CN1100750C - 15－脱乙酰基－13－氨基酸取代的竹红菌素及其制法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素及其制法。将摩尔比为1∶50～1∶300的竹红菌素和甘氨酸、α-丙氨酸或β-丙氨酸与极性有机溶剂-碱性缓冲溶液混合，在氩气保护下80～120℃反应30-180分钟，然后用酸中和至中性或微酸性。用氯仿萃取，取反应后的氯仿层，用薄层层析或柱层析分离，产率达到30%～45%。它们在光疗窗口(600～900nm)有强吸收，而且水溶性大大增强，可用于制备治疗肿瘤、抗爱滋病、血液净化的药及光动力农药等。
Description
本发明属于具有光动力活性的光敏剂技术领域，特别涉及15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素及其制法和用途。
光动力疗法(Photodynamic therapy，简称PDT)指给人体施用光敏剂，然后光照激活光敏剂，在氧的参与下，产生活性氧及其它活性中间体(如光敏剂自由基)达到治疗疾病的目的。要求光敏剂的光毒性高，暗毒性低，在光疗窗口(600-900纳米)有强吸收，且易于聚集在病变组织上。由于光疗同时需要光敏剂和光的参与，具有双重选择性(药物选择性富集和选择性光照激活)。这样光疗就比一般的化疗更易将药物作用点控制在病变组织内，减少对正常组织的损伤，从而大大降低了药物的毒副作用。
一九九三年四月十六日，加拿大健康保护局(the Health Protection Bureau ofCanada)宣布，批准光卟啉(Photofrin)商品化，用于治疗膀胱癌。此后日本、美国和欧洲也相继批准了用光疗来治疗一些癌症，如胃癌、肺癌等。这是一个漫长而艰苦、耗资巨大的过程，是对以前许多科学家研究工作的承认。1972年戴尔芒德(Diamond)等人在《手术刀》1972年第二卷第1175页的文章中(Lancet1972，2，1175)报导了光疗用于治疗恶性肿瘤，后来道尔蒂(Dougherty)等人在《北大西洋公约组织癌症研究所杂志》1974年第51卷第1333页(J.Natl.CancerInst.1974.5.1333)和1975年第55卷第115页(J.Natl.Cancer Inst.1975，55，115)的文章中报导了光疗对脑癌、颈癌和眼癌等浅层癌具有明显疗效。血卟啉衍生物(Haematoporphyrin derivatives，简称HPD)及其商业化产品光卟啉(Photofrin)、光疗素(Photosan)、光灵素(Photogem)及光癌素(photocarcinorin)，在肿瘤光疗的历史上具有举足轻重的地位。目前临床上使用的有血卟啉衍生物(HPD)和血卟啉单甲醚(Dihematoporthyrin ethers and esters：简称DHE)。在道尔林(Doiron)和高莫(Gomer)编的《卟啉定位及肿瘤治疗》一书中，道尔蒂(Dougherty)等人在《血卟啉衍生物活性组分的结构》部分(Thestructure of the active component of hematoporphyrin derivative.In PorphyrinLocalization and Treatment of Tumor 1984，6，259-274)报导了血卟啉衍生物(HPD)的有效成分为血卟啉单甲醚(DHE)。血卟啉单甲醚(DHE)的商品制剂为光卟啉(Photofrin)和卟菲摩钠(Porfimer Sodium)，含有低于20％的无活性单体和高于80％的有活性卟啉双体及低聚物。
尽管血卟啉衍生物(HPD)及其商品已广泛用于实验临床，但这些第一代光敏剂有三个不可忽视的缺点。首先，它们的选择性不好，易引起皮肤过敏的副作用，且需要避光时间长。第二，红光部分的吸收带(带I，约630纳米)很弱，不能很好地吸收红光。第三，其成分复杂，稳定性差，这都限制了它的应用。
八十年代以后，第二代光敏剂的研究和筛选使光疗研究又跨出了一步。这些第二代光敏剂的活性和选择性都得以改进。博耐特(Bonnett)在《化学社会综述》1995年第24卷第19页(Chemical Society Reviews，1995，24，19)上发表了对这些第二代光敏剂的介绍，包括卟啉、卟吩、二氢卟吩、内源卟啉、酞菁和萘酞菁。
除此之外，竹红菌素，一种中国特有的新型光敏剂，近年来吸引了国内外的广泛兴趣。它是从生长在我国云南西北部山区的箭竹的寄生真菌----竹红菌中提取的光敏剂色素，其中包括竹红菌甲素(Hypocrellin A，简称HA)和竹红菌乙素(Hypocrellin B，简称HB)。其结构如下：竹红菌甲素 竹红菌乙素
作为新型光敏剂，竹红菌素具有如下优点：易得、易纯化、低毒，高稳定性，不簇集，能富集于癌细胞、代谢较快、无明显副作用等，有望成为新一代的光疗药物。第五振军(Diwu)等人在《光化学光生物杂志A：化学》1992年第64卷第273页(J.Photochem.Photobiol.A：Chem.1992，64，273)的文章中报导了竹红菌甲素的单重态量子产率(φΔ)(在苯中)高达0.81，竹红菌乙素的单重态氧量子产率φΔ在苯中值为0.76，是一种有效的单重态氧敏化剂。哈德森(Hudson)等人在《光化学与光生物》1994年第60卷第253页(Photochem.Photobiol.1994，60，253)上报导了竹红菌甲素(HA)能杀灭爱滋病毒；傅乃武等人在《中国药理学报》1989年第10卷第371页上报导了竹红菌甲素(HA)对肝癌细胞的线粒体和微粒体具有光动力杀伤作用。邹伟等人在《光化学与光生物杂志：生物》1996年第33卷第73页(J.Photochem.Photobiol.B：Biol.1996，33，73)上报导了竹红菌甲素-脂质体及13-SO3Na-竹红菌甲素能对超螺旋质粒pBR322 DNA产生光敏损伤。曹恩华(Cao)等人在《光化学与光生物杂志B：生物》1998年第43卷第106页(J.Photochem.Photobiol.B：Biol.1998，43，106)上报导了竹红菌甲素(HA)能光敏导致三种恶性肿瘤细胞株的凋亡。这些都证明了竹红菌素具有光疗应用潜力。但它们最大的不足之处在于其在光疗窗口(600-900纳米)无明显吸收。为了克服这一缺点，劳恩(Lown)及其合作者们用热化学方法合成了一系列胺基竹红菌素衍生物。通过对竹红菌素发色团的胺基化，使其在红光部分的吸收大大增强，并进行了体内和体外实验，这些研究结果，劳恩在《加拿大化学杂志》1997年第75卷99页(Can.J.Chem.1997，75，99)中作了总结。但他们所采用的热化学胺基化反应产物多，目标产物的产率低于15％，分离困难，因而不利于将来商品化和应用于临床。
本发明的目的在于克服用热化学方法以一般胺类化合物作为胺基化试剂合成胺基竹红菌素衍生物时反应产物多、目标产物的产率低、分离困难等缺陷，利用氨基酸作为胺基化试剂，提供一种目标产物产率高，副产物少，相对易于分离的15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素衍生物及其制法。
为了简化合成过程，降低成本，提高产率，我们利用氨基酸的特殊结构，用甘氨酸(H2NCH2COOH)、L-α-丙氨酸(D-α-丙氨酸，D，L-α-丙氨酸)(NH2CH(CH3)COOH)或β-丙氨酸(NH2CH2CH2COOH)作为胺基化试剂，竹红菌素为竹红菌甲素和竹红菌乙素，得到了甘氨酸、α-丙氨酸和β-丙氨酸取代的竹红菌素衍生物：15-脱乙酰基-13-甘氨酸取代竹红菌素(简称13-Gly-DHB，如(I)式所示)，15-脱乙酰基-13-α-丙氨酸取代竹红菌素(简称13-α-Ala-DHB，如(II)式所示)和15-脱乙酰基-13-β-丙氨酸取代竹红菌素(简称13-β-Ala-DHB，如(III)式所示)：
本发明的15位脱乙酰基-13位氨基酸取代的竹红菌素制备方法按如下步骤进行：
将竹红菌素和氨基酸(甘氨酸，α-丙氨酸或β-丙氨酸)，按摩尔比1∶50～1∶300，与适量极性有机溶剂-缓冲溶液混合，并使其溶解，其中极性有机溶剂与缓冲溶液体积比为2∶1～1∶2，缓冲溶液为水和无机盐，且pH＞10。同时搅拌，避光加热，通氩气保护，反应温度80～120℃，反应30～180分钟。用水将反应液稀释到原反应溶液体积的20～30倍，然后用酸中和至中性或微酸性，再用氯仿萃取，至水层无色。取氯仿层再用500ml水洗4次，减压浓缩氯仿液至干，得紫黑色固体。用干燥氯仿将之溶解，用薄层层析法分离纯化得15位脱乙酰基-13位氨基酸取代的竹红菌素，所用展开液为石油醚、乙酸乙酯和乙醇(体积比4∶2∶1)。将薄层层析板上呈蓝绿色的组分刮下，用氯仿或丙酮洗脱。或用柱层析法提纯，展开液为石油醚、乙酸乙酯和乙醇(体积比4∶2∶1)，最终得到15位脱乙酰基-13位氨基酸取代的竹红菌素。
其中竹红菌素为竹红菌甲素或竹红菌乙素；氨基酸为甘氨酸、α-丙氨酸或β-丙氨酸；极性有机溶剂为二甲基亚砜、N，N-二甲基甲酰胺或乙腈等；无机盐为磷酸氢二钠、磷酸氢二钾或氢氧化钠等；酸为盐酸等。
本发明的用途：本发明合成的15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素在光疗窗口(600-900纳米)有较强的吸收，有利于治疗肿瘤和癌症。化合物I，II，III的水溶性和竹红菌素相比大大提高，易溶于水中，有利于药物在体内的传递。在激光照射下，这些化合物的光动力活性强，暗毒性小，有望成为较血卟啉类光敏剂性能更优、功能更强的新一代光疗药物，用于制备治疗肿瘤、抗爱滋病毒和血液净化的药。此外，它们也极有希望成为新一代光活化农药。
本发明的优点和效果：此15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素的制法表明：氨基酸和竹红菌素的热化学取代反应在给定条件下，原料的利用效率高，反应速度快，副产物少，而目标产物的产率大大提高。我们用这种方法，使化合物的总产率达到30-45％(竹红菌素的转化率为80％)，这在热化学反应中是非常不容易的。而其它的热化学胺基化反应的产率不高于15％。这一结果表明，用氨基酸作为胺基化试剂与竹红菌素进行反应是一种新型高效的制备方法。15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素的光化学和光物理实验表明，此类衍生物完全保持了竹红菌甲素和竹红菌乙素的光敏活性，能够光敏产生单重态氧(1O2)、超氧负离子(O2 *-)和羟基自由基(·OH)，这些化合物与竹红菌素的光敏活性相近，它们产生超氧负离子(O2 *-)和羟基自由基(·OH)的能力与竹红菌素相比相应增强了2倍左右，单重态氧量子产率达0.65(式(I)化合物)，0.51(式(II)化合物)，0.57(式(III)化合物)。同时这些衍生物也都在无氧条件下能产生自身的半醌负离子自由基。它们在光疗窗口的吸收大大增强，它们的水溶性和竹红菌甲素相比大大提高，在纯水中溶解度可达0.2毫摩尔/升，而在中性缓冲溶液中可达20毫摩尔/升，这对于光疗来说已足够了。由于氨基酸中羧基的存在，它们对DNA分子有更强的亲和力，光照下与DNA分子发生光加成(竹红菌甲素和竹红菌乙素均无此作用)，破坏DNA的立体结构，导致核酸分子的损伤，可用于杀灭无膜病毒和进化血液。
光动力研究表明，13-位上基团的引入基本上保留了竹红菌素良好的光动力性质，利用13-位上特殊的化学活性在13-位上引入氨基酸基团是保持竹红菌素良好的光动力活性并同时增加水溶性和长波吸收的有效途径。
实施例1
竹红菌甲素40毫克(0.7×10-4摩尔)，甘氨酸263毫克(3.5×10-3摩尔)，二甲基亚砜—磷酸氢二钠氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶1，pH＝11)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在120℃反应30分钟。然后加水稀释反应液至800毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色。取氯仿层，用500ml水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位甘氨酸取代的竹红菌素(I)13.5毫克，产率38％.化合物的鉴定：
化合物I：
紫外吸收(λmax)：464nm，582nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3435cm-1，2997cm-1，1610cm-1，1730cm-1
核磁共振(δ1H)：16.19，15.97(s)；6.512，6.465(s)；3.943，4.025，4.047，4.064(s)；5.143(s)；2.329(s)；6.247(s)；2.628(s)
质谱分析：m/z 559(m+)
实施例2
竹红菌乙素37毫克(0.7×10-4摩尔)，甘氨酸263毫克(3.5×10-3摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶1，pH＝12)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在120℃反应30分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色。取氯仿层，用500ml水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位甘氨酸取代的竹红菌素(I)15.4毫克，产率39％。化合物的鉴定：
化合物I：
紫外吸收(λmax)：464nm，582nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3435cm-1，2997cm-1，1610cm-1，1730cm-1
核磁共振(δ1H)：16.19，15.97(s)；6.512，6.465(s)；3.943，4.025，4.047，4.064(s)；5.143(s)；2.329(s)；6.247(s)；2.628(s)质谱分析：m/z 559(m+)
实施例3
竹红菌甲素40毫克(0.7×10-4摩尔)，甘氨酸1.6克(2.1×10-2摩尔)，乙腈—氢氧化钠缓冲溶液(体积比2∶1，pH＝12)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在80℃反应180分钟。然后加水稀释反应液至1200毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用500ml水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位甘氨酸取代的竹红菌素(I)15.4毫克，产率39％。化合物的鉴定：
化合物I：
紫外吸收(λmax)：464nm，582nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3435cm-1，2997cm-1，1610cm-1，1730cm-1
核磁共振(δ1H)：16.19，15.97(s)；6.512，6.465(s)；3.943，4.025，4.047，4.064(s)；5.143(s)；2.329(s)；6.247(s)；2.628(s)质谱分析：m/z 559(m+)
实施例4
竹红菌乙素37毫克(0.7×10-4摩尔)，甘氨酸1.6克(2.1×10-2摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—磷酸氢二钠氢氧化钠缓冲溶液(体积比2∶1，pH＝11)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在80℃反应180分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用柱层析法分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法纯化，得到15位脱乙酰基-13位甘氨酸取代的竹红菌素(I)16.6毫克，产率42％。化合物的鉴定：
化合物I：
紫外吸收(λmax)：464nm，582nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3435cm-1，2997cm-1，1610cm-1，1730cm-1
核磁共振(δ1H)：16.19，15.97(s)；6.512，6.465(s)；3.943，4.025，4.047，4.064(s)；5.143(s)；2.329(s)；6.247(s)；2.628(s)质谱分析：m/z 559(m+)：
实施例5
竹红菌甲素40毫克(0.7×10-4摩尔)，甘氨酸526毫克(7.0×10-3摩尔)，N，N-二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶2，pH＝13)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在100℃反应120分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用500ml水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位甘氨酸取代的竹红菌素(I)13.1毫克，产率37％。化合物的鉴定：
化合物I：
紫外吸收(λmax)：464nm，582nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3435cm-1，2997cm-1，1610cm-1，1730cm-1
核磁共振(δ1H)：16.19，15.97(s)；6.512，6.465(s)；3.943，4.025，4.047，4.064(s)；5.143(s)；2.329(s)；6.247(s)；2.628(s)
质谱分析：m/z 559(m+)
实施例6
竹红菌乙素37毫克(0.7×10-4摩尔)，甘氨酸526毫克(7.0×10-3摩尔)，二甲基亚砜—氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶2，pH＝12)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在100℃反应120分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用500 ml水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位甘氨酸取代的竹红菌素(I)15.0毫克，产率38.2％。化合物的鉴定：
化合物I：
紫外吸收(λmax)：464nm，582nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3435cm-1，2997cm-1，1610cm-1，1730cm-1
核磁共振(δ1H)：16.19，15.97(s)；6.512，6.465(s)；3.943，4.025，4.047，4.064(s)；5.143(s)；2.329(s)；6.247(s)；2.628(s)质谱分析：m/z 559(m+)
实施例7
竹红菌甲素40毫克(0.7×10-4摩尔)，L-α-丙氨酸0.31克(3.5×10-3摩尔)，N，N-二甲基甲酰胺—磷酸氢二钠氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶1，pH＝11)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，避光，电磁搅拌，避光油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在120℃反应30分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位α-丙氨酸取代的竹红菌素(II)13.3毫克，产率33％.
化合物的鉴定：
化合物II：
紫外吸收(λmax)：462nm，580nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3436cm-1，2959cm-1，1621cm-1，1735cm-1
核磁共振(δ1H)：16.70，16.27(s)；6.387，6.552(s)；3.926，4.036，4.049，4.058(s)；5.646(s)；2.262(s)；6.119(s)；3.288(m)；1.936(d)
质谱分析：m/z 573(m+)
实施例8
竹红菌乙素37毫克(0.7×10-4摩尔)，α-丙氨酸0.31克(3.5×10-3摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶1，pH＝14)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在120℃反应30分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色或淡紫色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用柱层析分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法纯化，得到15位脱乙酰基-13位α-丙氨酸取代的竹红菌素(II)14.2毫克，产率35％.化合物的鉴定：
化合物II：
紫外吸收(λmax)：462nm，580nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3436cm-1，2959cm-1，1621cm-1，1735cm-1
核磁共振(δ1H)：16.70，16.27(s)；6.387，6.552(s)；3.926，4.036，4.049，4.058(s)；5.646(s)；2.262(s)；6.119(s)；3.288(m)；1.936(d)
质谱分析：m/z 573(m+)
实施例9
竹红菌甲素40毫克(0.7×10-4摩尔)，α-丙氨酸1.9克(2.1×10-2摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比2∶1，pH＝12)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在80℃反应180分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位α-丙氨酸取代的竹红菌素(II)14.9毫克，产率37％。化合物的鉴定：
化合物II：
紫外吸收(λmax)：462nm，580nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3436cm-1，2959cm-1，1621cm-1，1735cm-1
核磁共振(δ1H)：16.70，16.27(s)；6.387，6.552(s)；3.926，4.036，4.049，4.058(s)；5.646(s)；2.262(s)；6.119(s)；3.288(m)；1.936(d)
质谱分析：m/z 573(m+)
实施例10
竹红菌乙素37毫克(0.7×10-4摩尔)，α-丙氨酸1.9克(2.1×10-2摩尔)，N，N-二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比2∶1，pH＝14)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在80℃反应180分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位α-丙氨酸取代的竹红菌素(II)13.3毫克，产率39％。化合物的鉴定：
化合物II：
紫外吸收(λmax)：462nm，580nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3436cm-1，2959cm-1，1621cm-1，1735cm-1
核磁共振(δ1H)：16.70，16.27(s)；6.387，6.552(s)；3.926，4.036，4.049，4.058(s)；5.646(s)；2.262(s)；6.119(s)；3.288(m)；1.936(d)
质谱分析：m/z 573(m+)
实施例11
竹红菌甲素40毫克(0.7×10-4摩尔)，D-α-丙氨酸0.62克(7.0×10-3摩尔)，N，N-二甲基甲酰胺—磷酸氢二钾氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶2，pH＝11)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在100℃反应120分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位α-丙氨酸取代的竹红菌素(II)13.0毫克，产率32％。
化合物的鉴定：
化合物II：
紫外吸收(λmax)；462nm，580nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3436cm-1，2959cm-1，1621cm-1，1735cm-1
核磁共振(δ1H)：16.70，16.27(s)；6.387，6.552(s)；3.926，4.036，4.049，4.058(s)；5.646(s)；2.262(s)；6.119(s)；3.288(m)；1.936(d)
质谱分析：m/z 573(m+)
实施例12
竹红菌乙素37毫克(0.7×10-4摩尔)，α-丙氨酸0.62克(7.0×10-3摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶1，pH＝13)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在100℃反应120分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位α-丙氨酸取代的竹红菌素(II)13.9毫克，产率33.7％。化合物的鉴定：
化合物II：
紫外吸收(λmax)：462nm，580nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3436cm-1，2959cm-1，1621cm-1，1735cm-1
核磁共振(δ1H)：16.70，16.27(s)；6.387，6.552(s)；3.926，4.036，4.049，4.058(s)；5.646(s)；2.262(s)；6.119(s)；3.288(m)；1.936(d)质谱分析：m/z 573(m+)
实施例13
竹红菌甲素40毫克(0.7×10-4摩尔)，β-丙氨酸0.31克(3.5×10-3摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶1，pH＝12)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在120℃反应30分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位β-丙氨酸取代的竹红菌素(III)15.3毫克，产率38％。化合物的鉴定：
化合物III：
紫外吸收(λmax)：466nm，586nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3396cm-1，2959cm-1，1641cm-1，1728cm-1
核磁共振(δ1H)：16.21，16.66(s，)；6.521，6.589(s，)；3.943，4.025，4.047，4.064(s，)；5.198(s)；2.134(s)；6.292(s)；2.828(t)；2.412(t)质谱分析：m/z 573(m+)
实施例14
竹红菌乙素37毫克(0.7×10-4摩尔)，β-丙氨酸0.31克(3.5×10-3摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—磷酸氢二钠氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶1，pH＝11)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在120℃反应30分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位β-丙氨酸取代的竹红菌素(III)16.2毫克，产率40％.化合物的鉴定：
化合物III：
紫外吸收(λmax)：466nm，586nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3396cm-1，2959cm-1，1641cm-1，1728cm-1
核磁共振(δ1H)：16.21，16.66(s，)；6.521，6.589(s，)；3.943，4.025，4.047，4.064(s，)；5.198(s)；2.134(s)；6.292(s)；2.828(t)；2.412(t)质谱分析：m/z 573(m+)
实施例15
竹红菌甲素40毫克(0.7×10-4摩尔)，β-丙氨酸1.9克(2.1×10-2摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比2∶1，pH＝12)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在80℃反应180分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位β-丙氨酸取代的竹红菌素(III)15.7毫克，产率39％。化合物的鉴定：
化合物III：
紫外吸收(λmax)：466nm，586nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3396cm-1，2959cm-1，1641cm-1，1728cm-1
核磁共振(δ1H)：16.21，16.66(s，)；6.521，6.589(s，)；3.943，4.025，4.047，4.064(s，)；5.198(s)；2.134(s)；6.292(s)；2.828(t)；2.412(t)质谱分析：m/z 573(m+)
实施例16
竹红菌乙素37毫克(0.7×10-4摩尔)，β-丙氨酸1.9克(2.1×10-2摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比2∶1，pH＝13)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在80℃反应180分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为乙醇、乙酸乙酯和石油醚石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位β-丙氨酸取代的竹红菌素(III)16.6毫克，产率41％。化合物的鉴定：
化合物III：
紫外吸收(λmax)：466nm，586nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3396cm-1，2959cm-1，1641cm-1，1728cm-1
核磁共振(δ1H)：16.21，16.66(s，)；6.521，6.589(s，)；3.943，4.025，4.047，4.064(s，)；5.198(s)；2.134(s)；6.292(s)；2.828(t)；2.412(t)质谱分析：m/z 573(m+)
实施例17
竹红菌甲素40毫克(0.7×10-4摩尔)，β-丙氨酸0.62克(7.0×10-3摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶2，pH＝13)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在100℃反应120分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位β-丙氨酸取代的竹红菌素(III)15.0毫克，产率37％。化合物的鉴定：
化合物III：
紫外吸收(λmax)：466nm，586nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3396cm-1，2959cm-1，1641cm-1，1728cm-1
核磁共振(δ1H)：16.21，16.66(s，)；6.521，6.589(s，)；3.943，4.025，4.047，4.064(s，)；5.198(s)；2.134(s)；6.292(s)；2.828(t)；2.412(t)质谱分析：m/z 573(m+)
实施例18
竹红菌乙素37毫克(0.7×10-4摩尔)，β-丙氨酸0.62克(7.0×10-3摩尔)，N，N二甲基甲酰胺—氢氧化钠缓冲溶液(体积比1∶2，pH＝13)40毫升，加入100毫升三口烧瓶中，回流装置，电磁搅拌，避光，油浴加热，通氩气(100泡/分)保护，在100℃反应120分钟。然后加水稀释反应液至1000毫升，用盐酸将反应混合物中和至中性，再用氯仿萃取，直至水层无色为止。取氯仿层，用水再洗4次，减压抽干溶剂，然后再用干燥的氯仿重新溶解反应混合物，用硅胶板分离，展开液为石油醚、乙酸乙酯、乙醇，其体积比为4∶2∶1，进一步用此法层析纯化，得到15位脱乙酰基-13位β-丙氨酸取代的竹红菌素(III)15.9毫克，产率39％。化合物的鉴定：
化合物III：
紫外吸收(λmax)：466nm，586nm(在CHCl3中)
红外吸收(ν)：3396cm-1，2959cm-1，1641cm-1，1728cm-1
核磁共振(δ1H)：16.21，16.66(s，)；6.521，6.589(s，)；3.943，4.025，4.047，4.064(s，)；5.198(s)；2.134(s)；6.292(s)；2.828(t)；2.412(t)质谱分析：m/z 573(m+)
Claims (9)
1. 15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素，其特征在于具有如下结构：
其中R为甘氨酸、α-丙氨酸或β-丙氨酸的取代基。
2.如权利要求1所述的15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素，其特征在于所述α-丙氨酸为L-α-丙氨酸、D-α-丙氨酸或D，L-α-丙氨酸。
3.如权利要求1所述的15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素的制法，其特征在于将竹红菌素和甘氨酸、α-丙氨酸或β-丙氨酸按摩尔比1∶50～1∶300，与适量极性有机溶剂-缓冲溶液混合，并使其溶解，其中极性有机溶剂与缓冲溶液体积比为2∶1～1∶2，缓冲溶液为水和无机盐，且pH＞10，同时搅拌，避光加热，通氩气保护，反应温度80～120℃，反应30～180分钟；然后用水将反应液稀释到原反应溶液体积的20～30倍，用酸中和至中性或微酸性，再用氯仿萃取至水层无色，取氯仿层减压浓缩，用薄层层析法或柱层析法分离纯化得15位脱乙酰基-13位氨基酸取代的竹红菌素。
4.如权利要求3所述的15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素的制法，其特征在于所述的竹红菌素为竹红菌甲素或竹红菌乙素。
5.如权利要求3所述的15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素的制法，其特征在于所述极性有机溶剂为二甲基亚砜、N，N-二甲基甲酰胺或乙腈。
6.如权利要求3所述的15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素的制法，其特征在于所述的无机盐为磷酸氢二钾、磷酸氢二钠或氢氧化钠。
7.如权利要求3所述的15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素的制法，其特征在于所述的酸为盐酸。
8.如权利要求3所述的15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素的制法，其特征在于所述的薄层层析法所用展开液为石油醚、乙酸乙酯和乙醇，其体积比为4∶2∶1。
9.如权利要求3所述的15-脱乙酰基-13-氨基酸取代的竹红菌素的制法，其特征在于所述的柱层析法所用展开液为石油醚、乙酸乙酯和乙醇，其体积比为4∶2∶1。
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