CN110073214A - 利用socs表达或活性的抑制选择高效干细胞的方法 - Google Patents

利用socs表达或活性的抑制选择高效干细胞的方法 Download PDF

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Abstract

本申请的发明涉及选择用于治疗免疫疾病的高效间充质干细胞的方法，所述方法包括测定间充质干细胞中特定免疫抑制生物标志物水平的步骤，其中所述间充质干细胞中细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)的表达或活性被抑制，通过所述方法选择的高效间充质干细胞，以及利用所述高效间充质干细胞治疗免疫疾病的方法。本申请的发明提供了获得具有调控免疫反应的能力的功能优异的间充质干细胞的方法，所述间充质干细胞可用于临床上治疗包括移植物抗宿主病和自体免疫疾病的各种免疫疾病，本申请的发明可有效应用于免疫疾病的治疗。

Description

利用SOCS表达或活性的抑制选择高效干细胞的方法
技术领域
本申请的发明涉及选择用于治疗免疫疾病的高效间充质干细胞的方法，所述方法包括测定间充质干细胞中具体免疫抑制生物标志物的水平，其中所述间充质干细胞中细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)的表达或活性被抑制，通过所述方法选择的高效间充质干细胞，以及利用所述高效间充质干细胞治疗免疫疾病的方法。
背景技术
器官、组织或细胞移植可用于挽救患有各种疾病的患者生命。诸如肾脏、肝脏、心脏、肺、胰腺等的人体器官，诸如皮肤的组织，以及诸如骨髓细胞的细胞的异体移植是一种临床上通常进行的如终末器官衰竭的难治性疾病的治疗的解决方案。此外，非人类哺乳动物作为供体的异种移植是同种异体移植供体短缺的解决方案，并且正在积极研究。具体地，近年来，在适当条件下能够永久性自我再生并分化成各种类型细胞的干细胞的移植作为治疗各种难治性疾病的替代疗法已引起关注。
通常，具有正常功能的接受者的正常免疫系统将移植的器官、组织或细胞识别为“非自身”，并诱导对移植物的免疫排斥反应。免疫排斥通常由存在于接受者免疫系统并识别供体组织的同种抗原或异种抗原的同种反应性或异种反应性T细胞介导。因此，为了使同种异体移植物或异种移植物长时间存活，应该阻止接受者的免疫系统识别外来抗原或应当抑制免疫应答。
移植物抗宿主病由供体的T细胞诱导，所述T细胞由宿主的抗原呈递细胞激活，且该细胞迁移到靶组织(皮肤、肠和肝脏)，从而诱导靶器官的功能障碍。移植物抗宿主病的一线标准疗法是用高浓度的类固醇治疗。然而，50％患者对一线疗法无反应，并且已知一旦引起类固醇抵抗死亡率就会增加，而且没有进一步的治疗选择，因为没有类固醇抗性移植物抗宿主病的二线疗法。
此外，为了防止接受者对移植物的免疫应答，通常给接受者施用免疫抑制药物。代表性免疫抑制药物包括钙调磷酸酶抑制剂，如环孢霉素和他克莫司(FK-506)，以及抗增殖药物，如咪唑硫嘌呤、雷帕霉素、霉酚酸酯和环磷酰胺，它们目前常用于肾脏、肝脏、胰腺或心脏的同种异体移植。
这些类型的免疫抑制药物应该每天给药，如果停止给药，通常会发生免疫排斥反应。因此，这种免疫抑制药物需要长期给药，从而会引起肾毒性、肝毒性或高血压。此外，由于这些药物不是仅选择性地作用于对移植物的同种抗原起反应的免疫细胞的特异性免疫抑制药物，因此可能出现副作用，诸如由非特异性免疫抑制引起的机会性感染或肿瘤发生，如淋巴瘤。作为另一种免疫抑制方法，有一种给予如OKT3、达利珠单抗或巴利昔单抗的单克隆抗体的方法，但这些抗体也是非特异性免疫抑制药物，并且存在机会性感染或肿瘤发生的问题。因此，开发不存在药物毒性或机会性感染问题的新的免疫抑制方法是必需的。
同时，人间充质干细胞(MSC)可能来自各种组织，是基于细胞的移植或再生药物的优秀候选者。MSC的特性，如迁移到受损组织、具有免疫抑制功能、自我更新和多能性，提示其治疗应用的可能性。目前，在clinicaltrials.gov中已注册了大约500项临床试验，包括注射或移植MSC。此外，约20％的试验与MSC的免疫抑制相关。MSC的免疫抑制特性是已知的，虽然大多数I期临床试验没有表现出生物稳定性的问题，但是在更后期的临床阶段已经获得了不算突出的结果。
此外，由于缺乏用于MSC标准化的培养方法或方案，即使在从相同接受者的相同组织中分离MSC的情况下，也观察到表型和功能的多样性。因此，需要通过赋予特定条件来促进或者抑制MSC的功能的方法。
发明内容
技术问题
因此，本申请的发明人为开发选择具有优异免疫抑制特性的间充质干细胞的方法做了大量工作，从而发现SOCS表达/活性被抑制的间充质干细胞中具体免疫抑制生物标志物与免疫抑制活性的相关性，并且发现当这些生物标志物的表达增加时，间充质干细胞的免疫抑制活性比仅SOCS抑制时的免疫抑制活性进一步提高。从而完成了本申请的发明。
因此，本申请的发明旨在提供选择治疗免疫疾病的高效间充质干细胞的方法，包括测量间充质干细胞中具体免疫抑制生物标志物(IDO、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、PTGES、CXCR4、CXCR7、VCAM1、ICAM1、ICAM2、TNF-α、B7-H1、TRAIL或Fas配体)的水平，其中所述间充质干细胞中SOCS的表达或活性被抑制，并由此选择出高效间充质干细胞。
然而，本申请的发明解决的技术问题并不限于以上描述的问题，通过以下描述本领域普通技术人员将充分理解其他本文没有描述的问题。
技术方案
本申请的发明提供选择用于治疗免疫疾病的高效间充质干细胞的方法，包括测量间充质干细胞中具体免疫抑制生物标志物水平的步骤，其中所述间充质干细胞中SOCS的表达或活性被抑制。
根据本申请的发明一个示例性实施方案，所述方法包括以下步骤：
(a)培养间充质干细胞并用SOCS表达或活性抑制剂处理所述细胞；
(b)测量所述间充质干细胞中免疫抑制生物标志物的表达水平，其中所述间充质干细胞中SOCS的表达或活性被抑制；以及
(c)相比未用SOCS表达或活性抑制剂处理的对照组，将所述表达水平被抑制的细胞确定为用于治疗免疫疾病的高效间充质干细胞。
根据本申请的发明另一示例性实施方案，所述方法还包括在步骤(a)和步骤(b)之间以高密度培养间充质干细胞的步骤。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述免疫抑制生物标志物是选自以下的一种或多种：吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)、C-X-C基序配体9(CXCL9)、C-X-C基序配体10(CXCL10)、C-X-C基序配体11(CXCL11)、C-X-C基序配体12(CXCL12)、前列腺素E合成酶(PTGES)、C-X-C趋化因子受体4型(CXCR4)、C-X-C趋化因子受体7型(CXCR7)、血管细胞粘附分子1(VCAM1)、细胞间粘附分子1(ICAM1)、细胞间粘附分子2(ICAM2)、TNF-α、B7同源物1(B7-H1)、TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)和Fas配体。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述高效是与免疫抑制活性相关的。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述间充质干细胞源自以下任意一种：脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、沃顿胶、神经、皮肤、羊膜、绒毛膜、蜕膜和胎盘。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述免疫疾病是移植物抗宿主病、器官移植排斥、体液排斥、自体免疫疾病或过敏性疾病。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述自体免疫疾病为：克罗恩病、红斑、特应症、类风湿性关节炎、桥本氏甲状腺炎、恶性贫血、艾迪森氏病、I型糖尿病、狼疮、慢性疲劳综合征、纤维肌痛、甲状腺功能减退症、甲状腺功能亢进症、硬皮病、白塞氏病、炎症性肠病、多发性硬化症、重症肌无力、梅尼埃综合征、吉兰-巴雷综合征、干燥综合征、白癜风、子宫内膜异位症、牛皮癣、系统性硬皮病、哮喘或溃疡性结肠炎。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述SOCS表达抑制剂选自：对SOCS基因具有特异性的小干扰RNA(siRNA)、短发卡RNA(shRNA)、微小RNA(miRNA)、肽核酸(PNA)和反义寡核苷酸。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述SOCS活性抑制剂选自：对SOCS蛋白具有特异性的抗体、适体和拮抗剂。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，步骤(b)中采用免疫印迹、抗体免疫沉淀、ELISA、质谱分析、RT-PCR、竞争性RT-PCR、实时RT-PCR、RNA酶保护测定(RPA)、RNA印迹或DNA芯片来测量所述生物标志物的表达水平。
此外，本申请的发明提供由上述方法选择得到的用于治疗免疫疾病的高效间充质干细胞。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述免疫疾病是移植物抗宿主病、器官移植排斥、体液排斥、自体免疫疾病或过敏性疾病。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述高效是与免疫抑制活性相关的。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述间充质干细胞源自：脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、沃顿胶、神经、皮肤、羊膜或胎盘。
根据本申请的发明又一个示例性实施方案，所述间充质干细胞可源自自体细胞、异种细胞或同种异体细胞。
此外，本申请的发明提供用于治疗免疫疾病的药物组合物，其包含所述高效间充质干细胞。
此外，本申请的发明提供用于治疗移植物抗宿主病的药物制剂，其包含所述高效间充质干细胞。
此外，本申请的发明提供治疗诸如移植物抗宿主病的免疫疾病的方法，其包括将高效间充质干细胞施用于个体。
此外，本申请的发明提供了高效间充质干细胞在治疗如移植物抗宿主病的免疫疾病中的用途。
有益效果
本申请的发明提出了免疫抑制生物标志物(IDO、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、PTGES、CXCR4、CXCR7、VCAM1、ICAM1、ICAM2、TNF-α、B7-H1、TRAIL和Fas配体)的具体组合可用作用于在SOCS表达/活性为被抑制的间充质干细胞中选择对免疫相关疾病具有优异免疫抑制活性的间充质干细胞的生物标志物，免疫相关疾病包括移植物抗宿主病。
因此，本申请的发明可以提供一种能够获得具有免疫应答调节活性的功能优异的间充质干细胞的有用方法，该间充质干细胞可用于临床治疗各种免疫疾病，包括移植物抗宿主病和自体免疫疾病，并且可以有效地使用作为免疫疾病的治疗方法。
此外，利用根据本申请的发明选择的间充质干细胞对移植物抗宿主病的预防和治疗显示出同种异体干细胞移植的治疗可能性更高。
附图说明
图1a显示红色荧光染色的结果，证实通过用靶向SOCS的shRNA处理MSC，SOCS蛋白表达被抑制。
图1b显示了免疫印迹结果，证实通过用靶向SOCS的shRNA处理MSC，SOCS蛋白表达被抑制。
图2显示了证实MSC的免疫抑制特性的结果，其中在体内移植物抗宿主病的动物模型中SOCS被抑制。
发明实施方式
本申请的发明提供了选择用于治疗免疫疾病的高效间充质干细胞的方法，所述方法包括测量间充质干细胞中具体免疫抑制生物标志物水平的步骤，其中所述间充质干细胞中SOCS的表达或活性被抑制。
在本申请的发明中，SOCS蛋白属于细胞因子信号转导的负反馈调节剂组，并且已知包括Janus激酶/信号转导子和转录激活因子(JAK/STAT)途径。
SOCS的类型不受限制，并且可以是，例如，细胞因子可诱导的含SH2蛋白(CISH)、SOCS1、SOCS2、SOCS3、SOCS4、SOCS5、SOCS6或SOCS7，最优选SOCS1或SOCS3。
在本申请的发明中，免疫抑制生物标志物不受限制，并且可以是，例如，选自以下的一种或多种：吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)、C-X-C基序配体9(CXCL9)、C-X-C基序配体10(CXCL10)、C-X-C基序配体11(CXCL11)、C-X-C基序配体12(CXCL12)、前列腺素E合成酶(PTGES)、C-X-C趋化因子受体4型(CXCR4)、C-X-C趋化因子受体7型(CXCR7)、血管细胞粘附分子1(VCAM1)、细胞间粘附分子1(ICAM1)、细胞间粘附分子2(ICAM2)、TNF-α、B7同源物1(B7-H1)、TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)和Fas配体。
在此，已知PTGES用于合成PGE2，VCAM1用于结合细胞，CXCR7用作趋化因子的受体以将干细胞募集到炎性区域，并且ICAM1参与炎性细胞的附着和迁移。
此外，本申请的发明的选择方法可包括(a)培养间充质干细胞，并用SOCS表达或活性抑制剂处理所述细胞；(b)测量SOCS表达或活性被抑制的间充质干细胞中免疫抑制生物标志物的表达水平；和(c)与未用SOCS表达或活性抑制剂处理的对照组相比，确定所述表达水平抑制的细胞作为用于治疗免疫疾病的高效间充质干细胞。
在本申请的发明中，所述方法还包括在步骤(a)和步骤(b)之间以高密度培养间充质干细胞的步骤，所述高密度培养可以为5,000至20,000个细胞/cm2的密度培养。
本文所用的“高效”是指由于间充质干细胞的优良免疫抑制活性而在治疗免疫相关疾病方面的高功效。
本文所用的“间充质干细胞(MSC)”指具有分化成如骨、软骨、脂肪和肌肉细胞的各种中胚层细胞或如神经细胞的外胚层细胞的能力的多能干细胞。MSC优选源自以下的任何一种：脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、沃顿胶、神经、皮肤、羊膜、绒毛膜、蜕膜和胎盘。此外，MSC可源自人、胎儿或非人哺乳动物。非人哺乳动物更优选是犬科动物、猫科动物、猿科动物、牛、绵羊、猪、马、大鼠、小鼠或豚鼠，但其来源不受限制。
本文所用的“免疫疾病”不受限制，只要它是由免疫调节障碍引起的疾病，并且可以是例如，移植物抗宿主病、器官移植排斥、体液排斥、自体免疫疾病或过敏性疾病。
本文中的自体免疫疾病类型没有限制，可以为：克罗恩病、红斑、特应症、类风湿性关节炎、桥本氏甲状腺炎、恶性贫血、艾迪森氏病、I型糖尿病、狼疮、慢性疲劳综合征、纤维肌痛、甲状腺功能减退症、甲状腺功能亢进症、硬皮病、白塞氏病、炎症性肠病、多发性硬化症、重症肌无力、梅尼埃综合征、吉兰-巴雷综合征、干燥综合征、白癜风、子宫内膜异位症、牛皮癣、系统性硬皮病、哮喘或溃疡性结肠炎。
本文中的过敏性疾病类型不受限制，可以是：过敏性反应、过敏性鼻炎、哮喘、过敏性结膜炎、过敏性皮炎、特应性皮炎、接触性皮炎、荨麻疹、瘙痒症、昆虫过敏、食物过敏或药物过敏。
在本申请的发明中，SOCS表达抑制剂不受限制，只要其能特异性结合SOCS基因/mRNA以抑制表达，并且可以是例如对SOCS基因/mRNA具有特异性的小干扰RNA(siRNA)、短发卡RNA(shRNA)、微小RNA(miRNA)、肽核酸(PNA)或反义寡核苷酸。
在本申请的发明中，SOCS活性抑制剂不受限制，只要它能与SOCS蛋白结合/竞争以抑制其活性，并且可以是，例如对SOCS蛋白具有特异性的抗体、适体和拮抗剂。
在本申请的发明中，测量生物标志物表达水平的方法不受限制，并且可采用例如免疫印迹、抗体免疫沉淀、ELISA、质谱分析来测量蛋白表达，以及可采用RT-PCR、竞争性RT-PCR、实时RT-PCR、RNA酶保护测定(RPA)、RNA印迹或DNA芯片来测量mRNA表达。
此外，本申请的发明提供了通过上述方法选择的用于治疗免疫疾病的高效MSC。MSC的来源没有限制，因此MSC可源自体细胞、异种细胞或同种异体细胞。
此外，本申请的发明提供了用于治疗免疫疾病的药物组合物/药物制剂，其包含所述高效MSC。
本文使用的“药物组合物”可以进一步包括其他组分，如常规治疗活性组分，任何其他添加剂，或药学上可接受的载体。药学上可接受的载体的实例是盐水、无菌水、林格氏溶液、缓冲盐水、葡萄糖溶液、麦芽糖糊精溶液、甘油和乙醇。
组合物可以通过配制成口服制剂的形式使用，如粉末、颗粒、片剂、胶囊、悬浮液、乳液、糖浆或气溶胶、局部使用的制剂、栓剂或根据常规方法的无菌注射溶液。
本文使用的“剂量”范围可以根据患者的体重、年龄、性别、健康状况、饮食、给药时间、给药途径、排泄率和疾病严重程度进行不同调整，这是本领域普通技术人员容易做到的。
本文使用的“个体”是指需要治疗的个体，更具体地，是指哺乳动物，如人、非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马或牛。
本文使用的“药学有效量”可以根据参数确定，参数包括需要药物给药的疾病类型和严重程度、患者的年龄和性别、对药物的敏感性、给药时间、给药途径、排泄率、治疗期、同时施用的药物，以及医学领域中公知的其他参数，并且药学有效量是考虑所有参数后能够获得最大效果而没有副作用的量，并且可以容易地由本领域普通技术人员确定。
只要本申请的发明的组合物可以到达靶组织，对“给药途径”没有限制。给药途径的实例包括口服给药、动脉内注射、静脉内注射、经皮注射、鼻内给药、经支气管给药和肌内给药。日剂量可以是约0.0001至100mg/kg，优选0.001至10mg/kg，并且优选每天一次至数次给药。
在下文中，为了帮助理解本申请的发明，将提出示例性实施例。然而，仅提供以下实施例以使本申请的发明可以更容易理解，而非限制本申请的发明。
实施例
实施例1:实验方法
1-1.人组织来源的MSC的分离和培养
本实验由三星医疗中心的机构审查委员会(IRB)批准(IRB号2011-10-134)，所有样本均在知情同意下获得。通过常规已知方法分离MSC。分离的细胞以2×103个细胞/cm2的密度接种在达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM；Invitrogen-Gibco,Rockville,MD)，其中含有10％胎牛血清(FBS,Invitrogen-Gibco)和100U/mL青霉素/链霉素(Invitrogen-Gibco)，并在37℃和5％CO2条件下培养。
1-2.shRNA转染
为了抑制SOCS1的表达，用表达SOCS1shRNA和红色荧光蛋白(RFP)的腺病毒处理脂肪组织来源的MSC(AT-MSC)。具体而言，将靶向SOCS1的shRNA序列克隆到含有人U6启动子和TagRFP标记基因的穿梭载体(pO6A5-U6-mPGK-TagRFP)中，从而制备pO6A5-U6-shSOCS1-mPGK-TagRFP表达载体，并将该穿梭载体中的U6-shRNA-SV40-pA区重组并转移至BAC载体。回收的重组腺病毒(Ad5-U6-shSOCS1-mPGK-TagRFP)在HEK-293细胞中增殖，蛋白质转导结构域(PTD)HP4购自Peptron Inc.。为将腺病毒颗粒转染到MSC中，按照100的感染复数(MOI)，将腺病毒颗粒与HP4(100nM)一起处理，并在无血清培养基中室温下培养30分钟。然后，用PBS洗涤培养的细胞，并与Ad-RFP-shSOCS1和HP4制备物一起培养，两小时后，用PBS冲洗细胞，然后在含血清的培养基中培养。通过RFP的荧光观察和免疫印迹来确认选择的MSC。
1-3.免疫印迹
用冷PBS(Gibco-Invitrogen)洗涤细胞，并使用配制于300μl冷RIPA缓冲液[含有1％Triton X-100,150mM NaCl,0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)和1％脱氧胆酸钠的50mMTris-HCl，pH7.5]中的蛋白酶抑制剂混合物(Thermo Fisher Scientific，Rockford，IL，USA)裂解。将细胞裂解液在4℃下以3000g离心10分钟，收集上清液，使用BCA蛋白测定试剂盒(Thermo Fisher Scientific)测定蛋白浓度。对于电泳，在样品缓冲液(含有14.4mMβ-巯基乙醇、25％甘油、2％SDS和0.1％溴酚蓝的60mM Tris-HCl，pH 6.8)中裂解30μg蛋白，煮沸5分钟，并在10％SDS还原凝胶中分离。使用蛋白转印系统(Gibco-Invitrogen)，将分离的蛋白转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Amersham Biosciences，Little Chalfont，Buckinghamshire，UK)。用含有5％脱脂奶粉(BD Sciences，CA，USA)的TBS(含150mM NaCl的10mM Tris-HCl，pH7.5)封闭PVDF膜，室温下持续1小时，用TBS洗涤三次，并与一抗(所有抗体均按1:1000稀释)在含有3％脱脂奶粉的TBST(含有150mM NaCl和0.02％Tween-20的10mMTris，pH7.5)中4℃孵育过夜。第二天，用TBST洗涤印迹三次，在含3％脱脂乳粉的TBST中与HRP偶联二抗(按1:2000或1:5000稀释)在室温下孵育1小时。用TBST洗涤与二抗偶联的印迹三次，使用ECL检测系统(Amersham Biosciences)使蛋白可视化。
1-4.移植物抗宿主病(GVHD)动物模型
在8-9周龄的NOD/SCID免疫缺陷小鼠(Jackson Laboratories，Bar Harbor，ME)上进行300cGy的全身辐照，并在24小时后，静脉内施用人外周血单核细胞。具体而言，每只小鼠注射2×107个人外周血单核细胞和1×106个MSC。然后，在注射后7天重复注射相同数量的MSC。
实施例2:实验结果
2-1.SOCS表达的抑制
通过脂质组织来源的MSC(AT-MSC)与表达靶向SOCS1的shRNA的腺病毒一起转导，证实了MSC中SOCS表达的抑制。结果如图1a和1b所示，来自RFP标记(图1a)和免疫印迹(图1b)的结果可以证实MSC中SOCS1蛋白的表达显著抑制。
2-2.评估SOCS抑制的MSC的体内免疫抑制活性
确认在实施例2-1中获得的SOCS抑制的MSC是否真正在GVHD动物模型中表现出免疫抑制特性。
结果如图2所示，可以看出，与对照相比，SOCS被shRNA抑制的MSC(红线)处理组具有明显提高的存活率(免疫抑制特性)。
2-3.在SOCS抑制的MSC中发现其他免疫抑制生物标志物
为了研究SOCS表达抑制对MSC中基因表达的影响，在SOCS表达抑制剂(shRNA)处理之前和之后，比较了MSC的基因表达谱。结果证实，处理前后形态学变化没有显著差异，但基因表达谱存在显著差异。
事实上，用SOCS表达抑制剂(shRNA)处理的MSC中各种基因的表达增加，可以看出，在这些基因中，IDO、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、PTGES、CXCR4、CXCR7、VCAM1、ICAM1、ICAM2、TNF-α、B7-H1、TRAIL和Fas配体基因参与MSC的免疫抑制。
本领域普通技术人员应该理解，本申请的发明上述描述是示例性的，并且在不脱离本申请的发明的技术精神或本质特征的情况下，可以容易地将本文公开的示例性实施方案修改为其他特定形式。上述示例性实施方案应解释为说明性的而不限于任何方面。
工业实用性
本申请的发明可提供用于获得具有控制免疫反应能力的功能优异的MSC的方法，这样的MSC可用于临床治疗各种免疫疾病，包括移植物抗宿主病和自体免疫疾病，并可有效地用作免疫疾病的治疗方法。

Claims (20)

1.选择用于治疗免疫疾病的高效间充质干细胞的方法，其包括测量间充质干细胞中免疫抑制生物标志物的水平，其中所述间充质干细胞中细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)的表达或活性被抑制。
2.如权利要求1所述的方法，其包括如下步骤：
(a)培养间充质干细胞并用SOCS表达或活性抑制剂处理所述细胞；
(b)测量所述间充质干细胞中免疫抑制生物标志物的表达水平，其中所述间充质干细胞中SOCS的表达或活性被抑制；以及
(c)相比未用SOCS表达或活性抑制剂处理的对照组，将所述表达水平被抑制的细胞确定为用于治疗免疫疾病的高效间充质干细胞。
3.如权利要求2所述的方法，在所述步骤(a)和步骤(b)之间还包括以高密度培养间充质干细胞的步骤。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述免疫抑制生物标志物是选自以下的一种或多种：吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)、C-X-C基序配体9(CXCL9)、C-X-C基序配体10(CXCL10)、C-X-C基序配体11(CXCL11)、C-X-C基序配体12(CXCL12)、前列腺素E合成酶(PTGES)、C-X-C趋化因子受体4型(CXCR4)、C-X-C趋化因子受体7型(CXCR7)、血管细胞粘附分子1(VCAM1)、细胞间粘附分子1(ICAM1)、细胞间粘附分子2(ICAM2)、TNF-α、B7同源物1(B7-H1)、TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)和Fas配体。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述高效是与免疫抑制特性相关的。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述间充质干细胞源自以下任意一种：脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、沃顿胶、神经、皮肤、羊膜、绒毛膜、蜕膜和胎盘。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述免疫疾病是移植物抗宿主病、器官移植排斥、体液排斥、自体免疫疾病或过敏性疾病。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述自体免疫疾病为：克罗恩病、红斑、特应症、类风湿性关节炎、桥本氏甲状腺炎、恶性贫血、艾迪森氏病、I型糖尿病、狼疮、慢性疲劳综合征、纤维肌痛、甲状腺功能减退症、甲状腺功能亢进症、硬皮病、白塞氏病、炎症性肠病、多发性硬化症、重症肌无力、梅尼埃综合征、吉兰-巴雷综合征、干燥综合征、白癜风、子宫内膜异位症、牛皮癣、系统性硬皮病、哮喘或溃疡性结肠炎。
9.如权利要求2所述的方法，其中所述SOCS表达抑制剂选自：对SOCS基因具有特异性的小干扰RNA(siRNA)、短发卡RNA(shRNA)、微小RNA(miRNA)、肽核酸(PNA)和反义寡核苷酸。
10.如权利要求2所述的方法，其中所述SOCS活性抑制剂选自：对SOCS蛋白具有特异性的抗体、适体和拮抗剂。
11.如权利要求2所述的方法，其中步骤(b)中采用免疫印迹、抗体免疫沉淀、ELISA、质谱分析、RT-PCR、竞争性RT-PCR、实时RT-PCR、RNA酶保护测定(RPA)、RNA印迹或DNA芯片来测量所述生物标志物的表达水平。
12.治疗免疫疾病的高效间充质干细胞，所述间充质干细胞是通过权利要求1所述的方法选择的。
13.如权利要求12所述的细胞，其中所述免疫疾病是移植物抗宿主病、器官移植排斥、体液排斥、自体免疫疾病或过敏性疾病。
14.如权利要求12所述的细胞，其中所述高效是与免疫抑制活性相关的。
15.如权利要求12所述的细胞，其中所述间充质干细胞源自脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、神经、皮肤、羊膜或胎盘。
16.如权利要求12所述的细胞，其中所述间充质干细胞源自自体细胞、异种细胞或同种异体细胞。
17.用于治疗免疫疾病的药物组合物，其包含权利要求12的高效间充质干细胞。
18.用于治疗移植物抗宿主病的药物制剂，其包含权利要求12的高效间充质干细胞。
19.治疗免疫疾病的方法，包括将权利要求12的高效间充质干细胞(MSC)施用于个体。
20.权利要求12的高效间充质干细胞在治疗免疫疾病中的用途。
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