，而且保存效果较为理想。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：
一种金线莲种质资源的离体保存方法，依次包括以下步骤：种苗定植、施营养液、套袋密封、温室悬挂放置、保存管理；所述营养液中添加杀菌剂。
进一步地，所述种苗选择生长健壮、无病虫害的野生金线莲资源，或选择以金线莲茎段为外植体，通过器官发生途径诱导植株再生获得的完整植株，经过驯化炼苗后得到的组培生根苗。
更进一步地，所述组培生根苗采用株高5.0-6.0cm、根长2.0-4.0cm、根数2-3条的完整植株，驯化炼苗条件：温室温度为22-28℃、遮光率为70-80％，且炼苗为闭口10-15d、半敞口2-3d、全敞口3-5d。
进一步地，所述种苗定植采用的栽培器具为育苗盘，所述育苗盘为盘底带网眼的正方形塑料盘，每个育苗盘种植数量控制在64株以内。
进一步地，所述种苗定植采用的栽培基质为泥炭土、珍珠岩混合栽培基质，按体积比为泥炭土3～6份、珍珠岩1～2份。
更进一步地，所述种苗定植，将种苗按株行距5.0cm×5.0cm植入栽培基质中，定植深度为1.0～2.0cm。
进一步地，所述套袋密封采用透明塑料平口袋包装，厚度7丝，袋口密封处理，采用捆扎绳系紧。
进一步地，所述营养液的组分为：杀菌剂益培隆5.0-10.0mg/L、花宝1号500-800mg/L、KNO3400-600mg/L、(NH4)2SO4600-900mg/L、NaH2PO4.2H2O300-400mg/L、MgSO4·7H2O200-300mg/L、CaCl2·2H2O 100-200mg/L、MnSO4·H2O 10.0mg/L、ZnSO4·7H2O 2.0mg/L、H3BO33.0mg/L、FeSO4·7H2O 28.0mg/L、Na2·EDTA 37.0mg/L、盐酸硫胺素10.0-15.0mg/L、烟酸1.0-2.0mg/L、盐酸吡哆醇2.5-5.0mg/L、甘氨酸5.0-10.0mg/L、肌醇80-100mg/L；所述营养液按组分配比，采用无菌水分别溶解试剂，再混合均匀定容备用，然后使用喷壶将营养液浇透栽培基质，浇透判断以营养液从盘底渗出即停止喷施营养液。
进一步地，所述保存管理，在保存过程不需要再另外浇水、追肥，仅需温室内保持环境温度15～28℃，遮光率为60-85％，空气湿度保持在60～70％。
进一步地，所述温室悬挂放置，将套袋种植的金线莲种苗悬挂于温室苗床上，所述温室苗床为双层苗床，上层苗床放置其它兰花种质资源，套袋金线莲放置于第二层苗床上，其袋口方向垂直悬挂在第一层苗床下方。
本发明的有益效果在于：
采用本发明方法可充分利用温室二层苗床闲置空间，采用隔离套袋种植与浇灌研制的专用营养液配方结合方法，达到有效保存金线莲种质资源的目的，保存的种质资源不受病虫害危害，且种质种植保存过程不需要再另外浇水、追肥，管理简单，具有操作简便、保存成本低，存活率高等优点，即保护了金线莲这一珍贵的药用资源，也为今后更进一步保护和利用该物种提供了良好的物质基础。换而言之，本发明方法克服了现有技术中金线莲保存技术操作过程相对较为繁复、活体保存易受病虫害危害导致存活率低的缺陷。
【具体实施方式】
本发明一种金线莲种质资源的套袋种植保存方法，该方法包括如下具体操作步骤：
(1)种质资源的收集与获得：收集生长健壮、无病虫害的野生金线莲资源，或者选择以金线莲茎段为外植体，通过器官发生途径诱导植株再生获得的完整植株，经过驯化炼苗后的组培生根苗作为资源种植保存的种苗；
(2)栽培基质与器具的选择：选择泥炭土、珍珠岩混合栽培基质，按体积比进行配比，组份包括泥炭土3～6份、珍珠岩1～2份；栽培器具选用正方形育苗盘，育苗盘大小为43.0×43.0×6.0cm，套用育苗盘的袋子为透明塑料袋，其大小为80.0×100.0cm；
(3)套袋种植方法：将步骤(2)的混合基质装入育苗盘中，基质深度为4.5～5.5cm，将步骤(1)的金线莲资源，按株行距5.0cm×5.0cm植入基质中，定植深度为1.0～2.0cm；种植后浇灌添加杀菌剂的营养液，此营养液即发挥杀菌、定根水作用，又为后续培养提供充足养分；营养液均匀浇透育苗盘的全部基质，然后将育苗盘垂直放置步骤(2)中的塑料袋底部，再对袋口进行密封处理；
(4)种质保存管理：将步骤(3)套袋种植的金线莲种苗，放置于温室苗床下方，即装有育苗盘的袋子底部部分放置在第二层苗床上面，袋口悬挂在第一层苗床下方，第一层苗床上方是放置其它兰花盆栽种质资源。种质种植保存过程不需要再另外浇水、追肥，仅需温室内保持环境温度15～28℃，遮光率为60-85％，空气湿度保持在60～70％；
其中，营养液的组分为：杀菌剂益培隆5.0-10.0mg/L、花宝1号500-800mg/L、KNO3400-600mg/L、(NH4)2SO4600-900mg/L、NaH2PO4.2H2O 300-400mg/L、MgSO4·7H2O 200-300mg/L、CaCl2·2H2O 100-200mg/L、MnSO4·H2O 10.0mg/L、ZnSO4·7H2O 2.0mg/L、H3BO33.0mg/L、FeSO4·7H2O 28.0mg/L、Na2·EDTA 37.0mg/L、盐酸硫胺素(VB1)10.0-15.0mg/L、烟酸(VB5)1.0-2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)2.5-5.0mg/L、甘氨酸5.0-10.0mg/L、肌醇80-100mg/L。
在本发明具体实施例中，组培种苗株高为5.0-6.0cm、根长2.0-4.0cm、根数2-3条的完整植株，驯化炼苗条件：温室温度为22-28℃、遮光率为70-80％，且炼苗为闭口10-15d、半敞口2-3d、全敞口3-5d；育苗盘为盘底带网眼的正方形塑料盘，每个育苗盘种植数量控制在64株以内；套用育苗盘的袋子为透明PE塑料平口袋，厚度7丝，袋口密封处理，采用捆扎绳系紧；营养液按组分配比，采用经高温灭菌过的自来水分别溶解试剂，再混合均匀定容备用，然后使用喷壶将营养液浇透栽培基质，浇透判断以营养液从盘底渗出即停止喷施营养液；温室苗床为双层苗床，第一层苗床离地80cm，第二层苗床离地30cm，两层层距50cm，上层苗床放置其它兰花种质资源，盆距20.0cm×20.0cm摆放；套袋金线莲放置在第二层苗床上，其袋口方向垂直悬挂在第一层苗床下方。
另外，需要说明的是，在无特殊说明的情况下，本发明中的百分数均为质量百分数。
为了对本发明方法进行进一步的阐述说明，申请人给出了如下几个实施例，且这些实施例仅是示例性的，并不用于限制本发明的保护范围。
实施例1
(1)种质资源的收集与获得：从福建龙岩市连城县原生境收集生长健壮、无病虫害的野生金线莲作为资源种植保存的种苗；
(2)栽培基质与器具的选择：选择泥炭土、珍珠岩混合栽培基质，按体积比进行配比，组份包括泥炭土3份、珍珠岩1份；栽培器具选用正方形育苗盘，育苗盘大小为43.0×43.0×6.0cm，套用育苗盘的袋子为透明塑料袋，其大小为80.0×100.0cm；
(3)套袋种植方法：将泥炭土、珍珠岩混合基质装入育苗盘中，基质深度为5.5cm，将野生金线莲资源，按株行距5.0cm×5.0cm植入基质中，定植深度为2.0cm；种植后浇灌营养液(具体成份及各成份用量如下表1所示)，营养液均匀浇透育苗盘的全部基质，然后将育苗盘垂直放置塑料袋底部，再对袋口进行密封处理；
(4)种质保存管理：将套袋种植的金线莲种苗，放置于温室苗床下方，即装有育苗盘的袋子底部部分放置在第二层苗床上面，袋口悬挂在第一层苗床下方，第一层苗床上方是放置文心兰盆栽种质资源。种质种植保存过程无需另外浇水、追肥，温室内保持环境温度15～28℃，春、冬季节睛天遮光率为60％，夏、秋季晴天遮光率为80％空气湿度保持在60～70％。种质种植保存一年存活率达95％以上。
表1实施例1中营养液的成份及各成份用量
实施例2
(1)种质资源的收集与获得：从福建龙岩市连城县原生境收集生长健壮、无病虫害的野生金线莲为外植体，通过器官发生途径诱导植株再生获得的组培生根苗作为资源种植保存的种苗；
(2)栽培基质与器具的选择：选择泥炭土、珍珠岩混合栽培基质，按体积比进行配比，组份包括泥炭土5份、珍珠岩2份；栽培器具选用正方形育苗盘，育苗盘大小为43.0×43.0×6.0cm，套用育苗盘的袋子为透明塑料袋，其大小为80.0×100.0cm；
(3)套袋种植方法：将泥炭土、珍珠岩混合基质装入育苗盘中，基质深度为5.0cm，将金线莲种苗，按株行距5.0cm×5.0cm植入基质中，定植深度为1.5cm；种植后浇灌营养液(具体成份及各成份用量如下表2所示)，营养液均匀浇透育苗盘的全部基质，然后将育苗盘垂直放置塑料袋底部，再对袋口进行密封处理；
(4)种质保存管理：将套袋种植的金线莲种苗，放置于温室苗床下方，即装有育苗盘的袋子底部部分放置在第二层苗床上面，袋口悬挂在第一层苗床下方，第一层苗床上方是放置文心兰盆栽种质资源。种质种植保存过程无需另外浇水、追肥，温室内保持环境温度15～28℃，春、冬季节睛天遮光率为60％，夏、秋季晴天遮光率为85％空气湿度保持在60～70％。种质种植保存一年存活率达97.5％以上。
表2实施例2中营养液的成份及各成份用量
序号 成份名称 用量mg/L 序号 成份名称 用量mg/L
1 益培隆 8.0 10 H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> 3.0
2 花宝1号 600 11 FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O 28.0
3 KNO<sub>3</sub> 500 12 Na<sub>2</sub>.EDTA 37.0
4 (NH<sub>4</sub>)<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> 800 13 盐酸硫胺素 13.0
5 NaH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>.2H<sub>2</sub>O 350 14 烟酸 1.5
6 MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O 250 15 盐酸吡哆醇 3.5
7 CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O 150 16 甘氨酸 8.0
8 MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O 10.0 17 肌醇 90.0
9 ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O 2.0
实施例3
(1)种质资源的收集与获得：花叶金线莲为福建金线莲组培快繁中发现的突变单株，经多次继代，性状稳定，定向选择而育成的新品种，其为新的金线莲种质。选择花叶金线莲组培生根苗作为资源种植保存的种苗；
(2)栽培基质与器具的选择：选择泥炭土、珍珠岩混合栽培基质，按体积比进行配比，组份包括泥炭土5份、珍珠岩2份；栽培器具选用正方形育苗盘，育苗盘大小为43.0×43.0×6.0cm，套用育苗盘的袋子为透明塑料袋，其大小为80.0×100.0cm；
(3)套袋种植方法：将泥炭土、珍珠岩混合基质装入育苗盘中，基质深度为4.5cm，将金线莲种苗，按株行距5.0cm×5.0cm植入基质中，定植深度为1.0cm；种植后浇灌营养液(具体成份及各成份用量如下表3所示)，营养液均匀浇透育苗盘的全部基质，然后将育苗盘垂直放置塑料袋底部，再对袋口进行密封处理；
(4)种质保存管理：将套袋种植的金线莲种苗，放置于温室苗床下方，即装有育苗盘的袋子底部部分放置在第二层苗床上面，袋口悬挂在第一层苗床下方，第一层苗床上方是放置文心兰盆栽种质资源。种质种植保存过程无需另外浇水、追肥，温室内保持环境温度15～28℃，春、冬季节睛天遮光率为70％，夏、秋季晴天遮光率为85％空气湿度保持在60～70％。种质种植保存一年存活率达95.8％以上。
表3实施例3中营养液的成份及各成份用量
序号 成份名称 用量mg/L 序号 成份名称 用量mg/L
1 益培隆 5.0 10 H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> 3.0
2 花宝1号 800 11 FeSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O 28.0
3 KNO<sub>3</sub> 600 12 Na<sub>2</sub>.EDTA 37.0
4 (NH<sub>4</sub>)<sub>2</sub>SO<sub>4</sub> 900 13 盐酸硫胺素 15.0
5 NaH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>.2H<sub>2</sub>O 400 14 烟酸 2.0
6 MgSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O 300 15 盐酸吡哆醇 5.0
7 CaCl<sub>2</sub>.2H<sub>2</sub>O 200 16 甘氨酸 10.0
8 MnSO<sub>4</sub>.H<sub>2</sub>O 10.0 17 肌醇 100.0
9 ZnSO<sub>4</sub>.7H<sub>2</sub>O 2.0
实施例1-3表明，通过本发明的方法，种质种植保存一年存活率均达到95％以上。
本发明所述的种质保存，是指在较长时间内，种质仍处于存活状态，不同于常规生产角度出发的短期保存。本发明通过添加特定营养液、套袋种植、温室悬挂，能达到较长时间保存种质的目的。本发明采用套袋种植，可有效控制病害。若是未采用套袋种植，一般种植4个月后，会陆续出现茎腐病危害，导致金线莲死亡。一旦发生病害，药物也无法控制。本发明采用温室双层苗床培育，一是充分利用闲置空间，二是二层光照等条件能满足金线莲生长。而利用双层苗床培育，更需要采用套袋方式，这是由于第一层苗床种植其它兰花，其浇水、施肥的液体会渗漏下来，易传染病菌，会导致金线莲发病致死。本发明采用套袋悬挂放置，这是由于套袋会影响金线莲伸长生长空间，将其竖直悬挂，可扩大空间，利于空气循环，且受光相对均匀，更有利于金线莲生长。本发明通过添加特定营养液，使种质种植保存过程不需要再另外浇水、追肥，管理简单，还可满足金线莲在较长时间内的营养所需。

Claims (10)

1.一种金线莲种质资源的套袋种植保存方法，其特征在于：依次包括以下步骤：种苗定植、施营养液、套袋密封、温室悬挂放置、保存管理；所述营养液中添加杀菌剂。
2.根据权利要求1所述的金线莲种质资源的套袋种植保存方法，其特征在于：所述种苗选择生长健壮、无病虫害的野生金线莲资源，或选择以金线莲茎段为外植体，通过器官发生途径诱导植株再生获得的完整植株，经过驯化炼苗后得到的组培生根苗。
3.根据权利要求2所述一种金线莲种质资源的套袋种植保存方法，其特征在于：所述组培生根苗采用株高5.0-6.0cm、根长2.0-4.0cm、根数2-3条的完整植株，驯化炼苗条件：温室温度为22-28℃、遮光率为70-80％，且炼苗为闭口10-15d、半敞口2-3d、全敞口3-5d。
4.根据权利要求1所述的金线莲种质资源的套袋种植保存方法，其特征在于：所述种苗定植采用的栽培器具为育苗盘，所述育苗盘为盘底带网眼的正方形塑料盘，每个育苗盘种植数量控制在64株以内。
5.根据权利要求1所述的金线莲种质资源的套袋种植保存方法，其特征在于：所述种苗定植采用的栽培基质为泥炭土、珍珠岩混合栽培基质，按体积比为泥炭土3～6份、珍珠岩1～2份。
6.根据权利要求5所述的金线莲种质资源的套袋种植保存方法，其特征在于：所述种苗定植，将种苗按株行距5.0cm×5.0cm植入栽培基质中，定植深度为1.0～2.0cm。
7.根据权利要求1所述的金线莲种质资源的套袋种植保存方法，其特征在于：所述套袋密封采用厚度为7丝的透明塑料平口袋包装，袋口密封处理，采用捆扎绳系紧。
8.根据权利要求1所述的金线莲种质资源的套袋种植保存方法，其特征在于：所述营养液的组分为：杀菌剂益培隆5.0-10.0mg/L、花宝1号500-800mg/L、KNO3 400-600mg/L、(NH4)2SO4 600-900mg/L、NaH2PO4.2H2O 300-400mg/L、MgSO4·7H2O 200-300mg/L、CaCl2·2H2O100-200mg/L、MnSO4·H2O 10.0mg/L、ZnSO4·7H2O 2.0mg/L、H3BO3 3.0mg/L、FeSO4·7H2O28.0mg/L、Na2·EDTA 37.0mg/L、盐酸硫胺素10.0-15.0mg/L、烟酸1.0-2.0mg/L、盐酸吡哆醇2.5-5.0mg/L、甘氨酸5.0-10.0mg/L、肌醇80-100mg/L；所述营养液按组分配比，采用无菌水分别溶解试剂，再混合均匀定容备用，然后使用喷壶将营养液浇透栽培基质，浇透判断以营养液从盘底渗出即停止喷施营养液。
9.根据权利要求1所述的金线莲种质资源的套袋种植保存方法，其特征在于：所述保存管理，在保存过程不需要再另外浇水、追肥，仅需温室内保持环境温度15～28℃，遮光率为60-85％，空气湿度保持在60～70％。
10.根据权利要求1所述一种金线莲种质资源的套袋种植保存方法，其特征在于：所述温室悬挂放置，将套袋种植的金线莲种苗悬挂于温室苗床上，所述温室苗床为双层苗床，上层苗床放置其它兰花种质资源，套袋金线莲放置于第二层苗床上，其袋口方向垂直悬挂在第一层苗床下方。
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Assignee: LONGYAN CITY LIANCHENG COUNTY ZHISHAN ECOLOGICAL AGRICULTURE CO.,LTD.

Assignor: CROP Research Institute OF FUJIAN ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES

Contract record no.: X2022350000046

Denomination of invention: A Method for Conservation of Anoectochilus roxburghii Germplasm Resources by Bagging

Granted publication date: 20210907

License type: Common License

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