CN110066811A

CN110066811A - 一种水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28及其应用

Info

Publication number: CN110066811A
Application number: CN201910195823.7A
Authority: CN
Inventors: 郑爱萍; 牛贤宇; 杨桂晶; 夏园; 易晓群; 李双成; 朱军; 梁越洋; 李平
Original assignee: Sichuan Agricultural University
Current assignee: Sichuan Agricultural University
Priority date: 2019-03-15
Filing date: 2019-03-15
Publication date: 2019-07-30
Anticipated expiration: 2039-03-15
Also published as: CN110066811B

Abstract

本发明公开了一种水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28及其应用。该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；该基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过对立枯丝核菌effector基因的克隆及其功能分析，有助于揭示水稻纹枯病与水稻品种间特异性互作及其进化的分子机理。

Description

一种水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28及其应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28及其应用。

背景技术

水稻纹枯病(rice sheath blight)是由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)引起的一种世界范围内的水稻真菌性病害，被称为水稻的三大病害之一。该病害分布范围较广，就全球水稻种植区而言，主要在亚洲、美洲和非洲水稻种植的国家频繁发生，该病害曾一度是美国南方稻区最重要的水稻病害。目前，根据菌丝之间能否融合，立枯丝核菌可以被归类为14个融合群(AG1至AG13和AGBI)。AG1融合群又被认为是导致水稻纹枯病、玉米纹枯病和大豆纹枯病的主要致病类群。

目前，关于植物-病原菌互作的研究为广大学者所普遍接受的，还是Jones和Dangl在2006年提出的“zigzag”模型。该假说认为植物响应病原菌的侵染是一个双分支先天免疫系统：第一个分支是识别和响应许多类别的共有分子微生物，包括非病原体，来抵御病原体的攻击；第二种是识别病原体的效应因子。并且提出病原体在侵染植物的过程中，主要分为四个阶段。

第一阶段，当植物受到病原体侵入时，细胞膜上的模式识别受体(PatternRecognition Receptors，PRRs)就会去识别缓慢进化和保守的病原体相关分子模式(Pathogen-associated Molecular Patterns，PAMPs)，包含非病原体，上述反应就会刺激植物的免疫应答，该应答会通过复杂的反应来抵抗病原体的侵入，引发植物的基础免疫反应(PAMPs-triggered immunity，PTI)。Flagellin Sensing 2(FLS2)是最典型的PRRs之一，它能介导并识别触发植物体内产生各种生理生化的细菌的鞭毛蛋白(flg22)，该鞭毛蛋白与细菌的致病力密切相关，并且具有22个氨基酸保守区域的短肽。像其他PRRs一样，FLS2在其配体存在下与其他细胞表面蛋白(在这种情况下为BRI1相关受体激酶1(BAK1))形成复合物以启动各种免疫应答。出现活性氧(ROS)的快速产生和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的激活，转录重编程和气孔关闭等早期反应，后期反应在数小时至数天的较长时间内发生，如胼胝质沉积或幼苗生长抑制等。

第二阶段，病原菌为了克制或扰乱寄主的PTI反应和顺利的入侵寄主植物渐渐进化出了效应因子(effector)来克制PRR复合物或其下游信号转导，从而达到抑制免疫反应的目的，从而致使植物感病(effector-triggered susceptibility，ETS)。

第三阶段，为了防御这些病原体，植物还必须进化出一套识别效应因子的抗病基因(Resistance gene，R)，并激活抗病途径相关的信号传导级联网络，产生效应因子所触发的免疫反应(effector-triggered immunity，ETI)。通常表现为在侵染位置发生过敏性细胞坏死反应(hyper-sensitive cell deathresponse，HR)，这种反应发生在感病部位，以抑制病原体的生长。另外，由于许多效应蛋白在宿主细胞内起作用，这些效应蛋白的受体的大部分位于细胞内，并且大部分属于核苷酸结合结构域，富含亮氨酸重复受体(NLR)。已经发现，细菌病原体可以利用一种特殊的T3SS分泌系统将Avr蛋白传递到植物细胞质中。大多数真核生物的Avr基因编码分泌蛋白，包括亚麻锈病AvrL567、AvrM、AvrP4和AvrP123，稻瘟病菌中的AvrPi-TA、大豆疫霉菌中Avr1b-1、致病疫霉Avr3a和ATR1。

第四阶段，在自然选择下，病原体通过改变或者隐藏原有的效应蛋白的数量、种类或构象以及新效应因子的进化来来破坏原有的ETI反应，逃脱R蛋白的识别，使寄主植物再次感病。为了生存，病原体和宿主植物之间的斗争不断演变和发展，共同进化。

目前，植物病原菌互作中，effector已成为研究的热点，立枯丝核菌能够侵染多种作物与其分泌effector分子有关，这种分子可以调节宿主的先天免疫并增强自身侵染。目前已经研究的比较清楚的植物病原真菌的效应因子主要包括以下几类:(1)AVR1、AVR2、AVR3等：尖孢镰刀菌f.sp.lycopersici对番茄木质部分泌的有毒和无毒基因。在这些蛋白质中，Avr1(Six4)、Avr2(Six3)、Avr3(Six1)证明具有无毒活性。而AVR2和AVR3效应因子则是病原菌对番茄毒力所需的。(2)ATR1和ATR13：拟南芥霜霉菌RXLR类效应因子ATR1和ATR13，分别具有310和150个氨基酸，其引发RPP1-Nd/WsB和RPP13-Nd介导的抗性。ATR13含有保守的七肽亮氨酸或者异亮氨酸的重复序列，它是RPP13识别所需的，无毒活性取决于C-末端的可变氨基酸。ATR1和ATR13在H.arabidopsidis中的高度多态性以及它们在拟南芥中的同源抗性基因的多样性意味着这些效应因子可能对病原菌适应性有显着贡献。(3)Avr-Pita、PWL1、PWL2等：随着稻瘟病菌全基因组测序的完成，累计超过25个无毒基因已经被鉴定出来。然而，在从基因组中挖掘出的候选效应基因中，无毒的表型与观察到的多态性之间缺乏相关性，阻碍了新的无毒基因的识别。(4)AvrLm1、AvrLm6and AvrLm4-7：基于图位克隆策略获得的油菜茎溃疡病致病因子。这些基因是编码122至205个氨基酸的小分泌蛋白，与公共数据库中存在的其他蛋白质都没有相似性。AvrLm6具有6个半胱氨酸残基，而AvrLm4-7具有8个半胱氨酸残基，这些半胱氨酸可能稳定植物质外体中的AvrLm6和AvrLm4-7蛋白。然而，由于迄今为止描述的所有质外体效应因子绝大部分都是富含半胱氨酸的蛋白质，所以仅具有一个半胱氨酸残基的AvrLm1更可能转移到宿主细胞中。尽管有明确的无毒活性，但AvrLm识别机制和其对应的Rlm抗性基因以及其作用位点仍是未知的，与迄今为止克隆的大多数其他真菌效应因子相比，这三种基因均具有低GC含量。(5)酶抑制类效应因子：丝状植物病原真菌已经进化出具有抑制几种宿主水解酶活性的效应蛋白。Avr2抑制番茄的两个密切相关的半胱氨酸蛋白酶Rcr-3和PIP1，类似于Avr2，EPIC1和EPIC2B能够结合并抑制Rcr3。然而，与Avr2不同，它们在Cf-2/Rcr3pim番茄中不诱导过敏反应，表明致病疫霉能够在不激活免疫反应的情况下产生抑制番茄蛋白酶的潜伏的效应因子。(6)宿主选择性毒素：宿主选择性毒素(HST)是化学上不同的效应分子，其作为植物致病真菌产生的毒力因子而起作用。PtrToxA是P.triticirepentis和S.nodorum HSTs中研究最多的。它具有N末端分泌信号的模块化结构，其被切割形成成熟的蛋白质，接着是宿主易位所需的RGD结构域和C末端效应子结构域。

质外体效应因子是一种由病原菌分泌到寄主植物细胞间隙的效应蛋白，它也被称为胞间效应蛋白，可以与细胞表面蛋白或另外的胞外分子的相互作用，比如防御相关的酶类等，来干扰它们的功能，从而发挥其功能。目前被报道的质外体效应蛋白主要包括以下几类：(1)细胞壁降解酶类：这一类效应因子是研究的比较透彻的一类，比较基因组学显示细胞壁降解酶类效应因子在真菌病原体之间也有显著差异。其中腐生菌会产生大量的细胞壁降解酶，作为一类致病因子使寄主感病，例如大豆疫霉中分泌的质外体效应因子在侵染寄主时就作为一种毒力因子利用自身的木葡聚糖酶活性对寄主的细胞壁进行攻击。(2)Nep1-like蛋白(NLPs)：这一类效应因子存在于许多致病细菌、真菌和卵菌中，其通常通过质膜透化诱导双子叶植物中的细胞死亡。来自于细菌、真菌和卵菌中的NLPs能够引起植物细胞的死亡和乙烯的积累，并且能够作为PAMPs激发大量双子叶植物的免疫应答反应。但奇怪的是，单子叶植物的病原菌也携带NLPs基因，但它们在致病性中的作用仍然不明显，因为它们不引起细胞坏死。例如，来自Mycosphaerella graminicola(MgNLP)的单个NLP基因的异源表达不诱导细胞死亡或在小麦叶片中引起免疫应答，并且基因敲除不影响小麦的毒力。(3)CBEL类细胞壁蛋白：CBEL(Cellulose-binding Elicitor and Lectin activity)蛋白与卵菌的毒性密切相关且具有诱导烟草细胞坏死和诱导防御基因表达以及与附着于植物叶片纤维质的底物相关两种功能。(4)酶抑制剂：病原菌逐渐进化出了不同的酶抑制剂来对寄主产生的水解真菌细胞壁的酶类进行抑制，例如卵菌中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂EPC1和EPIC2。(5)富含半胱氨酸类的短肽。效应因子多数是富含半胱氨酸的小分泌蛋白，通过操纵植物的免疫反应来发挥作用。现有研究认为多数真菌的效应因子是通过操纵植物免疫应答从而发挥功能。一般来说，蛋白中包含大于4个半胱氨酸则被视为富含半胱氨酸。通常这一类蛋白的分子质量都相对较小，尽管与已知的蛋白相比没有明显的序列同源性，但是可能会具有相似的功能。研究报道表明，富含半胱氨酸分泌蛋白广泛存在，并且在真菌病原菌的特异性和致病性中扮演着重要角色。一些未知功能的富含半胱氨酸小分泌蛋白是一类有趣的质外体效应因子，其功能的研究也比较深入，这一类效应因子通常具有物种特异性或者甚至个体特异性。其中一些来源于枝状芽孢杆菌或者卵菌的效应因子被认为是细胞外对寄主的基础防御具有重要作用的蛋白酶的抑制剂。

目前我们仍然不清楚很多effector的生物化学活性以及它们是如何增强病原体的成功生殖的。我们也几乎不知道丝状病原菌立枯丝核菌effector的靶标，特别是转移到宿主细胞内部的effector。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28及其应用，本发明通过对立枯丝核菌effector基因的克隆及其功能分析，有助于揭示水稻纹枯病与水稻品种间特异性互作及其进化的分子机理。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28，其基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明包括将该基因的编码区和一个诱导型启动子连接，该启动子可以在IPTG诱导下，在大肠杆菌细胞中表达这两个基因。本发明还包括将该基因的编码区和一个组成型表达的启动子连接，该启动子可以在任何条件下及在侵入组织的不同时期表达。这种组成型的启动子包括花椰菜花叶病毒35S的启动子等。另一方面，也可以将该两个基因和一个组织特异性表达的启动子或精确环境诱导的启动子连接，这些启动子称为诱导型启动子。这样，环境的改变，侵入植株的不同时期都可以改变基因的表达。其中环境条件包括植株的生长状况、温度、湿度等，侵入植株的不同时期包括孢子萌发、侵入分化和侵染菌丝扩展等。

此外，根据本发明提供的RsIA_SCR28基因序列信息，本领域技术人员可以通过以下方法容易的获得与RsIA_SCR28等同的基因，或对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行修饰，得到具有较高同源性，且也能编码具有同等活性的蛋白的核苷酸序列，具体包括：(1)通过数据库检索获得；(2)以RsIA_SCR28基因片段为探针筛选立枯丝核菌或其它病原菌的基因组文库或cDNA文库获得；(3)根据RsIA_SCR28基因序列信息设计寡核苷酸引物，用PCR扩增的方法从立枯丝核菌AG1IA或其它病原菌的基因组、mRNA和cDNA中获取；(4)在RsIA_SCR28基因序列基础上用基因工程方法改造获得；(5)用化学合成的方法获得该基因。

上述基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

应当理解，本领域技术人员可根据本发明公开的氨基酸序列，在不影响其活性的前提下，例如在非活性位点，取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸，得到由该蛋白衍生的蛋白；这些衍生的蛋白也属于本发明的范围。

包含上述基因的表达载体。

包含上述载体的宿主细胞。

上述基因的实际用途包括以下几个方面：

(1)该基因的结构及其功能来设计新型农药的分子靶点；

(2)将所述的基因序列连接到任何一种含有荧光蛋白基因的转化载体，用任何一种转化方法将基因和荧光蛋白基因共价导入水稻或其它植物细胞。利用荧光共聚焦透射电镜可以观察到在水稻或其它植物细胞中与荧光蛋白融合表达的effector蛋白在植物细胞中的迁移及定位。利用此effector为诱饵蛋白钓出水稻或其它植株中与该effector蛋白结合的受体蛋白。利用基因工程方法敲除水稻或其它植物细胞中该受体基因或删除、添加、突变该受体基因的一个或多个碱基以缺失或改变受体基因的功能，得到抗某一effector的抗性植株。

(3)根据所述基因序列信息产生特异性的分子标记，包括但不限于SNP(单核苷酸多态性)、SSR(简单序列重复多态性)、RFLP(限制性内切酶长度多态性)、CAP(切割扩增片段多肽)。用这些标记可检测田间纹枯病群体的生理小种及其遗传结构的动态变化，以及该基因在田间自然群体中的分布情况；有助于水稻品种的抗病性鉴定和立枯丝核菌小种的鉴定；也有助于抗病品种的合理布局和轮换，以便有效地控制纹枯病的发生。

本发明能够进一步提供或应用利用上述effector基因功能的转基因菌株，以及用本发明的基因转化的菌株。也可以用有性杂交的方式将本发明的基因转入其它的菌株。

本发明的有益效果为：

本发明通过对立枯丝核菌effector基因的克隆及其功能分析，有助于揭示水稻纹枯病与水稻品种间特异性互作及其进化的分子机理。在实践上可以根据该基因的结构及其功能设计新型农药的分子靶点；可以将水稻等宿主细胞中该effector蛋白的受体蛋白基因敲除或突变，以得到持久抗病品种；有助于建立水稻纹枯病菌自然群体致病性变异的分子检测体系，研究水稻纹枯病effector基因在田间自然群体中的分布情况，揭示水稻纹枯病菌群体中小种的组成和变异特点；也有助于水稻品种的抗病性鉴定及其合理布局和轮换，以便有效地控制水稻纹枯病的发生。

附图说明

图1为水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28(AG1IA_09207)的转录组测序表达图；

图2为水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28与RsIA_SCR28Δsp的PCR检测结果图；其中，图2中M为分子量标记，由下至上依次为5000bp、3000bp、2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp和100bp；泳道1为RsIA_SCR28的PCR产物；泳道2为RsIA_SCR28Δsp；

图3为水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28瞬时表达的酞盼蓝染色检测结果图；

图4为基因RsIA_SCR28在烟草叶片中瞬时表达，引起过敏性坏死反应结果；其中，图4A为RsIA_SCR28、空载、阳性(BAX)和阴性(GFP)对照注射5天的图片，图4B为重复；

图5为基因RsIA_SCR28表达特性分析图。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式进行描述，以便于本技术领域的技术人员理解本发明，但应该清楚，本发明不限于具体实施方式的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。

实施例1：预测的effector基因的克隆

在超净工作台下，用接菌环接种活化的立枯丝核菌AG1IA的菌体，接入至50mL PDB培养基中，28℃，220r/m培养两天后，用四层纱布过滤收集菌丝，用液氮研磨提取总RNA。然后用oligod T做引物，反转录得到cDNA。

根据预测的序列设计引物，具体序列如下：

正向引物：acctcgactctagaggatccATGCGTCTTTCGTCTTCTCTTCTC)；(SEQ ID NO.3)

反向引物：gtccttgtagtcagaaggcctGTAAGTTCCTGGAATGACCGCA；(SEQ ID NO.4)

再以cDNA为模板克隆得到目的基因，克隆得到基因如图1中箭头所示，反应体系包括：DNA polymerase 1μL、10×Ex Taq buffer 25μL、cDNA templete 3μL、dNTP 1μL、Forward primer(10μM)2μL、Reverse primer(10μM)2μL，最后用add ddH₂O to 50μL；

扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性15sec，58℃退火15sec，72℃延伸30sec，30个循环；72℃后延伸5min。

实施例2：effector基因原核表达载体的构建

对实施例1中的PCR产物进行电泳检测，其结果如图2所示，根据图2可知，所得目的基因电泳检测没有杂带，然后再对目的基因片段进行回收，即可根据35S-pMDC32-flag说明，把目的基因连接到表达载体上，经过测序，基因RsIA_SCR28的序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，根据检测结果可知，基因RsIA_SCR28的序列与预测序列有个别碱基的差别。转化条件与常规大肠杆菌转化条件相同，挑取阳性转化子，37℃培养至OD值为0.6后，转入28℃。

实施例3：在烟草中瞬时表达

将实施例2构建的含有目的基因的35S-pMDC32-flag表达载体转入农杆菌GV3101中，于含有利福平(40mg/mL)和卡那霉素(50mg/mL)的YEP培养液中，28℃培养16h，离心收集菌体，MES重悬菌液[10mM MES(pH 5.6)，10mM MgCl₂，以及100μM乙酰丁香酮]，再于室温条件下，黑暗中培养2-3h后，用无菌注射器注射烟草叶片，并观察烟草叶片情况，其结果见图4，其酞盼蓝染色检测结果见图3。

由图3可知，烟草叶片能够被染色，表明农杆菌菌液中的目的基因RsIA_SCR28能在烟草叶片中表达。

由图4可知，阴性对照注射后不会引起烟草叶片的细胞坏死，而用阳性对照和携带目的基因RsIA_SCR28的农杆菌菌液注射烟草叶片5天后，烟草叶片出现明显的细胞坏死，说明RsIA_SCR28基因能产生致病性反应。

实施例4：effector基因的表达特性分析

利用RT-PCR技术对RsIA_SCR28基因的表达模式进行分析，其过程为：分别从未接种有菌丝的水稻叶片和接种有菌丝的水稻叶片中提取总RNA，反转录得到cDNA后，然后利用预测的序列设计引物SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6分别进行PCR扩增，其结果见图5；

具体序列如下：

正向序列：GAGGACAGTATGATTCGAGTGG；(SEQ ID NO.5)

反向序列：CGGGCAGTCGTTATAGTCTTG；(SEQ ID NO.6)

其扩增体系为：AceQ qPCR SYBR Green Master Mix 10μL、Forward primer(10μM)0.4μL、Reverse primer(10μM)0.4μL、cDNA templete 2μL，最后用add ddH₂O to 20μL；扩增程序为：预变性95℃5min，95℃10sec，60℃30sec，40个循环，溶解曲线58℃～96℃15sec。

图5中，TQ表示相对抗性品种，Lemont表示相对感病品种，通过图5可知，RsIA_SCR28基因在抗性品种和感病品种中的表达量存在差异。

然后利用实施例1中的扩增程序和扩增条件，从未接种有菌丝的水稻叶片和接种有菌丝的水稻叶片中提取得到的RNA均能克隆得到如图1中箭头所示的目的基因，说明该基因是组成型表达的基因。

实施例5：effector基因RsIA_SCR28的应用

利用本发明提供的RsIA_SCR28基因的序列信息，根据该基因的结构及功能设计新型农药的分子靶点；将该基因蛋白产物在水稻中的受体蛋白基因或信号通路中的机遇沉默或敲除掉，以培育抗病品种；根据该基因序列产生的分子标记在田间纹枯病群体监测中的应用；以及根据监测的结果指导抗病品种合理布局中的应用。

序列表

<110> 四川农业大学

<120> 一种水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28及其应用

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 549

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atgcgtcttt cgtcttctct tctcatcctc tctgccacct tggctctcgc ttcaccgctt 60

cagcctcgtg ctgcccctga caatactgtg ctaatcgaga gcaccaccaa gtactgtatg 120

gtcatgccac gcaaagccca taccaacatt ggcgaatcgg aaaaaccggg tggaatgcgc 180

gtgtactgtt cagcatctgc ccgtaccgac aattcccaag ggctgtttcc caacgacttc 240

tggaagaaag tcacatacaa gaccggaacg ggcaagaagg gcggaaaata cgttcaactc 300

accggacgga ttaagaaggg attctctcag ctcaatgaca atgatggcgg aggacagtat 360

gattcgagtg gtggagctgg cggaaaaggc aacccacagg gcagcgtgtg cacaggatat 420

aagcattatg ttcaactcgt cgaacccaac gacggccgtg catgcattcg ctgttgtcaa 480

gactataacg actgcccgct agacaaagac actgctgggt gtcctgcggt cattccagga 540

acttactga 549

<210> 2

<211> 182

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Arg Leu Ser Ser Ser Leu Leu Ile Leu Ser Ala Thr Leu Ala Leu

1 5 10 15

Ala Ser Pro Leu Gln Pro Arg Ala Ala Pro Asp Asn Thr Val Leu Ile

20 25 30

Glu Ser Thr Thr Lys Tyr Cys Met Val Met Pro Arg Lys Ala His Thr

35 40 45

Asn Ile Gly Glu Ser Glu Lys Pro Gly Gly Met Arg Val Tyr Cys Ser

50 55 60

Ala Ser Ala Arg Thr Asp Asn Ser Gln Gly Leu Phe Pro Asn Asp Phe

65 70 75 80

Trp Lys Lys Val Thr Tyr Lys Thr Gly Thr Gly Lys Lys Gly Gly Lys

85 90 95

Tyr Val Gln Leu Thr Gly Arg Ile Lys Lys Gly Phe Ser Gln Leu Asn

100 105 110

Asp Asp Asp Gly Gly Gly Gln Tyr Asp Ser Ser Gly Gly Ala Gly Gly

115 120 125

Lys Gly Asn Pro Gln Gly Ser Val Cys Thr Gly Tyr Lys His Tyr Val

130 135 140

Gln Leu Val Glu Pro Asn Asp Gly Arg Ala Cys Ile Arg Cys Cys Gln

145 150 155 160

Asp Tyr Asn Asp Cys Pro Leu Asp Lys Asp Thr Ala Gly Cys Pro Ala

165 170 175

Val Ile Pro Gly Thr Tyr

180

<210> 3

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gacctcgact ctagaggatc catgcgtctt tcgtcttctc ttctc 45

<210> 4

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gtccttgtag tcagaaggcc tgtaagttcc tggaatgacc gca 43

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gaggacagta tgattcgagt gg 22

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

cgggcagtcg ttatagtctt g 21

Claims

1.一种水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28，其基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.采用权利要求1所述基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种包含权利要求1所述基因的表达载体。

4.一种包含权利要求3所述载体的宿主细胞。

5.水稻纹枯病effector基因RsIA_SCR28在设计农药分子靶点、培育水稻抗病品种或水稻纹枯病群体监测中的应用。